KR101323897B1 - Novel Nannochloris sp. capable high temperature growth and use thereof - Google Patents

Novel Nannochloris sp. capable high temperature growth and use thereof Download PDF

Info

Publication number
KR101323897B1
KR101323897B1 KR1020110113876A KR20110113876A KR101323897B1 KR 101323897 B1 KR101323897 B1 KR 101323897B1 KR 1020110113876 A KR1020110113876 A KR 1020110113876A KR 20110113876 A KR20110113876 A KR 20110113876A KR 101323897 B1 KR101323897 B1 KR 101323897B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
microalgae
rotifer
nannochloris
culture
kctc
Prior art date
Application number
KR1020110113876A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR20130048940A (en
Inventor
허성범
배진희
Original Assignee
부경대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 부경대학교 산학협력단 filed Critical 부경대학교 산학협력단
Priority to KR1020110113876A priority Critical patent/KR101323897B1/en
Publication of KR20130048940A publication Critical patent/KR20130048940A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR101323897B1 publication Critical patent/KR101323897B1/en

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12Unicellular algae; Culture media therefor
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23KFODDER
    • A23K10/00Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12Unicellular algae; Culture media therefor
    • C12N1/125Unicellular algae isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2523/00Culture process characterised by temperature
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/89Algae ; Processes using algae

Abstract

본 발명은 고온에서 성장 가능한 신균주인 나노클로리스 속 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 30℃~32℃의 고온에서 생장 가능한 로티퍼(Rotifer) 배양용 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류(일명, 'KMMCC-395'라고 함), 상기 미세조류 및 이의 배양액을 포함하는 로티퍼 사료용 조성물, 상기 로티퍼 사료용 조성물을 유효성분으로 포함하는 수산사료용 제제 및 상기 본 발명의 신규한 미세조류를 이용한 저온수기의 로티퍼 대량 배양방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 신규한 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류는 고온인 30℃~32℃의 조건 하에서도 다른 종래 미세조류에 비해 성장률이 월등히 우수하고 해수의 염분 조건 하에서도 성장 가능한 내염성을 가지고 있으며, 이를 먹이로 하여 배양한 로티퍼는 각종 생리활성 기능을 하는 아미노산과 필수지방산을 풍부히 함유하고 있어, 궁극적으로 로티퍼와 같은 플랑크톤의 배양과 이러한 플랑크톤을 먹이로 하는 어류의 양식 산업에 사료로서 매우 유용하게 사용할 수 있는 효과가 있다. The present invention is a nano-viable novel strain at a high temperature in keulroriseu and relates to a use thereof, more specifically from 30 ℃ ~ 32 ℃ high temperature growth possible rotifers (Rotifer) nano keulroriseu for culture in (Nannochloris in (hereinafter also referred to as 'KMMCC-395'), a composition for a rotifer feed comprising the microalgae and a culture thereof, a preparation for fish feed containing the composition for the rotifer feed as an active ingredient, The present invention relates to a method for mass culture of low temperature hand rotifer using new microalgae. The novel nanoclose family according to the present invention ( Nannochloris sp.) KCTC 11965BP Microalgae have remarkably better growth rate than other conventional microalgae even under the condition of high temperature of 30 ° C ~ 32 ° C and have salt resistance that can grow even under salt conditions of seawater. Contains a variety of physiologically active amino acids and essential fatty acids, and ultimately has the effect of being very useful as a feed for the cultivation of plankton such as rotifers and the fish industry that feeds on such plankton.

Description

고온에서 성장 가능한 신균주 나노클로리스 속 신균주 및 이의 용도{Novel Nannochloris sp. capable high temperature growth and use thereof}A novel strain capable of growth at high temperature in a nanocholorous strain and its use {Novel Nannochloris sp. capable high temperature growth and use thereof.

본 발명은 고온에서 성장 가능한 신균주 나노클로리스 속 및 이의 용도에 관한 것으로서, 고온에서도 대량배양이 용이하고 로티퍼의 먹이로 사용할 수 있는 신균주인 나노클로리스 속 KCTC 11965BP 미세조류, 이를 포함하는 로티퍼 사료용 조성물, 고수온기에 로티퍼를 배양하는 방법 및 수산사료용 제제에 관한 것이다.The present invention relates to a novel strain of nanochloor that can grow at high temperature and its use, and is a novel strain of nanochloa genus KCTC 11965BP which is easy to mass culture at high temperature and can be used as food for rotifers, and a composition for a rotifer feed containing the same , A method for culturing rotifers at high temperature and a preparation for fish feed.

수산생물이 자연계에서 먹이의 대상으로 삼는 살아 있는 동식물을 먹이생물이라 하는데, 해양미세조류는 천해양식 동물의 종묘 생산 시 중요한 먹이생물이 된다. 또한, 해양미세조류는 해양생태계의 1차 생산자로서 해양의 생물생산력을 좌우하는 역할을 한다. Marine living microbes are important food animals in the production of seed animals of marine animals. In addition, marine microalgae are the primary producers of marine ecosystems and play a role in the marine bio-productivity.

로티퍼(Rotifer)는 1960년대에 최초로 개발된 참돔 Pagrus major 치어의 먹이생물로서, 크기가 작고 운동성이 약한 특징이 있으며, 고밀도 배양이 가능하여 해산 어류의 인공 종묘 생산 시 가장 널리 이용되는 초기 동물성 먹이생물 중 하나이다(Fukusho K. 1989. Biology and mass production of the rotifer, Brachionus plicatilis. Int J Aqu Fish Technol 1, 232-240).Rotifers (Rotifer) is the snapper Pagrus first developed in the 1960s It is one of the earliest animal food organisms that are most widely used for the production of artificial seeds of marine fishes (Fukusho K. 1989. Biology and mass production of the rotifer, Brachionus plicatilis , Int J Aqu Fish Technol 1, 232-240).

이러한 로티퍼의 대량배양을 위한 먹이생물로 미세조류와 효모가 현재 이용되고 있는데, 미세조류의 경우 Nannochloropsis , Chlorella Nannochloris 가 사용되고 있고, 효모로는 빵효모인 Saccharomyces cerevisiae 와 해양효모인 Candida utilis 가 대표적이다.Microalgae and yeast are currently used as feedstuffs for the mass culture of these rotifers. In the case of microalgae , Nannochloropsis , Chlorella And Nannochloris As yeast, Saccharomyces cerevisiae , a bread yeast, and Candida , a marine yeast, utilis .

그러나 효모는 미세조류에 비해 보다 경제적이라는 점에서 사용하기 용이하지만, 로티퍼의 성장에 필요한 불포화지방산이 부족한 문제점이 있다(Watanabe T, et al. 1980. Relationship between dietary value of brine shrimp Artemia salina and their content of ω-yeast highly unsaturated fatty acids. Bull Jap Soc Sci Fish 46, 35-41). 따라서 이러한 문제점을 해결하기 위해 빵효모에 오징어유를 유화시킨 ω-yeast를 개발하였으나(Hirayama K and Funamoto H. 1983. Supplement effect of several nutrient on nutritive deficiency of baker's yeast for population growth of the rotifer Brachionus plicatilis. Nippon suisan Gakkaishi 49, 505-510), 이 역시 미세조류에 비해 영양가가 떨어지고 수질 오염을 발생시키는 문제점이 있다. However, since yeast is more economical than microalgae, it is easy to use, but there is a problem of insufficient unsaturated fatty acids required for growth of rotifers (Watanabe T, et al . 1980. Relationship between dietary values of brine shrimp Artemia salina and their content of ω-yeast highly unsaturated fatty acids. Bull Jap Soc Sci Fish 46, 35-41). To solve these problems, ω-yeast was prepared by emulsifying squid oil in baker's yeast (Hirayama K and Funamoto H. 1983. Supplement effect of several nutrients on nutritive deficiency of baker's yeast for population growth of the rotifer Brachionus plicatilis . Nippon suisan Gakkaishi 49, 505-510), which is also less nutritious than microalgae and causes water pollution.

따라서 대부분의 부화장에서는 로티퍼의 대량 배양을 위해 고비용이 든다는 단점에도 불구하고 여전히 살아 있는 미세조류를 선호하고 있다.Therefore, most hatcheries still prefer living microalgae despite the disadvantages of high cost for large-scale cultivation of rotifers.

로티퍼 배양을 위해 사용되는 미세조류들, 특히 Chlorella , Nannochloris , Eustigmatophyceae의 Nannochloropsis은 대량배양이 용이하고 단백질 및 고도불포화지방산의 함량이 높아 로티퍼의 배양에 적합하다. The microalgae used for the rotifer culture, especially Chlorella, Nannochloris, Nannochloropsis Eustigmatophyceae of mass culture is easy and suited to the culture of rotifers high content of protein and polyunsaturated fatty acids.

