KR101615876B1 - 황산화 ｃ―배당체 및 이의 단리 방법 및 합성 방법 - Google Patents

황산화 ｃ―배당체 및 이의 단리 방법 및 합성 방법 Download PDF

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Abstract

[과제] 본 발명은, 차푸로사이드 및 이의 유연체의 전구체로서 신규 화합물인 황산화 C-배당체, 및 당해 황산화 C-배당체의 효율적인 제조방법 및 이를 사용한 차푸로사이드 및 이의 유연체의 효율적인 제조방법을 제공하는 것을 과제로 한다.
[해결수단] 하기 화학식 A1 또는 B1의 황산화 C-배당체를 찻잎 또는 찻물 앙금으로부터 물, 탄소수 1 내지 3의 저급 알콜 용제 또는 이들의 혼합액을 사용하여 당해 황산화 C-배당체를 추출하거나, 또는 이소비텍신 또는 비텍신 등의 플라본 C-배당체와 황산기 도입제를 반응시켜 당해 플라본 C-배당체를 황산화함으로써 제조하고, 수득된 황산화 C-배당체를 가열함으로써, 효율적으로 차푸로사이드 및 이의 유연체를 제조한다.
[화학식 A1]
Figure 112011059482723-pct00044

[화학식 B1]
Figure 112011059482723-pct00045

상기 화학식 A1 및 B1에서,
R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 OH기이다.

