KR100858059B1

KR100858059B1 - 레몬 과피로부터 디오스메틴을 제조하는 방법 및 이를유효성분으로 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR100858059B1
Application number: KR1020060119447A
Authority: KR
Inventors: 염명훈; 손의동; 박찬웅; 이상준
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2006-11-30
Filing date: 2006-11-30
Publication date: 2008-09-10
Also published as: KR20080049174A

Abstract

본 발명은 레몬 과피로부터 산, 알칼리, 효소반응을 통해 디오스메틴(diosmetin)을 제조하는 방법과 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 피부기질의 분해에 관련된 자외선에 의한 MMP-1의 생합성을 감소시킴으로써 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진시키는 효과가 뛰어난 디오스메틴을 제조하는 방법과 이를 유효성분으로 함유하는 피부 노화 예방 및 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

레몬 과피(Lemon peel), 디오스메틴(diosmetin), MMP-1, 노화방지, 주름개선

Description

레몬 과피로부터 디오스메틴을 제조하는 방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Preparing method of diosmetin from lemon peel and the cosmetic composition containing thereof as active ingredient}

본 발명은 레몬 과피로부터 산, 알칼리, 효소반응을 통해 디오스메틴을 제조하는 방법과 이를 유효성분으로 함유하는 피부노화 또는 주름생성 방지용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 제기관을 온도 및 습도 변화, 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해 주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 하고 있다. 그러나, 자외선, 외부로부터 받는 과도한 물리적, 화학적 자극 및 스트레스, 영양결핍 등은 피부의 정상기능을 저하시키고 탄력손실, 각질화, 주름생성 등의 피부 노화현상을 촉진시킨다.

특히 각질세포가 차례차례로 계속해서 만들어지면서, 최외층의 오래된 각질세포가 때때로 이탈하여 표피가 일정한 두께를 유지하게 하는 각화과정이 순조롭지 못하면, 비정상적인 각질세포가 생성되며, 이것이 피부 표면에 쌓여 각질층이 두꺼 워지게 되면, 피부가 거칠어지고, 칙칙해지며, 미세한 잔주름이 생기게 되어 결국 피부 노화가 진행되게 된다. 또한, 자외선에 의한 MMP-1의 생합성으로 인한 타입 1 프로콜라겐의 생합성 감소도 피부 노화와 관련이 있다.

따라서, 이러한 현상을 방지하고 보다 건강하고 탄력 있는 피부를 유지하기 위하여, 종래부터 각종 동물, 식물, 미생물 등으로부터 얻은 생리활성 물질들이 강화된 화장품을 사용함으로써 피부의 고유기능을 유지시키고 피부세포를 활성화시켜 피부 노화를 효과적으로 억제하기 위한 노력이 있어 왔다.

그러나, 기존의 화장품 원료들은 대부분 효능이 미진하거나 피부 부작용을 유발하는 등 여러 가지 문제점을 가지고 있다. 따라서, 피부 부작용을 유발하지 않으면서도 피부 노화방지 효과를 갖는 원료에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.

이에, 본 발명자들은 천연물 중에서 피부 부작용을 유발하지 않으면서 피부 노화 방지 효과를 가지는 원료를 찾기 위해 노력한 결과, 레몬 과피에서 분리한 디오스메틴이 피부노화 방지와 관련된 효과, 즉 자외선에 의한 MMP-1의 생합성을 감소시켜 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진하는 효과가 있음을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명은 기존의 천연물로부터 단순 추출한 추출액을 사용한 것이 아니라, 분리 정제와 산, 알칼리 및 효소반응을 통하여 자외선에 의한 MMP-1 억제효과가 뛰어난 디오스메틴을 발견 및 제조하고자 하였으며, 추출물에 포함된 미지의 성분으 로부터 발생될 수 있는 안전성의 문제도 해결하고자 하였다.

따라서, 본 발명은 레몬 과피로부터 산, 알칼리, 효소가수분해 반응을 통해 디오스메틴을 제조하는 방법과, 이를 함유하여 피부 노화 또는 주름 생성을 효과적으로 예방하거나 치료할 수 있는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 레몬 과피로부터 분리 정제와 산, 알칼리 및 효소반응을 통하여 디오스메틴을 제조하는 방법을 제공한다.