한편, 이러한 로티퍼의 배양에 사용되는 미세조류라도 30℃ 이상의 고수온기에는 갑자기 폐사하는 예가 많고, 10℃ 이하의 저수온기에는 성장이 매우 낮아, 특히 고수온기인 여름과 저수온기인 겨울에는 로티퍼의 대량배양에 많은 어려움이 따르고 있다(Fukusho K, et al. 1985. Food value of a rotifer, Brachionus plicatilis cultured with Tetraselmis tetrathele for larvae of a flounder Paralichthys olivaceus. Bull Natl Res Aquacult 7, 29-36; Hur SB 1991. The selection of optimum phytoplankton species for rotifer culture during cold and warm seasons their nutritional value for marine finfish larvae. In : Rotifer and Microalgae Culture Systems, Proceedings of a U.S. - Asia Workshop, Fulks W and Main K, eds. The Oceanic Institute . 163-173). On the other hand, even in the case of microalgae used for the cultivation of such rotifers, there are many cases where the temperature is suddenly dropped when the temperature is higher than 30 ° C, and the growth is very low at the temperature lower than 10 ° C. There are many difficulties (Fukusho K, et al . 1985. Food value of a rotifer, Brachionus plicatilis cultured with Tetraselmis tetrathele for a larvae of a flounder Paralichthys olivaceus . Bull Natl Res Aquacult 7, 29-36; Hur SB 1991. The selection of optimum phytoplankton species for rotifer culture during cold and warm seasons is their nutritional value for marine finfish larvae. In: Rotifer and Microalgae Culture Systems, Proceedings of a US-Asia Workshop, Fulks W and Main K, eds. The Oceanic Institute . 163-173).

따라서 고수온기와 저수온기에 생존률 및 대량배양이 용이하여 로티퍼의 배양에 적합한 신규한 미세조류의 개발이 필요한 실정이다. Therefore, it is necessary to develop new microalgae suitable for cultivation of rotifers, because survival rate and mass culture are easy in high temperature and low temperature.

이에 본 발명자들은 고수온기에 대량배양이 용이하고 로티퍼의 먹이생물로 적합한 신규한 미세조류인 나노클로리스 속(Nannochloris sp.)를 처음으로 분리 및 동정함으로써 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have completed the present invention by first isolating and identifying a new microalgae, Nannochloris sp., Which is suitable for large-scale culture in high temperature and suitable for feeding food of rotifers.

따라서 본 발명의 목적은 30℃~32℃의 고온에서 생장 가능한 로티퍼(Rotifer) 배양용 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류를 제공하는 것이다.It is therefore an object of the present invention can grow at a high temperature of 30 ℃ ~ 32 ℃ rotifers (Rotifer) in culture for nano keulroriseu (Nannochloris sp.) KCTC 11965BP to provide microalgae.

본 발명의 다른 목적은 본 발명에 따른 상기 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류 또는 이의 배양액을 포함하는 로티퍼(Rotifer) 사료용 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for producing the Nanochloris sp.) KCTC 11965BP microalgae or a culture thereof.

본 발명의 다른 목적은 본 발명에 따른 상기 로티퍼(Rotifer) 사료용 조성물을 유효성분으로 포함하는 수산사료용 제제를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a formulation for aquaculture feed comprising the composition for feed rotifer according to the present invention as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적은 본 발명에 따른 상기 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류를 먹이로 이용하여 고온수기인 7월~8월 동안 로티퍼(Rotifer)를 대량 배양하는 방법을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a method for producing the Nanochloris sp.) KCTC 11965BP A method for mass culturing rotifers during July to August at high temperatures using feed of microalgae.

또한, 본 발명의 다른 목적은 고수온기인 7~8월 동안 30℃~32℃의 온도에서 배양하는 단계를 포함하는 상기 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류를 대량 배양하는 방법을 제공하는 것이다. It is another object of the present invention due gosuon 7-8 the nano comprising the step of culturing at a temperature of 30 ℃ ~ 32 ℃ for the month in keulroriseu (Nannochloris sp.) KCTC 11965BP A method for mass culturing microalgae.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 30℃~32℃의 고온에서 생장 가능한 로티퍼(Rotifer) 배양용 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention can grow at a high temperature of 30 ℃ ~ 32 ℃ rotifers (Rotifer) in culture for nano keulroriseu (Nannochloris sp.) KCTC 11965BP Provides microalgae.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 로티퍼는 Brachionus plicatilis일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the rotifer Brachionus plicatilis can be.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 미세조류는 로티퍼의 성장에 필요한 아미노산 및 불포화지방산의 함량을 증가시켜 로티퍼의 성장을 촉진시킬 수 있다. In one embodiment of the present invention, the microalgae may increase the content of amino acids and unsaturated fatty acids necessary for growth of the rotifer, thereby promoting growth of the rotifer.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 미세조류는 염분이 15~35psu(practical salinity unit)인 조건에서 내염성을 가질 수 있다. In one embodiment of the present invention, the microalgae may have salt resistance at a salinity of 15 to 35 psu (practical salinity unit).

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 상기 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류 또는 이의 배양액을 포함하는 로티퍼(Rotifer) 사료용 조성물을 제공한다. In addition, the present invention relates to a method for producing the nanochloris sp.) KCTC 11965BP A composition for feeding rotifers comprising microalgae or a culture thereof.

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 상기 로티퍼(Rotifer) 사료용 조성물을 유효성분으로 포함하는 수산사료용 제제를 제공한다.In addition, the present invention provides a formulation for aquatic fish feed comprising the composition for rotifer feed according to the present invention as an active ingredient.

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 상기 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류를 먹이로 이용하여 고온수기인 7월~8월 동안 로티퍼(Rotifer)를 대량 배양하는 방법을 제공한다. In addition, the present invention relates to a method for producing the nanochloris sp.) KCTC 11965BP Provides a method for mass culturing rotifers during July to August at high temperatures, using microalgae as food.

또한, 본 발명은 고수온기인 7~8월 동안 30℃~32℃의 온도에서 배양하는 단계를 포함하는 상기 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류를 대량 배양하는 방법을 제공한다.The present invention also relates to a method for producing the nanocholorous plant, comprising culturing the plant at a temperature of 30 ° C to 32 ° C for 7 to 8 months, sp.) KCTC 11965BP Provides a method for mass culture of microalgae.

본 발명에 따른 신규한 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류는 고온인 30℃~32℃의 조건 하에서도 다른 종래 미세조류에 비해 성장률이 월등히 우수하고 해수의 염분 조건 하에서도 성장 가능한 내염성을 가지고 있으며, 이를 먹이로 하여 배양한 로티퍼는 각종 생리활성 기능을 하는 아미노산과 필수지방산을 풍부히 함유하고 있어, 궁극적으로 로티퍼와 같은 동물플랑크톤의 배양과 이러한 동물플랑크톤을 먹이로 하는 어패류의 양식 산업에 먹이생물 및 사료로서 매우 유용하게 사용할 수 있는 효과가 있다. The novel nanoclose family according to the present invention ( Nannochloris sp.) KCTC 11965BP Microalgae have remarkably better growth rate than other conventional microalgae even under the condition of high temperature of 30 ° C ~ 32 ° C and have salt resistance that can grow even under salt conditions of seawater. Is rich in various physiologically active amino acids and essential fatty acids, and can ultimately be used for food culture and feed in aquaculture industry that cultivates zooplankton such as rotifers and feeds these zooplankton It is effective.

도 1은 본 발명에 따른 신균주인 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP(KMMCC 395)과 다른 미세조류들을 대상으로 30℃와 32℃의 고온에서 배양하여 기간경과에 따른 세포밀도를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 신균주인 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP(KMMCC 395)과 다른 미세조류들을 먹이로 사용하여 배양한 로티퍼의 성장률을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명에서 분리 및 동정한 신균주의 계통발생학적 분석을 계통수(Phylogenetic tree)로 나타낸 것이다.
도 4a는 본 발명에 따른 신균주인 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP(KMMCC 395)의 염분이 30psu인 배양조건에서의 성장률을 나타낸 그래프이다.
도 4b는 본 발명에 따른 신균주인 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP(KMMCC 395)의 염분이 15psu인 배양조건에서의 성장률을 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명에 따른 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP(KMMCC 395)와 다른 미세조류들을 먹이로 사용하여 배양한 로티퍼의 성장률을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
Fig. 1 is a graph showing the results of cultivating a new strain of Nanochloris sp.) KCTC 11965BP (KMMCC 395) and other microalgae at a high temperature of 30 ° C and 32 ° C, respectively, and measuring cell densities over time.
Fig. 2 is a graph showing the results of the measurement of Nannochloris sp.) KCTC 11965BP (KMMCC 395) and other microalgae as food.
FIG. 3 is a phylogenetic tree showing the phylogenetic analysis of a new strain isolated and identified in the present invention.
FIG. 4A is a graph showing the results of cultivating a new strain of Nanochloris sp.) KCTC 11965BP (KMMCC 395) at a salinity of 30 psu.
FIG. 4B is a graph showing the results of cultivating a new strain of Nanochloris sp.) KCTC 11965BP (KMMCC 395) at a salt concentration of 15 psu.
FIG. 5 is a graph showing the effect of the Nanochloris sp.) KCTC 11965BP (KMMCC 395) and other microalgae as food.