Description

황산화 Ｃ―배당체 및 이의 단리 방법 및 합성 방법{Sulfated C-glycoside, method for isolating same and method for synthesizing same}
본 발명은 신규 화합물인 황산화 C-배당체에 관한 것이다. 상세하게는, 본 발명은 스테로이드제와 동등 또는 그 이상으로 우수한 항염증 작용 등의 생리 활성이 기대되는 차푸로사이드 및 이의 유연체(類緣體)의 전구체인 황산화 C-배당체, 이의 차잎으로부터의 단리 방법, 이의 신규 합성 방법, 및 당해 황산화 C-배당체로부터의 차푸로사이드 및 이의 유연체의 제조 방법에 관한 것이다.
차푸로사이드(chafuroside)는 플라본 유도체의 일종인 플라본 C 배당체(C-glycoside)이며, 항산화 작용, 항알레르기 작용, 항염증 작용, 발암 억제 작용 등을 나타내는 것이 알려져 있다. 차푸로사이드는 우롱차로부터 단리되는 화합물인 것이 알려져 있으며 그 구조식이 결정되어 있다.
우에하라 외는, 아토피 환자에 대해, 시판 우롱차를 2배로 농축한 농후 용액 400ml을 매일 조식과 석식후에 그 절반씩 4주간 음용시키고, 당해 환자 특유의 일상적인 피부 염증과 그것에 부수하는 강한 가려움 발증을 효과적으로 예방하는지 여부를 조사하는 시험을 행하여, 동 우롱차가 이 시험에 참가한 아토피 환자의 62%에게 유효하였다라는 지견을 수득하였다(비특허 문헌 1 참조).
상기 지견을 바탕으로, 누카야 외는 2,4-디니트로-플루오로벤젠 유발 아토피 모델에 대한 유효성을 분리의 지표로, 동 우롱차로부터 유효 성분의 단리를 시험하였다(특허 문헌 1 참조). 그 결과, 이 우롱차용의 차잎 약 3.5kg으로부터 경구 투여에서 활성을 나타내는 2개의 성분 각각을 약 1mg 수득하고, 구조식을 결정하고, 신규 물질이었기 때문에 차푸로사이드 A(chafuroside A)와 차푸로사이드 B(chafuroside B)라고 명명하였다(특허 문헌 1 참조).
그것에 의하면, 차푸로사이드 A와 B는 하기 구조식으로 각각 A2-2과 B2-2로서 나타낼 수 있다.
[구조식 A2-2]
Figure 112011059482723-pct00001
차푸로사이드 A
[구조식 B2-2]
Figure 112011059482723-pct00002
차푸로사이드 B
계속해서, 차푸로사이드 A와 B의 생물 활성에 관해서 상세한 검토가 가해졌다. 그리고 2,4-디니트로-플루오로벤젠으로 유발된 아토피 모델에 있어서, 차푸로사이드 A는 시판 스테로이드 항염증제 프레도니솔론(10mg/kg) 및 베타메타손(0.8mg/kg)보다도 저용량인 10㎍/kg에서 그들과 동정도의 유의적인 피부 염증 억제 활성을 나타내는 것이 나타났다(특허 문헌 1, 비특허 문헌 2 참조).
또한, Min 마우스의 래트 대장에 있어서의 아족시메탄(AOM) 유발 장관 폴립 형성에 대해 차푸로사이드 A는, 인도메타신(indomethacin)과 동용량인 2.5mg/kg에서 효과적으로 억제하는 작용을 발휘하는 것이 확인되었다. 그리고, 이 효과는 차푸로사이드 A가 COX-2에 저해적으로 작용하기 때문이라고 추찰되었다. 이러한 점과 그 구조로부터, 차푸로사이드 A는 새로운 타입의 항염증제가 될 가능성이 높다(특허 문헌 2, 비특허 문헌 3 참조).
이와 같이 차푸로사이드 A 및 B는, 현재 가장 유용한 약의 하나인 스테로이드 항염증제보다도 우수한 생리 활성을 나타내고, 그 유용성이 기대되고 있는 점에서, 종래 이들을 공업적으로 제조하기 위한 여러 가지 방법이 검토되고 있다. 예를 들면, 공지의 플라본 C 배당체인 이소비텍신(isovitexin)과 비텍신(vitexin)으로부터 각각 합성하고자 하는 시도가 이루어지고 있으며, 그 중에서도 이소비텍신과 비텍신으로부터 이하의 화학 반응식에 나타내는 광연(光延) 반응을 사용하여 차푸로사이드 A와 B를 합성하는 것이 제안되어 있다(특허 문헌 2). 그러나 이 방법은 폭발의 위험이 높은 아조 시약을 사용하기 때문에, 그 공업화는 매우 어렵다.
Figure 112011059482723-pct00003
또한, 상기한 비특허 문헌 2에도, 차푸로사이드 A의 신규 화학 합성법이 개시되어 있지만, 안전성이 낮다고 하는 결점을 가진다(특허 문헌 3, 특허 문헌 4, 비특허 문헌 2 참조).
상기한 차푸로사이드 A 및 B의 구조, 제조법 및 생리 활성 등으로부터, 차푸로사이드 A 및 B의 우롱차잎 중에 있어서의 생성 메커니즘은 매우 관심을 받고 있지만, 간편하고 고수율이며, 게다가 안전하고 저렴한 공업적 생산방법은 아직 확립되어 있지 않으며, 이들 화합물의 높은 유용성을 생각하면, 그 효율적인 생산 방법의 개발이 강하게 요망되고 있다.
특허 문헌 1: 일본 공개특허공보 2004-035474호 특허 문헌 2: 일본 공개특허공보 2006-342103호 특허 문헌 3: 일본 공개특허공보 2005-314260호 특허 문헌 4: 일본 공개특허공보 2005-289888호
비특허 문헌 1: 우에하라 외, 피부과 정기간행물 92, 143-148(1997) 비특허 문헌 2: T. Nakatsuka et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 14(2004) 3201-3203 비특허 문헌 3: N. Niho et al., Cancer Science 97(2006) 248-251
본 발명은 차푸로사이드 및 이의 유연체의 전구체로서 신규 화합물인 황산화 C-배당체, 및 당해 황산화 C-배당체의 효율적인 제조 방법, 및 이를 사용한 차푸로사이드 및 이의 유연체의 효율적인 제조 방법을 제공하는 것을 과제로 한다.
본 발명자는 차푸로사이드 A와 B의 생성 요인에 관해서 검토를 가하고, 생성 요인을 특정하는 것에 성공하였다. 그리고, 이 성과를 바탕으로 차푸로사이드 A와 B의 각 전구체를 단리하여, 신규 화합물인 이들 양 전구체의 구조를 각종 물리화학적 데이터에 의해 추정하고, 합성에 의해 구조 결정하였다.
또한, 이들 전구체를 가열 처리함으로써, 용이하고 고수율로 각각 차푸로사이드 A와 B로 변환 가능, 즉 이들 전구체보다 매우 효율적으로 차푸로사이드 A와 B가 수득되는 것을 밝혀내었다.
또한, 하기 화학식에 나타내는 바와 같이, 차푸로사이드 A와 B 각 전구체의 부분 구조(a)(하기 식 중, 좌)를 갖는 화합물은, 각각 차푸로사이드 A 및 B와 동일한 부분 구조(b)(하기 식 중, 우)를 갖는 화합물로 변환되는 것으로 생각되는 점에서, 당해 부분 구조(a)를 갖는 다른 화합물군으로부터도 마찬가지로 하여 차푸로사이드 A 및 B와 동일한 부분 구조를 갖는 화합물군이 수득되는 것이 추정된다.
Figure 112011059482723-pct00004
본 발명자는 상기한 것을 전제로, 자연계 또는 합성적으로 제조 가능한 당 유도체의 2-설페이트(2-sulfate)로부터 차푸로사이드 및 이의 유연 화합물이 유도되는 것을 밝혀내고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 본 발명은 이하에 나타내는 황산화 C-배당체, 이의 단리 방법 및 합성 방법, 및 당해 황산화 C-배당체로부터의 차푸로사이드 및 이의 유연체의 제조 방법을 제공하는 것이다.
(1) 하기 화학식 A1 또는 B1의 황산화 C-배당체.
[화학식 A1]
Figure 112011059482723-pct00005
[화학식 B1]
Figure 112011059482723-pct00006
상기 화학식 A1 및 B1에서,
R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 OH기이다.
(2) 상기 황산화 C-배당체가, 하기 화학식 A1-2의 이소비텍신의 황산화체 또는 하기 화학식 B1-2의 비텍신의 황산화체인 것을 특징으로 하는, 청구항 1 기재의 황산화 C-배당체.
[화학식 A1-2]
Figure 112011059482723-pct00007
[화학식 B1-2]
Figure 112011059482723-pct00008
(3) (1) 또는 (2) 기재의 황산화 C-배당체를 단리하는 방법으로서, 상기 황산화 C-배당체를 함유하는 차잎 또는 찻물 앙금으로부터 물, 탄소수 1 내지 3의 저급 알콜 용제 또는 이들의 혼합액을 사용하여 당해 황산화 C-배당체를 추출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 황산화 C-배당체의 단리 방법.
(4) 이하의 공정 (가), (나) 및 (다)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 청구항 3 기재의 황산화 C-배당체의 단리 방법.
(가) 상기 황산화 C-배당체를 함유하는 차잎 또는 찻물 앙금의 분쇄물을, 물, 탄소수 1 내지 3의 저급 알콜 용제 또는 이들의 혼합액을 사용하여 추출하여, 당해 황산화 C-배당체를 포함하는 추출액을 수득하는 추출 공정
(나) 상기 추출 공정 (가)에서 수득된 추출액을 감압하에서 가열 농축 건고(乾固)시켜, 상기 황산화 C-배당체를 포함하는 건고 물질을 수득하는 농축·건고 공정
(다) 상기 농축·건고 공정 (나)에서 수득된 황산화 C-배당체를 포함하는 건고 물질을, 물 및 n-부탄올 용제를 사용하여 액액 분배(液液分配)하고, 그 수층부를 화학 분리 정제법에 의해 정제하는 정제 공정
