KR101508397B1 - Methods for detecting inflammatory bowel disease - Google Patents

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Abstract

본 발명은 대조군과 비교하여 포유동물의 조직 또는 세포에서 LY6 유전자의 증가된 발현을 검출함으로써 포유동물의 위장관 조직 또는 세포에서 염증성 장 질환의 존재를 검출하는 방법을 제공한다. The present invention provides a method for detecting the presence of inflammatory bowel disease in the gastrointestinal tract tissue or cells of a mammal by detecting the increased expression of LY6 genes in a tissue or cell of a mammal as compared to the control group.
LY6 유전자 발현, 유전자 발현 프로파일, 염증성 장 질환 LY6 gene expression, gene expression profile, inflammatory bowel disease

Description

염증성 장 질환의 검출 방법{METHODS FOR DETECTING INFLAMMATORY BOWEL DISEASE} Detection of inflammatory bowel disease {METHODS FOR DETECTING INFLAMMATORY BOWEL DISEASE}

본 발명은 염증성 장 질환 발병기전에서의 유전자 발현 프로파일에 관한 것이다. The present invention relates to gene expression profiles in inflammatory bowel disease pathogenesis. 이러한 발견은 염증성 장 질환의 검출 및 진단에서 용도가 발견된다. This discovery has applications in the detection and diagnosis of inflammatory bowel disease is found.

미국에서 약 100만명의 환자가 앓고 있는 위장관의 만성 염증성 장애인 염증성 장 질환 (IBD)은 2가지 주요 군으로 구성된다: 궤양성 대장염 (UC) 및 크론병 (CD). US Chapter of about one million people with disabilities of patients with chronic inflammatory gastrointestinal inflammatory suffering from the disease (IBD) is composed of two main groups: ulcerative colitis (UC) and Crohn's disease (CD). IBD의 양쪽 형태 모두에서, 장의 미생물이 유전학적으로 감수성인 개체에서 질환을 개시시킬 수 있다. In both forms of IBD, this chapter microbes can initiate the disease in genetically susceptible person object. UC는 종종 결장에 한정되는 한편, CD는 소장의 회장 및 결장에서 전형적으로 발생한다 ([Podolsky, DK, N. Engl. J. Med. 347:417-429 (2002)]). UC is often restricted to the colon the other hand, CD typically occurs in the colon, and the president of the small intestine ([Podolsky, DK, N. Engl J. Med 347:.. 417-429 (2002)]). IBD 환자로부터의 조직의 유전자 발현 프로파일링(profiling)은 치료법 및/또는 진단에 대한 가능한 표적에 대한 약간의 식견을 제공하였다 (예를 들어, [Dieckgraefe, BK et al., Physiol. Genomics 4:1-11 (2000)]; [Lawrance IC et al., Hum Mol Genet. 10:445-456 (2001)]; [Dooley TP et al., Inflamm. Bowel Dis. 10:1-14 (2004)]; 및 [Uthoff SM, Int J Oncol. 19:803-810 (2001)] 참조). Gene expression profiling (profiling) of tissue from IBD patients has provided some insight into possible targets for therapy and / or diagnosis (e.g., [Dieckgraefe, BK et al, Physiol Genomics 4:.. 1 -11 (2000)]; [Lawrance IC et al, Hum Mol Genet 10:. 445-456 (2001)]; [Dooley TP et al, Inflamm Bowel Dis 10:.... 1-14 (2004)]; and [Uthoff SM, Int J Oncol 19:. 803-810 (2001)] reference). 염증성 장 질환을 앓고 있는 환자에서의 유전자 조절곤란의 추가적인 연구에는, 예를 들어, UC 및 CD에서의 여러 유전자에 대한 특색있는 유전자 발현 프로 파일들이 개시된 Lawrance, IC 등의 연구가 포함된다 ([Lawrance, IC et al., Human Mol. Genetics 10(5):445-456 (2001)]). Further study of the difficulties gene regulation in patients with inflammatory bowel disease include, for example, it is disclosed that characteristic gene expression profiles that for many genes in UC and CD that includes studies of Lawrance, IC ([Lawrance , Genetics 10 IC et al, Human Mol (5):.. 445-456 (2001)]). Uthoff, SMS 등은 마이크로어레이 분석을 사용한 UC 및 CD에 대한 후보 유전자의 확인을 개시하였다 ([Uthoff, SMS et al., Int'l. J. Oncology 19:803-810 (2001)]). Uthoff, SMS, etc. discloses the identification of candidate genes for UC and CD using micro array analysis ([Uthoff, SMS et al, Int'l J. Oncology 19:.. 803-810 (2001)]). Dooley, TP 등은 IBD에서의 유전자 발현과 이러한 장애에 대한 약물 치료의 상관관계를 개시하였다 ([Dooley, TP et al., Inflamm. Bowel Dis. 10(1): 1-14 (2004)]). Dooley, TP et al. Disclosed correlation of gene expression and drug therapy for these disorders in IBD ([Dooley, TP et al, Inflamm Bowel Dis 10 (1):... 1-14 (2004)]) .

염증성 장 질환의 추가적인 생물학적 마커의 확인이 이러한 만성 질환의 진단에서 사용하기 위해 요구된다. The identification of additional biological marker of the inflammatory bowel disease is required for use in the diagnosis of this chronic disease. 본 발명은 이러한 요구를 충족시킨다. The present invention meets these needs.

본원에서 언급된 모든 참고문헌의 전체 내용은 거명에 의해 본원에 포함된다. The entire contents of all references referred to herein are incorporated herein by reference.

발명의 개요 Summary of the Invention

LY6 수퍼패밀리의 유전자의 구성원들이 뮤린(murine) 대장염 모델 및 IBD를 앓고 있는 인간 환자의 장 조직 내의 장 상피 세포 (IEC)의 표면 상에서 상향조절되고, 이러한 유전자가 건강한 IEC 상에서는 발현되지 않는다는 독특한 발견이 본원에서 개시된다. Gene member of LY6 superfamily that are upregulated on the surface of murine (murine) chapter in the field of human patients suffering from colitis model and IBD tissue epithelial cells (IEC), a unique discovery of these does genes are not expressed On Healthy IEC It is disclosed herein. LY6 패밀리 구성원의 대다수는 조혈 기원의 세포 상에 광범위하게 분포되고 비-조혈 세포 상에서는 더 한정되어 발현되는 GPI-앵커형(anchored) 세포 표면 당단백질이다. The majority of LY6 family members are widely distributed and the ratio on the hematopoietic origin cells is a cell surface glycoprotein GPI- anchor type (anchored) to be expressed is On hematopoietic cells more limited. 면역 세포의 분화의 마커로서 광범위하게 사용되지만 ([Sunderkotter, C. et al., J. Immunol. 172:4410-4417 (2004)]), LY6 패밀리가 지니는 기능은 판명하기가 어려웠다 ([Shevach, EM and PE Korty, Immunol. Today 10: 195-200 (1989)]). Widely used as markers of differentiation of immune cells, but the ([Sunderkotter, C. et al, J. Immunol 172:.. 4410-4417 (2004)]), LY6 family is having functional is difficult to ascertain ([Shevach, EM and PE Korty, Immunol Today 10:. 195-200 (1989)]). LY6 분자가 T 세포 활성화 ([Zhang, ZX et al., Eur. J. Immunol. 32: 1584-1592 (2002)] 및 [Henderson, SC et al., J. Immunol. 168: 118-126 (2002)]), 후각 ([Chou, JH et al., Genetics 157:211-224 (2001)]) 및 세포 부착 ([Jaakkola, I. et al., J. Immunol. 170: 1283-1290 (2003)])을 포함하는 다양한 기능에서 수반되는 것으로 리포트들에서 나타났다. LY6 molecules are T cell activation ([Zhang, ZX et al, Eur J. Immunol 32:... 1584-1592 (2002)] and [Henderson, SC et al, J. Immunol 168:.. 118-126 (2002 )), olfactory ([Chou, JH et al, Genetics 157:. 211-224 (2001)]), and cell adhesion ([Jaakkola, I. et al, J. Immunol 170:.. 1283-1290 (2003) - to be involved in a variety of functions including) it appeared in the report.

가장 넓은 의미에서, 본 발명은 대조군 포유동물과 비교하여 장 장애를 앓고 있는 1차 포유동물로부터의 장 조직에서 인간 LY6 유전자 패밀리의 유전자의 증가된 발현을 검출하는 방법을 제공한다. In the broadest sense, the present invention provides a method of detecting increased expression of genes of the human LY6 gene family in intestinal tissue from a first mammal suffering from a bowel disorder compared to the control mammal animal. 더욱 제한적인 의미에서, 상기 방법은 인간 LY6H, LYPD1, LYPD3, 및 LYPD5 발현과 관련된 장 장애에 관련된 장애의 진단에 적용가능할 것으로 예상되고, 상기 장애에는 염증성 장 질환 (IBD), 예컨대 궤양성 대장염 (UC) 및 크론병 (CD)이 비제한적으로 포함된다. In a more limited sense, the method is expected to be applicable to the diagnosis of disorders related to bowel disorder associated with human LY6H, LYPD1, LYPD3, and LYPD5 expression, the inflammatory bowel above disorders (IBD), such as ulcerative colitis ( UC) and Crohn's disease (CD) is included as a non-restrictive. 한 실시양태에서, 본 발명의 방법은 IBD 치료 처치의 응답자 및 비응답자를 검출하는데 유용하다. In one embodiment, the method of the present invention are useful to detect the responder and non-responder of IBD therapeutic treatment. 한 실시양태에서, IBD는 궤양성 대장염 (UC)이다. In one embodiment, the IBD is ulcerative colitis (UC). 한 실시양태에서, IBD는 크론병 (CD)이다. In one embodiment, the IBD is Crohn's disease (CD). 한 실시양태에서, 장 조직은 결장 조직이다. In one embodiment, the intestinal tissue is colon tissue. 한 실시양태에서, 결장 조직은 S자 결장이다. In one embodiment, the colon tissue is an S-shaped colon. 한 실시양태에서, LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 유전자 발현이 IBD, CD 또는 UC를 앓고 있지 않은 포유동물의 정상적인 장 조직 (예컨대 정상적인 결장 조직)과 비교하여 IBD, UC 또는 CD 포유동물의 장 조직 (예컨대 결장 조직)에서 증가된다. In one embodiment, LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 gene expression are IBD, chapter in IBD, UC or CD mammal as compared to a normal section of the mammal is not suffering from a CD or UC tissues (e.g. normal colon tissue) It is increased in the tissue (e.g. colon tissue). 한 실시양태에서, LY6H 유전자는 서열 1의 핵산을 포함하고. In one embodiment, the LY6H gene comprises the nucleic acid of SEQ ID NO: 1. 서열 2를 포함하는 LY6H 폴리펩티드를 코딩한다. The LY6H polypeptide comprising SEQ ID NO: 2 codes. 한 실시양태에서, LYPD1 유전자는 서열 3 또는 4의 핵산을 포함하고, 서열 5를 포함하는 LYPD1 폴리펩티드를 코딩한다. In one embodiment, LYPD1 gene comprises the nucleic acid of SEQ ID NO: 3 or 4, and encoding the LYPD1 polypeptide comprising SEQ ID NO: 5. 한 실시양태에서, LYPD3 유전자는 서열 6의 핵산을 포함하고, 서열 7의 LYPD3 폴리펩티드를 코딩한다. In one embodiment, LYPD3 gene comprises the nucleic acid of SEQ ID NO: 6, encoding the LYPD3 polypeptide of SEQ ID NO: 7. 한 실시양태에서, LYPD5 유전자는 서열 8 또는 9의 핵산을 포함하고, 서열 10의 LYPD5 폴리펩티드를 코딩한다. In one embodiment, LYPD5 gene comprises the nucleic acid of SEQ ID NO: 8 or 9, and encoding the LYPD5 polypeptide of SEQ ID NO: 10.

한 실시양태에서, 본 발명의 방법은 장 장애를 앓고 있을 것으로 추측되는 시험 포유동물로부터 조직 샘플을 수득하는 단계, 조직을 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 단백질 또는 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5를 코딩하는 핵산과 상호작용하는 검출가능 제제와 접촉시키는 단계, 및 대조군 조직과 비교하여 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 발현 수준을 결정하는 단계를 포함한다. In one embodiment, the invention of the method field to obtain a tissue sample from a test mammal that is supposed to be suffering from the disorder, a tissue LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 protein or LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or as compared with the phase, and control tissue is contacted with detectable agent that interacts with nucleic acid encoding the LYPD5 determining a LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 expression levels. 한 실시양태에서, 대조군과 비교하여 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5의 증가된 발현은 시험 포유동물에 IBD가 존재함을 나타낸다. In one embodiment, compared to the control LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or increased expression of LYPD5 indicates that IBD is present in the test mammal. 한 실시양태에서, 대조군 장 조직과 비교하여 시험 장 조직에서의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5의 증가된 발현은 시험 포유동물에 UC가 존재함을 나타낸다. In one embodiment, LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or increased expression of LYPD5 in a test field, in comparison with the control intestinal tissue organization indicates that UC is present in the test mammal. 한 실시양태에서, 대조군 장 조직과 비교하여 시험 장 조직에서의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5의 증가된 발현은 시험 포유동물에 CD가 존재함을 나타낸다. In one embodiment, LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or increased expression of LYPD5 in a test field, in comparison with the control intestinal tissue organization shows that the CD is present in the test mammal. 한 실시양태에서, 시험 및 대조군 포유동물로부터의 조직 또는 세포는 결장으로부터의 것이다. In one embodiment, the test and control tissue or cell from a mammal is from a colon.

한 실시양태에서, LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 발현은 유전자 발현의 검출에 의해, 예컨대 조직 샘플 또는 세포 내의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5를 코딩하는 mRNA의 검출에 의해 결정된다. In one embodiment, LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 expression is determine by detection of mRNA for the detection of gene expression by, for example, encoding a tissue sample or LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 in a cell. 한 실시양태에서, 대조군 샘플은 위장 장애, 예컨대 IBD, UC 또는 CD를 앓고 있지 않은 것으로 공지된 포유동물로부터 수득한 동일한 조직 또는 세포 유형의 조직 또는 세포의 샘플이다. In one embodiment, the control sample is a sample of the gastrointestinal disorder, such as IBD, the same tissue or cell type of tissue or cells obtained from a mammal known not suffering from UC or CD. 한 실시양태에서, 대조군 샘플은 여러 정상 조직으로부터의 또는 다중 세포주로부터의 RNA를 포 함하는 보편적 표준물이다. In one embodiment, the control sample is a universal standard water that contains the RNA from a cell line or a multiple from the number of normal tissues. 마이크로어레이 분석에서, 이같은 보편적 표준물은 실험내 및 실험간 변이를 모니터링 및 제어하는데 유용하다. In microarray analysis, such universal standards are useful for monitoring and controlling the variation between experiments, and within experiments. 한 실시양태에서, 보편적 표준물 (또는 보편적 기준(Universal Reference) RNA (URR))은 [Novoradovskaya, N. et al., (2004) BMC Genomics 5:20]에서 제공된 바와 같이 제조되고, 상기 참고문헌은 거명에 의해 전체적으로 본원에 포함된다. In one embodiment, universal standards (or a universal standard (Universal Reference) RNA (URR)) is prepared as provided in [Novoradovskaya, N. et al., (2004) BMC Genomics 5:20], the reference which it is incorporated herein entirely by reference. 한 실시양태에서, 마우스 RNA의 마이크로어레이 분석에서 대조군으로 사용하기 위해, URR은 Stratagene®로부터의 보편적 마우스 기준 RNA (카탈로그 #740100, Stratagene® (La Jolla, CA))이다. In one embodiment, the order in microarray analysis of mouse RNA for use as a control, URR is a Universal Mouse RNA standards (catalog # 740100, Stratagene® (La Jolla, CA)) from Stratagene®. 한 실시양태에서, 인간 RNA의 마이크로어레이 분석에서 대조군으로 사용하기 위해, URR은 Stratagene®로부터의 보편적 인간 기준 RNA (카탈로그 #740000)이다. In one embodiment, for use as a control in microarray analysis of human RNA, the URR is a Universal Human RNA standards (catalog # 740 000) from Stratagene®. 한 실시양태에서, 래트 RNA의 마이크로어레이 분석에서 대조군으로 사용하기 위해, URR은 Stratagene®로부터의 보편적 래트 기준 RNA (카탈로그 #740200)이다. In one embodiment, for use as a control in microarray analysis of rat RNA, the URR is a Universal Rat reference RNA (catalog # 740 200) from Stratagene®. RNA가 마우스 RNA인 한 실시양태에서, 전체 RNA가 추출되는 세포주는 배아, 배아 섬유모세포, 신장, 간의 간세포, 폐의 폐포 대식세포, B-림프구, T-림프구 (흉선), 유선, 근육의 근육모세포, 피부, 및 고환으로부터 유래된 세포주를 포함한다. In one embodiment the RNA is mouse RNA, the cell line is the total RNA extracted embryo, embryo fibroblast, kidney, between hepatocytes, alveolar macrophages of the lung for, B- lymphocytes, T- lymphocyte (thymus), mammary gland, muscle muscle cells, a cell line derived from skin, and testis. RNA가 인간 RNA인 한 실시양태에서, 전체 RNA가 추출되는 세포주는 유선 선암종, 간의 간모세포종, 경부 선암종, 배아 암종 또는 고환, 뇌의 아교모세포종, 흑색종, 지방육종, 조직구 림프종 (대식세포, 조직구), T 림프모구의 림프모구성 백혈병, B 림프구 형질세포종 흑색종으로부터 유래된 세포주를 포함한다. In one embodiment the RNA is human RNA, the cell line is the total RNA extracted is wired adenocarcinoma, liver medulloblastoma, cervical adenocarcinoma, embryonic carcinoma or testis, brain glioblastoma, melanoma, liposarcoma, histiocytic lymphoma between (macrophages, histiocytic), and a cell line derived from a T lymphoblastic leukemia in lymphoblastic hair bulb, B lymphocyte plasmacytoma melanoma. RNA가 래트 RNA인 한 실시양태에서, 전체 RNA가 추출되는 세포주는 혈액 호염기구성 백혈병, 혈액 T-림프구 림프종, 혈액 B-림프모구 하이브리도마, 뇌의 신경 아교종, 배아 난황 암종, 배아의 정상적인 섬유모세포, 정상적인 신장, 간의 간암, 폐의 정상적인 폐포 대식세포, 폐의 정상적인 제II형 폐포, 유선 선암종, 근육의 근육모세포, 정상적인 피부, 및 고환 라이디히 세포 종양으로부터 유래된 세포주를 포함한다. In one embodiment the RNA is rat RNA, the cell line is the total RNA extracted is blood basophilic leukemia, blood T- lymphocyte lymphoma, blood B- lymphoid hair bulb hybridoma, brain nerve ah glioma, embryo yolk sac carcinoma, embryo of and a normal fibroblast, normal kidney, derived cell line from the liver, the normal alveolar macrophages, normal type II alveolar lung, mammary gland adenocarcinoma, muscle muscle cells, normal skin, and testis Lai Grundig cell tumor of the lung between.

한 양상에서, 본 발명은 용기, 및 용기 내에 함유된 당해 조성물을 포함하는 제조품을 제공하고, 이때 당해 조성물은 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 또는 이의 상보체를 코딩하는 핵산, 및/또는 항-LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 항체 또는 항체들, 또는 이의 항-LY6H-, LYPD1-, LYPD3- 및/또는 LYPD5-결합 단편을 포함하고, 상기 핵산 및/또는 항체는 검출가능하다. In one aspect, the present invention provides the container, and provides the article of manufacture comprising a the composition contained in the container, wherein the composition LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 or nucleic acid encoding its complement, and / or wherein -LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 antibody or antibodies, or including thereof wherein -LY6H-, LYPD1-, LYPD3- and / or LYPD5- binding fragment thereof, said nucleic acid and / or antibodies can be detected. 한 실시양태에서, 당해 조성물은 장 장애를 앓고 있는 것으로 추측되는 시험 포유동물의 조직 샘플 내의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 핵산에 결합하는 핵산, 예컨대 비제한적으로 LY6H-, LYPD1-, LYPD3- 및/또는 LYPD5-코딩 핵산 또는 이의 상보체를 검출하기 위한 검출가능 제제를 포함한다. In one embodiment, the composition is a nucleic acid that binds to the LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 nucleic acid in a tissue sample of a test mammal, probably suffering from a bowel disorder, for example, but not limited to, LY6H-, LYPD1-, LYPD3- and / or LYPD5- comprises a detectable agent for detecting the encoding nucleic acid or its complement. 한 실시양태에서, 당해 조성물은 장 장애를 앓고 있는 것으로 추측되는 시험 포유동물의 조직 샘플 내의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5에 예를 들어 결합하는 항체를 검출하기 위한 검출가능 제제를 포함한다. In one embodiment, the present composition comprises a detectable agent for detecting such antibody binding contained in the test mammal LY6H in the tissue samples of the animal, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5, probably suffering from a bowel disorder. 한 실시양태에서, 조성물의 항체는 검출가능하게 표지된다. In one embodiment, the antibody of the composition is labeled detectably. 한 실시양태에서, 조성물의 항체는 제2 항체에 의해 검출가능하고, 이러한 제2 항체가 검출가능하거나 또는 검출가능하게 표지된다. In one embodiment, the composition of the antibody can be detected by a second antibody, this second antibody is labeled detectably or detecting possible. 제조품은 용기에 고정된 표지, 또는 용기 내에 포함된 포장 삽입물을 추가로 임의적으로 포함할 수 있고, 이는 장 조직 (비제한적으로 결장 조직을 포함함)에서의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5의 증가된 발현의 검출에서 의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 핵산 또는 이의 상보체 및/또는 항-LY6H, 항-LYPD1, 항-LYPD3 및/또는 항-LYPD5 항체 또는 이의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 결합 단편의 용도를 지시한다. The article of manufacture may optionally include as an additional in the package insert contained in the cover, or container fixed to the container, which intestinal tissue (Non also limited including a colon tissue) of the LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 in LY6H, LYPD1, LYPD3 in the detection of increased expression and / or LYPD5 nucleic acid or its complement and / or anti--LY6H, wherein -LYPD1, wherein -LYPD3 and / or anti--LYPD5 antibody or a LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 directs the use of binding fragments. 한 실시양태에서, 장 장애는 IBD이다. In one embodiment, the bowel disorder is IBD. 한 실시양태에서, 장 장애는 UC 또는 CD이다. In one embodiment, the bowel disorder is UC or CD. 한 실시양태에서, LYPD1 폴리펩티드 및 항-LYPD1 항체는 각각 US7,157,558 및 US7,144,990에 개시된 항체이다. In one embodiment, LYPD1 polypeptide and the anti -LYPD1 antibody is an antibody as disclosed in US7,157,558 and US7,144,990, respectively.

한 양상에서, 본 발명은 (a) 포유동물로부터 수득한 조직 또는 세포의 시험 샘플, 및 (b) 동일한 조직 기원 또는 유형의 장 장애를 앓고 있지 않은 포유동물로부터의 공지된 정상 세포의 대조군 샘플 내의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 검출하는 것을 포함하며, 이때 대조군 샘플과 비교하여, 시험 샘플에서의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 폴리펩티드의 더 높은 수준의 발현은 시험 샘플을 수득한 포유동물에 장 장애가 존재함을 나타내는 것인, 포유동물에서 장 장애의 존재를 진단하는 방법에 관한 것이다. In one aspect, in the present invention comprises (a) testing of a tissue or a cell obtained from a mammalian sample, and (b) of known normal cells control sample from the mammal is not suffering from a bowel disorder of the same tissue origin or type, LY6H, the LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 and includes detecting the level of expression of a gene encoding a polypeptide, and this time compared to the control sample, the test sample LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 higher levels of the polypeptide in expression relates to being, a method of diagnosing the presence of a bowel disorder in a mammal, which indicates that a failure exists in the field to give the mammal a test sample. 한 실시양태에서, 장 장애는 IBD이다. In one embodiment, the bowel disorder is IBD. 한 실시양태에서, IBD는 UC이다. In one embodiment, the IBD is UC. 한 실시양태에서, IBD는 CD이다. In one embodiment, the IBD is CD. 한 실시양태에서, LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 폴리펩티드에 대한 항체, 또는 항체의 결합 단편을 시험 및 대조군 샘플과 접촉시키고, 항체-폴리펩티드 복합체 형성의 상대적인 양을 결정함으로써 검출된다. In one embodiment, by contacting a binding fragment of an antibody, or antibody to LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 polypeptide and the test and control samples, antibody is detected by determining the relative amount of a polypeptide complex formation. 대조군 샘플과 비교하여 시험 샘플에서의 더 높은 수준의 항체-폴리펩티드 복합체 형성은 시험 포유동물에 장 장애, 예컨대 IBD, UC 또는 CD가 존재함을 나타낸다. The antibodies of the high level in the test sample compared to the control sample-polypeptide complex formation indicate that the bowel disorder, such as IBD, UC or CD is present in the test mammal. 본 발명의 항체가 검출가능하게 표지되거나, 또는 별법적으로, 검출가능한 제2 항체의 후속 결합에 의해 항체가 검출된다. Or the antibody is labeled to enable detection of the invention, or by law, the antibody is detected by subsequent binding of a detectable second antibody.

추가적인 실시양태에서, 본 발명은 (a) 시험 포유동물로부터 수득한 조직 또는 세포를 포함하는 시험 샘플을 높은 엄격도에서 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 핵산 (또는 이의 상보체)에 혼성화되는 올리고뉴클레오티드 또는 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 단계 및 (b) 시험 샘플 내에서의 올리고뉴클레오티드 또는 항체와 각각 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 핵산 (또는 이의 상보체) 또는 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 폴리펩티드 간의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하며, 이때, 대조군 샘플과 비교하여 시험 샘플에서의 더 많은 이같은 복합체의 형성은 시험 포유동물 내의 장 장애 (예컨대 IBD, UC 또는 CD)의 존재를 나타내는 것인, 포유동물에서 장 장애의 존재를 진단하는 방법에 관한 것이다. In a further embodiment the present invention provides oligonucleotides that hybridize to (a) test mammal a test sample containing a tissue or a cell obtained from an animal in a high stringency LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 nucleic acid (or complement thereof) nucleotide or LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 polypeptide specific to the bound antibody, and contacting and (b) testing the sample oligonucleotide or antibody and each of LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 nucleic acid in the (or in comprising the step of detecting the formation of its complement) or LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 complex between the polypeptide and, at this time, the more the formation of many such complexes in the test sample compared to the control sample is a chapter in the test mammal, that would indicate the presence of the disorder (e.g. IBD, UC or CD), relates to a method of diagnosing the presence of a bowel disorder in a mammal. 한 실시양태에서, 장 장애는 IBD이다. In one embodiment, the bowel disorder is IBD. 한 실시양태에서, 장애는 UC이다. In one embodiment, the disorder is UC. 한 실시양태에서, 장애는 CD이다. In one embodiment the disorder is CD. 한 실시양태에서, 시험 및 대조군 포유동물의 조직은 결장 조직이다. In one embodiment, the test and control tissue of mammals is colon tissue. 임의적으로, 본 발명의 방법에 의해 사용된, LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 유전자에 혼성화되는 올리고뉴클레오티드는 검출가능한 항체 또는 올리고뉴클레오티드, 검출가능하게 표지된 항체 또는 올리고뉴클레오티드, 고체 지지체에 부착된 항체 또는 올리고뉴클레오티드 등이고/이거나, 조직 또는 세포의 시험 샘플은 장 장애를 앓고 있는 것으로 추측되는 개체로부터 수득되고, 이때 상기 장애는 IBD이고, 예컨대 비제한적으로 UC 또는 CD이다. Optionally, the oligonucleotide which hybridizes to an antibody or LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 gene coupled to a, LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 polypeptide used by the method of the invention nucleotides are detectable antibody or oligonucleotide, and a detectably labeled antibody or an oligonucleotide, or antibodies or oligonucleotides or the like / immobilized on a solid support, the test sample of tissue or cells is obtained from a subject, probably suffering from a bowel disorder, wherein the disorder is IBD, For example, but not limited to, a UC or CD.

추가적인 실시양태에서, 본 발명은 결장 조직이 비제한적으로 포함되는 포유 동물의 장 조직에서의 IBD, CD 또는 UC가 비제한적으로 포함되는 장 장애의 진단 검출에 유용한 의약의 제조에서의, (a) LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 폴리펩티드, (b) LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 또는 (a)의 핵산을 포함하는 벡터 또는 숙주 세포, (c) 항-LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 폴리펩티드 항체, 또는 (d) LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5-결합 올리고펩티드의 용도에 관한 것이다. In a further embodiment the present invention provides a colon tissue is in the manufacture of a medicament useful in diagnostic detection of a bowel disorder that includes the IBD, CD or UC in the field of mammalian tissue, but are not limited to included, but not limited to, (a) LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 polypeptide, (b) LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 vector or host cell comprising a nucleic acid or nucleic acid (a) encoding the polypeptide, (c) wherein -LY6H, LYPD1 , to a LYPD3 and / or LYPD5 polypeptide antibody, or (d) it uses of the LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5- binding oligopeptides.

한 양상에서, 본 발명은 대조군 포유동물의 대조군 위장 조직과 비교하여 시험 포유동물의 위장 조직에서의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 발현을 결정하는 것을 포함하며, 이때 대조군 조직과 비교하여 시험 조직에서의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5의 더 높은 수준의 발현은 질환 상태 또는 질환 상태의 지속을 나타내는 것인, IBD 치료제로 치료된 포유동물에서 치료 약물 응답을 검출하는 방법을 포함한다. In one aspect, the present invention is compared with the, at this time control tissue comprising determining the LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 expression in gastrointestinal tissue of a test mammal as compared to a control gastrointestinal tissue of a control mammal test tissue LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or higher levels of expression of LYPD5 in includes a method for detecting one of, a therapeutic drug response in a mammal treated with the IBD therapeutic agent that represents the duration of the disease state or disease state. 정상적인 대조군 발현 수준보다 현저하게 높지 않거나 포유동물 집단에서의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5에 대한 정상적인 발현 수준의 범위 내인 시험 조직에서의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 발현에서의 차이는 장 장애의 개선 또는 해소를 나타내고, 이러한 개선 또는 해소는 치료제로 인한 것일 수 있다. LY6H, LYPD1, the difference in LYPD3 and / or normal expression levels within a range of testing organization LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 expression in the for LYPD5 in a mammal populations or higher significantly than normal control expression levels Chapter represents an improvement or elimination of disorders, improve or eliminate these may be due to the drug. 한 실시양태에서, 치료제로 치료된 포유동물의 위장 또는 결장 조직 또는 세포에서의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5의 발현 수준이 상이할 때 (발현이 정상 대조군에 더욱 유사할 때, 즉, LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 수준이 치료 전의 포유동물에서의 LY6H, LYPD1, LYPD3 및/또는 LYPD5 발현 수준보다 낮을 때) 치료적 응답이 결정된다. In one embodiment, when the LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or level of expression of LYPD5 in a mammalian gastrointestinal or colon tissues or cells treated with therapeutic agents be different (when the expression is more similar to normal control, i.e., LY6H , LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 when the level is lower than LY6H, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5 expression levels in a mammal prior to treatment), a therapeutic response is determined.

본 발명의 추가적인 실시양태들이 본 명세서를 읽음으로써 당업자에게 명백할 것이다. Additional embodiments of the invention will be apparent to those skilled in the art upon reading the specification.

도 1A 및 1B는 인간 LY6H 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 1) 및 인간 LY6H 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 2)을 도해한다. Figure 1A and 1B illustrates the nucleotide sequence (SEQ ID NO: 1) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 2) of human LY6H polypeptide encoding human LY6H polypeptide.

도 2A 및 2B는 인간 LYPD1 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 3 및 4)을 도해하고, 도 2C에서는 인간 LYPD1 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 5)이 제시된다. Figures 2A and 2B illustrate the nucleotide sequence (SEQ ID NO: 3 and 4) encoding the human LYPD1 polypeptide and is the Figure 2C presents the amino acid sequence (SEQ ID NO: 5) of human LYPD1 polypeptide.

도 3A 및 3B는 인간 LYPD3 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 6) 및 인간 LYPD3 폴리펩티드의 아미노산 서열을 도해한다 (서열 7). 3A and 3B are a nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 6) encoding human LYPD3 polypeptide and illustrates the amino acid sequence of human LYPD3 polypeptide (SEQ ID NO: 7).

도 4A 및 4B는 인간 LYPD5 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 8 및 9)을 도해하고, 도 4C에서는 인간 LYPD5 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 10)이 제시된다. 4A and 4B illustrate the nucleotide sequence (SEQ ID NO: 8 and 9) encoding human LYPD5 polypeptide and, in Figure 4C are presented amino acid sequence (SEQ ID NO: 10) of human LYPD5 polypeptide.

도 5A 및 5B는 인간 LY6D 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 11) 및 인간 LY6D 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 12)을 도해한다. 5A and 5B illustrates a nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 11) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 12) of human LY6D polypeptide encoding human LY6D polypeptide.

도 6A 및 6B는 인간 LY6E 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 13) 및 인간 LY6E 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 14)을 도해한다. 6A and 6B illustrates the nucleotide sequence (SEQ ID NO: 13) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 14) of human LY6E polypeptide encoding human LY6E polypeptide.

도 7A 및 7B는 인간 LYPD2 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 15) 및 인간 LYPD2 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 16)을 도해한다. 7A and 7B illustrates the nucleotide sequence (SEQ ID NO: 15) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 16) of human LYPD2 polypeptide encoding human LYPD2 polypeptide.

도 8A-8H는 GLG-1 (ESL-1) 분자의 서열을 도해한다: (AB) 기탁 번호 U64791, 인간 GLG-1 (ESL-1) 폴리펩티드 (서열 18)를 코딩하는 핵산 서열 (서열 17); Fig 8A-8H is a GLG-1 (ESL-1) illustrates the sequence of the molecule: (AB) Accession No. U64791, the human GLG-1 (ESL-1) nucleic acid sequence encoding a polypeptide (SEQ ID NO: 18) (SEQ ID NO: 17) .; (CD) 기탁 번호 NM_012201, 인간 GLG-1 (ESL-1) 폴리펩티드 (서열 20)를 코딩하는 핵산 서열 (서열 19); (CD) Accession No. NM_012201, human GLG-1 (ESL-1) polypeptide (SEQ ID NO: 20) coding nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 19); (EF) 기탁 번호 AK172806, 인간 GLG-1 (ESL-1) 폴리펩티드 (서열 22)를 코딩하는 핵산 서열 (서열 21); (EF) Accession No. AK172806, the human GLG-1 (ESL-1) polypeptide (SEQ ID NO: 22) coding nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 21); 및 기탁 번호 AK131501, 인간 GLG-1 (ESL-1) 폴리펩티드 (서열 24)를 코딩하는 핵산 서열 (서열 23). And Accession No. AK131501, the human GLG-1 (ESL-1) polypeptide (SEQ ID NO: 24) of a nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 23) encoding.

도 9A 및 9B는 뮤린 LY6A 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 25) 및 뮤린 LY6A 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 26)을 도해한다. 9A and 9B illustrates a nucleic acid encoding murine LY6A polypeptide sequence (SEQ ID NO: 25) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 26) of murine LY6A polypeptide.

도 10A 및 10B는 뮤린 LY6C 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 27) 및 뮤린 LY6C 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 28)을 도해한다. Figure 10A and 10B illustrates the nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 27) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 28) of murine LY6C polypeptide encoding murine LY6C polypeptide.

도 11A 및 11B는 뮤린 LY6D 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 29) 및 뮤린 LY6D 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 30)을 도해한다. Figure 11A and 11B illustrates the nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 29) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 30) of murine LY6D polypeptide encoding murine LY6D polypeptide.

도 12A 및 12B는 뮤린 LY6E 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 31) 및 뮤린 LY6E 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 32)을 도해한다. Figure 12A and 12B illustrates a nucleic acid encoding murine LY6E polypeptide sequence (SEQ ID NO: 31) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 32) of murine LY6E polypeptide.

도 13A 및 13B는 뮤린 LY6F 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 33) 및뮤린 LY6F 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 34)을 도해한다. Figure 13A and 13B illustrates the nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 33) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 34) of murine LY6F polypeptide encoding the murine LY6F polypeptide.

도 14A 및 14B는 뮤린 LY6I 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 35) 및 뮤린 LY6I 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 36)을 도해한다. Figure 14A and 14B illustrates the nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 35) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 36) of murine LY6I polypeptide encoding the murine LY6I polypeptide.

도 15A 및 15B는 뮤린 LY6K 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 37) 및 뮤린 LY6K 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 38)을 도해한다. 15A and 15B illustrates the nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 37) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 38) of murine LY6K polypeptide encoding the murine LY6K polypeptide.

도 16A 및 16B는 뮤린 LYPD3 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 45) 및 뮤린 LYPD3 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 46)을 도해한다. Figure 16A and 16B illustrates the nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 45) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 46) of murine LYPD3 polypeptide encoding murine LYPD3 polypeptide.

도 17A 및 17B는 뮤린 LY6H 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 47) 및 뮤린 LY6H 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 48)을 도해한다. Figure 17A and 17B illustrates the nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 47) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 48) of murine LY6H polypeptide encoding murine LY6H polypeptide.

도 18A 및 18B는 뮤린 LYPD1 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 49) 및 뮤린 LYPD1 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 50)을 도해한다. Figure 18A and 18B illustrates a nucleic acid encoding murine LYPD1 polypeptide sequence (SEQ ID NO: 49) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 50) of murine LYPD1 polypeptide.

도 19A 및 19B는 뮤린 LYPD2 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 51) 및 뮤린 LYPD2 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 52)을 도해한다. Figure 19A and 19B illustrates the nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 51) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 52) of murine LYPD2 polypeptide encoding the murine LYPD2 polypeptide.

도 20A 및 20B는 뮤린 LY6g5c 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 53) 및 뮤린 LY6g5c 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 54)을 도해한다. Figure 20A and 20B illustrates the nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 53) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 54) of murine LY6g5c polypeptide encoding the murine LY6g5c polypeptide.

도 21A 및 22B는 뮤린 LY6g6c 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 55) 및 뮤린 LY6g6c 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 56)을 도해한다. Figure 21A and 22B illustrates the nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 55) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 56) of murine LY6g6c polypeptide encoding the murine LY6g6c polypeptide.

도 22A 및 22B는 뮤린 SLURP2/LYNX1 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (서열 57) 및 뮤린 SLURP2/LYNX1 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 58)을 도해한다. Figure 22A and 22B illustrates the nucleic acid encoding the murine SLURP2 / LYNX1 polypeptide sequence (SEQ ID NO: 57) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 58) of murine SLURP2 / LYNX1 polypeptide.

도 23은 LY6 패밀리 구성원이 대장염의 뮤린 모델에서의 IEC에서 상향조절된다는 것을 나타낸다. Figure 23 shows that the LY6 family members that upregulate the IEC in murine models of colitis. IL10 -/- (도 23A) 및 CD45RB Hi 전이 대장염 모델 (도 23B) 양쪽 모두에서의 IEC를 LCM에 의해 단리하고, RNA를 정제하였다. IL10 - / - (Figure 23A) and CD45RB Hi transfer colitis model (Figure 23B) was isolated by LCM the IEC in both, which was purified RNA. 실시예에 기술된 바와 같이 마이크로어레이 분석을 수행하고 분석하였다. The analysis was carried out and the microarray analysis as described in Example. 숫자는 건강한 마우스에 대한 대장염 마우스의 보편적 표준물 RNA에 비한 배수 변화의 평균을 나타낸다. The number represents the average change in multiples of ruthless universal standards of colitis mouse RNA in healthy mice. 열 지도(heatmap) 아래의 숫자는 개개의 마우스의 염증 점수를 가리킨다. Column numbers below the map (heatmap) refers to the inflammation scores of individual mice.

도 24A-24D는 LY6 분자의 표면 발현이 대장염의 IL10-/- 모델에서 IEC 상에서 상향조절된다는 것을 나타낸다. Figure 24A-24D has the surface of IL10 expression of LY6 molecules colitis - it indicates that up-regulated in a model on the IEC - /. 야생형 (도 24A) 또는 IL10 -/- 마우스 (도 24B)를 LY6A의 표면 발현에 대해 염색하였다 (녹색 + DAPI 대조염색). Wild type (Figure 24A) or IL10 - / - mouse (Figure 24B) were stained for surface expression of LY6A (green + DAPI counterstained). 유사하게, 야생형 (도 24C) 또는 IL10 -/- 마우스 (도 24D)를 LY6C의 표면 발현에 대해 염색하였다. Similarly, wild type (Figure 24C) or IL10 - / - mouse (Figure 24D) were stained for surface expression of LY6C.

도 25A-25I는 LY6A 및 LY6C의 표면 발현이 염증성 사이토카인, 특히 IFNγ에 응답하여 상향조절된다는 것을 나타낸다. Figure 25A-25I show that surface expression of LY6A and LY6C in response to inflammatory cytokines, particularly IFNγ upregulation. YAMC 세포를 지시된 사이토카인으로 15시간 동안 처리하고, LY6C (도 25 A) 및 LY6A (도 25B)의 표면 발현에 대해 염색하였다. Treatment for 15 hours with the indicated cytokine for YAMC cells and stained for surface expression of LY6C (Figure 25 A) and LY6A (Figure 25B). YAMC 세포를 증가하는 용량의 IFNγ의 존재 하에 15시간 동안 배양하고, LY6C (도 25C) 및 LY6A (도 25D)의 발현에 대해 유동 세포측정에 의해 분석하였다. Cultured for 15 hours in the presence of IFNγ capacity to increase the YAMC cells, LY6C (Figure 25C) were analyzed by flow cytometry for expression of and LY6A (Figure 25D). IFNγ로 자극된 YAMC 세포를 지시된 바와 같은 다양한 시점에 수집하고, LY6C (도 25E) 및 LY6A (도 25F)의 발현에 대해 유동 세포측정에 의해 분석하였다. Collecting the YAMC cells stimulated with IFNγ at various times as indicated, and, LY6C (Figure 25E) and analyzed by flow cytometry for expression of and LY6A (Figure 25F). IL-22는 LY6C (도 25G) 및 LY6A (도 25H) 양쪽 모두의 발현을 상향조절시켰다. IL-22 is LY6C (Figure 25G) and LY6A (Figure 25H) was up-regulated the expression of both. LY6A 및 LY6C 양쪽 모두의 수준이 뮤린 IEC 세포주 CMT93에서 IFNγ에 응답하여 상향조절되었다 (도 25I). LY6A and LY6C levels of both the murine cell line CMT93 was upregulated in IEC in response to IFNγ (Fig. 25I).

도 26A-26E: 지질 래프트(raft) 결핍이 LY6C-매개 케모카인 생산의 억제를 초래하였다. Figure 26A-26E: resulted in lipid rafts (raft) lack inhibition of the LY6C- mediated chemokine production. 콜레스테롤이 결핍된 YAMC 세포 (흑색 막대) 또는 결핍되지 않은 YAMC 세포 (백색 막대)를 지시된 바와 같이 플레이트에 결합된 항-KLH 또는 항-LY6C와 함께 15시간 동안 인큐베이션하였다. Together with the anti -KLH or wherein -LY6C joined to the plate as indicated the YAMC cells (black bars) or non-deficient YAMC cells (white bars), a cholesterol-deficient were incubated for 15 hours. RNA를 수집하고, CXCL2, CXCL5, 및 CCL7의 발현 수준을 결정하였다 (도 26A-26C). RNA was collected and determining the expression levels of CXCL2, CXCL5, and CCL7 (FIG. 26A-26C). LY6A (도 26D) 및 LY6C (도 26E)의 표면 수준이 콜레스테롤 결핍에 응답하여 감소되었다. LY6A (FIG. 26D) was reduced by a surface-level response to the lack of cholesterol and LY6C (Fig. 26E).

도 27A-27D는 LY6C의 가교가 LY6A 및 LY6C의 표면 발현의 상향조절을 유도하지만 LY6A는 그렇지 않다는 것을 나타낸다. Figure 27A-27D show that crosslinking of LY6C induces upregulation of surface expression of LY6A and LY6C, but LY6A are not. YAMC 세포를 항-KLH 대조군, 항-LY6A 또는 항-LY6C로 코팅된 플레이트 상에서 24시간 동안 인큐베이션하고, LY6C (도 27A) 또는 LY6A (도 27B)의 발현에 대해 유동 세포측정에 의해 분석하였다. Incubated for 24 hours on a plate coated with the YAMC cells with the control group wherein -KLH, wherein -LY6A or wherein -LY6C and analyzed by flow cytometry for expression of LY6C (Figure 27A) or LY6A (Figure 27B). 세포를 12시간 동안 100 U/㎖의 IFNγ로 예비처리하였고, 유사하게 항체가 코팅된 플레이트 상에 플레이팅하여, LY6C (도 27C) 또는 LY6A (도 27D)의 발현에 대해 분석하였다. The cells were pretreated for 12 hours with 100 U / ㎖ of IFNγ, by putting similarly plated on antibody coated plates and analyzed for expression of LY6C (Figure 27C) or LY6A (Figure 27D).

도 28A-28C는 LY6C의 가교가 케모카인의 분비를 유도하지만 LY6A는 그렇지 않다는 것을 나타낸다. Figure 28A-28C show that crosslinking of LY6C induce secretion of chemokines but LY6A are not. 도 28A: YAMC 세포를 지시된 바와 같이 100 U/㎖의 IFNγ와 함께 15시간 동안 예비-인큐베이션하거나 예비-인큐베이션하지 않고, 10 ㎍/㎖의 항-LY6A (흑색 막대) 또는 항-LY6C (빗금 막대) 또는 항-KLH 대조군 (백색 막대)으로 코팅된 플레이트 상에서 배양하였다. Figure 28A: YAMC cells as indicated for 15 hours with the IFNγ 100 U / ㎖ pre-incubation or pre-incubation without, 10 ㎍ / ㎖ of anti -LY6A (black bars) or anti -LY6C (hatched bars ) or anti -KLH was cultured on a plate coated with control (white bars). RNA를 24시 (왼쪽), 48시 (중앙) 및 72시 (오른쪽)에 단리하고, CXCL5 또는 CCL7의 발현에 대해 분석하였다 (A). 24 when the RNA (left), 48 hours (center), and was isolated in 72 hour (right) and analyzed for expression of CXCL5 or CCL7 (A). 데이터는 미처리된, 이소타입이 가교된 세포와 비교된 배수 변화 (2 -ΔΔ Ct 방법에 의해 결정됨)의 평균 ± SD를 가리킨다. Data indicate the mean ± SD of the variation are compared to the untreated, isotype crosslinked cells multiple (as determined by the 2 -ΔΔ Ct method). 도 28B: 상기와 같이 1, 5 또는 10 ㎍/㎖ (지시된 바와 같음)의 항체와 가교된 세포에서 상등액을 48시에 수집하고, 상등액 내로의 CXCL5 분비를 ELISA에 의해 결정하였다. Figure 28B: The supernatant was collected from the antibody and the cross-linking of the cell 1, 5, or 10 ㎍ / ㎖ (as hereinbefore indicated) as described above for 48 hours, and determining by the CXCL5 secretion into the supernatant in the ELISA. *<0.05. * <0.05. 도 28C: LY6C 가교에 응답한 CXCL5 및 CXCL2 양쪽 모두의 수준이 LY6C 수준이 siRNA로 녹다운(knockdown)되 었을 때 감소되었다. Figure 28C: The levels of both CXCL5 and CXCL2 in response to LY6C a cross-linking was decreased when LY6C levels eoteul back to siRNA (knockdown) knockdown.

도 29A-29B는 대장염에서의 IEC가 유사한 케모카인 유전자 발현 패턴을 지닌다는 것을 나타낸다. Figure 29A-29B show that IEC in colitis is has a similar chemokine gene expression pattern. IL10 -/- (도 29A) 및 CD45RB Hi 전이 대장염 모델 (도 29B) 양쪽 모두에서의 IEC를 LCM에 의해 단리하고, RNA를 정제하였다. IL10 - / - (Figure 29A) and CD45RB Hi transfer colitis model (Figure 29B) was isolated by LCM the IEC in both, which was purified RNA. 실시예에 기술된 바와 같이 마이크로어레이 분석을 수행하고 분석하였다. The analysis was carried out and the microarray analysis as described in Example. 숫자는 건강한 마우스에 대한 대장염 마우스의 보편적 표준물 RNA에 비교된 배수 변화의 평균을 나타낸다. The number represents the average of the drainage changes compared to the universal standards of colitis mouse RNA in healthy mice. 열 지도 아래의 숫자는 개개의 마우스의 염증 점수를 가리킨다. The number of heat map below indicate the inflammation score of each mouse.

도 30A-30C는 인간 LY6 패밀리 유전자의 발현이 사이토카인으로 처리된 결장 세포에서 상향조절된다는 것을 나타낸다. Figure 30A-30C show that expression of human LY6 family genes that up-regulated in colon cells treated with cytokines. 인간 Colo-205 세포를 지시된 사이토카인, 또는 사이토카인들의 조합물로 18시간 또는 24시간 동안 처리하였다. Human Colo-205 cells with a combination of a cytokine, or a cytokine-indicated was treated for 18 hours or 24 hours. 인간 LY6H (도 30A), 인간 LYPD3 (도 30B), 및 인간 LYPD5 (도 30C)의 발현에서의 배수 증가가 인간 β-액틴 대조군과 비교되어 제시된다. The increased drain on expression of human LY6H (Figure 30A), human LYPD3 (Figure 30B), and human LYPD5 (Figure 30C) are shown and compared with the human β- actin control.

도 31A-31B는 크론병 환자에서 결장 내의 LYPD1 (도 31A) 및 LYPD5 (도 31B) 수준이 상승되었음을 나타낸다. Figure 31A-31B illustrates that LYPD1 (Figure 31A) and LYPD5 (Figure 31B) levels are elevated in the colon in Crohn's disease. 인간 IBD 환자로부터의 조직 샘플을 수득하고, LYPD1 및 LYPD5 유전자 발현을 결정하였다. Obtain tissue samples from human IBD patients, we were determined LYPD1 and LYPD5 gene expression. LYPD1 및 LYPD5의 발현에서의 통계적으로 유의한 증가가 CD 환자의 염증이 있는 조직에서 관찰되었다. A statistically significant increase in the LYPD1 and LYPD5 expression was observed in tissues with inflammation in patients with CD. LYPD5의 발현에서의 통계적으로 유의한 증가가 UC 환자의 염증이 있는 조직에서 또한 관찰되었다. A statistically significant increase in the LYPD5 expression was also observed in an inflamed tissue of UC patients. Y축의 값은 보편적 RNA 표준물에 비교된 유전자 발현을 반영한다. Value of the Y-axis reflects the gene expression compared to the universal RNA standard.

도 32A 및 32B는 (A) 형질감염되지 않은 COS 세포, 및 (B) GLG-1 (ESL-1) 폴 리펩티드로 형질감염되고 LYPD5-Fc 단백질로 염색된 COS 세포를 나타낸다. Figure 32A and 32B are (A) transformants transfected with non-infected COS cells, and (B) GLG-1 (ESL-1) poly peptide and shows the COS cells stained with LYPD5-Fc protein.

도 33A는 LYPD5의 결합을 특성화하는데 적절한 GLG-1 또는 ESL-1 및 각종 단편의 구조를 도해하고, 도 33B는 LYPD5 리간드 및 LYPD5의 결합을 특성화하는 공동-면역침전 연구의 결과를 나타낸다. 33A is for characterizing the binding of LYPD5 and illustrates the structure of a suitable GLG-1 or ESL-1 and various fragments, 33B is common to characterize the binding of LYPD5 ligand and LYPD5 - shows the results of immunoprecipitation studies.

도 34A는 LYPD5의 결합을 특성화하는데 적절한 GLG-1 또는 ESL-1 및 각종 단편의 구조를 도해하고, 도 34B는 LYPD5 리간드 및 LYPD5의 결합을 특성화하는 공동-면역침전 연구의 결과를 나타낸다. Figure 34A is for characterizing the binding of LYPD5 and illustrates the structure of a suitable GLG-1 or ESL-1 and various fragments, Figure 34B is common to characterize the binding of LYPD5 ligand and LYPD5 - shows the results of immunoprecipitation studies.

도 35A는 LYPD5의 결합을 특성화하는데 적절한 GLG-1 또는 ESL-1 및 각종 단편의 구조를 도해하고, 도 35B는 LYPD5 리간드 및 LYPD5의 결합을 특성화하는 공동-면역침전 연구의 결과를 나타낸다. 35A is for characterizing the binding of LYPD5 and illustrates the structure of a suitable GLG-1 or ESL-1 and various fragments, Figure 35B is common to characterize the binding of LYPD5 ligand and LYPD5 - shows the results of immunoprecipitation studies.

도 36A 및 36B는 인간 인테그린, 베타 7을 코딩하는 핵산 서열 (서열 68), 및 인간 인테그린, 베타 7 폴리펩티드의 아미노산 서열 (서열 69)을 도해한다. Figure 36A and 36B illustrates the nucleic acid sequence (SEQ ID NO: 68) and amino acid sequence (SEQ ID NO: 69) of human integrin, beta 7 polypeptide encoding human integrin, beta 7.

정의 Justice

"염증성 장 질환" 또는 "IBD"는 염증 및/또는 궤양형성을 야기하는 장의 질환을 지칭하도록 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 크론병 및 궤양성 대장염을 비제한적으로 포함한다. "Inflammatory Bowel Disease" or "IBD," is used interchangeably herein to refer to sheets of disorders that cause inflammation and / or ulceration and includes Crohn's disease and ulcerative colitis are not limited to.

"크론병 (CD)" 또는 "궤양성 대장염 (UC)"은 병인이 알려지지 않은 만성 염증성 장 질환이다. "Crohn's disease (CD)" or "ulcerative colitis (UC)" are chronic inflammatory bowel disease of unknown etiology. 크론병은, 궤양성 대장염과 달리, 장의 모든 부분에 영향을 미칠 수 있다. Crohn's disease, unlike ulcerative colitis, can affect any part of this chapter. 크론병의 가장 우세한 양상은 장 벽의 과립형 적자색 부종성 비후화이다. The most dominant aspect of Crohn's disease is the granular reddish purple edematous thickening of the bowel wall screen. 염증이 발달되면서, 이러한 육아종은 종종 이의 국한성 경계를 상실하고, 주위의 조직과 통합된다. With the development of inflammation, these granulomas are often localized loses its boundaries and integrate with the surrounding tissue. 설사 및 장의 폐쇄가 우세한 임상 양상이다. Diarrhea and intestinal closure is predominant clinical manifestations. 궤양성 대장염과 같이, 크론병의 과정은 연속적 또는 재발성, 경증 또는 중증일 수 있지만, 궤양성 대장염과 달리, 크론병은 장의 관련된 절편의 절제에 의해 치유가능하지 않다. Of course, such as Crohn's disease and ulcerative colitis, unlike continuous or relapsing, mild or it may be severe, although ulcerative colitis, Crohn's disease is not curable by resection of the fragments can be related chapter. 대부분의 크론병 환자들은 일부 지점에서의 수술을 필요로 하지만, 이어지는 재발이 통상적이고, 지속적인 의학적 처치가 일반적이다. Most patients with Crohn's disease are common and the need for surgery, but subsequent relapse at some point, a continuous medical treatment in general.

크론병은 입에서 항문까지의 소화관의 임의의 부분을 수반할 수 있지만, 전형적으로는 회결장, 소장 또는 결장-항문 영역에서 나타난다. Crohn's disease may involve any part of the digestive tract from the mouth to the anus, typically once the colon, small intestine, or colon-rectum seen in the area. 조직병리학적으로, 크론병은 불연속성 육아종, 움 농양, 열창 및 아프타 궤양으로 나타난다. Pathological tissue, Crohn's disease appears as a discontinuity granuloma, Umm abscesses, fissures and aphthous ulcers. 림프구 (T 및 B 세포 양쪽 모두), 혈장 세포, 대식세포, 및 중성구로 구성된 염증성 침윤물이 혼합된다. It lymphocytes inflammatory infiltrates composed of (T and B cells both), plasma cells, macrophages, and neutrophils are mixed. IgM- 및 IgG-분비 혈장 세포, 대식세포 및 중성구에서의 불균형한 증가가 있다. IgM- and IgG- secreting plasma cells, there is a disproportionate increase in macrophages and neutrophils.

항-염증성 약물인 술파살라진 및 5-아미노살리실산 (5-ASA)은 경증 활성의 결장성 크론병을 치료하는데 유용하고, 이의 완화를 유지시키기 위해 통상적으로 처방된다. Anti-inflammatory drug, sulfamic burn particulates and 5-amino salicylic acid (5-ASA) are useful in the treatment of Crohn's disease colon property of mild activity, it is commonly prescribed to maintain the relief thereof. 메트로이다졸 및 시프로플록사신은 술파살라진과 효능이 유사하고, 항문주위 질환을 치료하는데 특히 유용한 것으로 보인다. Metro a sol, and ciprofloxacin was sulfanyl Ala Gin efficacy are similar and appear to be particularly useful for treating perianal disease. 더욱 중증인 경우에, 코르티코스테로이드가 활성 악화를 치료하는데 효과적이며, 심지어 완화를 유지시킬 수 있다. In the case of more severe, corticosteroids are effective in the treatment of active worse, can even maintain relief. 아자티오프린 및 6-메르캅토퓨린이 코르티코스테로이드의 만성 투여를 필요로 하는 환자에서 성공적인 것으로 또한 나타났다. Azathioprine and 6-mercapto-purine is also shown to be successful in patients who require chronic administration of corticosteroids. 이러한 약물들이 장기 예방에서 역할을 할 수 있는 것이 또한 가능하다. Is that these drugs may play a role in long-term prevention is also possible. 불행하게도, 일부 환자에서 작용의 개시 전에 매우 긴 지연 (6개월까지)이 있을 수 있다. Unfortunately, there may be a very long delay (up to six months) before onset of action in some patients.

지사제 약물이 일부 환자에서 증상 경감을 또한 제공할 수 있다. The jisaje drugs can also provide symptomatic relief in some patients. 영양 요법 또는 기본식이 환자의 영양 상태를 개선하고 급성 질환의 증상 개선을 유도할 수 있지만, 이는 지속적인 임상 완화를 유도하지 않는다. Nutritional therapy or improve the nutritional status of patients with basal diet and can lead to improved symptoms of acute disease, but it does not induce sustained clinical relief. 항생제가 2차 소장 박테리아 과잉성장의 치료 및 화농성 합병증의 치료에 사용된다. Antibiotics are used to treat secondary treatment and septic complications of small bowel bacterial excessive growth.

"궤양성 대장염 (UC)"은 대장을 괴롭힌다. "Ulcerative colitis (UC)" afflicts the large intestine. 질환의 과정은 연속적 또는 재발성, 경증 또는 중증일 수 있다. The course of disease may be continuous or relapsing, mild or severe. 가장 초기의 병변은 리버쿤와(crypt of Lieberkuhn)의 기부에서의 농양 형성이 있는 염증성 침윤이다. The earliest lesion is an inflammatory infiltration of with abscess formation at the base of the river kunwa (crypt of Lieberkuhn). 이러한 팽창되고 파열된 리버쿤와의 유착은 위에 놓인 점막을 혈액 공급으로부터 분리시키는 경향이 있어, 궤양형성에 이른다. This expansion and adhesion with ruptured River Kuhn tends to separate the overlying mucosa from the blood supply, it leads to ulcer formation. 질환의 증상은 경련, 하복부 통증, 직장 출혈, 및 약간의 대변 입자와 함께 혈액, 고름 및 점액으로 주로 구성된 빈번한 설사 배설물을 포함한다. Symptoms of the disease include cramping, lower abdominal pain, rectal bleeding, and frequent diarrhea feces, mainly consisting of blood, pus and mucus with a little stool particles. 급성, 중증 또는 만성의 끊임없는 궤양성 대장염에서 전체 결장절제술이 요구될 수 있다. There are entire colon resection may be required for acute, severe or chronic ulcerative colitis endless.

UC의 임상 양상은 고도로 가변성이고, 개시가 잠행성이거나 갑작스러울 수 있으며, 설사, 뒤무직 및 재발성 직장 출혈을 포함할 수 있다. Clinical features of UC are highly variable and, the number and the start seureoul sudden or insidious, and may include diarrhea, rear unemployed and relapsing rectal bleeding. 전체 결장이 전격성으로 관련되면서, 생명을 위협하는 응급상황인 독성 거대결장증이 일어날 수 있다. As the entire colon associated with fulminant, emergencies can happen toxic megacolon increased life-threatening. 장외 소견에는 관절염, 괴저성 농피증, 포도막염 및 결절 홍반이 포함된다. OTC findings include arthritis, pyoderma gangrenosum, erythema, nodules and uveitis.

UC에 대한 치료에는 경증 사례에 대한 술파살라진 및 관련된 살리실레이트-함유 약물, 및 중증 사례에서의 코르티코스테로이드 약물이 포함된다. Treatment for UC includes sulfamic burn particulates and salicylate related to mild cases - include a corticosteroid drug in the drug-containing, and severe cases. 살리실레이트 또는 코르티코스테로이드의 국소 투여는 때때로 효과적고, 특히 질환이 원위부 장에 제한되는 경우에 그러하며, 전신 사용에 비해 감소된 부작용과 관련된다. Salicylate topical administration of salicylate, or corticosteroids is sometimes less effective, especially geureohamyeo when the disease is limited to the distal section, are associated with reduced side effects as compared to systemic use. 철 및 지사제의 투여와 같은 보조적인 조치가 때때로 지시된다. The secondary measures such as administration of iron and jisaje is sometimes indicated. 아자티오프린, 6-메르캅토퓨린 및 메토트렉세이트가 난치성 코르티코스테로이드-의존적 사례에서의 사용에 대해 또한 때때로 처방된다. Are sometimes also prescribed for use in the dependent case - azathioprine, 6-mercapto-purine and methotrexate are refractory corticosteroid.