본 발명은 고온에서도 성장이 우수하여 고온수기인 여름철 동안 로티퍼의 대량 배양을 위한 먹이 공급 부족을 해결할 수 있는 신규한 로티퍼(Rotifer) 배양용 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) 미세조류를 제공한다는 데 그 특징이 있다. The present invention is by growing a solid even at a high temperature in a high temperature manipulation of rotifers nano keulroriseu for mass cultivation culture food supply novel rotifers to address the lack of (Rotifer) for a while during summer (Nannochloris sp.) It is characterized by providing microalgae.

일반적으로 로티퍼는 댐, 저수지 등 유속이 완만한 담수역에서 주로 발견되는 윤형동물문(Rotifera)의 동물플랑크톤으로, 지금까지 알려진 바로는 전 세계적으로 2500 여종이 분포하고 있다.Generally, Rotifera is a zooplankton of Rotifera, which is found mainly in fresh water stations such as dams and reservoirs. As of now, there are more than 2500 species distributed worldwide.

이러한 로티퍼는 수산생물의 먹이생물로 사용되고 있는데, 먹이생물이란 수서생물(aquatic creature)이 어린 시기에 먹게 되는 식물 및 동물플랑크톤을 의미한다. 또한, 로티퍼는 수산생물, 특히 자어에게 필요한 영양분을 고루 갖추고 있어 시중에 판매되고 있는 배합사료보다 훨씬 우수한 먹이생물이 될 수 있다.These rotifers are used as food organisms for aquatic life, which means plants and zooplankton that aquatic creatures eat during their childhood. In addition, the rotifers have the necessary nutrients for aquatic organisms, especially for the ears, and can be a much better food organism than commercially available formulas.

뿐만 아니라 실제로 수산 분야에서 증식 및 양식 대상 생물이 되는 어류인 자어를 비롯하여, 무척추동물 중 일부는 수정난에서 부화된 후 먹이로서 로티퍼를 섭취해야만 생존할 수 있다. 이처럼 로티퍼 없이는 수산 증양식 분야의 생물들을 사육하는 것 자체가 불가능하므로, 로티퍼는 이들 수서생물 종묘의 대량 생산시 유용한 먹이생물로서 그 산업적 가치를 인정받고 있다.In addition, some of the invertebrates, including the larvae that actually become proliferation and aquaculture organisms in the aquaculture sector, can survive only after ingesting the rotifers as food after hatching from the fertilized eggs. Since it is impossible to breed creatures in the aquaculture farm without the use of rotifers, the rotifers are recognized as valuable industrial animals for use in the mass production of these aquatic specimens.

한편, 해산어의 종묘 생산 과정에서 먹이생물로 이용 가능한 로티퍼는 배양하는 과정에서 로티퍼의 먹이가 되는 미세조류의 종류에 따라 큰 영향을 받고 있으며(Hirayama et.al., 1979), 특히 여름철에는 수온의 온도가 높아 로티퍼의 먹이가 되는 미세조류가 폐사하는 예가 많아 대량배양이 어려운 문제점이 있다.On the other hand, the rotifers which can be used as food organisms during the production of sea fishes are greatly influenced by the kinds of microalgae that feed on the rotifers during cultivation (Hirayama et al., 1979) There are many cases in which microalgae that feed on rotifers are killed, which makes it difficult to mass-culture them.

이에 본 발명에서는 여름철에도 로티퍼의 대량 배양을 가능하게 할 수 있는 신규한 로티퍼 배양용 미세조류를 발굴하기 위해, 서해안 염전에서 식물플랑크톤을 수집한 후, 고온에서도 성장이 활발한 신규한 미세조류를 분리 및 동정하였고, 18S rRNA의 염기서열을 분석하여 계통학적 분류를 조사한 결과, 동일한 염기서열을 갖는 미세조류는 존재하지 않았으며, 계통학적으로 나노클로리스 속(Nannochloris sp.)에 속하는 것을 확인할 수 있었다(도3 참조).Therefore, in order to discover microalgae for culturing new rotifers capable of mass culture of rotifers even in summer, phytoplankton is collected from the west coast tidal field, and new microalgae, which are growing at high temperatures, The nucleotide sequence of 18S rRNA was analyzed and the phylogenetic classification was examined. As a result, there was no microalgae having the same nucleotide sequence, and phylogenetically the Nanochloris sp.) (see Fig. 3).

따라서 본 발명자들은 본 발명에서 분리 및 동정한 신규한 미세조류를 2011.06.14일자로 한국생명공학연구원 미생물자원센타에 기탁하여 기탁번호 KCTC 11965BP를 부여받았고 이를 “나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류”로 명명하였다. Therefore, the present inventors deposited a new microalgae isolated and identified in the present invention on June 14, 2011, and deposited it with the microorganism resource center of the Korea Research Institute of Bioscience and received the deposit number KCTC 11965BP and called it " Nannochloris sp.) KCTC 11965BP microalgae ".

본 발명에서 분리 및 동정한 상기 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류는 고온, 바람직하게는 30℃~32℃의 고온에서도 생장 또는 성장이 활발한 특징이 있다.In the present invention, the above-mentioned nanocholorous ( Nannochloris sp.) KCTC 11965BP Microalgae are characterized by active growth or growth at high temperatures, preferably at temperatures between 30 ° C and 32 ° C.

본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명의 상기 신규 미세조류의 고온 성장 특징이 다른 미세조류들에 비해 현저하게 우수한지를 확인하기 위해 부경대학교 한국해양미세조류은행(Korea Marine Microalgae Culture center, KMMCC)으로부터 분양 받은 KMMCC-33: Nannochloropsis sp., KMMCC-13: Nannochloropsis oceanica, KMMCC-120: Chlorella vulgaris 미세조류들과 본 발명의 신규 미세조류를 대상으로 30℃ 와 32℃의 고온에서 성장률을 비교한 결과, 30℃ 와 32℃에서 모두 본 발명의 신규 미세조류인 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP가 가장 높은 성장률을 보였다(도 1 및 2 참조). 30℃에서 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris) KCTC 11964BP와 나노클로롭시스 속(Nannochloropsis sp.) KMMCC-33도 나쁘지 않은 성장률이지만 32℃의 성장률을 보면 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris) KCTC 11964BP와 나노클로롭시스 속(Nannochloropsis sp.)의 미세조류에 비해 2배 이상의 높은 성장률을 보이는 것으로 나타났다(도 1 참조).According to one embodiment of the present invention, the Korean Marine Microalgae Culture Center (KMMCC) of Pukyong National University was used to confirm that the new microalgae of the present invention had significantly higher growth characteristics than other microalgae, KMMCC-33: Nannochloropsis sp., KMMCC-13: Nannochloropsis oceanica , KMMCC-120: Chlorella vulgaris The microalgae and the new microalgae of the present invention were compared with each other at a high temperature of 30 ° C and 32 ° C. As a result, the microalgae of the present invention, Nannochloris sp.) KCTC 11965BP showed the highest growth rate (see Figures 1 and 2). At 30 < 0 > C, Chlorella V. vulgaris ) KCTC 11964BP and Nannochloropsis sp. KMMCC-33 are not bad growth rates, but at a growth rate of 32 ° C, Chlorella vulgaris) compared to microalgae of KCTC 11964BP and nano claw drop in cis (Nannochloropsis sp.) appeared to exhibit more than twice the highest growth rate (see Fig. 1).

또한, 본 발명에서 분리 및 동정한 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류는 내염성을 갖는 특징이 있으며, 특히 10psu ~ 35psu의 염도 조건 하에서도 활발한 성장을 보이는 특징이 있다.In addition, in the present invention, the Nanochloris sp.) KCTC 11965BP Microalgae are characterized by salt tolerance, especially under the salinity conditions of 10 psu to 35 psu.