(5) (1) 또는 (2) 기재의 황산화 C-배당체를 합성하는 방법으로서, 하기 화학식 A0 또는 B0의 플라본 C-배당체와 황산기 도입제를 반응시켜, 당해 플라본 C-배당체를 황산화하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 황산화 C-배당체의 합성 방법.
[화학식 A0]
Figure 112011059482723-pct00009
[화학식 B0]
Figure 112011059482723-pct00010
상기 화학식 A0 및 B0에서,
R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 OH기이다.
(6) 상기 황산기 도입제가, 피리딘-SO3 착체, 황산-DCC, 및 트리에틸아민-SO3 착체로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 것인, (5) 기재의 황산화 C-배당체의 합성 방법.
(7) 하기 화학식 A2 또는 B2의 차푸로사이드 및 이의 유연체를 제조하는 방법으로서, (1) 또는 (2) 기재의 황산화 C-배당체를 130 내지 190℃에서 가열하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 차푸로사이드 및 이의 유연체의 제조 방법.
[화학식 A2]
Figure 112011059482723-pct00011
[화학식 B2]
Figure 112011059482723-pct00012
상기 화학식 A2 및 B2에서,
R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 OH기이다.
본 발명에 있어서는, 차푸로사이드 A와 B의 전구체로서, 신규 황산화 C-배당체(이소비텍신과 비텍신의 황산화체)를 단리할 수 있었다. 그리고, 양 화합물은 신규 화합물이기 때문에, 각종 물리화학적 데이터에 의해, 그 구조를 추정하고, 합성에 의해 결정하였다.
이것에 의해, 차푸로사이드 A 및 B는, 차잎 중에서 각각 이소비텍신 및 비텍신의 황산화체로부터 제조되는 것이 판명되었다. 또한, 본 발명자가 아는 한에서는, 플라본 배당체, 및 플라본 C-배당체의 황산화체는 지금까지 밝혀져 있지 않으며, 본 발명에 있어서 처음으로 밝혀진 것이다.
차푸로사이드 A 및 B의 양 전구체 각각으로부터, 가열 처리에 의해 차푸로사이드 A와 차푸로사이드 B가 생성된다. 차푸로사이드 A와 차푸로사이드 B는 항염증 작용을 나타내고, 특히 전자의 작용은 시판 스테로이드제보다도 우수하다고 보고되어 있다.
본 발명에서 확인되고 있는 것은 차푸로사이드 A의 전구체(이소비텍신 2-설페이트)와 차푸로사이드 B의 전구체(비텍신 2-설페이트)로부터 각각 차푸로사이드 A와 B가 생성되는 것뿐이지만, 차푸로사이드 A 및 B의 양 전구체와 동일한 부분 구조를 갖는 화합물은, 차푸로사이드 A와 B와 동일한 부분 구조를 갖는 화합물로 변환되는 것이 추정된다. 또한, 차푸로사이드 A 및 B와 동일한 부분 구조를 갖는 이들 화합물군에도 우수한 스테로이드와 같은 항염증의 생리 활성이 기대된다.
본 발명에 있어서의, 차푸로사이드 및 이의 유연체의 전구체로서 신규 화합물인 황산화 C-배당체의 발견은, 이들에 의해 차푸로사이드를 많이 포함하는 차품종이나 다른 식용 소재의 탐색, 각종 차잎이나 다른 식용 소재로부터의 식품의 제조에 있어서 차푸로사이드 함량의 컨트롤, 및 이를 많이 포함하는 차나 다른 식품의 제조를 가능하게 하는 것으로, 그 의의는 높다.
본 발명의 황산화 C-배당체는, 고상 상태에서 가열에 의해 용이하게 입체 반전(立體反轉)을 수반하는 환화 반응을 일으킨다. 따라서, 본 발명에 의해, 이소비텍신과 비텍신 등의 플라본 C-배당체로부터 황산화 C-배당체를 거쳐 차푸로사이드 및 이의 유연체를 합성할 수 있는, 저렴한 차푸로사이드 및 이의 유연체의 합성법을 제공할 수 있다. 본 발명의 방법에 의하면, 저렴하고 안전한 출발 물질이나 시약을 사용하며, 또한 비교적 온화한 반응 조건임에도 불구하고, 고수율로 차푸로사이드 및 이의 유연체를 생성할 수 있기 때문에, 스케일업에 의해 공업적 생산이 가능하여 산업상 매우 유용하다.
대사에 있어서 황산화는 해독적 배설 기구와 관련지어져 온 것을 고려하면, 차잎 중에 황산화체인 차푸로사이드 전구체가 존재하는 것의 의의는 크다. 이소비텍신과 비텍신에 관해서는, 이들의 항암 작용, UV 조사에 의한 손상의 경감 효과, COX 억제 작용, 항산화적인 효과, 항불안 효과 등이 최근 주목받고 있다. 본 발명의 신규 화합물인 차푸로사이드 전구체는 황산화체로 물에 용해되기 쉬운 점에서, 물에 매우 난용인 이소비텍신과 비텍신에 비해, 인체로의 이행성이 높고, 그 체내 동태 및 생리 활성에 관해서도 이소비텍신 및 비텍신과 같은 약리 작용이 기대되며, 보다 고효율로 게다가 안전성이 우수한 천연 유래의 새로운 타입의 항염증제 등으로서 이용할 수 있는 가능성이 높다.
또한, 대부분의 시판 홍차에 차푸로사이드 전구체의 함량이 적은 점에서, 차 제조의 발효에 있어서의 산화적 효소 반응에서 차푸로사이드 전구체가 어떻게 대사 변환되는지도 흥미롭다.
도 1은 차푸로사이드 전구체의 분리 공정의 일례를 도시하는 차트도이다.
이하에, 본 발명의 실시형태를 설명한다.
(1) 황산화 C-배당체
본 발명의 황산화 C-배당체는 신규 화합물이며, 하기 화학식 A1 또는 B1의 플라본 골격을 갖는 플라본 C-배당체의 황산화체이다.
[화학식 A1]
Figure 112011059482723-pct00013
[화학식 B1]
Figure 112011059482723-pct00014
상기 화학식 A1 및 B1에서,
R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 OH기이고, 바람직하게는, R1은 OH기이며, R1 및 R2는 각각 수소 원자이다.
상기 화학식 A1 또는 B1의 화합물의 구체예로서는, 하기 화학식에 나타낸 A1-1, A1-2, A1-3, A1-4, B1-1, B1-2, B1-3 및 B1-4를 들 수 있다. (이들 화학식들에서, R, R1 및 R2은 상기 화학식 A1 및 B1에서 정의한 바와 동일하다.)
화학식 A1
Figure 112011059482723-pct00015
화학식 A2
Figure 112011059482723-pct00016
상기 화학식 A1의 화합물 중 특히 바람직한 것은, 차푸로사이드 전구체 A(prechafuroside A)(상기 화합물(A1-2))이며, 이것은 이소비텍신의 황산화체(이소비텍신 2"-설페이트(isovitexin 2"-sulfate))이다. 화학식 B1의 화합물 중 특히 바람직한 것은 차푸로사이드 전구체 B(prechafuroside B)(상기 화합물(B1-2))이며, 이것은 비텍신의 황산화체(비텍신 2"-설페이트(vitexin 2"-sulfate))이다.
(2) 차잎 중의 황산화 C-배당체의 단리 방법
본 발명의 상기 화학식 A1 또는 B1의 황산화 C-배당체는, 당해 황산화 C-배당체를 함유하는 차잎 또는 찻물 앙금으로부터 물, 저급 알콜 용제 또는 이들의 혼합물을 사용하여 추출함으로써 단리할 수 있다. 즉, 본 발명의 황산화 C-배당체의 단리 방법은, 상기 황산화 C-배당체를 함유하는 차잎 또는 찻물 앙금으로부터 물, 탄소수 1 내지 3의 저급 알콜 용제 또는 이들의 혼합액을 사용하여 당해 황산화 C-배당체를 추출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 한다.
단리의 구체적인 순서는 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 이하의 공정 (가) 내지 (다)를 포함하는 방법으로 실시된다.
(가) 상기 황산화 C-배당체를 함유하는 생차잎, 차잎 또는 찻물 앙금의 분쇄물을, 물, 탄소수 1 내지 3의 저급 알콜 용제 또는 이들의 혼합액을 사용하여 추출하고, 당해 황산화 C-배당체를 포함하는 추출액을 수득하는 추출 공정
(나) 상기 추출 공정 (가)에서 수득된 추출액을 감압하에서 가열 농축 건고시켜 상기 황산화 C-배당체를 포함하는 건고 물질을 수득하는 농축·건고 공정
(다) 상기 농축·건고 공정 (나)에서 수득된 황산화 C-배당체를 포함하는 건고 물질을, 물 및 n-부탄올 용제를 사용하여 액액 분배하고, 그 수층부를 화학 분리 정제법에 의해 정제하는 정제 공정
상기 추출 공정 (가)에서 사용되는 황산화 C-배당체를 함유하는 차잎 또는 찻물 앙금의 분쇄물에 있어서, 차잎으로서는, 예를 들면 생차잎, 녹차용 차잎, 볶음차용 차잎, 홍차용 차잎, 우롱차 등을 들 수 있지만, 특히 바람직한 것은, 생차잎, 강하게 가열하지 않은 녹차용 차잎 또는 우롱차잎이다. 또한, 황산화 C-배당체를 함유하는 찻물 앙금에 있어서, 떫은 차로서는, 녹차의 제조 공정에 있어서 차잎의 주로 싹 부분 등의 비교적 여린 부분에서 나오는 가루차 또는 이것이 굳어진 것을 사용할 수 있다. 이들 차잎 또는 찻물 앙금의 분쇄 방법은 특별히 제한되지 않는다.