본원에서 사용된 "LY6 유전자 패밀리 구성원" 또는 "LY6 유전자 수퍼패밀리 구성원"은 LY6 유전자 패밀리의 구성원에 대한 상동성이 있는 유전자를 지칭하도록 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 상기 유전자 패밀리 구성원의 대다수는 조혈 기원의 세포 상에 광범위하게 분포되고 비-조혈 세포 상에서는 더 한정되어 발현되는 GPI-앵커형 세포 표면 당단백질이다. The "LY6 gene family member" as used herein or "LY6 gene superfamily member" are used interchangeably herein to refer to a gene having homology to members of the LY6 gene family, the majority of the gene family member is hematopoietic It is widely distributed on the cell of origin of the non-stem cells on a glycoprotein cell surface type GPI- anchor which is more limited expression. 이러한 유전자 패밀리의 구성원은 면역 세포 분화의 마커로 사용된다 ([Sunderkotter, C. et al., J. Immunol. 172:4410-4417 (2004)]). Members of this gene family are used as markers of differentiation of immune cells ([Sunderkotter, C. et al, J. Immunol 172:.. 4410-4417 (2004)]). LY6 패밀리의 유전자들이 시험되었고 ([Shevach, EM and PE Korty, Immunol. Today 10: 195-200 (1989)]), 기능에는 T 세포 활성화 ([Zhang, ZX et al., Eur. J. Immunol. 32: 1584-1592 (2002)] 및 [Henderson, SC et al., J. Immunol. 168:118-126 (2002)]), 후각 ([Chou, JH et al., Genetics 157:211-224 (2001)]) 및 세포 부착 ([Jaakkola, I. et al., J. Immunol. 170:1283-1290 (2003)])이 포함된다. LY6 family of genes have been tested ([Shevach, EM and PE Korty, Immunol Today 10:. 195-200 (1989)]), it features activated T cells ([Zhang, ZX et al, Eur J. Immunol... 32: 1584-1592 (2002)] and [Henderson, SC et al, J. Immunol 168:.. 118-126 (2002)]), olfactory ([Chou, JH et al, Genetics 157:. 211-224 ( 2001)) and cell adhesion ([Jaakkola, I. et al, J. Immunol 170:.. are included 1283-1290 (2003)). LY6 유전자 패밀리의 구성원에는 포유류 LY6 유전자 패밀리의 구성원, 예컨대 마우스 또는 인간의 LY6 패밀리 유전자가 비제한적으로 포함된다. LY6 members of the gene family, the members of the mammalian gene family LY6, such as mouse or human LY6 family gene include, but are not limited to. 본원에서 사용된 "LY6 유전자"는 LY6 유전자 패밀리 구성원을 지칭하고, "LY6 폴리펩티드"는 LY6 유전자에 의해 코딩되는 폴리펩티드를 지칭한다. The "LY6 gene" as used herein refers to a LY6 gene family member and, "LY6 polypeptide" refers to a polypeptide encoded by a LY6 gene. 뮤린 LY6 유전자 패밀리 구성원에는 LY6A (NM_10738, 폴리펩티드 서열 26을 코딩하는 핵산 서열 25), LY6C (NM_010741, 폴리펩티드 서열 28을 코딩하는 핵산 서열 27), LY6D (NM_003695, 폴리펩티드 서열 30을 코딩하는 핵산 서열 29), LY6E (NM_002346, 폴리펩티드 서열 32를 코딩하는 핵산 서열 31), LY6F (NM_008530, 폴리펩티드 서열 34를 코딩하는 핵산 서열 33), LY6I (NM_020498, 폴리펩티드 서열 36을 코딩하는 핵산 서열 35), 및 LY6K (NM_017527, 폴리펩티드 서열 38을 코딩하는 핵산 서열 37)이 비제한적으로 포함된다. Murine LY6 gene family members include LY6A (NM_10738, nucleic acid encoding the polypeptide SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 25), LY6C (NM_010741, nucleic acid SEQ ID NO: 27 encoding the polypeptide SEQ ID NO 28), LY6D (nucleic acid sequence 29 coding for NM_003695, polypeptide SEQ ID 30) , LY6E (nucleic acid sequence encoding a NM_002346, polypeptide sequences 32 31), LY6F (NM_008530, polypeptide sequence 34 nucleic acid sequence 33 encoding), LY6I (nucleic acid sequence 35 coding for NM_020498, polypeptide SEQ ID 36), and LY6K (NM_017527 , a nucleic acid sequence encoding the polypeptide SEQ ID NO. 37 38) are included, but not limited to. 인간 LY6 유전자 패밀리 구성원에는 LY6H (NM_002347, 폴리펩티드 서열 2를 코딩하는 핵산 서열 1), LYPD1 (NMJ44586, 폴리펩티드 서열 5를 코딩하는 핵산 서열 3 또는 4), LYPD3 (NM_014400, 폴리펩티드 서열 7을 코딩하는 핵산 서열 6), LYPD5 (NM_182573, 폴리펩티드 서열 10을 코딩하는 핵산 서열 8 또는 9), LY6D (NM_003695, 폴리펩티드 서열 12를 코딩하는 핵산 서열 11), LY6E (NMNM_002346, 폴리펩티드 서열 14를 코딩하는 핵산 서열 13), LYPD2 (NM_205545, 폴리펩티드 서열 16을 코딩하는 핵산 서열 15)가 비제한적으로 포함된다. Human LY6 gene family members include the nucleic acid sequence encoding a LY6H (NM_002347, nucleic acid encoding the polypeptide SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 1), LYPD1 (NMJ44586, nucleic acid SEQ ID NO: 3 or 4 encoding a polypeptide sequence 5), LYPD3 (NM_014400, polypeptide SEQ ID NO: 7 6), LYPD5 (NM_182573, nucleic acid SEQ ID NO: 8, or 9 encoding the polypeptide SEQ ID 10), LY6D (NM_003695, nucleic acid SEQ ID NO: 11 encoding the polypeptide SEQ ID NO: 12), LY6E (NMNM_002346, nucleic acid SEQ ID NO: 13 encoding the polypeptide SEQ ID NO: 14), the LYPD2 (15 nucleic acid sequence encoding an NM_205545, polypeptide SEQ ID NO: 16) include, but are not limited to. 실시양태들에서, 본원에 개시된 각각의 LY6 유전자 패밀리 구성원의 폴리뉴클레오티드는 서열 1, 3, 4, 6, 8, 9, 11, 13, 15, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 또는 57의 15개 이상, 25개 이상, 50개 이상, 100개 이상, 250개 이상, 500개 이상, 750개 이상, 1000개 이상, 1250개 이상, 1500개 이상, 1750개 이상, 2000개 이상, 2040개 이상의 인접한 뉴클레오티드들을 포함하거나, 또는 LY6 유전자 패밀리 구성원 폴리뉴클레오티드는 서열 1, 3, 4, 6, 8, 9, 11, 13, 15, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 또는 57을 포함한다. In embodiments, each of the polynucleotides of the LY6 gene family member disclosed herein SEQ ID NO: 1, 3, 4, 6, 8, 9, 11, 13, 15, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37 , 45, 47, 49, 51, 53, 55, or more than 57 15 or more, 25, 50 or more, 100 or more, more than 250, more than 500, more than 750, more than 1000, 1250 , at least 1500, comprising at least 1750, 2000 or more, 2040 or more contiguous nucleotides, or LY6 gene family member polynucleotide SEQ ID NO: 1, 3, 4, 6, 8, 9, 11, 13, 15, 25, it comprises 27, 29, 31, 33, 35, 37, 45, 47, 49, 51, 53, 55, or 57. 한 실시양태에서, LY6 유전자 패밀리 구성원 폴리뉴클레오티드 (서열 1, 3, 4, 6, 8, 9, 11, 13, 15, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 또는 57)에 결합하는 폴리뉴클레오티드, 또는 이의 단편은 LY6 폴리펩티드 또는 이의 단편과의 서열 동일성이 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 99% 이상 또는 100%이다. In one embodiment, LY6 gene family member polynucleotide (SEQ ID NO: 1, 3, 4, 6, 8, 9, 11, 13, 15, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 45, 47, 49 , 51, 53, 55, or 57) a polynucleotide that binds to, or fragment thereof is a LY6 polypeptide or fragment thereof and the sequence identity is at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, 95% or more, 97% or higher, 99% or more, or 100%. 한 실시양태에서, LY6 유전자 패밀리 구성원 폴리펩티드는 서열 2, 5, 7, 10, 12, 14, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 또는 58의 10개 이상, 25개 이상, 50개 이상, 75개 이상, 100개 이상, 125개 이상, 150개 이상, 175개 이상, 200개 이상, 225개 이상, 250개 이상, 275개 이상, 300개 이상, 또는 325개 이상의 적어도 인접한 아미노산들을 포함하거나, 또는 LY6 유전자 패밀리 폴리펩티드는 서열 2, 5, 7, 10, 12, 14, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 또는 58을 포함한다. In one embodiment, LY6 gene family member polypeptide is SEQ ID NO: 2, 5, 7, 10, 12, 14, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 46, 48, 50, 52, 54, 56, or 10 or more of 58, 25 or more, 50 or more, 75 or more, 100 or more, 125 or more, more than 150, more than 175, more than 200, more than 225, more than 250, 275 or more , comprise more than 300, or 325, at least contiguous amino acids, or LY6 gene family polypeptide comprises SEQ ID NO: 2, 5, 7, 10, 12, 14, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 46 includes, 48, 50, 52, 54, 56, or 58.

임의의 LY6 유전자 패밀리 구성원의 "천연 서열 폴리펩티드"는 천연에서 유래된 상응하는 LY6 유전자 패밀리 구성원 폴리펩티드와 아미노산 서열이 동일한 폴리펩티드를 포함한다. Any of the LY6 gene family member "native sequence polypeptide" includes the corresponding LY6 gene family member polypeptide with the same amino acid sequence of a polypeptide derived from nature. 이같은 천연 서열 LY6 폴리펩티드는 천연으로부터 단리될 수 있거나, 또는 재조합 또는 합성 수단에 의해 생산될 수 있다. Such native sequence LY6 polypeptides can be produced by or may be isolated from natural or recombinant or synthetic means. 용어 "천연 서열 LY6 폴리펩티드"는 천연-발생 말단절단 또는 분비형 형태의 특정 LY6 폴리펩티드 (예를 들어, 세포외 도메인 서열), 천연 발생 변이체 형태 (예를 들어, 별법적으로 스플라이싱(splicing)된 형태) 및 폴리펩티드의 천연발생 대립유전자 변이체를 명확하게 포함한다. The term "native sequence LY6 polypeptide" is a natural-occurring truncated or specific LY6 polypeptide of the secreted forms (e. G., An extracellular domain sequence), naturally occurring variant forms (e. G., A legal-splicing (splicing) the form) and a polypeptide comprising clarify the naturally occurring allelic variants. 한 특정 양상에서, 본원에 개시된 천연 서열 LY6 폴리펩티드는 도 1-7 및 서열 2, 5, 7, 10, 12, 14, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 또는 58에 상응하는 성숙형 또는 전장 천연 서열 폴리펩티드이다. In one particular aspect, the native sequence LY6 polypeptides disclosed herein, Fig. 1 through 7 and SEQ ID NO: 2, 5, 7, 10, 12, 14, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 46, 48, 50 is a mature or full-length native sequence polypeptides corresponding to the 52, 54, 56, or 58.

본원에서 사용된 "LY6 폴리펩티드 변이체"는 본원에 개시된 바와 같은 전장 천연 서열 LY6 폴리펩티드 서열, 및 신호 펩티드가 없는 이의 변이체 형태, 세포외 도메인, 또는 전장 천연 서열 LY6 폴리펩티드의 임의의 기타 단편 예컨대 본원에 언급된 것들과의 아미노산 서열 동일성이 적어도 약 80%인, LY6 폴리펩티드, 바람직하게는 이의 생물학적으로 활성인 형태 (본원에서 정의된 바와 같음)를 의미한다. The "LY6 polypeptide variant" is referred to the full-length native sequence LY6 polypeptide sequence, and variants thereof form without the signal peptide, extracellular domain, or full-length any other fragment for example present in the native sequence LY6 polypeptide as described herein as used herein those with the amino acid sequence identity is preferably at least approximately 80%, LY6 polypeptide, the means for the form (as defined herein), its biological activity. 이같은 변이체 폴리펩티드는, 예를 들어, 전장 천연 아미노산 서열의 N- 또는 C-말단에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 부가 또는 결실된 폴리펩티드를 포함한다. Such variant polypeptides include, for example, the one or more additional amino acid residues or deleted from the N- or C- terminal polypeptide of the full-length native amino acid sequence. 특정 양상에서, 이같은 변이체 폴리펩티드는 본원에 개시된 바와 같은 전장 천연 서열 LY6 폴리펩티드 서열, 및 신호 펩티드가 없는 이의 변이체 형태, 세포외 도메인, 또는 전장 천연 서열 LY6 폴리펩티드의 임의의 기타 단편 예컨대 본원에 언급된 것들과의 아미노산 서열 동일성이 적어도 약 80%, 별법적으로는 적어도 약 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%일 것이다. In a specific aspect, such variant polypeptides are those mentioned in the full-length native sequence LY6 polypeptide sequence, and variants thereof form without the signal peptide, extracellular domain, or full-length any other fragment for example present in the native sequence LY6 polypeptide as described herein the amino acid sequence identity of at least about 80% and, by the law, at least about 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% would be.

본원에서 확인된 LY6 폴리펩티드 서열에 관한 "백분율 (%) 아미노산 서열 동일성"은 서열들을 정렬하고, 필요하다면 갭(gap)을 도입하여, 최대 백분율의 서열 동일성을 달성한 후의 특정 LY6 폴리펩티드 서열 내의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로 정의되고, 이때 어떠한 보존성 치환도 서열 동일성의 일부로 간주되지 않는다. "Percent (%) amino acid sequence identity" relates to a LY6 polypeptide sequence identified herein is introduced into the gap (gap), if aligning the sequences and, if necessary, the amino acid residues in the specific LY6 polypeptide sequence after achieving the sequence identity of the maximum percentage and it is defined as the percentage of amino acid residues in the candidate sequence identical, at this time does not have any conservative substitutions as part of the sequence identity are considered. 백분율 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 목적의 정렬은 당업계의 기술에 속하는 다양한 방식으로, 예를 들어, 공개적으로 입수가능한 컴퓨터 소프트웨어 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 달성할 수 있다. Alignment of the object to determine the percentage amino acid sequence identity is in different ways belongs to the skill in the art, for example, publicly available in a computer software for example achieved by using BLAST, BLAST-2, ALIGN or Megalign (DNASTAR) software can do. 당업자는 비교될 서열들의 전체 길이에 걸쳐 최대의 정렬을 달성하기 위해 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 정렬을 측정하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. Those skilled in the art, including any algorithms needed to achieve maximum alignment over the full length of the sequences to be compared, one can determine appropriate parameters for measuring alignment. 그러나, 본원에서의 목적을 위해, % 아미노산 서열 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성되고, ALIGN-2 프로그램을 위한 완전한 소스(source) 코드가 하기 표 1에서 제공된다. However, for the purposes of the present application,% amino acid sequence identity value sequence comparison computer program is created by using the ALIGN-2, is provided below the complete source (source) code for the ALIGN-2 program Table 1. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 Genentech, Inc.에 의해 제작되었고, 하기 표 1에 제시된 소스 코드가 사용자 문서와 함께 미국 저작권청(US Copyright Office) (Washington DC, 20559)에 제출되어 미국 저작권 번호 TXU510087 하에 등록되어 있다. ALIGN-2 sequence comparison computer program, Genentech, has been produced by Inc., to the source code shown in Table 1 has been submitted to the US Copyright Office (US Copyright Office) (Washington DC, 20559) with your document US copyright number TXU510087 It is registered under. ALIGN-2 프로그램은 Genentech, Inc. ALIGN-2 program, Genentech, Inc. (South San Francisco, California)를 통해 공개적으로 입수가능하거나, 또는 하기 표 1에서 제공된 소스 코드로부터 컴파일링(compiling)될 수 있다. Publicly available through the (South San Francisco, California), or you can be the ring (compiling) compiled from the source code provided in Table 1. ALIGN-2 프로그램은 UNIX 운영 체제, 바람직하게는 디지털 UNIX V4.0D 상에서의 사용에 대해 컴파일링되어야 한다. ALIGN-2 program should be compiled for use on a UNIX operating system, preferably digital UNIX V4.0D. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되고, 변하지 않는다. All sequence comparison parameters are set by the ALIGN-2 program and do not change.

본원에서 사용된 "LY6 변이체 폴리뉴클레오티드" 또는 "LY6 변이체 핵산 서열", 또는 "LY6 유전자"는 LY6 유전자 패밀리 구성원 폴리펩티드, 바람직하게는 이의 생물학적으로 활성인 형태 (본원에서 정의된 바와 같음)을 코딩하고, 본원에서 확인된 전장 천연 서열 LY6 폴리펩티드 서열, 또는 본원에서 확인된 바와 같은 각각의 전장 LY6 폴리펩티드 서열의 임의의 기타 단편 (예컨대 전장 LY6 폴리펩티드에 대한 완전한 코딩 서열의 일부만을 나타내는 핵산에 의해 코딩되는 것)을 코딩하는 핵산 서열과의 핵산 서열 동일성이 적어도 약 80%인 핵산 분자를 지칭한다. Coding for the "LY6 variant polynucleotide" or "LY6 variant nucleic acid sequence", or "LY6 gene" is a LY6 gene family member polypeptide, preferably active form (as defined herein) with its biological used herein and , it will be encoded by a nucleic acid that is the full-length native sequence LY6 polypeptide sequence, or present the respective full-length LY6 complete only a portion of the coding sequence for any other fragment (e. g. full-length LY6 polypeptide of the polypeptide sequence as identified in the identified herein ) to refer to a nucleic acid molecule the nucleic acid sequence identity of the nucleic acid sequence encoding at least about 80%. 통상적으로, 이같은 변이체 폴리뉴클레오티드는 각각의 전장 천연 서열 LY6 폴리펩티드 서열 또는 본원에서 확인된 각각의 전장 LY6 폴리펩티드 서열의 임의의 기타 단편을 코딩하는 핵산 서열과의 핵산 서열 동일성이 적어도 약 80%, 별법적으로는 적어도 약 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%일 것이다. Typically, such a mutant polynucleotide is legal respective full-length native sequence LY6 polypeptide sequence or nucleic acid sequence identity of the nucleic acid sequence coding for any other fragment of the respective full-length LY6 polypeptide sequence identified herein, at least about 80%, by at least about 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96 %, it will be 97%, 98%, or 99%. 이같은 변이체 폴리뉴클레오티드는 천연 뉴클레오티드 서열을 포함하지 않는다. Such variant polynucleotides do not include the natural nucleotide sequence.

통상적으로, 이같은 변이체 폴리뉴클레오티드는 길이가 천연 서열 폴리펩티드로부터 적어도 약 50개의 뉴클레오티드만큼 다르고, 별법적으로, 변이는 길이에서 적어도 약 50개, 55개, 60개, 65개, 70개, 75개, 80개, 85개, 90개, 95개, 100개, 105개, 110개, 115개, 120개, 125개, 130개, 135개, 140개, 145개, 150개, 155개, 160개, 165개, 170개, 175개, 180개, 185개, 190개, 195개, 200개, 210개, 220개, 230개, 240개, 250개, 260개, 270개, 280개, 290개, 300개, 310개, 320개, 330개, 340개, 350개, 360개, 370개, 380개, 390개, 400개, 410개, 420개, 430개, 440개, 450개, 460개, 470개, 480개, 490개, 500개, 510개, 520개, 530개, 540개, 550개, 560개, 570개, 580개, 590개, 600개, 610개, 620개, 630개, 640개, 650개, 660개, 670개, 680개, 690개, 700개, 710개, 720개, 730개, 740개, 750개, 760개, 770개, 780개, 790개, 800개, 810개, 820개, 830개, 840개, 850개, 860개, 870개, Typically, such a mutant polynucleotide length is different by at least about 50 nucleotides from the native sequence polypeptide, as legal, variations, at least about 50 in length, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160 , 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 one, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 400 dogs 390, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620 , 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790 one, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880개, 890개, 900개, 910개, 920개, 930개, 940개, 950개, 960개, 970개, 980개, 990개, 또는 1000개의 뉴클레오티드일 수 있으며, 이러한 정황에서의 용어 "약"은 언급된 뉴클레오티드 서열 길이 ± 언급된 길이의 10%를 의미한다. 880, may be 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, dog 960, 970, 980, 990, or 1000 nucleotides, and the term in this context. " about "refers to 10% of the referenced nucleotide sequence length ± mentioned length.

본원에서 확인된 LY6 유전자 폴리펩티드-코딩 핵산 서열과 관련된 "백분율 (%) 핵산 서열 동일성"은 서열들을 정렬하고, 필요하다면 갭을 도입하여, 최대 백분율의 서열 동일성을 달성한 후의 당해 LY6 유전자 핵산 서열 내의 뉴클레오티드와 동일한 후보 서열 내의 뉴클레오티드의 백분율로 정의된다. In the encoding nucleic acid sequences, "percent (%) nucleic acid sequence identity" related by introducing gaps, if aligning the sequences and, if necessary, the art LY6 gene nucleic acid sequence after achieving the sequence identity of the maximum percentage - As used herein, the LY6 gene polypeptide found in It is defined as the percentage of nucleotides in a candidate sequence identical with the nucleotides. 백분율 핵산 서열 동일성을 결정하기 위한 목적의 정렬은 당업계의 기술에 속하는 다양한 방식으로, 예를 들어, 공개적으로 입수가능한 컴퓨터 소프트웨어 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 달성할 수 있다. The alignment of the object for determining the percent nucleic acid sequence identity are different ways belongs to the skill in the art, for example, publicly available in a computer software for example achieved by using BLAST, BLAST-2, ALIGN or Megalign (DNASTAR) software can do. 그러나, 본원에서의 목적을 위해, % 핵산 서열 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성되고, ALIGN-2 프로그램을 위한 완전한 소스 코드가 하기 표 1에서 제공된다. However, for the purposes of the present application,% nucleic acid sequence identity values ​​are sequence comparison computer program is created by using the ALIGN-2, is provided below the complete source code for the ALIGN-2 program Table 1. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 Genentech, Inc.에 의해 제작되었고, 하기 표 1에 제시된 소스 코드가 사용자 문서와 함께 미국 저작권청 (Washington DC, 20559)에 제출되어 미국 저작권 번호 TXU510087 하에 등록되어 있다. ALIGN-2 sequence comparison computer program source code shown in, Table 1 were produced by Genentech, Inc. has been submitted to the US Copyright Office (Washington DC, 20559) with the user's documents are registered under the United States Copyright numbers TXU510087. ALIGN-2 프로그램은 Genentech, Inc. ALIGN-2 program, Genentech, Inc. (South San Francisco, California)를 통해 공개적으로 입수가능하거나, 또는 하기 표 1에서 제공된 소스 코드로부터 컴파일링될 수 있다. Publicly available through the (South San Francisco, California), or you can be compiled from the source code provided in Table 1. ALIGN-2 프로그램은 UNIX 운영 체제, 바람직하게는 디지털 UNIX V4.0D 상에서의 사용에 대해 컴파일링되어야 한다. ALIGN-2 program should be compiled for use on a UNIX operating system, preferably digital UNIX V4.0D. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되고, 변하지 않는다. All sequence comparison parameters are set by the ALIGN-2 program and do not change.

ALIGN-2가 핵산 서열 비교에 사용되는 경우, 소정의 핵산 서열 C의 소정의 핵산 서열 D에 대한, D와의 또는 D와 대조된 % 핵산 서열 동일성 (소정의 핵산 서열 D에 대한, D와의 또는 D와 대조된 특정 % 핵산 서열 동일성을 갖는 또는 포함하는 소정의 핵산 서열 C로 별법적으로 표현될 수 있음)은 하기와 같이 계산된다: When the ALIGN-2 is used for nucleic acid sequence comparison, a given nucleic acid sequence C of a given nucleic acid sequence D, the contrast% and D with or D to a nucleic acid sequence identity (for a given nucleic acid sequence D, D with or D and it can be represented by a legal to a predetermined nucleic acid sequence C that has or comprises a certain% nucleic acid sequence identity verification) is calculated as follows:

100 × 분수 W/Z 100 × Fountain W / Z

[식중, W는 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의해 이러한 프로그램의 C와 D의 정렬에서 동일한 매치로 점수가 매겨진 뉴클레오티드의 개수이고, Z는 D 내의 뉴클레오티드의 전체 개수이다]. [Wherein, W is the number of nucleotides have the same match in the alignment of C and D of this program by the sequence alignment program ALIGN-2 score numbered, Z is the total number of nucleotides in the D]. 핵산 서열 C의 길이가 핵산 서열 D의 길이와 동일하지 않은 경우, C의 D에 대한 % 핵산 서열 동일성은 D의 C에 대한 % 핵산 서열 동일성과 동일하지 않을 것임이 이해될 것이다. If the length of nucleic acid sequence C is not equal to the length of nucleic acid sequence D,% nucleic acid sequence identity of C to D it will be understood that does not equal the% nucleic acid sequence identity of D to C. % 핵산 서열 동일성 계산의 예로서, 표 4 및 5는 "비교 DNA"로 지시된 핵산 서열의 "기준-DNA"로 지시된 핵산 서열에 대한 % 핵산 서열 동일성을 계산하는 방법을 실연하고, 이때 "기준-DNA"는 가상의 당해 LY6 유전자-코딩 핵산 서열을 나타내고, "비교 DNA"는 당해 "기준-DNA" 핵산 분자가 비교될 핵산 분자의 뉴클레오티드 서열을 나타내며, "N", "L" 및 "V"는 상이한 가상 뉴클레오티드들을 각각 나타낸다. As examples of% nucleic acid sequence identity calculations, Tables 4 and 5, and demonstrate how to calculate the% nucleic acid sequence identity to the nucleic acid sequence indicated as "Comparison DNA" "-DNA reference" of the nucleic acid sequence indicated by, In this case " -DNA reference "is the art of virtual LY6 gene-encoding nucleic acid sequence indicates," comparison DNA "is art" standard -DNA "represents the nucleotide sequence of the nucleic acid molecule is a nucleic acid molecule compared," N "," L "and" V "each represent different virtual nucleotides. 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 % 핵산 서열 동일성 값은 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 바로 앞의 단락에서 기술된 바와 같이 수득된다. One, is all% nucleic acid sequence identity values ​​used herein are obtained as described in the immediately preceding paragraph using the ALIGN-2 computer program, unless specifically stated otherwise.

또다른 실시양태에서, LY6 유전자 변이체 폴리뉴클레오티드는 각각 LY6 폴리펩티드를 코딩하고, 바람직하게는 엄격한 혼성화 및 세정 조건 하에, 본원에 개시된 바와 같은 전장 LY6 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 혼성화할 수 있는 핵산 분자이다. In other embodiments, LY6 gene variant polynucleotides are each LY6 that encodes a polypeptide, and preferably under stringent hybridization and wash conditions, a nucleic acid molecule capable of hybridizing to the nucleotide sequence encoding the full-length LY6 polypeptide as described herein . 변이체 폴리펩티드는 이같은 변이체 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 것일 수 있다. Variant polypeptides may be those that are encoded by such variant polynucleotides.

"단리된"은, 본원에 개시된 다양한 LY6 폴리펩티드를 기술하도록 사용되는 경우, 이의 천연 환경의 성분으로부터 확인 및 분리 및/또는 회수된 폴리펩티드를 의미한다. "The isolated" refers to the various LY6 when used to describe a polypeptide, determine from a component of its natural environment and separated and / or recovered polypeptides disclosed herein. 이의 천연 환경의 오염 성분은 폴리펩티드에 대한 진단 또는 치료 용도를 전형적으로 방해할 물질이고, 효소, 호르몬 및 기타 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. Contaminant components of its natural environment are materials and will typically interfere with diagnostic or therapeutic uses for the polypeptide, enzymes, hormones, and other proteinaceous or non-proteinaceous solutes may include. 바람직한 실시양태에서, 이같은 폴리펩티드는 (1) 스피닝 컵 서열분석기의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 잔기 15개 이상을 수득하는데 충분한 정도로, 또는 (2) 쿠마시(Coomassie) 블루 또는 바람직하게는 은 염색을 이용하는 환원 또는 비-환원 조건 하에서의 SDS-PAGE에 의해 균질할 때까지 정제될 것이다. In a preferred embodiment, such a polypeptide (1) to the extent sufficient to give the N- terminal or internal residues of the amino acid sequence of 15 or more by use of a spinning cup sequence analyzer, or (2) Coomassie (Coomassie), the blue or, preferably, It is is reduced or non-use of the dye-may be purified until homogeneous by SDS-PAGE under reducing conditions. 이같은 단리된 폴리펩티드에는 재조합 세포 내의 상응하는 계내 폴리펩티드가 포함되는데, 이는 LY6 폴리펩티드의 천연 환경으로부터의 이러한 폴리펩티드의 1가지 이상의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문이다. There is an isolated polypeptide such includes the corresponding polypeptides in situ within recombinant cells, this is because one or more of such polypeptide component of the LY6 polypeptide from its natural environment does not exist. 그러나, 통상적으로, 이같은 단리된 폴리펩티드는 1회 이상의 정제 단계에 의해 제조될 것이다. However, typically, such an isolated polypeptide will be prepared by at least one purification step.

"단리된" LY6 폴리펩티드-코딩 핵산은 폴리펩티드-코딩 핵산의 천연 공급원에서 통상적으로 회합되는 1가지 이상의 오염 핵산 분자로부터 확인 및 분리된 핵산 분자이다. "The isolated" LY6 polypeptide-encoding nucleic acid is a polypeptide - a verification and an isolated nucleic acid molecule from one or more of the nucleic acid molecule contamination normally associated in the natural source of the encoding nucleic acid. 임의의 상기의 이같은 단리된 핵산 분자는 자연에서 발견되는 형태 또는 환경과 상이하다. Any of these isolated nucleic acid molecules of the above is different from the form or setting that is found in nature. 따라서, 임의의 이같은 핵산 분자는 천연 세포 내에 존재하는 특정 폴리펩티드-코딩 핵산 분자와 구별된다. Thus, any of these nucleic acid molecules specific polypeptide present in natural cells are distinguished from the encoding nucleic acid molecules.

용어 "제어 서열"은 특정 숙주 생물 내에서 작동가능하게 연결된 코딩 서열의 발현에 필요한 DNA 서열을 지칭한다. The term "control sequences" refers to DNA sequences necessary for the expression of an operably linked coding sequence in a particular host organism. 예를 들어, 원핵생물에 적절한 제어 서열은 프로모터, 임의적으로는 오퍼레이터(operator) 서열, 및 리보좀 결합 부위를 포함한다. For example, the appropriate control sequences for prokaryotes a promoter, optionally comprises an operator (operator) sequence, and a ribosome binding site. 진핵생물 세포는 프로모터, 폴리아데닐화 신호, 및 인핸서(enhancer)를 이용하는 것으로 공지되어 있다. Eukaryotic cells are known to utilize promoters, polyadenylation signals, and enhancers (enhancer).

핵산은 또다른 핵산 서열과 기능적 관계에 놓일 때 "작동가능하게 연결"된다. Nucleic acid is "operably linked" when placed again in a functional relationship with another nucleic acid sequence. 예를 들어, 프리(pre)-서열 또는 분비 리더(leader)에 대한 DNA가 폴리펩티드의 분비에 참여하는 프리-단백질로서 발현될 경우 폴리펩티드에 대한 DNA에 작동가능하게 연결된 것이거나; For example, free (pre) - the DNA of the sequence or secretory leader (leader) pre that participates in the secretion of the polypeptide is operably linked to DNA for a polypeptide when expressed as a protein, or; 프로모터 또는 인핸서가 코딩 서열의 전사에 영향을 미치는 경우 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 것이거나; A promoter or enhancer is operably linked to a coding sequence if it affects the transcription of the coding sequence or; 또는 리보좀 결합 부위가 번역을 촉진하도록 위치하는 경우 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 것이다. Or if the ribosome binding site is positioned so as to facilitate translation is operably linked to a coding sequence. 일반적으로, "작동가능하게 연결된"은 연결되는 DNA 서열들이 인접함을 의미하고, 분비 리더의 경우에는 인접하고 판독 상 내인 것을 의미한다. Generally, "operably linked" when the connection means that the DNA sequences are contiguous and, secretory leader is adjacent to the reading means within. 그러나, 인핸서는 인접할 필요가 없다. However, enhancers need not be contiguous. 연결은 편리한 제한 부위에서 결찰에 의해 달성된다. Linking is accomplished by ligation at convenient restriction sites. 이같은 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커가 통상적인 관례에 따라 사용된다. If such sites do not exist, synthetic oligonucleotide adapters or linkers are used in accordance with conventional practice.

본원에서 사용된, 유전자 발현에 적용된 "발현"은 단백질을 코딩하는 유전자가 전사되어 mRNA가 생산되는 것, 뿐만 아니라 mRNA가 번역되어 유전자에 의해 코딩되는 단백질이 생산되는 것을 지칭한다. "Expression" is applied to the gene expression as used herein, is transferred a gene encoding a protein that is produced mRNA, the mRNA is translated as well as referred to in that the production of protein encoded by the gene. 따라서, 증가된 또는 감소된 발현은 유전자의 증가된 또는 감소된 전사 및/또는 전사로부터 생성된 mRNA의 증가된 또는 감소된 번역을 지칭한다. Thus, the increase or decrease in expression refers to an increased or decreased translation of mRNA resulting from an increased or reduced transcription and / or transcription of a gene.

혼성화 반응의 "엄격성"은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있고, 일반적으로 프로브 길이, 세정 온도, 및 염 농도에 좌우되는 실험적인 계산값이다. Of hybridization reactions "stringency" is an experimental value that is calculated can be easily determined by one skilled in the art, in general, depending on the probe length, washing temperature, and salt concentration. 일반적으로, 프로브가 길수록 적합한 어닐링(annealing)을 위해 더 높은 온도가 필요하고, 프로브가 짧을수록 더 낮은 온도가 필요하다. In general, the higher the temperature required for proper annealing (annealing) the longer the probe, the shorter probes need lower temperatures. 혼성화는 상보적인 가닥이 이의 용융 온도 미만의 환경에 존재할 때 변성 DNA가 다시 어닐링하는 능력에 일반적으로 좌우된다. Hybridization is generally dependent on the ability of denatured DNA annealing again when the complementary strand is present in less than its melting temperature. 프로브와 혼성화가능한 서열 간의 원하는 동일성 정도가 높을수록, 사용될 수 있는 상대적인 온도가 더 높다. The higher the degree of desired identity between the probe and the sequences can hybridize, the relative temperature which can be higher. 결과적으로, 상대적인 온도가 높을수록 반응 조건을 더욱 엄격하게 만드는 경향이 있는 반면, 온도가 낮을수록 덜 엄격해진다는 것을 따른다. As a result, while this tends to be the higher the relative temperature of more stringent reaction conditions, it follows that the lower temperature becomes less strict. 혼성화 반응의 엄격성의 추가적인 상세사항 및 설명에 대해서는, 문헌 [Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers, (1995)]을 참조한다. For additional details and explanation of stringency sexual hybridization reaction, reference is made to the literature [Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers, (1995)].

본원에서 정의된 "엄격한 조건" 또는 "고도의 엄격성 조건"은 (1) 세정을 위해 낮은 이온 강도 및 높은 온도를 사용하는 것, 예를 들어, 50℃에서 0.015 M 염화나트륨/0.0015 M 시트르산 나트륨/0.1% 소듐 도데실 술페이트를 사용하는 것; Defined herein, "stringent conditions" or "stringent conditions of high castle" is to use low ionic strength and high temperature for (1) cleaning, for example, at 0.015 M sodium chloride, 50 ℃ /0.0015 M sodium citrate / . using 0.1% sodium dodecyl sulfate; (2) 혼성화 동안에 변성제, 예컨대 포름아미드를 사용하는 것, 예를 들어, 42℃에서 50% (v/v) 포름아미드 + 0.1% 소 혈청 알부민/0.1% 피콜(Ficoll)/0.1% 폴리비닐피롤리돈/50 mM 인산나트륨 완충제 (pH 6.5) + 750 mM 염화나트륨, 75 mM 시트르산나트륨을 사용하는 것; (2) to use a denaturing agent such as formamide during hybridization, e.g., in 42 ℃ 50% (v / v) formamide, 0.1% bovine serum albumin, 0.1% Ficoll (Ficoll), 0.1% polyvinyl Raleigh to use the money / 50 mM sodium phosphate buffer (pH 6.5) + 750 mM NaCl, 75 mM sodium citrate; 또는 (3) 42℃에서 50% 포름아미드, 5×SSC (0.75 M NaCl, 0.075 M 시트르산나트륨), 50 mM 인산나트륨 (pH 6.8), 0.1% 피로인산나트륨, 5× 덴하르트 용액, 초음파처리된 연어 정액 DNA (50 ㎍/㎖), 0.1% SDS, 및 10% 덱스트란 술페이트를 사용하는 용액에서 하룻밤 동안 혼성화시키고, 42℃에서 0.2×SSC (염화나트륨/시트르산나트륨)에서 10분 세정한 후, 55℃에서 EDTA를 함유하는 0.1×SSC로 구성된 고도 엄격성 세정이 이어지는 것에 의해 확인될 수 있다. Or (3) from 42 ℃ 50% formamide, 5 × SSC (0.75 M NaCl, 0.075 M sodium citrate), an, 50 mM sodium phosphate (pH 6.8), 0.1% sodium pyrophosphate, 5 × Den Reinhardt solution, sonicated after salmon sperm DNA hybridized overnight in a solution that uses the (50 ㎍ / ㎖), 0.1% SDS, and 10% dextran sulfate and washed at 42 ℃ in 0.2 × SSC (sodium chloride / sodium citrate) for 10 minutes, high configured at 55 ℃ in 0.1 × SSC containing EDTA may be confirmed by a subsequent washing stringency.

"중등도로 엄격한 조건"은 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1989]에 기술된 바와 같이 확인될 수 있고, 상기 기술된 것들보다 덜 엄격한 세정 용액 및 혼성화 조건 (예를 들어, 온도, 이온 강도 및 %SDS)의 사용을 포함한다. "Stringent conditions to a moderate" is [Sambrook et al, Molecular Cloning:. A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1989] A can be confirmed as described in the less rigorous cleaning than the described ones solution and include the use of hybridization conditions (e.g., temperature, ionic strength and% SDS). 중등도로 엄격한 조건의 예는 20% 포름아미드, 5× SSC (150 mM NaCl, 15 mM 시트르산3나트륨), 50 mM 인산나트륨 (pH 7.6), 5× 덴하르트 용액, 10% 덱스트란 술페이트, 및 20 ㎎/㎖의 변성된 전단 연어 정자 DNA를 포함하는 용액에서 37℃에서 하룻밤 동안 인큐베이션시킨 후, 필터를 1× SSC에서 약 37-50℃에서 세척하는 것을 포함한다. Examples of the stringent conditions as moderate, 20% formamide, 5 × SSC (150 mM NaCl, 15 mM citric acid tri-sodium), 50 mM sodium phosphate (pH 7.6), 5 × Den Reinhardt solution, 10% dextran sulfate, and after incubation overnight in a solution containing a shear-modified salmon sperm DNA in 20 ㎎ / ㎖ at 37 ℃, involves washing the filters in 1 × SSC at about 37-50 ℃. 당업자는, 프로브 길이 등과 같은 인자에 맞추기 위해 필요하다면, 온도, 이온 강도 등을 조정하는 방법을 인지할 것이다. Those skilled in the art, if necessary, to accommodate factors such as probe length, will recognize how to adjust the temperature, ionic strength and the like.

본원에서 사용된 용어 "에피토프 태그(tag)가 부착된"은 "태그 폴리펩티드"에 융합된, LY6 폴리펩티드를 포함하는 키메라 폴리펩티드, 또는 LY6 폴리펩티드 결합제를 지칭한다. As used herein, the term "epitope tag (tag) is attached to" refers to a chimeric polypeptide, or LY6 polypeptide binding agent comprising a, LY6 polypeptide fused to a "tag polypeptide". 태그 폴리펩티드는 항체가 에피토프에 대해 만들어질 수 있는 에피토프를 제공하기에 충분한 잔기를 갖지만, 자신이 융합된 폴리펩티드의 활성을 방해하지 않도록 하기에 충분히 짧다. Tag polypeptides gatjiman enough residues to provide an epitope which an antibody can be made to the epitope, it is short enough to not interfere with the activity of the polypeptide to which it is fused. 또한 바람직하게는 태그 폴리펩티드는 이같은 항체가 다른 에피토프와 실질적으로 교차 반응하지 않도록 상당히 독특하다. Further preferably, the tag polypeptide is fairly unique so that such antibody does not substantially cross-react with other epitopes. 적절한 태그 폴리펩티드에는 6개 이상의 아미노산 잔기, 일반적으로 약 8개 내지 50개 사이의 아미노산 잔기 (바람직하게는, 약 10개 내지 20개 사이의 아미노산 잔기)가 있다. Appropriate tag polypeptide has at least six amino acid residues, typically residues of amino acids between about 8 to 50 (preferably, between about amino acid residues 10 to 20).

본원에서의 목적을 위한 "활성인" 또는 "활성"은 천연 또는 천연-발생 폴리펩티드의 생물학적 및/또는 면역학적 활성을 유지하는 폴리펩티드의 형태(들)을 지칭하고, 이때 "생물학적" 활성은 천연 또는 천연-발생 폴리펩티드가 지니는 항원성 에피토프에 대한 항체의 생산을 유도하는 능력을 제외한, 천연 또는 천연-발생 폴리펩티드에 의해 야기된 생물학적 기능 (억제성 또는 자극성)을 지칭하고, "면역학적" 활성은 천연 또는 천연-발생 폴리펩티드가 지니는 항원성 에피토프에 대한 항체의 생산을 유도하는 능력을 지칭한다. "Active" or "activity" for the purposes herein, a natural or natural-refers to generate polypeptide biological and / or immunological polypeptide form of maintaining the active (s) and, wherein "biological" activity of native or natural-occurring polypeptide having other than the ability to induce the production of antibodies to the antigenic epitopes of natural or natural-refers to a biological function (inhibitory or stimulating) caused by the generation polypeptides, and "immunological" activity of natural natural or - refers to the ability to induce the production of antibodies to the antigenic epitope is the polypeptide having occurred. 본원에서 사용된 활성 폴리펩티드는 IBD에 걸리지 않은 유사한 조직 상에서의 발현에 비해 IBD 조직에서, 정성적 또는 정량적인 관점에서, 차별적으로 발현되는 항원이다. The active polypeptides as used herein, in IBD tissue, compared to the expression on similar tissue that is caught in IBD, the qualitative or quantitative perspective, an antigen that is differentially expressed.

용어 "길항제"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 본원에 개시된 천연 폴리펩티드의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 완전히 차단하거나, 억제하거나 또는 중화시키는 임의의 분자를 포함한다. The term "antagonist" includes any molecule that is used in the broadest sense, partially or completely block the biological activity of the native polypeptide disclosed herein, or the control or neutralization. 적절한 길항제 분자에는 길항제 항체 또는 항체 단편, 천연 폴리펩티드의 단편 또는 아미노산 서열 변이체, 펩티드, 안티센스(antisense) 올리고뉴클레오티드, 유기 소분자 등이 구체적으로 포함된다. Appropriate antagonist molecules include oligonucleotide antagonist antibodies or antibody fragments, antisense (antisense) of a natural polypeptide fragment or amino acid sequence variants, peptide, a nucleotide, an organic small molecules are specifically included. 길항제를 확인하는 방법은 이같은 폴리펩티드 (이를 발현하는 세포 포함)를 후보 작동제 또는 길항제 분자와 접촉시키는 단계, 및 이같은 폴리펩티드와 정상적으로 관련된 하나 이상의 생물학적 활성에서 검출가능한 변화를 측정하는 단계를 포함할 수 있다. It may be how to determine the antagonist comprises the step of measuring such a polypeptide (including a cell expressing it) a candidate agonist or contacting with antagonist molecule, and such polypeptide and detectable change in one or more of the biological activity associated normally .

"치료하는" 또는 "치료" 또는 "완화"는 치료용 처치 및 예방용 또는 방지용 조치 모두를 지칭하고, 이때 목표는 질환의 진행을 방지하거나 늦추는 (줄이는) 것이다. "Treating" or "treatment" or "mitigating" refers to both treatment and preventive measures for prevention or for therapy, where the goal is (to reduce) prevent or slow the progression of the disease. 치료는 IBD의 진행의 변형을 또한 지칭할 수 있다. Treatment may also be referred to the transformation of IBD in progress.

"진단"은 IBD, UC 및/또는 크론병이 비제한적으로 포함되는 질환의 특색있는 특징을 확인 또는 결정하는 과정을 지칭한다. "Diagnosis" refers to the process of identifying or determining the characteristic features of the disease, IBD, UC and / or Crohn's disease which include, but are not limited to. 진단 과정은 중증도 또는 질환 진행, 뿐만 아니라 위치 (예를 들어, 염증 및/또는 변경된 유전자 발현이 발견되는 위장관 내의 또는 위장관을 따라서 있는 위치)를 기초로 하는 병기 결정 또는 질환 분류로 또한 종종 표현된다. Diagnostic procedures are also often expressed in severity or disease progression, as well as the position staging or disease classification based on a (e. G., Inflammation and / or locations along the changed or the gastrointestinal tract in the gastrointestinal tract which gene expression is found).

진단을 필요로 하는 대상에는 비정상적인 LY6 발현을 이미 앓고 있는 이들, 뿐만 아니라 LY6 발현이 비정상적인 경향이 있는 이들 또는 비정상적인 LY6 발현을 방지하려는 이들이 포함된다. A subject in need thereof a diagnosis that is already suffering from an abnormal expression LY6, as well as they are included to prevent the expression of these two LY6 LY6 or abnormal expression in an unusual trend. 따라서, 본 발명의 한 양상은 대조군과 비교하여 시험 포유동물의 위장 조직에서의 LY6 발현을 결정하는 단계, 및 LY6 발현 수준이 정상적인 대조군 발현 수준과 유의하게 상이하지 않다는 것을 결정하는 단계를 포함하는, IBD의 치료를 위한 치료제로 치료된 포유동물에서 치료 약물 응답을 검출하는 것이다. Accordingly, to one aspect of the present invention comprises the step of determining that the determining LY6 expression in gastrointestinal tissue of a test mammal compared to the control, and LY6 expression level is not significantly different from normal control expression level, to detect the therapeutic drug response in a mammal treated with a therapeutic agent for the treatment of IBD. 한 실시양태에서, 치료제로 치료된 포유동물의 LY6의 발현 수준이 상이한 경우에 (발현이 정상적인 대조군에 더욱 유사하고, 즉 LY6 발현 수준이 치료 전의 포유동물에서의 LY6 발현 수준보다 낮은 경우에), 치료 응답이 결정된다. In one embodiment, the (if the expression is more similar to normal control, that is, LY6 expression levels lower than LY6 expression levels in a mammal prior to treatment) when the level of expression of LY6 of the mammal treated with a therapeutic agent are different, the therapeutic response is determined.

질환에서의 성공적인 치료 및 개선을 평가하기 위한 상기의 파라메터들은 의사에게 익숙한 일상적인 절차에 의해 용이하게 측정가능하다. The parameters for assessing successful treatment and improvement in the disease are readily determined by routine procedures familiar to a physician. IBD 치료법의 경우, 예를 들어, 질환 진행까지의 시간 (TDP)을 평가하고/하거나 응답률 (RR)을 측정함으로써, 효능을 결정할 수 있다. For IBD therapy, for example, it can be determined by evaluating the effects of time (TDP) of the disease to progress and / or measuring the response rate (RR). 유전자 발현을 평가하고 환자로부터의 위장 조직의 조직병리학을 관찰하기 위해 생검물을 취할 수 있다. Evaluation of gene expression and can take a biopsy of water to observe the histopathology of gastrointestinal tissue from the patient. 예휴 및/또는 진단 방법에 관한 본원에 기술된 발명은 LY6 유전자 발현 상향조절의 결정 및 평가를 수반한다. The invention described herein relates to yehyu and / or diagnostic procedure involves the determination and evaluation of LY6 gene expression upregulation.

IBD의 치료, 이의 증상 완화 또는 이의 진단을 위한 "포유동물" 또는 "포유류 대상"은 인간, 가축 및 농장 동물, 및 동물원, 운동 또는 애완 동물, 예컨대 개, 고양이, 소, 말, 양, 돼지, 염소, 토끼, 흰족제비 등을 포함하는, 포유동물로 분류되는 임의의 동물을 지칭한다. For the treatment, its symptoms or a diagnosis of IBD "mammals" or "mammalian subject" is a human, livestock and farm animals, and zoo, sports or pet animals such as dogs, cats, cattle, horses, sheep, pigs, containing goats, rabbits, ferrets, etc., refers to any animal classified as a mammal. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다. Preferably, the mammal is a human.

하나 이상의 추가적인 치료제와의 "조합" 투여는 동시 (공동) 투여 및 임의 순서의 연속 투여를 포함한다. "Combination" administration of the one or more further therapeutic agents includes simultaneous administration of continuous (co) administration and in any order.

본원에서 사용된 "담체"는 사용되는 투여량 및 농도에서 이에 노출되는 세포 또는 포유동물에 비독성인 제약상 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제를 포함한다. The "carrier" as used herein includes non-toxic to this cell or mammal being exposed adult pharmaceutically acceptable carriers, excipients or stabilizers used in the administration amount and concentration. 종종, 생리학적으로 허용가능한 담체는 수성 pH 완충 용액이다. Often the physiologically acceptable carrier is an aqueous pH buffered solution. 생리학적으로 허용가능한 담체의 예로는 완충제 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 기타 유기 산; Examples of the physiologically acceptable carrier is a buffer, for example phosphate, citrate, and other organic acids; 아스코르브산이 포함되는 항산화제; Antioxidants including ascorbic acid is first; 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; Low molecular weight (less than about ten residues of) polypeptides; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; Proteins, such as serum albumin, gelatin, or immunoglobulins; 친수성 중합체 예컨대 폴리비닐피롤리돈; Hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; 아미노산 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 라이신; Amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, arginine or lysine; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린이 포함되는 단당류, 이당류, 및 기타 탄수화물; Glucose, monosaccharides, disaccharides that contain the mannose, or dextrin, and other carbohydrates; 킬레이팅제 예컨대 EDTA; Chelating agent, for example EDTA; 당 알콜 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; Alcohols such as mannitol or sorbitol sugar; 염-형성 카운터 이온 예컨대 나트륨; Salt-forming counterions such as sodium; 및/또는 비이온성 계면활성제 예컨대 TWEEN™, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 PLURONICS™이 포함된다. And / or non-ionic surfactants include for example, TWEEN ™, polyethylene glycol (PEG), and PLURONICS ™.

"고상" 또는 "고체 지지체"는 폴리펩티드, 핵산, 항체 또는 LY6 결합제가 부착 또는 접착될 수 있는 비-수성 매트릭스를 의미한다. "Solid phase" or "solid support" is a polypeptide, nucleic acid, antibody or LY6 binding ratio which can I be attached or bonded; means a water-based matrix. 본원에서 포함되는 고상의 예로는 유리 (예를 들어, 제어형 다공성 유리), 다당류 (예를 들어, 아가로스), 폴리아크릴아미드, 폴리스티렌, 폴리비닐 알콜 및 실리콘으로 부분적으로 또는 전체적으로 형성된 것들이 포함된다. Examples of the solid phase contained in the present application include those of glass (e.g., controlled porous glass), polysaccharides (e.g., agarose), as polyacrylamide, polystyrene, polyvinyl alcohol and silicon in part or formed as a whole. 특정 실시양태에서, 환경에 따라, 고상은 분석 플레이트의 웰을 포함할 수 있고, 또한 다르게는 정제 컬럼 (예를 들어, 친화성 크로마토그래피 컬럼)이다. In certain embodiments, depending on the circumstances, the solid phase can comprise the well of the assay plate, and alternatively purification column (e.g., an affinity chromatography column). 이러한 용어는 개별적인 입자들의 불연속 고상, 예컨대 미국 특허 번호 4,275,149에 기술된 것들을 또한 포함한다. Such term also includes a discontinuous solid phase include those described in, e.g., U.S. Patent No. 4,275,149 of the individual particles.

"리포솜"은 약물을 포유동물에게 전달하는데 유용한, 다양한 유형의 지질, 인지질 및/또는 계면활성제로 구성된 소포이다. "Liposome" is a packet consisting of a drug to a mammal is useful for delivery to, various types of lipids, phospholipids and / or surfactant. 리포솜의 성분은, 생물학적 막의 지질 배열과 유사하게, 이층 형성으로 일반적으로 배열된다. Components of the liposomes are, similar to the lipid arrangement biological membrane, and is generally arranged in a two-ply formation.

"소분자" 또는 "유기 소분자"는 분자량이 약 500 달톤 미만인 것으로 본원에서 정의된다. "Small molecule" or "small organic molecule" is defined herein as less than about 500 daltons molecular weight.

길항제의 "유효량"은 생리학적 효과를 일으키는데, 예컨대, 비제한적으로, 유전자 또는 이에 의해 코딩되는 단백질의 기능을 부분적으로 또는 전체적으로 억제하는데 충분한 양이다. "Effective amount" of the antagonist to cause a physiological effect, for example, but not limited to, an amount sufficient to inhibit, partially or as a whole the function of the protein encoded by the gene or its. "유효량"은 이러한 목적과 관련되어, 경험적으로, 그리고 일상적인 방식으로 결정될 수 있다. "Effective amount" in connection with this purpose, can be determined empirically, and the routine manner.

용어 "치료상 유효량"은 대상 또는 포유동물에서 질환 또는 장애를 "치료"하는데 효과적인 길항제 또는 기타 약물을 지칭한다. The term "therapeutically effective amount" refers to an effective antagonists or other drugs to "treat" a disease or disorder in a subject or mammal. IBD의 경우에, 치료상 유효량의 약물은 비정상적인 LY6 발현을 정상적인 생리학적 수준으로 복구시키고/시키거나, 위장 염증을 감소시키고/시키거나, 위장 병변의 개수를 감소시키고/시키거나, IBD, UC 및/또는 CD와 관련된 증상들 중 하나 이상을 어느 정도 경감시킬 것이다. In the case of IBD, the drug in a therapeutically effective amount is abnormal LY6 recover the expressed normal physiological levels and / or decrease the gastric irritation and / or, reduced the number of gastric lesions and / or, IBD, UC and / or will to some extent alleviate one or more of the symptoms associated with CD. "치료"의 본원에서의 정의를 참조한다. See the definition herein of the "treatment".

길항제의 "성장 억제량"은 시험관내 또는 생체내에서 세포, 특히 종양, 예를 들어, 암 세포의 성장을 억제할 수 있는 양이다. Antagonist "growth inhibiting amount" is that amount which can enter the cell, especially tumor, e.g. in vitro or in vivo, inhibit the growth of cancer cells. 신생물성 세포 성장을 억제하는 목적을 위해, 이같은 양은 경험적으로, 그리고 일상적인 방식으로 결정될 수 있다. For the purposes of inhibiting neoplastic cell growth, such amounts may be determined empirically, and the routine manner.

길항제의 "세포독성량"은 시험관내 또는 생체내에서 세포, 특히 증식하고 있는 세포, 예를 들어, 암 세포의 파괴를 야기할 수 있는 양이다. Antagonist "cytotoxic amount" is an amount that can cause a cell, for example, the destruction of cancer cells, which cells, especially proliferating in vitro or in vivo. 신생물성 세포 성장을 억제하는 목적을 위해, 경험적으로, 그리고 일상적인 방식으로 결정될 수 있다. For the purposes of inhibiting neoplastic cell growth it may be determined empirically, and the routine manner.

용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 예를 들어, 항-LY6 모노클로날 항체 (길항제 및 중화 항체 포함), 폴리에피토프 특이성이 있는 항-LY6 항체 조성물, 폴리클로날 항체, 단일쇄 항-LY6 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적), 및 원하는 생물학적 또는 면역학적 활성을 나타내는 경우에 한하여, 상기 열거된 항체들 모두의 항원 결합 단편 (하기 참조)을 명확하게 포함한다. The term "antibody" is used in the broad sense, for example, wherein a monoclonal antibody -LY6 monoclonal antibody (including antagonist and neutralizing antibodies), anti-poly-epitope specificity that have -LY6 antibody composition, polyclonal antibodies, single chain anti- LY6 antibodies, multispecific antibodies and (e.g., bispecific), and comprising the only if exhibit the desired biological or immunological activity, clearly the above-listed antibodies antigen-binding fragments of both (see below). 용어 "면역글로불린" (Ig)은 본원에서 항체와 상호교환가능하게 사용된다. The term "immunoglobulin" (Ig) is used interchangeably with the possible antibody herein.

"단리된" 항체는 이의 천연 환경의 성분으로부터 확인 및 분리 및/또는 회수된 것이다. "The isolated" antibody is identified and separated and / or recovered from a component of its natural environment. 이의 천연 환경의 오염 성분은 항체에 대한 진단 또는 치료 용도를 방해할 물질이고, 효소, 호르몬 및 기타 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. Contaminant components of its natural environment are materials and interfere with diagnostic or therapeutic uses for the antibody, enzymes, hormones, and other proteinaceous or non-proteinaceous solutes may include. 바람직한 실시양태에서, 항체는 (1) 로우리(Lowry) 방법으로 측정시 95 중량%의 항체를 초과하는 정도, 가장 바람직하게는 99 중량%를 초과하는 정도로, (2) 스피닝 컵 서열분석기의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 잔기 15개 이상을 얻기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마시 블루 또는 바람직하게는 은 염색을 이용하는 환원 또는 비-환원 조건하에서의 SDS-PAGE에 의해 균질할 때까지 정제될 것이다. In a preferred embodiment, the antibody (1) Lowry (Lowry) as measured in a way so that more than the amount, and most preferably 99 weight% in excess of the antibodies of the 95% by weight, (2) the use of a spinning cup sequence analyzer N- by a sufficient degree to obtain a terminal or internal amino acid sequence of residues at least 15, or (3) Coomassie blue or, preferably, is reduced or non-use of the dye-until homogeneity by SDS-PAGE under reducing conditions It will be purified. 단리된 항체에는 재조합 세포 내의 계내 항체가 포함되는데, 이는 항체의 천연 환경의 1가지 이상의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문이다. The isolated antibody, there is included the antibody in situ within recombinant cells, since the one or more of components of the natural environment of the antibody will not be present. 그러나, 통상적으로, 단리된 항체는 1회 이상의 정제 단계에 의해 제조될 것이다. However, typically, an isolated antibody will be prepared by at least one purification step.

기본적인 4쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경쇄 (L) 및 2개의 동일한 중쇄 (H)로 구성된 이종사량체성(heterotetrameric) 당단백질이다 (IgM 항체는 J 사슬로 칭해지는 추가적인 폴리펩티드와 함께 기본적인 이종사량체 단위 5개로 구성되는 항체이고, 따라서 10개의 항원 결합 부위를 함유하는 한편, 분비형 IgA 항체는 J 사슬과 함께 기본적인 4쇄 단위 2-5개를 포함하는 다가의 조립체(assemblage)를 형성하도록 중합될 수 있다). The basic 4-chain antibody unit are two identical light chains (L) and the second is a glycoprotein two kinds tetramer identity (heterotetrameric) consisting of two identical heavy chains (H) (IgM antibodies basic two kinds tetramer units with becoming additional polypeptide called a J chain, an antibody comprising five, thus containing 10 of the antigen binding site while secreted IgA antibodies can polymerize to form an assembly (assemblage) of polyhydric containing 2-5 basic 4-chain units along with J chain have). IgG의 경우에, 4쇄 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤이다. In the case of IgG, 4-chain unit is generally about 150,000 daltons. 각각의 L 사슬은 1개의 디술피드 공유 결합에 의해 H 사슬에 연결되는 한편, 2개의 H 사슬은 H 사슬 이소타입(isotype)에 따라 1개 이상의 디술피드 결합에 의해 서로 연결된다. Each L chain is connected to a H chain by one covalent disulfide On the other hand, the two H chains are linked together by one or more disulfide bonds depending on the H chain isotype (isotype). 각각의 H 및 L 사슬은 또한 규칙적인 간격의 사슬내 디술피드 다리를 갖는다. Each H and L chain also has regularly spaced within the chain disulfide bridge. 각각의 H 사슬은 N-말단에 가변 도메인 (V H )이 있고, 여기에 α 및 γ 사슬 각각에 대해서는 3개의 불변 도메인 (C H )이, μ 및 ε 이소타입에 대해서는 4개의 C H 도메인이 이어진다. Each H chain has a variable domain (V H) and is, here, the α and the four C H domains for μ and ε isotypes three constant domains (C H) for each of the γ-chain N- terminus It followed. 각각의 L 사슬은 N-말단에 가변 도메인 (V L )이 있고, 여기에 불변 도메인 (C L )이 다른쪽 말단에서 이어진다. Each L chain has a variable domain (V L) in the N- terminus, where the constant domain (C L) is followed at the other end on. V L 은 V H 와 정렬되고, C L 은 중쇄의 첫번째 불변 도메인 (C H 1)과 정렬된다. V L is aligned with the V H, C L is aligned with the first constant domain of the heavy chain (C H 1). 특정 아미노산 잔기가 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 사이의 계면을 형성하는 것으로 여겨진다. It is believed that certain amino acid residues forming the interface between the light chain variable domain and a heavy chain variable domain. V H 와 V L 이 함께 쌍을 이루는 것으로 단일 항원-결합 부위가 형성된다. The binding site is formed - a single antigen that V H and V L are paired together. 상이한 클래스의 항체들의 구조 및 성질에 대해서는, 예를 들어, 문헌 [Basic and Clinical Immunology, 8th edition, Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994]의 71면 및 제6장을 참조한다. For the structure and properties of the different classes of antibodies, see, e.g., [Basic and Clinical Immunology, 8th edition, Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, refers to the surface 71 and Chapter 6, CT, 1994].

임의의 척추동물 종으로부터의 L 사슬은 이의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기초로, 카파 및 람다로 칭해지는 명백하게 상이한 2가지 유형 중의 하나로 지정될 수 있다. L chain from any vertebrate species can be assigned on the basis of the amino acid sequence of the constant domains thereof, as one becomes clearly different two types referred to as kappa and lambda. 중쇄의 불변 도메인 (C H )의 아미노산 서열에 따라, 면역글로불린은 여러 클래스 또는 이소타입으로 지정될 수 있다. Depending on the amino acid sequence of the heavy chain constant domains (C H), immunoglobulins can be assigned to different classes or isotypes. 면역글로불린에는 5가지 부류가 있다: 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 지정된 중쇄를 갖는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM. There are five immunoglobulin classes: each of α, δ, ε, IgA, IgD, IgE, IgG and IgM heavy chain with a given γ, and μ. γ 및 α 클래스는 C H 서열 및 기능에서의 비교적 작은 차이를 기초로 서브클래스로 추가로 분류되고, 예를 들어, 인간은 하기의 서브클래스를 발현한다: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2. γ and α classes are classified further into subclasses on the basis of relatively minor differences in C H sequence and function, e.g., humans express the subclass of the following: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, and IgA2.

용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 절편이 서열 면에서 항체들 간에 크게 상이하다는 사실을 지칭한다. The term "variable" refers to the fact that certain fragments of variable domains that differ significantly in sequence between the antibody surface. V 도메인은 항원 결합을 매개하고, 특정 항체의 이의 특정 항원에 대한 특이성을 정의한다. V domain mediates antigen binding and define specificity of a particular antibody for its particular antigen. 그러나, 가변성은 가변 도메인의 아미노산 약 110개 길이에 걸쳐 고르게 분포되지 않는다. However, the variability is not evenly distributed across the approximately 110 amino acids in length of the variable domain. 대신, V 영역은 길이가 각각 아미노산 9-12개인 "초가변 영역"으로 칭해지는 극도의 가변성의 더 짧은 영역에 의해 분리되는 아미노산 15-30개의 프레임워크(framework) 영역 (FR)으로 칭해지는 비교적 불변성인 신축물로 구성된다. Instead, V region relatively becomes long is referred to as 15 to 30 amino acids of the framework (framework) region (FR) separated by shorter regions of extreme variability, referred respectively to the amino acids 9 to 12 private "hypervariable region" It consists of a flexible constancy of water. 천연 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 도메인은 β-시트 구조를 연결하고, 일부 경우에는 β-시트 구조의 일부를 형성하는 루프를 형성하는 3개의 초가변 영역에 의해 연결된, β-시트 배열을 주로 채택한 4개의 FR을 포함한다. Natural heavy and light chain variable domains are each connected to four β- sheet structure and, in some cases, mainly adopted, β- sheet array, connected by three hypervariable regions, which form loops forming a portion of β- sheet structure It includes two FR. 각각의 사슬 내의 초가변 영역은 FR에 의해 매우 근접하게 함께 유지되고, 다른 사슬로부터의 초가변 영역들과 함께, 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다 ([Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)] 참조). Hypervariable regions in each chain are held together in close proximity by the FR, with the hypervariable regions from the other chain, of antibody-antigen-contributes to the formation of the binding site ([Kabat et al, Sequences of Proteins. of Immunological Interest, see 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]). 불변 도메인은 항체가 항원에 결합하는데 직접적으로 수반되지는 않지만, 항체 의존적 세포형 세포 독성 (ADCC)에서의 항체의 참여와 같은 다양한 이펙터 기능을 나타낸다. The constant domains are antibodies, but are not involve directly in binding to an antigen, but exhibit various effector functions, such as participation of the antibody in antibody dependent cellular cytotoxicity type (ADCC).

본원에 사용된 용어 "초가변 영역"은 항원 결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. As used herein, the term "hypervariable region" refers to amino acid residues of an antibody that is responsible for antigen-binding. 초가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기 (예를 들어, V L 내의 대략적인 카밧 잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2) 및 89-97 (L3) 주변, 및 V H 내의 대략적인 카밧(Kabat) 잔기 31-35B (H1), 50-65 (H2) 및 95-102 (H3) 주변; [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]) 및/또는 "초가변 루프"로부터의 잔기 (예를 들어, V L 내의 대략적인 코티아(Chothia) 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2) 및 91-96 (L3) 및 V H 내의 26-32 (H1), 52A-55 (H2) 및 96-101 (H3) 주변; [Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)])를 일반적으로 포함한다. Hypervariable regions "complementarity determining region" to the amino acid residues (for example, from or "CDR" example, the peripheral rough Kabat residues 24-34 (L1), 50-56 (L2 ) and 89-97 (L3) in the V L , and approximate Kabat (Kabat) residues 31-35B (H1), 50-65 (H2 ) and 95-102 (H3) in the V H peripheral;. [Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health , Bethesda, MD. (1991)]) and / or (approximate nose thiazole (Chothia in, for example, V L) residues 26-32 (L1 "hypervariable loop" residues from ), 50-52 (L2) and 91-96 (L3) and around 26-32 (H1), 52A-55 (H2) and 96-101 (H3) in the V H;. [Chothia and Lesk J. Mol Biol . 196: 901-917 generally include the (1987)).

