KR100719029B1 - Micro-well Plate - Google Patents

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Abstract

본 발명은, 미세한 웰(well)이 복수개 형성되어 있어 매우 적은 부피의 화학반응장치 및/또는 미생물을 동정하거나 계수할 수 있는 마이크로-웰 플레이트에 관한 것이다.The present invention relates to a micro-well plate having a plurality of fine wells and capable of identifying or counting a very small volume of chemical reactors and / or microorganisms.

본 발명에 의한 마이크로-웰 플레이트를 사용하여 미생물을 동정하고 그 수를 측정할 경우, 종래의 방법보다 소요시간이 대폭 단축되고, 간단하며 정확하게 측정할 수 있게 된다.When microorganisms are identified and the number is measured using the micro-well plate according to the present invention, the time required is significantly shorter than that of the conventional method, and it is possible to measure simply and accurately.

마이크로-웰, 마이크로웰, 반응장치, 미생물, 동정, 계수, 미생물 수 Micro-wells, Microwells, Reactors, Microorganisms, Identification, Counting, Microbial Count

Description

마이크로-웰 플레이트{Micro-well Plate} Micro-well Plate             

도 1은 본 발명의 마이크로-웰 플레이트를 제작하는 과정을 보여주는 모식도.1 is a schematic diagram showing a process of manufacturing a micro-well plate of the present invention.

도 2는 본 발명에 의한 마이크로-웰 플레이트의 평면도 및 부분확대도.Figure 2 is a plan view and partial enlarged view of a micro-well plate according to the present invention.

도 3은 본 발명에 의한 마이크로-웰 플레이트를 이용하여 피검액 중의 미생물을 촬영한 사진.Figure 3 is a photograph of the microorganisms in the test solution using the micro-well plate according to the present invention.

본 발명은 미세한 웰(well)이 복수개 형성되어 있어 매우 적은 부피의 화학반응장치 및/또는 미생물을 동정하거나 계수할 수 있는 마이크로-웰 플레이트에 관한 것이다.The present invention relates to a micro-well plate in which a plurality of fine wells are formed to identify or count a very small volume of chemical reactors and / or microorganisms.

현재, 실험실 수준에서의 각종 화학, 생물적 반응은 통상 시험관에서 이루어지거나, 경우에 따라서는 소형 튜브에서 이루어지는 것이 현실이다. 이 경우 반응 액의 부피는 0.1∼100㎖에 이르고 있는데, 일반적으로 화학실험 생물학 실험의 시료들은 매우 고가이기 때문에 반응액의 부피는 실험의 경제성을 낮게하는 요인이 되고 있다. 또한 반응액의 부피가 크기 때문에 전체 반응이 균일하게 일어나기 어렵다는 단점도 있다. At present, various chemical and biological reactions at the laboratory level are usually carried out in a test tube or, in some cases, in a small tube. In this case, the volume of the reaction solution ranges from 0.1 to 100 ml. In general, the volume of the reaction solution is a factor that lowers the economic efficiency of the experiment because the samples of the biological experiment biological experiment is very expensive. In addition, there is a disadvantage that the entire reaction is difficult to occur uniformly because the volume of the reaction solution is large.

따라서 미세 부피의 반응액을 이용하여 원하는 결과를 얻을 수 있는 반응장치가 개발될 필요성이 있다.Therefore, there is a need to develop a reaction apparatus that can obtain a desired result using a fine volume of the reaction solution.

한편, 검체중의 미생물 동정 및 그 수의 측정은 미생물학 분야에서뿐만 아니라, 우리의 실생활에서 그 응용 범위가 다양하다. 예를 들면, 대량생산된 식품, 유제품, 육류, 해산물, 화장품 및 약품의 생산 및 가공 공정시 발생될 수 있는 미생물로 인한 오염 검사에 가장 기초적인 방법으로 널리 이용되고 있다. On the other hand, the identification of microorganisms in the specimen and the measurement of the number thereof have a wide range of applications not only in the field of microbiology but also in our real life. For example, it is widely used as the most basic method for screening contamination caused by microorganisms that may occur during the production and processing of mass-produced food, dairy products, meat, seafood, cosmetics and drugs.

그러나, 종래의 미생물 동정 및 수 측정방법으로는 배양방법, 아데노신 삼인산(adenosine triphosphate, ATP) 측정방법, 면역분석방법 및 DNA 또는 RNA 탐침을 이용한 검출방법 등이 있으나, 각각이 내포하고 있는 단점 및 한계로 인하여 널리 활용되지 못하고 있는 실정이다. However, conventional microorganism identification and number measurement methods include culture methods, adenosine triphosphate (ATP) measurement methods, immunoassay methods, and detection methods using DNA or RNA probes. Due to the situation is not widely used.