상기 추출 공정 (가)에서 사용되는 탄소수 1 내지 3의 저급 알콜 용제로서는, 메탄올, 에탄올, 프로판올 등을 들 수 있지만, 바람직하게는 메탄올이다. 물과 메탄올을 사용하여 추출을 하는 경우, 보다 구체적으로는, 황산화 C-배당체를 함유하는 차잎 또는 찻물 앙금을 분쇄하여 물에 분산시키고, 이의 차잎 또는 찻물 앙금 분말을 상기 물의 5 내지 20배 용량(바람직하게는 5 내지 15배 용량)의 40 내지 60wt%(바람직하게는 45 내지 55wt%) 메탄올 수용액을 사용하고, 5 내지 70℃에서 5 내지 30분간의 추출 조작을 실시하여 황산화 C-배당체를 포함하는 추출액을 수득한다.
상기 농축·건고 공정 (나)에 있어서는, 추출 공정 (가)에서 수득된 추출액을 감압하(바람직하게는 10 내지 500mmHg의 감압하)에서 충분한 온도(바람직하게는 당해 추출액의 비점보다 20℃ 이상 높은 온도)로까지 가열하여 추출액의 용매를 증발시켜서 농축하고, 또한 그 농축 온도로 가열을 계속하여 용매를 실질적으로 제거하고, 추출액 중에 용해되어 있는 물질을 건고시켜 황산화 C-배당체를 포함하는 건고 물질을 수득하는 것이 특히 바람직하다.
상기 정제 공정 (다)에 있어서는, 농축·건고 공정 (나)에서 수득된 황산화 C-배당체를 포함하는 건고 물질을, 물 및 n-부탄올 용제를 사용하여 액액 분배하고, 그 수층부를 화학 분리 정제에 사용되는 방법에 의해 정제한다. 화학 분리 정제법으로서는, 박층 크로마토그래피, 흡착 크로마토그래피, 분배 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 고속 액체 크로마토그래피(HPCL), 전기 영동 등을 들 수 있다.
상기 황산화 C-배당체는 이소비텍신이나 비텍신과 달리, 황산기의 존재에 의해 수용성이 높은 고극성 물질이다. 따라서, 물과 n-부탄올 용제의 액액 분배에서는, 이소비텍신이나 비텍신, 및 차푸로사이드는 n-부탄올 용제층으로 이행하는데 대해, 상기 황산화 C-배당체는 수층부에 포함된다.
보다 구체적으로는, 상기 정제 공정 (다)에 있어서, 액액 분배후의 수층부를 합성 흡착제 등에 통과시킨 후, 물로 충분히 세정후, 흡착부를 10 내지 60% 메탄올(바람직하게는 30% 메탄올)로 용출시킨 후, 겔 여과나 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 등의 방법으로 분획하고, 각 용출 분획을 140 내지 190℃에서 5 내지 180분(보다 바람직하게는 160℃에서 40분) 가열 처리후에 생성되는 차푸로사이드량을 LC-MS/MS 분석에 의해 구하고, 생성량이 가장 높은 분획만을 HPLC법으로 정제한다.
흡착 크로마토그래피에는, 상품명「Diaion SP825」[미쯔비시가가쿠 가부시키가이샤 제조], Diaion SP207[미쯔비시가가쿠 가부시키가이샤 제조], 앰버라이트 XAD[오르가노 가부시키가이샤 제조], 크로마토용 실리카 겔[와코쥰야쿠사 제조, 머크사 제조] 등을 사용할 수 있다.
겔 여과는, 상품명「Sephadex LH-20」[파마시아사 제조], Bio Gel P-2 등의 겔 여과 크로마토그래피를 사용할 수 있다.
LC-MS/MS 분석법으로서는, 메탄올 수용액 또는 아세토니트릴 수용액에 의한 HPLC-MS/MS 분석법을 사용할 수 있다. 또한 상기 HPLC-MS/MS 분석법에서는, 예를 들면, 인택트 가부시키가이샤 제조의 C18 칼럼을 사용하고, 특정한 용매를 사용하는「Cadenza CD C18의 HPLC-MS/MS 분석법」을 사용할 수 있다.
상기의 메탄올 수용액 또는 아세토니트릴 수용액은, 20 내지 80wt%의 메탄올 수용액, 또는 10 내지 60wt%의 아세토니트릴 수용액인 것이, 특히 HPLC-MS/MS 분석법에 있어서 높은 정밀도로 차잎이나 그것으로부터 분리 과정에서 수득한 분획의 가열 처리후에 이들에 포함되는 차푸로사이드 또는 이의 유연체를 정량할 수 있기 때문에, 더욱 바람직하다.
(3) 플라본 C-배당체로부터의 황산화 C-배당체의 합성 방법
본 발명의 황산화 C-배당체는, 하기 화학식 A0 또는 B0의 플라본 C-배당체로부터 합성함으로써도 수득할 수 있다.
[화학식 A0]
Figure 112011059482723-pct00017
[화학식 B0]
Figure 112011059482723-pct00018
상기 화학식 A0 및 B0에서,
R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 OH기이다.
상기 화학식 A0 또는 B0의 플라본 C-배당체로서는, 하기 화학식에 나타낸 A0-1, A0-2, A0-3, A0-4, B0-1, B0-2, B0-3, 및 B0-4를 들 수 있다. (이들 화학식들에서, R, R1 및 R2는, 각각 상기 화학식 A1 및 B1에서 정의한 바와 동일하다.)
화학식 A0
Figure 112011059482723-pct00019
화학식 B0
Figure 112011059482723-pct00020
상기 화학식 A0의 화합물 중 특히 바람직한 것은, 이소비텍신(상기 화합물(A0-2))이다. 화학식 B0의 화합물 중 특히 바람직한 것은 비텍신(상기 화합물(B0-2))이다.
본 발명의 황산화 C-배당체의 합성 방법은, 상기 화학식 A0 또는 B0의 플라본 C-배당체와 황산기 도입제를 반응시켜 당해 플라본 C-배당체를 황산화하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 한다. 차푸로사이드 전구체 A를 합성하는 경우는 플라본 C-배당체로서 이소비텍신을, 차푸로사이드 전구체 B를 합성하는 경우는 플라본 C-배당체로서 비텍신을 사용한다.
여기에서 사용되는 황산기 도입제로서는 특별히 한정되지 않지만, 피리딘-SO3 착체(Pyridine-SO3(1:1) complex), 황산-DCC, 및 트리에틸아민-SO3 착체로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 것을 들 수 있다.
상기 합성 방법 중, 이소비텍신 및 비텍신으로부터 각각 차푸로사이드 전구체 A 및 B를 합성하는 방법에 관해서 보다 구체적으로 서술하면, 제1 단계에서, 이소비텍신 또는 비텍신의 4위치와 5위치의 하이드록실기를 미리 보호한다. 보호기의 도입에는, 예를 들면 벤즈알데히드디메틸아세탈-PPTS, 벤즈알데히드-염화아연 등을 사용할 수 있다.
그 다음에, 4위치와 5위치에 보호기가 도입된 상기 화합물에 황산기 도입제를 반응시켜, 원하는 2위치에 황산기를 도입한다. 이 때의 반응 온도는, 바람직하게는 20 내지 80℃, 보다 바람직하게는 30 내지 40℃이며, 반응 시간은 0.5 내지 8시간, 보다 바람직하게는 2 내지 4시간이다.
이와 같이 하여 수득한 이소비텍신 또는 비텍신의 4위치와 5위치의 하이드록실기가 보호되고, 2 "또는 3" 위치가 황산화된 이소비텍신 또는 비텍신 유도체를, 양이온 교환 수지(IR-120), 40% 아세트산 등으로 가수분해 처리로 4위치와 5위치의 하이드록실기의 보호기를 제거한 후, 원하는 차푸로사이드 전구체는 Sep-Pack C18을 사용하는 분배 칼럼 크로마토그래피, ODS-C18 칼럼을 사용하는 HPLC, 겔 여과 등으로부터 단리, 정제할 수 있다.
(4) 차푸로사이드 및 이의 유연체의 제조 방법
본 발명의 차푸로사이드 및 이의 유연체의 제조 방법은, 상기 황산화 C-배당체를 140 내지 190℃, 바람직하게는 150 내지 180℃에서 가열하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 한다. 황산화 C-배당체를 가열함으로써, 전이 상태를 거쳐 분자내 환화 반응이 진행되어 차푸로사이드 및 이의 유연체가 생성되는 것으로 생각된다. 그 화학 반응식에 관해서, 차푸로사이드 전구체 A(이소비텍신 2"-설페이트)로부터 차푸로사이드 A의 제조, 및 차푸로사이드 전구체 B(비텍신 2"-설페이트)로부터 차푸로사이드 B의 제조에 있어서의 화학 반응의 예를 이하에 나타낸다.
Figure 112011059482723-pct00021
상기 황산화 C-배당체 중, 화학식 A1의 황산화 C-배당체로부터는, 하기 화학식 A2의 차푸로사이드 및 이의 유연체가 수득된다. 화학식 B1의 황산화 C-배당체로부터는, 하기 화학식 B2의 차푸로사이드 및 이의 유연체가 수득된다. 여기서, 하기 화학식 A2 및 B2에서, R, R1 및 R2는, 각각 상기 화학식 A1 및 B1에서 정의한 바와 동일하다.
[화학식 A2]
Figure 112011059482723-pct00022
[화학식 B2]
Figure 112011059482723-pct00023
보다 구체적으로는, 상기 황산화 C-배당체 중, 하기 화학식 A1-1 및 B1-1의 황산화 C-배당체로부터는, 각각 하기 화학식 A2-1 및 B2-1의 차푸로사이드의 유연체가 수득된다. 화학식 A1-2 및 B1-2의 차푸로사이드 전구체 A와 B로부터는, 각각 하기 화학식 A2-2 및 B2-2의 차푸로사이드 A와 B가 수득된다. 화학식 A1-3 및 B1-3의 황산화 C-배당체로부터는, 각각 하기 화학식 A2-3 및 B2-3의 차푸로사이드의 유연체가 수득된다. 화학식 A1-4 및 B1-4의 황산화 C-배당체로부터는, 각각 하기 화학식 A2-4 및 B2-4의 차푸로사이드의 유연체가 수득된다.
화학식 A2
Figure 112011059482723-pct00024
화학식 B2
Figure 112011059482723-pct00025