본원에서 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체들의 집단으로부터 수득한 항체를 지칭하고, 즉 집단을 이루는 개별적인 항체들은, 모노클로날 항체의 생산 동안 발생할 수 있는 가능한 변이체들 (이같은 변이체들은 일반적으로 미량으로 존재한다)을 제외하고는, 동일하고/하거나 같은 에피토프(들)에 결합한다. As used herein, the term "monoclonal antibody" substantially refers to one obtained from a group of a homogeneous antibody, i.e., the individual antibodies constituting the population are, of possible variants that may arise during production of the monoclonal antibody (such mutants are are generally exclude to present in a very small amount), and identical and / or bind to the same epitope (s). 이같은 모노클로날 항체는 표적에 결합하는 폴리펩티드 서열을 포함하는 항체를 전형적으로 포함하며, 이때 표적-결합 폴리펩티드 서열은 다수의 폴리펩티드 서열로부터의 단일 표적 결합 폴리펩티드 서열의 선별을 포함하는 프로세스에 의해 수득되었다. And monoclonal antibodies to these monoclonal antibodies comprises an antibody comprising a polypeptide sequence that binds a target, typically, at this time the target-binding polypeptide sequence was obtained by a process comprising a single target binding screening of the polypeptide sequence from a plurality of polypeptide sequences . 예를 들어, 선별 프로세스는 다수의 클론, 예컨대 하이브리도마 클론, 파지 클론 또는 재조합 DNA 클론의 풀(pool)로부터 독특한 클론을 선별하는 것일 수 있다. For example, the screening process is the large number of clones, e.g., hybridoma clones, phage clones, or a unique clone from a pool (pool) of the recombinant DNA clones can be screened for. 예를 들어, 표적에 대한 친화도 개선, 표적 결합 서열의 인간화, 세포 배양에서의 이의 생산의 개선, 생체 내에서의 이의 면역원성의 감소, 다중특이적 항체의 생성 등을 위해, 선별된 표적 결합 서열이 추가로 변경될 수 있고, 변경된 표적 결합 서열을 포함하는 항체 또한 본 발명의 모노클로날 항체라는 것을 이해하여야 한다. For example, for the humanization of affinity improvement over the target, the target binding sequence, cells improvement of its production in the culture, and its decrease in immunogenicity in a living body, the creation of a multi-specific antibody or the like, the selected target binding this sequence may be changed by adding and, it is to be understood that the antibody comprising the altered target binding sequence also a monoclonal antibody of the present invention. 여러 결정인자 (에피토프)에 대해 지시된 여러 항체를 전형적으로 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 대조적으로, 모노클로날 항체 제제의 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대해 지시된다. Polyclonal antibody preparations as opposed to containing several antibodies directed against different determinants (epitopes), typically, monoclonal antibodies to each of the monoclonal antibodies of the monoclonal antibody preparations by monoclonal is directed against a single determinant on the antigen. 이의 특이성에 더하여, 모노클로날 항체 제제는 전형적으로 다른 면역글로불린에 오염되지 않는다는 점에서 유리하다. In addition to its specificity, monoclonal antibody preparations are typically monoclonal is advantageous in that it is not contaminated with other immunoglobulins. 수식어구 "모노클로날"은 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된다는 항체의 특성을 가리키는 것이며, 임의의 특정한 방법에 의한 항체 생산을 요구하는 것으로 해석되어서는 안된다. Modifier "monoclonal" is substantially pointing will the characteristics of antibodies that obtained from a homogeneous antibody population, and should not be construed as requiring production of the antibody by any particular method. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 하이브리도마 방법 (예를 들어, [Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]; [Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988)]; [Hammerling et al., Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, NY, 1981)]), 재조합 DNA 방법 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 참조), 파지 디스플레이 기술 (예를 들어, [Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991)]; [Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)]; [Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004)]; [Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5):1073-1093 (2004)]; [Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34):12467-12472 (2004)]; 및 [Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2):119-132 (2004)] 참조), 및 인간 면역글로불린 서열을 코딩하는 인간 면역글로불린 유전자좌 또는 유전자의 일부 또는 모두를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유 For example, the monoclonal antibodies used in accordance with the invention is the hybridoma method (e.g., [Kohler et al, Nature, 256:. 495 (1975)]; [Harlow et al, Antibodies:. A Laboratory Manual , (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed 1988.)];. [Hammerling et al, Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, NY, 1981)]), recombinant DNA methods (e. g., US Patent No. 4,816,567), phage display technology (e.g., [Clackson et al, Nature, 352:. 624-628 (1991)]; [Marks et al, J. Mol Biol 222:... 581-597 ( 1991)]; [Sidhu et al, J. Mol Biol 338 (2):... 299-310 (2004)]; [Lee et al, J. Mol Biol 340 (5):... 1073-1093 ( 2004)]; [Fellouse, Proc Natl Acad Sci USA 101 (34):.... 12467-12472 (2004)]; and [Lee et al, J. Immunol Methods 284 (1-2):.. 119- 132 (2004) reference), and human immunoglobulin loci encoding the human immunoglobulin sequence or human or in an animal that has some or all of the human gene-oil 항체를 생산하기 위한 기술 (예를 들어, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; [Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993)]; [Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993)]; [Bruggemann et al., Year in Immuno., 7:33 (1993)]; Technology for the production of antibodies (e.g., WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; [Jakobovits et al, Proc Natl Acad Sci USA, 90:..... 2551 (1993)]; [Jakobovits et al, Nature, 362:... 255-258 (1993)]; [Bruggemann et al, Year in Immuno, 7:33 (1993)]; 미국 특허 번호 5,545,806; US Patent No. 5,545,806; 5,569,825; 5,569,825; 5,591,669 (모두 GenPharm); 5,591,669 (all GenPharm); 5,545,807; 5,545,807; WO 1997/17852; WO 1997/17852; 미국 특허 번호 5,545,807; US Patent No. 5,545,807; 5,545,806; 5,545,806; 5,569,825; 5,569,825; 5,625,126; 5,625,126; 5,633,425; 5,633,425; 및 5,661,016; And 5,661,016; [Marks et al., Bio/Technology, 10: 779-783 (1992)]; [Marks et al, Bio / Technology, 10:. 779-783 (1992)]; [Lonberg et al., Nature, 368: 856-859 (1994)]; [Lonberg et al, Nature, 368:. 856-859 (1994)]; [Morrison, Nature, 368: 812-813 (1994)]; [Morrison, Nature, 368: 812-813 (1994)]; [Fishwild et al., Nature Biotechnol. [Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996)]; 14: 845-851 (1996); [Neuberger, Nature Biotechnol. [Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996)]; 14: 826 (1996); 및 [Lonberg and Huszar, Intern. And [Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Rev. Immunol., 13: 65-93 (1995)] 참조)이 예를 들어 포함되는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다. Immunol, 13:. 65-93, see (1995)) may be prepared by a variety of techniques for example it included.

"키메라" 항체 (면역글로불린)에는 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 중쇄 및/또는 경쇄의 부분이 있는 한편, 사슬(들)의 나머지부분은 또다른 종으로부터 유래되거나 또다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 항체, 뿐만 아니라 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이같은 항체의 단편이 포함된다 (미국 특허 번호 4,816,567; [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)]). "Chimeric" antibodies (immunoglobulins), the remainder of the derived from a particular species, or that are identical to the corresponding sequence, or homologous to the heavy chain and / or part of the light chain of the antibody belonging to a particular antibody class or subclass other hand, the chain (s) It is also derived from other species, or may be the same as another antibody class or the corresponding sequences of the antibody belonging to a subclass or contains a homologous antibody, as such an antibody fragment of a exhibit the desired biological activity as well (U.S. Pat. No. 4,816,567; [ USA 81 Morrison et al, Proc Natl Acad Sci: 6851-6855 (1984)])...... 본원에서 사용된 인간화 항체는 키메라 항체의 부분집합이다. Humanized antibody as used herein is a portion of the chimeric antibody set.

비-인간 (예를 들어, 설치류) 항체의 "인간화" 형태는 비-인간 면역글로불린으부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. Non-human (e.g., rodent) antibodies, "humanized" forms is a non-chimeric antibodies that contain minimal sequence derived from a human immunoglobulin coming. 대부분의 부분에 대해서, 인간화 항체는 수용자의 초가변 영역으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화도 및 능력이 있는 마우스, 래트, 토끼 또는 비-인간 영장류와 같은 비-인간 종으로부터의 초가변 영역 잔기 (공여자 항체)로 대체된 인간 면역글로불린 (수용자 또는 어셉터 항체)이다. For the most part, humanized antibodies specific residues from hypervariable region of the recipient desired, mouse, rat, rabbit or non with affinity and capacity-hypervariable region residues from a human species (non-like human primates are replaced by donor antibody) is a human immunoglobulin (recipient or acceptor antibody). 일부 경우에는, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 영역 (FR) 잔기가 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. In some cases, the ratio of the Fv framework region (FR) residues of the human immunoglobulin equivalent - is replaced with human residues. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체에서 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. Furthermore, humanized antibodies may comprise residues that are not found in the recipient antibody or in the donor antibody. 이러한 변형은 항체의 성능 예컨대 결합 친화도를 더욱 정련시키기 위해 이루어진다. These modifications are made to further refine the performance e.g. binding affinity of the antibody. 일반적으로, 인간화 항체는 1개 이상, 전형적으로는 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함하고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 면역글로불린의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은, 비록 FR 영역이 결합 친화도를 개선시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수는 있지만, 인간 면역글로불린 서열의 것이다. In general, the humanized antibody is at least one, and typically two substantially containing all the variable domain, in which all or substantially all of the hypervariable loops are non-equivalent to that of a human immunoglobulin and all or substantially all of the FR region, though it may include one or more amino acid substitutions that improve binding affinity to the FR region, but will be of a human immunoglobulin sequence. FR 내의 이러한 아미노산 치환의 수는 전형적으로 H 사슬 내에서 6개 이하, L 사슬 내에서 3개 이하이다. The number of these amino acid substitutions in the FR are typically less than 6 in the H chain, no more than three in the L chain. 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로는 인간 면역글로불린의 것을 임의적으로 또한 포함할 것이다. Humanized antibodies, at least some, and typically of an immunoglobulin constant region (Fc) will optionally also include that of a human immunoglobulin. 추가적인 상세사항은, 문헌 [Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)]; Additional details, the literature [Jones et al, Nature 321: 522-525 (1986).]; [Reichmann et al., Nature 332:323-329 (1988)]; [Reichmann et al, Nature 332:. 323-329 (1988)]; 및 [Presta, Curr. And [Presta, Curr. Op. Op. Struct. Struct. Biol. Biol. 2:593-596 (1992)]을 참조한다. 2: Refer to 593-596 (1992).

"항체 단편"은 무손상 항체의 일부분, 바람직하게는 무손상 항체의 항원 결합 또는 가변 영역을 포함한다. "Antibody fragment" is a portion of an intact antibody, preferably the antigen binding or variable region of the intact antibody. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab') 2 및 Fv 단편, 디아바디(diabody), 선형 항체 (미국 특허 5,641,870의 실시예 2; [Zapata, et al., Protein Eng., 8(10):1057-1062 (1995)] 참조), 단일쇄 항체 분자, 및 항체 단편들로부터 형성된 다중특이적 항체가 포함된다. Examples of antibody fragments include Fab, Fab ', F (ab ') 2 and Fv fragments, Dia body (diabody), linear antibodies (Example of U.S. Patent 5,641,870 2;.. [Zapata, et al, Protein Eng, 8 ( 10): see 1057-1062 (1995)), it includes a multi-specific antibody formed from a single-chain antibody molecules, and antibody fragments.

항체를 파파인(papain)으로 소화시키면 "Fab" 단편이라고 칭해지는 2개의 동일한 항원-결합 단편과, 나머지 "Fc" 단편이 생성되는데, Fc라는 명칭은 쉽게 결정화되는 능력을 반영한 것이다. Antibody to papain (papain) by digestion when "Fab" fragments become two identical antigen referred to as a-binding fragment thereof and, there is the rest of "Fc" fragment created, named & Fc reflects its ability to crystallize readily. Fab 단편은 한 중쇄의 제1 불변 도메인 (C H 1), 및 H 사슬의 가변 영역 도메인 (VH) + 전체적인 L 사슬로 구성된다. Fab fragments are composed of the first constant domain (C H 1), and the variable region domain (VH) + overall L chain of the H chain of the heavy chain. 각각의 Fab 단편은 항원 결합과 관련하여 1가이고, 즉 단일 항원-결합 부위를 갖는다. Each Fab fragment is monovalent with respect to antigen binding, i.e., a single antigen-binding site has a. 항체를 펩신으로 처리하면, 2가의 항원-결합 활성을 갖는 디술피드로 연결된 2개의 Fab 단편에 대략 상응하고, 여전히 항원과 가교될 수 있는 단일한 대형 F(ab') 2 단편이 산출된다. If the antibody treated with pepsin, a bivalent antigen-roughly equivalent, and still a single large F (ab ') 2 fragment which can be cross-linked with an antigen in two Fab fragments linked by disulfide having a binding activity is calculated. Fab' 단편은, 항체 힌지(hinge) 영역으로부터의 1개 이상의 시스테인을 포함하여 C H 1 도메인의 카르복시 말단에 추가적인 몇개의 잔기들이 있다는 점에서 Fab 단편과 다르다. Fab 'fragments, including one or more cysteines from the antibody hinge (hinge) region differs from Fab fragments in that they are a few additional residues at the carboxy terminus of the C H 1 domain. 본원에서 Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)이 유리 티올 기를 갖는 Fab'에 대한 명칭이다. Herein, Fab'-SH is the designation for Fab 'is a cysteine ​​residue (s) of the constant domains have a free thiol group. F(ab') 2 항체 단편은 힌지 시스테인이 사이에 있는 Fab' 단편들의 쌍으로서 본래 생산되었다. F (ab ') 2 antibody fragments are Fab, between the hinge cysteine, were produced as pairs of the original fragments. 항체 단편들의 다른 화학적 커플링 또한 공지되어 있다. Ring Other chemical coupling of antibody fragments are also known.

Fc 단편은 디술피드에 의해 함께 유지되는 양쪽 H 사슬의 카르복시-말단 부분을 포함한다. It comprises a terminal portion - Fc fragment is carboxy in both H chains held together by disulfides. 항체의 이펙터 기능은 Fc 영역 내의 서열에 의해 결정되고, 또한 이 영역은 특정 세포 유형 상에서 발견된 Fc 수용체 (FcR)에 의해 인식되는 부분이다. Effector function of an antibody is a portion that is determined by the sequence in the Fc region, and this region is recognized by Fc receptors (FcR) found on certain cell types.

"Fv"는 완전한 항원-인식 부위 및 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. "Fv" is the complete antigen is the minimum antibody fragment which contains a binding site-recognition site and the antigen. 이러한 단편은 1개의 중쇄 가변 영역 도메인과 1개의 경쇄 영역 가변 도메인이 단단하게 비공유결합적으로 회합되어 있는 이량체로 구성된다. This fragment consists of a dimer with one heavy chain variable region domain and one light chain variable domain area are securely associated with non-covalent associative. 이러한 두 도메인의 폴딩으로부터, 항원 결합을 위한 아미노산 잔기를 제공하고 항원 결합 특이성을 항체에 부여하는 6개의 초가변 루프 (H 및 L 사슬로부터 각각 3개의 루프)가 생성된다. From this, the folding of the two domains, the six hypervariable providing the amino acid residues for antigen binding and grant the antigen-binding specificity to the antibody loops (3 loops each from the H and L chain) is produced. 그러나, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)도, 비록 전체 결합 부위보다는 친화도가 낮지만, 항원을 인식하고 이에 결합하는 능력을 갖는다. However, (a half of an Fv comprising only three CDR specific for an antigen or a) single variable domains also, although a lower affinity than the entire binding site has the ability to recognize antigens and combining them.

"sFv" 또는 "scFv"로 또한 약칭되는 "단일쇄 Fv"는 단일 폴리펩티드 사슬로 연결된 V H 및 V L 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. "sFv" or also be abbreviated as "scFv" "Single-chain Fv" is an antibody fragment containing a V H and V L antibody domains connected into a single polypeptide chain. 바람직하게는, sFv 폴리펩티드는 sFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있게 하는 V H 와 V L 도메인 간의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. Preferably, the sFv polypeptide further comprises a polypeptide linker between the V H and V L domains that enables the sFv to form the desired structure for antigen binding. sFv의 개관을 위해서는, 문헌 [Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. For an overview of sFv, literature [Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]; 269-315 (1994); [Borrebaeck 1995, 하기 문헌]을 참조한다. See [Borrebaeck 1995, the literature].

본원에서 사용된 "LY6 결합 폴리펩티드"는 LY6 폴리펩티드, 리간드 또는 신호전달 성분에 각각 결합하는, 바람직하게는 특이적으로 결합하는 올리고펩티드, 또는 이의 LY6 결합 부분 또는 단편이다. As used herein "LY6 binding polypeptide" is an oligopeptide, or a LY6 binding portion or fragment coupled to LY6 polypeptide, ligand or is specific to, and preferably to combine each enemy in the signaling component. 이같은 올리고펩티드는 공지된 올리고펩티드 합성 방법을 사용하여 화학적으로 합성될 수 있거나, 또는 재조합 기술을 사용하여 제조 및 정제될 수 있다. Such oligopeptides are known oligonucleotides may be prepared using peptide synthesis and purification, or can be synthesized chemically, or by using recombinant techniques. 이같은 올리고펩티드는 길이가 일반적으로 아미노산 적어도 약 5개이고, 별법적으로는 길이가 아미노산 적어도 약 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개, 33개, 34개, 35개, 36개, 37개, 38개, 39개, 40개, 41개, 42개, 43개, 44개, 45개, 46개, 47개, 48개, 49개, 50개, 51개, 52개, 53개, 54개, 55개, 56개, 57개, 58개, 59개, 60개, 61개, 62개, 63개, 64개, 65개, 66개, 67개, 68개, 69개, 70개, 71개, 72개, 73개, 74개, 75개, 76개, 77개, 78개, 79개, 80개, 81개, 82개, 83개, 84개, 85개, 86개, 87개, 88개, 89개, 90개, 91개, 92개, 93개, 94개, 95개, 96개, 97개, 98개, 99개, 또는 100개 또는 그 이상이다. Such oligopeptides of length generally amino acids, at least about five pieces, legal from about 6 in length amino acid, at least, seven, eight, nine, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 dog, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81 , 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 a dog, 99, or 100 or more. 이같은 올리고펩티드는 주지된 기술을 사용하여 과도한 실험없이 확인할 수 있다. Such oligopeptides may be identified by using well known techniques without undue experimentation. 이와 관련하여, 폴리펩티드 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고펩티드에 대해 올리고펩티드 라이브러리를 스크리닝하는 기술은 당업계에 주지되어 있는 것으로 인지된다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,556,762, 5,750,373, 4,708,871, 4,833,092, 5,223,409, 5,403,484, 5,571,689, 5,663,143; PCT 공개 번호 WO 84/03506 및 WO84/03564; [Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:3998-4002 (1984)]; [Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:178-182 (1985)]; [Geysen et al., Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986)]; [Geysen et al., J. Immunol. Meth., 102:259-274 (1987)]; [Schoofs et al., J. Immunol., 140:611-616 (1988)], [Cwirla, SE et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6378 (1990)]; [Lowman, HB et al. Biochemistry. 30:10832 (1991)]; [Clackson, T. et al. Nature. 352:624 (1991)]; [Marks, JD et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]; [Kang, AS et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88:8363 (1991)], 및 [Smith, GP, C In this regard, oligonucleotide for peptide oligonucleotide capable of specific binding to a polypeptide target is recognized as is well known in the art techniques for screening a peptide library (e.g., U.S. Patent Nos. 5,556,762, 5,750,373, 4,708,871, 4,833,092 , 5,223,409, 5,403,484, 5,571,689, 5,663,143; PCT Publication Nos. WO 84/03506 and WO84 / 03564; [Geysen et al, Proc Natl Acad Sci USA, 81:..... 3998-4002 (1984)]; [Geysen et al, Proc Natl Acad Sci USA, 82:....... 178-182 (1985)]; [Geysen et al, Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986)]; [Geysen et al, J. Immunol Meth, 102:.. 259-274 (1987)]; [Schoofs et al, J. Immunol, 140:...... 611-616 (1988)], [Cwirla, SE et al Proc Natl Acad Sci . USA, 87: 6378 (1990)]; [Lowman, HB et al Biochemistry 30:.. 10832 (1991)]; [Clackson, T. et al Nature 352:.. 624 (1991)]; [Marks, JD ... et al, J. Mol Biol, 222: 581 (1991)]; [Kang, AS et al Proc Natl Acad Sci USA 88:...... 8363 (1991)], and [Smith, GP, C urrent Opin. Biotechnol., 2:668 (1991)] 참조). . Urrent Opin Biotechnol, 2:. 668 (1991)], see).

당해 표적 항원, 예를 들어 LY6에 "결합하는" LY6 길항제 (예를 들어, 항체, 폴리펩티드, 올리고펩티드 또는 소분자)는 항원을 발현하는 세포 또는 조직을 표적화하는데 있어서 유용한 진단, 예후 및/또는 치료 작용제이도록 충분한 친화도로 표적에 결합하고, 다른 단백질과는 유의하게 교차-반응하지 않는 것이다. Art target antigen, for example LY6 antagonist "combining" the LY6 (e.g., antibody, polypeptide, oligopeptide or small molecule) is useful according to targeting a cell or tissue expressing the antigen diagnostic, prognostic and / or therapeutic agent so that a sufficient affinity binding to the target, and the other proteins are significantly cross-react will not. 원치 않는 마커 폴리펩티드에 결합하는 정도는, 형광 활성화 세포 분류 (FACS) 분석 또는 방사성면역침전 (RIA)과 같은 일반적인 기술에 의해 결정 시, 특정한 원하는 표적에 결합하는 것의 약 10% 미만일 것이다. Extent that bind to unwanted marker polypeptides, fluorescence activated cell sorting (FACS) is less than about 10% of that which binds to a specific desired target, as determined by a general analysis technique such as sedimentation or radioimmunoassay (RIA).

또한, 특정 LY6 폴리펩티드 또는 특정 LY6 폴리펩티드 표적 상의 에피토프에 대한 "특이적 결합" 또는 이에 "특이적으로 결합한다" 또는 이에 대해 "특이적이다"라는 용어는 비-특이적 상호작용과 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. Furthermore, the particular LY6 polypeptide or for an epitope on a particular LY6 polypeptide target "specific binding" or in "specifically bind" or on the other hand the term "a-specific" is a non-specific interaction with measurement possibly different It refers to a bond. 특이적 결합은, 예를 들어, 분자의 결합을 결합 활성이 없는 유사한 구조의 분자인 대조군 분자의 결합과 비교하여 결정함으로써 측정될 수 있다. Specific binding, for example, be measured by determining as compared to binding of a control molecule of similar structure to the molecule does not have binding activity of the binding molecules. 예를 들어, 표적과 유사한 대조군 분자, 예를 들어, 과량의 표지되지 않은 표적과의 경쟁에 의해 특이적 결합이 결정될 수 있다. For example, similar to the target control molecule, for example, the specific binding can be determined by competition with excess unlabeled target. 이러한 경우에, 프로브에 대한 표지된 표적의 결합이 과량의 표지되지 않은 표적에 의해 경쟁적으로 억제된다면 특이적 결합이 지시된다. In such a case, if the binding of the labeled target to a probe is competitively inhibited by excess unlabeled target this specific binding is indicated. 한 실시양태에서, 이같은 용어는 분자가 어떠한 다른 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프에도 실질적으로 결합하지 않으면서 특정 폴리펩티드 또는 특정 폴리펩티드 상의 에피토프에 결합하는 경우의 결합을 지칭한다. In one embodiment, these terms refer to the binding of the book when binding to a particular polypeptide or epitope on a particular polypeptide do not substantially binding to any other polypeptide or polypeptide epitope is any molecule. 별법적으로, 이같은 용어는 표적에 대한 Kd가 적어도 약 10 -4 M, 10 -5 M, 10 -6 M, 10 -7 M, 약 10 -8 M, 10 -9 M, 10 -10 M, 10 -11 M, 10 -12 M, 또는 그 이상인 분자에 의해 기술될 수 있다. Legally it stars, such term is at least about 10 Kd for the target -4 M, 10 -5 M, 10 -6 M, 10 -7 M, about 10 -8 M, 10 -9 M, 10 -10 M, 10 -11 M, can be described by the 10 -12 M, or greater molecules.

동일한 조직 유형의 정상적인 위장 세포 또는 조직과 비교하여, 세포 또는 조직에서 세포 내의 LY6 코딩 핵산이 증가된 것으로 나타나는 경우 또는 세포 또는 조직이 LY6 단백질을 과다하게 생산하여 분비하는 경우 위장 세포 또는 조직은 LY6을 "과발현"한다. As compared to a normal gastrointestinal cell or tissue of the same tissue type, in the case if it appears to be a LY6-encoding nucleic acid in the cells increased in the cell or tissue is, or cells or tissues which secrete the over-produced the LY6 proteins gastrointestinal cell or tissue is a LY6 The "over-expression". 이같은 과발현은 유전자 증폭으로부터 또는 증가된 전사 또는 번역에 의해 초래될될 수 있다. Such overexpression may be caused by increased transcription or translation or from the gene amplification. 세포 표면에서의 수준 증가 또는 감소 또는 분비형 단백질의 수준 증가 또는 감소를 초래하는 변경된 발현 수준을 측정하는 다양한 진단 또는 예후 분석법이 공지되어 있고, 비제한적으로 항-LY6 항체를 사용하는 면역조직화학 분석법, FACS 분석 등을 포함한다. Immunohistochemical assays and a variety of diagnostic or prognostic assays that measure altered expression levels resulting in increased or decreased levels of secreted level or increase or decrease in the protein at the cell surface is known, using an anti-antibody, but not limited to -LY6 , it includes FACS analysis. 별법적으로, 예를 들어, LY6-코딩 핵산 또는 이의 상보체에 상응하는 핵산-기재 프로브를 사용하는 형광 제자리 혼성화 (FISH; WO98/45479 (1998년 10월 공개) 참조), 서던(Southern) 블롯팅(blotting), 노던(Northern) 블롯팅, 또는 중합효소 연쇄 반응 (PCR) 기술, 예컨대 정량 실시간 PCR (RT-PCR)을 통해, LY6 코딩 핵산 또는 mRNA의 수준을 세포 내에서 측정할 수 있다, 별법적으로, 항체-기재 분석법을 예를 들어 사용하여, 혈청과 같은 생체액 내의 박리된(shed) 항원을 측정함으로써 LY6 폴리펩티드 과발현이 결정된다 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,933,294 (1990년 6월 12일 허여); WO91/05264 (1991년 4월 18일 공개); 미국 특허 5,401,638 (1995년 3월 28일 허여); 및 [Sias et al., J. Immunol. Methods 132:73-80 (1990)]를 또한 참조). Legally by, for example, LY6- encoding nucleic acid or the corresponding nucleic acid to its complement-situ fluorescence hybridization using the probes described (FISH; see WO98 / 45479 (10 1998 publication)), Southern (Southern) block rotting (blotting), Northern (Northern) block rotting, or polymerase chain reaction (PCR) technology can, for example, through the quantitative real-time PCR (RT-PCR), measuring the levels of LY6 encoding nucleic acid or mRNA in the cell, legally specific, antibody-using the described method, for example, by measuring the bio-exfoliated (shed) an antigen in a liquid, such as serum LY6 polypeptide overexpression is determined (e. g., U.S. Patent No. 4,933,294 (June 1990 issued 12 days); WO91 / 05264 (4 1991 on April 18, is a public); United States Patent 5,401,638 (issued March 28, 1995); and [Sias et al, J. Immunol Methods 132:.. 73-80 (1990 ); see also). 상기 분석법에 더하여, 다양한 생체내 분석법이 당업자에게 이용가능하다. In addition to the above assays, various in vivo assays are available to those skilled in the art. 예를 들어, 환자의 신체 내의 세포를 검출가능한 표지, 예를 들어, 방사성 동위원소로 임의적으로 표지된 항체에 노출시킬 수 있고, 예를 들어, 방사성에 대한 외부 스캐닝에 의해 또는 치료제에 이전에 노출된 환자로부터 취해진 생검물을 분석함으로써, 환자 내의 세포에 대한 항체의 결합을 평가할 수 있다. For example, a detectable cell within a patient's body cover, for instance, may be exposed to the optionally labeled antibody with a radioactive isotope, for example, exposed to prior to treatment or by external scanning for radioactive by analyzing a biopsy taken from a patient with water, it can be evaluated in the binding of the antibody to cells in the patient.

본원에서 사용된 용어 "면역어드헤신"은 이종성 단백질 ("어드헤신")의 결합 특이성이 면역글로불린 불변 도메인의 이펙터 기능과 조합된 항체-유사 분자를 의미한다. As used herein, the term "immune adjuster hesin" is a heterologous protein ( "hesin adjuster") a binding specificity are combined with the effector functions of immunoglobulin constant domains of an antibody-like molecules means. 구조적으로, 면역어드헤신은 항체의 항원 인식 및 결합 부위가 아닌 (즉, "이종성"인) 원하는 결합 특이성이 있는 아미노산 서열과 면역글로불린 불변 도메인 서열의 융합물을 포함한다. Structurally, the immune adjuster H. GOD include the antibody-antigen recognition and binding site than the (i.e., "heterologous" a) the amino acid sequence with the desired binding specificity and an immunoglobulin constant domain sequence fusion of water. 전형적으로 면역어드헤신 분자의 어드헤신 부분은 수용체 또는 리간드의 결합 부위를 적어도 포함하는 인접 아미노산 서열이다. Typically the adjuster part of the immune hesin adjuster hesin molecule is adjacent to the amino acid sequence comprising at least the binding site of a receptor or a ligand. 면역어드헤신 내의 면역글로불린 불변 도메인 서열은 임의의 면역글로불린, 예컨대 IgG-1, IgG-2, IgG-3, 또는 IgG-4 서브타입, IgA (IgA-1 및 IgA-2 포함), IgE, IgD, 또는 IgM으로부터 수득될 수 있다. Immune adjuster immunoglobulin constant domain sequence is any immunoglobulin, such as IgG-1, IgG-2, IgG-3, or IgG-4 subtypes, IgA (including IgA-1 and IgA-2) in the hesin, IgE, IgD from, or IgM, it can be obtained.

본원에서 사용된 용어 "표지"는 "표지된" 항체, 올리고펩티드 또는 기타 유기 분자가 생성되도록 항체, 올리고펩티드 또는 기타 유기 분자에 직접적으로 또는 간접적으로 접합된 검출가능한 화합물 또는 조성물을 지칭한다. The term "cover" used herein refers to a "labeled" antibody, oligopeptide or other organic molecule is capable of generating such antibodies, oligonucleotide directly or indirectly conjugated to a peptide or other organic molecule detecting compounds or compositions. 표지는 자체가 검출가능할 수 있거나 (예를 들어, 방사성 동위원소 표지 또는 형광 표지), 또는 효소 표지의 경우에는 검출가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변형을 촉매할 수 있다. The label or may be itself a detected case of (e. G., Radiolabeled or fluorescence-labeled), or enzymatic label, it can be catalyze chemical alteration of a substrate compound or composition that is detectable.

본원에서 사용된 용어 "세포독성제"는 세포의 기능을 억제 또는 방지하고/하거나 세포의 파괴를 야기하는 물질을 지칭한다. As used herein, the term "cytotoxic agent" refers to a substance that inhibits or prevents the function of cells and / or causes destruction of cells. 이 용어는 방사성 동위원소 (예를 들어 At 211 , I 131 , I 125 , Y 90 , Re 186 , Re 188 , Sm 153 , Bi 212 , P 32 및 Lu의 방사성 동위원소), 화학요법제, 효소 및 이의 단편 예컨대 뉴클레오용해성(nucleolytic) 효소, 항생제, 및 박테리아, 진균류, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소 (이의 단편 및/또는 변이체 포함) 또는 소형-분자 독소와 같은 독소, 및 하기에 개시되는 다양한 항종양 또는 항암 작용제를 포함하도록 의도된다. The term, radioactive isotopes (e.g. At 211, I 131, I 125 , Y 90, Re 186, Re 188, Sm 153, Bi 212, P radioisotope of 32, and Lu), chemotherapeutic agents, enzymes a fragment thereof, for example nucleoside solubility (nucleolytic), enzymes, antibiotics, and bacteria, fungi, plants or enzymatically active animal origin toxin (including fragments thereof and / or mutants) or small-toxin, such as a molecule toxins, and to It is intended to include the various antitumor or anticancer agents disclosed. 기타 세포독성제가 하기에 기술된다. Other cytotoxic agent are described below. 종양치사제(tumoricidal agent)는 종양 세포의 파괴를 야기한다. The (tumoricidal agent) lethal tumor will lead to the destruction of tumor cells.

"화학요법제" 또는 "치료제"는 장애 또는 질환의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. "Chemotherapeutic agent" or "therapeutic agent" is a chemical compound useful in the treatment of disorders or diseases. IBD의 치료를 위한 화학요법제 또는 치료제의 예로는 항-염증성 약물인 술파살라진 및 5-아미노살리실산 (5-ASA)이 비제한적으로 포함된다; Examples of chemotherapeutic agents or therapeutic agents for the treatment of IBD are anti-inflammatory drug, sulfamic burn particulates and 5-amino salicylic acid (5-ASA) are included, but not limited to; 메트로이다졸 및 시프로플록사신은 술파살라진과 효능이 유사하고, 항문주위 질환을 치료하는데 특히 유용한 것으로 보인다; Metro a sol, and ciprofloxacin seems to be particularly useful in the treatment of around sulfamic Ala Gin efficacy similar to, and anal disease; 더욱 중증인 경우에, 코르티코스테로이드가 활성 악화를 치료하는데 효과적이며, 심지어 완화를 유지시킬 수 있다; In case of more severe, it is effective in the treatment of corticosteroid activity deterioration, it even possible to maintain the relief; 아자티오프린, 6-메르캅토퓨린 및 메토트렉세이트가 코르티코스테로이드의 만성 투여를 필요로 하는 환자에서 성공적인 것으로 또한 나타났다; Azathioprine, 6-mercapto-purine and that methotrexate is successful in patients who require chronic administration of corticosteroids also appeared; 지사제 약물이 일부 환자에서 증상 경감을 또한 제공할 수 있다; The jisaje drugs can also provide symptomatic relief in some patients; 영양 요법 또는 기본식이 환자의 영양 상태를 개선하고 급성 질환의 증상 개선을 유도할 수 있다; Improve the nutritional status of the patient's diet and nutritional therapy or default may lead to improved symptoms of acute diseases; 항생제가 2차 소장 박테리아 과잉성장의 치료 및 화농성 합병증의 치료에 사용된다. Antibiotics are used to treat secondary treatment and septic complications of small bowel bacterial excessive growth. IBD 화학요법제에는 하기와 같은 생물학적 작용제 및 기타 작용제가 추가로 포함된다: 항-베타7 항체 (예를 들어, WO2006026759 참조), 항-알파4 항체 (예컨대 ANTEGEN®), 항-TNF 항체 (REMICADE®), 또는 5-ASA 화합물 ASACOL®, PENTASA™, ROWASA™, COLAZAL™이 비제한적으로 포함되는 비-단백질 화합물, 및 기타 화합물 예컨대 퓨리네톨(Purinethol) 및 스테로이드 예컨대 프레드니손. Biological agent, and other action, such as to include IBD chemotherapeutic agents further include agents are: anti-beta-7 antibody (see, for example, WO2006026759), anti-alpha-4 antibodies (e.g. ANTEGEN®), wherein -TNF antibody (REMICADE protein compound, and other compounds such as Fourier netol (Purinethol) and the steroid prednisone for example - ®), or 5-ASA compounds ASACOL®, PENTASA ™, ROWASA ™, COLAZAL ™ is a non-included, but not limited to. 암의 치료를 위한 화학요법제의 예로는 히드록시우레아탁산 (예컨대 파클리탁셀 및 도세탁셀) 및/또는 안트라사이클린 항생제; Examples of chemotherapeutic agents for the treatment of cancer is hydroxyurea taxane (e.g. paclitaxel and docetaxel) and / or anthracycline antibiotics; 알킬화제 예컨대 티오테파 및 CYTOXAN® 시클로스포스파미드; Alkylating agents, for example thiotepa and CYTOXAN® cycloalkyl sports SPA imide; 알킬 술포네이트 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; Alkyl sulfonates e.g. part Rouse, being encapsulated pro Rouse and Rouse; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카르보퀴온, 메투레도파, 및 우레도파; Aziridines such as benzoin waveguide, carbonate kwion, methoxy rail waveguide, and the waveguide urea; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드 및 트리메틸롤로멜라민이 포함되는, 에틸렌이민 및 메틸렌라멜라민; Al Tre vitamin, triethylene melamine, triethylene phosphonic Fora imide, thio triethylene phosphonic Fora and mid-trimethyl-pyrrolo melamine is included, ethyleneimine and methylene la melamine; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); Genin acetonitrile (especially rider ing ing and non-shi); 델타-9-테트라히드로카나비놀 (드로나비놀, MARINOL®); Delta-9-tetrahydro Carnaby play (play draw butterfly, MARINOL®); 베타-라파콘; Beta-Con La Paz; 라파콜; Rapa call; 콜히친; Colchicine; 베툴린산; Betulinic acid; 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 (HYCAMTIN®), CPT-11 (이리노테칸, CAMPTOSAR®), 아세틸캄토테신, 스코폴렉틴, 및 9-아미노캄토테신 포함); Camptothecin (including the synthetic analogue topotecan (HYCAMTIN®), CPT-11 (irinotecan, CAMPTOSAR®), acetyl camptothecin, Scoring pole lectin, and 9-amino-camptothecin); 브리오스타틴; Brioche statins; 칼리스타틴; Carly statins; CC-1065 (이의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); CC-1065 (including its gel Lessines Addo, carboxylic gel Lessines and bijel Lessines synthetic analogs); 포도필로톡신; Podophyllotoxin; 포도필린산; Grape peel acid; 테니포사이드; I'll Forsythe; 크립토파이신 (특히 크립토파이신 1 및 크립토파이신 8); Cryptophycin (particularly cryptophycin 1 and cryptophycin 8); 돌라스타틴; Dolastatin; 듀오카르마이신 (합성 유사체인 KW-2189 및 CB1-TM1 포함); Duo Karma, who (with synthetic analog, KW-2189 and CB1-TM1); 엘레우테로빈; Eleanor woote Robin; 판크라티스타틴; Chrysler board Tea statins; 사르코딕타인; Sarcoidosis Dick others; 스폰지스타틴; Sponge statins; 질소 머스타드 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; Nitrogen mustard e.g. chlorambucil, chlorpheniramine or pajin, chloro phosphamid, estramustine, epoch spa imide, methyl chloride Alpharetta min, methyl chloride Alpharetta Min oxide hydrochloride, melphalan, nobem non-, phenethyl Ste Lin, Fred nimu Steen, troponin spa imide, uracil mustard; 니트로스우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라니무스틴; Knitted Los urea for example carboxylic estramustine, chloro crude cytosine, bubble temu sustaining, Romuald sustaining, nimu sustaining, and Raney estramustine; 항생제 예컨대 엔다이인 항생제 (예를 들어, 칼리키아마이신, 특히 칼리키아마이신 감마1I 및 칼리키아마이신 오메가I1 (예를 들어, [Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33:183-186 (1994)] 참조); 다이네마이신 A가 포함되는 다이네마이신; 에스페라마이신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련된 색단백질 엔다이인 항생제 발색단); Antibiotics, for example, yen die antibiotics (e.g., calicheamicin, especially calicheamicin gamma 1I and calicheamicin omega I1 (for example, [Agnew, Chem Intl Ed Engl, 33:... 183-186 (1994 ) reference); the stuffing is contained the erythromycin a stuffing azithromycin; S. Ferraro azithromycin; as well as neo-carboxylic Gino statin chromophore and related color protein yen die of antibiotic chromophores); 아클라시노마이신, 악티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라바이신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 덱토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, ADRIAMYCIN® 독소루비신 (모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 예컨대 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 켈라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; Oh Cloud Sino mitomycin, dactinomycin, O trad azithromycin, aza-serine, bleomycin, Rapid actinomycin, Calabar who, carboxylic unexposed azithromycin, carboxylic Gino pilrin, chromotherapy My City Nice, Doc actinomycin, daunorubicin, deck mound bisin, 6-diazo-5-oxo -L- norleucine, ADRIAMYCIN® doxorubicin (morpholino-doxorubicin, cyano, morpholino-doxorubicin, 2-pyrrolidin-no-containing doxorubicin and deoxy doxorubicin), epi ruby Instead, the sole bisin, idarubicin, Marcelo mitomycin, mitomycin, for example mitomycin C, mycophenolic acid, no split azithromycin, Olivo azithromycin, page flows azithromycin, port fatigue azithromycin, furo azithromycin, Kell Lama who, also ruby ​​sour Streptococcus your green, streptomycin courtiers, investment Aberdeen Bercy, right-Mex Benny, Gino statins, premature ejaculation bisin; 항-대사물질 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); Anti-metabolites such as methotrexate into uracil and 5-fluorouracil (5-FU); 엽산 유사체 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; Folic acid analogues, for example to aminopterin, methotrexate, peute rope aminopterin, trimetrexate track glyphosate; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; Purine analogs example fludarabine, 6-mercapto-purine, T amido printer, thioguanine; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 사이타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스우리딘; Pyrimidine analogs, for example ANSI turbine, azacytidine, 6-aza uridine, Carmo greener, among other Lavigne, dideoxy uridine, doksi flat Metalurgs Dean, Hainaut during turbine, phlox uridine; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; Androgens, e.g., calusterone, de our star nolron propionate, epithio stanol, mepi thio Stan, testosterone lactone; 항-부신제 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; Anti-adrenals claim e.g. amino glue teti imide, carbon Mito, teurilro Stan; 엽산 보충물 예컨대 프롤린산; Folic acid supplementation for example proline acid; 아세글라톤; Glaciers acetic tone; 알도포스파미드 글리코시드; Al coated SPA mid-glycoside; 아미노레불린산; Aminolevulinic acid; 에닐우라실; Enyl uracil; 암사크린; Amsacrine; 베스트라부실; Best La insolvent; 비산트렌; Bisantrene; 에다트렉세이트; Eda Trek St; 데포파민; Defoe pamin; 데메콜신; Demecolcine; 디아지퀴온; Dia kwion not; 엘포르니틴; El Fort nitin; 엘리프티늄 아세테이트; Eli Petit titanium acetate; 에포틸론; Epothilone; 에토글루시드; Eto'o Lucid articles; 질산갈륨; Gallium nitrate; 히드록시우레아; Hydroxyurea; 렌티난; Lentinan; 로니다이닌; Ronnie is coix seed; 메이탄시노이드 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; Maytansinoids such as Mei tansin Ansari and Mito God; 미토구아존; Mito guar zone; 미톡산트론; Mitoxantrone; 모피단몰; Fur danmol; 니트라에린; Nitra, Erin; 펜토스타틴; Pento statins; 페나메트; Pena mat; 피라루비신; Fira Ruby God; 로속산트론; A soksan anthrone; 2-에틸히드라지드; 2-ethyl-hydrazide; 프로카르바진; Procarbazine; PSK® 다당류 복합체 (JHS Natural Products (Eugene, OR)); PSK® polysaccharide complex (JHS Natural Products (Eugene, OR)); 라족산; Razoxane; 리족신; Li Shin; 시조피란; Progenitor pyran; 스피로게르마늄; Spiro germanium; 테누아존산; Te noir jonsan; 트리아지퀴온; Triage kwion; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안귀딘); 우레탄; 빈데신 (ELDISINE®, FILDESIN®); 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미톨락톨; 피포브로만; 가사이토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 티오테파; 탁소이드, 예를 들어, TAXOL® 파클리탁셀 (Bristol-Myers Squibb Oncology (Princeton, NJ)), ABRAXANE™ 크레모포르-프리(Cremophor-free), 파클리탁셀의 알부민-조작 나노입자 제형 (American Pharmaceutical Partners (Schaumberg, Illinois)), 및 TAXOTERE® 독세탁셀 (Rhone-Poulenc Rorer (Antony, France)); 클로란부실; 젬시타빈 (GEMZAR®); 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴 (VELBAN®); 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴 (ONVOVIN®); 옥살리플라틴; 류코보빈; 비노렐빈 (N 2,2 ', 2 "- trichloro roteuri ethylamine; tricot tesen (especially T-2 toxin, Vera kurin A, Lori A Dean and Dean angwi); urethane; binde new (ELDISINE®, FILDESIN®); dacarbazine; only labor sustaining; Mito bromo nitol; mitol raktol; only encapsulated bromo; lyrics Ito Shin; arabinoside ( "Ara-C"); thiotepa; takso Id, e.g., TAXOL® paclitaxel (Bristol-Myers Squibb Oncology (Princeton , NJ)), ABRAXANE ™ Crescent parent formate-free (Cremophor-free), albumin-paclitaxel-operation nanoparticle formulation (American Pharmaceutical Partners (Schaumberg, Illinois)), and TAXOTERE® dock washing cell (Rhone-Poulenc Rorer (Antony , France)); claw is stale; gemcitabine (GEMZAR®); 6- thioguanine; mercapto-purine; methotrexate; platinum analogs such as cisplatin and carboplatin; vinblastine (VELBAN®); platinum; etoposide ( VP-16); epoch spa imide; mitoxantrone; vincristine (ONVOVIN®); oxaliplatin; leuco bobbin; vinorelbine (N AVELBINE®); 노반트론; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드 예컨대 레티노산; 카페시타빈 (XELODA®); 임의의 상기 물질들의 제약상 허용가능한 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 2가지 이상의 상기 물질들의 배합물, 예컨대 시클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니솔론의 조합 요법에 대한 약자인 CHOP, 및 5-FU 및 류코보빈과 배합된 옥살리플라틴 (ELOXATIN™)으로의 치료 요법에 대한 약자인 FOLFOX가 포함된다. Daunomycin;; Trek St. eda; AVELBINE®); roadbed Tron aminopterin; ibandronate; topoisomerase inhibitor RFS 2000; difluoromethyl ornithine (DMFO); retinoids, for example retinoic acid; capecitabine ( XELODA®); any pharmaceutically acceptable salts of said substances, acids or derivatives thereof; a stands for, as well as combinations of two or more of the materials, such as cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine and prednisolone in combination therapy with CHOP, and 5-FU and is included in FOLFOX stands for the therapy of oxaliplatin in a (ELOXATIN ™) combined with the leuco bobbin.

용어 "사이토카인"은 또다른 세포 상에서 세포간 매개자로서 작용하는 하나의 세포 집단에 의해 방출되는 단백질에 대한 일반명이다. The term "cytokine" is a generic name for proteins released by one cell population that act as mediators between cells on yet another cell. 이같은 사이토카인의 예로는 림포카인, 모노카인 및 전통적인 폴리펩티드 호르몬이 포함된다. Examples of such cytokines include lymphokines, cytokines mono and traditional polypeptide hormones. 사이토카인에는 성장 호르몬, 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬 및 소 성장 호르몬; Cytokines include growth hormone such as human growth hormone, N- methionyl human growth hormone, and bovine growth hormone; 부갑상선 호르몬; Parathyroid hormone; 티록신; Thyroxine; 인슐린; insulin; 프로인슐린; Proinsulin; 릴랙신; Lil raeksin; 프로릴랙신; Pro reel raeksin; 당단백질 호르몬, 예컨대 여포 자극 호르몬 (FSH), 갑상선 자극 호르몬 (TSH) 및 황체형성 호르몬 (LH); Glycoprotein hormones such as follicle stimulating hormone (FSH), thyroid stimulating hormone (TSH), and luteinizing hormone (LH); 간 성장 인자; Hepatic growth factor; 섬유모세포 성장 인자; Fibroblast growth factor; 프로락틴; Prolactin; 태반성 락토겐; Placental lactogen; 종양 괴사 인자-α 및 종양 괴사 인자-β; TNF -α and -β tumor necrosis factor; 뮬러(mullerian)-억제 물질; Muller (mullerian) - inhibitors; 마우스 성선자극호르몬-관련 펩티드; Mouse gonadotropin-associated peptide; 인히빈; Inhibin; 액티빈; Activin solution; 혈관 내피 성장 인자; Vascular endothelial growth factor; 인테그린; Integrin; 트롬보포이에틴 (TPO); Thrombopoietin (TPO); 신경 성장 인자 예컨대 NGF-β; Nerve growth factor, for example NGF-β; 혈소판-성장 인자; Platelet-growth factor; 전환 성장 인자 (TGF) 예컨대 TGF-α 및 TGF-β; Transforming growth factor (TGF), for example TGF-α and TGF-β; 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II; Insulin-like growth factor -I and -II; 에리트로포이에틴 (EPO); Erythropoietin (EPO); 골유도성 인자; Golyu conductivity factor; 인터페론 예컨대 인터페론-α, -β, 및 -γ; Interferons such as interferon -α, -β, and -γ; 및 콜로니 자극 인자 (CSF) 예컨대 대식세포-CSF (M-CSF); And colony-stimulating factor (CSF), for example macrophage -CSF (M-CSF); 과립구-대식세포-CSF (GM-CSF); Granulocyte-macrophage -CSF (GM-CSF); 및 과립구-CSF (G-CSF); And granulocyte -CSF (G-CSF); 인터루킨 (IL) 예컨대 IL-1, IL-a, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12; Interleukins (IL), for example IL-1, IL-a, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL -12; 종양 괴사 인자 예컨대 TNF-α 또는 TNF-β; TNF, for example TNF-α or TNF-β; 및 및 LIF 및 키트 리간드 (KL)가 포함되는 기타 폴리펩티드 인자가 포함된다. And and it includes other polypeptide factors including LIF and kit ligand is (KL). 본원에 사용된 용어 사이토카인은 천연 공급원으로부터의 단백질 또는 재조합 세포 배양액으로부터의 단백질, 및 천연 서열 사이토카인의 생물학적으로 활성인 등가물을 포함한다. The term cytokine as used herein includes biologically active equivalents of the protein, and the native sequence cytokines from a protein or a recombinant cell culture from natural sources.

용어 "포장 삽입물"은 치료용 제품의 상업적 포장에 관례적으로 포함되는 지침서를 지칭하도록 사용되고, 이러한 지침서는 이같은 치료용 제품의 사용에 관련된 적응증, 용법, 투여량, 투여, 금기 및/또는 경고에 관한 정보를 함유한다. The term "package insert" is used to refer to the instructions contained in the convention on the commercial packaging of therapeutic products, these guidelines are the indications, usage, dosage, administration, contraindications and / or warnings concerning the use of products such treatment contain related information.

"상피들", "상피의" 및 "상피"는 샘 및 이로부터 유래된 기타 구조물을 포함하는 내부 및 외부 신체 표면 (피부성, 점액성 및 장액성)의 세포성 덮개, 예를 들어, 각막 상피 세포, 식도 상피 세포, 표피 상피 세포, 및 모낭 상피 세포를 지칭한다. "Epithelial s", and "epithelium", "epithelial" Sam and internal and external body surfaces including the other structures derived therefrom (cutaneous, mucous and serous) cellular covering of, e.g., the cornea It refers to epithelial cells, esophageal epithelial cells, skin epithelial cells, and hair follicle epithelial cells. 상피 조직의 또다른 예로는 후각 상피 (비강의 후각 영역의 내면을 이루고 후각에 대한 수용체를 함유하는 거짓중층상피); Another example of the epithelial tissue is not (false-layer epithelial forms the inner surface of the olfactory region of the nasal cavity containing a receptor for the sense of smell), olfactory epithelium; 샘 상피 (분비형 세포로 구성된 상피); Sam epithelium (epithelial cells consisting of secreted-form); 편평 상피 (하나 이상의 세포층을 포함하고, 가장 외부의 층은 비늘모양 또는 판모양의 평평한 세포로 구성된 상피)가 포함된다. Squamous are included (including one or more cell layers, and the outermost layer is composed of epithelial scaly or plate-shaped flat cells). 상피는 수축 및 팽창으로 인한 커다란 기계적 변화가 적용되는 중공 기관, 예를 들어, 중층 편평 상피와 원주 상피 간의 이행을 나타내는 조직의 내면을 이루면서 특징적으로 발견되는 것과 같은 이행 상피를 또한 지칭할 수 있다. Epithelium can also refer to a transition epithelium such as that characteristically found yirumyeonseo the inner surface of the tissue that represents the transition between the major mechanical changes in the hollow organ, are applied, for example, stratified squamous epithelium and the columnar epithelium resulting from contraction and expansion.

세포의 "성장 상태"는 세포의 증식 속도 및/또는 세포의 분화 상태를 지칭한다. "Growth state" of a cell refers to a differentiation state of the proliferation rate of cells and / or cells. "변경된 성장 상태"는 비정상적인 속도의 증식을 특징으로 하는 세포 상태, 예를 들어, 정상 세포에 비해 증가된 또는 감소된 속도의 증식을 나타내는 세포이다. "Altered growth state" is a cell that represents the cell state, e.g., proliferation of the increase or decrease in speed as compared to normal cells, characterized by the proliferation of abnormal speed.

용어 "LY6" 또는 "LY6 폴리펩티드"는 포유류 LY6 유전자 패밀리의 포유류 상동체 중 임의의 것을 유전학적으로 지칭하도록 본원에서 사용된다. The term "LY6" or "LY6 polypeptide" is used herein to refer to any of the mammalian homologs of the mammalian LY6 gene family genetically. 용어 "LY6"은 단백질 또는 핵산을 기술하도록 사용될 수 있다. The term "LY6" can be used to describe a protein or nucleic acid.

본원에서 사용된 용어 "과발현"은 조직에 대한 정상적인 발현 수준보다 높은 조직의 세포 유전자 발현 수준을 지칭한다. The term "over-expressing" as used herein refers to cellular gene expression levels of a high tissue than the normal expression levels for the organization. 본원에서 사용된 용어 "저발현"은 조직에 대한 정상적인 발현 수준보다 낮은 조직의 세포 유전자 발현 수준을 지칭한다. As used herein, the term "low expression" refers to cellular gene expression levels of a low tissue than the normal expression levels for the organization. 어느 경우든, 더 높은 발현 또는 더 낮은 발현은 제어된 연구 조건 하에서 정상적인 발현과 상당히 상이하다. In any case, higher expression or lower expression is significantly different from normal expression under controlled experimental conditions.

"대조군"은 IBD를 앓고 있지 않은 포유동물에서의 정상적인 발현 또는 활성 또는 기준선을 결정하는데 사용하기 위한 샘플을 포함한다. "Control" includes a sample for use in determining the normal expression or activity in a mammal or a reference line that is not suffering from IBD. 따라서, 대조군 샘플은 염증 및/또는 IBD, UC 또는 CD에 걸리지 않은 조직 또는 세포로부터 (표준 기술에 의해 결정됨); Accordingly, the control sample (determined by standard techniques) from a tissue or cell that is caught in inflammation and / or IBD, UC or CD; 예를 들어, IBD를 앓고 있지 않은 대상의 세포로부터의, 비-IBD 세포 또는 조직으로부터; For example, from the rain -IBD cells or tissue from the target cell that is not suffering from IBD; IBD, 크론병, 또는 궤양성 대장염 장애가 없는 대상으로부터; From IBD, Crohn's disease, ulcerative colitis, or not subject disabilities; IBD, CD 또는 UC가 걸릴 위험이 있는 것으로 추측되지 않는 대상으로부터; From the target it does not assume that there is a risk of IBD, CD or UC; 또는 이같은 대상으로부터 유래된 세포 또는 세포주로부터를 포함하는 다수의 수단에 의해 수득될 수 있다. Or it may be obtained by a number of means including from the cell or cell line derived from such a subject. 대조군은 이전에 확립된 표준물을 또한 포함한다. The control group also includes a previously established standard water. 마이크로어레이 분석법이 포함되는 mRNA 분석법과 같은 분석법을 위해, 대조군은 보편적 대조군일 수 있다. For assays, such as mRNA assays contained a microarray assays, a control may be a universal control. 이같은 보편적 대조군은 건강한 조직들의 혼합물로부터 또는 다양한 조직으로부터 유래된 세포주들의 혼합물로부터 단리된 RNA, 예컨대, 비제한적으로, 본원에 개시된 보편적 기준 RNA로부터 수득한 특정 LY6 유전자의 RNA 발현 정보를 지칭한다. Such universal control group to the isolated from the mixture of cell lines derived from various tissues or from a mixture of healthy tissue RNA, for example, without limitation, to refer to RNA expression information of a particular LY6 gene obtained from a universal standard RNA as disclosed herein. 따라서, 본 발명에 따라 수행된 임의의 시험 또는 분석법이 확립된 표준물과 비교될 수 있고, 매번 비교를 위해 대조군 샘플을 수득하는 것이 필요하지 않을 수 있다. Thus, it can be compared with the present invention, any test or assay to establish the standards is performed according to, then it may not be necessary to obtain a control sample for comparison each time.

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본 발명의 진단 방법 Diagnostic methods of the invention

IBD용 치료제의 사용이 침범된 조직 및/또는 세포가 대조군에 비해 증가된 LY6 발현을 나타내는 장애에 대해 특이적으로 표적화될 수 있는 것으로 추가적으로 구현된다. The involvement of tissue and / or cells, the use of a therapeutic agent for IBD is implemented in addition to that can be specifically targeted to disorders for indicating an increased LY6 expression relative to control. 따라서, 증가된 LY6 발현의 검출이 포유동물의 위장 조직에서 IBD, 예컨대 CD 또는 UC를 검출하는데 및/또는 인간 환자에서 IBD, UC 및/또는 CD를 경감시키는데 유용한, 화학요법제를 포함하는 IBD 치료제로의 치료가 특히 이로울 조직 및 장애를 확인하는데 사용될 수 있는 것으로 구현된다. Thus, the detection of increased LY6 expression in gastrointestinal tissue of a mammal in IBD, for example, CD or detection and / or human patient for the UC useful in reducing the IBD, UC and / or CD, IBD therapeutic agent, including a chemotherapeutic agent the treatment to be implemented that can be used to identify a particular beneficial organizations and failure.

바람직한 실시양태에서, 유전자 전사물의 직접적인 검출에 의해 또는 단백질 수준의 검출에 의해 LY6 발현 수준이 검출된다. In a preferred embodiment, the LY6 expression levels are detected by, or by detection of protein levels of the gene transcription of water direct detection. LY6 mRNA 전사물, 이로부터 합성된 cDNA, 또는 LY6 유전자 증폭이 존재하는 DNA에 대한 프로브의 혼성화에 주로 의존하는 다양한 기술들 중 임의의 것을 사용하여 전사물을 검출할 수 있다. LY6 mRNA transcripts, using any of a variety of techniques depends primarily on the hybridization of the probe to the cDNA, or DNA which the LY6 gene amplification presence synthesis from which it is possible to detect the transcript. 주지된 기술에는 전사물 수준의 노던 블롯팅, 역전사효소 PCR 및 마이크로어레이 분석이 포함된다. Known techniques include Northern blotting, reverse transcriptase PCR and microarray analysis of transcript levels. LY6 단백질 수준을 검출하는 방법에는 웨스턴 블롯팅, 면역침전, 2-차원 폴리아크릴아미드 젤 전기영동 (2D SDS-PAGE - 바람직하게는, LY6 단백질의 위치가 결정되어 있는 표준물에 대해 비교됨), 및 질량 분광법이 포함된다. Method for detecting LY6 protein levels include Western blotting, immunoprecipitation, two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D SDS-PAGE - preferably, bigyodoem for standards with the position of the LY6 proteins is determined), and It includes mass spectrometry. 질량 분광법은 특정 샘플 내의 다수의 상이한 단백질 수준의 고처리량 확인을 허용하도록 일련의 정제 단계와 커플링될 수 있다. Mass spectroscopy may be coupled with a series of purification steps to allow a large number of high-throughput confirmation of different protein levels in a particular sample. 단백질분해성 이벤트, 유비퀴틴화, 인산화, 지질 변형 등이 포함되는 단백질에 대한 전사후 변형을 확인하는데 질량 분광법 및 2D SDS-PAGE이 또한 사용될 수 있다. Proteolytic events, ubiquitination, phosphorylation, lipid modification, etc. are included to identify the protein variants by mass spectroscopy and 2D SDS-PAGE and then transferred to that can also be used. 기질 DNA에의 결합 또는 표적 프로모터의 시험관내 전사 활성화를 분석함으로써 LY6 활성을 또한 평가할 수 있다. By analyzing the in vitro transcription activation of binding to substrate DNA or the target promoter it may also assess the LY6 activity. 젤 이동(shift) 분석법, DNA 풋프린팅(footprinting) 분석법 및 DNA-단백질 가교 분석법 모두 DNA 상의 Gli 결합 부위에 결합할 수 있는 단백질의 존재를 평가하는데 사용될 수 있는 방법이다 (문헌 [J Mol. Med 77(6):459-68 (1999)]; [Cell 100(4): 423-34 (2000)]; [Development 127(19): 4923-4301 (2000)]). A method that the gel moves (shift) assay, DNA foot printing (footprinting) analysis and DNA- protein cross-linking assays both be used to assess the presence of a protein capable of binding to Gli binding sites on DNA (literature [J Mol. Med 77 (6): 459-68 (1999)]; [Cell 100 (4): 423-34 (2000)]; [Development 127 (19): 4923-4301 (2000)]).

특정 실시양태에서, LY6 전사물 수준이 측정되고, 대조군과 비교하여 현저하게 상승된 LY6 수준을 나타내는, 질환 또는 장애가 있는 조직이 IBD 치료 화합물로 처치된다. In certain embodiments, LY6 transcript levels are measured, the tissue that, disease or disorder that represents the level of LY6 markedly elevated as compared to the control group is treated with IBD treatment compounds. 따라서, LY6 발현 수준이 환자가 IBD를 앓고 있는지 여부 및 이러한 환자에게 IBD 치료제를 제공하여야 하는지 여부를 결정하기 위한 강력한 진단 수단이다. Therefore, the expression level LY6 a powerful diagnostic means for determining whether the IBD therapeutic agent to be provided and whether these patients if the patient is suffering from IBD.

본 발명의 방법에서 사용하기 위한 항체 조성물 Antibody compositions for use in the method of the present invention

A. 항-LY6 항체 A. Section -LY6 antibody

한 실시양태에서, 본 발명은 항-LY6 항체의 용도를 제공하고, 이는 염증성 장 질환 예컨대 UC의 존재, 중증도를 결정하고/하거나 이러한 질환의 질환 경과를 진단하는 것에서의 치료제, 진단제 및/또는 예후제로서 본원에서 용도가 확인될 수 있다. In one embodiment, the invention provides the use of an anti -LY6 antibody, which in IBD for example the presence of UC, therapeutic agents from determining the severity and / or diagnosing a disease course of such diseases, a diagnostic agent and / or the prognostic can be verified by use herein. 이같은 목적에 사용될 수 있는 예시적인 항체로는 폴리클로날, 모노클로날, 인간화, 이중특이적 및 이종접합체 항체가 포함된다. Exemplary antibodies that can be used for this purpose include a polyclonal, day, humanized, bispecific and heterogeneous conjugate antibody. 용어 "항체"는 때때로 항원-결합 단편을 또한 포함한다. Also it includes binding fragments - the term "antibody" is sometimes antigen. 항-LY6 항체는 시판되고, 예를 들어, R&D Systems (Minneapolis, MN)으로부터 시판된다. Wherein -LY6 antibodies are commercially available, for example, it is commercially available from R & D Systems (Minneapolis, MN). 항원으로서의 LY6에 특이적으로 결합하는 항체는 상업적으로 수득될 수 있거나, 또는 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 항체 및 단백질 화학 분야에 공지된 표준 방법에 의해 제조될 수 있다. Antibodies specifically binding to the antigen as the LY6 may be commercially obtained, or can be prepared by standard methods known to the antibody and protein chemistry for use in the methods of the present invention. 예를 들어 US 7,144,990에 LYPD1에 대한 항체가 개시되어 있고, 상기 특허는 거명에 의해 전체적으로 본원에 포함된다. For example, there is disclosed an antibody for LYPD1 in US 7,144,990, it said patents are incorporated herein by reference as a whole.

1. 폴리클로날 항체 1. Polyclonal Antibodies

폴리클로날 항체는 관련 항원 및 애주번트(adjuvant)의 다중 피하 (sc) 또는 복강내 (ip) 주사에 의해 동물에서 바람직하게 상승된다. Polyclonal antibodies are preferably raised in animals by multiple subcutaneous (sc) or intraperitoneal (ip) injections of the relevant antigen and adjuvant (adjuvant). 면역화될 종에서 면역원성인 단백질에 관련 항원 (특히 합성 펩티드가 사용되는 경우)을 접합시키는 것이 유용할 수 있다. Related to the immunogenic protein in the species to be immunized with the antigen (especially when synthetic peptides are used) it may be useful to bond to. 예를 들어, 이관능성 또는 유도체화 작용제, 예를 들어 말레이미도벤조일 술포숙신이미드 에스테르 (시스테인 잔기를 통한 접합), N-히드록시숙신이미드 (라이신 잔기를 통한 접합), 글루타르알데히드, 숙신산 무수물, SOCl 2 , 또는 R 1 N=C=NR (식중, R 및 R 1 은 상이한 알킬기이다)을 사용하여, 항원을 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 혈청 알부민, 소 티로글로불린 또는 대두 트립신 억제제에 접합시킬 수 있다. For example, a bifunctional or derivatizing agent, for example, maleimido benzoyl alcohol posuk (bonding through cysteine ​​residues) god imide ester, N- hydroxy (bonded through a lysine residue) succinimide, glutaraldehyde, succinic anhydride, SOCl 2, or R 1 N = C = NR, using a (wherein, R and R 1 are different alkyl groups), keyhole antigens rimpet hemocyanin (KLH), serum albumin, bovine thyroglobulin, or soybean trypsin inhibitor a can be joined.

예를 들어, 100 ㎍ 또는 5 ㎍의 단백질 또는 접합체 (각각 토끼 또는 마우스에 대해)를 3배 용량의 프로인트(Freund) 완전 애주번트와 합하고, 이 용액을 다중 부위에 피내 주사함으로써, 항원, 면역원성 접합체 또는 유도체에 대해 동물들을 면역화시킨다. For example, 100 ㎍ or 5 ㎍ of proteins or conjugates were combined with Freund (Freund) complete adjuvant three times the capacity of the (for each rabbit or mouse), by intradermal injection to the solution to a multi-region, an antigen, immune immunized animals against immunogenic conjugates or derivatives. 1개월 후, 프로인트 완전 애주번트 내의 펩티드 또는 접합체를 원래 양의 1/5 내지 1/10로 다중 부위에 피하 주사하여 동물을 부스팅(boosting)시킨다. After one month, the peptide or conjugate in Freund's complete adjuvant with 1/5 to 1/10 the original amount by subcutaneous injection in a multi-site thereby boosting (boosting) the animal. 7 내지 14일 후, 동물에서 채혈하여, 혈청을 항체 역가에 대해 분석한다. 7 to 14 days, and blood samples were withdrawn from the animals and analyzed for serum antibody titers. 역가가 정체기(plateau)에 도달할 때까지 동물을 부스팅시킨다. Thereby boosting the animals until the activity has reached a plateau (plateau). 접합체는 재조합 세포 배양에서 단백질 융합물로서 또한 제조될 수 있다. The conjugate may also be prepared as a fusion protein with water in recombinant cell culture. 또한, 백반과 같은 응집제가 면역 응답을 강화시키기 위해 적절하게 사용된다. In addition, a coagulant such as alum are suitably used to enhance the immune response.

2. 모노클로날 항체 2. The monoclonal antibody

모노클로날 항체는 [Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]에 최초로 기술된 하이브리도마 방법을 사용하여 제조할 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법 (미국 특허 번호 4,816,567)으로 제조할 수 있다. Monoclonal antibodies: can be prepared by [Kohler et al, Nature, 256 495 (1975).] The hybrid or hybridoma method can be produced using, or recombinant DNA methods (U.S. Patent No. 4,816,567) technologies first to have.

하이브리도마 방법에서는, 마우스 또는 기타 적절한 숙주 동물, 예컨대 햄스터를 상기 기술된 바와 같이 면역화시켜, 면역화에 사용된 단백질에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유발시킨다. In the hybridoma method, it causes a mouse or other appropriate host animal, such as hamster was immunized as described above, lymphocytes that produce or produce antibodies specifically bind to the protein used for immunization. 별법적으로, 림프구를 시험관내에서 면역화시킬 수 있다. Legally it stars, the lymphocytes can be immunized in vitro. 면역화 후, 림프구를 단리하고 나서, 적절한 융합제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 골수종 세포주와 융합시켜, 하이브리도마 세포를 형성시킨다 ([Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)]). After the immunization, and then isolating the lymphocytes, using a suitable fusing agent, such as polyethylene glycol and fused with myeloma cell line to form a hybridoma cell ([Goding, Monoclonal Antibodies:. Principles and Practice, pp 59-103 (Academic Press, 1986)]).