본 발명에서 동정된 신규 미세조류는 로티퍼의 배양을 위한 먹이용 미세조류로 사용할 수 있는데, 현재 순수 해수역에 서식하는 로티퍼는 10 여종이 있는 것으로 알려져 있고, 담수 유래종 중 일부는 담수와 해수의 중간 정도 수준의 염도를 나타내는 영역, 즉 자연 수역의 기수(汽水, brackish water) 영역에 적응하여 서식하는 것으로 알려져 있다. The new microalgae identified in the present invention can be used as feed microalgae for the cultivation of rotifers. It is known that there are about 10 species of rotifers in the pure seawater, and some of the freshwater- It is known to live in an area that exhibits a moderate level of salinity, that is, it adapts to the brackish water area of natural waters.

따라서 해수뿐만 아니라 기수 영역에 서식하는 로티퍼의 배양을 위해서는 이의 먹이가 되는 미세조류도 내염성을 갖는 것이 필수적일 수 있다.In order to cultivate rotifers not only in seawater but also in the radionuclides, microalgae, which feed on them, may also be required to have salt resistance.

이에 본 발명자들은 본 발명에서 동정한 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류의 내염성 정도를 측정하기 위해, 본 발명의 일실시예에서 15psu 및 30psu의 염도 조건 하에 미세조류의 성장 정도를 조사한 결과, 다른 미세조류들에 비해 본 발명의 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류가 15psu 및 30psu의 염도 조건 모두에서 월등한 성장률을 보이는 것으로 나타났다(도 4a 및 4b 참조). Accordingly, the present inventors have found that the Nanochloris sp.) KCTC 11965BP In order to measure the degree of salt tolerance of microalgae, the degree of microalgae growth under the salinity condition of 15 psu and 30 psu was examined in one embodiment of the present invention. As a result, ( Nannochloris sp.) KCTC 11965BP microalgae showed superior growth rates at both 15 psu and 30 psu salinity conditions (see Figures 4a and 4b).

상기에서 염도 단위로 사용한 "psu"는 실용 염분 단위인 practical salinity unit를 의미하는 것으로서, 해수 1kg에 녹아 있는 용존 물질의 g 질량의 비(psu)로 염분을 나타낸 것이다. 일반적으로 해수의 평균 염도는 35psu의 염분을 나타낸다고 알려져 있으나 연안은 강우량에 따라 염분의 변화가 심하다.In the above, "psu" used as a salinity unit means a practical salinity unit which is a practical salinity unit, and shows the salinity by the ratio of g mass of the dissolved substance dissolved in 1 kg of seawater (psu). In general, the average salinity of seawater is known to represent 35 psu of salinity, but the salinity of the coast varies greatly depending on the amount of rainfall.

따라서 본 발명에 따른 신규 미세조류는 염분 농도가 낮은 염전의 저수지에서 채집되어, 10psu ~ 35psu의 염도 조건 하에서도 활발한 성장을 보이는 것으로 나타나 해수 조건 하에서도 배양이 용이한 특징이 있다. 일반적으로 해수보다는 낮은 농도의 기수에서 채취되고 분리되는 생물은 곧바로 해수에 옮기면 염분 적응에 실패하여 폐사하는 경우가 많으나 본 발명의 신규 미세조류는 염분 농도의 변화 폭이 큰 염전에서 분리되었으므로 염분 적응에 실패할 우려가 없다.Therefore, the new microalgae according to the present invention are collected in a tidal reservoir having a low salinity, and are actively growing under salinity conditions of 10 psu to 35 psu. Thus, the microalgae are easy to culture even under seawater conditions. Generally, organisms harvested and separated from sea water at a concentration lower than that of seawater are often killed due to failure to adapt to salinity when they are transferred to seawater. However, since the new microalgae of the present invention were isolated from a salt having a large variation in salt concentration, There is no fear of failure.

나아가 본 발명자들은 신규한 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류가 로티퍼의 배양에 유용한 성분인 아미노산 및 지방산의 성분과 함량을 충분히 가지고 있는 지를 분석하였다. Furthermore, the present inventors have found that a novel nanocholorous plant ( Nannochloris sp.) KCTC 11965BP It was analyzed whether microalgae had sufficient contents of amino acids and fatty acids which are useful for culturing rotifers.

본 발명의 일실시예에 따른 결과에 의하면, 대조군인 다른 미세조류에 비해 본 발명의 신규 미세조류의 아미노산의 함량이 월등히 더 높은 것으로 나타났으며 필수아미노산 및 비필수아미노산 함량 모두 다른 대조군에 비해 높았다. 특히 필수아미노산에서는 leusine이 높게 나타났고 비필수아미노산에서는 glutamic acid가 비교적 높게 나타났다(표 3참조). According to the results of one embodiment of the present invention, the amino acid content of the novel microalgae of the present invention was much higher than that of the other microalgae of the control group, and both the essential amino acid and the non-essential amino acid content were higher than those of the other control microalgae . Especially, leucine was higher in essential amino acids and glutamic acid was higher in non-essential amino acids (see Table 3).

또한, 지방산 분석 결과, 신규한 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류의 경우 다른 미세조류보다 생체 내에서 중요한 기능을 담당하고 있는 불포화지방산의 함량이 월등히 많은 것으로 나타났으며, 이중 EPA(eicosapentaenoic acid) 및 DHA(decosahexaenoic acid)과 이를 포함하는 고도불포화지방산(polyunsaturated fatty acids, PUFA)의 함량은 비교적 높았고 특히 단일불포화지방산(monoun-saturated fatty acids)의 함량은 월등히 많이 함유되어 있는 것으로 나타났다(표 4 참조).As a result of fatty acid analysis, a novel nanocholorous plant ( Nannochloris The contents of EPA (eicosapentaenoic acid) and DHA (decosahexaenoic acid) and their contents were higher than those of other microalgae in vivo. The content of polyunsaturated fatty acids (PUFA) was relatively high, and the content of monoun-saturated fatty acids was significantly higher (see Table 4).

고도불포화지방산 중 EPA(eicosapentaenoic acid) 및 DHA(decosahexaenoic acid)는 등푸른 생선류에 많이 포함되어 있는 것으로 알려져 있으며, 특히 어린 동물들의 성장발육과 면역력 증강에 필수적인 역할을 하는 것으로 알려져 있고, 양식용 어류의 경우에도 치어기에 충분한 양의 EPA나 DHA를 공급받지 못하면 면역기능이 저하되어 치사율이 높고 성어기에 성장 장애가 두드러질 뿐만 아니라 채색이 불량하여 상품성이 현저히 저하되는 문제가 있어 EPA나 DHA는 치어의 먹이용 영양성분으로서 반드시 공급되어져야 하는 성분들이다.EPA (eicosapentaenoic acid) and DHA (decosahexaenoic acid) among polyunsaturated fatty acids are known to be contained in a lot of fresh fishes, and they are known to play an essential role in growth and development of immunity of young animals. If EPA or DHA is not supplied in sufficient quantity in Edo period, the immune function is lowered and the mortality rate is high. In addition, not only the growth disorder is pronounced during sexual growth, but also the colorability is poor and the merchantability is significantly lowered. EPA or DHA, These are the ingredients that must be supplied as ingredients.

이러한 점에 비추어 볼 때, 본 발명에서 분리 및 동정한 신규한 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류는 로티퍼 내의 아미노산과 불포화지방산, 특히 단일불포화지방산(monoun-saturated)과 고도불포화지방산의 함량을 풍부히 할 수 있어, 본 발명의 미세조류로 양식한 치어 등의 수산생물은 영양학적인 면에서 우수할 수 있다.In view of this, in the present invention, a novel nanocholorous plant ( Nannochloris sp.) KCTC 11965BP Microalgae can enrich the contents of amino acids and unsaturated fatty acids, especially monounsaturated and polyunsaturated fatty acids, in the rotifers. Therefore, fish species such as fry, which are cultured with the microalgae of the present invention, And can be excellent in terms of nutrition.

그러므로 본 발명은 본 발명에 따른 신규한 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류 또는 이의 배양액을 포함하는 로티퍼 사료용 조성물을 제공할 수 있다.Therefore, the present invention relates to a novel nanocholorous genus ( Nannochloris sp.) KCTC 11965BP microalgae or a culture thereof.