실시예
이하에, 실시예를 들어 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예에만 한정되는 것이 아니다.
<실시예 1>
실시예 1에서는, 각종 차잎 중에 포함되는 차푸로사이드 A와 차푸로사이드 B의 함량을, 이하의 방법으로 분석하였다. 우선, 뉴질랜드산의 푸리리(Puriri)(Vitex lucens)를 원료로 하고, 이것으로부터 조제한 이소비텍신 및 비텍신으로부터 광연 반응으로 차푸로사이드 A와 B를 각각 합성하고, 이들을 사용하여 차푸로사이드 분석용의 검량선을 제작하고, 이를 바탕으로 각종 차잎 중의 차푸로사이드 A와 B의 정량 분석을 실시하였다.
(1) 시약
합성에 사용한 시약, 용매는 모두 와코쥰야쿠사 제조의 특급품을 사용하였다. 분배형 분리제로서는 Waters사 제조의 상품명「Sep-Pack C18 Cartridge」에 충전되어 있는「ODS C18」을 사용하였다. 겔 여과에 상품명「Sephadex LH 20」[파마시아사 제조], 흡착 분리제로서 상품명「Diaion SP825」[미쯔비시가가쿠 가부시키가이샤 제조]을 사용하였다. 분리용 HPLC 칼럼에 상품명「Cadenza CD-C18」[인택트 가부시키가이샤 제조]를 사용하였다.
(2) 시료
실험용 차잎에는 이하의 품종의 것을 사용하였다.
녹차; 시즈 7132, 야부키타, 사야마카오리
볶음차; 시즈 7132, 야부키타
우롱차; 시즈 7132, 스이센, 철관음
홍차; 시즈 7132, 앗삼, 다질링
또한, 시즈 7132로부터 제조한 녹차, 우롱차, 및 홍차는, 시즈오카현 시마다시 주재의 차 제조 전문가가 작성한 것이다.
차잎의 추출은, 차잎을 커피밀로 분쇄후, 그 0.2g을 50% MeOH(2ml)로 교반하, 90℃에서 20분 동안 실시하였다. 또한, 이 조작은 2회 반복하였다. 추출액을 감압하 농축 건고시켜 H2O(1ml)에 용해한 후, n-BuOH(1ml×2)을 사용하여 추출하여 수득한 n-BuOH층부를 감압하 농축 건고후, 30%-CH3CN(0.5ml)에 용해하여 분석용 샘플로 하였다.
(3) 측정 및 분석의 방법
NMR 측정은, 상품명「JNM-ECA 500」[니혼덴시사 제조], LC-MS/MS 분석에는 상품명「Agilent 1100」및「API 2000」[Applied Bio사 제조]을 병용하고, QTOF-MS 측정에는 상품명「QSTAR」[Applied Bio사 제조], UV 측정은 상품명「U3900」[가부시키가이샤 히타치세사쿠쇼 제조], 가열에는 미크로 증류용 가열 항온조[Buchi사 제조]를 사용하였다.
(4) 차푸로사이드 A와 B, 및 이소비텍신과 비텍신의 분석
미리 합성한 차푸로사이드 A와 B, 및 이소비텍신과 비텍신으로부터, 각각 0.2ng/ml, 1.0ng/ml, 10ng/ml, 100ng/ml 및 1000ng/ml의 표준 용액을 조제하였다. 이들 각 표준 용액을 사용하고, 칼럼에는 상품명「Cadenza CD-C18」(3×150mm)을 사용하고, 용출 전개는 H2O-CH3CN의 혼합 용매를 사용하여 20분에 걸쳐 15 내지 50%로 하는 그래디언트법을 사용하였다.
각 농도의 표준 용액 10㎕를 사용하여 수득한 크로마토그램의 각 화합물의 피크 면적으로부터 검량선을 작성하고, 이를 바탕으로 ESI법을 사용한 PLC-MS/MS법으로 정량 분석을 실시하였다. MS/MS 조건은 이하에 나타냈다.
Figure 112011059482723-pct00026
(5) 결과 및 고찰
상기 각 상표의 차잎에 포함되는 차푸로사이드 A, 차푸로사이드 B, 이소비텍신, 및 비텍신의 양을 HPLC-MS/MS법으로 분석한 결과를, 하기 표 2에 기재한다. 또한, 표 중에 기재되는 함유량의 단위는「ng/g」이다.
Figure 112011059482723-pct00027
상기 각 상표의 차잎 모두에 관해서, 이소비텍신과 비텍신과 함께 차푸로사이드 A 및 차푸로사이드 B가 검출되었다. 이소비텍신 및 비텍신의 함량은, 차잎 1그램당 몇십에서부터 100㎍이고, 평균치로 보면 그 양은 녹차, 볶음차, 우롱차, 홍차의 순서대로 많으며, 각 차 및 상표간에 큰 차이는 없었다.
한편, 차푸로사이드 A와 B는 차 간에 큰 차이가 확인되었다. 녹차 및 홍차중의 함량은 차잎 1그램당 몇십 ng이고, 상표간의 차이는 거의 없었다. 이들에 비해, 시즈 7132로부터 제조한 우롱차를 제외하고, 볶음차와 우롱차에서는 편차는 있지만 함량은 차잎 1그램당 수㎍으로 녹차 및 홍차에 비해 현저하게 그 함량은 높았다. 볶음차에서는 상표간에는 유의적인 차이는 없었지만, 우롱차에서는 큰 차이가 있었다.
녹차는 신선한 어린잎을 찐 후, 즉시 식히고, 80℃ 정도로 가열하면서 물을 날리면서 손으로 섞듯이 하여 건조시켜 차를 제조한다. 홍차는 약 8시간에 걸쳐 어린잎을 시들게 하여 그 수분을 제거하고, 그 후 손으로 비벼 수시간 동안 산화 발효시킨 후, 90℃ 정도의 열풍으로 단시간에 건조시키면서 차를 제조한다. 우롱차는 성숙한 잎을 2 내지 3시간 동안 일광욕으로 시들게 하고, 실내에서 대바구니 위에서 흔들면서 중간 정도의 발효를 가하고, 계속해서 160 내지 260℃의 열풍에 의해 단시간에 효소를 죽이고, 최종적으로 90℃ 정도에서 건조시키면서 차를 제조한다. 볶음차는 녹차를 160 내지 200℃로 단시간 동안 볶아 제조한다.
실온에서 우롱차 중에서 함량이 많은 것은 강하게 불을 지핀 볶음 흔적이 확인되었지만, 시즈 7132로부터 제조한 우롱차에는 그러한 흔적이 없었다. 또한, 동족의 동일한 차잎으로 제조한 녹차는 볶음으로써 현저한 함량 상승이 확인되었다.
이상에 의해, 차푸로사이드 A와 차푸로사이드 B의 생성 요인 중 하나는 160℃ 이상의 고온에서의 가열이라고 추찰되었다.
또한, 각 상표의 차잎 중의 차푸로사이드 A와 B의 함량과 이소비텍신 및 비텍신량 간에는 상관성은 확인되지 않았다.
(6) 생성 요인의 최적화
시즈 7132로부터 제조한 우롱차를 120, 140, 160, 180 및 200℃에서 40분간 가열한 후, 각각의 차잎 중의 차푸로사이드 A와 B의 함유량을 구하고, 표 3에 기재하는 결과를 수득하였다. 또한, 표 중에 기재되는 함유량의 단위는「ng/g」이다.
Figure 112011059482723-pct00028
또한, 가열 온도 160℃에서 20, 40, 60 및 80분 동안 가열한 후의 각 차잎 중의 차푸로사이드 A와 차푸로사이드 B의 함유량을 구하고, 표 4의 결과를 수득하였다. 또한, 표 중에 기재되는 함유량의 단위는「ng/g」이다.
Figure 112011059482723-pct00029
이상의 결과로부터, 제차(製茶)잎 중에서 차푸로사이드 A와 B는 가열에 의해 생성되고, 그 최적 온도는 본 차잎에서는 160 내지 180℃의 범위인 것이 명확해졌다. 지나치게 높으면 분해되는 것이 나타났다. 또한, 160℃의 가열에서는 약 40분 동안에 그 생성량은 극대가 되고, 그 이상의 시간을 들여도 생성량은 증가하지 않고, 거의 일정하였다.
또한, 각 상표의 녹차, 우롱차, 및 홍차를 최적 온도와 최적 시간으로 가열 처리하면, 녹차와 우롱차, 및 특정 홍차에서는 차푸로사이드 A와 B의 함량은 현저하게 증가하여, 평균 15㎍/g(차잎) 정도가 되었다. 그러나, 시판중인 일반적인 홍차에서는 그 양은 현저하게 증가하지만 평균 수㎍/g(차잎) 정도이었다. 이것으로부터 차 제조 과정의 산화적 발효 처리도 차푸로사이드 A와 B의 생성에 중요한 것이 나타났다.