또한, 상기의 디오스메틴을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 노화 억제 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 상기 디오스메틴은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~5중량%로 함유됨을 특징으로 한다.

이하 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.

본 발명에 사용된 레몬은 세계 여러 나라에서 먹고 있는 감귤과실의 일종이다. 레몬 과즙의 상쾌한 신맛의 성분은 구연으로 피로회복 효과, 아스콜빈산에는 괴혈병 예방효과, 바이오 플라보노이드(bioflavonoid)나 비타민 P라고 하는 헤스페리딘(hesperidin)에는 모세혈관의 강화작용이 있다고 알려져 있다. 또한 레몬에는 많은 후라보노이드(flavonoid) 화합물이 포함되어 있고, 이러한 후라보노이드들은 항 알러지 작용, 항 바이러스 작용, 항 염증 작용뿐만 아니라 항 히스타민, 항 암 작용 등을 한다는 보고가 있다. 이에 본 발명자들은 레몬 유래의 후라보노이드에 관심을 갖게 되었고, 특히 레몬 과피에 많은 후라보노이드들이 함유되어 있음을 확인하였다. 그리고 많은 후라보노이드 중, 특히 디오스메틴을 분리하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명에서는 헥산 혹은 이와 유사한 유기용매를 이용하여 레몬 과피 내의 오일 성분을 제거하였다. 오일이 제거된 레몬 과피의 잔류물을 물과 물을 포함한 유기용매 또는 유기용매를 이용하여 추출하고, 이 추출물을 여과, 농축하였다. 디오스메틴은 상기의 추출물을 산, 알칼리 가수분해 또는 효소를 이용하여 가수분해하는 방법으로 제조하였다.

효소를 이용하여 가수분해시에는 당결합을 분해하는 β-글루코시다아제(β-glucosidase), α, β-아라비노시다아제(α, β-arabinosidase), α, β-라모시다아제(α, β-rhamosidase) 등 엑소 당결합분해효소 및 이들을 함유하고 있는 복합효소제를 사용하였다.

위의 가수분해 방법으로 얻은 가수분해물들로부터 디오스메틴의 분리는 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 이용하며, 이때 사용하는 용매는 클로포름과 메탄올의 농도구배를 이용하였다.

본 발명에서 목적하는 효과를 얻기 위하여 상기 디오스메틴은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 5중량% 양으로 함유된다. 함량이 0.0001 중량％ 미만일 경우에는 상기 성분에 의한 항노화 효과 등을 얻을 수 없고, 함량이 5중량％ 초과가 될 경우에는 함량 증가에 비해 효과의 증가가 크지 않기 때문이다.

본 발명의 화장료는 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 보디로션, 보디크림, 보디오일, 보디에센스등의 화장료로 제형화될 수 있다.

이하, 제조예 및 시험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

[제조예 1] 레몬 과피 추출물 제조

레몬 과피 1㎏을 헥산 혹은 이와 유사한 유기용매 5L를 이용하여 추출하고 유기용매 층을 분리하여 제거하였다. 위 공정을 3회 이상 반복하여 오일을 완전히 제거한 레몬 과피를 얻었다. 오일이 제거된 레몬 과피에 물과 물을 포함한 유기용매(에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 크로로포름 등) 또는 유기용매 5L를 넣고, 3회 환류 추출한 후, 15℃에서 하루동안 방치하여 침적시켰다. 위 공정을 2회 반복하여 추출액을 얻었으며, 추출액을 여과한 후 그 여과액을 진공 농축기에서 농축하여 건고물 100g을 얻었다.

[제조예 2] 산가수분해물의 제조

제조예 1에서 얻은 레몬 과피 추출물 30g을 20배(v/w)의 7% 황산/50% 에탄올 용액(v/w)을 가하고, 100℃ 수욕조에서 6시간 동안 가열 환류시킴으로써 디오스메 틴 배당체에 결합된 당결합을 가수분해시켰다. 반응액을 감압농축하여 용매를 제거하고, 잔사에 증류수(1,000㎖)를 가해 현탁시킨 후, 동량의 에테르로 3회 추출하였다. 총 에테르층을 증류수로 세척한 뒤, 무수황산마그네슘(MgSO₄)으로 탈수, 여과, 농축하여 산가수분해물 1.5g을 얻었다.

