KR101437605B1 - 형질 전환된 유채를 제조하는 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 (a) 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자를 Vicillin 프로모터와 Octopain 터미네이터 사이에 삽입하여 Pvic-McD6DES-Tocs 카세트를 구성하고, 상기 카세트를 형질전환 운반체에 클로닝 한 뒤 숙주 미생물에 도입하는 단계 및 (b) 상기 숙주 미생물을 유채에 감염시켜 형질 전환 시키는 단계를 포함하는 감마-리놀렌산을 다량 함유하는 형질 전환 유채를 제조하는 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 외래 유전자를 포함하는 벡터가 도입되어 감마-리놀렌산이 생산되는 형질 전환된 유채의 제조 방법에 관한 것이다.
리놀레산과 감마-리놀렌산은 하루에 일정량을 섭취해야 하는 필수지방산이다. 감마리놀렌산은 사람의 체내에서는 합성되지 않아 외부의 음식으로부터 섭취해야 하는데 현재 모유와 달맞이꽃 종자유에서만 만들어지는 것으로 알려져 있다. 또한 아토피성피부염 증상을 완화시키는데 달맞이 꽃 종자유가 효과 있다는 임상 결과가 보고되었는데, 아토피성 피부염을 앓고 있는 환자의 경우 감마-리놀렌산이 부족하여 감마-리놀렌산 대사물이 감소한 것으로 밝혀졌다.
감마-리놀렌산은 프로스타글란딘의 생체 내 합성에 없어서는 안 될 필수적인 물질이며, 프로스타글란딘은 혈압, 혈당, 혈중 콜레스테롤의 수치를 낮추는데 효과가 있음은 이미 노벨 생리의학상을 수상한 박사들에 의해 1982년에 증명되었다. 즉, 감마-리놀렌산은 인체 내에서 식물유 성분의 필수 지방산인 리놀레산으로부터 합성되어 프로스타글란딘의 원료가 되는 것이다. 따라서, 감마-리놀렌산이 부족하면 리놀레산→감마-리놀렌산→프로스타글란딘의 흐름이 원활하게 이루어지지 않게 되고, 그 결과 혈압이나 콜레스테롤의 수치가 올라가고, 천식 증상 등의 질환이 나타날 수 있다.
오랫동안 감마-리놀렌산의 주요 공급원으로 식물성인 달맞이꽃 종자유가 사용되었는데 전체 지방산 중에서 감마-리놀렌산을 9~15% 정도 함유하고 있지만 식물체로서의 재배기간과 정제 등 기술적인 한계를 극복하지 못하고 있을 뿐만 아니라 생산에 소요되는 시간 등의 제한적인 요소 때문에 산업화되고 있지 못하는 실정이다(Hiruta, O., Kamisaka, Y., Yokochi, T., Futamura, T., Takebe, H. and Satoh, A. et al. 1996. Gamma-linoleic acid production by a low temperature-resistant mutant of Mortierella ramanniana . J. Fermen. Bioeng. 82: 119-123.). 따라서 영국에서 1993년부터 Mucor circinelloides 균주를 이용한 감마-리놀렌산의 생산연구가 시작된 이래 일본 연구자들에 의해서 Mortierella ramanniana 돌연변이체를 활용한 세포배양방법으로 성공적인 연구결과를 발표한바 있다(Hiruta et al., 1996). 한국특허등록 제0316068호에는 시아노박테리아(Cyanobacteria) 유래 델타-6 불포화효소 유전자를 이용하여 감마-리놀렌산 함량이 증가 된 식물체의 제조방법이 개시되어 있으며, 한국특허등록 제0606612호에는 녹차 어린잎 유래 델타-6 불포화효소 유전자를 이용한 형질 전환체의 제조방법이 개시되어 있다.
이에 본 발명은 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자를 포함하는 감마-리놀렌산을 다량 함유한 형질 전환된 유채를 제조하는 방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 (a) 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자를 Vicillin 프로모터와 Octopain 터미네이터 사이에 삽입하여 Pvic-McD6DES-Tocs 카세트를 구성하고, 상기 카세트를 형질전환 운반체에 클로닝 한 뒤 숙주 미생물에 도입하는 단계 및 (b) 상기 숙주 미생물을 유채에 감염시켜 형질 전환 시키는 단계를 포함하는 감마-리놀렌산을 함유하는 형질 전환 유채를 제조하는 방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 제조 방법에 따라 제조된 감마-리놀렌산을 함유하는 유채, 상기 제조된 유채의 종자, 종실 또는 이의 자손을 제공한다.