<실시예 2>
본 실시예에서는, 차푸로사이드 전구체의 분리·정제, 및 구조 결정을 실시하였다.
상기한 바와 같이, 차푸로사이드 A와 B는 이소비텍신과 비텍신에 트리페닐포스핀과 디에틸아조디카르복실레이트를 작용시키는 광연 반응에 의해 생성된다. 여기서, 먼저 전구체의 추출과 그 성상에 관해서 이하와 같이 검토를 더하였다.
(1) 차푸로사이드 전구체의 분리·정제
시즈 7132로부터 제조한 우롱차잎(1g)을 분쇄하고, 환류하, MeOH, 50%-MeOH 및 물(1ml)로 추출하고, 추출액을 감압하 농축 건고후, 물(0.4ml)에 현탁하여 n-BuOH(4 및 1ml)로 추출하였다. 각 추출물, 이들로부터 액액 분배에서 수득한 수층부와 n-BuOH층부를 160℃에서 40분 동안 가열하였다.
그 결과, 각 추출물과 그 수층부 중에만 가열에 의한 차푸로사이드 A와 B의 생성이 확인되었다. 또한, 이소비텍신과 비텍신은, 물과 n-BuOH의 액액 분배에서는 n-BuOH층으로 이행한다. 이것으로부터, 차푸로사이드 A와 B의 전구체는 이소비텍신과 비텍신과는 달리, 이들보다 수용성이 높은 고극성 물질인 것을 알 수 있었다.
이상의 결과를 바탕으로, 전구체의 분리는, 각 분리 단계에서 수득한 분획을 건고후, 160℃에서 40분 동안 가열 처리한 후, 차푸로사이드 A와 B의 LC-MS/MS 분석에 제공하여, 차푸로사이드 A나 B의 생성량이 가장 높았던 분획만을 다음의 분리에 제공하는 방법으로 실시하였다. 이와 같이 하여 확립한 전구체의 분리 공정의 일례를 도 1(차트도)에 도시하였다.
시즈 7132로부터 제조한 우롱차잎(1Kg)을 분쇄하고, 환류하, MeOH(10L)로 추출을 실시하였다. 수득된 추출액을 감압하 농축 건고후, 추출물(348g)을 물(4L)에 현탁하고, n-BuOH(4 및 1L)로 추출하였다. 수층부(142g)를 물(3L)에 용해하고,「Diaion SP825」(2.4L)에 어플라이하고, 물(3L)로 세정후, 30% 메탄올(8L)로 용출시켰다. 30% 메탄올 용출부(248g)를 메탄올로 전개하는「Sephadex LH-20」(12L)을 사용하는 겔 여과로 분획하였다.
Kd=2.1-2.8의 용출 분획(1.97g)을 20% 아세토니트릴 용액으로 전개하는「ODS-C18」(400mL) 칼럼 크로마토그래피에 의해, 차푸로사이드 A와 B의 전구체를 포함하는 조(粗)분획(각각 87mg 및 63mg)을 수득하였다.
최종적으로「Cadenza CD-C18」칼럼과 0.05% HCO2H-CH3CN(82:18)을 사용하는 HPLC법으로 정제하여, 차푸로사이드 전구체(prechafuroside) A, 및 차푸로사이드 전구체 B(각각 5mg 및 4mg)를 수득하였다.
이와 같이, 본 발명에 의하면, 수층부를 강염기성의 이온 교환 수지에 부착하고, 흡착부를「Sephadex LH-20」(12L)을 사용하는 겔 여과, 20% 아세토니트릴 용액으로 전개하는「ODS-C18」(400mL) 칼럼 크로마토그래피,「Cadenza CD-C18」칼럼과 0.05% HCO2H-CH3CN(82:18)을 사용하는 HPLC법 등으로 정제할 수 있다.
(2) 차푸로사이드 전구체의 구조 결정
네가티브 모드(Negative mode)에서의 QTOF-MS 분석에 의해 구한 차푸로사이드 전구체 A와 B 양 화합물의 정밀 분자량(차푸로사이드 전구체 A: m/z 511.05612 (M-H)-과 차푸로사이드 전구체 B: m/z 511.05643(M-H)-)과, 13C-NMR 데이터(하기 표 5 참조)로부터, 양 화합물의 분자식을 「C21H20O13S」(C21H20O13S_H에 대한 계산치, 511.05625)으로 결정하였다.
차푸로사이드 전구체 A는 그 UV 스펙트럼에 있어서 이소비텍신과 동일한 파장, 330nm(ε40200)과 284nm(ε64200)에서 극대 흡수를, 또한 차푸로사이드 전구체 B에서는 비텍신의 극대 흡수 파장, 325nm(ε44100)과 285nm(ε62200)에 극대 흡수를 확인하였다. 또한, 피리딘·디옥산(1:1)에 의한 수해 처리에 의해 차푸로사이드 전구체 A로부터 이소비텍신이, 또한 차푸로사이드 전구체 B에 의해 비텍신이, 거의 정량적으로 생성되었다.
표 5에 기재한 차푸로사이드 전구체 A와 B 및 이소비텍신과 비텍신의 13C-NMR 데이터로부터 명확한 바와 같이, 차푸로사이드 전구체 A와 이소비텍신간, 및 차푸로사이드 전구체 B와 비텍신 양자간의 각 탄소 원자의 케미칼 시프트값은 모두 C-2"을 제외하고, 유의적인 차이는 확인되지 않는다.
그리고, 차푸로사이드 전구체 A와 이소비텍신, 및 차푸로사이드 전구체 B와 비텍신간의 C-2" 탄소 원자의 케미칼 시프트값의 차, 저자장 시프트값에 의해 차푸로사이드 전구체 A와 차푸로사이드 전구체 B는 각각 이소비텍신과 비텍신의 C-2" 위치의 OH기가 황산화된 화합물인 것을 강하게 시사하였다.
Figure 112011059482723-pct00030
이들 결과로부터, 차푸로사이드 전구체 A와 B의 구조는 하기 화학식에 나타낸 각각「이소비텍신 2"-0-설페이트」와「비텍신 2"-0-설페이트」라고 결론지었다. 하기 화학식 중, 왼쪽은「이소비텍신 2"-0-설페이트」이며, 오른쪽은「비텍신 2"-0-설페이트」이다.
Figure 112011059482723-pct00031
QTOF-MS/MS 측정에서 차푸로사이드 전구체 A는 [이소비텍신-H]에 상당하는 C21H19O10에 귀속할 수 있는 프래그먼트 이온(m/z 431.1040(C21H19O10에 대한 계산치, 431.0978))과 OSO3H 상당의 프래그먼트 이온(m/z 96.9618(HSO4에 대한 계산치, 96.9601))을, 또한 차푸로사이드 전구체 B도 [비텍신-H] 상당의 C21H19O10으로 나타내는 프래그먼트 이온(m/z 431.1040(C21H19O10에 대한 계산치, 431.0978))과 OSO3H 상당의 프래그먼트 이온(m/z 96.9604(HSO4에 대한 계산치, 96.9601))을 각각 준 것은, 이들 구조를 잘 지지한다(하기 화학식 참조). 또한, 이하에 서술하는 합성법으로 수득한 추정한 화합물과 우롱차잎으로부터 수득한 차푸로사이드 전구체는 물리화학적인 데이터가 완전히 일치한 점에서 각각을 이소비텍신 2"-0-설페이트와 비텍신 2"-0-설페이트로 결정하였다.
Figure 112011059482723-pct00032
도면. 차푸로사이드 전구체 A와 B의 프래그먼트화
황산화당이나 담즙 알콜의 측쇄의 하이드록실기가 황산화된 화합물에서는, 강알칼리 처리에 의해 근접하는 OH가 O-로 구핵제가 되고, 그 결과 SN2 타입의 치환 반응이 유발되어, 분자내 환화가 진행되는 것이 알려져 있다.
차푸로사이드 전구체 A와 B에서는, 가열에 의해 각각 하기 화학식에 나타내는 전이 상태를 거쳐 분자내 환화 반응이 진행되어 차푸로사이드 A와 차푸로사이드 B가 생성되었다고 하면, 가열에 의한 차푸로사이드 전구체 A와 B로부터 차푸로사이드 A와 B로의 변환은 잘 설명된다.
차푸로사이드 전구체 A와 B로부터의 차푸로사이드 A와 B로의 형성 메카니즘
Figure 112011059482723-pct00033