[제조예 3] 염기가수분해물의 제조

제조예 1에서 얻은 레몬 과피 추출물 10g을 건조피리딘(500㎖)에 녹이고, 여기에 파우더(powder)형태의 메톡사이드 나트륨(sodium methoxide) 10g을 가해 유욕상에서 8시간 동안 환류 반응시킴으로써, 디오스메틴 배당체의 당결합을 가수분해시켰다. 반응액을 감압농축하여 용매를 제거하고, 잔사에 증류수(500㎖)를 가해 현탁시킨 후, 동량의 에테르로 3회 추출하였다. 총 에테르층을 증류수로 세척한 뒤, 무수황산마그네슘(MgSO₄)으로 탈수, 여과, 농축하여 염기가수분해물 0.4g을 얻었다.

[제조예 4] 효소가수분해물의 제조

제조예 1에서 얻은 레몬 과피 추출물 30g을 1000㎖의 0.1M 초산완충용액(pH 4.5)에 용해시키고, 여기에 효소 25g을 첨가하였다. 이때 사용하는 효소는 당결합을 분해하는 β-글루코시다아제(β-glucosidase), α, β-아라비노시다아제(α, β-arabinosidase), α, β-라모시다아제(α, β-rhamosidase) 등 엑소 당결합분해효소 및 이들을 함유하고 있는 복합효소제이다. 효소 첨가 후, 37℃ 수욕상에서 48시 간 동안 교반시키면서, 박층크로마토그래피에 의해 주기적으로 확인하여, 기질이 완전히 소실되면 열수중에서 10분간 가열하여 반응을 종료시킨 다음, 반응액은 동량의 에테르로 3회 추출, 여과, 농축하여 생성물 2g을 얻었다.

[제조예 5] 산가수분해물로부터의 디오스메틴의 제조

제조예 2에서 얻은 산가수분해물 1g을 실리카겔 칼럼크로마토그래피(실리카겔 200g 충진)로 정제하였다. 전개용매로는 클로로포름과 메탄올을 사용하였으며, 클로로포름과 메탄올의 비를 10:1에서 2:1까지 농도구배를 높여 분획을 얻었고, 이들 분획으로부터 디오스메틴 0.05g을 얻었다.

[제조예 6] 염기가수분해물로부터의 디오스메틴의 제조

제조예 3에서 얻은 염기가수분해물 1g을 실리카겔 칼럼크로마토그래피(실리카겔 200g 충진)로 정제하였다. 전개용매로는 클로로포름과 메탄올을 사용하였으며, 클로로포름과 메탄올의 비를 10:1에서 2:1까지 농도구배를 높여 분획을 얻었고, 이들 분획으로부터 디오스메틴 0.02g을 얻었다.

[제조예 7] 효소가수분해물로부터의 디오스메틴의 제조

제조예 4에서 얻은 효소가수분해물 1g을 실리카겔 칼럼크로마토그래피(실리카겔 200g 충진)로 정제하였다. 전개용매로는 클로로포름과 메탄올을 사용하였으며, 클로로포름과 메탄올의 비를 10:1에서 2:1까지 농도구배를 높여 분획을 얻었 고, 이들 분획으로부터 디오스메틴 0.1g을 얻었다.

[시험예 1] 자외선에 의한 타입 I 콜라게나제(MMP-1)의 생합성 억제능 관찰

인체 섬유아세포를 24-공 평판 배양기(well plate)에 10⁴ 개의 농도로 넣고 10% 우태아 혈청이 들어있는 DMEM 배지에서 37℃로 배양한 후, 제조예 1, 4, 5에서 제조한 각 시료를 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 48시간 후 상징액을 수확해서 ELISA(AP biotech RPN2610) 방법을 사용하여 생성된 타입 I 콜라게나제의 양을 정량하였고, 아무것도 처리하지 않은 대조군을 100으로 하여 측정한 비교치를 표 1에 나타내었다.