배양방법은 미생물을 평판배지에 배양하여 어느 정도 성장이 이루어진 다음, 그 수를 육안으로 측정하는 방법으로서, 소요되는 시간이 길고 정확성이 떨어지는 단점을 지니고 있다. ATP 측정방법은 모든 살아있는 개체에 존재하는 세포내 구성요소인 ATP의 양을 측정하여 미생물의 수를 산출하는 방법으로서, 생장하는 것과 사멸한 것에 상관없이 전체 미생물수를 얻어 신뢰도가 떨어질 뿐 아니라 미생물의 종류를 판별할 수 없는 단점이 있다. 면역분석 방법은 목적하는 미생물에 특이적인 항체를 이용하여 특정 미생물의 존재 및 그 수를 산출하는 방법으로서, 특정 미생물에만 한정되며, 분석을 위해 고가의 장비 및 경비가 소요되는 단점이 있다. DNA 또는 RNA 탐침을 이용한 검출방법은 단계가 매우 복잡하고, 인체에 유해한 시약을 사용하게 된다는 단점을 갖고 있다.The culturing method is a method of cultivating microorganisms in a plate medium and growing to some extent, and then measuring the number with the naked eye, which has a long time and has a disadvantage in accuracy. The ATP method is a method of calculating the number of microorganisms by measuring the amount of ATP, an intracellular component present in all living individuals, and the total number of microorganisms is obtained regardless of growth and death. There is a disadvantage that cannot be determined. The immunoassay method is a method for calculating the presence and the number of specific microorganisms by using an antibody specific for a desired microorganism, and is limited to a specific microorganism and has a disadvantage of requiring expensive equipment and expense for analysis. Detection methods using DNA or RNA probes have the disadvantage that the steps are very complicated and use reagents harmful to the human body.

따라서, 종래의 미생물 동정 및 계수방법의 단점을 극복하며, 간단하며 신속하고 정확하게 미생물을 동정하고 그 수를 측정하는 장치를 개발하여야할 필요성이 대두되고 있다.Therefore, there is a need to overcome the disadvantages of the conventional microorganism identification and counting method, and to develop a device for identifying and measuring the number of microorganisms simply, quickly and accurately.

이에, 본 발명자들은 미세체적의 반응액으로도 실험이 가능한 미세체적 반응장치, 및 간단ㆍ신속ㆍ정확하게 미생물을 동정하고 그 수를 측정할 수 있는 장치 및 방법을 개발하고자 예의 연구·노력한 결과, 복수 개의 마이크로 웰을 만들어 제작한 마이크로-웰 플레이트를 이용할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.Accordingly, the inventors of the present invention sought to develop a microvolume reaction apparatus capable of experimenting even with a microvolume reaction solution, and an apparatus and method for easily and quickly identifying microorganisms and measuring the number thereof. The present invention was completed by confirming that micro-well plates prepared by making two micro wells could be used.

결국, 본 발명의 주된 목적은 미세체적 반응장치 겸 미생물 판별장치로 사용될 수 있는 마이크로-웰 플레이트를 제공하는 것이다.
After all, the main object of the present invention is to provide a micro-well plate that can be used as a microvolume reaction device and a microorganism discriminator.

상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명은, 깊이가 2∼30 ㎛, 부피가 0.1 nℓ∼10 ㎕인 마이크로-웰이 복수 개 형성되어 있으며, 웰 입구의 변의 길이(웰의 입구가 정사각형일 때) 또는 직경(웰의 입구가 원형일 때)이 웰 깊이의 2~120배인 것을 특징으로 하는 플라스틱, 단결정 실리콘 또는 단결정 게르마늄 재질의 마이크로-웰 플레이트에 관한 것이다.In order to achieve the above object, the present invention provides a plurality of micro-wells having a depth of 2 to 30 µm and a volume of 0.1 nL to 10 µl, and the length of the well inlet side (when the inlet of the well is square). ) Or diameter (when the inlet of the well is circular) is 2 to 120 times the depth of the well relates to a micro-well plate of plastic, monocrystalline silicon or monocrystalline germanium.

본 발명에서 웰의 부피는 화학적, 생물학적 반응의 규모 또는 측정하고자 하는 미생물의 특징에 따라 조절될 수 있으며, 웰의 깊이(즉, 두께)는 상기 현미경의 초점조절이 필요 없을 정도의 깊이(즉, 현미경의 초점이 잡히는 거리 범위)이면서, 세균의 평균 사이즈(1 ∼3 ㎛) 보다는 깊고 미생물이 웰내에서 층상으로 배치되지 않도록 할 수 있는 정도의 두께로 정할 수 있다. 다만, 실험에 의하면 웰의 깊이가 25 ㎛가 되어도 피검액을 점적한 후 약 1∼2분 경과하면 세포가 웰의 바닥으로 침강하는 현상이 발견되었다. 따라서 실질적으로 웰의 깊이는 세균의 평균 사이즈(1 ∼3 ㎛) 보다 깊기만 하면 적용상의 제한이 없다.In the present invention, the volume of the well may be adjusted according to the scale of chemical and biological reactions or the characteristics of the microorganism to be measured, and the depth of the well (that is, the thickness) is such that the depth of the microscope does not require focusing (ie, Distance within the focus range of the microscope), it can be set to a thickness that is deeper than the average size of the bacteria (1-3 μm) and prevents microorganisms from being layered in the wells. However, the experiment revealed that even if the depth of the well was 25 μm, the cells settled to the bottom of the well after about 1 to 2 minutes after dropping the test liquid. Therefore, as long as the depth of the well is actually deeper than the average size of the bacteria (1-3 μm), there is no application limitation.