본 발명은 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자를 포함하는 형질 전환된 유채로부터 야생형 유채에서는 생산되지 않는 감마-리놀렌산을 함유한 유채, 상기 제조된 유채의 종자, 종실 또는 이의 자손을 생산할 수 있다.
도 1은 Pvic-McD6DES-Tocs 유전자 카세트 제작 및 확인을 나타낸다.
도 2는 Pvic-McD6DES-Tocs 유전자 카세트를 형질전환 운반체 내 클로닝 하는 것을 나타낸다.
도 3은 McD6DES1, McD6DES2 유전자로 형질 전환된 유채를 나타낸다.
도 4는 PCR에 의한 McD6DES1, McD6DES2 및 McD6DES3 유전자 형질 전환체 확인을 나타낸다.
도 5는 McD6DES1 형질 전환된 유채 8번 개체에 대한 지방산의 조성에 대한 분석 크로마토그램을 나타낸다.
도 2는 Pvic-McD6DES-Tocs 유전자 카세트를 형질전환 운반체 내 클로닝 하는 것을 나타낸다.
도 3은 McD6DES1, McD6DES2 유전자로 형질 전환된 유채를 나타낸다.
도 4는 PCR에 의한 McD6DES1, McD6DES2 및 McD6DES3 유전자 형질 전환체 확인을 나타낸다.
도 5는 McD6DES1 형질 전환된 유채 8번 개체에 대한 지방산의 조성에 대한 분석 크로마토그램을 나타낸다.
본 발명은 감마-리놀렌산을 다량 함유하는 형질 전환된 유채(Brassica napus L.)를 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 용어 “다량 함유”란 유채와 비교하여 형질 전환된 유채 식물의 전체 지방산 조성 중 감마-리놀렌산을 3 내지 10% 함유하는 것을 의미할 수 있다.
본 발명에 있어서 감마-리놀렌산을 다량 함유하는 형질 전환된 유채는 (a) 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자를 Vicillin 프로모터와 Octopain 터미네이터 사이에 삽입하여 Pvic-McD6DES-Tocs 카세트를 구성하고, 상기 카세트를 형질전환 운반체에 클로닝한 뒤 숙주 미생물에 도입하는 단계 및 (b) 상기 숙주 미생물을 유채에 감염시켜 형질 전환 시키는 단계를 포함할 수 있다.
상기 '프로모터'란 특정한 숙주 세포에서 작동 가능하게 연결된 핵산 서열의 발현을 조절하는 DNA 서열을 의미하며, '작동 가능하게 연결된다(operably linked)'는 것은 하나의 핵산 단편이 다른 핵산 단편과 결합되어 그의 기능 또는 발현이 다른 핵산 단편에 의해 영향을 받는 것을 말한다. 아울러, 전사를 조절하기 위한 임의의 오퍼레이터 서열, 적합한 mRNA 리보좀 결합부위를 코딩하는 서열 및 전사 및 해독의 종결을 조절하는 서열을 추가로 포함할 수 있다.
상기 (a) 단계의 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자는 서열번호 1의 핵산서열일 수 있다.
본 발명의 상기 유전자는 서열번호 1의 핵산서열 전체 또는 그것의 일부로 이루어지며, 오픈리딩 프레임(ORF)을 포함할 수 있고, 오픈리딩 프레임(ORF) 또는 종결신호 또는 ORF로부터 떨어져 있는 다른 3' 조절 영역 같은 3'-조절 영역의 기능성 또는 활성을 방해하지 않고 하나 또는 그 이상의 뉴클레오티드 치환(들), 삽입(들) 및/또는 결실(들)에 의하여 변형될 수 있다. 더욱이 서열의 변형에 의하여 프로모터 활성은 증가될 수 있거나, 또는 보다 활성이 큰 프로모터, 심지어 이종 생물체의 프로모터로 완전히 대체되는 것도 가능할 수 있다. 식물체에서의 발현을 위하여 상기 언급된 것과 같이 핵산분자는 올바른 시점에 요구되는 공간적 발현 양상으로 유전자를 발현하는 적절한 프로모터에 작동 가능하게 연결되거나 프로모터를 포함해야 한다.