<실시예 3>
본 실시예에서는 차푸로사이드 전구체 A를 이소비텍신으로부터 합성하였다.
(1) 이소비텍신의 4위치와 5위치의 하이드록실기를 보호한 화합물의 합성
디메틸포름알데히드(DMF) 중에서, 촉매량의 PPTS(Pyridine-p-Toluenesulfuric acid complex)의 존재하, 이소비텍신에 2당량의 벤즈알데히드 디메틸아세탈을 50℃에서 2시간 동안 작용시켜 이소비텍신의 4위치와 5위치의 하이드록실기를 보호한「화합물 A」(Mw(분자량)=520)를 합성하였다(수율: 100%).
(2) 화합물 A의 2"-설페이트(화합물 B)의 합성
상기 화합물 A를 피리딘(Pyridine)에 용해후, 1.5당량의 피리딘-S03(1:1) 착체를 50℃에서 2시간 동안 작용시켜 상기 화합물 A의 2"-설페이트(이하,「화합물 B」라고 한다)(Mw=600)를 합성하였다(수율: 약 50%). 이 방법으로, 화합물 B와 동량의 화합물 A의 3"-설페이트가 생성되었다.
(3) 이소비텍신의 2"-설페이트(이소비텍신 2"-설페이트)의 합성
20% MeOH에 용해한 화합물 B에 산성 타입의 양이온 교환 수지(상품명「Amberlite IR-120(H+)」[롬&하스사 제조]를 가하고, pH 3으로 하고, 약 1시간 동안 50℃에서 교반하 가열하여, 이소비텍신 2"-설페이트를 수득하였다(수율: 100%). 이들 화학 반응을 이하의 식으로 나타낸다.
Figure 112011059482723-pct00034
(4) 수득된 이소비텍신 2"-설페이트는, 상기 실시예 2에 있어서 차잎으로부터 추출한 것과 직접 그 구조를 비교하여, 상기 차푸로사이드 전구체 A인 것을 확인하였다. 또한, 이 이소비텍신 2"-설페이트를 약 160 내지 170℃에서 가열한 결과, 차푸로사이드 A가 수율 약 85%로 생성되었다.
<실시예 4>
본 실시예에서는, 차푸로사이드 전구체 B를, 비텍신으로부터 합성하였다.
(1) 비텍신의 4위치와 5위치의 하이드록실기를 보호한 화합물의 합성
디메틸포름알데히드(DMF) 중에서, 촉매량의 PPTS(Pyridine-p-Toluenesulfuric acid complex)의 존재하, 비텍신에 2당량의 벤즈알데히드디메틸아세탈을 50℃에서 2시간 동안 작용시켜 비텍신의 4위치와 5위치의 하이드록실기를 보호한 「화합물 C」(Mw(분자량)=520)를 합성하였다(수율: 100%).
(2) 화합물 C의 2"-설페이트(화합물 D)의 합성
상기 화합물 C를 피리딘(Pyridine)에 용해후, 1.5당량의 피리딘-SO3(1:1) 착체를 50℃에서 2시간 동안 작용시켜 상기 화합물 C의 2"-설페이트(이하,「화합물 D」라고 한다)(Mw=600)를 합성하였다(수율: 약 50%). 이 방법으로, 화합물 D와 동량의 화합물 C의 3"-설페이트가 생성되었다.
(3) 비텍신의 2"-설페이트(비텍신 2"-설페이트)의 합성
20% MeOH에 용해한 화합물 D에 산성 타입의 양이온 교환 수지(상품명「Amberlite IR-120(H+)」[롬&하스사 제조]을 가하고, pH 3으로 하고, 약 1시간 동안 50℃에서 교반하 가열하여, 비텍신 2"-설페이트를 수득하였다(수율: 100%). 이들의 화학 반응을 이하의 식으로 나타낸다.
Figure 112011059482723-pct00035
(4) 수득된 비텍신 2"-설페이트는, 상기 실시예 2에 있어서 차잎으로부터 추출한 것과 직접 그 구조를 비교하여, 상기 차푸로사이드 전구체 B인 것을 확인하였다. 또한, 이 비텍신 2"-설페이트를 약 160 내지 170℃로 가열한 결과, 차푸로사이드 B가 수율 약 85%로 생성되었다.
본 발명에서 밝혀진 신규 화합물인 차푸로사이드 전구체(차푸로사이드 전구체 A 및 B)는, 그 자체가 항산화 작용, 항알레르기 작용, 항염증 작용, 발암 억제 작용 등이 우수한 약리 작용을 갖는 것이 기대되는 데다가, 황산기가 도입되어 있는 점에서 수용성이 높고 인체와의 친화성이 우수한 것이다. 또한, 당해 차푸로사이드 전구체를 사용하면, 이미 이러한 약효 성분을 갖는 것이 알려져 있는 차푸로사이드 A 및 B를 매우 높은 수율로 제조하는 것이 가능해진다.
따라서, 본 발명에 의하면, 저렴하고 안전한 출발 물질이나 시약을 사용하고, 또한 비교적 온화한 반응 조건임에도 불구하고, 고수율로 차푸로사이드를 생성할 수 있기 때문에, 스케일업에 의해 공업적 생산이 가능하여, 산업상 매우 유용하다.

