KR101100292B1 - 단백다당체 생산능을 가지는 신균주 차가버섯ｍ5 - Google Patents

단백다당체 생산능을 가지는 신균주 차가버섯ｍ5 Download PDF

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Abstract

본 발명은 단백다당체 생산능을 가지는 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5에 관한 것으로, 보다 상세하게는 차가버섯(Inonotus obliquus) 균사체를 UV처리한 후 원형질체를 형성시키고 상기 원형질체의 재생과정으로 제조된 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5 및 상기의 신균주를 배양하고 그 배양액으로부터 단백다당체를 생산하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백다당체의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5는 친균주인 차가버섯 균주에 비해 균체성장률 및 단백다당체의 생산성이 높으며, 따라서 본 발명에 의해 면역증강, 항암, 항당뇨 효능 등을 나타내는 차가버섯 유래 단백다당체의 대량공급이 가능하다.
차가버섯M5, 단백다당체, 차가버섯 균사체, 원형질체, 재생

Description

단백다당체 생산능을 가지는 신균주 차가버섯Ｍ5{Novel Inonotus obliquus M5 having the ability of β-D-glucan production}
본 발명은 단백다당체 생산능을 가지는 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5에 관한 것으로, 보다 상세하게는 차가버섯(Inonotus obliquus) 균사체를 UV처리한 후 원형질체를 형성시키고 상기 원형질체의 재생과정으로 제조된 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5 및 상기의 신균주를 배양하고 그 배양액으로부터 단백다당체를 생산하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백다당체의 제조방법에 관한 것이다.
고등균류(higher fungi)인 버섯은 오래전부터 맛과 영양이 풍부하여 식품으로 애용되어 왔을 뿐 아니라 약용 등의 목적으로도 널리 이용되어 왔다. 특히 질병의 치료 및 예방에 효과가 있는 천연물 중 가장 주목받고 있는 담자균류(Basidiomycetes) 버섯은 이들의 광범위한 약리작용으로 인해 한방의학에서도 널리 활용되고 있다. 최근 담자균류 유래 약용버섯들의 항암효과가 과학적으로 입증 되고 있으며, 약용버섯 추출물 중에서 특별히 면역증강작용에 의해 탁월한 항암효능과 당뇨병 개선효과를 보이는 생리활성물질은 β-D-Glucan 구조를 갖는 수용성 단백다당체(이후 “단백다당체”로 명명함)로 구성되어 있음이 밝혀졌다. 이중에서도 특히 대표적인 담자균류에 속하는 차가버섯(Inonotus obliquus)유래의 단백다당체는 면역증강 효과와 함께 인슐린 분비 촉진작용에 의한 혈당강하 효능이 탁월한 것으로 밝혀져 당뇨개선 약효를 갖는 새로운 생리활성물질로 주목을 받고 있다.
당뇨개선 약효가 뛰어난 것으로 알려진 차가버섯은 성장조건이 까다로워 번식이 잘 되지 않아 야생의 것은 너무 비싸고 희귀하여 구입하기가 쉽지 않다. 최근 들어 인공재배에 의해 자실체를 생산하고 있으나 긴 생산기간과 낮은 생산성으로 인해 소비자가 원하는 저렴한 가격에 판매가 어려운 실정이다. 최근 여러가지 버섯들의 항당뇨작용 및 면역증강작용에 의한 항암효과가 과학적으로 입증되었으며 이러한 효능을 나타내는 성분은 β-D-glucan 구조를 갖는 단백다당체로 밝혀졌다. 차가버섯(Inonotus obliquus)의 면역증강작용에 의해 항암 및 항당뇨 성분으로 밝혀진 베타글루칸 구조의 단백다당체는 특별히 고안된 정제과정을 거쳐 정제된 조단백다당체에도 5% 이하의 함량을 나타내는 미량성분이다.