	MMP-1 저해율 (%)
시험농도	음성대조군	제조예 1	제조예 4	제조예 5
1ppm	100	10	22	45
10ppm	100	15	34	75

실험 결과, 제조예 5에서 제조한 디오스메틴이 자외선에 의한 타입 I 콜라게나제의 생합성을 월등히 감소시킴을 알 수 있었고, 이 결과로 디오스메틴이 피부기질의 분해를 효과적으로 막아주어 피부 주름개선에 기여할 수 있을 것으로 판단되었다.

[시험예 2] 피부세포의 콜라겐 생합성 효능 측정

인체 섬유아세포를 24- 공 평판 배양기(well plate)에 10⁴ 개의 농도로 넣고 10% 우태아 혈청이 들어있는 DMEM 배지에서 배양한 후, 제조예 1, 4, 5에서 제조한 각 시료를 1ppm, 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 48시간 후 상징액을 수확해서 ELISA(Takara MK101) 방법을 사용하여 생성된 프로콜라겐의 양을 정량하였고, 대조군을 100으로 한 비교치를 표 2에 나타내었다.

	타입 1 프로콜라겐 생합성(%)
시험농도	음성대조군	제조예 1	제조예 4	제조예 5
1ppm	100	102	101	125
10ppm	100	104	110	138

실험 결과, 제조예 5에서 제조한 디오스메틴이 타입 I 콜라겐 생합성을 증가시킴을 알 수 있었다. 이 결과에 의해 디오스메틴이 피부노화 개선에 효과를 나타내는 것으로 판단할 수 있다.

이하, 상기의 시험예의 결과를 근거로 하여, 제조예 5의 디오스메틴을 함유하는 여러 가지 제형의 화장료의 조성을 제시한다. 그러나 본 발명의 조성물이 하기의 예에만 한정되는 것은 아니다.

[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)

본 발명에 따른 유연화장수는 하기 표 3의 조성으로 제조하였다.

배합성분	중량%
제조예 5	0.5
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
PEG 12 노닐페닐에테르	0.2
폴리솔베이트 80	0.4
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

[제형예 2] 영양화장수(밀크로션)

본 발명에 따른 영양 화장수는 하기 표 4의 조성으로 제조하였다.

배합성분	중량%
제조예 5	0.5
스쿠알란	5.0
밀납	4.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.5
유동파라핀	0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

[제형예 3] 마사지크림

본 발명에 따른 마사지크림은 하기 표 5의 조성으로 제조하였다.

배합성분	중량%
제조예 5	0.5
밀납	10.0
폴리솔베이트 60	1.5
PEG 60 경화피마자유	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.8
유동파라핀	40.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

[제형예 4] 팩

본 발명에 따른 팩은 하기 표 6의 조성으로 제조하였다.

배합성분	중량%
제조예 5	1.0
폴리비닐알콜	13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스	0.2
글리세린	5.0
알란토인	0.1
에탄올	6.0
PEG 12 노닐페닐에테르	0.3
폴리솔베이트 60	0.3
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

[제형예 5] 젤

본 발명에 따른 젤은 하기 표 7의 조성으로 제조하였다.

배합성분	중량%
제조예 5	0.5
에틸렌디아민초산나트륨	0.05
글리세린	5.0
카르복시비닐폴리머	0.3
에탄올	5.0
PEG 60 경화피마자유	0.5
트리에탄올아민	0.3
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 디오스메틴은 피부기질의 분해에 관련된 자외선에 의한 MMP-1의 생합성을 감소시킴으로써 피부기질의 분해를 효과적으로 막아주어 피부 주름개선에 기여할 수 있으며, 또한 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진시킴으로써 피부노화 및 주름방지에 효과적으로 사용될 수 있다.

Claims

삭제
삭제
삭제
디오스메틴을 유효성분으로 함유하는 주름 개선용 화장료 조성물.
제 4항에 있어서, 상기 디오스메틴은 조성물의 총 함량에 대하여 0.0001~5중 량% 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
삭제
제 4항에 있어서, 상기 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 보디로션, 보디크림, 보디오일 또는 보디에센스의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.