Claims (7)

  1. 하기 화학식 A1 또는 B1의 황산화 C-배당체.
    [화학식 A1]
    Figure 112011059482723-pct00036

    [화학식 B1]
    Figure 112011059482723-pct00037

    상기 화학식 A1 및 B1에서,
    R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 OH기이다.
  2. 제1항에 있어서, 상기 황산화 C-배당체가, 하기 화학식 A1-2의 이소비텍신의 황산화체 또는 하기 화학식 B1-2의 비텍신의 황산화체인 것을 특징으로 하는, 황산화 C-배당체.
    [화학식 A1-2]
    Figure 112011059482723-pct00038

    [화학식 B1-2]
    Figure 112011059482723-pct00039
  3. 제1항 또는 제2항에 기재된 황산화 C-배당체를 단리하는 방법으로서, 상기 황산화 C-배당체를 함유하는 차잎, 또는 가루차 또는 이것이 굳어진 것으로부터 물, 탄소수 1 내지 3의 저급 알콜 용제 또는 이들의 혼합액을 사용하여 당해 황산화 C-배당체를 추출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 황산화 C-배당체의 단리 방법.
  4. 제3항에 있어서, 이하의 공정 (가), (나) 및 (다)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 황산화 C-배당체의 단리 방법.
    (가) 상기 황산화 C-배당체를 함유하는 생차잎, 차잎, 또는 가루차 또는 이것이 굳어진 것의 분쇄물을, 물, 탄소수 1 내지 3의 저급 알콜 용제 또는 이들의 혼합액을 사용하여 추출하여, 당해 황산화 C-배당체를 포함하는 추출액을 수득하는 추출 공정
    (나) 상기 추출 공정 (가)에서 수득된 추출액을 감압하에서 가열 농축 건고(乾固)시켜, 상기 황산화 C-배당체를 포함하는 건고 물질을 수득하는 농축·건고 공정
    (다) 상기 농축·건고 공정 (나)에서 수득된 황산화 C-배당체를 포함하는 건고 물질을, 물 및 n-부탄올 용제를 사용하여 액액 분배(液液分配)하고, 그 수층부를 화학 분리 정제법에 의해 정제하는 정제 공정
  5. 제1항 또는 제2항에 기재된 황산화 C-배당체를 합성하는 방법으로서, 하기 화학식 A0 또는 B0의 플라본 C-배당체와, 피리딘-SO3 착체, 황산-디사이클로헥실카르보디이미드(DCC), 및 트리에틸아민-SO3 착체로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 황산기 도입제를 반응시켜, 당해 플라본 C-배당체를 황산화하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 황산화 C-배당체의 합성 방법.
    [화학식 A0]
    Figure 112016021289407-pct00040

    [화학식 B0]
    Figure 112016021289407-pct00041

    상기 화학식 A0 및 B0에서,
    R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 OH기이다.
  6. 삭제
  7. 하기 화학식 A2 또는 B2의 차푸로사이드 및 이의 유연체(類緣體)를 제조하는 방법으로서, 제1항 또는 제2항에 기재된 황산화 C-배당체를 130 내지 190℃에서 가열하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 차푸로사이드 및 이의 유연체의 제조 방법.
    [화학식 A2]
    Figure 112011059482723-pct00042

    [화학식 B2]
    Figure 112011059482723-pct00043

    상기 화학식 A2 및 B2에서,
    R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 OH기이다.
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Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5678640B2 (ja) * 2010-12-17 2015-03-04 静岡県公立大学法人 チャフロサイド類の簡易製造方法
MX2013007884A (es) 2011-01-07 2013-09-13 Elcelyx Therapeutics Inc Terapias a base de ligando del receptor quimiosensorial.
US9795792B2 (en) 2011-02-25 2017-10-24 Medtronic, Inc. Emergency mode switching for non-pacing modes
TWI566772B (zh) * 2011-04-12 2017-01-21 資生堂股份有限公司 美白劑及黑色素生成抑制劑
CN104254325A (zh) 2012-01-06 2014-12-31 埃尔舍利克斯治疗公司 双胍组合物和治疗代谢性病症的方法
EP2800562A2 (en) 2012-01-06 2014-11-12 Elcelyx Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treating metabolic disorders
JP5229839B1 (ja) * 2012-01-18 2013-07-03 静岡県公立大学法人 チャフロサイドｂ高含有飲料用茶葉及びその製造方法
AU2013290100A1 (en) 2012-07-11 2015-01-29 Elcelyx Therapeutics, Inc. Compositions comprising statins, biguanides and further agents for reducing cardiometabolic risk
MX2020011594A (es) 2013-01-05 2022-01-13 Anji Pharma Us Llc Composición de liberación demorada que comprende biguanida.
JP6654316B2 (ja) * 2015-05-29 2020-02-26 静岡県公立大学法人 硫酸化ビテキシン２”または硫酸化イソビテキシン２”の前駆体、メラニン生成抑制剤およびそれらを含む飲食品
WO2017222078A1 (ja) * 2016-06-24 2017-12-28 サントリーホールディングス株式会社 褐変抑制用組成物及びその用途
JP7262222B2 (ja) * 2018-12-21 2023-04-21 株式会社 資生堂 褐色脂肪細胞活性化剤
CN110361346A (zh) * 2019-07-19 2019-10-22 浙江大学 一种铁皮石斛药材的质量检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1731522A1 (en) 2004-03-31 2006-12-13 Suntory Limited Process for producing flavone c glycoside derivatives
WO2008032105A2 (en) 2006-09-15 2008-03-20 The Babraham Institute Flavonoid derivatives and their uses
EP1533313B1 (en) 2002-07-03 2008-07-02 Suntory Limited Novel flavone c-glycoside derivatives and composition containing the derivatives

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2041216B1 (es) * 1992-02-25 1994-06-16 Espanola Prod Quimicos Procedimiento de preparacion de un nuevo derivado sulfatado de diosmina.
JP2006176407A (ja) * 2003-04-18 2006-07-06 Daiichi Asubio Pharma Co Ltd 新規フラボン誘導体、その製造法およびそれらを含む医薬組成物
JP2005314260A (ja) 2004-04-28 2005-11-10 Japan Science & Technology Agency フラボンｃ配糖体の製法
JP2006008626A (ja) * 2004-06-28 2006-01-12 Daiichi Asubio Pharma Co Ltd フラボン誘導体の製造法ならびにフラボン誘導体およびそれを含む医薬組成物
JP2006342103A (ja) 2005-06-09 2006-12-21 National Cancer Center-Japan ウーロン茶葉抽出物ｏｔａｃを有効成分とする発癌抑制剤
JP2008239513A (ja) * 2007-03-26 2008-10-09 Shizuokaken Koritsu Daigaku Hojin 効率的フラボン構築に基づくＣｈａｆｕｒｏｓｉｄｅの新規製造法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1533313B1 (en) 2002-07-03 2008-07-02 Suntory Limited Novel flavone c-glycoside derivatives and composition containing the derivatives
EP1731522A1 (en) 2004-03-31 2006-12-13 Suntory Limited Process for producing flavone c glycoside derivatives
WO2008032105A2 (en) 2006-09-15 2008-03-20 The Babraham Institute Flavonoid derivatives and their uses

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