이렇게 제조된 하이브리도마 세포를 융합되지 않은 모 골수종 세포 (융합 파트너로 또한 지칭됨)의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 바람직하게는 함유하는 적절한 배양 배지에 파종하여 성장시킨다. The thus prepared hybridoma cells parental myeloma cells that is free of fusion to thereby (also referred to as fusion partner search) grown by inoculating a suitable culture medium containing preferably one or more substances that inhibit the growth or survival. 예를 들어, 모 골수종 세포에 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT) 효소가 없는 경우, 하이브리도마용 선별 배양 배지는 전형적으로 하이포잔틴, 아미노프테린 및 티미딘을 포함할 것이며 (HAT 배지), 이러한 물질들은 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방지한다. For example, if there is no hypoxanthine guanine phospholipid view transferase (HGPRT or HPRT) enzyme to the parental myeloma cells, hives Lido Ma Yong screening culture media is typically hypoxanthine, aminopterin, and will comprise a thymidine (HAT medium), such materials shall prevent the growth of HGPRT- deficient cells.

바람직한 융합 파트너 골수종 세포는 효율적으로 융합되고, 선별된 항체-생산 세포에 의한 안정적인 높은 수준의 항체 생산을 지지하며, 융합되지 않은 모 세포에 대해 선별하는 선별 배지에 대해 감수성인 골수종 세포이다. Preferred fusion partner myeloma cells are fuse efficiently, the selected antibody-sensitivity of the myeloma cells for a selective medium to screen for and that support the production of antibodies of the stable high-level production by the cell, the parent cells of fusion. 바람직한 골수종 세포주는 뮤린 골수종 세포주, 예컨대 <Salk Institute Cell Distribution Center (San Diego, California USA)>로부터 입수가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 것, 및 SP-2 및 유도체, 예를 들어, <American Type Culture Collection (Manassas, Virginia, USA)>으로부터 입수가능한 X63-Ag8-653 세포이다. Preferred myeloma cell lines are, for the murine myeloma cell line, e.g., <Salk Institute Cell Distribution Center (San Diego, California USA)> those derived from MOPC-21 and MPC-11 mouse tumors available from, and SP-2 and derivatives such as , <American Type Culture Collection (Manassas, Virginia, USA)> is the X63-Ag8-653 cells available from. 인간 골수종 및 마우스-인간 헤테로골수종 세포주 또한 인간 모노클로날 항체의 생산을 위해 기술되어 있다 ([Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984)]; 및 [Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)]). Human myeloma and mouse-human hetero-myeloma cell lines are also described for the production of human monoclonal antibodies ([Kozbor, J. Immunol, 133: 3001 (1984).]; And [Brodeur et al, Monoclonal Antibody Production Techniques. and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)]).

하이브리도마 세포가 성장 중인 배양 배지를 항원에 대해 지시된 모노클로날 항체의 생산에 대해 분석한다. Hybridoma is hybridoma cells is assayed for production of monoclonal antibodies in the culture medium are grown to a monoclonal antibody directed against the antigen. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생산된 모노클로날 항체의 결합 특이성을 면역침전에 의해 또는 시험관내 결합 분석법, 예컨대 방사선면역분석법 (RIA) 또는 효소-결합 면역흡착 분석법 (ELISA)에 의해 측정한다. Preferably, the hybrid by the binding specificity of monoclonal antibody to the monoclonal antibody produced by the hybridoma cells for immunoprecipitation or in vitro binding assay, such as radioimmunoassay assay (RIA) or enzyme-linked as determined by immunosorbent assay (ELISA) do.

모노클로날 항체의 결합 친화도는, 예를 들어, [Munson et al., Anal. Binding affinity of the monoclonal antibody can, for example, [Munson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980)]에 기술된 스캐차드(Scatchard) 분석에 의해 결정할 수 있다. Biochem, 107:. 220 (1980)] The scanner Chad (Scatchard) technology can be determined by analysis.

원하는 특이성, 친화도 및/또는 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포가 확인되면, 클론을 한계 희석 절차에 의해 서브클로닝하고, 표준 방법에 의해 성장시킬 수 있다 ([Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)]). If the desired specificity, affinity and / or hybridoma cells are confirmed to produce antibody of the active, it may be subcloned by a clone in the limiting dilution procedures and grown by standard methods ([Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)]). 이러한 목적에 적절한 배양 배지는, 예를 들어, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. Appropriate culture media for this purpose include, for example, D-MEM or RPMI-1640 medium. 또한, 예를 들어, 마우스 내로의 세포의 복강내 주사에 의해, 하이브리도마 세포를 동물에서 복수 종양으로서 생체내 성장시킬 수 있다. Also, for instance, by intraperitoneal injection of the cells into mice, the hybridomas as ascites tumors in an animal cell may be grown in vivo.

서브클론에 의해 분비된 모노클로날 항체는 통상적인 항체 정제 절차, 예를 들어, 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 단백질 A 또는 단백질 G-세파로스 사용) 또는 이온-교환 크로마토그래피, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 젤 전기영동, 투석 등에 의해 배양 배지, 복수액 또는 혈청으로부터 적절하게 분리된다. Monoclonal antibodies secreted by the subclones are monoclonal antibodies by conventional antibody purification procedures, for example, affinity chromatography (e.g., Protein A or protein G- Sepharose used) or ion-exchange chromatography, hydroxyl apatite chromatography is suitably isolated from the gel electrophoresis, the culture medium, ascites fluid, or serum by dialysis.

모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 절차를 이용하여 (예를 들어, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 이용함으로써) 쉽게 단리 및 서열분석된다. DNA encoding the monoclonal antibodies using conventional procedures (e. G., Oligonucleotides capable of binding specifically to genes encoding the heavy and light chains of murine antibodies by using a nucleotide probe) readily isolated and sequenced do. 하이브리도마 세포는 이같은 DNA의 바람직한 공급원으로 기능한다. The hybridoma cells serve as a preferred source of such DNA. 일단 단리되면, DNA를 발현 백터 내로 넣을 수 있고, 그 후 이를 형질감염되지 않으면 항체 단백질을 생산하지 않는 숙주 세포 예컨대 대장균 세포, 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 골수종 세포 내로 형질감염시켜, 재조합 숙주 세포에서의 모노클로날 항체의 합성을 수득한다. Once isolated, it is possible to insert a DNA into an expression vector, followed by transfection into this trait does not infect the antibody protein to the host cell, for example E. coli cells, monkey COS cells, Chinese hamster ovary (CHO) cells, or myeloma cells that do produce infection to obtain the synthesis of monoclonal antibodies in the recombinant host cells. 항체를 코딩하는 DNA의 박테리아에서의 재조합 발현에 대한 리뷰 논문에는 [Skerra et al., Curr. Review articles on recombinant expression in bacteria of DNA encoding the antibody include [Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262 (1993)] 및 [Pluckthun, Immunol. Opinion in Immunol, 5:. 256-262 (1993)] and [Pluckthun, Immunol. Revs. Revs. 130:151-188 (1992)]이 포함된다. 130: 151-188 is (1992) it includes a.

추가적인 실시양태에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편을 [McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990)]에 기술된 기술을 사용하여 생성된 항체 파지 라이브러리로부터 단리할 수 있다. In a further embodiment, monoclonal antibodies or antibody fragments: can be isolated from the [McCafferty et al, Nature, 348. 552-554 (1990)] the antibody phage libraries generated using the techniques described. [Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991)] 및 [Marks et al., J. Mol. [Clackson et al, Nature, 352:. 624-628 (1991)]. And [Marks et al, J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)]에는 파지 라이브러리를 사용한 뮤린 및 인간 항체의 단리가 각각 기술되어 있다. Biol, 222:. 581-597 (1991)] has the isolation of murine and human antibodies using phage libraries are described respectively. 후속 문헌들에는 사슬 셔플링(shuffling)에 의한 고친화도 (nM 범위) 인간 항체의 생산 ([Marks et al., Bio/Technology, 10:779-783 (1992)]), 뿐만 아니라 매우 큰 파지 라이브러리를 구축하기 위한 전략으로서의 조합 감염 및 생체내 재조합 ([Waterhouse et al., Nucl. Acids Res., 21:2265-2266 (1993)])이 기술되어 있다. Subsequent reference to the production of affinity (nM range) human antibodies repaired by chain shuffling (shuffling) ([Marks et al, Bio / Technology, 10:. 779-783 (1992)]), very large phage libraries, as well as infection in combination as a strategy for constructing and in vivo recombination ([Waterhouse et al, Nucl Acids Res, 21:... 2265-2266 (1993)]) are described. 따라서, 이러한 기술들은 모노클로날 항체의 단리를 위한 전통적인 모노클로날 항체 하이브리도마 기술에 대한 실행가능한 대안이다. Thus, these techniques are a viable alternative to traditional monoclonal antibody hybridoma techniques for isolation of monoclonal monoclonal antibodies.

예를 들어, 상동성 뮤린 서열을 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인 (C H 및 C L ) 서열로 치환함으로써 (미국 특허 번호 4,816,567 및 [Morrison, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984)]), 또는 면역글로불린 코딩 서열을 비-면역글로불린 폴리펩티드 (이종성 폴리펩티드)에 대한 코딩 서열 전부 또는 일부와 융합시킴으로써, 항체를 코딩하는 DNA를 변형시켜 키메라 또는 융합 항체 폴리펩티드를 생산할 수 있다. For example, by replacing the homologous murine sequences to human heavy and light chain constant domain (C H and C L) sequences (U.S. Patent No. 4,816,567 and [Morrison, et al, Proc Natl Acad Sci USA, 81...: 6851 (1984)), or the immunoglobulin coding sequence for a non-by the coding sequence all or fusion with a portion of the immunoglobulin polypeptide (heterologous polypeptide), by modifying the DNA encoding the antibody can produce chimeric or fusion antibody polypeptides . 비-면역글로불린 폴리펩티드 서열이 항체의 불변 도메인을 치환할 수 있거나, 또는 이러한 서열로 항체의 한 항원-결합 부위의 가변 도메인을 치환하여, 항원에 대한 특이성이 있는 한 항원-결합 부위 및 상이한 항원에 대한 특이성이 있는 또다른 항원-결합 부위를 포함하는 키메라 2가 항체가 생성된다. Non- or immunoglobulin polypeptide sequences can substitute for the constant domains of an antibody, or such an antigen of the antibody to the sequence-binding sites and a different antigen-by replacing the variable domain of the binding site, an antigen that is specific for the antigen for another antigen with a specificity-2 is a chimeric antibody comprising the binding site is generated.

3. 인간 및 인간화 항체 3. Human and Humanized Antibodies

본 발명의 실행에서 유용한 항-LY6 항체는 인간화 항체 또는 인간 항체를 추가로 포함할 수 있다. Wherein -LY6 useful antibodies in the practice of the present invention may further comprise humanized antibodies or human antibodies. 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체의 인간화 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소의 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 이의 단편 (예컨대 항체의 Fv, Fab, Fab', F(ab') 2 또는 기타 항원-결합 하위서열(subsequence))이다. Non-human (e.g., murine) a humanized form of the antibody is non-chimeric immunoglobulins, immunoglobulin chains or fragments thereof containing the minimal sequence derived from a human immunoglobulin (e. G. Fv of an antibody, Fab, Fab ', F (ab ') 2 or other antigen-binding a sub-sequence (subsequence)). 인간화 항체는 수용자의 상보성 결정 영역 (CDR)으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화도 및 능력이 있는 마우스, 래트 또는 토끼와 같은 비-인간 종의 CDR로부터의 잔기 (공여자 항체)로 대체된 인간 면역글로불린 (수용자 항체)를 포함한다. Humanized antibody ratio, such as a mouse, rat or rabbit with a residue from a complementarity determining region (CDR) of the recipient desired specificity, affinity and capacity - the human immunoglobulin are replaced by residues (donor antibody) from the human species CDR and a (recipient antibody). 일부 경우에는, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 잔기가 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. In some cases, the ratio of the Fv framework residues of the human immunoglobulin equivalent - is replaced with human residues. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체에서 또는 임포팅된(imported) CDR 또는 프레임워크 서열에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. Furthermore, humanized antibodies may comprise residues that are not found in the recipient antibody or in the imported (imported) CDR or framework sequences. 일반적으로, 인간화 항체는 1개 이상, 전형적으로는 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비-인간 면역글로불린의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 컨센서스(consensus) 서열의 것이다. In general, the humanized antibody is at least one, and typically two will be substantially free of all of the single variable domains, in which all or substantially all of the CDR regions is non-equivalent to that of a human immunoglobulin and all or substantially all of the FR regions are those of a human immunoglobulin consensus (consensus) sequence. 최적으로는, 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로는 인간 면역글로불린의 것을 또한 포함할 것이다 ([Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986)]; [Riechmann et al., Nature, 332:323-329 (1988)]; 및 [Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)]). Most preferably, the humanized antibody is at least a portion of an immunoglobulin constant region (Fc), typically it will also include those of a human immunoglobulin ([Jones et al, Nature, 321:. 522-525 (1986)]; [ . Riechmann et al, Nature, 332: 323-329 (1988)]; and [Presta, Curr Op Struct Biol 2:.... 593-596 (1992)]).

비-인간 항체를 인간화시키는 방법은 당업계에 공지되어 있다. Non-way humanizing human antibodies are well known in the art. 일반적으로, 인간화 항체에는 비-인간 공급원으로부터의 하나 이상의 아미노산 잔기가 도입되어 있다. In general, the humanized antibody is a non-at least one amino acid residue from a human source has been introduced. 이러한 비-인간 아미노산 잔기는 종종 "임포트" 잔기로 지칭되고, 이는 전형적으로는 "임포트" 가변 도메인으로부터 취해진다. These non-human amino acid residues are often referred to as "import" residues, which are typically taken from "import" variable domain. 설치류 CDR 또는 CDR 서열로 인간 항체의 상응하는 서열을 치환함으로써, Winter 및 공동 연구원의 방법 ([Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986)]; [Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988)]; [Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536 (1988)])에 따라 인간화를 본질적으로 수행할 수 있다. Method by replacing the corresponding sequences of a human antibody with a rodent CDR or CDR sequences, Winter and co-workers ([Jones et al, Nature, 321:. 522-525 (1986)];. [Riechmann et al, Nature, 332 : 323-327 (1988)]; [Verhoeyen et al, Science, 239: it may be carried out essentially in accordance with the humanized 1534-1536 (1988)). 따라서, 이같은 "인간화" 항체는 무손상 인간 가변 도메인보다 실질적으로 더 적은 서열이 비-인간 종으로부터의 상응하는 서열로 치환된 키메라 항체 (미국 특허 번호 4,816,567)이다. Accordingly, such "humanized" antibodies are substantially less than the non-variable sequences are intact human domain - the corresponding chimeric antibodies (U.S. Patent No. 4,816,567), substituted with a sequence from the human species. 실제로, 전형적으로 인간화 항체는 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 FR 잔기가 설치류 항체의 유사한 부위로부터의 잔기로 치환된 인간 항체이다. In practice, humanized antibodies are typically human antibodies substituted by residues from some CDR residues and possibly some FR residues are similar to parts of the rodent antibody.

인간화 항체를 제조하는데 사용되는 인간 가변 도메인 (경쇄 및 중쇄 모두)을 선택하는 것은 항체가 인간 치료 용도에 의도되는 경우 항원성 및 HAMA 응답 (인간 항-마우스 항체)을 감소시키는데 매우 중요하다. When choosing the (both light and heavy chain), a humanized variable domain of a human antibody to be used for producing the antibody it is intended for human therapeutic use antigenicity and HAMA response (human anti-mouse antibody) is important to reduce. 소위 "베스트-핏(best-fit)" 방법에 따라, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열을 공지된 인간 가변 도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝한다. So-called in accordance with the "best fit (best-fit)" method, and screening for the entire library of known sequence of the rodent antibody variable domain, the human variable domain sequences. 설치류의 서열에 가장 근접한 인간 V 도메인 서열을 확인하고, 그 내부의 인간 프레임워크 영역 (FR)이 인간화 항체용으로 수용된다 ([Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)]; [Chothia et al. J. Mol. Biol. 196:901 (1987)]). Determine the closest human V domain sequence to the rodent sequence, and the inside of the human frame work region (FR) for the humanized antibody is received ([Sims et al J. Immunol 151:.. 2296 (1993)]; [ . Biol 196 Chothia et al J. Mol:.. 901 (1987)]). 또다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정 서브그룹의 모든 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 특정 프레임워크 영역을 사용한다. Another method uses a particular framework region derived from the consensus sequence of all human antibodies of a particular subgroup of light or heavy chain. 여러 상이한 인간화 항체에 대해 동일한 프레임워크를 사용할 수 있다 ([Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)]; [Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)]). Can use the same framework for several different humanized antibodies ([Carter et al Proc Natl Acad Sci USA, 89:..... 4285 (1992)]; [Presta et al J. Immunol, 151:.. 2623 (1993)).

항원에 대한 높은 친화성 및 기타 유리한 생물학적 성질을 유지시키면서 항체를 인간화시키는 것이 또한 중요하다. While maintaining the high affinity and other favorable biological properties of the antigen to humanizing antibodies are also important. 이러한 목적을 이루기 위해, 바람직한 방법에 따라, 모 서열 및 인간화 서열의 3차원 모델을 사용하는 모 서열 및 다양한 개념적 인간화 생성물의 분석 프로세스에 의해 인간화 항체가 제조된다. To achieve this object, according to a preferred method, a humanized antibody is produced by a process of analysis of base sequence and the base sequence and various conceptual humanized products using three-dimensional models of the humanized sequences. 3차원 면역글로불린 모델은 통상적으로 입수가능하고, 당업자에게 친숙하다. A three-dimensional immunoglobulin models are commonly available and are familiar to those skilled in the art. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 입체 구조를 설명하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램을 이용할 수 있다. A computer program that is described and displaying the 3-dimensional structures of selected candidate immunoglobulin sequences may be used. 이러한 디스플레이들의 정밀검사로 후보 면역글로불린 서열의 기능화에서 잔기들의 가능한 역할을 분석할 수 있으며, 즉, 항원에 결합하는 후보 면역글로불린의 능력에 영향을 미치는 잔기를 분석할 수 있다. To analyze the possible role of the residues in the functionalization of the candidate immunoglobulin sequence to the probe of such a display, and, that is, it is possible to analyze the residues that influence the ability of the candidate immunoglobulin to bind antigen. 이러한 방식으로, 원하는 항체 특성, 예컨대 표적 항원(들)에 대한 증가된 친화도가 달성되도록 수용자 및 임포트 서열로부터 FR 잔기들을 선택하고 조합시킬 수 있다. In this manner, a desired antibody characteristic, for example, it is possible to select the combination of FR residues from the recipient and import sequences so that the increase in affinity is achieved for the target antigen (s). 일반적으로, 초가변 영역 잔기가 항원 결합에 영향을 미치는데 직접적으로, 그리고 가장 실질적으로 관여한다. In general, the directly involved in, and the most practical for the hypervariable region residues that influence antigen binding.

다양한 형태의 인간화 항-LY6 항체가 구현된다. Various forms of the humanized anti--LY6 antibody is realized. 예를 들어, 인간화 항체는 항체 단편, 예컨대 Fab일 수 있고, 이는 면역접합체를 생성하기 위해 하나 이상의 세포독성제(들)에 임의적으로 접합될 수 있다. For example, the humanized antibody may be an antibody fragment, such as Fab, which may be optionally bonded to one or more cytotoxic agent (s) to generate an immunoconjugate. 별법적으로, 인간화 항체는 무손상 항체, 예컨대 무손상 IgG1 항체일 수 있다. Legally specific, humanized antibody may be an intact antibody, such as an intact IgG1 antibody.

인간화의 대안으로서, 인간 항체가 생성될 수 있다. As an alternative to humanization, a human antibody can be produced. 예를 들어, 면역화 시,내인성 면역글로불린 생산의 부재 하에 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생산할 수 있는 트랜스제닉(trnasgenic) 동물 (예를 들어, 마우스)을 생산하는 것이 현재 가능하다. For example, it is now possible to produce transgenic (trnasgenic) animals (e.g., mice) capable of producing a full repertoire of human antibodies in the absence of immunization, endogenous immunoglobulin production. 예를 들어, 키메라 및 생식계열 돌연변이 마우스에서 항체 중쇄 연결 영역 (J H ) 유전자를 동형접합 결실시키면 내인성 항체의 생산이 완전히 억제된다는 것이 기술되었다. For example, if the chimeric and germ line mutant mice from antibody heavy-through area (J H) a homozygous gene deletion has been described it is that the production of endogenous antibody completely inhibited. 인간 생식계열 면역글로불린 유전자 어레이를 이같은 생식계열 돌연변이 마우스에게 전달하면, 항원 챌린지 시 인간 항체가 생산될 것이다. Passing the human germline immunoglobulin gene array to such germ line mutant mice will be human antibodies upon antigen challenge produced. 예를 들어, 문헌 [Jakobovits et al., Proc. See, e.g., [Jakobovits et al., Proc. Natl. Natl. Acad. Acad. Sci. Sci. USA, 90:2551 (1993)]; USA, 90: 2551 (1993)]; [Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993)]; [Jakobovits et al, Nature, 362:. 255-258 (1993)]; [Bruggemann et al., Year in Immuno., 7:33 (1993)]; [Bruggemann et al, Year in Immuno, 7:33 (1993)..]; 및 미국 특허 번호 5,545,806, 5,569,825, 5,591,669 (모두 GenPharm); And US Patent Nos. 5,545,806, 5,569,825, 5,591,669 (all GenPharm); 5,545,807; 5,545,807; 및 WO 97/17852를 참조한다. And refer to the WO 97/17852.

별법적으로, 파지 디스플레이 기술 ([McCafferty et al., Nature 348:552-553 (1990)])을 이용하여, 면역화되지 않은 공여자로부터의 면역글로불린 가변 (V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 인간 항체 및 항체 단편을 시험관내에서 생산할 수 있다. Legally specific, phage display technology ([McCafferty et al, Nature 348:. 552-553 (1990)]) by the use of immunoglobulin from non-immunized donors variable (V) domain gene repertoires from human antibodies and antibody fragments to be produced in vitro. 이러한 기술에 따르면, 항체 V 도메인 유전자가 M13 또는 fd와 같은 필라멘트형 박테리오파지의 주요 또는 소수 코트 단백질 유전자 내로 인-프레임(in-frame) 클로닝되고, 파지 입자의 표면 상에 기능성 항체 단편으로 디스플레이된다. According to this technique, antibody V domain genes into filamentous key or a small number coat protein gene of a bacteriophage such as M13 or fd - frames (in-frame) is cloned, is displayed on the surface of the phage particle as a functional antibody fragment. 필라멘트형 입자가 파지 게놈의 단일-가닥 DNA 카피를 함유하기 때문에, 항체의 기능적 성질을 기초로 하는 선별로 이러한 성질을 나타내는 항체를 코딩하는 유전자가 또한 선별된다. The filamentary particles of a single phage genome - because it contains the copy-stranded DNA, the gene encoding the antibody exhibiting such properties by screening for the functional properties of the antibody also based screening. 따라서, 파지는 B-세포의 성질을 일부 모방한다. Thus, the phage mimics some of the properties of and B- cells. 파지 디스플레이는 다양한 포맷으로 수행될 수 있고, [Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3:564-571 (1993)]에 예를 들어 리뷰되어 있다. Phage display can be performed in various formats,: it is a review for example in [Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3 564-571 (1993)]. V-유전자 절편의 다양한 공급원을 파지 디스플레이에 사용할 수 있다. Various sources of V- gene segments can be used for phage display. [Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991)]에서는 면역화된 마우스의 비장으로부터 유래된 V 유전자의 소형 무작위 조합형 라이브러리로부터 항-옥사졸론 항체의 다양한 어레이가 단리되었다. [Clackson et al, Nature 352:. 624-628 (1991)] wherein the combination from a small random library of V genes derived from the spleens of immunized mice in the various arrays oxazolone antibodies were isolated. 본질적으로 [Marks et al., J. Mol. Essentially [Marks et al., J. Mol. Biol. Biol. 222:581-597 (1991)], 또는 [Griffith et al., EMBO J. 12:725-734 (1993)]에 기술된 기술에 따라, 면역화되지 않은 인간 공여자로부터의 V 유전자의 레퍼토리가 구축될 수 있고, 다양한 어레이의 항원 (자가-항원 포함)에 대한 항체가 단리될 수 있다. 222: 581-597 (1991)], or [Griffith et al, EMBO J. 12:. 725-734 (1993)] The repertoire of V genes, from non-immunized human donors according to the technique described to be established in and can, antigens of the various array-a antibody to (including self-antigens) can be isolated. 또한, 미국 특허 번호 5,565,332 및 5,573,905를 참조한다. In addition, reference is made to U.S. Patent No. 5,565,332 and 5,573,905.

상기 논의된 바와 같이, 인간 항체는 시험관내 활성화된 B 세포에 의해 또한 생성될 수 있다 (미국 특허 번호 5,567,610 및 5,229,275 참조). As discussed above, human antibodies may also be generated by in vitro activated B cells (see U.S. Pat. No. 5.56761 million and 5,229,275).

4. 항체 단편 4. Antibody fragments

특정 상황에서는, 전체 항체보다 항체 단편을 사용하는 것이 유리하다. In certain situations, it is advantageous to use antibody fragments than whole antibodies. 상응하는 전장 분자의 유사한 항원 결합 특이성을 유지하는 한편 단편의 더 작은 크기는 신속한 소거를 허용하고, 고형 종양에 대한 개선된 접근에 이를 수 있다. Smaller size to maintain a similar antigen binding specificity of the corresponding full-length molecule while fragments will allow the rapid erasure, and can lead to improved access to solid tumors.

항체 단편의 생산을 위하여 다양한 기술이 개발되어 왔다. A variety of techniques have been developed for the production of antibody fragments. 전통적으로, 이러한 단편들은 무손상 항체의 단백질분해성 소화를 통해 유도되었다 (예를 들어, [Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)] 및 [Brennan et al., Science 229:81 (1985)] 참조). Traditionally, these fragments were derived via proteolytic digestion of intact antibodies (e.g., [Morimoto et al, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:. 107-117 (1992)] and [Brennan et al,. Science 229: 81 (1985)], see). 그러나, 현재 이러한 단편들은 재조합 숙주 세포에 의해 직접적으로 생산될 수 있다. However, at present these fragments can be produced directly by recombinant host cells. Fab, Fv 및 ScFv 항체 단편이 모두 대장균에서 발현되어 이로부터 분비될 수 있고, 따라서 다량의 이러한 단편들이 손쉽게 생산되도록 한다. Are both Fab, Fv and ScFv antibody fragments expressed in E. coli may be secreted therefrom, thereby to easily produce such large amounts of these fragments. 상기 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 항체 단편이 단리될 수 있다. It can be an antibody fragment isolated from the antibody phage libraries discussed above. 별법적으로, Fab'-SH 단편들이 대장균으로부터 직접 회수되고 화학적으로 커플링되어 F(ab') 2 단편이 형성될 수 있다 ([Carter et al, Bio/Technology 10:163-167 (1992)]). Can be recovered by the law, Fab'-SH fragments from E. coli and directly to the coupling by chemically forming the F (ab ') 2 fragments ([Carter et al, Bio / Technology 10: 163-167 (1992)] ). 또다른 접근법에 따르면, F(ab') 2 단편이 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접적으로 단리될 수 있다. According to another approach, the F (ab ') 2 fragments can be isolated directly from recombinant host cell culture. 샐비지(salvage) 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하는 생체내 반감기가 증가된 Fab 및 F(ab') 2 단편이 미국 특허 번호 5,869,046에 기술되어 있다. Sal busy (salvage) receptor binding is increased in vivo half-life comprising an epitope residues Fab and F (ab ') 2 fragments are described in U.S. Patent No. 5,869,046. 항체 단편의 생산을 위한 또다른 기술이 당업자에게 명백할 것이다. Another technique for the production of antibody fragments will be apparent to those skilled in the art. 또다른 실시양태에서, 선택된 항체는 단일쇄 Fv 단편 (scFv)이다. In another embodiment, the chosen antibody is a single chain Fv fragment (scFv). WO 93/16185; WO 93/16185; 미국 특허 번호 5,571,894; US Patent No. 5,571,894; 및 미국 특허 번호 5,587,458을 참조한다. And see US Patent No. 5,587,458. Fv 및 sFv는 불변 영역이 없는 무손상 결합 부위를 갖는 유일한 종이다; Fv and sFv are the only species with intact combining sites without constant region; 따라서, 이들은 생체내 사용 동안 감소된 비특이적 결합에 적절하다. Therefore, they are suitable for reduced nonspecific binding during in vivo use of. sFv의 아미노 또는 카르복시 말단에서 이펙터 단백질의 융합이 산출되도록 sFv 융합 단백질을 구축할 수 있다 ([Antibody Engineering, ed. Borrebaeck, 상기 문헌] 참조). Such that the fusion of effector proteins calculated from the amino or carboxy terminus of the sFv may be built sFv fusion proteins (see [Antibody Engineering, ed. Borrebaeck, supra). 또한 항체 단편은, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,641,870에 기술된 것과 같이, "선형 항체"일 수 있다. In addition, antibody fragments may, for example, as described in U.S. Pat. No. 5.64187 million, may be a "linear antibody". 이같은 선형 항체 단편은 단일특이적 또는 이중특이적일 수 있다. Such linear antibody fragments have proven to be a single specific or bispecific.

5. 이중특이적 항체 5. bispecific antibody

이중특이적 항체는 2개 이상의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성이 있는 항체이다. Bispecific antibodies are antibodies that have binding specificities for at least two different epitopes. 대표적인 이중특이적 항체는 별도의 항원들에 결합할 수 있거나, 또는 본원에 기술된 특정 LY6 폴리펩티드의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. Representative bispecific antibodies or can be coupled to a separate antigen, or may bind to two different epitopes of a particular LY6 polypeptide described herein. 또다른 이같은 항체는 상기 LY6 결합 부위를 또다른 단백질에 대한 결합 부위와 조합시킬 수 있다. Another such antibody may be combined with a binding site for the LY6 binding site on another protein. 이중특이적 항체가 본 발명의 진단 방법에서 유용한 경우, 제2 항체 암(arm)이 검출가능한 폴리펩티드에 결합할 수 있다. If the bispecific antibody is useful in diagnostic methods of the present invention, it may be bonded to the 2 polypeptide antibody arm (arm) is detected. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, F(ab') 2 이중특이적 항체)으로 제조될 수 있다. Bispecific antibodies can be prepared as full length antibodies or antibody fragments (e.g., F (ab ') 2 bispecific antibodies).

이중특이적 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. Method of producing bispecific antibodies are known in the art. 전장 이중특이적 항체의 전통적인 생산은 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공동-발현을 기초로 하고, 이때 두 사슬은 특이성이 상이하다 ([Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983)]). Traditional production of full length bispecific antibodies is two immunoglobulin heavy chain-light chain pair of co - and on the basis of the expression, where the two chains have different specificities are ([Millstein et al, Nature, 305: 537-539 (1983. )). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 배열(assortment)로 인해, 이러한 하이브리도마 (쿼드로마(quadroma))는 10가지 상이한 항체 분자의 잠재적 혼합물을 생산하고, 이중 하나만이 올바른 이중특이적 구조를 갖는다. Due to the immunoglobulin heavy chain and random arrays (assortment) of the light chain, and has these hybridomas (quadromas (quadroma)) are 10 kinds of production potential mixture of different antibody molecules, and the only one of the correct bispecific structure. 일반적으로 친화성 크로마토그래피 단계에 의해 이루어지는 올바른 분자의 정제는 다소 번거롭고, 생성물 수율이 낮다. Purification of the correct molecule made by the general affinity chromatography step is rather cumbersome, low product yield. 유사한 절차가 WO 93/08829 및 [Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991)]에 개시되어 있다. A similar procedure as WO 93/08829 and [Traunecker et al, EMBO J., 10: 3655-3659 (1991).] There is disclosed in.

다른 접근법에 따르면, 원하는 결합 특이성 (항체-항원 결합 부위)이 있는 항체 가변 도메인이 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. According to another approach, the desired binding specificity - the antibody variable domain in the (antibody-antigen combining sites) are fused to immunoglobulin constant domain sequences. 바람직하게는, 융합은 힌지, C H 2 및 C H 3 영역의 적어도 일부분을 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인과의 융합이다. Preferably, the fusion is a fusion with immunoglobulin heavy chain constant domain, comprising at least part of the hinge, C H 2 and C H 3 regions. 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제1 중쇄 불변 영역 (C H 1)이 융합물 중 적어도 하나에 존재하는 것이 바람직하다. The first heavy chain constant region containing the site necessary for light chain binding (C H 1) is preferably present in at least one of the fusion. 면역글로불린 중쇄 융합물, 및 원한다면 면역글로불린 경쇄를 코딩하는 DNA들을 별도의 발현 벡터에 삽입하고, 적절한 숙주 세포 내로 공동-형질감염시킨다. Immunoglobulin heavy chain fusion, and, if desired insert DNA encoding an immunoglobulin light chain in a separate expression vector, into an appropriate host cell co-transfected thereby. 이것은 구축에 사용된 3개의 폴리펩티드 사슬의 동등하지 않은 비율이 원하는 이중특이적 항체의 최적 수율을 제공하는 실시양태에서 3개의 폴리펩티드 단편의 상호 비율을 조정하는데 있어서 더 큰 유연성을 제공한다. This provides for greater flexibility in adjusting the mutual proportions of the three polypeptide chains of three polypeptide fragments in embodiments that are not equal to the ratio provided the best yield of the desired bispecific antibody for use in construction. 그러나, 동일한 비율의 2개 이상의 폴리펩티드 사슬의 발현으로 높은 수율이 수득되는 경우 또는 원하는 사슬 조합의 수율에 대해 비율이 유의한 효과가 없는 경우, 2개 또는 모든 3개의 폴리펩티드 사슬에 대한 코딩 서열을 단일 발현 벡터에 삽입할 수 있다. However, when the same rate with the high yield of the two or more expression of the polypeptide chain resulting in or does not have an effect, the ratio noted for the yield of the desired chain combination, a single two or coding sequences for all three polypeptide chains It can be inserted into an expression vector.

이러한 접근법의 바람직한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 한쪽 암 내의 제1 결합 특이성을 갖는 하이브리드 면역글로불린 중쇄, 및 다른쪽 암 내의 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍 (제2 결합 특이성 제공)으로 구성된다. In a preferred embodiment of this approach, the bispecific antibody is either claim hybrid immunoglobulin heavy chain with a first binding specificity, and a hybrid immunoglobulin heavy chain in the other arm in the arm-consists of a light chain pair (providing a second binding specificity). 이중특이적 분자의 한쪽 절반에만 면역글로불린 경쇄가 존재하여 용이한 분리 방식을 제공하기 때문에, 이러한 비대칭 구조는 바람직하지 않은 면역글로불린 사슬 조합물로부터의 원하는 이중특이적 화합물의 분리를 용이하게 한다는 것이 발견되었다. Because it provides a dual specificity one half separation easy and the immunoglobulin light chain exists only in the way the enemy molecule, discovered that facilitate separation of the desired bispecific compound from such an asymmetric structure of the immunoglobulin chain combinations undesired water It was. 이러한 접근법이 WO 94/04690에 개시되어 있다. This approach is disclosed in WO 94/04690. 이중특이적 항체를 생성시키는 것의 추가적인 상세사항을 위해, 예를 들어 문헌 [Suresh et al., Methods in Enzymmology, 121:210 (1986)]을 참조한다. For further details of what to produce a bispecific antibody, for example, the literature: see [Suresh et al, Methods in Enzymmology, 121 210 (1986).].

미국 특허 번호 5,731,168에 기술된 또다른 접근법에 따르면, 한 쌍의 항체 분자 사이의 경계면을 조작하여 재조합 세포 배양물로부터 회수되는 이종이량체의 백분율을 최대화할 수 있다. According to another approach described in U.S. Patent No. 5,731,168, it is possible to operate the interface between a pair of antibody molecules to maximize the percentage of heterodimers that are recovered from recombinant cell culture dimer. 바람직한 경계면은 C H 3 도메인의 적어도 일부를 포함한다. The preferred interface comprises at least a part of the C H 3 domain. 이러한 방법에서, 제1 항체 분자의 경계면으로부터의 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄가 보다 큰 측쇄 (예를 들어, 타이로신 또는 트립토판)로 대체된다. In this method, one or more small amino acid side chains from the interface of the first antibody molecule are replaced with larger side chains (e.g., tyrosine or tryptophan). 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 아미노산 측쇄 (예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)로 대체함으로써 큰 측쇄(들)에 대한 동일하거나 유사한 크기의 보상 "공동(cavity)"이 제2 항체 분자의 경계면 상에 생성된다. The large amino acid side chains more small amino acid side chain is the same or compensation of a similar size "cavity (cavity)" for the large side chain (s) by replacing (e.g., alanine or threonine) are created on the interface of the second antibody molecule . 이는 동종이량체와 같은 다른 바람직하지 않은 최종-생성물에 비해 이종이량체의 수율을 증가시키는 메커니즘을 제공한다. This is the same type as other undesirable end-mer - provides a mechanism for increasing the yield of the heterodimer compared to the dimer product.

이중특이적 항체에는 가교된 또는 "이종접합체" 항체가 포함된다. Bispecific antibodies include cross-linked or "two kinds of conjugates" antibody. 예를 들어, 이종접합체 내의 항체들 중 하나는 아비딘에 커플링되고, 다른 하나는 비오틴에 커플링될 수 있다. For example, one of the antibodies within a heterogeneous conjugate coupled to avidin, the other may be coupled to biotin. 이같은 항체들은, 예를 들어, 바람직하지 않은 세포에 대한 면역계 세포의 표적화 (미국 특허 번호 4,676,980), 및 HIV 감염의 치료 (WO 91/00360, WO 92/20373 및 EP 03089)를 위해서 제안되었다. Such antibodies have, for example, have been proposed for targeting (U.S. Patent No. 4,676,980), cells of the immune system, and treatment (WO 91/00360, WO 92/20373, and EP 03089) of HIV infection for the undesirable cell. 개선된 분석법 검출을 위해 각각의 항체 상에 다수의 (동일하거나 상이한) 검출가능한 마커를 제공함으로써 본 발명의 방법에서 이종접합체 항체의 용도가 또한 발견된다. By providing a large number of (same or different) detectable markers on each antibody for improved assay detection in the method of the present invention the use of different types of antibody conjugates it is also found. 이종접합체 항체는 임의의 편리한 가교 방법을 이용하여 제조할 수 있다. Two kinds of bonded antibody can be prepared using any convenient cross-linking methods. 다수의 가교 기술과 함께, 적절한 가교제가 당업계에 주지되어 있고, 미국 특허 번호 4,676,980에 개시되어 있다. Along with a number of cross-linking techniques, and a suitable crosslinking agent known in the art, it is disclosed in U.S. Patent No. 4,676,980.

항체 단편으로부터 이중특이적 항체를 생성시키는 기술이 또한 문헌에 기술되어 있다. The technique of generating bispecific antibodies from antibody fragments have also been described in the literature. 예를 들어, 화학적 연결을 이용하여 이중특이적 항체를 제조할 수 있다. For example, using the chemical connections can be made bispecific antibodies. [Brennan et al., Science 229:81 (1985)]에는 무손상 항체를 단백질분해적으로 절단시켜 F(ab') 2 단편을 생성시키는 방법이 기술되어 있다. [Brennan et al, Science 229: . 81 (1985)] , there is a method to produce by cutting the intact antibody with protein minute pirate F (ab ') 2 fragment described. 이러한 단편을 디티올 착화제인 아비산나트륨의 존재하에 환원시켜, 인접한 디티올들을 안정화시키고 분자간 디술피드 형성을 방지한다. By reduction in the presence of the dithiol complexing agent sodium arsenite to this fragment, a stabilization adjacent dithiols and prevent intermolecular disulfide formation. 그후 생성된 Fab' 단편을 티오니트로벤조에이트 (TNB) 유도체로 전환시킨다. Then it converts the resulting Fab 'fragments by thio nitrobenzoate (TNB) derivatives. 그후 Fab'-TNB 유도체들 중 하나를 메르캅토에틸아민으로의 환원에 의해 Fab'-티올로 재전환시키고 등몰량의 다른 Fab'-TNB 유도체와 혼합하여 이중특이적 항체를 형성시킨다. Then mixed with Fab'-TNB derivative to one of mercaptoethyl reconverted to the Fab'- thiol by reduction and the like other Fab'-TNB derivative of the molar amount of the amine to form the bispecific antibody. 생산된 이중특이적 항체를 효소의 선택적 고정을 위한 작용제로서 사용할 수 있다. The bispecific antibodies produced can be used as agents for the selective fixing of the enzyme.

최근의 진보로 대장균으로부터의 Fab'-SH 단편의 직접적인 회수가 용이해졌고, 이를 화학적으로 커플링시켜 이중특이적 항체를 형성시킬 수 있다. It became easy direct recovery of Fab'-SH fragments from E. coli as recent advances, by coupling it chemically can form bispecific antibodies. [Shalaby et al., J. Exp. [Shalaby et al., J. Exp. Med. Med. 175:217-225 (1992)]에는 완전히 인간화된 이중특이적 항체 F(ab') 2 분자의 생산이 기술되어 있다. 175: 217-225 (1992), there is a fully humanized bispecific antibody F (ab ') 2 molecule of production technology. 각각의 Fab' 단편이 대장균으로부터 별도로 분비되었고, 시험관내에서 지향성으로 화학적 커플링되어, 이중특이적 항체가 형성되었다. Each Fab 'fragment was separately secreted from E. coli, is chemically coupled to the ring orientation in vitro, it was formed with a bispecific antibody. 이렇게 형성된 이중특이적 항체는 ErbB2 수용체를 과발현하는 세포 및 정상적인 인간 T 세포에 결합할 수 있을 뿐만 아니라, 인간 유방 종양 표적에 대한 인간 세포독성 림프구의 용해 활성을 촉발할 수 있었다. Thus formed bispecific antibody was able to not only able to bind to cells and normal human T cells overexpressing the ErbB2 receptor and trigger the lytic activity of human cytotoxic lymphocytes against human breast tumor targets.

재조합 세포 배양물로부터 직접적으로 이중특이적 항체 단편을 제조 및 단리하기 위한 다양한 기술이 또한 기술되었다. Various techniques for making and isolating bispecific antibody fragments directly from recombinant cell culture have also been described. 예를 들어, 류신 지퍼를 사용하여 이중특이적 항체가 생산되었다 (문헌 [Kostelny et al., J. Immunol. 148(5):1547-1553 (1992)]). For instance, it was to produce a bispecific antibody using the leucine zipper (lit. [Kostelny et al, J. Immunol 148 (5):.. 1547-1553 (1992)]). Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩티드를 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 유전자 융합에 의해 연결시켰다. The leucine zipper peptides from the Fos and Jun proteins in the Fab 'portions of two different antibodies by gene fusion were connected. 항체 동종이량체를 힌지 영역에서 환원시켜 단량체를 형성시킨 후, 다시 산화시켜 항체 이종이량체를 형성시켰다. After a homogeneous antibody by reduction of dimer in the hinge region to form monomers, to form the two kinds of antibody dimers by oxidation again. 이러한 방법은 항체 동종이량체의 생산에 또한 이용될 수 있다. This method is homogeneous antibodies can also be used in the production of dimers. [Holliger et al., Proc. [Holliger et al., Proc. Natl. Natl. Acad. Acad. Sci. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)]에 기술된 "디아바디" 기술은 이중특이적 항체 단편의 별법적인 제조 메커니즘을 제공하였다. USA 90: 6444-6448 (1993)] a "dia body" technology described has provided a legal production mechanism by the bispecific antibody fragments. 단편은 동일한 사슬 상의 두 도메인이 쌍을 이루게 하기에는 너무 짧은 링커에 의해 V L 에 연결된 V H 를 포함한다. Fragment comprises a V H connected to a V L by a linker is too short hagieneun constitute the two domains on the same chain pairs. 따라서, 한 단편의 V H 및 V L 도메인이 또다른 단편의 상보적인 V H 및 V L 도메인과 쌍을 이루도록 강요됨으로써, 2개의 항원 결합 부위가 형성된다. Thus, by being forced to fulfill the complementary V H and V L domains of one fragment with a pair of V H and V L domains is another piece, is formed with two antigen-binding sites. 단일쇄 Fv (sFv) 이량체를 사용하여 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 또다른 전략이 또한 보고되었다 (문헌 [Gruber et al., J. Immunol. 152:5368 (1994)] 참조). Another strategy for using the single-chain Fv (sFv) dimers to produce the bispecific antibody fragments have also been reported (as described in [Gruber et al, J. Immunol 152:.. 5368 (1994)] reference).

2가를 초과하는 항체가 구현된다. 2 Add excess antibody is realized. 예를 들어, 삼중특이적 항체를 제조할 수 있다 ([Tutt et al., J. Immunol. 147:60 (1991)]). For example, it is possible to produce a triple-specific antibody ([Tutt et al, J. Immunol 147:.. 60 (1991)]).

6. 다가 항체 6. The multivalent antibody

다가 항체는 항체가 결합하는 항원을 발현하는 세포에 의해 2가 항체보다 빨리 내재화 (및/또는 이화)될 수 있다. The multivalent antibody may be internalized faster than the second antibody (and / or physico) by a cell expressing an antigen to which the antibodies bind. 본 발명의 항체는 3개 이상의 항원 결합 부위가 있는 다가 항체 (IgM 클래스 이외의 것)일 수 있고 (예를 들어 4가 항체), 이는 항체의 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 핵산의 재조합 발현에 의해 쉽게 생산될 수 있다. The antibodies of the invention can be approached in three or more antigen-binding site antibodies (other than IgM class) and (e. G. Tetravalent antibodies), which is readily produced by recombinant expression of nucleic acid encoding the polypeptide chains of the antibody It can be. 다가 항체는 이량체화 도메인 및 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 수 있다. The multivalent antibody can comprise a dimerization domain and three or more antigen binding sites. 바람직한 이량체화 도메인은 Fc 영역 또는 힌지 영역을 포함한다 (또는 이로 구성된다). The preferred dimerization domain comprises an Fc region or a hinge region (or which is configured). 이러한 시나리오에서, 항체는 Fc 영역, 및 Fc 영역에 대해 아미노 말단인 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 것이다. In such a scenario, the antibody will comprise the amino terminus of three or more antigen binding sites for the Fc region, and Fc region. 본원에서 바람직한 다가 항체는 3 내지 약 8개, 바람직하게는 4개의 항원 결합 부위를 포함한다 (또는 이것으로 구성된다). The preferred multivalent antibody herein is from 3 to about 8, preferably comprises four antigen binding sites (or consists of it). 다가 항체는 1개 이상의 폴리펩티드 사슬 (바람직하게는 2개의 폴리펩티드 사슬)을 포함하며, 이때 폴리펩티드 사슬(들)은 2개 이상의 가변 도메인을 포함한다. Multivalent antibody comprises at least one polypeptide chain (and preferably two polypeptide chains), wherein the polypeptide is a chain (s) comprise two or more variable domains. 예를 들어, 폴리펩티드 사슬(들)은 VD1-(X1) n - VD2-(X2) n -Fc [식중, VD1은 제1 가변 도메인이고, VD2는 제2 가변 도메인이고, Fc는 Fc 영역의 한 폴리펩티드 사슬이고, X1 및 X2는 아미노산 또는 폴리펩티드를 나타내고, n은 0 또는 1이다]를 포함할 수 있다. For instance, the polypeptide chain (s) is VD1- (X1) n - VD2- (X2) n -Fc [wherein, VD1 is a first variable domain, VD2 is a second variable domain, Fc is one of the Fc region a polypeptide chain, X1 and X2 represents an amino acid or polypeptide, n may include 0 or 1]. 예를 들어, 폴리펩티드 사슬(들)은 VH-CH1-가요성 링커-VH-CH1-Fc 영역 사슬; For instance, the polypeptide chain (s) is CH1- VH-CH1-flexible linker-Fc region chain -VH; 또는 VH-CH1-VH-CH1-Fc 영역 사슬을 포함할 수 있다. Or it may comprise a VH-CH1-VH-CH1-Fc region chain. 바람직하게는 본원에서의 다가 항체는 적어도 2개 (바람직하게는 4개)의 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드를 추가로 포함한다. Preferably, the multivalent antibody herein may further comprise a light chain variable domain polypeptides of at least two (and preferably four). 본원에서의 다가 항체는, 예를 들어, 약 2개 내지 약 8개의 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드를 포함할 수 있다. Multivalent antibody herein may, for example, comprise from about two to about eight light chain variable domain polypeptides. 여기서 구현된 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 임의적으로, CL 도메인을 추가로 포함한다. The light chain variable domain polypeptides implemented here includes a light chain variable domain, and optionally comprises a, adding a CL domain.

7. 이펙터 기능 조작 7. Effector Function Operation

이펙터 기능과 관련하여, 예를 들어, 항체의 항원-의존적 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체 의존적 세포독성 (CDC)가 강화되도록, 본 발명의 항체를 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. With respect to effector function, e.g., of an antibody antigen-dependent cell-to-mediated cytotoxicity (ADCC) and / or complement dependent cytotoxicity (CDC) is enhanced, it may be desirable to modify the antibody of the invention. 이는 항체의 Fc 영역에 하나 이상의 아미노산 치환을 도입함으로써 달성할 수 있다. This can be achieved by introducing one or more amino acid substitutions in the Fc region of an antibody. 별법적으로 또는 추가적으로, 시스테인 잔기(들)를 Fc 영역에 도입함으로써, 이러한 영역 내에 사슬간 디술피드 결합이 형성되도록 할 수 있다. The introduction of a legal or additionally, cysteine ​​residue (s) in the Fc region, can be such that the inter-chain disulfide bond formation in this region. 이렇게 생성된 동종이량체 항체는 내재화 능력이 개선되고/되거나 보체-매개 세포 사멸 및 항체-의존적 세포형 세포독성 (ADCC)이 증가될 수 있다 (문헌 [Caron et al., J. Exp Med., 176:1191-1195 (1992)] 및 [Shopes, BJ Immunol., 148:2918-2922 (1992)] 참조). The generated homodimer antibody is improved internalization capability and / or complement-dependent cell-type can be increased cytotoxicity (ADCC) (literature [Caron et al, J. Exp Med,-mediated cell killing and antibody. 176: 1191-1195 (1992)] and [Shopes, BJ Immunol, 148:. 2918-2922 (1992) refer). [Wolff et al. [Wolff et al. Cancer Research, 53:2560-2565 (1993)]에 기술된 바와 같은 이종이관능성 가교-링커를 사용하여 항-종양 활성이 강화된 동종이량체 항체를 또한 제조할 수 있다. Cancer Research, 53: 2560-2565 (1993)] a heterogeneous bifunctional cross-linking as described - can be the same type of tumor the active reinforcement also prepared a dimer antibody with a linker, wherein. 별법적으로, 이중 Fc 영역을 갖는 항체를 조작함으로써 보체 용해 및 ADCC 능력을 강화시킬 수 있다 (문헌 [Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design, 3:219-230 (1989)] 참조). Legally, by operating the antibodies with dual Fc regions may be enhanced complement lysis and ADCC capabilities (lit. [Stevenson et al, Anti-Cancer Drug Design, 3.: 219-230 (1989)] Reference) stars. 항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,739,277에 기재된 바와 같이 항체 (특히, 항체 단편) 내로 샐비지 수용체 결합 에피토프를 혼입시킬 수 있다. To increase the serum half-life of the antibody, for example, it may be incorporated into the Sal busy receptor binding epitope into the antibody (especially an antibody fragment) as described in U.S. Patent No. 5,739,277. 본원에 사용된 용어 "샐비지 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기를 증가시키는 것을 담당하는 IgG 분자 (예를 들어, IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 또는 IgG 4 )의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다. As used herein, the term "Sal busy receptor binding epitope" is a Fc region of an IgG molecule (e.g., IgG 1, IgG 2, IgG 3 or IgG 4) that is responsible of increasing the in vivo serum half-life of the IgG molecule epitopes used in the It refers to.

8. 면역접합체 8. The immunoconjugate

본 발명은 세포독성제 예컨대 화학요법제, 성장 억제제, 독소 (예를 들어, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소, 또는 이의 단편), 또는 방사성 동위원소 (즉, 방사성접합체) 및/또는 검출가능한 표지에 접합된 항체를 포함하는 면역접합체에 또한 관련된다. The present invention is a cytotoxic agent, for example a chemotherapeutic agent, a growth inhibitory agent, a toxin (e. G., Bacterial, fungal, plant or animal enzymatically active toxin, or a fragment thereof in origin), or a radioactive isotope (i.e., a radioactive conjugate ) also it relates to immunoconjugates comprising an antibody conjugated to and / or a detectable label.

a. a. 화학요법제 Chemotherapy

이같은 면역접합체의 생성에 유용한 화학요법제가 상기에 기술되어 있다. Useful chemotherapeutic agent in the generation of such immunoconjugates have been described above. 사용될 수 있는 효소적으로 활성인 독소 및 이의 단편으로는 디프테리아 A 사슬, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 사슬 (슈도모나스 아에루기노사( Pseudomonas aeruginosa ) 유래), 리신 A 사슬, 아브린 A 사슬, 모데신 A 사슬, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디( Aleurites fordii ) 단백질, 디안틴 단백질, 파이톨라카 아메리카나( Phytolaca americana ) 단백질 (PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 젤로닌, 미토젤린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센이 포함된다. The enzymatically active toxins and fragments thereof that can be used include diphtheria A chain, diphtheria unbound active fragments, exotoxin A chain (Pseudomonas ah rugi labor (Pseudomonas aeruginosa), derived from) the toxins, ricin A chain, abrin A chain , Modesto Shin A chain, alpha-Sar sour waters we tested formate di (Aleurites fordii) protein, Dian tin protein, pie toll lacquer americana (Phytolaca americana) proteins (PAPI, PAPII, and PAP-S), all know dicarboxylic Curran thiazole (momordica charantia) inhibitor, a Pico Rezin, chroman tin, sapphire or shine Ria operational during include the day-less (sapaonaria officinalis) inhibitors, gel Ronin, Mito jelrin, less trick cytosine, page Norma who, Hainaut azithromycin and tricot tesen. 다양한 방사성핵종이 방사성접합된(radioconjugated) 항체의 생산에 이용가능하다. It is applicable to production of various radionuclides radioactive conjugated (radioconjugated) antibody. 예로는 212 Bi, 131 I, 131 In, 90 Y, 및 186 Re가 포함된다. Examples include 212 Bi, 131 I, 131 In , 90 Y, and 186 Re. 다양한 이관능성 단백질 커플링제 예컨대 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티올)프로피오네이트 (SPDP), 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이관능성 유도체 (예컨대 디메틸 아디프이미데이트 HCl), 활성 에스테르 (예컨대 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드 (예컨대 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물 (예컨대 비스(p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예컨대 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예컨대 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 플루오르 화합물 (예컨대 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 항체와 세포독성제의 접합체가 제조된다. Variety of bifunctional protein coupling agent, for example, N- succinimidyl-3- (2-pyridyl-dithiol) propionate (SPDP), iminothiolane (IT), bifunctional derivatives of imidoesters (such as dimethyl adipimidate HCl), active esters (such as disuccinimidyl suberate), aldehydes (such as glutaraldehyde), bis-azido compounds (such as bis (p- azidobenzoyl) hexanediamine), bis-diazonium derivatives (such as bis - (p- diazonium-benzoyl) - ethylenediamine), diisocyanates (such as toluene 2,6-diisocyanate), and bis-active fluorine compounds (such as 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene) the conjugates of the antibody and cytotoxic agent are made using. 예를 들어, [Vitetta et al., Science, 238:1098 (1987)]에 기술된 바와 같이 리신 면역독소를 제조할 수 있다. For example, it can be prepared [Vitetta et al, Science, 238. 1098 (1987)] the ricin immunotoxin as described. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아나토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)은 방사성뉴클레오티드를 항체에 접합시키기 위한 대표적인 킬레이트화제이다 (WO 94/11026 참조). The carbon 14-labeled 1-isothiocyanato-3-methyldiethylene triaminepentaacetic acid (MX-DTPA) is an exemplary chelating agent for bonding the radionucleotide to the antibody (see WO 94/11026).

1가지 이상의 소분자 독소, 예컨대 칼리키아마이신, 메이탄시노이드, 트리코테센 및 CC1065 및 독소 활성이 있는 이러한 독소들의 유도체와 항체의 접합체 또한 본원에서 구현된다. One or more of the conjugates of small molecule toxins such as calicheamicin, a maytansinoid, and derivatives of antibody tricot tesen and CC1065, and these toxins that have toxin activity are also implemented in the present application.

B. LY6 결합 올리고펩티드 B. LY6 binding oligopeptides

본 발명의 LY6 결합 올리고펩티드는 본원에 기술된 바와 같은 LY6 폴리펩티드에 결합하는, 바람직하게는 특이적으로 결합하는 올리고펩티드이다. LY6 binding oligonucleotide according to the present invention the peptide is a peptide that binds to the oligonucleotide to the specific LY6, preferably that binds to the polypeptide ever as described herein. LY6 결합 올리고펩티드는 공지된 올리고펩티드 합성 방법을 사용하여 화학적으로 합성될 수 있거나, 또는 재조합 기술을 사용하여 제조 및 정제될 수 있다. LY6 binding oligopeptides are known oligonucleotides may be prepared using peptide synthesis and purification, or can be synthesized chemically, or by using recombinant techniques. LY6 결합 올리고펩티드는 길이가 일반적으로 아미노산 적어도 약 5개이고, 별법적으로는 길이가 아미노산 적어도 약 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개, 33개, 34개, 35개, 36개, 37개, 38개, 39개, 40개, 41개, 42개, 43개, 44개, 45개, 46개, 47개, 48개, 49개, 50개, 51개, 52개, 53개, 54개, 55개, 56개, 57개, 58개, 59개, 60개, 61개, 62개, 63개, 64개, 65개, 66개, 67개, 68개, 69개, 70개, 71개, 72개, 73개, 74개, 75개, 76개, 77개, 78개, 79개, 80개, 81개, 82개, 83개, 84개, 85개, 86개, 87개, 88개, 89개, 90개, 91개, 92개, 93개, 94개, 95개, 96개, 97개, 98개, 99개, 또는 100개 또는 그 이상이며, 이때 이같은 올리고펩티드는 본원에 기술된 바와 같은 LY6 폴리펩티드에 결합, 바람직하게는 특이적으로 결합할 수 LY6 binding oligopeptides of length generally amino acids, at least about five pieces, legal from about 6 in length amino acid, at least, seven, eight, nine, 10, 11, 12, 13, 14 , 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64 , 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81 dog, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, or 100 or more, and wherein such oligopeptides are coupled to a LY6 polypeptide as described herein, preferably capable of binding specifically to 있다. have. LY6 결합 올리고펩티드는 주지된 기술을 사용하여 과도한 실험없이 확인할 수 있다. LY6 binding oligopeptides may be identified by using well known techniques without undue experimentation. 이와 관련하여, 폴리펩티드 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고펩티드에 대해 올리고펩티드 라이브러리를 스크리닝하는 기술은 당업계에 주지되어 있는 것으로 인지된다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,556,762, 5,750,373, 4,708,871, 4,833,092, 5,223,409, 5,403,484, 5,571,689, 5,663,143; PCT 공개 번호 WO 84/03506 및 WO84/03564; [Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:3998-4002 (1984)]; [Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:178-182 (1985)]; [Geysen et al., Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986)]; [Geysen et al., J. Immunol. Meth., 102:259-274 (1987)]; [Schoofs et al., J. Immunol., 140:611-616 (1988)], [Cwirla, SE et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6378 (1990)]; [Lowman, HB et al. Biochemistry. 30:10832 (1991)]; [Clackson, T. et al. Nature. 352:624 (1991)]; [Marks, JD et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]; [Kang, AS et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88:8363 (1991)], 및 [Smith, GP, C In this regard, oligonucleotide for peptide oligonucleotide capable of specific binding to a polypeptide target is recognized as is well known in the art techniques for screening a peptide library (e.g., U.S. Patent Nos. 5,556,762, 5,750,373, 4,708,871, 4,833,092 , 5,223,409, 5,403,484, 5,571,689, 5,663,143; PCT Publication Nos. WO 84/03506 and WO84 / 03564; [Geysen et al, Proc Natl Acad Sci USA, 81:..... 3998-4002 (1984)]; [Geysen et al, Proc Natl Acad Sci USA, 82:....... 178-182 (1985)]; [Geysen et al, Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986)]; [Geysen et al, J. Immunol Meth, 102:.. 259-274 (1987)]; [Schoofs et al, J. Immunol, 140:...... 611-616 (1988)], [Cwirla, SE et al Proc Natl Acad Sci . USA, 87: 6378 (1990)]; [Lowman, HB et al Biochemistry 30:.. 10832 (1991)]; [Clackson, T. et al Nature 352:.. 624 (1991)]; [Marks, JD ... et al, J. Mol Biol, 222: 581 (1991)]; [Kang, AS et al Proc Natl Acad Sci USA 88:...... 8363 (1991)], and [Smith, GP, C urrent Opin. Biotechnol., 2:668 (1991)] 참조). . Urrent Opin Biotechnol, 2:. 668 (1991)], see).

이와 관련하여, 박테리오파지 (파지) 디스플레이는 대형 올리고펩티드 라이브러리를 스크리닝하여 폴리펩티드 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 이러한 라이브러리의 구성원(들)을 확인하도록 하는 주지된 기술들 중 하나이다. In this regard, bacteriophage (phage) display is one of a well-known technique to verify that a member (s) of those libraries capable of specific binding to a polypeptide target by the large up screening peptide libraries. 파지 디스플레이는 변이체 폴리펩티드가 박테리오파지 입자의 표면 상의 코트 단백질에 대한 융합 단백질로서 디스플레이되는 기술이다 ([Scott, JK and Smith, GP (1990) Science. 249: 386]). Phage display is a technique that is a variant polypeptide display as a fusion protein on the coat protein on the surface of bacteriophage particles ([Scott, JK and Smith, GP (1990) Science 249:. 386]). 파지 디스플레이의 활용은 선택적으로 무작위화된 단백질 변이체들 (또는 무작위로 클로닝된 cDNA들)의 대형 라이브러리가 표적 분자에 높은 친화도로 결합하는 서열들에 대해 신속하고 효율적으로 분류될 수 있다는 사실에 의존한다. Use of phage display is selectively randomized protein variants of rapidly for sequences that bind a large library roads high in the target molecule affinity (or randomly cDNA in cloning a) depends on the fact that it can be efficiently divided into . 파지 상의 펩티드 ([Cwirla, SE et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87:6378]) 또는 단백질 ([Lowman, HB et al. (1991) Biochemistry. 30:10832]; [Clackson, T. et al. (1991) Nature. 352:624]; [Marks, JD et al. (1991), J. Mol. Biol., 222:581]; [Kang, AS et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:8363]) 라이브러리의 디스플레이는 특이적 결합 성질이 있는 것에 대해 수백만개의 폴리펩티드 또는 올리고펩티드를 스크리닝하는데 사용되어 왔다 ([Smith, GP (1991) Current Opin. Biotechnol., 2:668]). Peptides on phage ([Cwirla, SE et al (1990) Proc Natl Acad Sci USA 87: 6378......]) Or protein ([Lowman, HB et al (1991) Biochemistry 30:.. 10832]; [ .. Clackson, T. et al (1991) Nature 352: 624]; [Marks, JD et al (1991), J. Mol Biol, 222:... 581]; [Kang, AS et al (1991). .... Proc Natl Acad Sci USA, 88: 8363]) display library has been used for screening millions of polypeptides or oligopeptides for what the specific binding properties ([Smith, GP (1991) Current Opin. Biotechnol, 2:. 668]). 무작위 돌연변이체의 파지 라이브러리를 분류하는 것은 다수의 변이체를 구축하고 증식시키기 위한 전략, 표적 수용체를 사용하는 친화성 정제 절차, 및 결합 강화의 결과를 평가하는 수단을 필요로 한다. Classifying the phage libraries of random mutants it requires a means of evaluating the results of a number of affinity purification procedure using the strategy, the target receptor for building and proliferation variants, and the combined enhanced. 미국 특허 번호 5,223,409, 5,403,484, 5,571,689, 및 5,663,143. US Patent No. 5,223,409, 5,403,484, 5,571,689, and 5,663,143.

대부분의 파지 디스플레이 방법에서 필라멘트형 파지가 사용되어 왔지만, 람다형 파지 디스플레이 시스템 (WO 95/34683; US 5,627,024), T4 파지 디스플레이 시스템 ([Ren et al., Gene. 215: 439 (1998)]; [Zhu et al., Cancer Research. 58(15): 3209-3214 (1998)]; [Jiang et al., Infection & Immunity, 65(11): 4770-4777 (1997)]; [Ren et al., Gene, 195(2):303-311 (1997)]; [Ren, Protein Sci., 5: 1833 (1996)]; [Efimov et al., Virus Genes. 10: 173 (1995)]) 및 T7 파지 디스플레이 시스템 ([Smith and Scott, Methods in Enzymology. 217: 228-257 (1993)]; US 5,766,905)가 또한 공지되어 있다. Most came is a filamentous phage in the phage display method, the lambda-type phage display systems (WO 95/34683; US 5,627,024), T4 phage display systems ([Ren et al, Gene 215:.. 439 (1998)]; [. Zhu et al, Cancer Research 58 (15):. 3209-3214 (1998)]; [Jiang et al, Infection & Immunity, 65 (11):. 4770-4777 (1997)]; [Ren et al. , Gene, 195 (2): 303-311 (1997)]; [Ren, Protein Sci, 5:. 1833 (1996)]; [Efimov et al, Virus Genes 10:.. 173 (1995)]) and T7 phage display system:; is ([Smith and Scott, Methods in Enzymology 217. 228-257 (1993)] US 5,766,905) are also known.