상기 로티퍼 사료용 조성물은 유효성분으로서 신규한 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류 또는 상기 미세조류의 배양액을 포함할 수 있는데, 상기 미세조류의 배양액은 미세조류를 포함한 배양액일 수 있고, 또는 배양액 중의 배양배지를 제거하고 농축된 균체만을 회수하기 위해 원심분리 또는 여과과정을 거쳐 수득한 농축 균체을 포함할 수 있으며 농축된 균체는 통상적인 방법에 따라 냉동(frozen)하거나 또는 냉동건조(lyophilized)하여 그 활성을 잃지 않도록 보존할 수 있다. 바람직하게 상기 미세조류 및 상기 미세조류의 배양액은 살아있는 미세조류를 사용할 수 있다.The composition for the rotifers feed contains a novel nanocholorous genus ( Nannochloris sp.) KCTC 11965BP microalgae or a culture of the above microalgae. The microalgae may be a culture medium containing microalgae, or may be cultured in a centrifuge to remove the culture medium in the culture medium and to recover only the concentrated microalgae Separation or filtration, and the concentrated cells can be preserved by frozen or lyophilized according to a conventional method so as not to lose their activity. Preferably, the microalgae and the microalgae can be used as living microalgae.

또한, 본 발명은 상기 로티퍼 사료용 조성물을 유효성분으로 포함하는 수산사료용 제제를 제공할 수 있다.In addition, the present invention can provide a formulation for aquaculture feed containing the composition for rotifers as an active ingredient.

본 발명에 따른 상기 수산 사료용 제제는 양식어패류의 먹이생물, 사료첨가제 또는 각 양식 어패류에 따라 시판되는 사료조성물에 상기 본 발명의 사료용 제제를 첨가한 형태로서 제조될 수 있으며, 상기 양식 어패류에 이에 제한되지는 않으나 로티퍼를 먹이로 하는 어류라면 모두 포함할 수 있으며, 예를 들면, 어류의 자치어, 갑각류(새우, 게, 가재, 닭새우 등) 및 두족류(문어, 오징어, 낙지 등)의 유생일 수 있다.The fish food feed composition according to the present invention can be manufactured in the form of a feed composition of the present invention added to a commercially available feed composition according to a food creature, a feed additive or each type of fish culture product of aquaculture, (Eg, shrimp, crab, crayfish, chicken prawns) and cephalopods (octopus, squid, octopus, etc.) can be included in the fish .

본 발명은 본 발명에서 발굴한 신규한 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류를 이용한 로티퍼의 대량 배양 방법을 제공할 수 있는데, 특히 고온수기 동안 로티퍼를 대량 배양하는 방법을 제공할 수 있다.The present invention relates to a novel nanocholorous plant ( Nannochloris sp.) KCTC 11965BP It is possible to provide a method for mass culture of rotifers using microalgae, and in particular, it is possible to provide a method for mass culture of rotifers during high temperature water.

나아가 본 발명은 30℃~32℃의 고온에서 배양하는 단계를 포함하는 상기 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류를 대량 배양하는 방법을 제공할 수 있다. Further, the present invention relates to a method for producing the above-mentioned Nanochloris sp.) KCTC 11965BP A method for mass culturing microalgae can be provided.

앞서 기재한 바와 같이 본 발명에 따른 신규 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류는 30~32℃의 고온에서도 성장이 활발히 이루어지는 특징이 있어 상기 신규 미세조류를 사용할 경우, 고온수기인 여름철 동안에도 옥외에서 로티퍼를 대량 배양할 수 있다.As described above, the novel nanoclose family according to the present invention ( Nannochloris sp.) KCTC 11965BP Microalgae are characterized in that they are actively growing even at high temperatures of 30 to 32 ° C. When the new microalgae are used, they can be cultivated in large quantities in the open air even during the summer months when they are hot.

상기 로티퍼의 대량 배양 방법은 로티퍼 배양 방법과정에서 종래 먹이 대신 본 발명의 신규 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KCTC 11965BP 미세조류를 먹이로 사용하여 배양할 수 있으며, 로티퍼 배양 방법으로는 회분(batch)배양 방법, 반 연속 배양 방법 및 고밀도 배양 방법이 있으며, 이들 중 어느 하나의 방법으로 배양할 수 있다.The method of mass-culturing the rotifer is a method of culturing a new nanochloris of the present invention ( Nannochloris sp.) KCTC 11965BP Microalgae can be used as feeds. Rotifer cultivation methods include batch culture, semi-continuous culture, and high-density culture. Any of these methods can be used. have.

상기 회분 배양 방법은 가장 일반적인 배양 방법으로 비교적 소형의 배양수조를 여러 개 사용하여 배양하는 방법이고, 상기 반 연속 배양 방법은 비교적 대형의 수조에서 배양하고 일정기간 동안 매일 같은 수조에서 일정량의 로티퍼를 수확한 후 수확한 만큼의 양에 해당되는 배양수를 로티퍼의 먹이나 새로운 배양수를 보충하여 배양하는 방법이다. 또한 상기 고밀도 배양 방법은 로티퍼의 개체밀도를 ml당 10,000~20,000개체로 유지하면서 배양하는 방법으로 이는 로티퍼 개체수가 증가함으로써 발생되는 산소부족과 암모니아의 농도 증가를 제어하는 시스템을 설치하여 배양하는 방법이다. The batch culture method is the most general culture method and is a method of culturing using a plurality of relatively small culture water tanks. The semi-continuous culture method cultivates in a relatively large water tank and harvests a certain amount of rotifers from the same water tank for a certain period of time And then cultivated by replenishing the amount of cultured water corresponding to the harvested amount of the cultivated lotion or a new culture water. In addition, the above-mentioned high-density culture method is a method of culturing while maintaining the individual density of the rotifer at 10,000 to 20,000 individuals per ml, wherein a system for controlling the oxygen deficiency and the increase in ammonia concentration caused by an increase in the number of rotifers is installed and cultured .

따라서 본 발명에서 제공하는 로티퍼 대량 배양 방법은 상기 기술된 방법 중 어느 것으로도 배양 할 수 있으며, 본 발명의 신규 미세조류 또는 이를 포함하는 로티퍼 사료용 조성물을 로티퍼 배양수에 첨가하거나 로티퍼의 사료에 첨가하여 사용함으로써 배양할 수 있다.Therefore, the method for mass culture of rotifers provided by the present invention can be cultured by any of the above-described methods, and the novel microalgae of the present invention or the composition for a rotifer feed containing the same can be added to the rotifer culture water or added to the feed of the rotifers Can be cultured.

또한, 본 발명에서 제공하는 상기 배양 방법은 고온수기, 바람직하게는 7월~8월 동안에도 로티퍼를 대량으로 배양할 수 있다. In addition, the culture method provided by the present invention can also be used to cultivate a large amount of rotifer during hot water, preferably from July to August.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시 예에 한정되는 것은 아니다.
However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.

<< 실시예Example 1> 1>

신균주인A new strain 나노클로리스Nanoclose 속( genus( NannochlorisNannochloris spsp .) .) KCTCKCTC 11965 11965 BPBP 의 분리Separation of

<1-1> 균주의 분리<1-1> Isolation of strain

본 발명자들은 고온에서도 생육 발달이 활발하고 대량배양이 가능하여 로티퍼의 배양용 먹이로 사용 가능한 새로운 미세조류를 발굴하기 위해 전북 부안군 염전에서 20 μm의 식물플랑크톤네트를 사용하여 조수를 채취하였고, 한천 고체 배지(LDM 배지, 표1 참조)에 도말하여 배양한 후, 생장을 보이는 균주를 분리하였다. 이후, 생장을 보이는 균주들을 대상으로 고온인 30℃~32℃에서도 생장이 활발한 균주를 분리하기 위해, 상기 분리된 각 균주들을 대상으로 30℃~32℃의 온도가 유지되는 조건하에서 해수용 배양액으로 알려진 f/2배지(표 2 참조)를 이용하여 균주를 배양시켰다. 또한 형태학적 분석 및 균학적 특성을 분석하였다.
The present inventors collected fresh water using a 20-μm phytoplankton net at Buan-gun, Jeonbuk Province, in order to find new microalgae that can be used as a food for culture of rotifers, After culturing on a medium (LDM medium, see Table 1), strains showing growth were isolated. Then, in order to isolate strains which are active at 30 ° C to 32 ° C, which are grown at high temperatures, the above-mentioned isolated strains are cultured in a sea water culture medium under the condition of maintaining the temperature of 30 ° C to 32 ° C The strains were cultured using known f / 2 medium (see Table 2). Morphological analysis and mycological characteristics were also analyzed.

<1-2> 선별된 균주의 동정<1-2> Identification of selected strains

a. 형태학적 동정a. Morphological identification

상기 실시예 <1-1>에서 선별된 균주들 대상으로 현미경을 통해 균주의 형태학적 모양을 관찰하였다. The morphological shape of the strain was observed through a microscope for the strains selected in Example <1-1>.