본 발명의 상기 유전자에 의해 번역되는 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 단백질은 리놀레산(18:2)(LA)을 기질로 하여, 감마-리놀렌산(18:3)(GLA) 산물을 생성하는 효소로서, 막-결합 부위와 지방산의 불포화를 촉매하는 활성 부위를 갖는다. 또한, 아미노산 서열 분석 결과 참다랑어 유래 델타-6 불포화효소와 79%, 날새기 유래 델타-6 불포화효소와 80%의 상동성을 나타낸다.
본 발명에서의 갯장어(Muraenesox cinereus)는 뱀장어목 갯장어과에 속하는 물고기로 깊이 20~100 m 정도의 모래 바닥이나 암초 근처에서 서식한다. 다른 장어류와 같이 영양소가 풍부한 보양음식으로 알려져 있다. 본 발명에서는 이에 제한 되지 않으나, 갯장어의 간일 수 있다.
본 발명에 있어서 상기 형질 전환된 유채는 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자, Vicillin 프로모터, Octopain 터미네이터를 포함하는 재조합 벡터로 형질 전환된 유채일 수 있다. 또한 상기 형질 전환된 유채는 형질전환 운반체로 형질 전환된 숙주 미생물로부터 감염되어 형질 전환된 유채일 수 있다.
상기 (a) 단계의 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자를 HindIII 제한효소로 처리하여 Vicillin 프로모터와 Octopain 터미네이터 사이에 삽입할 수 있다.
따라서 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자를 HindIII 제한효소로 처리하여 Vicillin 프로모터와 Octopain 터미네이터 사이에 삽입하여 Pvic-McD6DES-Tocs 카세트를 구성할 수 있다.
상기 Vicillin 프로모터는 종자특이발현 프로모터일 수 있다.
또한 본 발명의 상기 (a) 단계의 Pvic-McD6DES-Tocs 카세트를 XbalI 제한효소 부위로 절단하여 형질전환 운반체인 pCAMBIA 3300에 클로닝할 수 있다.
본 발명에 있어서 상기 (a) 단계의 숙주 미생물는 이에 제한되지 않으나, 아그로박테리움일 수 있다.
본 발명의 구체예에서, 형질전환 운반체는 아그로박테리움과 함께 유채 식물체에 도입될 수 있으며, 아그로박테리움에서 복제, 발현 및 선발이 가능하고, 유체 식물체에서 발현 및 선발이 가능하도록 구성된 어떠한 운반체도 사용 가능하다.
또한 본 발명의 구체예에 있어서, 상기 형질전환 운반체는 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자 배열의 양 말단에 HindIII 제한효소 절단 부위를 붙여 PCR 한 후 pGEM의 Vicillin 프로모터와 Octopain 터미네이터 사이에 삽입할 수 있다. 상기 Vicillin 프로모터와 Octopain 터미네이터 사이에 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자를 삽입하여 연결된 PVic-McD6DES-Tocs 카세트를 XbaI 제한효소 부위로 절단하여 pCAMBIA 3300 운반체에 클로닝하여 아그로박테리움 LBA4404에 도입할 수 있다.
상기 형질전환 운반체 pCAMBIA 3300을 아그로박테리움에 통상의 방법으로 도입한 후, 운반체 pCAMBIA 3300이 도입된 아그로박테리움을 선발하는 것에 의해 유채를 형질전환시킨다. 여기서 사용된 아그로박테리움 균주는 당분야에서 통상적으로 사용되고 있는 것을 적의 선정하여 사용할 수 있으나, 본 발명에서는 식물시료에 침투하여 외래 유전자를 전달하는데 필요한 병원성이 크다고 알려진 아그로박테리움 투메파시엔 LBA4404(Agrobacterium tumefaciens LBA4404)를 사용하였다. 따라서, 본 발명의 일 실시예에서는 본 발명의 재조합 벡터를 아그로박테리움 투메파시언스 LBA4404에 형질 전환시킨 다음 상기 형질 전환된 아그로박테리움에 의해 식물 세포 내로 본 발명의 유전자가 도입되도록 하였다.
또한 본 발명은 상기 PVic-McD6DES-Tocs 카세트를 포함하는 재조합 운반체가 도입된 아그로박테리움-형질전환 방법으로 제조된 감마-리놀렌산이 다량 함유한 형질 전환된 유채를 제공한다.