기본적인 파지 디스플레이 개념의 다수의 기타 개선물 및 변형물이 현재 개발되어 있다. A number of other pieces of gifts and variations of the basic phage display concept are currently under development. 이러한 개선물들은 선택된 표적 분자에의 결합에 대해 펩티드 라이브러리를 스크리닝하는 디스플레이 시스템의 능력 및 원하는 성질에 대해 이러한 단백질들을 스크리닝하는 잠재력이 있는 기능성 단백질을 디스플레이하는 능력을 강화시킨다. Enhance the ability to display functional proteins with the potential of screening these proteins for desired properties and the ability of display systems to screen peptide libraries for binding to selected target molecules such waters improved. 파지 디스플레이 반응을 위한 조합형 반응 장치가 개발되었고 (WO 98/14277), 파지 디스플레이 라이브러리가 2분자성 상호작용 (WO 98/20169; WO 98/20159) 및 구속된 나선형 펩티드의 성질 (WO 98/20036)을 분석 및 제어하는데 사용되었다. The reaction was combined devices for phage display reactions developed (WO 98/14277), phage display libraries are 2 molecular interactions (WO 98/20169; WO 98/20159) and properties of constrained helical peptides (WO 98/20036 ) it was used in the analysis and control. WO 97/35196에는 파지 디스플레이 라이브러리를 리간드가 표적 분자에 결합할 제1 용액 및 친화성 리간드가 표적 분자에 결합하지 않을 제2 용액과 접촉시켜 결합 리간드를 선택적으로 단리하는, 친화성 리간드를 단리하는 방법이 기술되어 있다. WO 97/35196 it is that the ligand is a phage display library to the first solution and the affinity ligand to bind to the target molecule into contact with a second solution not bound to target molecules to isolate affinity ligands, and selectively isolating the bound ligand this method is described. WO 97/46251에는 무작위 파지 디스플레이 라이브러리를 친화성-정제된 항체로 바이오패닝(biopanning)한 후, 결합 파지를 단리하고, 이어서 마이크로플레이트 웰을 사용하는 마이크로패닝(micropanning) 프로세스로 고친화성 결합 파지를 단리하는 방법이 기술되어 있다. WO 97/46251 is a random phage display library affinity - after the bio panning (biopanning) in a purified antibody, an isolated binding phage, followed by the chemical conversion binding phage repairing the micro panning (micropanning) process using microplate wells the method for isolating is described. 친화성 태그로서의 황색 포도상구균( Staphylococcus aureus ) 단백질 A의 용도가 또한 보고되었다 ([Li et al. (1998) Mol Biotech., 9:187]). The use of Staphylococcus aureus as an affinity tag (Staphylococcus aureus) protein A has also been reported ([Li et al (1998) Mol Biotech, 9:.. 187]). WO 97/47314에는 파지 디스플레이 라이브러리일 수 있는 조합형 라이브러리를 사용하여 효소 특이성을 구별하기 위해 기질 차감 라이브러리를 사용하는 것이 기술되어 있다. WO 97/47314 discloses the use of substrate subtraction libraries to use the recombinant library, which may be a phage display libraries to distinguish enzyme specificities. 파지 디스플레이를 사용하여 세제에서 사용하기에 적절한 효소를 선별하는 방법이 WO 97/09446에 기술되어 있다. A method for using phage display screening a suitable enzymes for use in detergents have been described in WO 97/09446. 특이적 결합 단백질을 선별하는 추가적인 방법이 미국 특허 번호 5,498,538, 5,432,018, 및 WO 98/15833에 기술되어 있다. Additional methods of selecting specific binding proteins are described in U.S. Patent Nos. 5,498,538, 5,432,018, and WO 98/15833.

펩티드 라이브러리를 생성시키고 이러한 라이브러리를 스크리닝하는 방법이 미국 특허 번호 5,723,286, 5,432,018, 5,580,717, 5,427,908, 5,498,530, 5,770,434, 5,734,018, 5,698,426, 5,763,192, 및 5,723,323에 또한 개시되어 있다. The method of generating peptide libraries and screening these libraries are also disclosed in U.S. Patent Nos. 5,723,286, 5,432,018, 5,580,717, 5,427,908, 5.49853 million, 5,770,434, 5,734,018, 5,698,426, 5,763,192, and 5,723,323.

한 양상에서, 본 발명은 LYPD5 폴리펩티드에 대한 리간드에 관한 것이다. In one aspect, the invention relates to ligands for the LYPD5 polypeptide. 도 32는 형질감염되지 않은 COS 세포 (A), 및 GLG-1으로 형질감염되고 LYPD5-Fc 단백질로 염색된 COS 세포를 나타낸다. 32 is transformed and transfected into COS cells (A), GLG-1 and uninfected shows the COS cells stained with LYPD5-Fc protein. 한 실시양태에서, LYPD5에 대한 리간드는 서열 18, 20, 22, 또는 24 (각각 서열 17, 19, 21, 또는 23으로 제시된 핵산에 의해 코딩됨)에 제시된, 골지 복합체에 위치하는 당단백질 1 (GLG-1) 또는 E-셀렉틴 1 (ESL-1) 폴리펩티드이다. In one embodiment, the ligand for LYPD5 is a glycoprotein that shown in SEQ ID NO: 18, 20, (which are shown in SEQ ID 17, 19, 21, or 23, encoded by the nucleic acid set forth in) 22, or 24, located in the Golgi complex 1 ( GLG-1) or E- selectin 1 (ESL-1) is a polypeptide. 또다른 실시양태에서, GLG-1 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 17, 19, 21, 또는 23의 15개 이상, 25개 이상, 50개 이상, 100개 이상, 250개 이상, 500개 이상, 750개 이상, 1000개 이상, 1250개 이상, 1500개 이상, 1750개 이상, 2000개 이상, 2040개 이상, 2090개 이상, 2150개 이상, 2200개 이상, 2300개 이상, 2400개 이상, 2500개 이상, 2600개 이상, 2700개 이상, 2800개 이상, 2900개 이상, 3000개 이상, 3100개 이상, 3200개 이상, 3300개 이상, 3400개 이상, 3500개 이상, 3600개 이상, 3700, 또는 3720개 이상의 인접한 뉴클레오티드를 포함하거나, 또는 GLG-1을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 17, 19, 21, 또는 23을 포함한다. In another embodiment, the polynucleotide encoding a GLG-1 polypeptide is SEQ ID NO: 17, 19, 21, or more than 23 15 or more, 25, 50 or more, 100 or more, more than 250, more than 500, 750, at least 1000, more than 1,250, more than 1,500, more than 1,750, 2,000 or more, 2,040 or more, 2,090 or more, more than 2,150, more than 2,200, more than 2,300, more than 2400, 2500 or more, 2,600 or more, more than 2,700, more than 2,800, 2,900, at least 3,000, at least 3,100, 3,200, at least 3,300, more than 3,400, more than 3,500, more than 3600, 3700 or 3720 and a contiguous nucleotides or more, or a polynucleotide encoding a GLG-1 comprises SEQ ID NO: 17, 19, 21, or 23. 한 실시양태에서, GLG-1을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 (서열 17, 19, 21, 또는 23) 또는 이의 단편에 결합하는 폴리뉴클레오티드는 GLG-1 폴리펩티드 또는 이의 단편에 대한 서열 동일성이 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 99% 이상 또는 100%이다. In one embodiment, the polynucleotide encoding a GLG-1 (SEQ ID NO: 17, 19, 21, or 23) or a polynucleotide that binds to the fragment thereof is a GLG-1 polypeptide or sequence identity to a fragment thereof at least 75%, 80 % or higher, 85% or more, at least 90%, at least 95%, 97%, 99% or more, or 100%. 한 실시양태에서, GLG-1 폴리펩티드는 서열 18, 20, 22, 또는 24의 10개 이상, 25개 이상, 50개 이상, 75개 이상, 100개 이상, 125개 이상, 150개 이상, 175개 이상, 200개 이상, 225개 이상, 250개 이상, 275개 이상, 300개 이상, 325개 이상, 350개 이상, 400개 이상, 450개 이상, 500개 이상, 550개 이상, 600개 이상, 650개 이상, 700개 이상, 750개 이상, 800개 이상, 850개 이상, 900개 이상, 950개 이상, 1000개 이상, 1050개 이상, 1100개 이상, 1150개 이상, 또는 1200개 이상의 인접한 아미노산을 포함하거나, 또는 GLG-1 폴리펩티드는 서열 18, 20, 22, 또는 24를 포함한다. In one embodiment, GLG-1 polypeptide is SEQ ID NO: 18, 20, 22, or 10 or more of 24, over 25, over 50, over 75, 100 or more, 125 or more, 150, 175 or more, more than 200, more than 225, more than 250, more than 275, more than 300, more than 325, more than 350, more than 400, more than 450, more than 500, more than 550, more than 600, 650 or more, 700 or more, at least 750, at least 800, at least 850, at least 900, at least 950, at least 1000, at least 1050, at least 1100, at least 1150, or at least 1200 contiguous amino acids to include, or GLG-1 polypeptide comprises SEQ ID NO: 18, 20, 22, or 24. GLG-1 또는 ESL-1은 중성구 상에서 발현되고, 조직 내로의 중성구의 분출에 수반되는 것으로 여겨지며, 염증에서 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다 (거명에 의해 전체적으로 본원에 포함된 [Hidalgo et al. (2007) Immunity, 26(4): 477-489] 참조). GLG-1 or ESL-1 is expressed on neutrophils, considered to be associated with neutrophil eruptions into the tissue, it is considered to play an important role in inflammation (as by reference entirely incorporated herein [Hidalgo et al. (2007 ) Immunity, 26 (4): see 477-489). GLG-1 또는 ESL-1에는 14개의 시스테인 풍부 GLG1 도메인이 있다. GLG1 or ESL-1 has 14 cysteine-rich domain GLG1. 세포외 도메인 (ECD)이 길며, 하기에 기술된 바와 같이, GLG-1 ECD의 변이체 또는 단편이 LYPD5에 결합하는 능력이 있는 것으로 발견되었다. The extracellular domain (ECD) is longer, as described below, a variant or fragment of GLG-1 ECD were found to have the ability to bind to LYPD5.

또다른 실시양태에서, LYPD5 리간드는 본원에 기술된 GLG-1 또는 ESL-1 분자의 변이체 또는 단편이다. In another embodiment, LYPD5 ligand is a variant or fragment of GLG-1 or ESL-1 molecule described herein. 도 33A-B에 나타난 바와 같이, GLG-1 또는 ESL-1은 단편 1, 2, 3, 및 4로 고려될 수 있고, 실시예 11에 기술된 바와 같이, 4개의 단편 중 임의의 하나가 LYPD5 결합에 충분하다. As shown in 33A-B, GLG-1 or ESL-1 is a fragment 1, 2, 3, and with 4 can be considered, as described in Example 11, any one of the four fragments are LYPD5 it is enough to combine.

또다른 실시양태에서, LYPD5 리간드는 단일 GLG-1 도메인인 GLG-1 또는 ESL-1의 변이체 또는 단편이다. In another embodiment, LYPD5 ligand is a variant or fragment of GLG-1 or ESL-1 is a single GLG-1 domain. 도 34A-B에 나타난 바와 같이, GLG-1은 다수의 GLG-1 도메인으로 구성되고, 실시예 11에 기술된 바와 같이, 단일 GLG-1 도메인이 LYPD5 결합에 충분하다. As shown in Fig. 34A-B, GLG-1 is composed of multiple GLG-1 domain, as described in Example 11, it is sufficient a single GLG-1 domains are LYPD5 binding.

또다른 실시양태에서, LYPD5 리간드는 LYPD5에 특이적인 GLG-1 또는 ESL-1의 변이체 또는 단편이다. In another embodiment, LYPD5 ligand is a specific variant or fragment of GLG-1 or ESL-1 for LYPD5. 도 35A-B에 나타난 바와 같이, GLG-1은 도메인 26-114, 도메인 115, 및 도메인 150을 포함하고, 실시예 11에 기술된 바와 같이, 도메인 115는 LYPD5에 결합하지만, 도메인 26-114는 LYPD5에 결합하지 않는다. As shown in FIG. 35A-B, GLG-1 is a domain 115 as described include domains 26-114, domain 115, and domain 150, and described in Example 11 is coupled to the LYPD5 but domains 26-114 is It does not bind to LYPD5.

LY6 패밀리 구성원에 대한 변이체가 본 발명에서 구현되는 것과 동일한 방식으로 GLG-1의 변이체가 본 발명에서 구현된다. In the same manner as the variants for LY6 family members is implemented in the present invention are variants of GLG-1 is implemented in the present invention.

C. 폴리펩티드 변이체 C. Polypeptide Variants

본원에 기술된 폴리펩티드, 항체 및 LY6 결합 폴리펩티드에 더하여, 본원에서 본 발명과 함께 사용하기 위해 이같은 분자들의 변이체가 제조될 수 있다는 것이 구현된다. In addition to the polypeptides, antibodies and LY6 binding polypeptides described herein, it is realized that there are variants of such molecules can be prepared for use with the invention herein. 이같은 변이체는 적합한 뉴클레오티드 변화를 코딩 DNA 내로 도입함으로써, 및/또는 원하는 항체 또는 폴리펩티드의 합성에 의해 제조할 수 있다. Such variants may be produced by the introduction of the appropriate nucleotide changes into the encoding DNA, and / or a desired antibody or polypeptide synthesis. 당업자는 아미노산 변화로 이러한 분자들의 번역후 프로세스가 변경될 수 있다는 것, 예컨대 글리코실화 부위의 수 또는 위치를 변화시키는 것 또는 막 고정 특성을 변경시키는 것을 인식할 것이다. Those skilled in the art will recognize that the ability to change the post-translational processes of these molecules of the amino acid changes, e.g., change to or membrane anchor property of changing the number or position of glycosylation sites.

예를 들어, 미국 특허 번호 5,364,934에 예를 들어 기재된 보존성 및 비-보존성 돌연변이에 대한 기술 및 가이드라인 중 임의의 것을 사용하여, 아미노산 서열에서의 변이가 이루어질 수 있다. For example, U.S. Patent No. 5,364,934, for example according to the shelf stability and non-using any of the techniques and guidance for the conservative mutant line may be a mutation in the amino acid sequence is made. 변이는 천연 서열과 비교하여 아미노산 서열에서의 변화를 초래하는, 아미노산 서열을 코딩하는 하나 이상의 코돈의 치환, 결실, 삽입일 수 있다. Variations may be a substitution, deletion, insertion of one or more codons encoding an amino acid sequence that results in a change in amino acid sequence compared to the native sequence. 임의적으로, 변이는 당해 아미노산의 하나 이상의 도메인에서의 하나 이상의 아미노산의 임의의 다른 아미노산으로의 치환에 의한 것이다. Optionally, the variation is by substitution of other amino acids in any of one or more amino acids at one or more of the amino acid domains. 원하는 활성에 불리하게 영향을 미치지 않으면서 어느 아미노산 잔기가 삽입, 치환 또는 결실될 수 있는지를 결정하는데 있어서의 안내는 당해 아미노산 서열의 서열을 공지된 상동성 단백질 분자와 비교하고 상동성이 높은 영역에서 이루어진 아미노산 서열 변화의 수를 최소화시킴으로써 확인될 수 있다. The one without adversely affecting the desired activity, the amino acid residue insert, from a substituted or guide in determining whether to be deleted are compared with the homologous protein molecules known the sequences of the amino acid sequence and the high homology region It can be ascertained by minimizing the number of amino acid sequence changes made. 아미노산 치환은 하나의 아미노산을 구조적 및/또는 화학적 성질이 유사한 또다른 아미노산으로 교체하는 것, 예컨대 류신을 세린으로 교체하는 것, 즉 보존성 아미노산 교체의 결과일 수 있다. Amino acid substitution is to replace the to replace one amino acid with another amino acid and structural and / or chemical properties similar to, for example, leucine by serine, that may be a result of conservative amino acid substitution. 삽입 또는 결실은 임의적으로 아미노산 약 1 내지 5개의 범위 내일 수 있다. Insertion or deletion may optionally tomorrow amino acids from about 1 to 5 range. 서열에서의 아미노산의 삽입, 결실 또는 치환을 체계적으로 만들고 생성된 변이체를 전장 또는 성숙형 천연 서열이 나타내는 활성에 대해 시험함으로써, 허용되는 변이가 결정될 수 있다. By testing for the insertion of the amino acids in the sequence, a deletion or an active variant produced is created and substituted systematically indicated by the full-length or mature native sequence, an acceptable variation can be determined.

다양한 폴리펩티드의 단편이 본원에서 제공된다. A variety of polypeptide fragments are provided herein. 이같은 단편은, 예를 들어, 전장 천연 항체 또는 단백질과 비교했을 때, N-말단 또는 C-말단에서 말단절단될 수 있거나, 또는 내부 잔기가 결여될 수 있다. Such fragments may, for example, compared to the full-length native antibody or protein, or may be cut in the end N- terminal or C- terminal, or internal residues can be missing. 원하는 생물학적 활성에 필수적이지 않은 아미노산 잔기가 결여된 이같은 단편 또한 개시된 방법에서 유용하다. Such fragments of the amino acid residues that are not essential for a desired biological activity are also useful in the disclosed method it lacks.

상기 폴리펩티드 단편은 다수의 통상적인 기술 중 임의의 것을 사용하여 제조할 수 있다. The polypeptide fragments can be prepared using any of a number of conventional techniques. 원하는 펩티드 단편을 화학적으로 합성할 수 있다. So as to produce a desired peptide fragment chemically. 별법적인 접근법에는 효소에 의한 소화에 의해, 예를 들어, 특정 아미노산 잔기에 의해 규정되는 부위에서 단백질을 절단하는 것으로 공지된 효소로 단백질을 처리함으로써, 또는 DNA를 적절한 제한 효소로 절단하고 원하는 단편을 단리함으로써 이같은 단편을 생성시키는 것이 수반된다. By digestion by, the enzyme-specific legal approach, for example, to by treating the protein with a known enzyme by cutting the protein at sites defined by particular amino acid residues, or fragments cut and optionally the DNA with suitable restriction enzymes it is accompanied by isolated to produce such fragments. 또다른 적절한 기술에는 중합효소 연쇄 반응 (PCR)에 의해 원하는 단편을 코딩하는 DNA 단편을 단리하고 증폭시키는 것이 수반된다. Another suitable technique involves isolating that the DNA fragment encoding the desired fragment by polymerase chain reaction (PCR), and amplification. DNA 단편의 원하는 말단을 규정짓는 올리고뉴클레오티드가 PCR에서 5' 및 3' 프라이머에서 사용된다. Oligonucleotides that define the desired ends of the fragment DNA nucleotides are used in the 5 'and 3' primers in the PCR. 바람직하게는, 이같은 단편은 상응하는 전장 분자와 하나 이상의 생물학적 및/또는 면역학적 활성을 공유한다. Preferably, such fragments share the corresponding full-length molecule, and at least one biological and / or immunological activity.

특정 실시양태에서, 당해 보존성 치환이 바람직한 치환이라는 표제 하에 하기 표 6에서 제시된다. In certain embodiments, are presented in Table 6 under the heading of preferred substitutions are conservative substitutions art. 이같은 치환으로 생물학적 활성이 변하게 되면, 표 6에서 예시적 치환으로 명명된 또는 아미노산 클래스와 관련하여 하기에 추가로 기술되는 바와 같은 더욱 실질적인 변화가 도입되고, 원하는 변이체를 확인하기 위해 생성물이 스크리닝된다. If a such a substitution changes the biological activity, the more substantial changes, as described further below in connection with the or an amino acid class named as exemplary substitutions in Table 6 was introduced, the product is screened to identify the desired variants.

Figure 112009057712971-pct00022

LY6 폴리펩티드의 기능 또는 면역학적 신원에서의 실질적인 변화는 (a) 예를 들어 시트 또는 나선 형상과 같은, 치환 영역 내의 폴리펩티드 골격의 구조, (b) 표적 부위에서의 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 부피(bulk)를 유지하는 것에 대한 효과가 현저하게 상이한 치환을 선별함으로써 달성된다. LY6 substantial change in polypeptide function or immunological identity of the: (a) For example, a sheet or structure of the polypeptide backbone in the same, a substituted area and the spiral, (b) the charge or hydrophobicity of the molecule at the target site, or (c ) it is effective for maintaining the volume (bulk) of the side chain is accomplished by selecting a different substitution remarkably. 천연 발생 잔기는 공통적인 측쇄 성질을 기초로 하기 군으로 분류될 수 있다: Naturally occurring residues may be divided into groups based on common side-chain properties as to:

(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (1) hydrophobic: norleucine, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (2) neutral hydrophilic: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

(3) 산성: Asp, Glu; (3) acidic: Asp, Glu;

(4) 염기성: His, Lys, Arg; (4) basic: His, Lys, Arg;

(5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; (5) residues that influence chain orientation: Gly, Pro; And

(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe. (6) aromatic: Trp, Tyr, Phe.

비-보존적 치환은 이러한 클래스들 중의 하나의 구성원을 또다른 클래스로 교환하는 것을 수반할 것이다. Non-conservative substitutions will entail exchanging a member of one of these classes with another class. 이같은 치환된 잔기 또한 보존성 치환 부위 내로, 더욱 바람직하게는 나머지 (보존되지 않은) 부위 내로 도입될 수 있다. Such substituted residues also into the conservative substitution sites, can be introduced into more preferably the remaining portion (non-preserved).

변이는 당업계에 공지된 방법 예컨대 올리고뉴클레오티드-매개 (부위-지정) 돌연변이유발, 알라닌 스캐닝, 및 PCR 돌연변이유발을 사용하여 이루어질 수 있다. It can be accomplished using mutagenesis, alanine scanning, and PCR mutagenesis variations are known in the art, for example oligo-nucleotide-mediated (specified area). 부위-지정 돌연변이유발 ([Carter et al., Nucl. Acids Res., 13:4331 (1986)]; [Zoller et al., Nucl. Acids Res., 10:6487 (1987)]), 카세트 돌연변이유발 ([Wells et al., Gene, 34:315 (1985)]), 제한 선별 돌연변이유발 ([Wells et al., Philos. Trans. R. Soc. London SerA. 317:415 (1986)]) 또는 기타 공지된 기술을 클로닝된 DNA 상에 수행하여, 항-LY6 분자를 생산할 수 있다. Site-directed mutagenesis ([Carter et al, Nucl Acids Res, 13: 4331 (1986)...]; [Zoller et al, Nucl Acids Res, 10: 6487 (1987)...]), Cassette mutagenesis ([Wells et al, Gene, 34:. 315 (1985)]), restriction selection mutagenesis ([Wells et al, Philos Trans R. Soc London SerA 317:..... 415 (1986)]) or other by performing the techniques known in the cloned DNA, and can produce an anti--LY6 molecule.

스캐닝 아미노산 분석을 또한 사용하여, 인접 서열을 따라 하나 이상의 아미노산을 확인할 수 있다. Also used to scanning amino acid analysis, you can identify one or more amino acids along a contiguous sequence. 바람직한 스캐닝 아미노산은 비교적 작은 중성 아미노산이다. The preferred scanning amino acids are relatively small neutral amino acid. 이같은 아미노산에는 알라닌, 글리신, 세린 및 시스테인이 포함된다. Such amino acids include alanine, glycine, serine and cysteine. 베타-탄소 너머의 측쇄가 삭제되고, 변이체의 주쇄 형상을 덜 변형시킬 것 같기 때문에, 이러한 군 중에서 알라닌이 전형적으로 바람직한 스캐닝 아미노산이다 ([Cunningham and Wells, Science, 244: 1081-1085 (1989)]). Beta-carbon of the side-chain beyond being removed, due to the same will be less deformed shape of the main chain variants, Alanine is typically a preferred scanning amino acid among this group ([Cunningham and Wells, Science, 244: 1081-1085 (1989)] ). 가장 통상적인 아미노산이기 때문에, 알라닌이 또한 전형적으로 바람직하다. Since the most common amino acid, alanine is also typically preferred. 게다가, 알라닌은 매립된 위치 및 노출된 위치 양쪽 모두에서 빈번하게 발견된다 ([Creighton, The Proteins, (WH Freeman & Co., NY)]; [Chothia, J. Mol. Biol., 150:1 (1976)]). Further, alanine is frequently found in both of the embedding position and the exposure position ([Creighton, The Proteins, (WH Freeman & Co., NY)]; [Chothia, J. Mol Biol, 150:.. 1 ( 1976)). 알라닌 치환으로 적당한 양의 변이체가 산출되지 않으면, 이소테릭(isoteric) 아미노산이 사용될 수 있다. If the proper amount of the mutant with alanine substitutions are not calculated, the soterik (isoteric) has the amino acid can be used.

LY6 폴리펩티드의 적합한 형상을 유지하는데 수반되지 않는 임의의 시스테인 잔기가 또한 치환되어 (일반적으로 세린으로 치환됨), 분자의 산화적 안정성이 개선되고 비정상적인 가교가 방지될 수 있다. Any cysteine ​​residue not involved in maintaining the proper shape of the LY6 polypeptide are also substituted (typically substituted with serine), it can be improved oxidative stability of the molecule and prevent an abnormal cross-linking. 역으로, 시스테인 결합(들)이 이같은 분자에 부가되어 이의 안정성이 개선될 수 있다 (특히, 항체가 Fv 단편과 같은 항체 단편인 경우). Conversely, cysteine ​​bond (s) are added to these molecules, the stability thereof can be improved (in particular, when the antibody is an antibody fragment such as an Fv fragment).

특히 바람직한 유형의 치환 변이체에는 모 항체 (예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 하나 이상의 초가변 영역 잔기가 치환되는 것이 수반된다. A particularly preferred type of substitution variant involves that the parent antibody one or more hypervariable region residues of (e. G., Humanized or human antibody) is replaced. 일반적으로, 추가적인 개발용으로 선별된 생성된 변이체(들)는 이들이 유래되는 모 항체에 비해 생물학적 성질이 개선될 것이다. Generally, the resulting variant (s) selected for further development will have improved biological properties relative to the parent antibody to which they are derived. 이같은 치환 변이체를 생성시키는 간편한 방법은 파지 디스플레이를 이용한 친화도 성숙이다. An easy way of generating such substitutional variants is affinity maturation using phage display. 간략하게, 몇몇 초가변 영역 부위 (예를 들어, 6 내지 7개 부위)가 각각의 부위에서 모든 가능한 아미노산 치환이 생성되도록 돌연변이된다. Briefly, several hypervariable region sites (e.g., 6 to 7 sites) are mutated to generate all possible amino acid substitutions at each site. 이렇게 생성된 항체 변이체가 각각 입자 내에 패키징된 M13의 유전자 III 생성물에 대한 융합물로서 필라멘트형 파지 입자로부터 1가 방식으로 디스플레이된다. The resulting antibody mutant is a fusion to the gene III product of M13 packaged within each particle is 1 is displayed from filamentous phage particles in the following manner. 이어서, 파지-디스플레이된 변이체가 본원에 개시된 바와 같이 이의 생물학적 활성 (예를 들어, 결합 친화도)에 대해 스크리닝된다. Then, the phage-displayed variants are screened for a biological activity (e.g., binding affinity) thereof as disclosed herein. 변형에 대한 후보 초가변 영역 부위를 확인하기 위해, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발을 수행하여 항원 결합에 현저하게 기여하는 초가변 영역 잔기를 확인할 수 있다. To determine candidate hypervariable region sites for modification, by performing alanine scanning mutagenesis can be found the hypervariable region residues contributing significantly to antigen binding. 별법적으로 또는 추가적으로, 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하여 항체와 표적 폴리펩티드 간의 접촉 지점을 확인하는 것이 유리할 수 있다. May be beneficial to analyze a crystal structure of the antibody conjugate to determine the contact points between the antibody and target polypeptide-law, or in addition, antigen-specific. 이같은 접촉 잔기 및 이웃 잔기는 본원에서 상술된 기술에 따른 치환에 대한 후보물이다. Such contact residues and neighboring residues are substituted for the treasure then according to the techniques described herein. 일단 이같은 변이체가 생성되면, 변이체 패널을 본원에 기술된 바와 같이 스크리닝하고, 하나 이상의 관련 분석법에서 탁월한 성질이 있는 항체를 추가적인 개발용으로 선별할 수 있다. Once such variants are generated, it is possible to screening as described herein and the mutant panel, selection of antibodies with superior properties in one or more relevant assays for further development.

당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 LY6 폴리펩티드의 아미노산 서열 변이체를 코딩하는 핵산 분자가 제조된다. The nucleic acid molecules are produced coding for the amino acid sequence variants of LY6 polypeptides by a variety of methods known in the art. 이러한 방법에는 천연 공급원으로부터의 단리 (천연 발생 아미노산 서열 변이체의 경우), 또는 천연 서열 또는 앞서 제조된 변이체의 올리고뉴클레오티드-매개 (또는 부위-지정) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발 및 카세트 돌연변이유발에 의한 제조가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. These methods include isolation (in the case of naturally occurring amino acid sequence variants), or a native sequence or oligonucleotide of the mutant prepared in advance nucleotides from natural sources-mediated (or site-defined) produced by mutagenesis, PCR mutagenesis and cassette mutagenesis It includes, but is not limited thereto.

D. 폴리펩티드의 변형 D. variants of the polypeptide

공유결합적으로 변형된 폴리펩티드 및/또는 항체 또한 본 발명의 범주 내에서 사용하기에 적절할 수 있다. The polypeptide and / or antibody variants covalently may also be suitable for use within the scope of the invention. 한가지 유형의 공유결합 변형은 이같은 항체 및 폴리펩티드의 표적화된 아미노산 잔기를 이같은 항체 및 폴리펩티드의 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시키는 것을 포함한다. One type of covalent modification involves that these antibodies and polypeptides such a targeted amino acid residues of the antibody and a polypeptide selected side chains or the N- or C- terminal residues can be reacted with the reaction with an organic derivatizing agent that of. 2관능성 작용제로의 유도체화가, 예를 들어, 상기의 분자를 정제에서 사용하기 위한 수불용성 지지체 매트릭스 또는 표면에 가교시키는데 유용하다. Painter bifunctional derivatives of agonists, for example, is useful for cross-linking to a water insoluble support matrix or surface for use in the purification of the molecule. 통상적으로 사용되는 가교제에는, 예를 들어, 1,1-비스(디아조아세틸)-2-페닐에탄, 글루타르알데히드, N-히드록시숙신이미드 에스테르, 예를 들어, 4-아지도살리실산과의 에스테르, 디숙신이미딜 에스테르 예컨대 3,3'-디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트)가 포함되는 동종이관능성(homobifunctional) 이미도에스테르, 이관능성 말레이미드 예컨대 비스-N-말레이미도-1,8-옥탄 및 메틸-3-[(p-아지도페닐)디티오]프로피오이미데이트와 같은 작용제가 포함된다. Crosslinking agent conventionally used include, for example, 1,1-bis (diazo-acetyl) -2-phenylethane, glutaraldehyde, an N- hydroxysuccinimide esters, for example, 4-O map acid and of the ester as disuccinimidyl esters such as 3,3'-dithiobis homogeneous bifunctional which contains a (succinimidyl propionate) (homobifunctional) imidoesters, bifunctional maleimides such as bis -N- maleimido-1, 8-octane and methyl -3 - [(p- O map phenyl) dithio] propionate are already agent acts as a date.

기타 변형으로는 글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기의 각각 상응하는 글루타밀 및 아스파르틸 잔기로의 탈아미드화, 프롤린 및 라이신의 히드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 히드록실 기의 인산화, 라이신, 아르기닌 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노 기의 메틸화 ([TE Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, WH Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)]), N-말단 아민의 아세틸화, 및 임의의 C-말단 카르복실 기의 아미드화가 포함된다. Other modifications include gluconic Tommy carbonyl and asparaginyl carbonyl moiety of each of the corresponding glutamyl and aspartate de-amide of a butyl moiety flower, of proline and lysine hydroxylation, Sheryl or tray O'Neill hydroxide phosphorylation of hydroxyl groups of the residues, lysine , methylation of the α- amino group of arginine, and histidine side chains ([TE Creighton, Proteins:. Structure and Molecular Properties, WH Freeman & Co., San Francisco, pp 79-86 (1983)]), acetylation of the N- terminal amine Flowers, and includes upset any C- terminal carboxyl group of the amide.

폴리펩티드 또는 항체의 또다른 유형의 공유결합 변형은 항체 또는 폴리펩티드의 천연 글리코실화 패턴을 변경시키는 것을 포함한다. Another type of covalent modification of a polypeptide or antibody includes the polypeptide or antibody to alter the natural glycosylation pattern. "천연 글리코실화 패턴의 변경"은 항체 또는 폴리펩티드의 천연 글리코실화 패턴을 변경시키는 것을 포함한다. "Changing the natural glycosylation pattern" involves changing the antibody or polypeptide of the native glycosylation pattern. "천연 글리코실화 패턴의 변경"은 천연 서열에서 발견되는 하나 이상의 탄수화물 모이어티를 결실시키는 것 (근원적인 글리코실화 부위를 제거함으로써 또는 화학적 및/또는 효소적 수단에 의해 글리코실화를 결실시킴으로써), 및/또는 각각의 천연 서열에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위를 부가하는 것을 의미하도록 본원에서 의도된다. "Natural change in glycosylation pattern" is (by deleting the glycosylation by the underlying glycosylation by eliminating the acylated moiety or chemical and / or enzymatic means) to which deletion of one or more carbohydrate moieties found in a native sequence, and / or to means for adding one or more glycosylation sites that are not present in the respective native sequence it is intended herein. 또한, 이 문구는 존재하는 다양한 탄수화물 모이어티의 성질 및 비율에서의 변화가 수반되는 천연 단백질의 글리코실화에서의 질적인 변화를 포함한다. In addition, the phrase includes qualitative changes in the that the change in properties of the various carbohydrate moieties present and the rate associated natural protein glycosylation.

항체 및 기타 폴리펩티드의 글리코실화는 전형적으로 N-연결 또는 O-연결된다. Antibodies and other glycosylated polypeptide are typically linked to N- linked or O-. N-연결은 탄수화물 모이어티가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착된 것을 지칭한다. N- linked refers to the carbohydrate moieties attached to the side chain of an asparagine residue. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (식중 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이다)은 탄수화물 모이어티를 아스파라긴 측쇄에 효소적으로 부착시키기 위한 인식 서열이다. Tripeptide sequences asparagine -X- serine and asparagine -X- threonine (wherein X is any amino acid except proline), are the recognition sequences for enzymatic attachment of the carbohydrate moiety to the asparagine side chain. 따라서, 이러한 트리펩티드 서열 중 하나가 폴리펩티드에 존재함으로써 잠재적인 글리코실화 부위가 생성된다. Therefore, a potential glycosylation site is generated by either of these tripeptide sequences are present in the polypeptide. O-연결된 글리코실화는 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 자일로스 중의 하나가 히드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌에 부착되는 것을 지칭하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시라이신 또한 사용될 수 있다. One of the O- linked glycosylation is N- acetyl galactosamine, galactose, or xylose per the hydroxy amino acid, most commonly is referred to that which is attached to serine or threonine, but the 5-hydroxyproline or 5-hydroxy lysine It may also be used.

글리코실화 부위의 부가는 하나 이상의 상기 기술된 트리펩티드 서열을 함유하도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 편리하게 이루어진다 (N-연결된 글리코실화 부위의 경우). Glycoside portion of the misfire region is achieved conveniently by modifying the amino acid sequence to contain one or more of the above-described tripeptide sequences (for N- linked glycosylation sites). 또한 변경은 원래의 이같은 항체 또는 폴리펩티드의 서열에 대한 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 부가 또는 치환에 의해 이루어질 수 있다 (O-연결된 글리코실화 부위의 경우). Further changes may be made by the addition or substitution of one or more serine or threonine residues to the original such antibody or polypeptide sequence (for O- linked glycosylation sites). 이같은 항체 또는 폴리펩티드 아미노산 서열은 DNA 수준에서의 변화를 통해, 특히 상기 아미노산 서열들을 코딩하는 DNA를 원하는 아미노산으로 번역될 코돈이 생성되도록 미리 선택된 염기에서 돌연변이시킴으로써 임의적으로 변경될 수 있다. Such antibody or polypeptide amino acid sequence may be optionally changed by a mutation at preselected bases such that, in particular codons are generated to be translated into the desired amino acids to DNA encoding the above amino acid sequence by a change in the DNA level.

탄수화물 모이어티의 수를 증가시키는 또다른 수단은 글리코시드를 폴리펩티드에 화학적으로 또는 효소에 의해 커플링시키는 것에 의한 것이다. Another means of increasing the number of carbohydrate moieties is by for coupling by chemically or enzyme glycosides to the polypeptide. 이같은 방법은 당업계에, 예를 들어, WO 87/05330 (1987년 9월 11일 공개), 및 [Aplin and Wriston, CRC Crit. Such methods in the art, for example, WO 87/05330 (September 1987 released 11 days), and [Aplin and Wriston, CRC Crit. Rev. Rev. Biochem., pp. Biochem., Pp. 259-306 (1981)]에 기술되어 있다. 259-306 is described in (1981).

탄수화물 모이어티의 제거는 화학적으로 또는 효소에 의해, 또는 글리코실화에 대한 표적으로 기능하는 아미노산 잔기를 코딩하는 코돈의 돌연변이성 치환에 의해 달성될 수 있다. Removal of carbohydrate moieties may be accomplished by mutation substitution of codons by chemically or enzymatically, or encoding an amino acid residue which functions as a target for glycosylation. 화학적 탈글리코실화 기술은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, [Hakimuddin, et al., Arch. Chemical de-glycosylation techniques are well known in the art, for example, [Hakimuddin, et al., Arch. Biochem. Biochem. Biophys., 259:52 (1987)] 및 [Edge et al., Anal. Biophys, 259:.. 52 (1987)] and [Edge et al, Anal. Biochem., 118:131 (1981)]에 기술되어 있다. Biochem, 118:. Is described in 131 (1981). 폴리펩티드 상의 탄수화물 모이어티의 효소에 의한 절단은 [Thotakura et al., Meth. Cleavage by the enzyme of carbohydrate moieties on the polypeptide is [Thotakura et al., Meth. Enzymol., 138:350 (1987)]에 기술된 바와 같은 다양한 엔도(endo)- 및 엑소(exo)-글리코시다제를 사용함으로써 달성할 수 있다. . Enzymol, 138: a variety of endo (endo) as described in 350 (1987)] may be accomplished by using a glycosidase-and exo (exo).

또다른 유형의 공유결합 변형은 미국 특허 번호 4,640,835; Another type of covalent modification of US Patent No. 4,640,835; 4,496,689; 4,496,689; 4,301,144; 4,301,144; 4,670,417; 4,670,417; 4,791,192 또는 4,179,337에 기재된 방식으로, 다양한 비-단백질성 중합체들 중 하나, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌에 연결시키는 것을 포함한다. In the manner described in the 4,791,192 or 4,179,337, various non - one of proteinaceous polymers, for example, involves connecting a polyethylene glycol (PEG), polypropylene glycol or polyoxyalkylene. 코아세르베이션(coacervation) 기술에 의해 또는 계면 중합에 의해 예를 들어 제조된 마이크로캡슐 (예를 들어, 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐) 내에, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 내에, 또는 마크로에멀젼 내에 LY6 폴리펩티드가 또한 포획될 수 있다. In the ((methylmethacrylate) microcapsules for example, each of hydroxymethyl cellulose or gelatin-microcapsules and poly), coacervation (coacervation) by a technique, or by interfacial polymerization, for example producing microcapsules the colloidal drug delivery systems in the (e. g., liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nano-particles and nanocapsules), or LY6 polypeptide in macro emulsions can also be captured. 이같은 기술이 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Oslo, A., Ed., (1980)]에 개시되어 있다. Such a technique is disclosed in [Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Oslo, A., Ed., (1980)].

한 폴리펩티드의 또다른 이종성 폴리펩티드 또는 아미노산 서열에 대한 융합물로부터 생성된 키메라 분자를 형성시키는 변형이 본 발명에서 사용하는데 또한 구현된다. This modification to form a chimeric molecule produced from the fusion of another heterologous polypeptide or amino acid sequence of the polypeptide is also implemented for use in the present invention.

한 실시양태에서, 이같은 키메라 분자는 항-태그 항체가 선택적으로 결합할 수 있는 에피토프를 제공하는 태그 폴리펩티드와 폴리펩티드의 융합물을 포함한다. In one embodiment, such a chimeric molecule anti-tag antibodies optionally include a fusion polypeptide with a tag polypeptide which provides an epitope capable of binding to. 에피토프 태그는 일반적으로 이같은 항체 또는 폴리펩티드의 아미노- 또는 카르복실-말단에 놓인다. Epitope tag is generally such an antibody or polypeptide of the amino-or carboxyl-placed in the end. 이같은 에피토프 태그가 부착된 형태의 이같은 항체 또는 폴리펩티드의 존재를 태그 폴리펩티드에 대한 항체를 사용하여 검출할 수 있다. Such an epitope tag such that the presence of the antibody or polypeptide of the attached forms can be detected using an antibody against the tag polypeptide. 또한, 에피토프 태그의 제공은 항-태그 항체 또는 에피토프 태그에 결합하는 또다른 유형의 친화성 매트릭스를 사용하여 친화성 정제에 의해 이같은 항체 또는 폴리펩티드를 쉽게 정제할 수 있도록 한다. Also, provision of the epitope tag is anti-for easy purification of such antibody or another type polypeptides by affinity purification using an affinity matrix that binds to the tag antibody or epitope tag. 다양한 태그 폴리펩티드 및 이들의 각각의 항체가 당업계에 주지되어 있다. Various tag polypeptides and their respective antibodies are well known in the art. 예로는 폴리-히스티딘 (폴리-his) 또는 폴리-히스티딘-글리신 (폴리-his-gly) 태그; Examples include poly-histidine (poly -his) or poly-histidine-glycine (poly -his-gly) tags; 인플루엔자 HA 태그 폴리펩티드 및 이의 항체 12CA5 ([Field et al., Mol. Cell. Biol., 8:2159-2165 (1988)]); Flu HA tag polypeptide and its antibody 12CA5 ([Field et al, Mol Cell Biol, 8:.... 2159-2165 (1988)]); c-myc 태그 및 이에 대한 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 및 9E10 항체 ([Evan et al., Molecular and Cellular Biology, 5:3610-3616 (1985)]); c-myc tag and hence of 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 and 9E10 antibody ([Evan et al, Molecular and Cellular Biology, 5:. 3610-3616 (1985)]); 및 단순 헤르페스 바이러스 당단백질 D (gD) 태그 및 이의 항체 ([Paborsky et al., Protein Engineering, 3(6):547-553 (1990)])가 포함된다. And protein D (gD) tag and its antibody per herpes simplex virus: include ([Paborsky et al, Protein Engineering, 3 (6). 547-553 (1990)]). 기타 태그 폴리펩티드에는 Flag-펩티드 ([Hopp et al., BioTechnology, 6:1204-1210 (1988)]); Other tag polypeptides include Flag- peptide ([Hopp et al, BioTechnology, 6: 1204-1210 (1988).]); KT3 에피토프 펩티드 ([Martin et al., Science, 255:192-194 (1992)]); KT3 epitope peptide ([Martin et al, Science, 255:. 192-194 (1992)]); α-튜불린 에피토프 펩티드 ([Skinner et al., J. Biol. Chem., 266:15163-15166 (1991)]); α- tubulin epitope peptide ([Skinner et al, J. Biol Chem, 266:... 15163-15166 (1991)]); 및 T7 유전자 10 단백질 펩티드 태그 ([Lutz-Freyermuth et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6393-6397 (1990)])가 포함된다. And the T7 gene 10 protein peptide tag: include ([Lutz-Freyermuth et al, Proc Natl Acad Sci USA, 87..... 6393-6397 (1990)]).

별법적인 실시양태에서, 키메라 분자는 폴리펩티드와 면역글로불린 또는 면역글로불린의 특정 영역의 융합물을 포함할 수 있다. In specific legal embodiment, the chimeric molecule may comprise a fusion of a particular region of the polypeptide with an immunoglobulin or immunoglobulin. 2가 형태의 키메라 분자 ("면역어드헤신"으로도 지칭됨)에 대해서, 이같은 융합물은 IgG 분자의 Fc 영역에 대한 것일 수 있다. 2 is with respect to (also referred to as "immune adjuster hesin") form of the chimeric molecule, such a fusion could be to the Fc region of an IgG molecule. 바람직하게는 Ig 융합물은 Ig 분자 내의 하나 이상의 가변 영역 대신에 가용성 (막횡단 도메인이 결실되거나 불활성화된) 형태의 상기 항체 또는 폴리펩티드의 치환을 포함한다. Preferably, the Ig fusion comprises at least one variable region rather than soluble form of substitution of the antibody or polypeptide (transmembrane domain deleted or inactivated) in the Ig molecule. 특히 바람직한 실시양태에서, 면역글로불린 융합물은 IgG 1 분자의 힌지, CH 2 및 CH 3 , 또는 힌지, CH 1 , CH 2 및 CH 3 영역을 포함한다. And a particularly preferred embodiment, the immunoglobulin fusion includes the hinge, CH 2 and CH 3, or the hinge, CH 1, CH 2 and CH 3 regions of IgG 1 molecule. 면역글로불린 융합물의 생산을 위해서는, 미국 특허 번호 5,428,130 (1995년 6월 27일 허여)를 또한 참조한다. For the production of the immunoglobulin fusion, the U.S. Pat. No. 5.42813 million (June 1995, issued May 27) See also.

E. 폴리펩티드의 제조 E. Preparation of polypeptide

주로 하기의 설명은 항체, 폴리펩티드 및 올리고펩티드를 코딩하는 핵산을 함유하는 벡터로 형질전환 또는 형질감염된 세포를 배양하는 것에 의한 폴리펩티드의 생산에 관한 것이다. Mainly the following description relates to the production of the polypeptide due to culturing the antibodies, polypeptides and oligonucleotides transformed with a vector containing a nucleic acid encoding the peptide or the transfected cells. 용어 "폴리펩티드"는 항체, 폴리펩티드 및 올리고펩티드를 포함할 수 있다. The term "polypeptide" may include antibodies, polypeptides and oligopeptides. 물론, 당업계에 주지된 별법적인 방법이 이같은 항체, 폴리펩티드 및 올리고펩티드를 제조하는데 사용될 수 있는 것으로 구현된다. Of course, it is implemented to have a specific legal method is well known in the art can be used to produce such antibodies, polypeptides and oligopeptides. 예를 들어, 적합한 아미노산 서열, 또는 이의 일부분을 고체-상 기술을 사용하여 직접적인 펩티드 합성에 의해 생산할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, WH Freeman Co., San Francisco, CA (1969)]; [Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85:2149-2154 (1963)] 참조). For example, the appropriate amino acid sequence, or portion thereof solid can be produced by direct peptide synthesis using the technique (see, e.g., [Stewart et al, Solid-Phase Peptide Synthesis, WH Freeman Co.,. San Francisco, CA (1969)]; [Merrifield, J. Am Chem Soc 85:... see 2149-2154 (1963)). 수동 기술을 사용하여 또는 자동화에 의해 시험관내 단백질 합성을 수행할 수 있다. It can be performed in vitro protein synthesis by using manual techniques or automated. 예를 들어, 자동화된 합성을 Applied Biosystems (Foster City, CA)의 펩티드 합성기를 사용하여 제조사의 지시에 따라 달성할 수 있다. For example, an automated synthesis using a peptide synthesizer of Applied Biosystems (Foster City, CA) can be achieved according to the manufacturer's instructions. 항체, 폴리펩티드 또는 올리고펩티드의 다양한 부분들을 별도로 화학적으로 합성하고, 화학적 또는 효소적 방법을 사용하여 조합하여, 원하는 생성물을 생산할 수 있다. Separately chemically synthesized by various portions of the antibody, polypeptide or oligopeptide, and the combined using chemical or enzymatic methods, can produce the desired product.

1. 폴리펩티드를 코딩하는 DNA의 단리 1. Isolation of DNA encoding the polypeptide

폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 이같은 항체, 폴리펩티드 또는 올리고펩티드 mRNA를 지니고 이를 검출가능한 수준으로 발현할 것으로 여겨지는 조직으로부터 제조된 cDNA 라이브러리로부터 수득할 수 있다. Such a DNA encoding a polypeptide antibody, polypeptide or mRNA oligonucleotide has a peptide to be expressed at high level for detecting this, considered can be obtained from a cDNA library prepared from tissue. 따라서, 이같은 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 인간 조직으로부터 제조된 cDNA 라이브러리로부터, 게놈 라이브러리로부터, 또는 공지된 합성 절차 (예를 들어, 자동화된 핵산 합성)에 의해 편리하게 수득할 수 있다. Therefore, from a cDNA library produced a DNA encoding such a polypeptide from human tissues, from a genomic library, or known synthetic procedures can be conveniently obtained by (e.g., automated nucleic acid synthesis).

당해 유전자 또는 이에 의해 코딩되는 단백질을 확인하기 위해 디자인된 프로브 (예컨대 적어도 약 20-80개 염기의 올리고뉴클레오티드)로 라이브러리를 스크리닝할 수 있다. May be screened the library with a probe (e. G., At least up to approximately 20-80 nucleotide bases) designed to identify the gene or the protein encoded by this. cDNA 또는 게놈 라이브러리를 선택된 프로브로 스크리닝하는 것은 예컨대 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)]에 기술된 표준 절차를 사용하여 수행할 수 있다. The screening of cDNA or genomic library with the selected probe, for example may be carried out using the standard procedures described in [Sambrook et al, Molecular Cloning:: (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 New York). A Laboratory Manual]. 별법적으로, PCR 방법을 사용할 수 있다 ([Sambrook et al., 상기 문헌]; [Dieffenbach et al., PCR Primer: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995)]). Legally specific, it is possible to use the PCR method ([. Sambrook et al, supra]; [Dieffenbach et al, PCR Primer:. A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995)]).

cDNA 라이브러리를 스크리닝하는 기술은 당업계에 주지되어 있다. Technology for screening a cDNA library are well known in the art. 프로브로 선택된 올리고뉴클레오티드 서열은 거짓 양성이 최소화되도록 길이가 충분하여야 하고, 충분히 명백하여야 한다. These oligonucleotide as a probe a nucleotide sequence shall be long enough to minimize the false positive and, to be sufficiently clear. 바람직하게는, 스크리닝될 라이브러리 내의 DNA에의 혼성화 시 검출될 수 있도록 올리고뉴클레오티드가 표지된다. Preferably, the oligonucleotide is labeled oligonucleotide so that it can be detected upon hybridization to the DNA in the library to be screened. 표지 방법은 당업계에 주지되어 있고, 32 P-표지된 ATP와 같은 방사성 표지, 비오틴화 또는 효소 표지의 사용을 포함한다. The labeling method include the use of radioactive labels, biotinylated, or enzymatic label, such as are well known and, 32 P- labeled ATP in the art. 중등도의 엄격성 및 고도의 엄격성이 포함되는 혼성화 조건이 [Sambrook et al., 상기 문헌]에서 제공된다. The hybridization conditions are included this moderate stringency and high stringency is provided in [Sambrook et al., Supra.

이같은 라이브러리 스크리닝 방법에서 확인된 서열을 GenBank와 같은 공공 데이타베이스 또는 기타 사설 서열 데이타베이스에 기탁되어 입수가능한 다른 공지된 서열에 대해 비교 및 정렬할 수 있다. Such libraries are deposited with the sequences identified in the screening methods in the public database or other private sequence databases such as GenBank can be sorted and compared against other known sequences, available. 분자의 한정된 영역 내의 또는 전장 서열에 걸친 서열 동일성 (아미노산 또는 뉴클레오티드 수준에서의 동일성)을 당업계에 공지되고 본원에 기술된 바와 같은 방법을 사용하여 결정할 수 있다. Sequence identity (or identity of amino acid in the nucleotide level), or over the full length sequence in the defined regions of the molecule it is known in the art and can be determined using the method as described herein.

선택된 cDNA 또는 게놈 라이브러리를 최초로 본원에 개시된 추정 아미노산 서열을 사용하여 스크리닝하고, 필요하다면, [Sambrook et al., 상기 문헌]에 기술된 통상적인 프라이머 신장 절차를 사용하여, cDNA로 역-전사되지 않았을 수 있는 mRNA의 전구체 및 프로세싱 중간체를 검출함으로써, 단백질 코딩 서열이 있는 핵산을 수득할 수 있다. If the screening by the selected cDNA or genomic libraries initially used to estimate the amino acid sequence disclosed herein and, if necessary, using a conventional primer extension procedures described in [Sambrook et al, supra.], A cDNA reverse-not have been transferred by detecting the precursors and processing intermediates of mRNA that can be obtained for nucleic acids in the protein coding sequence.

2. 숙주 세포의 선별 및 형질전환 2. Selection and Transformation of Host Cells

숙주 세포를 LY6 폴리펩티드 생산을 위한 본원에 기술된 발현 또는 클로닝 벡터로 형질감염 또는 형질전환시키고, 프로모터 유도, 형질전환체 선별 또는 원하는 서열을 코딩하는 유전자의 증폭에 적절하게 변형된 통상적인 영양 배지에서 배양한다. A host cell LY6 conversion transfected or transformed with expression or cloning vectors described herein for polypeptide production and, promoter induction, transformants selected or desired in a conventional nutrient medium appropriate modification to the amplification of the gene encoding the sequence cultured. 배양 조건, 예컨대 배지, 온도, pH 등은 과도한 실험 없이 당업자가 선택할 수 있다. The culture conditions, such as media, temperature, pH and the like can select any person skilled in the art without undue experimentation. 일반적으로, 세포 배양의 생산성을 최대화하기 위한 원리, 프로토콜, 및 실제적인 기술을 [Mammalian Cell Biotechnology: A Practical Approach, M. Butler, ed. In general, the principles, protocols, and practical techniques for maximizing the productivity of cell cultures [Mammalian Cell Biotechnology: A Practical Approach, M. Butler, ed. (IRL Press, 1991)] 및 [Sambrook et al., 상기 문헌]에서 발견할 수 있다. It can be found in (IRL Press, 1991)] and [Sambrook et al., Supra.

진핵생물 세포 형질감염 및 원핵생물 세포 형질전환 방법은 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들어, CaCl 2 , CaPO 4 , 리포솜-매개 및 전기천공이 포함된다. Eukaryotic cell transfection and prokaryotic cell transformation methods are well known to those skilled in the art, for example, CaCl 2, CaPO 4, liposome-mediated and electroporation are included. 사용된 숙주 세포에 따라, 형질전환은 이같은 세포에 적절한 표준 기술을 사용하여 수행된다. Depending on the host cell used, transformation is performed using standard techniques appropriate to such cells. [Sambrook et al., 상기 문헌]에 기술된 바와 같은 염화칼슘을 사용하는 칼슘 처리, 또는 전기천공이 원핵생물에 일반적으로 사용된다. Calcium treatment, electroporation or the use of calcium chloride as described in [Sambrook et al., Supra] is generally used for prokaryotes. [Shaw et al., Gene, 23:315 (1983)] 및 WO 89/05859 (1989년 6월 29일 공개)에 기술된 바와 같이, 아그로박테리움 투메파시엔스( Agrobacterium tumefaciens )로의 감염이 특정 식물 세포의 형질전환에 사용된다. [Shaw et al, Gene, 23 :. 315 (1983)] and as described in WO 89/05859 (June 1989 0 months 29), Agrobacterium Tome Pacific Enschede infection is specific to plants (Agrobacterium tumefaciens) It is used for transformation of the cells. 이같은 세포벽이 없는 포유류 세포에 대해서는, [Graham and van der Eb, Virology, 52:456-457 (1978)]의 인산칼슘 침전 방법을 사용할 수 있다. For these non-mammalian cells, cell walls,: can be used [Graham and van der Eb, Virology, 52 456-457 (1978)] the calcium phosphate precipitation method. 포유류 세포 숙주 시스템 형질감염의 일반적인 양상이 미국 특허 번호 4,399,216에 기술되어 있다. The common aspects of mammalian cell host system transfections have been described in US Patent No. 4,399,216. 효모 내로의 형질전환은 [Van Solingen et al., J. Bact., 130:946 (1977)] 및 [Hsiao et al., Proc. Transformed into the yeast [Van Solingen et al, J. Bact, 130:.. 946 (1977)]. And [Hsiao et al, Proc. Natl. Natl. Acad. Acad. Sci. Sci. (USA). (USA). 76:3829 (1979)]의 방법에 따라 전형적으로 수행된다. 76: 3829 (1979)] according to the method it is typically performed. 그러나, DNA를 세포 내로 도입하는 기타 방법, 예컨대 핵 미세주사, 전기천공, 무손상 세포와의 박테리아 원형질체 융합, 또는 다가양이온, 예를 들어, 폴리브렌, 폴리오르니틴에 의한 방법을 또한 사용할 수 있다. However, other methods for introducing DNA into cells, such as nuclear microinjection, electroporation, bacterial protoplast fusion with intact cells, or multivalent cations, for example, the method according to polybrene, poly-ornithine can also be used . 포유류 세포의 형질전환을 위한 다양한 기술에 대해서는, 문헌 [Keown et al., Methods in Enzymology, 185:527-537 (1990)] 및 [Mansour et al., Nature, 336:348-352]을 참조한다. Refers to: [348-352 Mansour et al, Nature, 336.]: For various techniques for transforming mammalian cells, the literature [Keown et al, Methods in Enzymology, 185. 527-537 (1990)] and .

본원에서 벡터 내의 DNA를 클로닝 또는 발현시키는데 적절한 숙주 세포에는 원핵생물, 효모, 또는 고급 진핵생물 세포가 포함된다. Sikineunde cloning or expressing the DNA in the vectors herein, suitable host cells include prokaryotes, yeast, or eukaryotic cell advanced. 적절한 원핵생물에는 유박테리아(eubacteria), 예컨대 그람-음성 또는 그람-양성 생물, 예를 들어, 장내세균 예컨대 대장균이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. Suitable prokaryotes oil bacteria (eubacteria), for example, Gram-negative or Gram-positive organisms, for example, Enterobacteriaceae, for example Escherichia coli include, but are not limited to. 다양한 대장균 균주, 예컨대 대장균 K12 균주 MM294 (ATCC 31,446); Various E. coli strains, such as E. coli K12 strain MM294 (ATCC 31,446); 대장균 X1776 (ATCC 31,537); E. coli X1776 (ATCC 31,537); 대장균 균주 W3110 (ATCC 27,325) 및 K5 772 (ATCC 53,635)가 공개적으로 입수가능하다. The E. coli strain W3110 (ATCC 27,325) and K5 772 (ATCC 53,635) is publicly available. 기타 적절한 원핵생물 숙주 세포에는 장내세균 예컨대 에쉐리키아( Escherichia ), 예를 들어, 대장균, 엔테로박테르( Enterobacter ), 에르위니아( Erwinia ), 클레브시엘라( Klebsiella ), 프로테우스( Proteus ), 살모넬라( Salmonella ), 예를 들어, 살모넬라 타이피무리움( Salmonella typhimurium ), 세라티아( Serratia ), 예를 들어, 세라티아 마르세스칸스( Serratia marcescans ), 및 시겔라( Shigella ), 뿐만 아니라 바실러스( Bacillus ) 예컨대 바실러스 서브틸리스( B. subtilis ) 및 바실러스 리케니포르미스( B. licheniformis ) (예를 들어, DD 266,710 (1989년 4월 12일 공개)에 개시된 바실리 리케니포르미스 41P), 슈도모나스( Pseudomonas ) 예컨대 슈도모나스 아에루기노사( P. aeruginosa ), 및 스트렙토마이세스( Streptomyces )가 포함된다. Other suitable prokaryotic host cells include the intestinal bacteria e.g. Sherry Escherichia (Escherichia), for example, E. coli, Enterobacter foil Terminus (Enterobacter), El Winiah (Erwinia), Klebsiella (Klebsiella), Proteus (Proteus), Salmonella (Salmonella), e.g., Salmonella tie blood bunch Titanium (Salmonella typhimurium), Serratia marcescens (Serratia), e.g., Serratia dry process kanseu (Serratia marcescans), and Shigella (Shigella), as well as Bacillus (Bacillus ), for example Bacillus subtilis (B. subtilis) and Bacillus Fort Lee Kenny Miss (B. licheniformis) (for example, DD 266,710 (1989 4 0 months 12) Bashile Fort Lee Kenny miss 41P disclosed), Pseudomonas ( Pseudomonas) are for example Pseudomonas rugi Oh contain labor (P. aeruginosa), and Streptomyces (Streptomyces). 이러한 예들은 제한적이기 보다는 예시적인 것이다. These examples are illustrative rather than restrictive. 균주 W3110은 재조합 DNA 생성물 발효에 통상적인 숙주 균주이기 때문에 특히 바람직한 숙주 또는 모 숙주이다. Strain W3110 is a particularly preferred host or parent host because it is a conventional host strain for recombinant DNA product fermentation. 바람직하게는, 숙주 세포는 최소량의 단백질분해성 효소를 분비한다. Preferably, the host cell secretes minimal amounts of proteolytic enzymes. 예를 들어, 균주 W3110은 숙주에 내인성인 단백질을 코딩하는 유전자에서의 돌연변이를 일으키도록 변형될 수 있고, 이같은 숙주의 예로는 완전한 유전자형 tonA 를 갖는 대장균 W3110 균주 1A2; For example, strain W3110 is an example of a host can be modified to cause a mutation, such in the gene encoding the endogenous protein in a host is E. coli having the complete genotype tonA W3110 strain 1A2; 완전한 유전자형 tonA ptr3 를 갖는 대장균 W3110 균주 9E4; E. coli W3110 strain having the complete genotype tonA ptr3 9E4; 완전한 유전자형 tonA ptr3 phoA E15 (argF-lac)169 degP ompT kan r 을 갖는 대장균 W3110 균주 27C7 (ATCC 55,244); The complete genotype tonA ptr3 phoA E15 (argF-lac ) 169 degP ompT E. coli W3110 strains with the kan r 27C7 (ATCC 55,244); 완전한 유전자형 tonA ptr3 phoA E15 (argF-lac)169 degP ompT rbs7 ilvG kan r 을 갖는 대장균 W3110 균주 37D6; The complete genotype tonA ptr3 phoA E15 (argF-lac ) 169 degP ompT rbs7 ilvG of E. coli W3110 strain 37D6 having the kan r; 비-카나마이신 저항성 degP 결핍 돌연변이가 있는 균주 37D6인 대장균 W3110 균주 40B4; A non-kanamycin resistant degP-deficient mutant of Escherichia coli W3110 strain 40B4, which is strain 37D6; 및 미국 특허 번호 4,946,783 (1990년 8월 7일 허여)에 개시된 돌연변이 원형질막주위공간 프로테아제를 갖는 대장균 균주가 포함된다. And is US Patent No. 4,946,783 contains a (August 1990, issued January 7) Plasma membrane mutant E. coli strain having the protease disclosed in the ambient space. 별법적으로, 시험관내 클로닝 방법, 예를 들어, PCR 또는 기타 핵산 중합효소 반응이 적절하다. Legally by in vitro cloning methods, e.g., a PCR or other nucleic acid polymerase reaction is appropriate.

특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않은 경우에, 예컨대 치료용 항체가 세포독성제 (예를 들어, 독소)에 접합되고 면역접합체 자체가 종양 세포 파괴에서 유효성을 나타내는 경우, 전장 항체, 항체 단편, 및 항체 융합 단백질을 박테리아에서 생산할 수 있다. In particular, in the case that does not require glycosylation and Fc effector function, e.g., therapeutic antibody is conjugated to a cytotoxic agent (e.g., toxin) the immunoconjugate itself indicates the effectiveness in tumor cell destruction, full-length antibodies, antibody fragments a, and antibody fusion proteins can be produced in bacteria. 전장 항체는 순환 반감기가 더 길다. Battlefield is a longer circulating half-life of the antibody. 대장균에서의 생산은 더 빠르고, 비용 면에서 더 효율적이다. Production in E. coli is faster, more cost-effective. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 대해서는, 예를 들어, 발현 및 분비를 최적화하기 위한 신호 서열 및 번역 개시 영역 (TIR)이 기술되어 있는 미국 특허 5,648,237 (Carter 등), 미국 특허 5,789,199 (Joly 등), 및 미국 특허 5,840,523 (Simmons 등)을 참조한다 (상기 특허들은 거명에 의해 본원에 포함됨). For the antibody fragment, and the expression of the polypeptide in bacteria, for example, U.S. Patent 5,648,237 that has a signal sequence and translation initiation region (TIR) ​​for optimizing expression and secretion is described (Carter, etc.), U.S. Patent 5,789,199 (Joly, etc. ), and US Patent 5,840,523 refer to (Simmons, etc.) (incorporated herein by reference the patents). 발현 후, 항체를 대장균 세포 페이스트로부터 가용성 분획 내에 단리하고, 이소타입에 따라, 예를 들어, 단백질 A 또는 G 컬럼을 통해 정제할 수 있다. After expression, the antibody is isolated from the E. coli cell paste in a soluble fraction and, depending on the isotype, for example, it can be purified via a protein A or G column. 최종 정제는 적절한 세포 (예를 들어, CHO 세포)에서 발현된 항체를 정제하는 프로세스와 유사하게 수행할 수 있다. Final purification can be carried out similarly to the process for purifying antibody expressed in suitable cells (e.g., CHO cells).