관찰 결과, 동정된 균주의 세포는 소형 녹조류로 구형의 형태를 갖는 것으로 관찰되었고, 직경은 1~3 μm이며 편모가 없어 운동성을 가지지 않는 것으로 관찰되었다(결과 미도시).
As a result of observation, the cells of the identified strain were observed to have a spherical shape with a small green alga, and the diameter was 1 to 3 μm, and it was observed that there was no mobility and no mobility (result not shown).

b. 분자생물학적 동정b. Molecular biology identification

상기 실시예 <1-1>에서 선별된 균주의 분자생물학적 동정을 위해 당업계에서 사용되고 있는 18S ribosomal RNA의 염기서열을 분석하였다.The nucleotide sequence of the 18S ribosomal RNA used in the present invention was analyzed for the molecular identification of the strains selected in Example <1-1>.

그 결과, 본 발명에서 동정한 균주는 나노클로리스 속에 속하는 균주인 것으로 나타났고, 분류상 위치는 Chlorophyceae - Chlorococcales - Chlorellaceae - Nannochloris에 속하는 것으로 조사되었으며, 특히 Nannochloris sp .에 속하는 것으로 분석되었다. 이에 본 발명자들은 상기 동정한 균주의 염기서열을 분석하였고, 그 염기서열을 서열번호 1에 나타내었으며, 이러한 염기서열을 갖는 균주는 기존에 존재하지 않는 신규한 균주임을 확인함으로써, 2011년 06월 14일자로 한국생명공학연구원 미생물자원센타에 기탁하여 기탁번호 KCTC 11965BP를 부여받았다. 이하 본 발명에서는 상기 동정한 신균주를 “Nannochloris sp. KCTC 11965BP”로 명명하였다. As a result, it was revealed that the strain identified in the present invention was a strain belonging to the genus of nanochloris,Chlorophyceae - Chlorococcales - Chlorellaceae - Nannochloris, And in particularNannochloris sp .. Thus, the present inventors have analyzed the nucleotide sequence of the identified strain, and the nucleotide sequence thereof is shown in SEQ ID NO: 1. As a result of confirming that the strain having this nucleotide sequence is a novel strain that does not exist in the past, And deposited with KCB Microbiology Resource Center of Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology as the deposit number KCTC 11965BP. In the present invention, the new strain identified above is referred to as &quot;Nannochloris sp. KCTC 11965BP &quot;.

c. c. 균학적Mycology 동정 Sympathy

상기 동정한 신균주인 Nannochloris sp. KCTC 11965BP 균주의 균학적 특징을 조사하였는데, 조사 결과, 광합성에 의한 광독립 영양생육을 할 수 있는 것으로 나타났고, 생육 온도는 30℃ 이상의 고온에서도 잘 성장하는 특징이 있는 것으로 나타났으며, 특히 30℃~32℃의 온도에서 성장이 우수한 것으로 나타났다.The above- The new strain Nannochloris sp. KCTC 11965BP strains were examined for their mycological characteristics. As a result of the investigation, it was shown that light independent growth and nutrition could be obtained by photosynthesis. Growth temperature was found to be well grown even at high temperature above 30 ℃, It was found that the growth was excellent at a temperature of 占 0 to 32 占 폚.

또한 생육 가능한 염분은 여과해수와 증류수를 혼합하여 15 psu와 30 psu로 구분하여 제조한 후, 이들 조건에서 생육을 조사한 결과, 15 psu와 30 psu 모두에서 생육 가능한 것으로 조사되었으며(도 4a와 4b 참조), 생육 조도는 60 μmol m-2s-1 ~ 100 μmol m-2s-1의 범위인 것으로 조사되었다. The viable salinity was determined by mixing 15 wpm and 30 psu of filtered seawater and distilled water, and the growth was investigated under these conditions. As a result, the growth was possible in both 15 psu and 30 psu (Figs. 4a and 4b ) And the growth intensities ranged from 60 μmol m -2 s -1 to 100 μmol m -2 s -1 .

특히 상기 염분 조건 하에서의 생육 조사는 본 발명의 신균주인 Nannochloris sp. KCTC 11965BP(일명, 'KMMCC-395'라고 함)와 대조군으로 부경대학교 한국해양미세조류은행으로부터 분양받은 KMMCC-79: Chlorella salina, KMMCC-95: Chlorella vulgaris, KMMCC-58: Nannochloris sp., KMMCC-117: Nannochloris sp., KMMCC-33: Nannochloropsis sp., KMMCC-13: Nannochloropsis oceanica를 사용하였다.
Particularly, the growth under the above-mentioned salt condition was investigated using Nannochloris sp. KCTC 11965BP (aka, 'KMMCC-395') and KMMCC-79: Chlorella distributed as a control from Korea Marine Microalgae Bank, Pukyong National University salina , KMMCC-95: Chlorella vulgaris, KMMCC-58: Nannochloris sp , KMMCC-117:.. Nannochloris sp, KMMCC-33:. Nannochloropsis sp, KMMCC-13: Nannochloropsis oceanica was used.

<< 실시예Example 2> 2>

고온에서의 균주 성장 분석Analysis of strain growth at high temperature

본 발명자들은 로티퍼의 대량배양에 큰 문제가 되었던 여름철 먹이 공급 부족의 문제를 해결하기 위해 본 발명에서 동정한 신균주를 여름철 로티퍼의 먹이로 용이하게 사용할 수 있는지를 확인하기 위해, 고온에서 대량 배양이 가능한지를 조사하였다. 즉, 여름철 고온수의 조건 하에서도 세포의 성장이 활발하여 잘 성장하는 미세조류는 여름철 로티퍼의 옥외 대량배양에 용이하게 사용할 수 있기 때문이다. 이에 고온인 30℃와 32℃에서 본 발명에서 동정한 신균주와 다른 미세균주들을 대상으로 성장 정도를 비교 분석하였다. 이때 비교를 위해 사용한 상기 미세균주들 또한 로티퍼 배양을 위해 사용되는 균주로서 KMMCC-33: Nannochloropsis sp., KMMCC-13: N. oceanica, KMMCC-120: Chlorella vulgaris 를 사용하였으며, 이들 균주는 부경대학교 한국해양미세조류은행으로부터 분양받아 사용하였다. 이들 각 균주들은 f/2배지에 100x104 cell/mL의 밀도로 접종하고 15psu의 염분 조건 하에서 100 μmolm-2s-1의 연속 조명으로 10일간 배양한 후, 혈구계산판을 사용하여 세포를 매일 동일 시간에 4회 반복 계수하고, Guillard의 방법으로 성장률을 계산하였다[sgr 〓 3.322×log(N1/N0)/t, (t : 접종 후 배양 일수, N0, N1 : 접종 후 및 t 일 후의 세포 밀도)].In order to solve the problem of shortage of food supply in the summer, which has been a major problem in the mass culture of rotifers, the inventors of the present invention have found that the new strain identified in the present invention can be easily used as food for summer rotifers, . That is, since the cell growth is active under the condition of hot water in summer, well-grown microalgae can be easily used for outdoor large-scale cultivation of summer rotifers. The growth rate of the new strains and other microbial strains identified in the present invention at 30 ° C. and 32 ° C., which are high temperatures, were compared and analyzed. The micro-strains used for comparison were also used as strains used for culturing rotifer KMMCC-33: Nannochloropsis sp., KMMCC-13: N. oceanica , KMMCC-120: Chlorella vulgaris were used, and these strains were purchased from the Korean Marine Microalgae Bank of Pukyong National University. Each of these strains was inoculated at a density of 100 × 10 4 cells / mL in f / 2 medium and cultured for 10 days under continuous illumination of 100 μmolm -2 s -1 under a salt condition of 15 psu. The growth rate was calculated by Guillard's method [sgr = 3.322 log (N 1 / N 0 ) / t, (t : Days after incubation, N 0 , N 1 : Cell density after inoculation and after t day).