또한 본 발명은 상기 방법으로 제조된 감마-리놀렌산이 다량 함유하는 유채, 상기 제조된 유채의 종자, 종실 또는 이의 자손을 제공한다.
일 실시예에서 본 발명에 따른 감마-리놀렌산이 다량 함유하는 형질 전환된 유채는 상기 유채 식물 전체 지방산 조성 중 5.7%, 7.3%의 감마-리놀렌산을 생산하였다. 상기 유채 식물 전체 지방산 조성 중 5.7%, 7.3%의 감마-리놀렌산은 감마-리놀렌산 10 내지 20 mg/g과 상응하는 생산량일 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
<실시예>
실시예
1. 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자(
McD6DES
) 형질전환 운반체 제작
McD6DES 유전자 배열의 양 말단에 HindIII 제한효소 절단 부위를 붙여 PCR 한 후 Vicillin 프로모터와 Octopain 터미네이터 사이에 삽입한 뒤(도 1), 연결된 PVic-McD6DES-Tocs 카세트를 XbaI 제한효소 부위로 절단하여 pCAMBIA 3300 운반체에 클로닝(도 2)하여 아그로박테리움 LBA4404에 도입하였다.
실시예
2. 유채의 형질전환
농촌진흥청 작물과학원의 바이오에너지 작물 센터로부터 분양 받은 영산 유채를 MS0에 파종하여 1주일 키운 후 배축(hypocotyl)을 절단하여 형질전환 운반체가 도입된 아그로박테리움을 A600이 0.7 되도록 MS0 배지로 희석시킨 아세토시링곤(acetosyringone)이 10 mM되도록 첨가한 다음 30분 동안 감염시킨 후 아세토시링곤을 함유하는 MS0 배지에서 2일 동안 공동배양 하고, 카베니실린(carbenicillin)과 10 ppm의 PPT가 포함되어 있는 배지에서 재분화를 유도하며 2주마다 계대 배양하였다(도 3).
실시예
3. 형질전환 유채의 확인
형질 전환된 유채는 바스타(basta)저항성 유전자를 가지고 있기 때문에 bar-strip 테스트에 의하여 2개의 밴드 중 하단에 나타나는 밴드를 확인함으로써 형질 전환된 유채를 1차 선발하였다. Bar-strip을 1차 선발했을 때 McD6DES1 유전자(1335 bp) 형질전환체 44개체, McD6DES2 유전자(1320 bp) 형질전환체 48개체, McD6DES3 유전자(1209 bp) 형질전환체 42개체를 확인하였고, 1차 선발된 각 형질 전환된 유채에 대하여 genomic DNA를 분리하여 PCR을 한 결과 McD6DES1, McD6DES2 및 McD6DES3으로 형질 전환된 유채를 각각 35, 35, 38개체를 확인, 선발하여(도 4) T1종실을 확보하였다. T1 형질 전환된 유채를 파종하여 본잎이 2개가 전개되었을 때 바스타를 처리하여 T2 종실을 확보하였다.
실시예
4. 형질 전환된 유채
T2
종실에
대한 지방산 조성 분석
형질 전환된 유채 McD6DES1, McD6DES2 및 McD6DES3 개체의 T2종실에 대하여 지방산을 분석하였다. McDD6DES2와 McD6DES3 형질 전환된 유채 종실에서는 감마-리놀렌산이 생성되지 않았으나, McDD6DES1 형질전환유채의 5번개체에서는 5.7%, 8번개체의 경우 7.3%의 감마-리놀렌산이 생성됨을 확인하였다(도 5, 표 1).