원핵생물에 더하여, 진핵생물 미생물 예컨대 필라멘트형 진균 또는 효모가 원하는 폴리펩티드를 코딩하는 벡터에 대한 적절한 클로닝 또는 발현 숙주이다. In addition to prokaryotes, a suitable cloning or expression hosts for vectors which are eukaryotic microorganisms, for example filamentous fungi or yeast encoding the desired polypeptide. 사카로마이세스 세레비지아에( Saccharomyces cerevisiae )가 통상적으로 사용되는 저급 진핵생물 숙주 미생물이다. The saccharide as a typical lower eukaryotic host microorganisms to be used in my process three Levy Jia (Saccharomyces cerevisiae). 기타 미생물에는 스키조사카로마이세스 폼베( Schizosaccharomyces pombe ) ([Beach and Nurse, Nature. 290:140 [1981]]; EP 139,383 (1985년 5월 2일 공개)); Other microbes, ski investigation Mai Seth Caro pombe (Schizosaccharomyces pombe) ([Beach and Nurse, Nature 290:. 140 [1981]]; EP 139,383 ( May 1985 2 days public)); 클루이베로마이세스( Kluyveromyces ) 숙주 (미국 특허 번호 4,943,529; [Fleer et al., Bio/Technology. 9:968-975 (1991)]), 예를 들어, 클루이베로마이세스 락티스( K. lactis ) (MW98-8C, CBS683, CBS4574; [Louvencourt et al., J. Bacteriol., 154(2):737-742 [1983]]), 클루이베로마이세스 프라길리스( K. fragilis ) (ATCC 12,424), 클루이베로마이세스 불가리쿠스( K. bulgaricus ) (ATCC 16,045), 클루이베로마이세스 위케라미이( K. wickeramii ) (ATCC 24,178), 클루이베로마이세스 왈티이( K. waltii ) (ATCC 56,500), 클루이베로마이세스 드라소필라룸( K. drosophilarum ) (ATCC 36,906; [Van den Berg et al., Bio/Technology, 8:135 (1990)]), 클루이베로마이세스 테르모톨레란스( K. Thermotolerans ), 및 클루이베로마이세스 마르시아누스( K. marxianus ); Cluj Vero My process (Kluyveromyces) host (U.S. Patent No. 4,943,529; [Fleer et al, Bio / Technology 9:.. 968-975 (1991)]), for example, Vero Cluj My process lactis (K. lactis) (MW98-8C, CBS683, CBS4574; [ Louvencourt et al, J. Bacteriol, 154 (2):.. 737-742 [1983]]), Cluj Vero My process infrastructure Gillis (K. fragilis) (ATCC 12,424) , Vero Cluj My process Bulgaria kusu (K. bulgaricus) (ATCC 16,045) , Cluj Vero My process wike ramiyi (K. wickeramii) (ATCC 24,178) , Cluj Vero My process Wallaby Chantilly (K. waltii) (ATCC 56,500) , Cluj Vero My process drive small pillars room (K. drosophilarum) (ATCC 36,906; [Van den Berg et al, Bio / Technology, 8:. 135 (1990)]), Cluj Vero My process Terre Mo Toledo lance (K. Thermotolerans) , and Cluj Vero My process Marcia Taunus (K. marxianus); 야로위아( yarrowia ) (EP 402,226); Yarrow subtotal (yarrowia) (EP 402,226); 피치아 파스토리스( Pichia Avoid Chiapas pastoris (Pichia pastoris ) (EP 183,070; [Sreekrishna et al., J. Basic Microbiol., 28:265-278 [1988]]); pastoris) (EP 183,070; [Sreekrishna et al, J. Basic Microbiol, 28:.. 265-278 [1988]]); 칸디다( Candida ); Candida (Candida); 트리코데르마 리시아( Trichoderma reesia ) (EP 244,234); Tricot der town Patricia (Trichoderma reesia) (EP 244,234) ; 뉴로스포라 크라사( Neurospora crassa ) ([Case et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 76:5259-5263 [1979]]); Neuro spokes la Klein Inc. (Neurospora crassa) ([Case et al, Proc Natl Acad Sci USA 76:...... 5259-5263 [1979]]); 슈완니오마이세스( Schwanniomyces ) 예컨대 슈완니오마이세스 오시덴탈리스( Schanniomyces occidentalis ) (EP 394,538 (1990년 10월 31일 공개)); Shoe wanni Oh, my process (Schwanniomyces) for example shoe wanni Oh, my process Occidental less (Schanniomyces occidentalis) (EP 394,538 (October 1990 published May 31,)); 및 필라멘트형 진균, 예를 들어, 뉴로스포라( Neurospora ), 페니실리움( Penicillium ), 톨리포클라디움( Tolypocladium ) (WO 91/00357 (1991년 1월 10일 공개)), 및 아스페르길루스( Aspergillus ) 숙주 예컨대 아스페르길루스 니둘란스( A. nidulans ) ([Ballance et al., Biochem. Biophvs. Res. Commun., 112:284-289 [1983]]; [Tilburn et al., Gene, 26:205-221 [1983]]; [Yelton et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 81:1470-1474 [1984]]) 및 아스페르길루스 니게르( A. niger ) ([Kelly and Hynes, EMBO J., 4:475-479 [1985]])가 포함된다. And filamentous fungi, for example, neuro-La Spokane (Neurospora), Penny Solarium Room (Penicillium), toll-lipoic Cloud Stadium (Tolypocladium) (WO 91/00357 (released on January 10, 1991)), and Aspergillus road Ruth (Aspergillus) host e.g. Aspergillus nidul pullulans (A. nidulans) (. [Ballance et al, Biochem Commun Biophvs Res, 112:..... 284-289 [1983]]; [Tilburn et al, Gene , 26: 205-221 [1983]] ; [Yelton et al, Proc Natl Acad Sci USA 81:...... 1470-1474 [1984]]) and Aspergillus germanium (A. niger) ( include: [Kelly and Hynes, EMBO J., 4 475-479 [1985]]). 메틸영양성(methylotropic) 효모가 본원에서 적절하고, 한세눌라( Hansenula ), 칸디다, 클로엑케라( Kloeckera ), 피치아, 사카로마이세스, 토룰롭시스( Torulopsis ), 및 로도토룰라( Rhodotorula )로 구성된 속으로부터 선택된 메탄올 상에서 성장할 수 있는 효모를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. Consisting of methyl nutritional (methylotropic) yeast are suitable herein, and a century Cronulla (Hansenula), Candida, close exciter Mosquera (Kloeckera), blood teeth, my process as saccharose, soil rulrop sheath (Torulopsis), and torulra (Rhodotorula) also It comprises a yeast which can grow on methanol selected from the genus, but are not limited to. 이러한 클래스의 효모의 대표적인 특정 종의 목록은 [C. A representative list of certain species of yeast in these classes [C. Anthony, The Biochemistry of Methylotrophs. Anthony, The Biochemistry of Methylotrophs. 269 (1982)]에서 발견할 수 있다. 269 ​​can be found in (1982).

글리코실화 폴리펩티드의 발현을 위한 적절한 숙주 세포는 다세포 생물로부터 유래된다. An appropriate host cell for the expression of glycosylated polypeptide are derived from multicellular organisms. 무척추동물 세포의 예로는 곤충 세포 예컨대 초파리 S2 및 스포돕테라(Spodoptera) Sf9, 뿐만 아니라 식물 세포, 예컨대 면, 옥수수, 감자, 대두, 페튜니아, 토마토 및 담배의 세포 배양물이 포함된다. Examples of invertebrate cells include insect cells such as Drosophila S2 and helping Terra Sports (Spodoptera) Sf9, as well as plant cells, such as cotton, corn, potato, soybean, petunia, tomato, and tobacco cell cultures. 스포돕테라 프루기페르다( Spodoptera Sports help Terra frugiperda (Spodoptera frugiperda ) (모충), 아에데스 아에집티( Aedes frugiperda) (caterpillars), jipti ah ah Rhodes (Aedes aegypti ) (모기), 아에데스 알보픽투스( Aedes aegypti) (mosquitoes), Oh Death Al bopik tooth (Aedes albopictus ) (모기), 드로소필라 멜라노가스테르( Drosophila melanogaster ) (과일파리), 및 봄빅스 모리( Bombyx mori )와 같은 숙주로부터의 수많은 배큘로바이러스(baculoviral) 균주 및 변이체, 및 상응하는 증식허용성 곤충 숙주 세포가 확인되어 있다. albopictus) (mortgages), draw small pillar Melano gas Termini (Drosophila melanogaster) (fruit flies), and viruses (baculoviral) strains and mutants in numerous baculovirus from a host such as a spring Biggs Mori (Bombyx mori), and the corresponding growth allowed insects has the host cell is OK. 다양한 형질감염용 바이러스 균주, 예를 들어, 오토그래파 칼리포니카( Autographa A variety of viral strains for transfection, for example, auto par Carly Yes pony car (Autographa californica ) NPV의 L-1 변이체 및 봄빅스 모리 NPV의 Bm-5 균주가 공개적으로 입수가능하고, 이같은 바이러스들은, 특히 스포롭테라 프루기페르다 세포의 형질감염을 위해, 본 발명에 따라 본원에서 바이러스로 사용될 수 있다. californica) Bm-5 strain of the L-1 variant and the spring Biggs mori NPV of NPV is publicly available, and these viruses, in particular sports Rob TB frugiperda for transfection of cells, and herein, in accordance with the invention It can be used as a virus.

그러나, 척추동물 세포가 가장 흥미롭고, 배양물 (조직 배양물)에서의 척추동물 세포의 증식은 일상적인 절차가 되었다. However, the proliferation of vertebrate cells in vertebrate cells is the most exciting, the culture (tissue culture) has become a routine procedure. 유용한 포유류 숙주 세포주의 예는 SV40으로 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7, ATCC CRL 1651); Examples of useful mammalian host cell lines are transformed monkey kidney CV1 cell line by SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 세포주 (293 또는 현탁액 배양에서의 성장을 위해 서브클로닝된 293 세포, [Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)]); Human embryonic kidney cell line (293 or suspensions for growth in culture subcloning the 293 cells, [Graham et al, J. Gen Virol 36:59 (1977)..]); 베이비 햄스터 신장 세포주 (BHK, ATCC CCL 10); Baby hamster kidney cells (BHK, ATCC CCL 10); 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR (CHO, [Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)]); Chinese hamster ovary cells / -DHFR (CHO, [Urlaub et al, Proc Natl Acad Sci USA 77:..... 4216 (1980)]); 마우스 세르톨리(sertoli) 세포 (TM4, [Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)]); Mouse Sertoli (sertoli) cells (TM4, [Mather, Biol Reprod 23:.. 243-251 (1980)]); 원숭이 신장 세포 (CV1 ATCC CCL 70); Monkey kidney cells (CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76, ATCC CRL-1587); African green monkey kidney cells (VERO-76, ATCC CRL-1587); 인간 자궁경부암종 세포 (HELA, ATCC CCL 2); Human cervical carcinoma cells (HELA, ATCC CCL 2); 개 신장 세포 (MDCK, ATCC CCL 34); Canine kidney cells (MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 래트(buffalo rat) 간 세포 (BRL 3A, ATCC CRL 1442); Buffalo rat (buffalo rat) liver cells (BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포 (W138, ATCC CCL 75); Human lung cells (W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포 (Hep G2, HB 8065); Human liver cells (Hep G2, HB 8065); 마우스 유방 종양 (MMT 060562, ATCC CCL51); Mouse mammary tumor (MMT 060562, ATCC CCL51); TRI 세포 ([Mather et al., Annals NY Acad. Sci. 383:44-68 (1982)]); TRI cells ([Mather et al, Annals NY Acad Sci 383:... 44-68 (1982)]); MRC 5 세포; MRC 5 cells; FS4 세포; FS4 cells; 및 인간 간세포암 세포주 (Hep G2)이다. And a human hepatoma cell line (Hep G2).

숙주 세포를 원하는 폴리펩티드 생산을 위한 상기 기술된 발현 또는 클로닝 벡터로 형질전환시키고, 프로모터 유도, 형질전환체 선별 또는 원하는 서열을 코딩하는 유전자의 증폭에 적절하게 변형된 통상적인 영양 배지에서 배양한다. Transforming a host cell with the above-described expression or cloning vectors for polypeptide production and desired, the culture in the promoter induction, transformants screened or conventional nutrient media modified as appropriate for amplification of the gene encoding the desired sequences.

3. 복제가능한 벡터의 선별 및 사용 3. Selection and Use of a replicable vector

각각의 LY6 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 (예를 들어, cDNA 또는 게놈 DNA)을 클로닝 (DNA의 증폭) 또는 발현을 위해 복제가능한 벡터 내로 삽입할 수 있다. Nucleic acid encoding the respective LY6 polypeptide (e.g., cDNA or genomic DNA) may be inserted into a replicable vector for cloning (amplification of the DNA) or expression. 다양한 벡터가 공개적으로 입수가능하다. Various vectors are publicly available. 벡터는, 예를 들어, 플라스미드, 코스미드, 바이러스 입자, 또는 파지의 형태일 수 있다. Vector is, for example, may be in the form of a plasmid, cosmid, viral particle, or phage. 다양한 절차에 의해 적합한 핵산 서열이 벡터 내로 삽입될 수 있다. The appropriate nucleic acid sequence by a variety of procedures may be inserted into the vector. 일반적으로, 당업계에 공지된 기술을 이용하여 DNA를 적절한 제한 엔도뉴클레아제 부위(들) 내로 삽입한다. Generally, the DNA is inserted using known techniques in the art into an appropriate restriction endonuclease site (s). 일반적으로 벡터 성분은 신호 서열, 복제 기원, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 요소, 프로모터, 및 전사 종결 서열 중 하나 이상을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. In general, the vector components are a signal sequence, origin of replication, one or more marker genes, an enhancer element, a promoter, and a transcription termination sequence one or more of, but are not limited to. 이러한 성분들 중 하나 이상을 함유하는 적절한 벡터의 구축은 당업자에게 공지된 표준 결찰 기술을 사용한다. Construction of suitable vectors containing one or more of these ingredients should use a standard ligation techniques known to those skilled in the art.

원하는 폴리펩티드는 재조합에 의해 직접적으로 생산될 수 있을 뿐만 아니라, 이종성 폴리펩티드와의 융합 폴리펩티드로서 생산될 수 있고, 상기 이종성 폴리펩티드는 신호 서열, 또는 성숙형 단백질 또는 폴리펩티드의 N-말단에 특정 절단 부위가 있는 기타 폴리펩티드일 수 있다. The desired polypeptide is not only can be produced directly by recombinant, heterologous and can be produced as a fusion polypeptide of a polypeptide, the heterologous polypeptide is a signal sequence, or a mature protein or to the N- terminus of the polypeptide with a specific cleavage site Others may be a polypeptide. 일반적으로, 신호 서열은 벡터의 성분일 수 있거나, 또는 벡터 내로 삽입되는 성숙형 서열을 코딩하는 DNA의 일부분일 수 있다. In general, the signal sequence may be may be a component of the vector, or a portion of the DNA encoding the mature sequence that is inserted into the vector. 신호 서열은 알칼리성 포스파타제, 페니실리나제, lpp, 또는 열-안정성 장독소 II 리더로 구성된 군으로부터 예를 들어 선택된 원핵생물 신호 서열일 수 있다. Alkaline phosphatase signal sequence, Penicillium xylanase, lpp, or heat-can be, for example, the selected prokaryotic signal sequence from the group consisting of a toxin stability Chapter II leaders. 효모 분비를 위해, 신호 서열은, 예를 들어, 효모 인버타제(invertase) 리더, 알파 인자 리더 (사카로마이세스 및 클루이베로마이세스 α-인자 리더 포함, 후자는 미국 특허 번호 5,010,182에 기술되어 있음), 또는 산 포스파타제 리더, 칸디다 알비칸스( C. albicans ) 글루코아밀라제 리더 (EP 362,179 (1990년 4월 4일 공개)), 또는 WO 90/13646 (1990년 11월 15일 공개)에 기술된 신호일 수 있다. For yeast secretion, the signal sequence, e.g., the yeast invertase hydratase comprising (invertase) leader, alpha factor leader (saccharide in my process and Cluj Vero My process α- factor leaders, the latter being available, are listed in U.S. Patent No. 5,010,182 ), or acid phosphatase leader, Candida albicans (C. albicans) glucoamylase leader (EP 362,179 (1990 4 04, Publication)), or WO 90/13646 (published November 1990 May 15), the signal described in can. 포유류 세포 발현에서, 포유류 신호 서열, 예컨대 동일하거나 관련된 종의 분비형 폴리펩티드로부터의 신호 서열, 뿐만 아니라 바이러스 분비 리더를 사용하여 단백질의 분비를 지시할 수 있다. In mammalian cell expression, mammalian signal sequences by, for example, equal to or signals from secreted polypeptides of the sequences related species, as well as use of viral secretory leader may direct the secretion of the protein.

발현 벡터 및 클로닝 벡터 양쪽 모두 벡터가 하나 이상의 선택된 숙주 세포 내에서 복제할 수 있도록 하는 핵산 서열을 함유한다. All expression vectors and cloning vectors should contain both a nucleic acid sequence that enables the vector to replicate in one or more selected host cells. 이같은 서열은 다양한 박테리아, 효모, 및 바이러스에 대해 주지되어 있다. Such sequences are well known for a variety of bacteria, yeast, and viruses. 플라스미드 pBR322로부터의 복제 기원이 대부분의 그람-음성 박테리아에 대해 적절하고, 2μ 플라스미드 기원이 효모에 적절하며, 다양한 바이러스 기원 (SV40, 폴리오마, 아데노바이러스, VSV 또는 BPV)이 포유류 세포에서 벡터를 클로닝하는데 유용하다. The origin of replication from the plasmid pBR322 most Gram-and appropriately, and 2μ plasmid origin for negative bacteria suitable for yeast, cloning a variety of viral origin vectors in (SV40, polyoma, adenovirus, VSV or BPV) are mammalian cells it is useful.

발현 및 클로닝 벡터는 선별가능 마커로 또한 명명된 선별 유전자를 전형적으로 함유할 것이다. Expression and cloning vectors will typically contain a selection gene also named as a screening marker. 전형적인 선별 유전자는 (a) 항생제 또는 기타 독소, 예를 들어, 앰피실린, 네오마이신, 메토트렉세이트, 또는 테트라사이클린에 대한 저항성을 부여하거나, (b) 영양요구성 결핍을 보완하거나, 또는 (c) 복합 배지에서 이용가능하지 않은 결정적인 영양소를 공급하는 단백질을 코딩하고, 예를 들어, 바실러스의 경우 D-알라닌을 코딩하는 유전자이다. Typical selection gene is (a) antibiotics or other toxins, e.g., ampicillin, neomycin, methotrexate, or imparting resistance to tetracycline or, (b) nutritional supplement the requirement deficiencies, or (c) compound encoding a protein to supply critical nutrients not available in the medium, and for example, in the case of a Bacillus gene encoding a D- alanine.

포유류 세포에 대한 적절한 선별가능 마커의 예는 바람직한 단백질을 코딩하는 핵산을 받아들이는데 적격인 세포의 확인을 가능하게 하는 것, 예컨대 DHFR 또는 티미딘 키나제이다. An example of a suitable selection marker for mammalian cells to accept a nucleic acid encoding a desired protein to enable confirmation of the eligible cell, for example, DHFR or thymidine kinase. 야생형 DHFR이 사용되는 경우 적합한 숙주 세포는 [Urlaub et al., Proc. If wild-type DHFR is used is a suitable host cells [Urlaub et al., Proc. Natl. Natl. Acad. Acad. Sci. Sci. USA, 77:4216 (1980)]에 기술된 바와 같이 제조 및 증식된, DHFR 활성이 결핍된 CHO 세포주이다. USA, 77: 4216 (1980)] is a CHO cell line The production and proliferation, DHFR activity is deficient as described. 효모에서 사용하기에 적절한 선택 유전자는 효모 플라스미드 YRp7에 존재하는 trp 1 유전자이다 ([Stinchcomb et al., Nature, 282:39 (1979)]; [Kingsman et al., Gene. 7:141 (1979)]; [Tschemper et al., Gene, 10:157 (1980)]). Proper selection gene for use in yeast is the trp 1 gene present in the yeast plasmid YRp7 ([Stinchcomb et al, Nature , 282:. 39 (1979)]; [Kingsman et al, Gene 7:.. 141 (1979) ]; [Tschemper et al, Gene, 10:. 157 (1980)]). trp 1 유전자는 트립토판에서 성장하는 능력이 없는 효모의 돌연변이 균주, 예를 들어, ATCC No. trp 1 gene is a mutant strain of yeast does not have the ability to grow in tryptophan, for example, ATCC No. 44076 또는 PEP4-1에 대한 선별 마커를 제공한다 ([Jones, Genetics. 85:12 (1977)]). Provides a selection marker for a 44 076 or PEP4-1 ([Jones, Genetics. 85:12 (1977)]).

발현 및 클로닝 벡터는 mRNA 합성을 지시하기 위해, 원하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열에 작동적으로 연결되된 프로모터를 일반적으로 함유한다. Expression and cloning vectors to indicate the mRNA synthesis, generally contain as the being operably linked to a nucleotide sequence encoding the desired amino acid sequence of the promoter. 다양한 잠재적인 숙주 세포에 의해 인식되는 프로모터들이 주지되어 있다. There are well known promoters recognized by a variety of potential host cells. 원핵생물 숙주와 사용하기에 적절한 프로모터로는 β-락타마제 및 락토스 프로모터 시스템 ([Chang et al., Nature, 275:615 (1978)]; [Goeddel et al., Nature. 281:544 (1979)]), 알칼리성 포스파타제, 트립토판 (trp) 프로모터 시스템 ([Goeddel, Nucleic acids Res., 8:4057 (1980)]; EP 36,776), 및 하이브리드 프로모터 예컨대 tac 프로모터 ([deBoer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 80:21-25 (1983)])가 포함된다. A suitable promoter for use with prokaryotic hosts include β- lactamase and lactose promoter systems ([. Chang et al, Nature, 275: 615 (1978)]; [Goeddel et al, Nature 281:.. 544 (1979) ]), alkaline phosphatase, tryptophan (trp) promoter system ([Goeddel, Nucleic acids Res, 8:. 4057 (1980)..]; EP 36,776), and hybrid promoters, for example the tac promoter ([deBoer et al, Proc Natl. ... Acad Sci USA 80: include 21-25 (1983)). 박테리아 시스템에서 사용하기 위한 프로모터는 원하는 단백질 서열을 코딩하는 DNA에 작동적으로 연결된 샤인-달가노(Shine-Dalgarno) (SD) 서열을 또한 함유할 것이다. Promoters for use in bacterial systems are desired protein Shine to DNA encoding the sequence operatively linked to - will also contain Dalgarno (Shine-Dalgarno) (SD) sequence.

효모와 함께 사용하기에 적절한 프로모터 서열의 예로는 3-포스포글리세레이트 키나제 ([Hitzeman et al., J. Biol. Chem., 255:2073 (1980)]) 또는 기타 당분해성 효소 ([Hess et al., J. Adv. Enzyme Reg., 7:149 (1968)]; [Holland, Biochemistry. 17:4900 (1978)]), 예컨대 에놀라제, 글리세르알데히드-3-포스페이트 탈수소효소, 헥소키나제, 피루베이트 디카르복실라제, 포스포프룩토키나제, 글루코스-6-포스페이트 이소머라제, 3-포스포글리세레이트 뮤타제, 피루베이트 키나제, 트리오스포스페이트 이소머라제, 포스포글루코스 이소머라제, 및 글루코키나제에 대한 프로모터가 포함된다. Examples of suitable promoter sequences for use with yeast, 3-phosphoglycerate kinase ([Hitzeman et al, J. Biol Chem, 255:... 2073 (1980)]) or other decomposable enzyme per ([Hess et al, J. Adv enzyme Reg, 7: 149 (1968)]; [Holland, Biochemistry 17:.... 4900 (1978)]), the granola, for example, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, hexokinase , pyruvate decarboxylase, phosphofructokinase look Tokina claim, glucose-6-phosphate isomerase, 3-phosphoglycerate mu hydratase, pyruvate kinase, the trio seuposeu sulfate isomerase, phospho-glucose isomerase, and it includes promoters for the glucokinase.

성장 조건에 의해 전사가 제어되는 추가적인 장점이 있는 유도성 프로모터인기타 효모 프로모터는 알콜 탈수소효소 2, 이소사이토크롬 C, 산 포스파타제, 질소 대사와 관련된 분해성 효소, 메탈로티오네인, 글리세르알데히드-3-포스페이트 탈수소효소, 및 말토스 및 갈락토스 활용을 담당하는 효소에 대한 프로모터 영역이다. Inducible promoter in other yeast promoters that have the additional advantage of transcription controlled by growth conditions are the alcohol dehydrogenase 2, iso-cytochrome C, acid phosphatase, metallothionein, degradable enzymes associated with nitrogen metabolism, glyceraldehyde -3 - the promoter region of the-phosphate dehydrogenase, and enzymes responsible for maltose and galactose utilization. 효모 발현에서 사용하기 위한 적절한 벡터 및 프로모터가 EP 73,657에 추가로 기술되어 있다. Appropriate vectors and promoters for use in yeast expression are further described in EP 73,657.

포유류 숙주 세포에서의 DNA 전사는, 예를 들어, 폴리오마 바이러스, 조류폭스 바이러스 (UK 2,211,504 (1989년 7월 5일 공개)), 아데노바이러스 (예컨대 아데노바이러스 2), 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 레트로바이러스, B형 간염 바이러스 및 원숭이(Simian) 바이러스 40 (SV40)과 같은 바이러스의 게놈으로부터, 이종성 포유류 프로모터, 예를 들어, 액틴 프로모터 또는 면역글로불린 프로모터로부터, 그리고 열-충격 프로모터로부터 수득한 프로모터에 의해 제어되고, 단, 이같은 프로모터는 숙주 세포 시스템과 상용성이다. DNA transcription in mammalian host cells, for example, polyoma virus, avian poxvirus (UK 2,211,504 (July 1989 0 months 5)), adenovirus (such as Adenovirus 2), bovine papilloma virus, avian sarcoma virus , cytomegalovirus, a retrovirus, B type hepatitis virus, and monkey (Simian) from the genome of viruses such as virus 40 (SV40), heterologous mammalian promoters, e.g., from the actin promoter or an immunoglobulin promoter, and heat-shock promoters It is controlled by a promoter obtained from, provided such promoters are compatible with the host cell systems.

인핸서 서열을 벡터 내로 삽입함으로써 원하는 폴리펩티드를 코딩하는 DNA의 전사가 증가될 수 있다. A transcription of the DNA encoding the desired polypeptide may be increased by inserting an enhancer sequence into the vector. 인핸서는 프로모터 상에 작용하여 전사를 증가시키는, DNA의 시스-작용 요소 (일반적으로 약 10 내지 300 bp)이다. Enhancers are cis to the DNA to act on the promoter to increase the transcription - a functional element (generally about 10 to 300 bp). 많은 인핸서 서열이 포유류 유전자들로부터 현재 공지되어 있다 (글로빈, 엘라스타제, 알부민, α-태아단백질, 및 인슐린). There are many enhancer sequences are now known from mammalian genes (globin, elastase, albumin, α- fetoprotein, and insulin). 그러나, 전형적으로, 진핵생물 세포 바이러스로부터의 인핸서가 사용될 것이다. However, typically, it would have an enhancer from a eukaryotic cell virus is used. 예로는 복제 기원의 후기 측면의 SV40 인핸서 (bp 100-270), 사이토메갈로바이러스 초기 프로모터 인핸서, 복제 기원의 후기 측면의 폴리오마 인핸서, 및 아데노바이러스 인핸서가 포함된다. Examples include the polyoma enhancer, and adenovirus enhancers of the late side of the SV40 enhancer (bp 100-270), the cytomegalovirus early promoter enhancer of the late side of the replication origin, origin of replication. 인핸서는 상기의 아미노산 서열들의 코딩 서열의 5' 또는 3'인 위치에서 벡터 내로 스플라이싱될 수 있지만, 바람직하게는 프로모터로부터 5'인 부위에 위치한다. Enhancer may be fly into the vector's caching at the 5 'or 3' position of the coding sequence of the amino acid sequence of the above, preferably located at the 5 'site from the promoter.

진핵생물 숙주 세포 (효모, 진균류, 곤충, 식물, 동물, 인간, 또는 기타 다세포 생물로부터의 유핵 세포)에서 사용된 발현 벡터는 전사 종결 및 mRNA 안정화에 필요한 서열을 또한 함유할 것이다. The expression vectors used in eukaryotic host cells (yeast, fungi, insect, plant, animal, nucleated cells from a human, or other multicellular organisms) will also contain sequences necessary for transcription termination and mRNA stabilization. 이같은 서열은 진핵생물 또는 바이러스 DNA 또는 cDNA의 5', 그리고 종종 3' 비번역 영역으로부터 통상적으로 입수가능하다. Such sequences can be typically available from eukaryotic or viral DNA, or 5 ', and often 3' untranslated region of the cDNA. 이러한 영역은 이러한 섹션에서 기술된 각각의 항체, 폴리펩티드 또는 올리고펩티드를 코딩하는 mRNA의 비번역 부분에서 폴리아데닐화 단편으로 전사된 뉴클레오티드 절편을 함유한다. This region contains a nucleotide fragment transferred polyadenylated fragments in the untranslated portion of the mRNA encoding the respective antibody, polypeptide or oligopeptide described in this section.

재조합 척추동물 세포 배양에서의 각각의 항체, 폴리펩티드 또는 올리고펩티드의 합성에 대해 개조하기에 적절한 또다른 방법, 벡터 및 숙주 세포가 [Gething et al., Nature, 293:620-625 (1981)]; Each of the antibody, polypeptide or oligonucleotide suitable alternative to modifications for the synthesis of peptides, vectors and host cells in recombinant vertebrate cell culture are [Gething et al, Nature, 293:. 620-625 (1981)]; [Mantei et al., Nature, 281:40-46 (1979)]; [Mantei et al, Nature, 281:. 40-46 (1979)]; EP 117,060; EP 117,060; 및 EP 117,058에 기술되어 있다. And it is described in EP 117,058.

4. 숙주 세포 배양 4. The host cell culture

LY6 폴리펩티드를 생산하는데 사용된 숙주 세포를 다양한 배지에서 배양할 수 있다. The host cell used to produce the LY6 polypeptide may be cultured in a variety of media. 햄(Ham) F10 (Sigma), 최소 필수 배지 ((MEM), Sigma), RPMI-1640 (Sigma), 및 둘베코 변형 이글 배지 ((DMEM), Sigma)와 같은 시판 배지가 숙주 세포의 배양에 적절하다. To a culture of Ham (Ham) F10 (Sigma), Minimum Essential Medium ((MEM), Sigma), RPMI-1640 (Sigma), and Dulbecco's modified Eagle's medium ((DMEM), Sigma) with a commercially available culture medium the host cell, such as proper. 또한, [Ham et al., Meth. In addition, [Ham et al., Meth. Enz. Enz. 58:44 (1979)], [Barnes et al., Anal. 58:44 (1979)], [Barnes et al., Anal. Biochem. Biochem. 102:255 (1980)], 미국 특허 번호 4,767,704; 102: 255 (1980), U.S. Patent No. 4,767,704; 4,657,866; 4,657,866; 4,927,762; 4,927,762; 4,560,655; 4,560,655; 또는 5,122,469; Or 5,122,469; WO 90/03430; WO 90/03430; WO 87/00195; WO 87/00195; 또는 미국 특허 Re. Or US Patent Re. 30,985에 기술된 배지들 중 임의의 배지를 숙주 세포용 배양 배지로 사용할 수 있다. Of the medium described in 30 985 can be any medium in the culture media for the host cells. 필요하다면 임의의 이러한 배지에 호르몬 및/또는 기타 성장 인자 (예컨대 인슐린, 트랜스페린, 또는 표피 성장 인자), 염 (예컨대 염화나트륨, 칼슘, 마그네슘, 및 포스페이트), 완충제 (예컨대 HEPES), 뉴클레오티드 (예컨대 아데노신 및 티미딘), 항생제 (예컨대 GENTAMYCIN™ 약물), 미량 원소 (일반적으로 마이크로몰 범위의 최종 농도로 존재하는 무기 화합물로 정의됨), 및 글루코스 또는 등가의 에너지 공급원을 보충할 수 있다. If necessary hormones in any such media and / or other growth factors (such as insulin, transferrin, or epidermal growth factor), salts (such as sodium chloride, calcium, magnesium, and phosphate), buffers (such as HEPES), nucleotides (such as adenosine and thymidine), antibiotics (such as GENTAMYCIN ™ drug), it is possible to compensate for the trace elements (defined as inorganic compounds usually being present in a final concentration in the micromolar range), and glucose or an equivalent energy source. 임의의 기타 필요한 보충물이 당업자에게 공지된 적절한 농도로 또한 포함될 수 있다. It may also be included at appropriate concentrations and any other necessary supplements known to those of skill in the art. 배양 조건, 예컨대 온도, pH 등은 발현용으로 선택된 숙주 세포와 함께 기존에 사용된 것들이고, 당업자에게 명백할 것이다. The culture conditions, such as temperature, pH and the like, and those used in existing with the host cell selected for expression, and will be apparent to those skilled in the art.

5. 유전자 증폭/발현 검출 5. gene amplification / expression is detected

본원에서 제공된 서열을 기초로, 적합하게 표지된 프로브를 사용하여, 유전자 증폭 및/또는 발현을 샘플에서 직접적으로, 예를 들어, 통상적인 서던 블롯팅, mRNA의 전사를 정량하는 노던 블롯팅 ([Thomas, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 77:5201-5205 (1980)]), 도트 블롯팅 (DNA 분석), 또는 제자리 혼성화에 의해 측정할 수 있다. Based on the sequences provided herein, using a suitably labeled probe, directly in the sample to DNA amplification and / or expression, e.g., conventional Southern blotting, northern blotting for quantifying transcription of mRNA ([ ..... Thomas, Proc Natl Acad Sci USA 77: 5201-5205 (1980)]), dot block can be measured by the rotting (DNA analysis), or hybridization in place. 별법적으로, DNA 이합체, RNA 이합체, 및 DNA-RNA 하이브리드 이합체 또는 DNA-단백질 이합체가 포함되는 특정 이합체를 인식할 수 있는 항체를 사용할 수 있다. Law, it is possible to use a DNA duplexes, RNA duplexes, and DNA-RNA hybrid duplexes or antibody that can recognize specific duplexes contained a DNA- protein duplexes specific. 이어서, 표면 상에 이합체가 형성되면 이합체에 결합된 항체의 존재를 검출할 수 있도록, 항체를 표지시킬 수 있고, 이합체가 표면에 결합된 분석법을 수행할 수 있다. Then, when a dimer is formed on the surface to detect the presence of antibody bound to the duplex, and the antibody can be labeled, and the dimer to perform the assay bound to the surface.

별법적으로, 유전자 발현을 면역학적 방법, 예컨대 세포 또는 조직 절편의 면역조직화학적 염색 및 세포 배양물 또는 체액의 분석에 의해 측정하여, 유전자 생성물의 발현을 직접적으로 정량할 수 있다. Legally, the gene expression immunological methods, for example as measured by the cell or immunohistochemical staining and analysis of cell culture or body fluids of a tissue section can be directly determined by the expression of a gene product-specific. 면역조직화학적 염색 및/또는 샘플액의 분석에 유용한 항체는 모노클로날 또는 폴리클로날일 수 있고, 임의의 포유동물에서 제조될 수 있다. Antibodies useful for immunohistochemical staining and / or analysis of the sample liquid may nalil day polyclonal or monoclonal, may be prepared in any mammal. 간편하게, 천연 서열 폴리펩티드 또는 올리고펩티드에 대해, 또는 DNA에 융합되고 이같은 폴리펩티드 또는 올리고펩티드의 특정 항체 에피토프를 코딩하는 외인성 서열에 대해, 본 발명의 방법에 적절한 항체를 제조할 수 있다. Conveniently, it is fused to, or DNA for the native sequence polypeptide or oligopeptide for the exogenous sequences such polypeptide or oligonucleotide encoding a specific antibody epitope of the peptide, can be made an appropriate antibody in the method of the present invention.

6. 단백질 정제 6. Protein Purification

배양 배지로부터 또는 숙주 세포 용해물로부터 폴리펩티드를 회수할 수 있다. It can be recovered from the polypeptide from the culture medium or lysate host cell. 막-결합된 경우, 적절한 세제 용액 (예를 들어 Triton-X 100)을 사용하여 또는 효소에 의한 절단에 의해 막으로부터 이를 방출시킬 수 있다. Membrane-bound case, a suitable detergent solution (e.g. Triton-X 100) can be released from this membrane by digestion with the enzyme or use. 상기 물질의 발현에 사용된 세포를 다양한 물리적 또는 화학적 수단, 예컨대 동결-해동 사이클링, 초음파처리, 기계적 파괴 또는 세포 용해제에 의해 파괴시킬 수 있다. Expressing cells various physical or chemical means, for use in the above materials, such as freeze-thaw cycling can be destroyed by, ultrasonication, mechanical fracture or cell agent.

상기 물질을 재조합 세포 단백질 또는 폴리펩티드로부터 정제하는 것이 바람직할 수 있다. The material may preferably be purified from recombinant cell proteins or polypeptides. 하기의 절차는 대표적인 적절한 정제 절차이다: 이온-교환 컬럼 상에서의 분획화; Following procedure is representative of suitable purification procedures: the ion-exchange column fractionation on; 에탄올 침전; Ethanol precipitation; 역상 HPLC; Reverse phase HPLC; 실리카 또는 양이온-교환 수지 예컨대 DEAE 상에서의 크로마토그래피; Silica or cation-exchange resin, for example, chromatography on DEAE; 크로마토포커싱(chromatofocusing); Focusing chromatography (chromatofocusing); SDS-PAGE; SDS-PAGE; 황산암모늄 침전; Ammonium sulfate precipitation; Sephadex G-75를 예를 들어 사용하는 젤 여과; A Sephadex G-75 gel filtration using, for example; IgG와 같은 오염물을 제거하기 위한 단백질 A 세파로스 컬럼; Protein A Sepharose columns to remove contaminants such as IgG; 및 에피토프 태그가 부착된 형태의 Wnt 길항제의 결합을 위한 금속 킬레이팅 컬럼. And metal chelating columns to the binding of the epitope of the Wnt antagonist are attached form tag. 다양한 단백질 정제 방법이 이용가능하고, 이같은 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 [Deutscher, Methods in Enzymology, 182 (1990)]; Available for a variety of protein purification methods, and such methods are known in the art, for example [Deutscher, Methods in Enzymology, 182 (1990)]; [Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Springer-Verlag, New York (1982)]에 기술되어 있다. Are described in: [Principles and Practice, Springer-Verlag, New York (1982) Scopes, Protein Purification]. 선택된 정제 단계(들)은, 예를 들어, 사용된 생산 공정의 성질, 및 청구된 방법들에 대해 생산된 특정 항체, 폴리펩티드 또는 올리고펩티드에 좌우될 것이다. Purification step (s) selected, for example, will depend upon the particular antibody, polypeptide or oligopeptide produced for the nature, and the claimed process of the production process used.

재조합 기술을 사용할 때, LY6 폴리펩티드가 세포 내에서 생산되거나, 원형질막 주위공간 내에서 생산되거나, 또는 배지 내로 직접 분비될 수 있다. When using recombinant techniques, or LY6 polypeptide is produced intracellularly, or produced in the space around the plasma membrane, or may be directly secreted into the medium. 이같은 분자가 세포 내에서 생산되는 경우, 첫번째 단계로서, 숙주 세포 또는 용해된 단편인 입상물질 잔해물을, 예를 들어, 원심분리 또는 초여과에 의해 제거한다. If such molecules are produced intracellularly, as a first step, the host cells or soluble fragments of the particulate material debris, for example, removed by centrifugation or ultrafiltration. [Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)]에는 대장균의 원형질막 주위공간으로 분비된 항체를 단리하는 절차가 기술되어 있다. [Carter et al, Bio / Technology 10:. 163-167 (1992)], there are procedures for isolating the secreted into the surrounding space of the E. coli plasma membrane antibody is described. 간략하게, 세포 페이스트를 아세트산나트륨 (pH 3.5), EDTA, 및 페닐메틸술포닐플루오라이드 (PMSF)의 존재 하에 약 30분 동안 해동시킨다. Briefly, the cell paste is thawed in the presence of sodium acetate (pH 3.5), EDTA, and phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) for about 30 minutes. 세포 잔해물을 원심분리에 의해 제거할 수 있다. Cells can be removed by centrifugation debris. 항체가 배지 내로 분비되는 경우, 일반적으로 이같은 발현 시스템으로부터의 상등액을 시판되는 단백질 농축 필터, 예를 들어, Amicon 또는 Millipore Pellicon 초여과 유닛을 사용하여 먼저 농축시킨다. If the antibody is secreted into the medium, in general, such protein expression is concentrated on the market and the supernatant from the filter system, for example, using Amicon ultrafiltration unit or Millipore Pellicon is concentrated first. 단백질분해를 억제하기 위해 프로테아제 억제제 예컨대 PMSF가 임의의 상기 단계에서 포함될 수 있고, 우발적인 오염물의 성장을 방지하기 위해 항생제가 포함될 수 있다. And the protease inhibitors PMSF may be included, for example at any of the steps to inhibit proteolysis, and antibiotics may be included to prevent the growth of adventitious contaminants.

예를 들어, 히드록시아파타이트 크로마토그래피, 젤 전기영동, 투석, 및 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제가 일어날 수 있고, 친화성 크로마토그래피가 바람직한 정제 기술이다. For example, hydroxyapatite chromatography, gel is electrophoresis, dialysis, and affinity chromatography is a preferred purification technique may occur purification, affinity chromatography using. 친화성 리간드로서의 단백질 A의 적합성은 항체에 존재하는 임의의 면역글로불린 Fc 도메인의 종 및 이소타입에 좌우된다. Suitability of protein A as an affinity ligand depends on the species and isotype of any immunoglobulin Fc domain that is present in the antibody. 단백질 A를 사용하여 인간 γ1, γ2 또는 γ4 중쇄를 기초로 하는 항체를 정제할 수 있다 ([Lindmark et al., J. Immunol. Meth. 62:1-13 (1983)]). Can be purified antibodies based on human γ1, γ2 or γ4 heavy chains using protein A ([Lindmark et al, J. Immunol Meth 62:... 1-13 (1983)]). 단백질 G는 모든 마우스 이소타입 및 인간 γ3에 대해 권장된다 ([Guss et al., EMBO J. 5:15671575 (1986)]). Protein G is recommended for all mouse isotypes and human γ3 ([Guss et al, EMBO J. 5:. 15671575 (1986)]). 친화성 리간드가 부착되는 매트릭스는 거의 대부분 아가로스이지만, 다른 매트릭스도 이용가능하다. Mars pro-matrix ligands are attached, but almost agarose, it is also possible to use another matrix. 기계적으로 안정적인 매트릭스 예컨대 제어형 다공성 유리 또는 폴리(스티렌디비닐)벤젠은 아가로스로 달성할 수 있는 것보다 유속이 더 빠르게 하고 처리 시간이 더 짧게 한다. Mechanically stable matrices e.g. controlled porous glass or poly (styrene-divinyl) benzene, further can be a faster flow rate and process time than that to be achieved with agarose short. 항체가 C H 3 도메인을 포함하는 경우, Bakerbond ABX™ 수지 (JT Baker (Phillipsburg, NJ))가 정제에 유용하다. If the antibody comprises a C H 3 domain, the Bakerbond ABX ™ resin is useful for purification (JT Baker (Phillipsburg, NJ) ). 회수될 항체에 따라 기타 단백질 정제 기술 예컨대 이온-교환 컬럼 상에서의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 상에서의 크로마토그래피, 헤파린 SEPHAROSE™ 상에서의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지 (예컨대 폴리아스파르트산 컬럼) 상에서의 크로마토그래피, 크로마토포커싱, SDS-PAGE, 및 황산암모늄 침전이 또한 이용가능하다. Other protein purification techniques, for example ion, depending on the antibody to be recovered - fractionation, ethanol precipitation, reverse phase HPLC, chromatography, anion or cation exchange resin (such as polyaspartic acid column on chromatography, heparin SEPHAROSE ™ on silica on the exchange column ) this chromatography, chromatographic focusing, SDS-PAGE, and ammonium sulfate precipitation on are also useful.

임의의 예비 정제 단계(들) 후에, 당해 항체 및 오염물을 포함하는 혼합물을 pH 약 2.5-4.5의 용출 완충제를 사용하는 낮은 pH 소수성 상호작용 크로마토그래피에 적용시킬 수 있고, 이는 바람직하게는 낮은 염 농도 (예를 들어, 약 0-0.25M 염)에서 수행된다. After any preliminary purification step (s), and a mixture containing the antibody and contaminant the art can be applied to low pH hydrophobic interaction chromatography using an elution buffer of pH from about 2.5 to 4.5, which is preferably a low salt concentration is carried out in a (e. g., from about 0-0.25M salt).

H. 제약 제형 H. Pharmaceutical Formulations

본 발명에 따라 사용된 치료 제형 ("치료제")은 원하는 정도의 순도를 갖는 치료제(들)를 임의의 제약상 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제 ([Remington; The Science of Practice of Pharmacy, 20th edition, Gennaro, A. et al., Ed., Philadelphia College of Pharmacy and Science (2000)])와 혼합함으로써 동결건조 제형 또는 수용액의 형태로 보관용으로 제조될 수 있다. The treatment formulation ( "cure") is a therapeutic agent (s) with the purity of the desired degree of any pharmaceutically acceptable carriers, excipients or stabilizers used according to the invention ([Remington; The Science of Practice of Pharmacy, 20th edition , Gennaro, A. et al., Ed., can be prepared for storage in the form of lyophilized formulations or aqueous solutions by mixing the Philadelphia College of Pharmacy and Science (2000)]). 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충제 예컨대 아세테이트, 트리스, 포스페이트, 시트레이트 및 기타 유기산; Acceptable carriers, excipients, or stabilizers are to recipients at the dosages and concentrations used nontoxic, buffers such as acetate, Tris, phosphate, citrate, and other organic acids; 아스코르브산 및 메티오닌이 포함되는 항산화제; Antioxidants contained ascorbic acid and methionine; 방부제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥사놀; 3-펜타놀; 및 m-크레졸); Preservatives (for example, octadecyl dimethyl benzyl ammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride, benzethonium chloride in benzamide; phenol, butyl or benzyl alcohol; methyl or alkyl parabens such as propylparaben; catechol; resorcinol; cyclohexanol play; 3-pentanol; and m- cresol); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; Low molecular weight (less than about ten residues of) polypeptides; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; Proteins, such as serum albumin, gelatin, or immunoglobulins; 친수성 중합체 예컨대 폴리비닐피롤리돈; Hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; 아미노산 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신; Amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine or lysine; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린이 포함되는 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물; Glucose, monosaccharides, disaccharides, and other carbohydrates that include mannose, or dextrins; 킬레이팅제 예컨대 EDTA; Chelating agent, for example EDTA; 등장화제 예컨대 트레할로스 및 염화나트륨; Isotonic agents, for example trehalose and sodium chloride; 당 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; For example sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol sugar; 계면활성제 예컨대 폴리소르베이트; Surfactants for example polysorbates; 염-형성 카운터 이온 예컨대 나트륨; Salt-forming counterions such as sodium; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 착물); Metal complexes (e.g., Zn- protein complexes); 및/또는 비-이온성 계면활성제 예컨대 TWEEN™, PLURONICS™ 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이 포함된다. And / or non-ionic surface active agent e.g. TWEEN ™, PLURONICS ™ or polyethylene glycol (PEG) is included. 바람직하게는, 제형은 5-200 ㎎/㎖, 바람직하게는 10-100 ㎎/㎖의 농도로 항체를 포함한다. Preferably, the formulations 5-200 ㎎ / ㎖, preferably comprising an antibody at a concentration of 10-100 ㎎ / ㎖.

본원에서의 제형은 치료될 특정 적응증에 필요한 경우 1가지를 초과하는 활성 화합물, 바람직하게는 서로에게 역효과를 일으키지 않는 보완적인 활성을 갖는 것들을 또한 함유할 수 있다. Formulation in the present application is, if necessary, the specific indication being treated active compound, preferably greater than one kinds may also contain those having a complementary activity which does not cause an adverse effect to each other. 예를 들어, 상기의 치료제(들)에 더하여, 추가적인 항체, 예를 들어, 제2의 이같은 치료제, 또는 신경아교종의 성장에 영향을 미치는 성장 인자와 같은 일부 다른 표적에 대한 항체를 제형 내에 포함하는 것이 바람직할 수 있다. For example, in addition to the therapeutic agent (s), an additional antibody, e.g., comprising an antibody to some other target such as these therapeutic agents, or growth factor that affects the growth of glioma of the second in the formulation it may be desirable. 별법적으로 또는 추가적으로, 조성물은 화학요법제, 세포독성제, 사이토카인, 성장 억제제, 항호르몬제 및/또는 심장보호제를 추가로 포함할 수 있다. Legal or additionally specific, the composition may further comprise a chemotherapeutic agent, cytotoxic agent, cytokine, growth inhibitory agent, anti-hormonal agent, and / or a cardioprotective agent. 이같은 분자들은 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합되어 적절하게 존재한다. Such molecules are suitably present in combination in an amount effective for the intended purpose.

또한 활성 성분들은 코아세르베이션 기술에 의해 또는 계면 중합에 의해 예를 들어 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어, 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 내에, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 내에, 또는 마크로에멀젼 내에 포획될 수 있다. In addition, the active ingredients are coacervation by techniques or by interfacial polymerization, for example producing a microcapsule, for instance, each of hydroxymethyl cellulose or gelatin-within the (methylmethacrylate) microcapsules, micro-capsules and poly in colloidal drug delivery systems (e.g. liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nano-particles and nanocapsules), or may be trapped in the macro-emulsion. 이같은 기술이 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 상기 문헌]에 개시되어 있다. Such techniques are: disclosed in [Remington The Science and Practice of Pharmacy, supra.

서방성 제제가 제조될 수 있다. A sustained-release preparation can be produced. 서방성 제제의 적절한 예로는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스가 포함되고, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. Suitable examples of sustained-release preparations containing the semi-permeable matrix of solid hydrophobic polymers containing the antibody, which matrices are in the form of shaped articles, e.g., films, or microcapsules. 서방성 매트릭스의 예로는 폴리에스테르, 히드로젤 (예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락티드 (미국 특허 번호 3,773,919), L-글루탐산과 γ-에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체 예컨대 LUPRON DEPOT™ (락트산-글리콜산 공중합체 및 루프롤리드 아세테이트로 구성된 주사용 마이크로스피어), 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산이 포함된다. Examples of sustained-release matrix is ​​a polyester, hydrogels gels (e. G., Poly (2-hydroxyethyl-methacrylate), or poly (vinyl alcohol)), polylactides (U.S. Pat. No. 3,773,919), L- glutamic acid and copolymer, the ratio of ethyl γ- -L- glutamate-degradable ethylene-vinyl acetate, degradable lactic acid-glycolic acid copolymer, for example LUPRON DEPOT ™ (lactic acid-glycolic acid copolymer and loop roll injectable microspheres composed of lead acetate), and poly -D-include 3-hydroxybutyric acid (-).

생체내 투여에 사용될 제형은 반드시 무균성이어야 한다. Formulations used for in vivo administration must be a sterility. 이는 무균 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다. This is readily accomplished by filtration through sterile filtration membranes.

염증성 장 질환의 진단 및/또는 치료를 위한 방법 A method for the diagnosis and / or treatment of inflammatory bowel disease

포유동물, 예컨대 IBD를 앓고 있는 포유동물의 위장 조직 또는 세포에서의 LY6 발현을 결정하기 위해, 다양한 진단 분석법이 이용가능하다. Mammal in order to determine the animal, for example mammalian LY6 expression in gastrointestinal tissue or cells of the animals suffering from IBD, various diagnostic assays are available. 한 실시양태에서, LY6 폴리펩티드 과발현을 RT-PCR, 제자리 혼성화, 마이크로어레이 분석, 및/또는 면역조직화학 (IHC)에 의해 분석할 수 있다. In one embodiment, the LY6 polypeptide can be analyzed by the over-expression in RT-PCR, place, hybridization, microarray analysis and / or immunohistochemistry (IHC). 포유동물 (예컨대 비제한적으로 인간)로부터의 위장 생검물 (예컨대 결장, 더욱 구체적으로는 S자 결장)으로부터의 신선한 조직 절편, 동결 조직 절편 및/또는 파라핀에 매립된 조직 절편을 RT-PCR, 제자리 혼성화, 마이크로어레이 분석 및/또는 IHC 분석법에 적용할 수 있다. Mammalian gastric biopsy water from (e. G., But not limited to, a human) (such as the colon, more specifically, the S-shaped colon) of fresh tissue slice, frozen tissue section and / or the tissue sections embedded in paraffin RT-PCR, in place from It can be applied to hybridization, microarray analysis and / or IHC assay.

별법적으로 또는 추가적으로, FISH 분석법 예컨대 INFORM® (Ventana (Arizona) 판매) 또는 PATHVISION® (Vysis (Illinois) 판매)를 포르말린에 고정된, 파라핀-매립 종양 조직 상에 수행하여, 조직 샘플 또는 생검물에서의 LY6 발현 및/또는 상향조절의 정도 (존재하는 경우)를 결정할 수 있다. A legal or additionally, FISH assays e.g. INFORM® (Ventana (Arizona) sale) or PATHVISION® a fixed (Vysis (Illinois), Sales) in formalin, paraffin-embedded tumor tissue by performing in-phase, tissue from a biopsy sample or water of LY6 expression and / or the degree of up-regulation (if any) can be determined.

생체내 진단 분석법을 사용하여, 예를 들어, 검출될 분자에 결합하고 검출가능한 표지 (예를 들어, 방사선 동위원소 또는 형광 표지)로 태그가 부착된 분자 (예컨대 항체, 올리고펩티드 또는 소분자)를 투여하고, 표지의 국소화에 대해 환자를 외부적으로 스캐닝함으로써, LY6 발현을 평가할 수 있다. Administration of the living body using in diagnostic assays, for example, can bind to the molecule to be detected and detecting a labeled (e. G., Radioisotope or fluorescent label) tagged molecule (e.g. an antibody, oligopeptide or small molecule) by, and scanning the patient for localization of the external cover, to evaluate the LY6 expression.

현재, IBD의 단계에 따라, 치료에는 하기 요법들 중 하나 또는 이의 조합이 수반된다: 침범된 장 조직을 제거하기 위한 수술, 치료제의 투여 (비제한적으로 화학요법 포함); Currently, depending on the stage of the IBD, treatment involves one or a combination thereof to one of the therapies (including, but not limited to, chemotherapy) administration of the surgery, treatment for the removal of the affected tissue section; 식이 변화, 및 생활양식 관리. Dietary changes, and lifestyle management. IBD의 치료에서 유용한 치료제 또는 화학요법제는 당업계에 공지되어 있고, 대표적인 치료제 및 화학요법제가 본원에서 개시된다. Useful for the treatment or chemotherapy in the treatment of IBD are known in the art and representative therapeutic and chemotherapeutic agents are disclosed herein.

특히, 파클리탁셀 및 변형된 유도체로의 조합 요법 (예를 들어, EP0600517 참조)이 구현된다. In particular, combination therapy with paclitaxel and modified derivatives (see, e.g., EP0600517) is implemented. 상기의 항체, 폴리펩티드, 올리고펩티드 또는 유기 분자가 치료적 유효 용량의 화학요법제와 함께 투여될 것이다. Wherein the antibody, polypeptide, oligopeptide or organic molecule will be administered with a chemotherapeutic agent in a therapeutically effective dose. 또다른 실시양태에서, 이같은 항체, 올리고펩티드 또는 소분자는 화학요법제, 예를 들어, 파클리탁셀의 활성 및 효능을 증강시키는 화학요법과 함께 투여된다. In another embodiment, such antibody, oligopeptide or small molecules include, for chemotherapy, for example, is administered in conjunction with chemotherapy to enhance the activity and efficacy of paclitaxel. [Physicians' Desk Reference (PDR)]에는 다양한 암의 치료에서 사용된 이러한 작용제들의 투여량이 개시되어 있다. [Physicians' Desk Reference (PDR)], it discloses the dose of such an agent in the treatment of various cancers. 치료적으로 효과적인 이러한 상기 언급된 화학요법 약물들의 투여 요법 및 투여량은 치료될 특정 암, 질환의 정도 및 당업계의 의사에게 친숙한 기타 요인에 따라 좌우될 것이고, 의사가 이를 결정할 수 있다. Therapeutically effective dosage regimen of these above-mentioned chemotherapeutic drug and dosage will depend on the particular cancer, and other factors familiar to the physician and the degree of the art of the disease to be treated, the doctor can decide this.

공지된 방법, 예컨대 정맥내 투여 (예를 들어, 볼루스로서의 투여 또는 일정 기간에 걸친 연속 주입에 의한 투여)에 따라서, 두개내, 뇌척수내, 관절내, 수막강내, 정맥내, 동맥내, 피하, 경구, 국소 또는 흡입 경로에 의해 치료제 또는 화학요법제가 인간 환자에게 투여된다. Known methods, such as intravenous administration in accordance with (e. G., Administration by continuous infusion over a dose or over a period of time as a bolus), intracranial, cerebrospinal fluid within, intraarticular, intrathecal, intravenous, intraarterial, subcutaneous, oral, topical, or inhalation routes by therapeutic or chemotherapeutic agents are administered to a human patient.

본 발명은 진단 단계 및 치료 처치 단계를 수반하는 방법을 제공한다. The present invention provides methods that involve a diagnostic step and a therapeutic treatment step. 한 실시양태에서, 본 발명은 (1) (a) 대상으로부터 수득한 조직 또는 세포의 시험 샘플, 및 (b) 대조군 샘플에서 LY6 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 또는 유전자의 발현 수준을 검출하고, 이때 대조군 샘플과 비교하여, 시험 샘플에서의 LY6 핵산 또는 유전자의 더 높은 발현 수준은 시험 샘플이 수득된 대상에 IBD가 존재함을 나타내는 것인 단계; In one embodiment, the invention (1) (a) a test of the tissue or cells obtained from a subject sample, and (b) detecting the expression level of the nucleic acid or gene encoding a LY6 polypeptide in a control sample, at which time the control sample and the higher level of expression of the LY6 nucleic acid or gene in the test sample are compared step would indicate that the test sample is IBD is present in the resultant target; 및 (2) 대상에게 유효량의 IBD 치료제를 투여하는 단계를 포함하는, 포유류 대상에서 염증성 장 질환 (IBD)을 검출하는 방법을 제공한다. And (2) it provides a method of detecting inflammatory bowel disease (IBD) in a subject that includes administering an effective amount of an IBD therapeutic agent, mammalian subject. 한 실시양태에서, IBD 치료제는 또다른 IBD-관련 분자의 길항제이다. In one embodiment, IBD therapeutic agent is an antagonist of another IBD- related molecules. IBD에서 차별적으로 발현되는 다양한 IBD-관련 분자들이 본 발명에서 구현된다. Various IBD- related molecules that are differentially expressed in IBD is implemented in the present invention. 한 실시양태에서, IBD-관련 분자는 IBD에서 차별적으로 발현되는 분자이다. In one embodiment, IBD- associated molecule is a molecule that is differentially expressed in IBD. 또다른 실시양태에서, IBD-관련 분자는 IBD에서 과발현된다. In another embodiment, IBD- relevant molecule is overexpressed in IBD. 또다른 실시양태에서, 과발현된 IBD-관련 분자는 인테그린이다. In another embodiment, the over-expression IBD- associated molecule is integrin. 한 실시양태에서, IBD-관련 분자는 인테그린, 베타 7 (ITGB2)이다 (거명에 의해 전체적으로 본원에 포함된 WO 2006/026759 참조). In one embodiment, IBD- associated molecule is integrin, beta 7 (ITGB2) (see WO 2006/026759 comprises a whole by reference herein). 본원에서 사용된 용어 "IBD 치료제"는 IBD-관련 분자의 길항제를 지칭한다. As used herein, the term "IBD therapeutic agent" refers to antagonists of IBD- related molecules. 한 실시양태에서, IBD 치료제는 인테그린의 길항제이다. In one embodiment, IBD therapeutic agent is an antagonist of the integrin. 또다른 실시양태에서, IBD 치료제는 ITGB7의 길항제이다. In another embodiment, IBD therapeutic agent is an antagonist of ITGB7. 또다른 실시양태에서, IBD 치료제는 서열 68로 제시된 핵산 서열에 의해 코딩되는 서열 69로 제시된 폴리펩티드의 길항제이다. In another embodiment, IBD therapeutic agent is an antagonist of the polypeptide set forth in SEQ ID NO: 69 encoded by the nucleic acid sequence set forth in SEQ ID NO: 68.

J. 제조품 및 키트 J. manufacture and kits

진단 용도를 위해, 제조품은 용기, 및 포유동물의 위장 조직 또는 세포에서의 LY6 (예컨대, 비제한적으로 LY6, LYPD1, LYPD3, 및/또는 LYPD5)의 발현을 검출하기 위한 용도를 지시하는, 용기 상의 또는 용기와 결합된 표지 또는 포장 삽입물을 포함한다. For diagnostic applications, the article of manufacture to indicate a use for detecting the expression of the vessel, and the mammalian LY6 in animal stomach tissue or cells (as for example, without limitation LY6, LYPD1, LYPD3 and / or LYPD5), on the container or comprises a label or package insert coupled with the container. 한 실시양태에서, 포유동물은 인간이다. In one embodiment, the mammal is a human. 한 실시양태에서, 조직 또는 세포는 위장 조직 또는 세포이다. In one embodiment, the tissue or cell is gastrointestinal tissue or cell. 한 실시양태에서, 검출은 대조군 샘플에 비한 정량을 포함한다. In one embodiment, the detection comprises a quantitative ruthless the control sample. 한 실시양태에서, 위장 조직 또는 세포가 포유동물의 결장으로부터의 것임이 용기, 표지 또는 포장 삽입물에서 지시된다. In one embodiment, the gastrointestinal tissue or cells will from the colon of a mammal is directed from the container, the label or package insert. 한 실시양태에서, 대조군 샘플과 비하여 증가된 LY6 발현은 포유동물에서의 IBD (비제한적으로 CD 및/또는 UC를 포함함)를 지시한다는 것이 용기, 표지 또는 포장 삽입물에서 지시된다. In one embodiment, LY6 expression increased compared to the control sample is indicated in that the container, the label or package insert that indicate the IBD (including but not limited to a CD and / or UC) in a mammal. 적절한 용기에는, 예를 들어, 병, 바이알, 주사기 등이 포함된다. In a suitable container, e.g., a bottle, include vials, syringes and the like. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로부터 형성될 수 있다. The container may be formed from a variety of materials such as glass or plastic. 추가적으로, 제조품은 완충제 또는 검출을 수행하는데 유용한 기타 시약 (예컨대 검출가능한 표지)를 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. Additionally, the article of manufacture may further comprise a second container containing other useful agents (e. G. A detectable label) to perform a buffer or detection. 이는 기타 완충제, 희석제, 필터 및 염료를 포함하여, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 기타 물질을 추가로 포함할 수 있다. This, including other buffers, diluents, filters, and dyes, may additionally include other materials desirable from a commercial and user standpoint.

LY6 폴리펩티드의 단리 및 정제를 위해, 키트는 비드 (예를 들어, 세파로스 비드)에 커플링된 LY6-결합 시약을 함유할 수 있다. For isolation and purification of LY6 polypeptide, the kit may contain a coupling LY6- a binding agent to the beads (e.g., sepharose beads). 시험관 내에서, 예를 들어, ELISA 또는 웨스턴 블롯에서 LY6 폴리펩티드의 검출 및 정량을 위한 분자를 함유하는 키트가 제공될 수 있다. In vitro, for example, a kit in ELISA or Western blot containing molecules for detection and quantitation of LY6 polypeptide can be provided. 제조품과 같이, 키트는 용기, 및 용기 상의 또는 용기와 결합된 표지 또는 포장 삽입물을 포함한다. As with the article of manufacture, the kit comprises a label or package insert associated with the container, and the container or on the container. 용기는 본 발명과 함께 사용가능한 하나 이상의 이같은 LY6 결합 항체, 올리고펩티드 또는 유기 분자를 포함하는 조성물을 보유한다. The container holds a composition comprising at least one available such LY6 binding antibody, oligopeptide or organic molecule in conjunction with the present invention. 희석제 및 완충제, 대조군 항체를 예를 들어 함유하는 추가적인 용기가 포함될 수 있다. Diluents and buffers, control antibodies may include additional container containing, for example. 표지 또는 포장 삽입물은 조성물의 설명서, 뿐만 아니라 의도된 시험관내 또는 진단 용도를 위한 지침서를 제공할 수 있다. Labeling or package insert instructions of the composition, as well as to provide guidance for the intended in vitro or diagnostic use.

K. 센스 및 안티-센스 LY6-코딩 핵산 K. Sense and anti-sense nucleic acid encoding LY6-

LY6 유전자를 코딩하는 핵산에 결합할 것으로 예상되는 분자에는 표적 LY6 mRNA 또는 DNA 서열에 결합할 수 있는 단일 가닥 핵산 서열 (RNA 또는 DNA)을 포함하는 센스 및 안티센스 올리고뉴클레오티드가 포함된다. Molecule is expected to bind to nucleic acids encoding an LY6 gene include sense and antisense oligonucleotides comprising a single-stranded nucleic acid sequence capable of binding to target LY6 mRNA or DNA sequences (RNA or DNA) it includes a nucleotide. 본 발명에 따르면, 안티센스 또는 센스 올리고뉴클레오티드는 LY6 DNA의 코딩 영역의 단편 또는 이의 상보체를 포함한다. According to the invention, antisense or sense oligonucleotides and oligonucleotide comprises a fragment or a complement of the coding region of the LY6 DNA. 소정의 단백질을 코딩하는 cDNA 서열을 기초로 안티센스 또는 센스 올리고뉴클레오티드를 유도하는 능력이, 예를 들어, [Stein and Cohen, Cancer Res. The ability of the antisense or sense oligonucleotide based upon a cDNA sequence derived nucleotides encoding the desired protein, e.g., [Stein and Cohen, Cancer Res. 48:2659, 1988] 및 [van der Krol et al., BioTechniques, 6:958, 1988]에 기술되어 있다. 48: 2659, 1988] and [van der Krol et al, BioTechniques, 6:. Is described in the 958, 1988].