또한 본 발명에서 모든 실험 결과의 통계 처리는 One-way ANOVA test를 실시하였으며, 처리 평균간의 유의성(P<0.05)은 Duncan's multiple range test로 하였다. 모든 통계분석은 SPSS (SPSS Inc., 2008; Ver. 17) program을 사용하였다. In the present invention, the one-way ANOVA test was used for statistical analysis of all experimental results, and the significance (P <0.05) between treatment averages was determined by Duncan's multiple range test. All statistical analyzes were performed using SPSS (SPSS Inc., 2008;

그 결과, 도 1, 2에 나타낸 바와 같이, 30℃ 와 32℃에서의 성장률은 본 발명에서 동정한 신균주인 Nannochloris sp. KCTC 11965BP(KMMCC-395)가 가장 높은 성장률을 보였으며, 30℃에서 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris) KCTC 11964BP와 나노클로롭시스 속(Nannochloropsis sp.) KMMCC-33도 나쁘지 않은 성장률이지만 32℃의 성장률을 보면 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris) KCTC 11964BP와 나노클로롭시스 속(Nannochloropsis sp.) 포함 다른 대조군인 미세조류에 비해 2배 이상의 높은 성장률을 보이는 것으로 나타남에 따라 고수온기의 로티퍼 대량배양에 매우 적합한 균주인 것을 알 수 있었다.
As a result, as shown in Figs. 1 and 2, the growth rate at 30 ° C and 32 ° C was the same as that of the new strain Nannochloris sp. KCTC 11965BP (KMMCC-395) showed the highest growth rate, and at 30 ° C, Chlorella V. vulgaris ) KCTC 11964BP and Nannochloropsis sp. KMMCC-33 are not bad growth rates, but at a growth rate of 32 ° C, Chlorella The results showed that the strains were more suitable for the cultivation of high temperature warm rotifers than the microalgae containing KCTC 11964BP and Nannochloropsis sp.

<< 실시예Example 3> 3>

영양 성분 분석Nutritional analysis

나아가 본 발명자들은 본 발명에서 동정한 Nannochloris sp. KCTC 11965BP균주의 영양성분을 분석하기 위해 아미노산과 지방산을 분석하였는데, 이를 위해 상기 기술된 동일한 방법으로 배양된 Nannochloris sp. KCTC 11965BP 균주를 대수성장기 종료시에 수확한 다음, 수확한 세포들을 분석 전까지 -80℃에서 냉동 보관하여 이후 실험을 수행하였으며, 이때 비교분석을 위해 본 발명에서 동정한 균주 이외에 KMMCC-33: Nannochloropsis sp., KMMCC-13: N. oceanica, KMMCC-120: Chlorella vulgaris를 사용한 시료들을 사용하였다. 즉, 비교분석을 위해 사용한 각 균주들 및 이들 균주로 배양한 로티퍼를 대조군 시료로 사용하였다. Further, the inventors of the present invention found that Nannochloris sp. To analyze the nutritional content of KCTC 11965BP strain, amino acids and fatty acids were analyzed. For this, Nannochloris sp. The KCTC 11965BP strain was harvested at the end of the logarithmic growth period, and the harvested cells were stored at -80 ° C. until analysis. After that, KMMCC-33: Nannochloropsis sp. , KMMCC-13: N. oceanica , KMMCC-120: Chlorella Samples with vulgaris were used. That is, each strain used for comparative analysis and a rotifer cultured with these strains were used as a control sample.

먼저 아미노산 분석을 위해 상기 냉동 보관한 각 수확 세포 20 mg을 시험관에 넣고, 6N HCl 15 mL를 가하여 밀봉한 후 110℃에서 24시간 가수분해하였다. 이 분해액을 여과한 후 감압 건조하여 HCl을 완전히 제거한 다음, sodium dilution buffer(pH 2.2)로 25 mL가 되도록 정량한 다음, 이 용액을 일정량 취하여 아미노산 자동분석기 S433(Sykam, Germany)를 이용하여 닌히드린(ninhydrin) 방법으로 분석하였다. 분석조건은 column size 4 mm× 150 mm, 흡광도 570 nm 및 440 nm, 용액 흐름 속도 0.25 mL/min, 버퍼 흐름 속도 0.45 mL/min, 반응기 온도 120℃, 반응기 크기 15 m, 분석시간을 65분으로 하여 분석하였다.For amino acid analysis, 20 mg of each of the harvested cells was stored in a test tube, sealed with 15 mL of 6N HCl, and then hydrolyzed at 110 ° C. for 24 hours. The digested solution was filtered, and then dried under reduced pressure to completely remove HCl. The solution was then diluted to 25 mL with sodium dilution buffer (pH 2.2), and then a predetermined amount of this solution was taken and analyzed using an amino acid automatic analyzer S433 (Sykam, Germany) And analyzed by the ninhydrin method. The analysis conditions were as follows: column size 4 mm × 150 mm, absorbance 570 nm and 440 nm, solution flow rate 0.25 mL / min, buffer flow rate 0.45 mL / min, reactor temperature 120 ° C., reactor size 15 m, Respectively.

또한, 지방산 분석은 15 mL 시험관에 상기에서 사용한 동일한 일정량의 시료(20 ㎎ 이상)에 10% BF3- methanol 2 mL를 첨가하고 질소로 충전한 다음, 85℃에서 1시간 30분간 가열하여 메틸 에스테르화 하였다(Morrison and Smith, 1964; Budge, 1999). 시료는 약 40℃로 냉각한 후 물과 헥산을 첨가하여 지방산을 분리 추출하였다. 추출된 지방산은 HP autosampler가 설치된 HP GC 6890 Plus(Agilent, USA)를 이용하여 분석하였는데, 지방산 분석에 사용된 GLC는 DB-225(20 m× 0.1 mm, i.d., 0.1 ㎛ film thickness, J&W Scientific, Agilent Technologies, USA)를 이용하였다. 분석 조건은 컬럼 온도가 60~195℃ (25℃/min)가 되도록 하였고, 승온 조건 195~205℃ (3℃/min), 205~230℃ (8℃/min), 주입 온도 250℃, 검출 온도 250℃, 수송 가스 He (60cm/sec)을 사용하였다. 지방산의 분석은 동일조건에서 분석한 standard(PUFA 1, 10 및 37 component FAME Mix, Supelco, Ontaro, Canada)를 이용하여 동정하였다. For fatty acid analysis, 2 mL of 10% BF 3 -methanol was added to the same amount of sample (20 mg or more) as used above in a 15 mL test tube, and the mixture was filled with nitrogen and heated at 85 ° C for 1 hour and 30 minutes to obtain methyl ester (Morrison and Smith, 1964; Budge, 1999). The sample was cooled to about 40 ° C, and water and hexane were added to separate the fatty acids. The fatty acids were analyzed using HP GC 6890 Plus (Agilent, USA) equipped with HP autosampler. The GLC used for fatty acid analysis was DB-225 (20 m × 0.1 mm, id, 0.1 μm film thickness, J & Agilent Technologies, USA). The analytical conditions were such that the column temperature was 60 to 195 ° C (25 ° C / min), the temperature was 195 to 205 ° C (3 ° C / min), 205 to 230 ° C A temperature of 250 占 폚, and a transport gas He (60 cm / sec) were used. Fatty acids were identified using standard (PUFA 1, 10 and 37 component FAME Mix, Supelco, Ontaro, Canada) analyzed under the same conditions.

분석 결과, 각 미세조류에 대한 아미노산 분석과 지방산 분석 결과는 하기 표 3 및 4에 기재하였으며, 본 발명의 신균주가 다른 균주보다 월등히 아미노산의 함유량이 높은 것으로 보였고 모든 아미노산을 고루 함유하고 있는 것을 알 수 있었다. 지방산의 경우 신균주는 Nannochloropsis 보다는 낮으나 비교적 높은 값을 보였으며, Chlorella 보다는 높은 EPA 값을 나타내었다.
As a result of the analysis, amino acid analysis and fatty acid analysis results for each microalgae are shown in Tables 3 and 4, and the new strain of the present invention was found to have a much higher amino acid content than the other strains, I could. In the case of fatty acid, the new strain was lower than Nannochloropsis but showed a higher value and showed higher EPA value than Chlorella .

Figure 112011086627814-pat00001
Figure 112011086627814-pat00001

Figure 112011086627814-pat00002
Figure 112011086627814-pat00002

Figure 112011086627814-pat00003
Figure 112011086627814-pat00003

Figure 112011086627814-pat00004
Figure 112011086627814-pat00004

본 발명의 신균주로 로티퍼를 배양한 결과는 도 5에 나타낸 바와 같이 Nannochloropsis에 비하면 낮은 값을 보였으나 Chlorella에 비하면 월등히 높은 값을 보였다.As shown in FIG. 5, when the rotifer was cultured with the new strain of the present invention, the value was lower than that of Nannochloropsis , but was much higher than that of Chlorella .