차가버섯 유래 단백다당체는 세포벽 구성성분으로 존재하는 세포내 단백다당체(intracellular exopolysaccharide: IPS)와 세포외로 분비하는 세포외 단백다당체(extracelluar exopolysaccharide: EPS)로 이루어져 있다. 세포내 단백다당체(IPS)는 단위 세포당 존재하는 비율이 거의 일정하기 때문에, 차가버섯 유래 단백다당체 생산의 경제성을 확보하기 위해서는 세포성장률이 높고, 세포외 단백다당 체(EPS) 분비량이 높은 균주의 개발이 필수적이다. 그러나 포자를 생성하지 않는 담자균류의 경우, 자실체 형성을 유도하여 포자를 획득하지 않는 한, 단일콜로니를 얻는 것이 불가능하고 이 때문에 균주개발의 시도 자체가 매우 힘든 실정이다.
본 발명의 목적은 차가버섯에서 유래한 단백다당체 생성량의 증대를 목적으로, 균사체의 개량을 통한 신균주를 개발하고자 하며, 이 신균주를 이용하여 의약품이나 식품에 사용할 수 있는 단백다당체를 대량생산하고자 함이다.
상기의 과제를 해결하고자, 본 발명은 단백다당체 생산능을 가지는 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5(KACC93073P)를 제공한다. 또한 본 발명은 상기의 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5를 배양하고 그 배양액으로부터 단백다당체를 생산하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백다당체의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5는 친균주인 차가버섯 균주에 비해 균체성장률 및 단백다당체의 생산성이 높으며, 따라서 본 발명에 의해 면역증강, 항암, 항당뇨 효능 등을 나타내는 차가버섯 유래 단백다당체의 대량공급이 가능하다.
본 발명은 단백다당체 생산능을 가지는 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5(KACC93073P)를 제공한다.
본 발명에서 상기 신균주는 차가버섯(Inonotus obliquus) 균사체를 UV처리한 후, 원형질체를 형성시키고 상기 원형질체의 재생과정으로 제조될 수 있다.
또한 본 발명에서 상기 단백다당체는 세포벽 구성성분인 세포내 단백다당체(intracellular exopolysaccharide: IPS) 또는 세포외로 분비되는 세포외 단백다당체(extracelluar exopolysaccharide: EPS)일 수 있다.
본 발명은 또한 상기의 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5(KACC93073P)를 배양하고 그 배양액으로부터 단백다당체를 생산하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백다당체의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 제조방법에서 상기 배양은 차가버섯(Inonotus obliquus)의 포자를 발아시켜 균사체를 얻고, 상기 균사체를 액체배지에서 액상배양한 것일 수 있다.
또한 본 발명의 제조방법에서 상기 단백다당체는 세포벽 구성성분인 세포내 단백다당체(intracellular exopolysaccharide: IPS) 또는 세포외로 분비되는 세포외 단백다당체(extracelluar exopolysaccharide: EPS)일 수 있다.
이하 본 발명의 단백다당체 생산능을 가지는 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5 및 이를 이용한 단백다당체의 제조방법에 대하여 보다 상세하게 설명한다.
본 발명은 단백다당체 생산성이 우수한 차가버섯의 개량균주인 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5에 관한 것이다. 또한 본 발명은 상기 신균주를 배양하여 그 배양물로부터 단백다당체를 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 차가버섯 M5(이하 신균주라 함)는 높은 면역증강, 항암, 항당뇨효과를 가지는 단백다당체의 생산균주인 차가버섯(야생에서 채취한 차가버섯의 자실체로부터 획득한 균사체를 이하 친균주라 함)의 균사체를 UV 돌연변이를 유발시키고, 단일 유전자를 분리하기 위해 원형질체 형성 및 재생된 균주 중에서 단백다당체를 가장 많이 생산하는 것으로 확인된 균주를 선별한 것으로, 당해 균주는 농업생명공학연구원에 2009년 5월 26일에 기탁되었으며, 기탁번호는 KACC93073P 이다.
본 발명에 따라 제조된 신균주 또는 동 균주가 생산하는 단백다당체는 의학적 또는 식품의 용도로서 제공될 수 있다.
본 발명자들은 돌연변이법과 원형질체 형성 및 재생법을 이용하여 단백다당체를 고농도로 생합성하는 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5를 개발하게 되었다. 본 발명은 상기 종래 기술이 지니는 한계를 극복하기 위해 안출된 것으로, 이에 따른 본 발명의 목적은 친균주인 야생형의 차가버섯에 비해 단백다당체의 생산성을 현저하게 높인 차가버섯(Inonotus obliquus) M5 신균주를 개발하는 것이다.