Sample | Palmitic acid (C16 : 0) | Palmitoleic acid (C16 : 1) | Stearic acid ( C18 : 0) |
Oleic
acid
( C18 : 1, n9 ) |
Linoleic acid (C18 : 2, n6 ) | γ-Linolenic acid (C18: 3, n6 ) | α-Linolenic acid (C18 :3, n3 ) |
Total
fatty
acid
( mg /g) |
영산유채 | 5.9 | 0.4 | 0.0 | 61.9 | 23.0 | 0.0 | 6.7 | 222.3 |
MC1 -1 | 14.02 | 1.02 | 2.04 | 133.12 | 44.57 | 5.02 | 11.48 | 211.3 |
MC1 -2 | 16.02 | 1.12 | 2.06 | 162.31 | 50.69 | 5.22 | 13.85 | 251.3 |
MC1 -3 | 13.94 | 0.98 | 5.38 | 141.90 | 42.51 | 5.61 | 11.34 | 221.7 |
MC1 -4 | 13.85 | 1.16 | 4.10 | 120.66 | 42.16 | 1.32 | 10.05 | 193.3 |
MC1 -5 | 14.65 | 1.06 | 3.15 | 144.14 | 42.07 | 13.00 | 10.55 | 228.6 |
MC1 -6 | 14.54 | 1.13 | 136.98 | 41.50 | 6.83 | 9.96 | 211.0 | |
MC1 -7 | 16.06 | 1.39 | 0.58 | 146.40 | 50.78 | 3.15 | 12.73 | 231.1 |
MC1 -8 | 14.26 | 1.09 | 121.06 | 36.13 | 14.70 | 9.08 | 196.3 | |
MC1 -9 | 15.50 | 1.22 | 132.24 | 58.93 | 3.98 | 17.85 | 229.7 | |
MC1 -10 | 15.70 | 1.24 | 0.53 | 133.18 | 52.39 | 3.87 | 15.57 | 222.5 |
MC1 -11 | 15.35 | 1.09 | 193.88 | 55.30 | 4.40 | 19.10 | 289.1 | |
MC1 -12 | 15.61 | 1.32 | 0.38 | 132.36 | 52.54 | 5.60 | 13.58 | 221.4 |
MC1 -13 | 14.27 | 1.04 | 137.78 | 46.20 | 2.68 | 12.46 | 214.4 | |
MC1 -14 | 14.95 | 1.07 | 137.23 | 50.97 | 3.32 | 12.85 | 220.4 | |
MC1 -15 | 16.67 | 1.15 | 160.44 | 53.51 | 3.12 | 14.40 | 249.3 | |
MC1 -16 | 15.97 | 1.26 | 129.77 | 50.90 | 3.42 | 13.53 | 214.9 | |
MC1 -17 | 15.12 | 1.06 | 161.82 | 54.86 | 1.58 | 16.22 | 250.7 | |
MC1 -18 | 14.58 | 1.04 | 159.31 | 49.77 | 0.13 | 14.05 | 238.9 | |
MC1 -19 | 13.17 | 0.89 | 134.78 | 40.00 | 3.83 | 12.30 | 205.0 | |
MC1 -20 | 14.78 | 1.09 | 158.52 | 48.24 | 3.31 | 13.08 | 239.0 | |
MC1 -21 | 10.67 | 0.82 | 1.07 | 92.76 | 33.93 | 4.79 | 7.61 | 151.7 |
MC1 -22 | 16.83 | 1.35 | 0.28 | 158.56 | 59.03 | 10.10 | 246.1 | |
MC1 -23 | 17.20 | 1.20 | 109.00 | 61.61 | 3.10 | 12.81 | 204.9 | |
MC1 -24 | 16.03 | 1.14 | 156.07 | 45.49 | 2.46 | 10.98 | 232.2 | |
MC1 -25 | 17.35 | 1.26 | 22.72 | 62.53 | 3.69 | 1.93 | 109.5 | |
MC1 -26 | 17.40 | 1.29 | 0.04 | 14.35 | 58.03 | 6.90 | 9.98 | 108.0 |
MC1 -27 | 15.58 | 1.10 | 0.17 | 159.97 | 48.05 | 5.24 | 11.17 | 241.3 |
MC1 -28 | 17.75 | 1.19 | 0.46 | 102.39 | 55.96 | 6.57 | 9.95 | 194.3 |
MC1 -29 | 15.69 | 1.14 | 85.45 | 57.66 | 3.29 | 15.96 | 179.2 | |
MC1 -30 | 16.11 | 1.16 | 14.13 | 55.67 | 2.80 | 11.46 | 101.3 |
<110> The Foundation of Agri. Tech. Commercialization & Transfer
<120> Method for producing a transgenic Brassica napus
<160> 1
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 1335
<212> DNA
<213> Delta-6 Desaturase Gene from Muraenesox cinereus
<400> 1
atggggggcg gaggtcaaca gacggagtcg gaatcgagct gtgggcgagg aggcggcgtt 60
ttcacctggg aagaggtgca gcggcattcc cacaaggggg accagtggtt ggtaatcgac 120