이러한 결과를 토대로 본 발명자들은 본 발명에서 분리 및 동정한 신균주인 Nannochloris sp. KCTC 11965BP를 로티퍼의 먹이용 미세균주로 사용할 경우 로티퍼의 성장을 촉진 시키는 아미노산 성분과 지방산 성분이 많아 로티퍼의 성장을 촉진시키는 효과가 있음을 확인하였고 대다수의 다른 균주들이 30℃이상의 고수온기에 갑자기 폐사하는 경우가 많은데 반해 본 발명의 신균주인 Nannochloris sp. KCTC 11965BP는 고온인 30~32℃에서도 성장이 활발한 특성을 가지고 있어 특히 여름철 로티퍼의 배양을 위한 먹이용 균주로 사용할 수 있는 효과가 있다.
Based on these results, the present inventors have found that the novel strain Nannochloris sp. When KCTC 11965BP was used as a microbial strain for the rotifers, it was found that there were many amino acid and fatty acid components that promoted the growth of the rotifer, thereby promoting the growth of the rotifer. Most of the other strains had sudden death While the new strain of the present invention, Nannochloris sp. KCTC 11965BP has an active growth characteristic even at high temperature of 30-32 ° C, and thus it can be used as a feeding strain for culturing rotifers in summer.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.The present invention has been described with reference to the preferred embodiments. It will be understood by those skilled in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in an illustrative rather than a restrictive sense. The scope of the present invention is defined by the appended claims rather than by the foregoing description, and all differences within the scope of equivalents thereof should be construed as being included in the present invention.

한국생명공학연구원Korea Biotechnology Research Institute KCTC11965BPKCTC11965BP 2011061420110614

서열목록 전자파일 첨부Attach an electronic file to a sequence list

Claims (8)

30℃~32℃의 고온에서 생장 가능한 로티퍼(Rotifer) 배양용 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KMMCC 395 미세조류(기탁번호: KCTC 11965BP). Nannochloris sp. KMMCC 395 microalgae (accession number: KCTC 11965BP) for rotifer culture capable of growing at a high temperature of 30 ° C to 32 ° C. 제1항에 있어서,
상기 로티퍼는 브라키오누스 플리카틸리스(Brachionus plicatilis)인 것을 특징으로 하는 로티퍼(Rotifer) 배양용 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KMMCC 395 미세조류(기탁번호: KCTC 11965BP).
The method according to claim 1,
The Nannochloris sp. KMMCC 395 microalgae (Accession No: KCTC 11965BP) for rotifer culture is characterized in that the rotifer is Brachionus plicatilis .
제1항에 있어서,
상기 미세조류는 로티퍼의 성장에 필요한 아미노산 및 불포화지방산의 함량을 증가시켜 로티퍼의 성장을 촉진시키는 것을 특징으로 하는 로티퍼(Rotifer) 배양용 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KMMCC 395 미세조류(기탁번호: KCTC 11965BP).
The method according to claim 1,
Wherein the microalgae increase the content of amino acids and unsaturated fatty acids necessary for growth of rotifers and promote the growth of rotifers. The Nannochloris sp. KMMCC 395 microalgae for the rotifer culture (Accession Number: KCTC 11965BP).
제1항에 있어서,
상기 미세조류는 염분이 15~35psu(practical salinity unit)인 조건에서 내염성을 갖는 것을 특징으로 하는 로티퍼(Rotifer) 배양용 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KMMCC 395 미세조류(기탁번호: KCTC 11965BP).
The method according to claim 1,
The microalgae have a salt tolerance at a salinity of 15 to 35 psu (practical salinity unit). KMMCC 395 microalgae (accession number: KCTC 11965BP) for culturing rotifer Nannochloris sp.
제1항의 나노클로리스 속(Nannochloris sp.) KMMCC 395 미세조류(기탁번호: KCTC 11965BP) 또는 이의 배양액을 포함하는 로티퍼(Rotifer) 사료용 조성물. A composition for the rotifer feed comprising the Nannochloris sp. KMMCC 395 microalgae (accession number: KCTC 11965 BP) of claim 1 or a culture thereof. 제5항의 로티퍼(Rotifer) 사료용 조성물을 유효성분으로 포함하는 수산사료용 제제.A formulation for aquatic fish feed comprising the composition of claim 5 as an active ingredient. 제1항의 미세조류를 먹이로 이용하여 고온수기인 7월~8월 동안 로티퍼(Rotifer)를 대량 배양하는 방법. A method for mass culture of rotifer during July to August at high temperature water using the microalgae of claim 1 as food. 고수온기인 7월~8월 동안 30℃~32℃의 온도에서 배양하는 단계를 포함하는 제1항의 KMMCC 395 미세조류(기탁번호: KCTC 11965BP)를 대량 배양하는 방법.




A method of mass-culturing the KMMCC 395 microalgae (accession number: KCTC 11965BP) according to claim 1, which comprises culturing at a high temperature from July to August at a temperature of 30 ° C to 32 ° C.




KR1020110113876A 2011-11-03 2011-11-03 Novel Nannochloris sp. capable high temperature growth and use thereof KR101323897B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020110113876A KR101323897B1 (en) 2011-11-03 2011-11-03 Novel Nannochloris sp. capable high temperature growth and use thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020110113876A KR101323897B1 (en) 2011-11-03 2011-11-03 Novel Nannochloris sp. capable high temperature growth and use thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20130048940A KR20130048940A (en) 2013-05-13
KR101323897B1 true KR101323897B1 (en) 2013-10-30

Family

ID=48659828

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020110113876A KR101323897B1 (en) 2011-11-03 2011-11-03 Novel Nannochloris sp. capable high temperature growth and use thereof

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101323897B1 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR19980025802A (en) * 1996-10-05 1998-07-15 김광양 New microorganisms in the genus Erythrobacter
KR20070049365A (en) * 2005-11-08 2007-05-11 강릉대학교산학협력단 A usefull ultra small rotifer, synchaeta sp. as live food for hatch larvae with small mouth and its culture methods

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR19980025802A (en) * 1996-10-05 1998-07-15 김광양 New microorganisms in the genus Erythrobacter
KR20070049365A (en) * 2005-11-08 2007-05-11 강릉대학교산학협력단 A usefull ultra small rotifer, synchaeta sp. as live food for hatch larvae with small mouth and its culture methods

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
부경대 박사학위 논문, Chlorella와 Nannochloris의 계절별 대량 배양을 위한 적종 선택과 배지 개발(2004년 8월). *
한국양식학회 2003 년도 추계학술발표대회 논문 요약집(Rotifer 대량 배양에 적합한 계절별 미세조류 개발, pp90-91,2003년10월01일) *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20130048940A (en) 2013-05-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Guedes et al. Nutritional value and uses of microalgae in aquaculture
JP4852662B2 (en) Selenium-containing single-cell microalgae for zooplankton feed and methods for culturing selenium-containing zooplankton using the same
JP6667870B2 (en) Rotifer feed
KR101241540B1 (en) Novel tetraselmis hazeni and use thereof
KR101768577B1 (en) Method of culturing of cold water species using rotifer as live food
Heneash et al. Effect of Un-live Microalgal diet, Nannochloropsis oculata and Arthrospira (Spirulina) platensis, comparing to yeast on population of rotifer, Brachionus plicatilis
CN106577371A (en) Finless eel breeding pilot feeding method employing baits of different gradient proportions
EP3431579A1 (en) Feed composition, method for manufacturing zooplankton, zooplankton, and zooplankton growth promoter and survival rate enhancer
KR101822736B1 (en) Feed stuff for sea cucumber including organic compounds in biofloc and method for preparation thereof
KR101323887B1 (en) Novel Nannochloris sp. Capable High Temperature Growth and Use Thereof
KR101323873B1 (en) Novel Nannochloropsis sp. capable high growth and use thereof
CN113508766B (en) Method for domesticating and feeding largemouth bass fry
KR101323957B1 (en) Novel Chlorella vulgaris capable low temperature growth and use thereof
CN101904307B (en) Method for culturing mud crab seedlings
KR101323897B1 (en) Novel Nannochloris sp. capable high temperature growth and use thereof
KR20140132226A (en) Novel Phaeodactylum tricornutum derived from fresh water and use thereof
CN110923146A (en) Chlorella rich in polyunsaturated fatty acids and essential amino acids and application thereof
CN110800888A (en) Composition for culturing plankton, preparation method and application thereof
JP2790642B2 (en) Euglena treated products and their uses
Okauchi et al. Trophic value of the unicellular diatom Phaeodactylum tricornutum for larvae of Kuruma prawn, Penaeus japonicus
CN111254080B (en) Nanochlorum sp microalgae and application thereof as aquatic product bait
KR101413186B1 (en) Feed composition comprising Neptheidae for Thamnaconus modestus and a breeding method therof
KR102037626B1 (en) Feeds for aqua-culture of Echinoidea.
Gopakumar et al. Live feed research for larviculture of marine finfish and shellfish
Gopal et al. INFLUENCE OF PHYSICAL AND NUTRITIVE PARAMETERS ON POPULATION AND SIZE VARIATION IN TWO SPECIES OF ROTIFER

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160928

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20181001

Year of fee payment: 6