이하 본 발명의 실시예 및 실험예를 설명한다. 다만 이들 실시예 등은 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 권리범위가 이들 실시예 등에 의해 제한되는 것은 아니다.
<실시예1> 차가버섯 균사체의 액상배양
1. 차가버섯의 포자를 발아시켜 균사체를 얻는 과정
차가버섯의 균사체는 야생에서 채취한 차가버섯의 자실체로부터 수득한 포자를 발아하여 획득한 균사체를 이용하였다. 차마버섯 균사체는 계대배양용 한천배지 (맥아추출물 20 g, 효모추출물 2 g, 한천 20g, 증류수 1L)에서 24℃ 온도로 11~15일 마다 계대배양을 수행하였다. 정치배양은 정치배양 배지(포도당 22.5 g, 효모추출물 2g, 펩톤 2g, 제2인산염 2g, 황산마그네슘 0.6 g, 증류수 1L)를 이용하였으며, 균주보관은 정치배양을 통해 얻은 균사체를 4℃에 보관하거나 20% glycerol stock을 만들어 -80℃에 보관하였고, 필요시 마다 보관된 stock을 꺼내어 고체 계대배양 배지에 접종하여 배양하여 사용하였다.
2. 차가버섯 균사체를 액체배지에서 액상배양하는 과정
상기 1.의 정치배지에서 성장한 균사체를 무균적으로 수거한 후, 이를 액체배지에 5%(v/v)이 되도록 접종하였다. 세포벽다당체(IPS) 생산배지 및 세포외다당체(EPS) 생산을 위한 액상배지로는 포도당 30 g, 효모추출물 8 g, 펩톤 4 g, 제이인산염 2 g, 황산 마그네슘 2 g, 증류수 1L, pH는 5.0으로 조정된 배지를 사용하였다. 균사체의 액상배양은 진탕배양기에서 28℃, 150rpm으로 7~10일간 배양하거나, 3~5일 배양한 후 다른 플라스크로 계대배양하였다.
3. 차가버섯 배양액에서 세포외 단백다당체 및 세포내 단백다당체 정량과정
1) 균체농도 측정 및 세포외 단백다당체(EPS)의 회수
균체농도 측정은 균사체 건조중량(DCW)을 이용하였다. 배양액으로부터 균일하게 균사체를 회수한 다음 20ml의 세포를 4,000rpm에서 10분간 원심분리 하였다. 상등액을 회수하여 1.5ml 마이크로 튜브에 옮겨 남아 있는 당의 측정에 사용하였고, 나머지 상등액을 제거한 후 3번의 세척과정을 통해서 남아 있는 당, 불용성 물질이나 염류들을 제거하였다. 이 후 무게측정용 접시에 담아 90℃에서 12시간 건조하여 건조균체농도의 무게에 변화가 없는 것을 확인한 후 건조중량을 측정하여 1L당 세포농도로 환산하여 나타내었다. 세포외 단백다당체(EPS)는 건조균체농도 측정을 위해 최초 10분간 원심분리한 배양액으로부터 상등액 5ml 또는 10ml를 취한 후 2배수의 100% 에탄올을 첨가하여 -20℃에서 하룻밤을 방치한 후 4,000rpm에서 10분간 원심분리 하였다. 이 후 상등액을 제거하고, 남아있는 pellet을 90℃ oven에서 12시간 정도 건조시킨 후 무게를 측정하였다.
2) HPLC를 이용한 세포내의 단백다당체(IPS) 정량분석
차가버섯으로부터 β-D-glucan의 구조를 갖는 세포내 단백다당체(IPS)의 정량분석을 위해, 배양한 균사체를 원심분리하여 상등액을 제거한 후 증류수를 이용하여 3번의 세척과정을 수행하였다. 이후 90℃에서 12시간 건조하여 분쇄된 건조균사체 25g을 증류수 50ml에 현탁한 후, 수증기중탕기를 이용하여 2시간 추출하고 다시 40ml의 증류수를 가하여 6시간 추출하였다. 이 후 0.45μm 여과지를 이용하여 2 번의 여과 과정을 수행한 후, 추출여액 15ml를 새로운 튜브로 옮겨 2배수의 99.9% 에탄올에서 6시간 동안 침전시켰다. 이를 2,800rpm에서 10분간 원심분리한 후 상등액을 제거하고 동결건조한 후, HPLC용 gel chromatography column과 ELSD detector를 이용하여 분석하였다.