agaaaggtgt gcaacatcac cgactgggtg aaaagacatc caggcggcgc ccgggtcatc 180
agccactatg ccggggagga cgccacggat gcttttgctg cattccatcc agagcctgac 240
tttgtgcgca agtttctgaa gccactgctg attggtgagc ttgcaacctc tgagcccaac 300
caggaccggg acaaaaattc tgtgttgaca caggctttcc gcgaactgcg cgaggaggta 360
gagagggagg gcctcttcag gactcagccg ctgttctttt gcctccacct ggggcatatt 420
cttctcctgg aggccctggc ttacttgctg atttgggtgt atggaacagg ctggctccag 480
accctgctgt gtgcagtaat actggccacc tcacagtctc aggccggatg gctccagcat 540
gacttcggcc acctttccgt cttcaaaaag tcccgctgga accacctgct gcacaagttt 600
gtcatcggac accttaaggg tgcttcggct aactggtgga accatcggca tttccagcac 660
catgcaaaac ccaacatctt cagtaaagac cctgatgtca acatgctcca cacctttgtg 720
ctaggaaaga cccagccagt ggagtatgga ataaagaaga tcaagtacat gccttacaac 780
caccagcacc agtacttctt cctcattgga cctcctatgc ttatcccagt gtatttccac 840
atccagatca tgcaaaccat gttctttcga cgtgattggg tggacctcgt ctggtcaatg 900
agctactacc tgcgctactt cacctgctac acgccctttt acggagtttt tggagctgtg 960
gcgctcatca gcttcgttag gtttctggag agccactggt ttgtgtgggt gacccaaatg 1020
aaccacattc ccatggacat tgaccacgag aagcacgagg attggctgac catgcagctg 1080
aaggccacct gcaacattga gcagtcattc ttcaacgact ggttcagcgg acacctcaac 1140
ttccaaatcg aacaccatct gtttcccaca atgccccggc acaactactg ccgcgtggcc 1200
cctctggtgc gcaaggtgtg tgagaagcat ggcgtcacct accaggagaa gaccctgtgg 1260
agcggcttca gagacgtggt cagctctcta cgggagtctg gagatctgtg gctggatgcg 1320
tatctccata aataa 1335
Claims (7)
- (a) 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자를 Vicillin 프로모터와 Octopain 터미네이터 사이에 삽입하여 Pvic-McD6DES-Tocs 카세트를 구성하고, 상기 카세트를 형질전환 운반체에 클로닝한 뒤 숙주 미생물에 도입하는 단계; 및
(b) 상기 숙주 미생물을 유채에 감염시켜 형질 전환 시키는 단계를 포함하는 감마-리놀렌산을 함유하는 형질 전환 유채를 제조하는 방법. - 제1항에 있어서
상기 (a) 단계의 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자는 서열번호 1의 핵산서열인 것을 특징으로 하는 감마-리놀렌산을 함유하는 형질 전환 유채를 제조하는 방법. - 제1항에 있어서
상기 (a) 단계의 갯장어 유래 델타-6 불포화효소 유전자를 HindIII 제한효소로 처리하여 Vicillin 프로모터와 Octopain 터미네이터 사이에 삽입하는 것을 특징으로 하는 감마-리놀렌산을 함유하는 형질 전환 유채를 제조하는 방법. - 제1항에 있어서,
상기 (a) 단계의 Pvic-McD6DES-Tocs 카세트를 XbalI 제한효소 부위로 절단하여 형질전환 운반체인 pCAMBIA 3300에 클로닝하는 것을 특징으로 하는 감마-리놀렌산을 함유하는 형질 전환 유채를 제조하는 방법. - 제1항에 있어서,
상기 (a) 단계의 숙주 미생물는 아그로박테리움인 것을 특징으로 하는 형질 전환된 유채를 제조하는 방법. - 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 방법으로 제조된 감마-리놀렌산을 함유하는 유채.
- 제 6항의 유채의 종자 또는 종실
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JP4422211B2 (ja) * | 1994-12-30 | 2010-02-24 | バイエル クロップサイエンス ソシエテ アノニム | △6−デサチュラーゼによるγリノレン酸の産生 |
KR20110063923A (ko) * | 2009-12-07 | 2011-06-15 | 대한민국(농촌진흥청장) | 돔 유래의 델타-6 불포화효소 유전자 및 이의 용도 |
-
2012
- 2012-06-29 KR KR1020120070546A patent/KR101437605B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (2)
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