LY6 유전자에 혼성화될 수 있는 센스 및/또는 안티센스 올리고뉴클레오티드는, 예를 들어, 본 발명에 따라 조직 또는 세포 샘플 포유동물의 위장 조직 또는 세포에서 LY6 DNA 또는 mRNA의 존재를 검출하는데 유용하다. Oligonucleotide sense and / or antisense oligonucleotides that can hybridize to the LY6 gene include, for example, is useful for detecting the presence of LY6 DNA or mRNA in the gastrointestinal tissue or cells of a mammalian tissue or cell sample in accordance with the present invention. 본 발명에 따라 사용되는 센스 및/또는 안티센스 화합물은 주지된 고상 합성 기술을 통해 편리하게, 그리고 일상적으로 제조될 수 있다. To sense and / or antisense compounds used in accordance with the present invention is useful over a known solid phase synthesis techniques, and can be routinely produced. Applied Biosystems (Foster City, Calif.)가 예를 들어 포함되는 여러 사업자가 이같은 합성을 위한 장치를 판매한다. Applied Biosystems (Foster City, Calif.) For the sale and a device for multiple carriers is included in these synthetic example. 당업계에 공지된 이같은 합성을 위한 임의의 기타 수단을 추가적으로 또는 별법적으로 사용할 수 있다. It may be any other means for such synthesis known in the art Additionally, or legal. 포스포로티오에이트 및 알킬화 유도체와 같은 올리고뉴클레오티드를 제조하기 위한 유사한 기술을 사용하는 것은 주지되어 있다. Oligonucleotides such as phosphorothioate and alkylated derivatives is well known to use similar techniques for the production of nucleotides. 본 발명의 화합물은 섭취, 분포 및/또는 흡수를 보조하기 위해 다른 분자, 분자 구조물 또는 화합물들의 혼합물, 예를 들어, 리포솜, 수용체 표적화 분자, 경구, 직장, 국소 또는 기타 제형과 부가혼합되거나, 이에 캡슐화되거나, 이와 접합되거나 또는 다른 방식으로 조합될 수 있다. The compounds of the invention intake, distribution and / or a mixture of other molecules, molecule structures or compounds to assist in the absorption, for example, liposomes, receptor targeted molecules, oral, rectal, topical or other formulations with added mixing, or In or encapsulated, it may be combined in this joint or otherwise. 이같은 섭취, 분포 및/또는 흡수 보조 제형의 제조가 교시된 대표적인 미국 특허에는 미국 특허 번호 5,108,921; Such intake, distribution and / or representative U.S. Patents which the production of secondary absorption formulation teachings include U.S. Patent No. 5,108,921; 5,354,844; 5,354,844; 5,416,016; 5,416,016; 5,459,127; 5,459,127; 5,521,291; 5,521,291; 5,543,158; 5,543,158; 5,547,932; 5,547,932; 5,583,020; 5,583,020; 5,591,721; 5,591,721; 4,426,330; 4,426,330; 4,534,899; 4,534,899; 5,013,556; 5,013,556; 5,108,921; 5,108,921; 5,213,804; 5,213,804; 5,227,170; 5,227,170; 5,264,221; 5,264,221; 5,356,633; 5,356,633; 5,395,619; 5,395,619; 5,416,016; 5,416,016; 5,417,978; 5,417,978; 5,462,854; 5,462,854; 5,469,854; 5,469,854; 5,512,295; 5,512,295; 5,527,528; 5,527,528; 5,534,259; 5,534,259; 5,543,152; 5,543,152; 5,556,948; 5,556,948; 5,580,575; 5,580,575; 및 5,595,756 (각각 거명에 의해 본원에 포함됨)이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. And 5,595,756, but containing the (each incorporated herein by reference), but is not limited to this.

센스 및 안티센스 올리고뉴클레오티드에는 PCR, RT-PCR, 혼성화 방법, 제자리 혼성화 등에 유용한 프라이머 및 프로브가 비제한적으로 포함된다. Oligonucleotide sense and antisense oligonucleotides include primers and probes useful such as PCR, RT-PCR, hybridization methods, hybridization place are not limited.

센스 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 또다른 예에는 유기 모이어티, 예컨대 WO 90/10048에 기술된 것들, 및 표적 핵산 서열에 대한 올리고뉴클레오티드의 친화도를 증가시키는 또다른 모이어티, 예컨대 폴리-(L-라이신)에 공유결합으로 연결된 올리고뉴클레오티드가 포함된다. Sense or antisense oligonucleotide another example, the organic moieties, such as those described in WO 90/10048, and target nucleic acid sequences up to the other moieties that increases affinity of the oligonucleotide T, such as poly - (L- lysine ) oligonucleotide covalently linked to include a nucleotide. 또한, 인터칼레이팅제, 예컨대 엘립티신, 및 알킬화제 또는 금속 착물이 센스 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드에 부착되어, 표적 뉴클레오티드 서열에 대한 안티센스 또는 센스 올리고뉴클레오티드의 결합 특이성을 변형시킬 수 있다. In addition, the intercalating oligonucleotide agents, such as ellipsis tisin, and alkylating agents or metal complexes are sense or antisense is attached to the nucleotide, oligonucleotide anti-sense or sense to a target nucleotide sequence can be modified the binding specificity of the nucleotide.

안티센스 또는 센스 RNA 또는 DNA 분자의 길이는 일반적으로 적어도 약 5개의 뉴클레오티드이고, 별법적으로는, 길이가 적어도 약 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 또는 1000개의 뉴클레오티드이며, 이때 이러한 문맥에서 용어 "약"은 언급된 뉴클레오티드 서열 길이 ± 이러한 언급된 길이의 10%를 의미 The length of the antisense or sense RNA or DNA molecules are generally at least about 5 nucleotides, legal, the length is at least about 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, or 1000 nucleotides, wherein in this context the term "about" refers to 10% of the stated nucleotide sequence length ± those mentioned length 다. The.

하기의 비제한적인 예들은 예시적인 목적으로 제공되며, 본 발명의 범주를 제한하도록 의도되지 않는다. The following non-limiting examples are provided for illustrative purposes and are not intended to limit the scope of the invention. 실시예에서 언급된 시판 시약들은 달리 지시되지 않는 한 제조업자의 지시에 따라 사용되었다. Exemplary commercially available reagents referred to in the examples were used according to instructions of the manufacturer, unless otherwise indicated. 하기의 실시예에서 및/또는 명세서 전반에 걸쳐 ATCC 기탁 번호에 의해 확인된 세포주들의 공급원은 <American Type Culture Collection> (Manassas, VA)이다. To a source of the cell line identified by ATCC Accession No over the embodiments and / or the first half of the specification is <American Type Culture Collection> (Manassas, VA).

실시예 1: 재료 및 방법 Example 1: Materials and methods

시약, 세포 및 마우스 : IFNγ, TNFα, 및 IL1β를 Peprotech™ (Rocky Hill, NJ)로부터 수득하였다. Reagents, cells and mice: the IFNγ, TNFα, IL1β and were obtained from Peprotech ™ (Rocky Hill, NJ) . IFNα를 Hycult Biotechnology™ (The Netherlands)로부터 수득하였다. The IFNα was obtained from Hycult Biotechnology ™ (The Netherlands). 가교 실험을 위해, 항-KLH 대조군 항체, 항-LY6A (클론 E113-161.7 또는 D7)를 Pharmingen™ (San Diego, CA)로부터 수득하였다. For crosslinking experiments, anti--KLH control antibody, wherein -LY6A (clone E113-161.7 or D7) were obtained from Pharmingen ™ (San Diego, CA). 항-LY6C (클론 HK1.4)를 Southern Biotech™ (Birmingham, AL)으로부터 수득하였다. Wherein the -LY6C (clone HK1.4) was obtained from Southern Biotech ™ (Birmingham, AL).

만성 CD45RB high 전이 대장염을 Balb/c 배경 상에서 SCID 마우스에서 이전에 기술된 바와 같이 유도하였다 ([Powrie, F. et al., (1994) Immunity 1:553-562]). Chronic CD45RB high transfer colitis was induced as described previously in SCID mice on a Balb / c background ([Powrie, F. et al, (1994) Immunity 1:. 553-562]). 자발적 대장염이 발달되는 129 배경 상의 IL10-/- 마우스 ([Kuhn, R. et al., (1993) Cell 15:263-274])를 11주령 내지 13주령 사이에 희생시켰다. IL10 129 on the background that the development of spontaneous colitis - / - mice ([. Kuhn, R. et al, (1993) Cell 15: 263-274]) to sacrificed to 11 weeks of age to 13 weeks of age. 기술된 바와 같은 실험에서 사용할 때까지 결장을 OCT에서 스냅(snap) 동결시켰다. The colon until used in experiments as described in OCT were snap frozen (snap). 근위부 결장, 중간 결장, 원위부 결장 및 직장을 0-5 (0 = 정상적인 장, 5 = 중증 질환)의 등급을 사용하여 채점하였다. The proximal colon, middle colon, distal colon and rectum were scored using a rating of 0-5 (0 = normal cabinet, 5 = severe disease). 점수를 합산하여, 각각의 동물에 대한 전체 대장염 중증도 점수에 도달하였다. By summing the scores, and reach the full colitis severity score for each animal.

이전에 기술된 바와 같이 ([Whitehead, RH et al., (1993) Proc Natl Acad Sci USA 90:587-591]), 청소년 마우스 결장세포 (YAMC) 세포주 (Vanderbilt University Medical Center (Nahville, TN)의 Robert Whitehead 제공)가 인터페론-γ-의존적 프로모터의 제어 하의 온도 민감성 T-항원 (tsTag)을 함유하는 트랜스제닉 동물인 Immortomouse™으로부터 유래되었다. As previously described ([Whitehead, RH et al, (1993) Proc Natl Acad Sci USA 90:. 587-591]), juvenile cells, mouse colon (YAMC) cell line (Vanderbilt University Medical Center (Nahville, TN) of Robert Whitehead provided) are derived from the interferon-dependent -γ- transgenic animal of Immortomouse ™ containing a temperature-sensitive T- antigen (tsTag) under the control of a promoter. YAMC 세포는 5 유닛/㎖ IFN-γ (Peprotech™, New Jersey)의 존재 하에 32℃의 허용성 조건 하에 증식하지만, 37℃에서 IFN-γ의 제거 시에는 더 이상 증식하지 않는다 (비-허용성 조건). YAMC cells, 5 units / ㎖ IFN-γ in the presence of a (Peprotech ™, New Jersey) proliferation under acceptable conditions of 32 ℃ but do not multiply there any more upon removal of IFN-γ at 37 ℃ (non-admissibility Condition).

YAMC 세포를 5% FBS, 2 mM L-글루타민, 페니실린/스트렙토마이신, 5 U/㎖ IFNγ 및 N-2 보충물을 함유하는 RPMI (Invitrogen™ (Carlsbad, CA))에서 배양하였다. The YAMC cells were cultured in 5% FBS, 2 mM L- glutamine, penicillin / streptomycin, 5 U / ㎖ IFNγ and RPMI (Invitrogen ™ (Carlsbad, CA)) containing an N-2 supplement. 실험 전 24시간 동안, 그리고 실험 기간 동안 세포를 비-허용성 조건 하에 배양하였다. For 24 hours before the experiment, and the cell ratio during the experiment were cultured under acceptable conditions.

CMT93 세포를 ATCC (ATCC Number® CCL-223™, ATCC (Manassas, VA))로부터 수득하여, 10% FBS, 2 mM L-글루타민, 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 DMEM에서 배양하였다. To give a CMT93 cells from the ATCC (ATCC Number® CCL-223 ™, ATCC (Manassas, VA)), and cultured in DMEM containing 10% FBS, 2 mM L- glutamine, and penicillin / streptomycin.

레이저 포착 현미경검사 및 RNA 정제 : 10-12 ㎛ 절편을 LCM 막 슬라이드 (Molecular Machines™ (Glattbrugg, Switzerland)) 상에 적용하였다. Was applied to the sections 10-12 on the ㎛ LCM membrane slides (Molecular Machines ™ (Glattbrugg, Switzerland )): Laser capture microscopy and RNA purification. 슬라이드를 단축형 H&E 염색으로 염색한 후 (총 시간 약 5분), 움 상피 세포를 조직학적으로 확인하고, MMI Cellcut™ 현미경 (Molecular Machines (Glattbrugg, Switzerland))을 사용하여 절개하였다. After staining the slides with a shorthand H & E staining were cut using the (total time about 5 minutes), check the help epithelial cells histologically and, MMI Cellcut ™ microscope (Molecular Machines (Glattbrugg, Switzerland)). 절개된 세포로부터 Arcturus™ Picopure™ RNA 정제 키트 및 제조업자의 프로토콜 (Arcturus™ (Sunnyvale, CA))을 사용하여 RNA를 정제하고, NanoDrop ND-1000™ 분광광도계 (NanoDrop Technologies™ (Wilmington, DE))를 사용하여 정량하였다. The Arcturus ™ from the incision cell Picopure ™ RNA purification kit and manufacturer's protocols (Arcturus ™ (Sunnyvale, CA)) purified the RNA and, NanoDrop ND-1000 ™ Spectrophotometer (NanoDrop Technologies ™ (Wilmington, DE)) using It was quantified using.

마이크로어레이 혼성화 및 데이터 분석 : 입력된 전체 RNA 샘플의 품질 및 양을 각각 ND-1000 분광광도계 (NanoDrop™ Technologies (Montchanin, DE)) 및 Bioanalyzer 2100™ (Agilent™ Technologies (Palo Alto, CA))을 사용하여 결정하였다. Using the quality and the amount of input total RNA sample, each ND-1000 spectrophotometer (NanoDrop ™ Technologies (Montchanin, DE )) and Bioanalyzer 2100 ™ (Agilent ™ Technologies ( Palo Alto, CA)): Microarray hybridization and data analysis and it was determined. Cy-염료로 표지된 cRNA 및 어레이 혼성화의 제조를 위한 방법은 Agilent™ Technologies (Palo Alto, CA)에 의해 제공되었다. Method for the production of the cRNA and array hybridization labeled with Cy- dyes was provided by (Palo Alto, CA) Agilent ™ Technologies. 간략하게, 전체 RNA 샘플을 이 중 가닥 cDNA로 전환시킨 후, Low RNA Input Fluorescent Linear Amplification™ 키트 (Agilent™, 제품# 5184-3523)를 사용하여 표지된 cRNA로 전환시켰다. Briefly, total RNA sample was converted to the one after conversion by strand cDNA, Low RNA Input Fluorescent Linear Amplification ™ Kit (Agilent ™, Product # 5184-3523), a labeled cRNA using. 표지된 cRNA를 RNeasy™ 미니 키트 (Qiagen™ (San Diego, CA))를 사용하여 정제한 후, ND-1000™ 분광광도계 (Nanodrop™ Technologies)를 사용하여 정량하였다. The labeled cRNA was purified using RNeasy ™ Mini Kit (Qiagen ™ (San Diego, CA)) was then quantified using the ND-1000 ™ spectrophotometer (Nanodrop ™ Technologies). 표지된 cRNA를 Novex™ TBE-Urea 젤 (Invitrogen™ (Carlsbad, CA)) 상에 러닝(running)시킨 후의 Typhoon™ 스캐너 (GE Healthcare™ (Piscataway, NJ)) 상에서의 젤 스캐닝에 의해 Cy-염료 혼입을 결정하였다. The labeled Novex ™ TBE-Urea gel cRNA (Invitrogen ™ (Carlsbad, CA)) running (running) in which after a Typhoon ™ scanner (GE Healthcare ™ (Piscataway, NJ)) Cy- incorporated dye by gel scanning on the image It was determined. Cy-염료 형광 카운트의 양을 결정하기 위해, 젤 영상을 ImageQuant™ 소프트웨어 (GE Healthcare™)를 사용하여 분석하였다. To determine the amount of fluorescent dye Cy- counts, the gel images were analyzed using ImageQuant ™ software (GE Healthcare ™). 약 500,000 카운트의 Cy-염료로 표지된 cRNA가 단편화되었고, Agilent의 제자리 혼성화 키트-플러스 (Agilent™, 제품# 5184-3568)에 기술된 바와 같이 Agilent의 전체 마우스 게놈 어레이에 혼성화되었다. Was fragmented into a dye Cy- approximately 500,000 counts cover cRNA, place of Agilent Hybridization kit-plus (Agilent ™, Product # 5184-3568) were hybridized to the arrays from Agilent whole mouse genome as described. LCM 샘플들을 Cy5 염료로 염색하고, Cy3 염료로 표지된 보편적 마우스 기준 (Stratagene™ (La Jolla, CA))에 대해 혼성화시켰다. Dyeing the LCM sample with Cy5 dye and allowed to hybridize for a universal mouse reference (Stratagene ™ (La Jolla, CA)) labeled with Cy3 dye. 혼성화 후, 어레이를 세정하고, 아세토니트릴로 건조시키고, Agilent™ DNA 마이크로어레이 스캐너 상에서 스캐닝하였다. After hybridization, washing the array, it dried with acetonitrile and scanned on the Agilent ™ DNA microarray scanner. 어레이 영상 파일을 Agilent™의 Feature Extraction™ 소프트웨어 7.5를 사용하여 분석하였고, Resolver™ (Merck™ (Seattle, WA))을 사용하여 추가적인 데이터 분석을 수행하였다. The array image files were analyzed using Feature Extraction ™ software 7.5 Agilent ™, it was carried out for additional data analysis using Resolver ™ (Merck ™ (Seattle, WA)).

Rosetta Resolver™ 소프트웨어 (Rosetta Biosoftware™ (Seattle, WA))를 사용하여 데이터를 분석하였다. Using the Rosetta Resolver ™ software (Rosetta Biosoftware ™ (Seattle, WA)) and analyzed the data. 간략하게, 건강한 샘플 및 대장염 샘플을 별도로 분류하고, 양쪽 꼬리 ANOVA (p<0.05)를 통과한 프로브들을 선택하였다. Were selected a quick, it classifies the healthy samples and samples separately and colitis, both through the tail ANOVA (p <0.05) probe. 이러한 프로브들을 건강한 샘플에 비해 대장염 샘플에서 2배 이상의 변화를 나타낸 프로브들 에 대해 추가로 분석하였다. Than those probes in healthy samples were analyzed further for their showing a 2-fold or more change in colitis sample probe.

실시간 정량 RT-PCR : 추출된 RNA 상에서 Taqman™ Gold™ RT-PCR 키트 및 시약 (Applied Biosystems™ (Foster City, CA))을 사용하여 RT-PCR을 수행하였다. The RT-PCR was performed using Taqman ™ Gold ™ RT-PCR kit and reagents (Applied Biosystems ™ (Foster City, CA)) on the RNA extraction: Real-time quantitative RT-PCR. 5'-FAM 및 3'-TAMRA 표지된 내부 프로브를 사용하여 유전자 특이적 프라이머로 모든 샘플을 러닝시켰다. 5'-FAM and 3'-TAMRA-labeled using the internal probe was running all samples with gene-specific primers. [Livak, KJ., and TD Schmittgen (2001) Methods 25:402-408]에 기술된 바와 같은 2 -ΔΔ Ct 방법에 의해 하우스키핑(housekeeping) 유전자인 SPF31에 특이적인 프라이머와 비교하여 분석을 수행하였다. Analysis was performed compared to the primers specific to the: [Livak, KJ, and Schmittgen TD (2001) Methods 25 402-408.] A 2 -ΔΔ housekeeping (housekeeping) gene by the Ct method as described in SPF31 . 프라이머 및 프로브들은 Primer3™ 소프트웨어 ([Rozen, S., and H. Skaletsky (2000) Methods Mol Biol 132:365-386])를 사용하여 디자인되었거나, 또는 시판되었다 (Applied Biosystems™). Primers and probes are Primer3 ™ software ([Rozen, S., and H. Skaletsky (2000) Methods Mol Biol 132: 365-386]), or designed using, or were commercially available (Applied Biosystems ™). 이러한 분석법에 사용된 프라이머 및 프로브는 하기와 같고, 이는 5'-3' 방향으로 제시된다: The primers and probes used in this assay is to the same, which is presented in the 5'-3 'direction:

LY6A: LY6A:

센스: CTT ACC CAT CTG CCC TCC TA (서열 39) Sense: CTT ACC CAT CTG CCC TCC TA (SEQ ID NO: 39)

안티센스: CCT CCA TTG GGA ACT GCT AC (서열 40) Antisense: CCT CCA TTG GGA ACT GCT AC (SEQ ID NO: 40)

프로브: TCC TGT TGC CAG GAA GAC CTC TGC (서열 41) Probe: TCC TGT TGC CAG GAA GAC CTC TGC (SEQ ID NO: 41)

LY6C: LY6C:

센스: ACT TCC TGC CCA GCA GTT AC (서열 42) Sense: ACT TCC TGC CCA GCA GTT AC (SEQ ID NO: 42)

안티센스: GGC ACT GAC GGG TCT TTA GT (서열 43) Antisense: GGC ACT GAC GGG TCT TTA GT (SEQ ID NO: 43)

프로브: CTG CCG CGC CTC TGA TGG AT (서열 44) Probe: CTG CCG CGC CTC TGA TGG AT (SEQ ID NO: 44)

면역형광 염색 : 동결된 조직을 5 ㎛ 절편으로 절단하고, 비오틴화 항-LY6C (Southern Biotech™ (Birmingham, AL)) 또는 2.5 ng/㎖의 항-SCA-1 (R&D Systems™ (Minneapolis, MN))으로 염색하였다. Immunofluorescence staining: cutting the frozen tissues into 5 ㎛ fragments, and biotinylated anti -LY6C (Southern Biotech ™ (Birmingham, AL)) or 2.5 ng / ㎖ of anti -SCA-1 (R & D Systems ™ (Minneapolis, MN) ) it was dyed. 슬라이드를 세정하고, Alexa Fluor™ 488에 접합된 스트렙타비딘으로 표지하고, Prolong Gold™ + DAPI (Invitrogen™ (Carlsbad, CA))로 마운팅하고, 공초점 현미경에 의해 시각화하였다. Washing the slide, and the Alexa Fluor ™ labeled with streptavidin conjugated to 488, and is mounted in Prolong Gold ™ + DAPI (Invitrogen ™ (Carlsbad, CA)), it was visualized by confocal microscopy.

LY6 분자 가교 : YAMC 세포를 플레이트에 결합된 항-LY6C 또는 항-KLH (대조군) 항체와 함께 인큐베이션하고, 케모카인 CXCL2, CXCL5 및 CCL7의 생산을 측정함으로써, 케모카인 생산을 초래하는 가교된 LY6 폴리펩티드의 능력을 시험하였다. LY6 crosslinking molecule: wherein the bond to the YAMC cell plate -LY6C or wherein -KLH (control) and incubated with antibodies, chemokines CXCL2, CXCL5, and by measuring the production of CCL7, of crosslinked LY6 polypeptide to result in a chemokine production capacity It was tested. 가교를 위해 세포 막에서의 지질 래프트 형성이 필요하기 때문에, 정상적인 래프트 형성 조건 (콜레스테롤이 결핍되지 않음) 및 콜레스테롤이 결핍된 조건 하에 케모카인 생산을 시험하였다. Due to the need for lipid raft formation in the cell membrane for crosslinking, chemokine production was tested under conditions of normal raft formation (cholesterol is not deficient) and cholesterol-deficient conditions.

플레이트에 결합된 항체를 사용하여 가교시키기 위해, 5 ㎍/㎖ 농도의 항-LY6C 또는 항-KLH (대조군) 항체 100 ㎕를 96웰 플레이트에 첨가하거나, 2 ㎖를 60㎟ 접시에 첨가하고, 4℃에서 15시간 동안 플레이트에 결합되도록 하였다. To cross-linking using an antibody binding to the plate, 5 ㎍ / ㎖ adding wherein -LY6C or wherein -KLH (control) antibody 100 ㎕ of concentration in a 96-well plate, or, and the addition of 2 to ㎖ 60㎟ plate 4 ℃ were to be coupled to the plate for 15 hours. 콜레스테롤 결핍 또는 비-결핍 조건 (하기 실시예 5에서 제공됨)에서 성장된 YAMC 세포를 플레이트에 결합된 항체와 함께 32℃에서 15시간 동안 콜레스테롤 비-결핍 조건 하에 인큐베이션하고, RNA를 수집하고, CXCL2, CXCL5, 및 CCL7의 발현 수준을 결정하였다. Cholesterol deficient or non-deficient conditions (for example 5 provided) the YAMC cells, grown in 32 ℃ with the antibody bound to the plate for 15 hours and cholesterol non-incubated in the absence conditions, collecting RNA, and CXCL2, the level of expression of CXCL5, and CCL7 were determined. 본원의 실시예 5에서 이러한 분석법이 추가로 기술되고, 결과가 제시된다. Is further described such a method in an embodiment of the present Example 5, the results are presented.

siRNA 억제 : 뮤린 LY6C에 대해 지시된 개별적인 siRNA들을 Dharmacon (Lafayette, CO)로부터 수득하였다. siRNA inhibition: Individual siRNA directed against the murine LY6C were obtained from Dharmacon (Lafayette, CO). siRNA를 리포펙타민 2000 (Invitrogen) 및 표 준 프로토콜을 사용하여 YAMC 세포 내로 형질감염시켰다. Using a standard protocol with siRNA Lipofectamine 2000 (Invitrogen) and Table were transfected into YAMC cells. 형질감염 72시간 후, 세포를 수집하여, 녹다운 효율을 결정하였다. After transfection 72 hours, to collect the cells, and determining the knockdown efficiency. 우수한 녹다운 효율 (정량 RT-PCR에 의한 95% 억제)을 기초로 1개의 siRNA가 가교 실험용으로 선택하였다. The superior knockdown efficiency of siRNA based on the one (95% inhibition by quantitative RT-PCR) was selected as the cross-linking experiments.

CXCL5 분비 : 자극된 세포로부터 지시된 시점에 상등액을 수집하고, 사이토카인 CXCL5 농도를 R&D Systems™로부터 시판되는 키트 및 제조업자의 프로토콜을 사용하여 ELISA에 의해 결정하였다. CXCL5 secretion: collecting the supernatant to the point of time designated from the stimulated cell, and use the kit, and the manufacturer's protocol, a commercial cytokine CXCL5 concentrations from R & D Systems ™ was determined by ELISA. 검출 수준은 15 pg/㎖의 CXCL5였다. Detecting the level of CXCL5 was 15 pg / ㎖.

콜레스테롤 결핍 : YAMC 세포를 37℃에서 72시간 동안 무혈청 배지에서 4 μM 로바스타틴 및 250 μM 메발로네이트 (Sigma)의 존재 하에 배양하였다. Cholesterol deficiency: the YAMC cells at 37 ℃ for 72 hours in serum-free medium and incubated in the presence of 4 μM lovastatin and 250 μM mevalonate (Sigma). 세포를 플레이팅하고, 실험 전반에 걸쳐 로바스타틴 및 메발로네이트에서 유지시켰다. Play the cells plated, and was maintained in lovastatin and mevalonate throughout the experiment as a whole.

통계학 : 군들 간의 비교를 위해 스튜던트 t 검정법을 사용하였다 (*는 p<0.05를 가리킨다). Statistics: For a comparison between groupings were used Student's t assay (* indicates p <0.05 indicates a).

실시예 2: IEC의 유전자 발현 패턴이 대장염 동안 변경된다 Example 2: Gene expression patterns of IEC are altered during colitis

IEC의 유전자 발현 패턴이 대장염의 마우스 모델, 뿐만 아니라 인간 IBD에서 현저하게 변경된다는 것이 연구에서 지시되었다 ([Fahlgren, A., et al. (2004) Clin Exp Immunol 137:379-385]; [Brand, S. et al. (2006) Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 290:G827-838]; [Ruiz, PA et al. (2005) J Immunol 174:2990-2999]). That the gene expression patterns of IEC that mouse models of colitis, as well as significant changes in human IBD were directed at research ([Fahlgren, A., et al (2004) Clin Exp Immunol 137:. 379-385]; [Brand ., S. et al (2006) Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 290: G827-838]; [Ruiz, PA et al (2005) J Immunol 174:. 2990-2999]). 본 실시예에서, IBD에서 변경된 신규 유전자 및 경로를 명확히 하기 위해 건강한 마우스 및 대장염 마우스의 IEC에서의 상승된 유전자 발현 패턴을 시험하였다. In this example, it was tested for elevated gene expression patterns in IEC of healthy mice, and colitis mice to clarify the new gene and the path is changed in the IBD.

CD45RB Hi T 세포 전이 대장염 마우스 모델, 뿐만 아니라 IL10 -/- 마우스 모델 (양쪽 모두 Th1 조절곤란으로부터 초래되고, 인간 크론병의 다수의 양상을 공유함)로부터의 장 상피 세포 (IEC)를 평가함으로써 IBD의 면역병리학에서 수반되는 유전자의 확인이 시도되었다 ([Elson, CO et al. (2005) Immunol Rev 206:260-276]; [Bouma, G., and W. Strober (2003) Nat Rev Immunol 3:521-533]). CD45RB Hi T cell transfer colitis mouse model as well as the IL10 - / - mouse model by evaluating intestinal epithelial cells (IEC) from the (both are all resulting from the Th1 control difficult, share a number of aspects of human Crohn's disease) IBD the identification of genes involved in immune pathology was trying ([Elson, CO et al (2005) Immunol Rev 206:. 260-276]; [Bouma, G., and W. Strober (2003) Nat Rev Immunol 3: 521-533]). 레이저 포착 미세절개 (LCM)를 사용하여, 움 IEC를 뮤린 IBD의 2가지 모델의 건강한 마우스 및 대장염 마우스의 결장으로부터 단리하였다. The use of laser capture micro-dissection (LCM), was isolated from the colon of the murine IEC helpful IBD 2 models of healthy mice and mice colitis. 이러한 샘플들로부터 RNA를 추출하고, 실시예 1에 기술된 바와 같은 마이크로어레이 기술에 의해 분석하였다. Extracting RNA from these samples and analyzed by microarray technology of the first embodiment as described. 전이 대장염 모델의 대장염 마우스의 IEC의 유전자 발현 프로파일에서는 대조군 마우스와 비교하여 2배를 초과하는 발현 변화가 있는 1770개의 프로브가 확인된 한편, IL10-/- 모델에서는 1140개의 프로브가 확인되었다. In the gene expression profile of the transition of the colitis model of colitis mouse IEC 1770 of the probe with a change in the expression of more than two times as compared with control mice confirmed the other hand, IL10 - / - model was confirmed in 1140 the probes. 양쪽 모델에서 중복되면서 발현에서 2배를 초과하는 변화가 있는 프로브는 540개였고, 이는 약 400개의 상이한 유전자에 상응한다 (데이터는 제시되지 않음). As the duplicate model at both the probe with a change exceeding twice in expression gaeyeotgo 540, corresponding to approximately 400 different genes (data not shown).

실시예 3 : 대장염 동안 IEC에서 영향을 받는 경로 및 유전자 Example 3: The path and the gene affected by the IEC during UC

양쪽 모델에서 영향을 받은 약 400개의 유전자 중에서, 항원 제시, TLR 신호전달 및 세포 이동에 수반된 유전자들이 과잉으로 나타났다 (표 7). Among approximately 400 genes affected in both models, genes involved in antigen presentation, TLR signaling and cell migration, they were in excess (Table 7). 표 7에서, 숫자들은 지시된 바와 같은 대장염의 IL10-/- 모델 또는 대장염의 CD45RB Hi 모델에서 건강한 마우스에 대한 대장염 마우스의 보편적 표준물 RNA에 비교된 배수 변화의 평균 및 표준 편차를 나타낸다. Represents the mean and standard deviation of the change in drainage compared to the universal standards of colitis mouse RNA in healthy mice in the model or models of colitis CD45RB Hi-In Table 7, the numbers of IL10 colitis as indicated - /. 결과는 IEC에서 발현된 일부 유전자들이 IBD의 뮤 린 모델에서 변경된 발현 패턴들을 나타낸다는 것을 가리킨다. Results indicate that some of the gene expression in IEC that represent altered expression patterns in lean mu model of IBD. TLR2, CCL7, CXCL5 및 ICAM-I를 포함하는 이러한 유전자들 중 다수가 대장염 동안 상피 발현이 증가가된 것으로 이전에 기술되었고 ([Breider, MA et al. (1997) Vet Pathol 34:598-604]; [Uguccioni, M. et al. (1999) Am J Pathol 155:331-336]; [Z'Graggen, K. et al. (1997) Gastroenterology 113:808-816]; [Singh, JC et al. (2005) Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 288:G514-524]), 이는 이러한 마이크로어레이에서 수득된 유전자 발현 패턴이 대장염에서의 IEC의 생물학의 정확한 반영물임을 시사한다. TLR2, CCL7, CXCL5 and a number of these genes including ICAM-I have been described previously as being an increase in the epithelial expression during colitis ([Breider, MA et al (1997) Vet Pathol 34:. 598-604] ; [Uguccioni, M. et al (1999) Am J Pathol 155:. 331-336]; [Z'Graggen, K. et al (1997) Gastroenterology 113:. 808-816]; [Singh, JC et al. (2005) Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 288: G514-524]), suggesting that the gene expression pattern is accurate reflection of the biology of IEC in colitis water obtained in these microarrays.

Figure 112009057712971-pct00023

IEC는 비-전문적인 APC로 기능할 수 있고 ([Snoeck, V. et al., (2005) Microbes Infect 7:997-1004]; 및 [Shao, L et al., (2005) Immunol Rev 206:160-176]), 이러한 마이크로어레이에서 수득된 유전자 발현 패턴은 이러한 기능이 항원 제시와 관련된 유전자, 예컨대 LMP7 및 TAP1, 뿐만 아니라 IEC의 표면 상에서의 항원 제시를 강화시키는 작용을 할 MHC 클래스 I 및 II 유전자에서의 상향조절에 의해 대장염 동안 강화된다는 것을 가리킨다. . IEC non-can function as a professional APC ([. Snoeck, V. et al, (2005) Microbes Infect 7: 997-1004]; and [Shao, L et al, (2005) Immunol Rev 206: 160-176]), the micro array gene expression pattern obtained from the genes related to these features and antigen presentation, such as LMP7 and TAP1, as well as MHC class can act to enhance antigen presentation on the surface of IEC I and II It indicates that enhanced during colitis by upregulation of the gene.

마이크로어레이 데이터는 대장염 IEC가 변경된 케모카인 발현을 통해 면역 세포를 결장으로 유인하고, 항원 제시와 관련된 유전자의 발현을 상향조절함으로써 침윤성 T 세포에 항원을 제시할 수 있다는 개념을 지지한다. Microarray data supports the concept that can present antigen to infiltrating T cells by the attracted immune cells to the colon through altered chemokine expression is colitis IEC, upregulate the expression of genes associated with antigen presentation.

실시예 4: LY6 Example 4: LY6 패밀리 구성원의 발현이 대장염 IEC 표면 상에서 강력하게 상향조절된다 The expression of family members is strongly upregulated on the surface of colitis IEC

마우스 LY6 패밀리의 구성원인 분자들이 전이 대장염 마우스 모델 및 IL10-/- 마우스 모델 양쪽 모두에서 갯수 면에서, 뿐만 아니라 상향조절 정도 면에서 과잉으로 나타났다 (도 23A 및 23B). Members of the mouse molecules transfer colitis mouse model of IL10 and LY6 family - / - mouse model with the number on both sides, not only was excessive in terms of degree of upward adjustment (23A and 23B). 전이 대장염 모델의 풀링(pooling) 및 증폭된 IEC RNA의 실시간 정량 RT-PCR에 의해 이러한 결과들이 확증되었다 (데이터는 제시되지 않음). These results by pooling (pooling) and real-time quantitative RT-PCR amplified IEC RNA in the transfer colitis model have been confirmed (data not shown). LY6 패밀리 구성원의 발현은 질환 상태에 독특하였고, 따라서 건강한 마우스는 이러한 LY6 패밀리 구성원들 중 어느 것도 감지가능한 수준으로 발현하지 않았다. Expression of LY6 family members were unique to the disease state, and therefore healthy mice did not express detectable levels of any of these LY6 family members also.

조혈 기원 세포의 표면 상에서의 뮤린 LY6 분자의 발현이 공지되어 있는 반면, IEC 상에서의 발현은 이전에 기술되지 않았다 ([Bamezai, A. (2004) Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 52:255-266]; 및 [Rock, KL et al. (1989) Immunol Rev 111:195-224]). While the expression of murine LY6 molecules on the surface of hematopoietic origin cells is known, expression on IEC has not been previously described ([Bamezai, A. (2004) Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 52: 255-266] ; and [Rock, KL et al (1989) Immunol Rev 111:. 195-224]). 결장 내에 존재하는 다수의 비-상피 세포, 예컨대 T 세포 및 과립구 상에서 뮤린 LY6A 및 LY6C의 발현이 검출가능하였다. A plurality of non-existing in the colon-epithelial cells, for example, was detectable expression of murine LY6A and LY6C on T cells and granulocytes. 건강한 결장 및 대장염 결장 상에서 뮤린 LY6A 및 LY6C 양쪽 모두에 대해 면역형광 염색을 수행하였다. It was performed immunofluorescence staining for both murine and LY6A LY6C both on the healthy colon and colitis, the colon. 건강한 IEC의 표면 상에서 뮤린 LY6A 및 LY6C의 수준은 최소이거나 부재하였다 (각각 도 24A 및 24C). Murine levels of LY6A and LY6C were minimal or members on the surface of healthy IEC (Figure 24A and 24C, respectively). 뮤린 LY6A 및 LY6C 양쪽 모두의 발현이 대장염 마우스의 결장 전반에 걸쳐 IEC의 표면 상에서 검출가능하였다 (각각 도 24B 및 24D). The expression of both murine LY6A and LY6C was detectable on the surface of IEC throughout the colon of a mouse colitis (FIG. 24B, respectively, and 24D). LY6A 또는 LY6C의 분극화의 증거가 없었고, 첨단측 막과 기저측 막 양쪽 모두 상에 염색이 존재하여, LY6 분자가 어느 한쪽 표면 상의 리간드에 접근가능하도록 하였다. There was no evidence of polarization of LY6A or LY6C, and staining is present on both the high-side film and the base film side, and the LY6 molecules to be accessible to ligands on either surface. 이러한 결과들은 뮤린 대장염 모델에서 뮤린 LY6A 및 LY6C의 상향조절을 나타내는 마이크로어레이 분석 결과가 오염성 면역 세포의 유입으로 인한 것이 아니였음을 가리킨다. These results point to no yeoteum that the microarray analysis results showing an upregulation of murine LY6A and LY6C in murine colitis model due to the influx of contaminating immune cells.

실시예 4: LY6 유전자의 전사가 염증성 사이토카인에 의해 자극된다 Example 4: the transcription of LY6 genes is stimulated by inflammatory cytokines

T 세포 상에서의 LY6 발현이 제I형 및 제II형 IFN 양쪽 모두에 의해 유도 및 강화된다 ([Khodadoust, MM, KD Khan, and AL Bothwell. 1999. Complex regulation of Ly-6E gene transcription in T cells by IFNs. J Immunol 163:811-819]). The LY6 expression on T cells is induced and enhanced by both the both the type I and type II IFN ([Khodadoust, MM, KD Khan, and AL Bothwell. 1999. Complex regulation of Ly-6E gene transcription in T cells by . IFNs J Immunol 163: 811-819]). 또한, 다수의 사이토카인의 발현이 활성 대장염 동안 결장에서 상승된다 ([Niessner, M., and BA Volk. 1995. Altered Th1/Th2 cytokine profiles in the intestinal mucosa of patients with inflammatory bowel disease as assessed by quantitative reversed transcribed polymerase chain reaction (RT-PCR). Clin Exp Immunol 101:428-435]). In addition, the expression of a number of cytokines, is elevated in the colon during active colitis ([Niessner, M., and BA Volk. 1995. Altered Th1 / Th2 cytokine profiles in the intestinal mucosa of patients with inflammatory bowel disease as assessed by quantitative reversed transcribed polymerase chain reaction (RT-PCR) Clin Exp Immunol 101:. 428-435]).

대장염 동안 존재하는 사이토카인이 IEC에서 LY6 패밀리 구성원의 전사에 영향을 미치는지를 결정하기 위해, 본 발명가들은 조건부로 불멸화된 뮤린 IEC 세포주인 YAMC 세포를 IL-1β, IFNα, TNFα, IFNγ 또는 TNF α와 IFNγ의 조합물로 처리하고, 모든 확인된 뮤린 LY6 유전자의 전사를 실시간 정량 RT-PCR (표 8)에 의해 분석하였다. To determine the cytokines present during colitis affect transcription of LY6 family members in IEC, the present inventors have for the murine IEC cell line, YAMC cells immortalized conditionally, IL-1β, IFNα, TNFα, IFNγ or TNF α and treated with a combination of IFNγ, and the transcription of all identified murine LY6 genes was analyzed by real-time quantitative RT-PCR (Table 8). 간략하게, IEC에서의 지시된 LY6 패밀리 구성원의 mRNA 수준을 지시된 사이토카인으로 처리하고 나서 15시간 후에 실시간 정량 RT-PCR에 의해 결정하였다. Briefly, it was determined by real-time quantitative RT-PCR 15 hours after treatment, and the mRNA level of the indicated LY6 family member in IEC with the indicated cytokine. 숫자는 미처리된 배지 대조군과 비교된 배수 변화 (2 -ΔΔ Ct 방법에 의해 결정됨)를 나타내고, *는 배지 대조군과 비교하여 P<0.05를, †는 IFNγ으로 처리된 세포와 비교하여 p<0.05를 나타낸다. Number represents the change in the drain (as determined by the 2 -ΔΔ Ct method) compared to the untreated control group the medium, - by comparing the P <0.05 compared to the medium control group, and the † is treated with IFNγ cells p <0.05 It represents. 하기의 LY6 패밀리 구성원은 시험되었지만 처리와 상관 없이 샘플에서 검출되지 않았다: LY6K, Lypd3, Lypd4, Lypd5, LY6g5b, Ly6g6d, Ly6g6e, Slurp1. LY6 to the family members were not detected in the sample, regardless of the treatment have been tested: LY6K, Lypd3, Lypd4, Lypd5, LY6g5b, Ly6g6d, Ly6g6e, Slurp1. 결과는 IEC가 염증성 사이토카인에 응답하여 LY6 패밀리 구성원들을 상향조절한다는 것을 가리킨다. The results indicate that IEC has the LY6 family members upregulated in response to inflammatory cytokines.

Figure 112009057712971-pct00024

다수의 LY6 패밀리 구성원들이 염증성 사이토카인의 존재 또는 부재 하에 검출되지 않았지만, 본 발명가들은 시험된 사이토카인 대다수에 응답한 뮤린 LY6A, LY6C 및 LY6F의 전사에서의 강력한 상향조절, 뿐만 아니라 시험된 사이토카인 일부에 응답한 뮤린 LY6E, LY6H 및 LYPD1의 더욱 중등도인 상향조절을 검출하였다. Although a number of LY6 family members were not detected in the presence or absence of inflammatory cytokines, the present inventors have tested, as well as a strong up-regulation, in a murine LY6A, transfer of LY6C and LY6F response to the test cytokine majority of cytokines, some a murine was detected in more moderate upregulation of LY6E, LY6H and LYPD1 in response. 그러나, IFNγ은 LY6 상향조절을 유도하는데 있어서 단연 가장 강력한 사이토카인이었다. However, IFNγ was by far the most potent cytokine in inducing LY6 upregulation to. 또한, TNFα는 LY6A, LY6F, LY6E 및 LYPD1의 발현에 대한 IFNγ의 효과를 강화시켰다. In addition, TNFα has improved the effect of IFNγ on the expression of LY6A, LY6F, LY6E and LYPD1. LY6 패밀리 구성원의 유사한 상향조절이 또다른 뮤린 IEC 세포주인 CMT93에서 나타났다 (데이터는 제시되지 않음). Similar upregulation of LY6 family members are found in another murine IEC cell line, CMT93 (data not shown).

사이토카인에 응답한 LY6 패밀리 구성원의 표면 발현을 시험하기 위해, YAMC 세포를 상기 사이토카인에 노출시키고, 실시예 1에서 본원에 기술된 바와 같이, 뮤린 LY6A 및 LY6C (이들에 대한 시판 항체가 입수가능함)의 발현에 대해 유동 세포측정에 의해 분석하였다. In order to examine the surface expression of LY6 family members in response to cytokines, to expose the YAMC cells to the cytokine, an embodiment as in the first described herein, the murine LY6A and LY6C (commercially available antibodies are available for these possible ) expression was analyzed by flow cytometry for the. 높은 수준의 뮤린 LY6A가 사이토카인이 첨가되지 않은 경우에도 YAMC 세포 상에서 발현되었다 (도 25B, 배지). The high levels of murine LY6A was expressed on YAMC cells even when the cytokine is not added (Figure 25B, media). 뮤린 LY6C의 발현 (도 25A, 배지)은 LY6A의 발현보다 상당히 낮았다. Expression of murine LY6C (Figure 25A, media) was considerably lower than expression of LY6A.

IL-1β 및 TNFα는, RNA 발현과 일치하여, 뮤린 LY6A 및 LY6C 양쪽 모두의 표면 발현에서의 약간의 증가를 유도하였다 (도 25A 및 25B). IL-1β and TNFα is consistent with the RNA expression was induced a small increase in the murine LY6A and LY6C in the surface expression of both (Figure 25A and 25B). IFNα가 세포에 첨가되었을 때 발현에서의 더욱 중등도의 증가가 주지된 한편, IFNγ는 LY6A 및 LY6C 양쪽 모두의 표면 발현에서의 극적인 증가를 유도하였다 (도 25A 및 25B). The IFNα are a more moderate increase in expression in the cells when added to give On the other hand, IFNγ induced a dramatic increase in the surface expression of both LY6A and LY6C (Figure 25A and 25B). 표면 단백질 발현은 RNA 발현을 밀접하게 반영하였다. Surface protein expression was closely reflect the RNA expression. Th2 사이토카인, 예컨대 IL4, IL10 또는 IL13은 LY6A 또는 LY6C의 표면 발현에 대한 효과가 없었다 (데이터는 제시되지 않음). Th2 cytokines such as IL4, IL10 or IL13 had no effect on surface expression of LY6A or LY6C (data not shown).

IFNγ에 의한 LY6A (도 25D) 및 LY6C (도 25C) 양쪽 모두의 유도는 용량 의존적이었다. LY6A by IFNγ (Fig 25D) and LY6C (Figure 25C) the induction of both was a dose-dependent manner. 6.25 유닛/㎖만큼 낮은 IFNγ의 용량으로 유동 세포측정에 의해 양쪽 LY6 분자 모두에서 검출가능한 증가가 초래되었다. It is 6.25 units / ㎖ by a detectable increase in both LY6 molecules by flow cytometry at a dose of IFNγ was low results. 또한, LY6A (도 25F) 및 LY6C (도 25E) 양쪽 모두의 표면 발현에서의 증가가 IFNγ 처리 후 2시간 내지 4시간 사이에 명확해졌고, IFNγ 처리 후 적어도 24시간 동안 꾸준히 증가하였다. Also, LY6A (Figure 25F) and LY6C (Figure 25E) surface expression became an increase in both clear between IFNγ for 2 hours to 4 hours after, and steadily increased for at least 24 hours after IFNγ treatment. 이러한 데이터는 비교적 낮은 농도의 IFNγ가 수시간 이내에 LY6 분자의 표면 발현을 증가시키는데 충분하다는 것을 가리킨다. These data indicate that less than the number of relatively low concentrations IFNγ time sufficient to increase the surface expression of LY6 molecules.

활성화된 T 세포에서 주로 분비되는 IL-22가 IEC 상에 존재하는 IL-22R 복합체를 통해 기능하여, 사이토카인 생산 및 염증성 표현형을 촉진한다는 증거가 있다 ([Brand, SF et al. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 290:G827-838 (2006)]). Which is mainly secreted by activated T cells, IL-22 is a proof of the functions through the IL-22R complex present on the IEC, promote cytokine production and an inflammatory phenotype ([Brand, SF et al. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 290: G827-838 (2006)]). 또한, IL-22는 크론병의 면역발병기전에 수반된다. In addition, IL-22 is involved in the immune pathogenesis of Crohn's disease. IL-22가 뮤린 IEC 상에서의 LY6 분자 발현에 영향을 미치는지 여부를 시험하기 위해, YAMC 세포를 IL-22의 존재 하에 배양하고, LY6C (도 25G) 및 LY6A (도 25H)의 발현에 대해 분석하였다. Was IL-22 are analyzed for expression of in order to test whether or not affects LY6 molecule expression on murine IEC, and culturing the YAMC cells in the presence of IL-22, LY6C (Figure 25G) and LY6A (Figure 25H) . 양쪽 LY6 분자 모두 IL-22의 존재 하에 IFNγ로의 처리 후에 나타난 유도에 필적하는 수준으로 실질적으로 증가되었다. Both LY6 molecules were all increased substantially to a level comparable to that seen after induction process to the IFNγ in the presence of IL-22.

LY6 분자의 상향조절이 YAMC 세포주에 특이적이지 않았음을 확실히 하기 위해, 뮤린 결장 상피 종양 세포주 CMT93에서의 뮤린 LY6A 및 LY6C의 RNA 수준을 시험하였다. To ensure that the upward adjustment of the molecular LY6 was not specific to the YAMC cell lines were tested in a murine RNA levels and LY6A LY6C in murine colonic epithelial tumor cell lines CMT93. 뮤린 LY6A 및 뮤린 LY6C 양쪽 모두의 수준이 IFNγ로의 처리 시 상향조절되었다 (도 25I). The levels of both murine LY6A and murine LY6C were upregulated upon treatment to IFNγ (Fig. 25I). LY6 분자들의 상향조절 수준이 CMT93 세포에서 더욱 수수하였지만, 유동 세포측정 분석은 미처리 세포에서도 수준이 꽤 높았음을 가리켰고 (데이터는 제시되지 않음), 이는 CMT93 세포의 종양 표현형의 결과일 것이다. While the up-regulated levels of LY6 molecules more cane in CMT93 cells, flow cytometry analysis (not data is present) that the point pointed quite a high level in untreated cells, which would be a result of the tumor phenotype of CMT93 cells.

이러한 데이터는 IEC가 염증성 사이토카인에 응답하여 LY6 패밀리 구성원을 상향조절한다는 것을 확증하는데 있어서 실시간 정량 RT-PCR에 의해 수득된 데이터를 지지한다. This data supports the data obtained by real-time quantitative RT-PCR method to confirm that the response to IEC upregulate LY6 family members on the inflammatory cytokines.

실시예 5: IEC LY6 자극이 지질 래프트 형성과 관련된다 Example 5: LY6 stimulation of IEC is associated with lipid raft formation

GPI-앵커형 단백질로서, LY6 패밀리 구성원은 전통적인 아웃사이드-인(outside-in) 신호전달과 관련된 독특한 세포내 도메인을 소유하지 않는다. As a GPI- anchor type protein, LY6 family members outside the traditional - does not possess a unique intracellular domain associated with the (outside-in) signaling. 그보다는, 이들은 지질 래프트 마이크로도메인 내에 존재한다 ([Bohuslav, J. et al. Eur J Immunol 23:825- 831(1993)). Rather, they are present in the lipid raft microdomains ([Bohuslav, J. et al Eur J Immunol 23:. 825- 831 (1993)). 그러나, 세포 표면 상에서의 LY6 패밀리 구성원의 가교는 또다른 세포 표면 분자의 재분배, 뿐만 아니라 지질 래프트 구조물의 재구성을 초래한다는 것이 제안되었고, 이는 LY6 분자가 신호 전달 및 하류의 세포성 기능에 영향을 미칠 수 있는 메커니즘을 시사한다 ([Simons, K. et al., Nat Rev Mol Cell Biol 1:31-39 (2000)]). However, the cross-linking of LY6 family members on the cell surface is another cell redistribution of surface molecules, as well as was suggested that result in the reorganization of the lipid raft structures, which LY6 molecules affect the cellular function of signal transduction and downstream suggest that mechanisms that can ([Simons, K. et al, Nat Rev Mol Cell Biol 1:. 31-39 (2000)]).

현재까지 LY6 단백질에 대한 리간드가 거의 확인되지 않았고, LY6A 또는 LY6C에 대한 리간드는 현재 공지되어 있지 않다 ([Paret, C. et al., (2005) Int J Cancer 115:724-733]; [Apostolopoulos, J. et al., (2000) Immunity 12:223-232]; 및 [Classon, BJ (2001) Trends Immunol. 22:126-127]). To date not been confirmed practically that ligands for LY6 proteins, a ligand for LY6A or LY6C is not currently known ([Paret, C. et al, (2005) Int J Cancer 115:. 724-733]; [Apostolopoulos ., J. et al, (2000) Immunity 12: 223-232]; and [Classon, BJ (2001) Trends Immunol 22:. 126-127]). 지질 래프트 통합성을 유지하는데 콜레스테롤이 요구되고 ([Simons, K., et al. J Clin Invest 110:597-603 (2002)]), 시험관 내에서 지질 래프트 생합성을 억제하는데 콜레스테롤 결핍이 종종 사용된다 ([von Tresckow, B. et al. J Immunol 172:4324-4331 (2004)]). The cholesterol to maintain lipid raft integrity is required ([Simons, K., et al J Clin Invest 110:. 597-603 (2002)]), cholesterol deficiency to inhibit lipid raft biosynthesis in vitro are often used ([von Tresckow, B. et al J Immunol 172:. 4324-4331 (2004)]).

LY6 가교에 응답하여 IEC에서 지질 래프트 재구성이 일어나는지 여부를 분석하기 위해, YAMC 세포를 콜레스테롤 결핍 조건 (지질 래프트가 세포로부터 결핍되는 조건) 및 콜레스테롤 비-결핍 조건 (지질 래프트 형성에 대해 허용성인 조건)에서 성장시켰다. In order in response to LY6 crosslinking to analyze whether the reconstructed lipid rafts going on IEC, cholesterol deficiency conditions the YAMC cells (conditions a lipid rafts is deficient from cells) and cholesterol non-deficient conditions (positive adult condition for lipid raft formation) It was grown in. 콜레스테롤 결핍 조건에 대해, YAMC 세포를 혈청의 부재 하에, 4μM 로바스타틴 및 0.25 mM 메발로네이트 (Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO))의 존재 하에 72시간 동안 37℃에서 성장시켰다. For cholesterol-deficient conditions, the YAMC cells in the absence of serum, in the presence of 4μM lovastatin and 0.25 mM mevalonate (Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO)) were grown for 72 hours at 37 ℃. 로바스타틴 또는 메발로네이트가 성장 배지에 첨가되지 않은 것을 제외하고는 동일한 성장 조건을 콜레스테롤 비-결핍 조건 하의 YAMC 세포에 사용하였다. The lovastatin or mevalonate cholesterol is the same growth conditions except for not adding to the growth medium, the non-used for YAMC cells under deficient conditions. 그후, 세포를 리프팅(lifting)시키고, LY6C를 실시예 1에 기술된 바와 같이 가교시켰다. Then, the cells were cross-linked as lifting (lifting) and describes a LY6C to the first embodiment. RNA를 수집하고, CXCL2, CXCL5, 및 CCL7의 발현 수준을 결정하였다. Collect RNA, and determined the level of expression of CXCL2, CXCL5, and CCL7.

이러한 연구의 결과들은 지질 래프트 결핍이 LY6C-매개 케모카인 생산의 억제를 초래한다는 것을 가리켰다. The results of these studies indicated that the lipid raft-mediated LY6C- deficiency leads to inhibition of chemokine production. 도 26A-26C는 콜레스테롤 결핍 (흑색 막대) YAMC 세포가 콜레스테롤이 결핍되지 않은 세포 (백색 막대)보다 케모카인을 덜 생산하였음을 나타낸다. Figure 26A-26C shows that the cholesterol-deficient (black bars) YAMC cells produced less hayeoteum the chemokine than that cholesterol is not deficient cells (white bars). 콜레스테롤 결핍은, LY6C 자극과 상관 없이, 항-KLH로 자극된 대조군에서 케모카인 생산에 영향을 미쳤지만, 응답이 최소였고, 일관적인 방향이 아니였다. Cholesterol deficiency, regardless of LY6C stimulation, crazy only affect chemokine production in stimulated with anti -KLH control, the response was minimal, it was not a consistent direction. 콜레스테롤 결핍이 세포 생육력에 전반적으로 영향을 미쳤는지 여부를 시험하기 위해, 본 발명가들은 7AAD 제외에 의해 세포 사망을 측정하였고, 콜레스테롤 결핍이 YAMC 세포의 생육력에 현저하게 영향을 미치지 않았음을 결정하였다 (92% 생육력 대 콜레스테롤 결핍 세포에서의 86%; 데이터는 제시되지 않음). To test whether cholesterol deficiency had an overall effect on cell viability, the present inventors have determined that you did not have a significant impact on the viability of the YAMC cells were measured for cell death by excluding 7AAD, cholesterol deficiency It was (86% at 92% viability for cholesterol-deficient cells; data not shown). LY6A (도 26D) 및 LY6C (도 26E) 양쪽 모두의 표면 발현이 콜레스테롤 결핍 YAMC 세포에서 양쪽 모두 상당히 더 낮았고, 이는 형질막 콜레스테롤 수준 및 지질 래프트 통합성이 세포 표면 상에서의 LY6 발현 수준에 영향을 미친다는 것을 시사한다. LY6A (FIG. 26D) and LY6C (Figure 26E) were lower significantly higher both in the surface expression of cholesterol, deficiency of both YAMC cells, which plasma membrane cholesterol levels and lipid raft integrity affects the LY6 expression levels on the cell surface It suggests that. 이러한 데이터는 콜레스테롤 생합성에 영향을 받는 지질 래프트 통합성이 표면 상에서의 LY6 분자의 발현을 허용하고, 케모카인의 LY6C 매개 유도에서 잠재적으로 수반된다는 것을 시사한다. These data suggest that lipid rafts integration affected the cholesterol biosynthesis castle that allow the expression of LY6 molecules on the surface, potentially accompanied by at LY6C mediated induction of chemokines. 따라서, 세포막 내의 LY6C 폴리펩티드들의 상호작용에 의해 매개되는 케모카인 생산의 강화는 세포 표면 상의 지질 래프트의 존재를 필요로 한다. Thus, reinforcement of chemokine production mediated by interaction of LY6C polypeptides in the cell membrane requires the presence of lipid rafts on the cell surface.

실시예 6: LY6C 의 가교가 LY6 분자의 증가된 표면 발현을 초래한다 Example 6: The cross-linking of the LY6C results in increased surface expression of LY6 molecules

T 세포의 표면 상에 LY6C를 가교시키는 것은 LY6C의 쉐딩(shedding)을 초래하는 것으로 보고되었다 ([Jaakkola, I. et al. (2003) J Immunol 170:1283-1290]). The cross-linking of the LY6C on the surface of T cells was reported to result in shedding (shedding) of LY6C ([Jaakkola, I. et al (2003) J Immunol 170:. 1283-1290]). 그러나, T 세포와는 달리, 뮤린 LY6C가 IEC의 표면 상에 가교되었을 때, LY6A 또는 LY6C의 쉐딩이 일어나지 않았다 (각각 도 27A 및 27B). However, T, unlike the cells, when murine LY6C was crosslinked on the surface of the IEC, the LY6A or LY6C shedding of the did not occur (Fig. 27A and 27B, respectively). 반대로, IFNγ의 부재 하에, LY6A 및 LY6C 양쪽 모두의 표면 발현 수준이 LY6C가 가교된 IEC 상에서 증가되었지만, LY6A의 경우에는 그렇지 않았다. In contrast, in the absence of IFNγ, but that the surface expression levels of both LY6A and LY6C on the increase that LY6C crosslinked IEC, but not in the case of LY6A. IEC가 IFNγ와 함께 예비인큐베이션되었을 때, 대부분의 이러한 효과가 폐지되었지만 (도 27C), LY6A의 약간의 상향조절이 여전히 검출되었다 (도 27D). When IEC is pre-incubated with IFNγ, but most of this effect was abolished (Figure 27C), a slight upregulation of LY6A was still detected (Figure 27D).

이러한 데이터는 IEC 상의 LY6C를 통한 자극이 LY6 분자의 증가된 표면 발현을 초래하는 양성 피드백 루프를 가리킨다. These data indicate a positive feedback loop to the magnetic poles through LY6C on IEC results in increased surface expression of LY6 molecules.

실시예 7: LY6A 의 자극이 케모카인의 Example 7: Preparation of chemokine stimulation of LY6A 증가된 분비를 초래한다 Resulting in an increased secretion

LY6 분자에 대한 기능이 완전하게 해명되지 않았다. This function about LY6 molecules were not fully explained. 대장염의 면역병리학에서의 LY6 분자의 역할을 시험하기 위해, LY6 분자의 자극을 IEC로부터의 케모카인의 전사 및 분비에 대한 효과에 대해 연구하였다. To examine the role of LY6 molecules in the immune pathology of colitis, stimulation of LY6 molecules was studied for the effect on the transcription and secretion of chemokines from IEC.

뮤린 LY6 분자의 가교에 응답한 IEC로부터의 케모카인의 생산을 분석하기 위해, IFNγ로 예비처리된 또는 처리되지 않은 YAMC 세포를 항-KLH 대조군 항체, 항-LY6A 또는 항-LY6C로 코팅된 플레이트 상에서 배양하였다. To analyze production of chemokines from IEC in response to crosslinking of murine LY6 one molecule, wherein the IFNγ YAMC cells are not pretreated or treated with -KLH cultured on a plate coated with control antibodies, or anti-anti--LY6A -LY6C It was. 24시간 후, 이러한 세포들로부터의 mRNA를 수득하고, 대장염에서 연루된 케모카인들인 CCL2, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL25, CXCL1, CXCL2, CXCL5, CXCL10, CXCL12 및 CX3CL1의 발현에 대해 정량 RT-PCR에 의해 분석하였다 (표 9) ([Papadakis, KA (2004) Curr Allergy Asthma Rep 4:83-89]; [Banks, C. et al., (2003) J Pathol 199:28-35]; 및 [Papadakis, KA, and SR Targan (2000) Inflamm Bowel Dis 6:303-313]). After 24 hours, to yield the mRNA from these cells, and the amount for the implicated in colitis chemokines which are CCL2, of CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL25, CXCL1, CXCL2, CXCL5, CXCL10, CXCL12 and CX3CL1 expression RT-PCR on was analyzed by (Table 9) ([Papadakis, KA (2004) Curr Allergy Asthma Rep 4: 83-89]; [Banks, C. et al, (2003) J Pathol 199:. 28-35]; and [ Papadakis, KA, and SR Targan (2000) Inflamm Bowel Dis 6: 303-313]). 비-허용성 성장 조건 (37℃, IFNγ 부재) 하에서 분석법을 수행하여, IFNγ 자극에 응답하여 IEC의 증식이 증가되는 가능성을 배제시켰다. Non-acceptable by performing the analysis under growth conditions (37 ℃, IFNγ member), IFNγ in response to stimulation was rule out the possibility that the increased proliferation of IEC.

Figure 112009057712971-pct00025

IFNγ로 예비처리된 세포들은 이러한 케모카인 유전자들 중 다수의 상향조절을 나타냈다 (표 9의 배지, 항-KLH 군 대 IFNγ, 항-KLH 군 참조). The pretreated cells with IFNγ are indicated the number of up-regulation of these chemokine genes (see medium, wherein -KLH group for IFNγ, wherein -KLH group of Table 9). 그러나, CCL8의 상향조절 및 CXCL1의 하향조절을 제외하고, 항-LY6A로 자극된 YAMC 세포는 항-KLH로 자극된 YAMC 세포와 유사한 유전자 발현 패턴을 나타냈다. However, except for the up-regulation and down-regulation of CXCL1 of CCL8 and the YAMC cells stimulated with anti--LY6A it exhibited a pattern of gene expression similar to that of the YAMC cells stimulated with anti--KLH. 그러나, 항-LY6C로 자극된 YAMC 세포는 실질적으로 변화되지 않고 유지된 CCL25 및 LY6C 자극에 응답하여 하향조절된 CXCL12를 제외하고는 분석된 모든 케모카인의 증가된 발현을 나타냈다. However, YAMC cells stimulated with anti--LY6C in response to the CCL25 and LY6C stimulation maintained without being substantially changed showed a down regulation, except for CXCL12 and the increased expression of all chemokines analyzed. LY6C 가교에 의해 유도된 케모카인의 증가된 유전자 발현이 IFNγ에 의존적이지 않았지만, IFNγ로 예비처리된 세포는 IFNγ로 예비처리되지 않은 세포에 비해 증가된 케모카인 발현을 나타냈다. The increased gene expression of chemokines induced by LY6C crosslinking did not dependent on IFNγ, the pretreated cells with IFNγ showed increased expression of chemokines compared to cells not pre-treated with IFNγ.

뮤린 LY6C 자극에 의해 유도된 케모카인 유도의 동역학을 분석하기 위해, 96웰 플레이트를 항-KLH 항체 또는 항-LY6A 또는 항-LY6C 모노클로날 항체로 코팅하였다. To analyze the kinetics of chemokine induction induced by murine LY6C stimulation, 96 well plates were coated with anti-antibody or anti--LY6A -KLH or wherein -LY6C monoclonal antibody. IFNγ로 예비처리된 또는 처리되지 않은 YAMC 세포를 24시, 48시 또는 72시에 첨가하였다. The IFNγ YAMC cells that are not the treatment or pre-treatment was added to the 24 hours, 48 ​​hours or 72. 지시된 시점에, 정량 RT-PCR 분석용으로 RNA를 수집하고, ELISA용으로 상등액을 수집하였다. The indicated time point, collect RNA for quantitative RT-PCR analysis and supernatants were collected for ELISA.