한편 세포외 다당체(EPS)의 분석은 상기의 방법에 의해 회수한 세포외 단백다당체를 막자사발을 이용하여 잘게 부순 후 적당량의 증류수에 녹이고, 0.45μm filter를 이용하여 최종적으로 얻은 시료를 상기의 HPLC 방법으로 분석하였다.
3) 당 분석
배양액 중의 당분석은 배양액을 12,000rpm에서 10분간 원심분리한 후 상등액을 취하여 12,000rpm에서 10분간 3회 원심분리를 반복 수행하여 상등액 만을 취한 후 0.45μm HPLC용 여과지를 이용하여 여과하였다. HPLC를 이용한 당분석 조건은 다음과 같았다:
- Column A: RS tech, NH2 column (250mm x 46mm)
- Column No : 091264AE
- Column temperature : 40 ℃
- Mobile phase : 75:25 (Acetonitrile : Water)
- Flow rate : 1.2 ml/min
- Detection : RI
<실시예 2> 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5의 제조
1. UV를 이용한 차가버섯 친균주의 돌연변이 유도
상기 친균주로부터 단백다당체 함량 및 생산성이 향상된 돌연변이주를 얻기 위해 친균주의 균사체를 수거하여 변이처리에 이용하였다. UV처리는 암소에서 254 nm의 UV lamp 2개를 0내지 380초 (약 97% 사멸조건) 동안 조사하여 0.1 ml씩 한천 플레이트에 도말하였다. 생존한 콜로니를 계수하여 UV를 처리하지 않은 대조군에 대한 백분율을 구하여 치사율이 약 90% 정도 되는 UV 처리시간을 변이조건으로 이용하였다. 본 결과를 바탕으로 UV의 차가버섯 친균주에 대한 최소저해농도 (Minimum inhibitory concentration: MIC)인 320초에서 UV 돌연변이 실험을 수행하였다. UV 돌연변이를 수행한 균사체는 가시광선에 의해 UV 돌연변이가 무력화되는 photoreactivation 현상을 막기 위해 약 7일간 밀봉하여 배양하였다.
2. 차가버섯 단일 콜로니 획득을 위한 원형질체의 형성
차가버섯과 같은 담자균류는 동일한 균사체 내에 여러 수의 핵이 함께 존재하는 다핵구조를 가지는 특징이 있다. 따라서 상기 돌연변이 처리를 통해 유전자에 돌연변이가 유도된 경우, 동일한 균사체 내에 각각 다른 유전형을 가진 핵이 함께 존재하게 된다. 따라서 유전적으로 동일한 단일 콜로니를 획득하기 위해서는 원형질체를 형성시켜 단일 핵을 분리시키고, 그 후에 세포로 다시 재생시키는 단계가 필수적이다.
상기 1.의 돌연변이원 처리단계를 거친 후 성장한 변이균사체를 분리하여 계대배양용 한천배지에서 7일간 배양한 후, 20% 글리세롤로 수거하여 액체 최소배지(포도당 30g, 황산암모늄 5g, 일인산칼륨 1g, 염화칼륨 0.2g, 증류수 1L)가 첨가된 250ml 플라스크에 접종하여 이를 28℃, 230rpm으로 36시간 동안 진탕배양하여 원형질체 형성에 필요한 균체를 얻었다. 플라스크에 있는 배양액과 균사체를 공극 크기가 20~25μm의 필터 (Watman No.4)에 통과시켜 배지 성분 등의 잔여물을 여과시켜 균사체만을 회수하였다. 여과를 통해 획득한 균사체를 0.6M 황산마그네슘 용액으로 2회 세척한 뒤 균체 1g을 원형질체 형성에 사용하였다.
원형질체 형성을 위해 원형질체 형성용액(0.6M 염화마그네슘, 10mM 인산염 완충액 pH 5.8) 5ml에 균체 1g과 Viscozyme L 0.05ml를 첨가하여 28℃, 80rpm으로 36시간 동안 반응시켰다. 반응 후 형성된 원형질체를 50ml conical tube에 조심스럽게 옮기고 3,000rpm으로 20분 동안 원심분리하여 상등액을 제거한 뒤, 약 5ml만 남기고 원형질체 형성 완충액 10ml을 첨가하였다. 그 후 3,000rpm에서 20분간 원심분리하여 상등액을 제거하였다. 남은 약 2ml을 원형질체 재생에 이용하였다.
3. 원형질체의 재생
상기 2.의 방법을 통해 준비된 원형질체를 원형질체 형성 완충용액에 현탁하여 1X105 protoplasts/ml 농도의 용액을 제조하였다. 그리고 이들 원형질체 용액 0.1ml을 최소 한천 배지 5ml에 첨가하여 고체 최소 한천배지 위에 중층하였다. 그 후 약 7일간 배양한 뒤, 재생된 원형질체를 측정하여 원형질체 형성률을 알아보기 위해 삼투압안정제가 첨가되지 않은 최소 배지에 접종하여 배양하였고, 콜로니 형성 여부를 비교하였고 그 사진을 도 1에 제시하였다(도 1 참조). 형성된 원형질체는 자체 제작한 0.5mm agar cylinder를 이용하여 주변의 다른 균사체가 닿지 않도록 하여 각각 분리해 낸 후 이미 만들어진 계대 배양 배지에 옮겨서 유래 단백다당체 생산성을 포한한 여러 가지 생리적 특성 비교 실험에 사용하였다.
4. 차가버섯 유래 단백다당체 고생산성 신균주 선별
본 실시예에서는 상기 UV 돌연변이를 시도한 친균주의 원형질체 중 차가버섯 유래 총 단백다당체(IPS, EPS)의 생산 능력이 우수한 돌연변이 균주들을 대량 선별하고자 하였다. 본 발명자의 선행 연구 결과에 따르면 차가버섯 균사체의 경우 세포내 단백다당체(intracellular polysaccharides)(IPS)의 함량이 세포 무게당 거의 일정한 양을 함유하고 있는 것으로 관찰되었다. 또한 세포외 단백다당체(extracellular polysaccharides)(EPS)의 생산시에도 고농도 균사체 배양이 우선되어야 하므로 돌연변이 된 균사체의 원형질체 형성을 통해 빠르게 성장하는 변이주를 선별하고자 하였다.
한편 본 실시예에서는 미생물 대량 배양을 통한 유용물질 생산에 있어서 미생물이 생성하는 색소는 제품 제조공정에서 문제를 일으킬 소지가 크므로 색소 저생산성 균주를 얻고자 하였다. 일련의 과정을 거쳐 획득된 변이주의 단백다당체 생산성과 성장률을 확인하고자 하였고 실시예 1에 제시된 방법을 이용하였다. 18종의 변이주를 선별하였고, 이들을 28℃, 250rpm, 7일간 액상배양한 후 성장속도를 비교해보았다(도 2 참조). 성장속도는 7일 배양을 종료한 후 실시예 1에 제시한 건조균체량 확인법을 이용하여 측정하였다.
한 종의 친균주에서 유래된 균주들임에도 불구하고 UV 돌연변이에 의해 매우 다양한 성격의 변이주가 생성된 것을 알 수 있었다. 친균주가 약 13g/L의 건조균체량을 보인 반면, 작게는 7g/L부터 많게는 22g/L의 성장률을 보인 균주를 선별할 수 있었다. 주목할 만한 점은 7일 배양 후 22g/L의 성장률을 보인 5번 균주는 색소를 저생산하는 균주라는 것으로써, 이는 산업규모의 생산공정에 있어서 매우 큰 장점이라고 할 수 있다. 친균주와 변이주 5번의 고체배양 사진을 도 3에 제시하였다(도 3 참조). 친균주는 색소 생산량이 많아서 배양물이 짙은 갈색을 나타내는 반면 변이주 5번은 낮은 색소 생산으로 인해 배양물이 옅은 미색을 띄는 것을 확인 할 수 있었다.
친균주에 비해 성장률이 약 1.7배 향상된 5번 신균주의 총 단백다당체 생산성을 친균주와 비교한 결과는 하기 표 1에 제시하였고, 단백다당체의 HPLC 결과를 도 4에 제시하였다(도 4 참조).