24시간 이내에, CXCL5 및 CCL7 양쪽 모두의 전사에서의 급격한 상승이 LY6C가 가교된 세포 상에서 검출되었지만 LY6A에서는 그렇지 않았다 (도 28A). Within 24 hours, CXCL5 and CCL7 was a sharp increase in the transcription of both LY6C is detected on a cross-linked cells were not in LY6A (Figure 28A). CXCL5 및 CCL7의 증가된 발현이 시간이 경과함에 따라 감소되었지만, 배양물에서 72시간 후에도 여전히 검출가능하였다. Although the increased expression of CXCL5 and CCL7 decrease with time, and can still be detected even after 72 hours in culture. 케모카인 전사를 강화시키는데 IFNγ가 필수적이지는 않았지만, IFNγ는 초기 시점에 CXCL5 및 CCL7 양쪽 모두의 전사를 유도하는데 있어서 LY6C 자극과 상승적으로 작용하였다. To strengthen the chemokine transcription IFNγ but is not essential, IFNγ was acting as LY6C stimulation and synergistic according to induce the transcription of both CXCL5 and CCL7 the initial point.

유전자 발현과 평행으로, LY6C이 가교된 세포의 상층액은 48시에 현저하게 더 높은 농도의 CXCL5를 함유하였지만 LY6A는 그렇지 않았다 (도 28B). In gene expression and parallel, supernatants of LY6C crosslinking the cells but is significantly further contains a high concentration of CXCL5 at 48 but not the LY6A (Figure 28B). 효과는 용량 의존적이었고, 1 ㎍/㎖만큼 적은 코팅된 항-LY6C로 검출가능하였다. The effect was dose-dependent, 1 ㎍ / ㎖ as it was possible to detect less, wherein the coated -LY6C. 전사와 마찬가지로, 세포가 IFNγ로 예비처리되었을 때 CXCL5의 분비가 강화되었지만, IFNγ가 효과에 필수적이지는 않았다. Like transcription, the cells, but the secretion of CXCL5 was enhanced when pre-treatment with IFNγ, did IFNγ is not essential to the effect. 24시 및 72시 시점 양쪽 모두에서 CXCL5의 증가된 분비가 또한 주지되었다. In both the 24 hour and 72 hour time point was not also an increased secretion of CXCL5.

관찰된 케모카인 상향조절에서 LY6C가 수반되었음을 확실히 하기 위해, 본 발명가들은 siRNA를 사용하여 LY6C를 녹다운시켰다. To ensure that LY6C are involved in the observed up-regulated chemokine, the present inventors have had a knockdown LY6C using siRNA. LY6C 전사물이 실시간 정량 RT-PCR에 의해 IFNγ의 부재 하에 95%, IFNγ의 존재 하에 약 90%만큼 억제되었고, 이는 YAMC 세포의 표면 상에서의 현저하게 더 낮은 수준의 LY6C에 상응하였다 (데이터는 제시되지 않음). LY6C transcript of 95% in the absence of IFNγ by real-time quantitative RT-PCR, was inhibited by about 90% in the presence of IFNγ, which corresponded to significantly lower levels on the YAMC cell surface LY6C (data are presented No). 표면 상의 LY6C 수준이 감소된 세포는 케모카인의 전사와 관련하여 LY6C 가교에 대한 감소된 응답을 나타냈다 (도 28C). The level of LY6C on the surface of cells in relation to the reduction of chemokine transcription showed a decreased response to LY6C crosslinking (Fig. 28C). LY6C의 녹다운에 의해 CXCL5의 분비가 또한 현저하게 억제되었다 (데이터는 제시되지 않음). The secretion of CXCL5 by knockdown of LY6C was also significantly inhibited (data not shown).

이러한 데이터들은 IEC의 표면 상에서의 LY6C의 가교가 증가된 케모카인 분비를 초래하지만 LY6A는 그렇지 않다는 것을 가리킨다. These data are the results in LY6C crosslinked chemokine secretion is increased on the surface of IEC, but LY6A indicates that otherwise.

실시예 8: 생체내 Example 8: In vivo IEC LY6C 로 자극된 세포에 대한 유사한 케모카인 유전자 발현을 나타낸다 Shows a similar chemokine gene expression for the IEC cells are stimulated with LY6C

뮤린 LY6C를 통해 자극된 IEC가 케모카인 유전자의 발현을 현저하게 상향조절하는 모델이 상기의 데이터에 의해 확립되었다. The IEC stimulated through murine LY6C this model markedly up-regulate the expression of chemokine genes was established by the data.

대장염의 뮤린 모델에서 레이저 포착 미세절개 IEC로부터의 마이크로어레이 데이터를 분석하여, 시험관내에서 LY6C 가교에 의해 자극된 케모카인이 생체내에서 IEC에 의해 분비되는 케모카인과 상관되는지를 결정하기 위해 대장염의 2가지 뮤린 모델의 건강한 마우스 및 대장염 마우스에서의 동일한 12개의 케모카인 유전자의 발현을 시험하였다 (도 29A 및 29B). By analyzing microarray data from laser capture micro dissection IEC in murine models of colitis, two types of colitis to determine if the chemokines stimulated by LY6C crosslinking in vitro correlate with chemokines secreted by IEC in vivo 12 were tested in the same expression of chemokine genes in murine models of healthy mice, and colitis mice (Fig. 29A and 29B). 발현 패턴이 LY6C 자극으로부터 초래된 케모카인의 상향조절과 동일하지는 않았지만, 시험관내 연구에서 가장 고도로 상향조절된 케모카인 유전자인 CXCL5의 발현이 대장염의 뮤린 모델에서 또한 가장 높게 상향조절된 케모카인이었다. This expression pattern, although not the same as the upregulation of the chemokine resulting from LY6C stimulation test most highly up-regulated the expression of chemokine genes in vitro studies CXCL5 this was also the most highly upregulated chemokines in the murine model of colitis. 본 발명가들은 대장염의 양쪽 모델 모두에서 CXCL1, CXCL10, CCL5 및 CCL7 발현에서의 상당한 상향조절을 발견하였다. The inventors have found a significant up-regulation in the CXCL1, CXCL10, CCL5 and CCL7 in both models of colitis expressed. 또한, 본 발명가들은 각각 전이 대장염 모델 또는 IL10-/- 모델에서 CCL4 및 CCL8의 상향조절을 발견하였다. In addition, the present inventors have respective transfer colitis model or the IL10 - found upregulation of CCL4 and CCL8 in the model - /.

흥미롭게도, 시험관 내에서 뮤린 LY6C 자극의 결과로 하향조절된 유일한 케모카인인 CXCL12가 또한 이러한 케모카인들 중에서 유일하게 생체내에서 하향조절되었다. Interestingly, the only downward as a result of in vitro murine LY6C stimulation regulation of chemokine CXCL12 was also the only down-regulated in vivo among these chemokines.

실시예 9: 결장 세포에서의 인간 LY6 유전자의 발현 Example 9: Expression of human LY6 genes in colon cells

인간 결장 세포주인 Colo 205 세포 (인간 결장 암종으로부터 유래된 세포주, ATCC™ 기탁 번호 CCL-222™)에서의 인간 LY6H, LYPD1, LYPD3, 및 LYPD5의 발현을 시험하였다. Human colon cell line, Colo 205 cells, human LY6H, LYPD1, LYPD3, and LYPD5 expression in (a cell line, ATCC ™ accession number CCL-222 ™ derived from a human colon carcinoma) were tested. 인간 Colo 205 세포를 사이토카인 IFN-r, LPS, TNFα, IFN-r + TNFα, IFN-r + LPS, 또는 LPS + TNFα (모두 100 ng/㎖, 단 LPS는 1 ug/㎖)로 18시간 (LYPD3) 또는 24시간 (LY6H 또는 LYPD5) 동안 처리하였다. 18 hours Human Colo 205 cells to cytokines IFN-r, LPS, TNFα, IFN-r + TNFα, IFN-r + LPS, or LPS + TNFα (all 100 ng / ㎖, only LPS is 1 ug / ㎖) ( LYPD3) or for 24 hours (LY6H or LYPD5). RNA를 수집 및 정제하고, 지시된 LY6 패밀리 구성원의 발현을 Applied Biosystems™으로부터의 시약을 사용하여 제조업자의 지침서에 따라 정량 RT-PCR에 의해 결정하였다. Collecting and purifying the RNA, and the expression of the indicated LY6 family member using reagents from Applied Biosystems ™ was determined by quantitative RT-PCR according to the manufacturer's instructions. RT-PCR 분석에 사용된 프라이머 및 프로브는 하기와 같았다: The primers and probes used for RT-PCR analysis were as follows:

LYPD1: LYPD1:

센스: CAT GAT CCT CCG AAT CTG GT (서열 59) Sense: CAT GAT CCT CCG AAT CTG GT (SEQ ID NO: 59)

안티센스: AGC ACA GAA CAG AGG GGC TA (서열 60) Antisense: AGC ACA GAA CAG AGG GGC TA (SEQ ID NO: 60)

프로브: ATA CGG CCA ATG TCA CAA CA (서열 61) Probe: ATA CGG CCA ATG TCA CAA CA (SEQ ID NO: 61)

LYPD3: LYPD3:

센스: ACT TCC TGT TCC CAC CAC TG (서열 62) Sense: ACT TCC TGT TCC CAC CAC TG (SEQ ID NO: 62)

안티센스: AGA GGA CAA GCG GAG AGA CA (서열 63) Antisense: AGA GGA CAA GCG GAG AGA CA (SEQ ID NO: 63)

프로브: TTC TGG CAG GGG TGT TCT AG (서열 64) Probe: TTC TGG CAG GGG TGT TCT AG (SEQ ID NO: 64)

LY6H: LY6H:

센스: AGC AGC AGC AGG AAG GAT (서열 65) Sense: AGC AGC AGC AGG AAG GAT (SEQ ID NO: 65)

안티센스: AAA AGT GCC GCT TAA CGA AG (서열 66) Antisense: AAA AGT GCC GCT TAA CGA AG (SEQ ID NO: 66)

프로브: CAA GAT GTG TGC TTC CTC CTG CGA (서열 67) Probe: CAA GAT GTG TGC TTC CTC CTG CGA (SEQ ID NO: 67)

LYPD5 프라이머 및 프로브들은 Applied Biosysems™ (카탈로그 번호 HS00289062_m1)에서 구입하였다. LYPD5 primers and probes were purchased from Applied Biosysems ™ (catalog number HS00289062_m1).

도 30A-30C에 도해된 결과는 인간 B-액틴 대조군과 비교된 이러한 인간 LY6 유전자들의 발현을 가리킨다. The results illustrated in Figure 30A-30C refers to the expression of a the human LY6 gene compared to the human B- actin control. 지시된 사이토카인으로의 처리 후에 인간 LY6H, LYPD3, 및 LYPD5의 발현에서의 상당한 증가가 관찰되었다. A significant increase in the human LY6H, LYPD3, and LYPD5 in expression was observed after treatment with the indicated cytokine.

실시예 10: 결장 생검 조직에서의 인간 LY6 유전자의 발현 Example 10: Expression of the gene in human colon biopsy LY6

CD 및 UC 환자의 결장에서의 증가된 LYPD1 및 LYPD5 발현의 근원을 추가로 연구하기 위해, UC 환자, CD 환자 및 대조군의 생검물의 코호트를 취하였다. To study further the source of the increased LYPD1 and LYPD5 expression in the colon of the patient's CD and UC, was taken to UC patients, the cohort of biopsies of water CD patients and the control group. 결장 생검물로부터 추출된 RNA를 사용한 LYPD1 발현에 대한 마이크로어레이 분석은 CD 환자의 염증이 있는 결장 조직에서 통계적으로 증가된 발현을 나타냈다 (도 31A). Colon microarray analysis for LYPD1 expression using RNA extracted from biopsies of water showed statistically increased expression in inflamed colon tissue of patients with CD (FIG. 31A). 결장으로부터 취해진 UC 및 CD 생검물에서, 통계적으로 증가된 LYPD5 발현이 염증이 있는 UC 및 CD 환자에서 관찰되었다 (도 31B). In the UC and CD biopsies taken from the water colon, statistically increased LYPD5 expression was observed in UC and CD patients with inflammation (Fig. 31B). 이는 염증이 없는 대조군 생검물에서는 관찰되지 않았다. This was not observed in the control group biopsies water without inflammation.

염증이 있는 IBD 조직의 말단 회장 생검물에서의 인간 LY6H의 발현을 RT-PCR (Taqman™) 분석을 사용하여 대조군 (비-IBD) 말단 회장 생검물과 비교하여 분석하였다. Human LY6H expression in terminal ileum biopsies of IBD tissue water with inflammation using RT-PCR (Taqman ™) analysis were compared to the control (non--IBD) terminal ileum biopsies water. 인간 LY6H 발현은 대조군과 비교하여 염증이 있는 IBD 생검물에서 1.5배 이상 더 컸다. Human LY6H expression was greater more than 1.5 times in water IBD biopsies with inflammation compared to the control.

염증이 있는 UC 결장 생검물에서의 인간 LYPD3 발현이 상향조절되었고, 대조군과 비교하여 염증이 있는 IBD 생검물에서 2배 미만으로 더 컸다. Human LYPD3 expression in UC colon biopsies was upregulated water with inflammation, greater by less than 2-fold in water IBD biopsies with inflammation compared to the control.

이러한 실험들의 결과는 IEC의 표면 상에서의 LY6 분자의 발현을 실연하였고, 발현이 염증 환경 내의 IEC에 독특하다는 것을 추가로 가리켰다. The results of these experiments indicated that it was further demonstrate the expression of LY6 molecules on the surface of IEC, expression is unique to IEC in the inflammatory environment. 또한, LY6A 및 LY6C의 표면 발현 수준이 대장염 마우스의 IEC 상에서 높았고, 결장 전체에 걸쳐 거의 보편적이었다. In addition, the surface expression level of LY6A and LY6C higher on the IEC in colitis mice was nearly universal throughout the colon. 분자들이 모두 질환 상태에 특이적으로 질환 동안에 편재성으로 발현되기 때문에, 인간 LY6 유전자 또는 폴리펩티드 발현, 특히 인간 LY6H, LYPD1, LYPD3, 및 LYPD5의 검출은 인간에서 UC 및/또는 CD가 포함되는 IBD를 검출하기 위한 유용한 방법이다. Since all molecules expressed ubiquity during a specific disease in the disease state, the human LY6 gene or polypeptide expression, particularly human LY6H, LYPD1, LYPD3, and detection of LYPD5 detects the IBD involved the UC and / or CD in humans It is a useful way to. 추가적으로, 인간 LY6 발현의 검출 방법은 인간에서 IBD, UC 및/또는 CD를 진단하는데, 그리고 IBD 치료제에 대한 응답을 모니터링하는데 유용하다. Additionally, the method for detecting a human LY6 expression in diagnosing IBD, UC and / or CD in a human, and is useful for monitoring the response to IBD therapeutic agents.

본원에 개시된 실시예들에서, IEC에서의 LY6 발현의 기능적 의미가 실연되었다. In embodiments disclosed herein, the functional significance of LY6 expression was acting in the IEC. YAMC 세포는 LY6A에 대해 강력하게 양성이었고, 더 낮은 수준의 LY6C를 발현하였다. YAMC cells were strongly positive for LY6A, was expressing lower levels of LY6C. 그러나, IL-1β, TNFα, IFNα, 특히 IL-22 및 IFNγ가 포함되는, 대장염 동안 결장 내에 존재하는 다수의 사이토카인으로의 자극 시, LY6 분자 양쪽 모두의 발현 수준이 크게 강화되었다. However, the IL-1β, TNFα, IFNα, and in particular IL-22 upon stimulation of a number of cytokines present within the colon during IFNγ, colitis that contain, LY6 expression levels of both molecules were greatly enhanced. LY6 분자의 발현을 상향조절하기 위해 IFNγ로 예비처리된 YAMC 세포는 LY6 발현의 기능적 의미를 분석하기 위한 유용한 시험관내 모델이었다. YAMC cells with IFNγ pre-treatment in order to up-regulate the expression of LY6 molecules was a useful in vitro model to analyze functional significance for LY6 expression.

YAMC 세포의 조건부로 불멸화된 성질은 SV40 대형 T 항원의 MHC II 프로모터-구동 발현으로부터 유래된다; The conditionally immortalized nature of the YAMC cells are MHC II promoters of SV40 large T antigen is derived from the driving expression; 낮은 수준 (2.5-5 U/㎖)의 IFNγ가 이러한 세포의 증식을 구동시키는데 사용된다 ([Whitehead, RH et al. (1993) Proc Natl Acad Sci USA 90:587-591]; [Whitehead, RH, and JL Joseph. (1994) Epithelial Cell Biol 3:119-125]). The low levels of IFNγ (2.5-5 U / ㎖) are used to drive proliferation of these cells ([Whitehead, RH et al (1993) Proc Natl Acad Sci USA 90: 587-591.]; [Whitehead, RH, and JL Joseph (1994) Epithelial Cell Biol 3:. 119-125]). YAMC 세포는 뮤린 IEC의 사이토카인 처리를 위한 시험관내 모델로 종종 사용된다 ([Mei, JM et al. (2000) Faseb J 14:1188-1201]; [Yan, F., and DB Polk (2002) J Biol Chem 277:50959-50965]). YAMC cells are often used as in vitro model for cytokine treatment of murine IEC ([Mei, JM et al (2000) Faseb J 14:. 1188-1201]; [Yan, F., and DB Polk (2002) J Biol Chem 277: 50959-50965]). 이러한 세포가 함유하는 SV40 대형 T 항원은 온도 민감성이고, 37℃에서 비-기능성이다. SV40 large T antigen that these cells contained is temperature sensitive, non from 37 ℃ - is functional. 본원에서 수행된 모든 실험은 이러한 비-허용성 조건 하에서의 IFNγ 처리를 수반하였다. All experiments performed herein, such non-IFNγ was accompanied by a treatment under acceptable conditions. 또한, 실험 전에 37℃에서 24시간 동안 YAMC 세포를 혈청 고갈시켰다 (그리고 IFNγ 고갈시켰다). In addition, the serum was depleted YAMC cells for 24 hours at 37 ℃ before testing (and was IFNγ depletion). 이같은 조건 하에, 잔여 T 항원 발현, 예컨대 세포의 증식을 가리키는 효과가 관찰되지 않았다. Under these conditions, residual T antigen expression, such as the effect that points to the proliferation of cells was observed. 그 결과, IFNγ 처리의 효과는 T 항원의 발현을 구동시키는 것에서 유래되는 효과보다는 IFNγ의 고유의 효과에 기인하였다. As a result, the effect of IFNγ treatment were due to inherent effects of IFNγ than the effect to be derived from that drives the expression of the T antigen. 또한, LY6 패밀리 구성원의 상향조절이 제2 뮤린 세포주인 CMT93에서 검출되었고, 이는 이러한 효과가 IEC에 광범위하게 적용가능하다는 것을 확증시킨다. In addition, the upregulation of LY6 family members was detected in a second murine cell line CMT93, which in turn confirms that this effect is possible broadly applicable to IEC.

또한, TNFα, IL-1β 및 IL-22로의 처리 후에 LY6 발현의 수수한 상향조절이 주지되었기 때문에, IFNγ는 LY6 분자를 유도하는 것에 대해 사이토카인들 중에서 유일하지 않았다. In addition, TNFα, because a modest upregulation of LY6 expression after treatment not to IL-1β and IL-22, IFNγ was not unique among cytokines for inducing LY6 molecules as. IL-22에 응답한 IEC 상에서의 LY6 분자의 상향조절이 크론병에서 IL-22에 대한 잠재적인 역할을 실연하는 최근의 데이터의 견지에서 흥미로왔다 ([Wolk, K., et al. J Immunol 178:5973-5981 (2007)]). Upregulation of LY6 molecules on IEC in response to the IL-22 has come interesting in light of recent data demonstrate that a potential role for IL-22 in Crohn's disease ([Wolk, K., et al. J Immunol 178: 5973-5981 (2007)). 마우스와 인간 LY6 분자 간의 상동성은 종종 복잡하지만, LY6 분자의 상향조절이 마우스에 한정되지 않는다는 것을 시사하는 증거가 있다. Homology between the mouse and human molecules LY6 castle often complicated, but there is evidence to suggest that upregulation of LY6 molecule is not limited to a mouse. 래트에서의 이전의 연구는 대장염 모델의 소장에서의 LY6 분자의 상향조절을 시사하였고, 이같은 발현이 염증, 세포/세포 상호작용, 뿐만 아니라 래트 IEC 내에서의 신호전달에 수반된다는 것이 제안되었다 ([Baksheev, L. et al. J Gastroenterol 41:1041-1052 (2006)]). Previous studies in rats it has been proposed that were suggested upregulation of LY6 molecules in the colitis model, small intestine, such expression is involved in inflammation, cell / cell interactions, and signal transduction in the well as the rat IEC ([ Baksheev, L. et al J Gastroenterol 41:. 1041-1052 (2006)]).

상기 기술된 데이터는 지질 래프트 통합성이 IEC에서의 LY6C 매개 신호 전달에서 수반될 가능성이 있다는 것을 가리킨다. The above-described data indicates that there is a possibility that lipid raft integrity involved in LY6C mediated signal transduction in IEC. 이는 지질 래프트의 파괴가 LY6C 발현을 하향조절시키는 것 및 LY6C 신호전달의 구조적 성분을 파괴하는 것 양쪽 모두에 의해 LY6C 자극의 하류 효과를 감소시키는 역할을 할 수 있음을 암시한다. This suggests that it can serve to reduce the downstream effects of LY6C stimulation both by to destroy the structural component of one of the destruction of lipid rafts down-regulating the expression of LY6C and LY6C signaling. 최근, 스타틴으로의 IEC의 콜레스테롤 결핍이 NF-κB 조정을 통해 전-염증성 유전자 발현을 억제하는 것으로 결정되었다 ([Lee, J. et al., Int Immunopharmacol 7:241-248 (2007)]). Recently, cholesterol deficiency in statin prior to the IEC through the NF-κB adjustment - was determined to inhibit inflammatory gene expression ([Lee, J. et al, Int Immunopharmacol 7: 241-248 (2007).]). 또한, 스타틴은 대장염의 뮤린 모델에서 효과적인 치료제였다 ([Naito, Y., et al. Int J Mol Med 17:997-1004 (2006)]). Further, the statins was an effective therapeutic agent in a murine model of colitis ([Naito, Y., et al Int J Mol Med 17:. 997-1004 (2006)]). 지질 래프트 운동성과 NF-κB 차단을 연결하는 메커니즘은 여전히 결정되지 않았지만, 본 발명가들의 데이터는 LY6C를 통한 활성화가 작용 메커니즘을 설명하는 한가지 가설일 수 있음을 시사한다. Mechanism linking lipid raft motility and blocking NF-κB have not been determined yet, the data of the inventors suggest that the activation through LY6C can be one hypothesis to explain the mechanism of action.

이러한 연구에서, 본 발명가들은 LY6 분자를 케모카인 유전자의 발현에서의 강력한 상류 스위치로서 확인하였다. In these studies, the inventors have identified the molecule as a powerful LY6 upstream switch in the chemokine gene expression. LY6C 수용체와 모노클로날 항체의 가교는 CXCL5를 포함하여 분석된 거의 모든 케모카인의 극적인 상향조절을 초래하였다. Crosslinking the monoclonal antibody to the LY6C receptor with monoclonal antibodies has resulted in dramatic upregulation of nearly all chemokines analyzed, including CXCL5. LY6C가 가교된 IEC에서 CXCL5 분비가 크게 강화된다는 것이 본 발명가들에 의해 추가로 확증되었다. Is that LY6C is greatly enhanced CXCL5 secretion from crosslinked IEC was confirmed further by the present inventors. 비록 LY6A 및 LY6C 양쪽 모두가 GPI 모이어티에 의해 세포 표면에 앵커링(anchoring)되지만, 그리고 IEC의 표면 상에서 LY6C보다 LY6A의 더 높은 수준의 발현에로 불구하고, LY6C 가교로는 케모카인 분비에 대한 하류 효과가 나타나지만 LY6A 가교와는 일관적이지 않다는 것이 흥미롭다. As though LY6A and LY6C both are but anchoring (anchoring) to the cell surface by a tee GPI moiety, and despite to the higher levels of LY6A expression than LY6C on the surface of IEC, LY6C crosslinking the downstream effects on chemokine secretion ropda appear LY6A and crosslinking is interesting that does inconsistent.

실시예 11 : LYPD5에 대한 리간드의 확인 Example 11: Identification of a ligand for LYPD5

이러한 연구에서, 당업자에게 주지된 기술을 통해, 즉 COS 세포 내로의 CMV 프로모터의 제어 하의 약 14,000개의 인간 유전자의 발현 클로닝에 의해 LYPD5의 리간드에 대한 검색을 수행하였다. In this study, through the well-known technique to those skilled in the art, that was carried out a search for ligands of LYPD5 by expression cloning of about 14,000 human genes under the control of the CMV promoter into COS cells. 100개의 유전자의 풀을 12개의 웰 플레이트 상의 140개의 웰에서 성장된 COS 세포 내로 형질감염시켰다. A pool of 100 genes were transfected into the COS cells grown in 140 wells on 12-well plates. 형질감염 후, 세포를 LYPD5-Fc 단백질로 염색하였다 (도 32 참조). After transfection, the cells were stained with LYPD5-Fc protein (see Figure 32). 양성으로 염색된 웰을 확인하고, 개별적인 클론들을 COS 세포 내로 형질감염시켰다. Check the wells stained positive, and were transfected individual clones into COS cells. 1개의 단백질 GLG-1 (ESL-1)을 발현하는 1개의 웰이 LYPD5에 대한 리간드로서 확인되었다. The one well expressing a single protein, GLG-1 (ESL-1) was identified as a ligand for LYPD5. GLG-1은 긴 세포외 도메인 (ECD), 막횡단 도메인 및 세포질 도메인을 특징으로 한다. GLG-1 is characterized by a long extracellular domain (ECD), transmembrane domain and a cytoplasmic domain. 당업자에게 공지된 기술을 사용하여 일련의 공동-면역침전 연구를 수행하여, GLG-1 ECD의 다양한 영역들의 LYPD5에 결합하는 능력을 평가하였다. Using techniques known to those skilled in the art a series of joint-perform the immunoprecipitation studies to evaluate the ability to bind LYPD5 of the various regions of the GLG-1 ECD. GLG-1 ECD의 변이체 또는 단편 (도 33-35 참조)이 LYPD5에 대한 리간드로서 작용할 수 있는 것으로 발견되었다. Variant or fragment of GLG-1 ECD (see Fig. 33-35) were found to be capable of acting as ligands for the LYPD5. 도 33B는 도 33A에 도해된 바와 같은 단편 1, 2, 3, 또는 4를 사용한 공동-면역침전 연구의 결과를 나타내고, 단편들 중 임의의 하나가 LYPD5 결합에 충분하다는 것을 실연한다. 33B is also co-used to fragment 1, 2, 3 or 4 as is illustrated in 33A - and demonstrate that shows the results of immunoprecipitation studies, any one of the fragments is sufficient for LYPD5 binding.

또한, GLG-1 ECD 도메인 자체가 LYPD5 결합에 충분한 것으로 발견되었다. In addition, a GLG-1 ECD domain itself has been found to be sufficient for LYPD5 binding. 도 33에 나타난 바와 같이, GLG-1은 다중 GLG-1 도메인으로 구성되고, 단일 GLG-1 도메인들이 LYPD5에 결합할 수 있다. As shown in Figure 33, GLG-1 is made up of multiple GLG-1 domains can be a single GLG-1 domains to bind LYPD5. 도 34B는 단편 1, 2, 3, 및 4, 뿐만 아니라 단일 GLG-1 도메인 115, 150, 215, 538, 609, 670, 729, 및 858 (도 34A에 제시됨)이 LYPD5에 결합할 수 있었음을 실연하는 공동-면역침전의 결과를 나타낸다. That there FIG 34B may be bonded to the fragments 1, 2, 3, and 4, as well as single GLG-1 domains 115, 150, 215, 538, 609, 670, 729, and 858 (noted in the FIG. 34A) is LYPD5 to demonstrate co-it shows the results of immunoprecipitation.

또다른 공동-면역침전 연구를 통해, LYPD5의 단편들 (도 35A 참조)을 기초로 결합이 특이적인 것으로 나타났고, 이때 LYPD5는 BAP 음성 대조군에 결합하지 않는 것으로 발견되었고, FN14 음성 대조군은 GLG-1 단편 2에 결합하는 것으로 발견되는 것으로 발견되지 않았으며, 인간 GLG-1 도메인 115는 LYPD5에 결합하였고, 도메인 115는 항상 검출가능한 수준으로 발현되지는 않았지만, 여전히 LYPD5를 끌어내렸고, 도메인 115가 없는 인간 GLG-1 단편 1 (잔기 26-114)은 LYPD5에 결합하지 않았다 (도 35B). Another co-through immunoprecipitation studies, showed that the binding is specific, based on fragments of LYPD5 (see Figure 35A), wherein LYPD5 was found that it does not bind BAP negative control, FN14 negative control was GLG- was one not found being found to bind to fragment 2, was coupled to human GLG-1 domain, 115 LYPD5, domain 115, although not always expressed detectable levels, but still climbed pull LYPD5, no domain 115 human GLG-1 fragment 1 (residues 26-114) did not bind LYPD5 (Figure 35B).

도 34A 및 35A의 "*"은 잠재적인 푸코실화 부위를 가리킨다. Of 34A and 35A "*" indicates the potential Foucault misfire region.

상기의 발명이 이해를 명확하게 하려는 목적으로 설명 및 예의 방식으로 약간 상세하게 기술되었지만, 설명 및 예가 본 발명의 범주를 한정하는 것으로 간주되지 않아야 한다. Although some described in detail by way of example and described for the purpose of the invention is to clarify the understanding of the description and examples should not be considered as limiting the scope of the invention. 본원에서 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 내용은 전체적으로 거명에 의해 확실하게 포함된다. The contents of all patent and scientific literature cited herein are incorporated as a whole by reference reliably.

SEQUENCE LISTING <110> Diehl, Lauri; SEQUENCE LISTING <110> Diehl, Lauri; Flanagan, Kenneth; Flanagan, Kenneth; Mo, Lian; Mo, Lian; Genentech Inc., <120> METHODS FOR DETECTING INFLAMMATORY BOWEL DISEASE <130> 39766-0296.PCT <140> Not yet Assigned <141> Herewith <150> US 60/891,196 <151> 2007-02-22 <150> US 60/987,752 <151> 2007-11-13 <150> US 61/024,170 <151> 2008-01-28 <160> 69 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 957 <212> DNA <213> Homo Sapiens <400> 1 cgcgtctgcg gctgcgttcc ccgaaagacg aggctgcgcc cggattccgg tccgcaggga 60 gaccgaaggg cacagctccc cgcgccgcgc acgccgcccg agcccggagt gcggacaccc 120 ccgggatgct tgcgccccag aggacccgcg ccccaagccc ccgcgccgcc cccaggccca 180 cccggagcat gctgcctgca gccatgaagg gcctcggcct ggcgctgctg gccgtcctgc 240 tgtgctcggc gcccgctcat ggcctgtggt gccaggactg caccctgacc accaactcca 300 gccattgcac cccaaagcag tgccagccgt ccgacacggt gtgtgccagt gtccgaatca 360 ccgatcccag cagcagcagg aaggatcact cggtgaacaa gatgtgtgcc tcctcctgtg 420 acttcgttaa gcgacacttt ttctcagact atctgatggg gtttattaac tctgggatct 480 taaaggtcga cgtggactgc tgcgagaagg atttgtgcaa tggggcggca ggggcagggc 540 acagcccctg ggccctggcc gggggg Genentech Inc., <120> METHODS FOR DETECTING INFLAMMATORY BOWEL DISEASE <130> 39766-0296.PCT <140> Not yet Assigned <141> Herewith <150> US 60 / 891,196 <151> 2007-02-22 <150> US 60 / 987,752 <151> 2007-11-13 <150> US 61 / 024,170 <151> 2008-01-28 <160> 69 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 957 <212> DNA <213> Homo Sapiens <400> 1 cgcgtctgcg gctgcgttcc ccgaaagacg aggctgcgcc cggattccgg tccgcaggga 60 gaccgaaggg cacagctccc cgcgccgcgc acgccgcccg agcccggagt gcggacaccc 120 ccgggatgct tgcgccccag aggacccgcg ccccaagccc ccgcgccgcc cccaggccca 180 cccggagcat gctgcctgca gccatgaagg gcctcggcct ggcgctgctg gccgtcctgc 240 tgtgctcggc gcccgctcat ggcctgtggt gccaggactg caccctgacc accaactcca 300 gccattgcac cccaaagcag tgccagccgt ccgacacggt gtgtgccagt gtccgaatca 360 ccgatcccag cagcagcagg aaggatcact cggtgaacaa gatgtgtgcc tcctcctgtg 420 acttcgttaa gcgacacttt ttctcagact atctgatggg gtttattaac tctgggatct 480 taaaggtcga cgtggactgc tgcgagaagg atttgtgcaa tggggcggca ggggcagggc 540 acagcccctg ggccctggcc gggggg ctcc tgctcagcct ggggcctgcc ctcctctggg 600 ctgggccctg atgtctcctc cttcccacgg ggcttctgag cttgctcccc tgagcctgtg 660 gctgccctct ccccagcctg gcgtggctgg ggctgggggc agccttggcc cagctccgtg 720 gctgtggcct gtggctctca ctcctccccc gacgtgaagc ctccctgtct ctccgccagc 780 tctgagtccc aggcagctgg acatctccag gaaaccaggc catctgggca ggaggcctgg 840 ggatgagggt ggggggggac ccccaggtcc cggaggggaa gtgaagcaac agcccagctg 900 gaagggcgtc ttctgcggag aaataaagtc acttttgagt cctgagaaaa aaaaaaa 957 <210> 2 <211> 140 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 2 Met Leu Pro Ala Ala Met Lys Gly Leu Gly Leu Ala Leu Leu Ala Val 1 5 10 15 Leu Leu Cys Ser Ala Pro Ala His Gly Leu Trp Cys Gln Asp Cys Thr 20 25 30 Leu Thr Thr Asn Ser Ser His Cys Thr Pro Lys Gln Cys Gln Pro Ser 35 40 45 Asp Thr Val Cys Ala Ser Val Arg Ile Thr Asp Pro Ser Ser Ser Arg 50 55 60 Lys Asp His Ser Val Asn Lys Met Cys Ala Ser 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540 gggagaagag gaagacagga agggggtggg gatgtgaagc gaccgtccca gccttccccg 600 cccgccaccc ccaccccaac tcggcagccg tcacgtgatg cctggagtgg gaggtgggga 660 gaaaagg cga gacttttgtg ggtgctcccg atcgccagta gttccttcag tctcagccgc 720 caactccgga ggcgcggtgc tcggcccggg agcgcgagcg ggaggagcag agacccgcag 780 ccgggagccc gagcgcgggc gatgcaggct ccgcgagcgg cacctgcggc tcctctaagc 840 tacgaccgtc gtctccgcgg cagcagcgcg ggccccagca gcctcggcag ccacagccgc 900 tgcagccggg gcagcctccg ctgctgtcgc ctcctctgat gcgcttgccc tctcccggcc 960 ccgggactcc gggagaatgt gggtcctagg catcgcggca actttttgcg gattgttctt 1020 gcttccaggc tttgcgctgc aaatccagtg ctaccagtgt gaagaattcc agctgaacaa 1080 cgactgctcc tcccccgagt tcattgtgaa ttgcacggtg aacgttcaag acatgtgtca 1140 gaaagaagtg atggagcaaa gtgccgggat catgtaccgc aagtcctgtg catcatcagc 1200 ggcctgtctc atcgcctctg ccgggtacca gtccttctgc tccccaggga aactgaactc 1260 agtttgcatc agctgctgca acacccctct ttgtaacggg ccaaggccca agaaaagggg 1320 aagttctgcc tcggccctca ggccagggct ccgcaccacc atcctgttcc tcaaattagc 1380 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atctctacat 780 ggagataaat gatttaaacc agaaaa 806 <210> 12 <211> 128 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 12 Met Arg Thr Ala Leu Leu Leu Leu Ala Ala Leu Ala Val Ala Thr Gly 1 5 10 15 Pro Ala Leu Thr Leu Arg Cys His Val ctt gcagccctgg ctgtggctac 120 agggccagcc cttaccctgc gctgccacgt gtgcaccagc tccagcaact gcaagcattc 180 tgtggtctgc ccggccagct ctcgcttctg caagaccacg aacacagtgg agcctctgag 240 ggggaatctg gtgaagaagg actgtgcgga gtcgtgcaca cccagctaca ccctgcaagg 300 ccaggtcagc agcggcacca gctccaccca gtgctgccag gaggacctgt gcaatgagaa 360 gctgcacaac gctgcaccca cccgcaccgc cctcgcccac agtgccctca gcctggggct 420 ggccctgagc ctcctggccg tcatcttagc ccccagcctg tgaccttccc cccagggaag 480 gcccctcatg cctttccttc cctttctctg gggattccac acctctcttc cccagccgca 540 acgggggtgc caggagcccc aggctgaggg cttccccgaa agtctgggac caggtccagg 600 tgggcatgga atgctgatga cttggagcag gccccacaga ccccacagag gatgaagcca 660 ccccacagag gatgcagccc ccagctgcat ggaaggtgga ggacagaagc cctgtggatc 720 cccggatttc acactccttc tgttttgttg ccgtttattt ttgtactcaa atctctacat 780 ggagataaat gatttaaacc agaaaa 806 <210> 12 <211> 128 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 12 Met Arg Thr Ala Leu Leu Leu Leu Ala Ala Leu Ala Val Ala Thr Gly 1 5 10 15 Pro Ala Leu Thr Leu Arg Cys His Val Cys Thr Ser Ser Ser Asn Cys 20 25 30 Lys His Ser Val Val Cys Pro Ala Ser Ser Arg Phe Cys Lys Thr Thr 35 40 45 Asn Thr Val Glu Pro Leu Arg Gly Asn Leu Val Lys Lys Asp Cys Ala 50 55 60 Glu Ser Cys Thr Pro Ser Tyr Thr Leu Gln Gly Gln Val Ser Ser Gly 65 70 75 80 Thr Ser Ser Thr Gln Cys Cys Gln Glu Asp Leu Cys Asn Glu Lys Leu 85 90 95 His Asn Ala Ala Pro Thr Arg Thr Ala Leu Ala His Ser Ala Leu Ser 100 105 110 Leu Gly Leu Ala Leu Ser Leu Leu Ala Val Ile Leu Ala Pro Ser Leu 115 120 125 <210> 13 <211> 1145 <212> DNA <213> Homo Sapiens <400> 13 gctccggcca gccgcggtcc agagcgcgcg aggttcgggg agctccgcca ggctgctggt 60 acctgcgtcc gcccggcgag caggacaggc tgctttggtt tgtgacctcc aggcaggacg 120 gccatcctct ccagaatgaa gatcttcttg ccagtgctgc tggctgccct tctgggtgtg 180 gagcgagcca gctcgctgat gtgcttctcc 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gattaccgtt taatctgtgg cttcatggat 720 gactgcaaaa atgacatcaa cattctgaaa tgtggcagta ttcggcttgg agaaaaggat 780 gcacattcac aaggtgaggt ggtatcatgc ttggagaaag gcctggtgaa agaagcagaa 840 gaaagagaac ccaagattca agtttctgaa ctctgcaaga aagccattct ccgggtggct 900 g cggc gctgcatctg 60 ctgctgctat tcgcggccgg ggccgagaaa ctccccggcc atggcgtcca cagccagggc 120 cagggtcccg gggccaactt tgtgtccttc gtagggcagg ccggaggcgg cggcccggcg 180 ggtcagcagc tgccccagct gcttcagtca tcgcagcttc agcagcaaca gcagcagcag 240 caacagcaac agcagcttca gccgccgcag ccgcctttcc cggcgggtgg gcctccggcc 300 cggcggggag gagcgggggc tggtgggggc tggaagctgg cggaggaaga gtcctgcagg 360 gaggacgtga cccgcgtgtg ccctaagcac acctggagca acaacctggc ggtgctcgag 420 tgcctgcagg atgtgaggga gcctgaaaat gaaatttctt cagactgcaa tcatttgttg 480 tggaattata agctgaacct aactacagat cccaaatttg aatctgtggc cagagaggtt 540 tgcaaatcta ctataacaga gattaaagaa tgtgctgatg aaccggttgg aaaaggttac 600 atggtttcct gcttagtgga tcaccgaggc aacatcactg agtatcagtg tcaccagtac 660 attaccaaga tgacggccat catttttagt gattaccgtt taatctgtgg cttcatggat 720 gactgcaaaa atgacatcaa cattctgaaa tgtggcagta ttcggcttgg agaaaaggat 780 gcacattcac aaggtgaggt ggtatcatgc ttggagaaag gcctggtgaa agaagcagaa 840 gaaagagaac ccaagattca agtttctgaa ctctgcaaga aagccattct ccgggtggct 900 g agctgtcat cggatgactt tcacttagac cggcatttat attttgcttg ccgagatgat 960 cgggagcgtt tttgtgaaaa tacacaagct ggtgagggca gagtgtataa gtgcctcttt 1020 aaccataaat ttgaagaatc catgagtgaa aagtgtcgag aagcacttac aacccgccaa 1080 aagctgattg cccaggatta taaagtcagt tattcattgg ccaaatcctg taaaagtgac 1140 ttgaagaaat accggtgcaa tgtggaaaac cttccgcgat cgcgtgaagc caggctctcc 1200 tacttgttaa tgtgcctgga gtcagctgta cacagagggc gacaagtcag cagtgagtgc 1260 cagggggaga tgctggatta ccgacgcatg ttgatggaag acttttctct gagccctgag 1320 atcatcctaa gctgtcgggg ggagattgaa caccattgtt ccggattaca tcgaaaaggg 1380 cggaccctac actgtctgat gaaagtagtt cgaggggaga aggggaacct tggaatgaac 1440 tgccagcagg cgcttcaaac actgattcag gagactgacc ctggtgcaga ttaccgcatt 1500 gatcgagctt tgaatgaagc ttgtgaatct gtaatccaga 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cagcctgcaa acatataaga 1560 tctggagacc caatgatctt gtcgtgcctg atggaacatt tatacacaga gaagatggta 1620 gaagactgtg aacaccgtct cttagagctg cagtatttca tctcccggga ttggaagctg 1680 gaccctgtcc tgtaccgcaa gtgccaggga gacgcttctc gtctttgcca cacccacggt 1740 tggaatga ga ccagtgaatt tatgcctcag ggagctgtgt tctcttgttt atacagacac 1800 gcctaccgca ctgaggaaca gggaaggagg ctctcacggg agtgccgagc tgaagtccaa 1860 aggatcctac accagcgtgc catggatgtc aagctggatc ctgccctcca ggataagtgc 1920 ctgattgatc tgggaaaatg gtgcagtgag aaaacagaga ctggacagga gctggagtgc 1980 cttcaggacc atctggatga cttggtggtg gagtgtagag atatagttgg caacctcact 2040 gagttagaat cagaggatat tcaaatagaa gccttgctga tgagagcctg tgagcccata 2100 attcagaact tctgccacga tgtggcagat aaccagatag actctgggga cctgatggag 2160 tgtctgatac agaacaaaca ccagaaggac atgaacgaga agtgtgccat cggagttacc 2220 cacttccagc tggtgcagat gaaggatttt cggttttctt acaagtttaa aatggcctgc 2280 aaggaggacg tgttgaagct ttgcccaaac ataaaaaaga aggtggacgt ggtgatctgc 2340 ctgagcacga ccgtgcgcaa tgacactctg caggaagcca 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gggtccgggt 540 cacgctgcgg cctggggagc cccagcagct ccaggtccgc ttccttcgtg ctgagggata 600 cccggtggac ctgtactacc ttatggacct gagctactcc atgaaggacg acctggaacg 660 cgtgcgccag ctcgggcacg ctctgctggt ccggctgcag gaagtcaccc attctgtgcg 720 cattggtttt ggttcctttg tggacaaaac ggtgctgccc tttgtgagca cagtaccctc 780 caaactgcgc cacccctgcc ccacccggct ggagcgctgc cagtcaccat tcagctttca 840 ccatgtgctg tccctgacgg gggacgcaca agccttcgag cgggaggtgg ggcgcca gag 900 tgtgtccggc aatctggact cgcctgaagg tggcttcgat gccattctgc aggctgcact 960 ctgccaggag cagattggct ggagaaatgt gtcccggctg ctggtgttca cttcagacga 1020 cacattccat acagctgggg acgggaagtt gggcggcatt ttcatgccca gtgatgggca 1080 ctgccacttg gacagcaatg gcctctacag tcgcagcaca gagtttgact acccttctgt 1140 gggtcaggta gcccaggccc tctctgcagc aaatatccag cccatctttg ctgtcaccag 1200 tgccgcactg cctgtctacc aggagctgag taaactgatt cctaagtctg cagttgggga 1260 gctgagtgag gactccagca acgtggtaca gctcatcatg gatgcttata atagcctgtc 1320 ttccaccgtg acccttgaac actcttcact ccctcctggg gtccacattt cttacgaatc 1380 ccagtgtgag ggtcctgaga agagggaggg taaggctgag gatcgaggac agtgcaacca 1440 cgtccgaatc aaccagacgg tgactttctg ggtttctctc caagccaccc actgcctccc 1500 agagccccat ctcctgaggc tccgggccct tggcttctca gaggagctga ttgtggagtt 1560 gcacacgctg tgtgactgta attgcagtga cacccagccc caggctcccc actgcagtga 1620 tggccaggga cacctacaat gtggtgtatg cagctgtgcc cctggccgcc taggtcggct 1680 ctgtgagtgc tctgtggcag agctgtcctc cccagacctg gaatctgggt gccgggctcc 1740 caatggcaca gggcccctgt gcagtggaaa gggtcactgt caatgtggac gctgcagctg 1800 cagtggacag agctctgggc atctgtgcga gtgtgacgat gccagctgtg agcgacatga 1860 gggcatcctc tgcggaggct ttggtcgctg ccaatgtgga gtatgtcact gtcatgccaa 1920 ccgcacgggc agagcatgcg aatgcagtgg ggacatggac agttgcatca gtcccgaggg 1980 agggctctgc agtgggcatg gacgctgcaa atgcaaccgc tgccagtgct tggacggcta 2040 ctatggtgct ctatgcgacc aatgcccagg ctgcaagaca ccatgcgaga gacaccggga 2100 ctgtgcagag tgtggggcct tcaggactgg cccactggcc accaactgca gtacagcttg 2160 tgcccatacc aatgtgaccc tggccttggc ccctatcttg gatgatggct ggtgcaaaga 2220 gcggaccctg gacaaccagc tgttcttctt cttggtggag gatgacgcca gaggcacggt 2280 cgtgctcaga gtgagacccc aagaaaaggg agcagaccac acgcaggcca ttgtgctggg 2340 ctgcgtaggg ggcatcgtgg cagtggggct ggggctggtc ctggcttacc ggctctcggt 2400 ggaaatctat gaccgccggg aatacagtcg ctttgagaag gagcagcaac aactcaactg 2460 gaagcaggac agtaatcctc tctacaaaag tgccatcacg accaccatca atcctcgctt 2520 tcaagaggca gacagtccca ctctctgaag gagggaggga cacttaccca aggctcttct 2580 ccttg gagga cagtgggaac tggagggtga gaggaagggt gggtctgtaa gaccttggta 2640 ggggactaat tcactggcga ggtgcggcca ccaccctact tcattttcag agtgacaccc 2700 aagagggctg cttcccatgc ctgcaacctt gcatccatct gggctacccc acccaagtat 2760 acaataaagt cttacctcag aaaaaaaaaa aaaaaaaa 2798 <210> 69 <211> 798 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 69 Met Val Ala Leu Pro Met Val Leu Val Leu Leu Leu Val Leu Ser Arg 1 5 10 15 Gly Glu Ser Glu Leu Asp Ala Lys Ile Pro Ser Thr Gly Asp Ala Thr 20 25 30 Glu Trp Arg Asn Pro His Leu Ser Met Leu Gly Ser Cys Gln Pro Ala 35 40 45 Pro Ser Cys Gln Lys Cys Ile Leu Ser His Pro Ser Cys Ala Trp Cys 50 55 60 Lys Gln Leu Asn Phe Thr Ala Ser Gly Glu Ala Glu Ala Arg Arg Cys 65 70 75 80 Ala Arg Arg Glu Glu Leu Leu Ala Arg Gly Cys Pro Leu Glu Glu Leu 85 90 95 Glu Glu Pro Arg Gly Gln Gln Glu Val Leu Gln Asp Gln Pro Leu Ser 100 105 110 Gln Gly Ala Arg Gly Glu Gly Ala Thr Gln Leu Ala Pro Gln Arg Val 115 120 125 Arg Val Thr Leu Arg Pro Gly Glu Pro Gln Gln Leu Gln Val Arg Phe 130 135 140 Leu Arg Ala Glu Gl y Tyr Pro Val Asp Leu Tyr Tyr Leu Met Asp Leu 145 150 155 160 Ser Tyr Ser Met Lys Asp Asp Leu Glu Arg Val Arg Gln Leu Gly His 165 170 175 Ala Leu Leu Val Arg Leu Gln Glu Val Thr His Ser Val Arg Ile Gly 180 185 190 Phe Gly Ser Phe Val Asp Lys Thr Val Leu Pro Phe Val Ser Thr Val 195 200 205 Pro Ser Lys Leu Arg His Pro Cys Pro Thr Arg Leu Glu Arg Cys Gln 210 215 220 Ser Pro Phe Ser Phe His His Val Leu Ser Leu Thr Gly Asp Ala Gln 225 230 235 240 Ala Phe Glu Arg Glu Val Gly Arg Gln Ser Val Ser Gly Asn Leu Asp 245 250 255 Ser Pro Glu Gly Gly Phe Asp Ala Ile Leu Gln Ala Ala Leu Cys Gln 260 265 270 Glu Gln Ile Gly Trp Arg Asn Val Ser Arg Leu Leu Val Phe Thr Ser 275 280 285 Asp Asp Thr Phe His Thr Ala Gly Asp Gly Lys Leu Gly Gly Ile Phe 290 295 300 Met Pro Ser Asp Gly His Cys His Leu Asp Ser Asn Gly Leu Tyr Ser 305 310 315 320 Arg Ser Thr Glu Phe Asp Tyr Pro Ser Val Gly Gln Val Ala Gln Ala 325 330 335 Leu Ser Ala Ala Asn Ile Gln Pro Ile Phe Ala Val Thr Ser Ala Ala 340 345 350 Leu Pro Val Tyr Gl n Glu Leu Ser Lys Leu Ile Pro Lys Ser Ala Val 355 360 365 Gly Glu Leu Ser Glu Asp Ser Ser Asn Val Val Gln Leu Ile Met Asp 370 375 380 Ala Tyr Asn Ser Leu Ser Ser Thr Val Thr Leu Glu His Ser Ser Leu 385 390 395 400 Pro Pro Gly Val His Ile Ser Tyr Glu Ser Gln Cys Glu Gly Pro Glu 405 410 415 Lys Arg Glu Gly Lys Ala Glu Asp Arg Gly Gln Cys Asn His Val Arg 420 425 430 Ile Asn Gln Thr Val Thr Phe Trp Val Ser Leu Gln Ala Thr His Cys 435 440 445 Leu Pro Glu Pro His Leu Leu Arg Leu Arg Ala Leu Gly Phe Ser Glu 450 455 460 Glu Leu Ile Val Glu Leu His Thr Leu Cys Asp Cys Asn Cys Ser Asp 465 470 475 480 Thr Gln Pro Gln Ala Pro His Cys Ser Asp Gly Gln Gly His Leu Gln 485 490 495 Cys Gly Val Cys Ser Cys Ala Pro Gly Arg Leu Gly Arg Leu Cys Glu 500 505 510 Cys Ser Val Ala Glu Leu Ser Ser Pro Asp Leu Glu Ser Gly Cys Arg 515 520 525 Ala Pro Asn Gly Thr Gly Pro Leu Cys Ser Gly Lys Gly His Cys Gln 530 535 540 Cys Gly Arg Cys Ser Cys Ser Gly Gln Ser Ser Gly His Leu Cys Glu 545 550 555 560 Cys Asp Asp Ala Se r Cys Glu Arg His Glu Gly Ile Leu Cys Gly Gly 565 570 575 Phe Gly Arg Cys Gln Cys Gly Val Cys His Cys His Ala Asn Arg Thr 580 585 590 Gly Arg Ala Cys Glu Cys Ser Gly Asp Met Asp Ser Cys Ile Ser Pro 595 600 605 Glu Gly Gly Leu Cys Ser Gly His Gly Arg Cys Lys Cys Asn Arg Cys 610 615 620 Gln Cys Leu Asp Gly Tyr Tyr Gly Ala Leu Cys Asp Gln Cys Pro Gly 625 630 635 640 Cys Lys Thr Pro Cys Glu Arg His Arg Asp Cys Ala Glu Cys Gly Ala 645 650 655 Phe Arg Thr Gly Pro Leu Ala Thr Asn Cys Ser Thr Ala Cys Ala His 660 665 670 Thr Asn Val Thr Leu Ala Leu Ala Pro Ile Leu Asp Asp Gly Trp Cys 675 680 685 Lys Glu Arg Thr Leu Asp Asn Gln Leu Phe Phe Phe Leu Val Glu Asp 690 695 700 Asp Ala Arg Gly Thr Val Val Leu Arg Val Arg Pro Gln Glu Lys Gly 705 710 715 720 Ala Asp His Thr Gln Ala Ile Val Leu Gly Cys Val Gly Gly Ile Val 725 730 735 Ala Val Gly Leu Gly Leu Val Leu Ala Tyr Arg Leu Ser Val Glu Ile 740 745 750 Tyr Asp Arg Arg Glu Tyr Ser Arg Phe Glu Lys Glu Gln Gln Gln Leu 755 760 765 Asn Trp Lys Gln Asp Se r Asn Pro Leu Tyr Lys Ser Ala Ile Thr Thr 770 775 780 Thr Ile Asn Pro Arg Phe Gln Glu Ala Asp Ser Pro Thr Leu 785 790 795

Claims (37)

  1. (a) 포유동물의 위장관으로부터 분리한 조직 또는 세포의 시험 샘플 및 (b) 대조군 샘플 내의 LY6 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 검출하는 것을 포함하며, 이때 대조군 샘플과 비교하여 시험 샘플에서의 LY6 핵산 또는 폴리펩티드의 더 높은 수준의 발현이 시험 샘플을 분리한 포유동물에 염증성 장 질환 (IBD)이 존재함을 나타내는 것인, 포유동물에서 염증성 장 질환 (IBD)을 검출하는데 필요한 정보를 제공하는 방법. (A) Test of the mammal which tissue or cell isolated from the gastrointestinal tract of animals, the sample and (b) includes detecting the level of expression of a gene encoding a LY6 polypeptide in a control sample, wherein the LY6 in a test sample compared to the control sample a method of providing the necessary information to detect the inflammatory bowel disease (IBD) in a mammal would indicate that a nucleic acid or a higher level of expression of the polypeptide of inflammatory bowel disease (IBD) is present in a mammal by separating the test sample .
  2. 제1항에 있어서, 시험 샘플의 조직 또는 세포가 포유동물의 결장으로부터 분리된 것인 방법. The method of claim 1, wherein the tissue or cells of the test sample will separate from the colon of a mammal.
  3. 제1항에 있어서, 대조군 샘플이 동일한 조직 기원 또는 유형의 정상적인 비-IBD 조직 또는 세포의 샘플, 또는 발현 수준이 평균된 동일한 조직 기원 또는 유형의 비-IBD 조직 또는 세포의 다중 샘플, 또는 동일한 종의 건강한 정상 조직의 다중 샘플에서의 유전자 발현을 나타내는 보편적 대조군인 방법. The method of claim 1, wherein the control sample, the same tissue origin or type of a normal non--IBD tissue or sample of cells, or the expression level is an average of the same tissue origin or type, of non--IBD multiple tissue or cell sample, or the same species the method of universal control representing gene expression in multiple samples of healthy normal tissue.
  4. 제1항에 있어서, 시험 샘플의 조직 또는 세포에 염증이 있는 것인 방법. The method of claim 1, wherein the one with the inflammation of the tissues or cells of the test sample.
  5. 제1항에 있어서, 시험 샘플의 조직 또는 세포에 염증이 없는 것인 방법. The method of claim 1, wherein, there are no inflamed tissues or cells of the test sample.
  6. 제1항에 있어서, 시험 또는 대조군 샘플 내의 LY6 발현 수준의 검출이 (a) 시험 샘플을 LY6 폴리펩티드 또는 이의 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 특이적으로 결합하는 검출가능 제제와 접촉시키는 단계; In the step of contacting a test or detection of (a) a test sample of LY6 expression level in the control sample with the detectable agent that specifically binds to a polynucleotide encoding a LY6 polypeptide or fragment thereof in one of the preceding claims; (b) 대조군 샘플을 검출가능 제제와 접촉시키는 단계; (B) the step of detecting a control sample can be contacted with agents; 및 (c) 검출가능 제제와 시험 샘플 및 대조군 샘플의 폴리뉴클레오티드 간의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하며, 이때 대조군 샘플과 비교하여 시험 샘플에서의 더 많은 복합체 형성이 포유동물에 IBD가 존재함을 나타내는 것인 방법. And (c) detection from, comprising the step of detecting the formation of a complex between a polynucleotide of the preparation and a test sample and a control sample, wherein a more complex formation in the test sample compared to the control sample should IBD is present in a mammal the method represents a.
  7. 제6항에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 서열 8, 9, 1, 3, 4, 6의 핵산 서열, 또는 서열 8, 9, 1, 3, 4, 6의 15개 이상의 인접한 뉴클레오티드를 포함하는 이의 단편을 포함하는 것인 방법. The method of claim 6, wherein the polynucleotide is SEQ ID NO: 8,9, 1,3, 4,6 nucleic acid sequence, or SEQ ID NO: 8,9, 1,3, 4,6 fragment thereof comprising 15 or more contiguous nucleotides of the the method comprises.
  8. 제6항에 있어서, 시험 샘플의 조직 또는 세포가 포유동물의 결장으로부터 분리된 것인 방법. The method of claim 6 wherein the tissue or cells of the test sample will separate from the colon of a mammal.
  9. 제8항에 있어서, 대조군 샘플이 동일한 조직 기원 또는 유형의 정상적인 비-IBD 조직 또는 세포의 샘플, 또는 발현 수준이 평균된 동일한 조직 기원 또는 유형의 비-IBD 조직 또는 세포의 다중 샘플, 또는 동일한 종의 건강한 정상 조직의 다중 샘플에서의 유전자 발현을 나타내는 보편적 대조군인 방법. The method of claim 8, wherein the control sample, the same tissue origin or type of a normal non--IBD tissue or sample of cells, or the expression level is an average of the same tissue origin or type, of non--IBD multiple tissue or cell sample, or the same species the method of universal control representing gene expression in multiple samples of healthy normal tissue.
  10. 제9항에 있어서, 시험 샘플의 조직 또는 세포에 염증이 있는 것인 방법. 10. The method of claim 9, wherein the one with the inflammation of the tissues or cells of the test sample.
  11. 제9항에 있어서, 시험 샘플의 조직 또는 세포에 염증이 없는 것인 방법. 10. The method of claim 9, wherein, there are no inflamed tissues or cells of the test sample.
  12. 제6항에 있어서, 검출가능 제제가 서열 8, 9, 1, 3, 4, 6을 갖는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체에 혼성화되는 제2 폴리뉴클레오티드인 방법. The method of claim 6 wherein the detectably method of preparation is SEQ ID NO: 8, 9, 1, 3, 4, a second polynucleotide that hybridizes to a polynucleotide or a complement thereof having 6.
  13. 제12항에 있어서, 제2 폴리뉴클레오티드가 검출가능한 표지를 포함하거나 또는 고체 지지체에 부착된 것인 방법. 13. The method of claim 12, wherein the second polynucleotide is one that contains a detectable label or immobilized on a solid support.
  14. 제13항에 있어서, 검출가능한 표지가 직접적으로 검출가능한 것인 방법. The method of claim 13, wherein the detectable label is a method that can directly detected.
  15. 제13항에 있어서, 검출가능한 표지가 간접적으로 검출가능한 것인 방법. The method of claim 13, wherein the detectable label is one possible method of indirectly detected.
  16. 제13항에 있어서, 검출가능한 표지가 형광 표지인 방법. The method of claim 13, wherein the detectable label is a fluorescent label method.
  17. 제6항에 있어서, 제자리(in situ) 혼성화 분석법인 방법. 7. The method of claim 6, in place (in situ) The method of hybridization assays.
  18. 제6항에 있어서, 실시간 중합효소 연쇄 반응 (RT-PCR) 분석법인 방법. The method of claim 6, wherein the real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) assay method.
  19. 제1항에 있어서, 시험 또는 대조군 샘플 내의 LY6 발현 수준의 검출이 (a) 시험 샘플을 LY6 폴리펩티드 또는 이의 단편에 특이적으로 결합하는 검출가능 제제와 접촉시키는 단계; In the step of contacting a test or detection of (a) a test sample of LY6 expression level in the control sample with the detectable agent that specifically binds to a LY6 polypeptide or fragment thereof in one of the preceding claims; (b) 대조군 샘플을 검출가능 제제와 접촉시키는 단계; (B) the step of detecting a control sample can be contacted with agents; 및 (c) 검출가능 제제와 시험 샘플 및 대조군 샘플의 폴리펩티드 간의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하며, 이때 대조군 샘플과 비교하여 시험 샘플에서의 더 많은 복합체 형성이 포유동물에 IBD가 존재함을 나타내는 것인 방법. And (c) detection from, comprising the step of detecting the formation of a pharmaceutical composition and the test sample, and between the control sample polypeptide complex, wherein that a more complex formation in the test sample compared to the control sample IBD is present in a mammal the method represents.
  20. 제19항에 있어서, LY6 폴리펩티드가 서열 10, 2, 5, 7, 또는 서열 10, 2, 5, 또는 7의 10개 이상의 인접 아미노산을 포함하는 이의 단편을 포함하는 것인 방법. 20. The method of claim 19, the method LY6 polypeptide comprises a fragment thereof, comprising a contiguous amino acids of more than 10 of SEQ ID NO: 10, 2, 5, 7, or SEQ ID NO: 10, 2, 5, or 7.
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  22. 제19항에 있어서, 시험 샘플의 조직 또는 세포가 포유동물의 결장으로부터 분리된 것인 방법. 20. The method of claim 19, wherein the tissue or cells of the test sample will separate from the colon of a mammal.
  23. 제6항 또는 제19항에 있어서, 시험 샘플의 조직 또는 세포에 염증이 있는 것인 방법. The method of claim 6 or claim 19, wherein the one with the inflammation of the tissues or cells of the test sample.
  24. 제6항 또는 제19항에 있어서, 시험 샘플의 조직 또는 세포에 염증이 없는 것인 방법. 7. The method of claim 6 or claim 19, wherein, there are no inflamed tissues or cells of the test sample.
  25. 제19항에 있어서, 검출가능 제제가 항체 또는 이의 항원-결합 단편인 방법. The method of claim 19, wherein the detectable agent is an antibody or an antigen-binding fragment manner.
  26. 제25항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 검출가능한 표지를 포함하는 것인 방법. 26. The method of claim 25, wherein the antibody or an antigen-method comprises a detectable label capable of binding fragments.
  27. 제26항에 있어서, 검출가능한 표지가 직접적으로 검출가능한 것인 방법. 27. The method of claim 26 wherein the detectable label is a method that can directly detected.
  28. 제26항에 있어서, 검출가능한 표지가 간접적으로 검출가능한 것인 방법. 27. The method of claim 26 wherein the detectable label is one possible method of indirectly detected.
  29. 제26항에 있어서, 검출가능한 표지가 형광 표지 또는 방사성표지인 방법. 27. The method of claim 26 wherein the detectable label is a fluorescent labeling method, or radioactive labels.
  30. 제1항, 제6항 및 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 또는 세포의 시험 샘플이 IBD를 앓는 것으로 추측되는 포유동물로부터 분리된 것인 방법. The method of claim 1, claim 6 and claim 19 according to any one of claims, wherein the test sample of tissue or cells being detached from the mammal, probably suffering from IBD.
  31. 제1항, 제6항 및 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 조직 또는 세포의 시험 샘플이 궤양성 대장염 (UC)을 앓는 것으로 추측되는 포유동물로부터 분리된 것인 방법. The method of claim 1, claim 6 and claim 19 according to any one of claims, wherein the test sample of tissue or cell UC will separate from the mammal, probably suffering from (UC).
  32. 제1항, 제6항 및 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물로부터 분리된 조직 또는 세포를 치료제와 접촉시키며, 이때 LY6 발현 수준이 포유동물로부터 분리된 조직 또는 세포에서의 치료제에 대한 응답의 존재 또는 부재를 나타내는 것인 방법. Of claim 1, claim 6 and claim 19 according to any one of items, sikimyeo contacting a tissue or cells isolated from a mammal with a therapeutic agent, wherein the LY6 expression levels are for the therapeutic agent in the tissue or cells isolated from a mammal the method of indicating the presence or absence of a response.
  33. 제1항, 제6항 및 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물로부터 분리된 조직 또는 세포를 치료제와 접촉시키며, 이때 검출은 2차 또는 후속 검출이고, LY6 발현 수준이 포유동물로부터 분리된 조직 또는 세포에서의 치료제에 대한 응답의 존재 또는 부재를 나타내는 것인 방법. The method according to any one of claim 1, claim 6 and claim 19, sikimyeo contacting a tissue or cells isolated from a mammal with a therapeutic agent, wherein the detecting is a second or subsequent detecting, and separating the LY6 expression levels from the mammal the method of indicating the tissue or the presence or absence of a response to the therapeutic agent in the cell.
  34. 제1항, 제6항 및 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 시험 샘플에서의 LY6 발현의 증가가 대조군 샘플에서보다 1.5배 이상 더 큰 것인 방법. The method of claim 1, claim 6 and claim 19 according to any one of items, that the increase in LY6 expression in the test sample was greater than 1.5 times than in the control sample.
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