[표 1] 친균주인 신균주 5번 변이주의 총단백다당체(농도: g/L) 생산성 비교
0일째 1일째 2일째 3일째 4일째 5일째 6일째 7일째
I. obliquus
wild type		 IPS 0.035 0.07 0.14 0.21 0.42 0.63 0.84 0.91
EPS 0 0 0 0.4 0.8 1.0 1.6 1.8
I. obliquus
#5		 IPS 0.028 0.14 0.42 0.63 0.98 1.19 1.4 1.54
EPS 0 0.2 0.3 1.2 1.7 2.1 2.5 2.6
(상기 표 1에서, 단백다당체 생산배지는 포도당 30g, 효모추출물 8g, 펩톤 4g, 제이인산염 2g, 황산 마그네슘 2g, 증류수 1L을 포함하며, pH는 5.0, 온도는 28℃, 교반속도는 250rpm에서 7일간 배양 후 분석한 결과를 나타낸다.)
상기 표 1에 제시된 바와 같이 친균주에 비해 신균주의 세포내 단백다당체(IPS)와 세포외 단백다당체(EPS)의 생산성은 각각 1.7배, 1.4배 향상되어 최종적으로 총 단백다당체 생산성은 약 1.5배 증가된 것을 확인 할 수 있었다.
이에 단위시간당 성장률, 총 단백다당체 생산성, 색조 저생산 신균주인 5번 돌연변이균주를 차가버섯(Inonotus obliquus) M5로 명명하고 농업생명공학연구원에 기탁하여 기탁번호 KACC93073P를 부여받았다.
본 발명의 신균주 개발방법은 단백다당체를 고생산하는 산업균주 개발에 매우 필수적인 방법일 뿐만 아니라, 타 미생물에도 적용 가능한 범용기술이므로 다른 물질의 생산공정에도 직접적으로 적용이 가능할 것이다. 또한 본 발명을 통해 획득한 고생산 균주를 이용할 경우 차가버섯 균사체 및 단백다당체의 생산성이 극대화 되어 최종 생산물의 경제성에 매우 큰 도움을 주어 제품개발 및 시장 진출에 큰 도움이 될 것으로 기대된다.
도 1은 UV에 의하여 돌연변이된 친균주의 원형질체 형성 사진을 나타낸다.
도 2는 돌연변이된 친균주의 원형질체 형성 및 재생과정으로 분리된 단일 콜로니들(신균주들)의 7일 액상배양 결과로 획득된 건조균체량을 나타낸다.
도 3은 친균주와 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5의 고체배양시 색소 생성율을 비교한 사진을 나타낸다.
도 4는 친균주와 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5에서 생산된 단백다당체 HPLC 분석표를 나타낸다.

Claims (6)

  1. 단백다당체 생산능을 가지는 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5(KACC93073P).
  2. 제1항에 있어서, 상기 신균주는 차가버섯(Inonotus obliquus) 균사체를 UV처리한 후 원형질체를 형성시키고 상기 원형질체의 재생과정으로 제조된 것임을 특징으로 하는 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5(KACC93073P).
  3. 제1항에 있어서, 상기 단백다당체는 세포벽 구성성분인 세포내 단백다당체(intracellular exopolysaccharide: IPS) 또는 세포외로 분비되는 세포외 단백다당체(extracelluar exopolysaccharide: EPS)임을 특징으로 하는 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5(KACC93073P).
  4. 특허청구범위 제1항의 신균주 차가버섯(Inonotus obliquus) M5(KACC93073P)를 배양하고 그 배양액으로부터 단백다당체를 생산하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백다당체의 제조방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 배양은 차가버섯(Inonotus obliquus)의 포자를 발아시켜 균사체를 얻고, 상기 균사체를 액체배지에서 액상배양한 것임을 특징으로 하는 단백다당체의 제조방법.
  6. 제4항에 있어서, 상기 단백다당체는 세포벽 구성성분인 세포내 단백다당체(intracellular exopolysaccharide: IPS) 또는 세포외로 분비되는 세포외 단백다당체(extracelluar exopolysaccharide: EPS)임을 특징으로 하는 단백다당체의 제조방법.
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