본 발명에서 마이크로-웰 플레이트의 재질은 취급이 용이하고 미세가공이 가능한 임의의 재질이라도 가능하다. 예를들면, 마이크로-웰 플레이트를 위한 금형(mold)에 통상의 열가소성수지 또는 열경화성수지를 사출(injection molding)하여 제작할 수 있다. 또한 종래 반도체 공정에서 사용되는 단결정 실리콘 또는 단결정 게르마늄을 적용할 수도 있다.In the present invention, the material of the micro-well plate may be any material that can be easily handled and finely processed. For example, it can be produced by injection molding a conventional thermoplastic or thermosetting resin into a mold for a micro-well plate. In addition, single crystal silicon or single crystal germanium used in a conventional semiconductor process may be applied.

단결정 실리콘 또는 단결정 게르마늄 재질의 것은 표면결함이 거의 없기 때문에 미생물 또는 미세입자를 배경과 용이하게 구분할 수 있는 장점이 있다. 또한 실리콘이나 게르마늄은 유기용매, 산, 알칼리에 대하여 내부식성이 있다. 따라서 다양한 화학적, 생물학적 실험을 위해 여러 가지 시약(staining 등)을 자유롭게 사용할 수 있을 뿐만 아니라 용매선택에 제약이 없게 된다. 또한 현재 반도체산업에서 널리 사용되고 있는 반도체 공학기술을 활용하여 수십 nm 이하의 수평오차 보정기능, 수십 nm 정도의 정밀한 micro-stepping 기능 등을 활용하여 미세하고 정교한 웰을 구성할 수 있게 된다.Since single crystal silicon or single crystal germanium material has almost no surface defects, there is an advantage of easily distinguishing microorganisms or microparticles from the background. Silicon and germanium are also corrosion resistant to organic solvents, acids and alkalis. Therefore, various reagents (staining, etc.) can be freely used for various chemical and biological experiments, and there is no restriction in solvent selection. In addition, by using semiconductor engineering technology widely used in the semiconductor industry, it is possible to construct fine and sophisticated wells by using horizontal error correction function of several tens of nm or less and precise micro-stepping function of several tens of nm.

본 발명에서 마이크로-웰 플레이트상에 형성되는 웰의 수는 필요에 따라 다양하게 선택할 수 있다. 통상 많이 사용하고 있는 96-웰을 적용할 수도 있으며, 관찰의 집적도를 높이기 위해 20 개의 96-웰로 구성되는 총 1920-웰이 적용될 수도 있다.The number of wells formed on the micro-well plate in the present invention can be variously selected as necessary. A commonly used 96-well may be used, and a total of 1920-wells consisting of 20 96-wells may be applied to increase the degree of observation.

통상적인 96-웰의 부피(working volume)가 약 200-250 ㎕인데 반하여 본 발명에 의한 마이크로-웰 플레이트에 형성된 웰의 부피는 0.1 nℓ 내지 10 ㎕이므로 약 이십만분의 일의 부피 감소효과가 있다. 화학 또는 생물학 실험에서 사용되는 시약 등이 비교적 고가임을 감안한다면 시약 사용에 있어 원가절감 효과뿐만 아니라, 실험 대상물의 부피가 매우 적기 때문에 반응속도 향상의 효과를 얻을 수 있을 것이다.While the working volume of a typical 96-well is about 200-250 μl, the volume of the well formed on the micro-well plate according to the present invention is 0.1 nL to 10 μl, which is about a volume reduction effect of about one hundred thousand minutes. . Considering that the reagents used in the chemical or biological experiments are relatively expensive, not only the cost saving effect of the reagents but also the volume of the test object is very small, and thus the reaction rate may be improved.

한편, 본 발명에 의한 마이크로-웰 플레이트의 웰에는 각 웰마다 고유번호를 부여하여 관련장비들이 필요위치로 이동하는 것을 자동으로 제어할 수 있는 기준을 마련하는 것이 바람직하다. 이에 의해 각 웰마다 요구되는 반응 및 분석을 동시에 독립적으로 처리할 수 있게 된다.On the other hand, the well of the micro-well plate according to the present invention is preferably given a unique number for each well to provide a standard that can automatically control the movement of the associated equipment to the required position. This makes it possible to independently process the reactions and assays required for each well simultaneously.

본 발명에 의한 마이크로-웰 플레이트는 단순한 현미경 또는 영상촬영기가 부착된 현미경과 결합되어 미세체적 반응장치 또는 미생물 판별장치로 활용될 수 있다. The micro-well plate according to the present invention may be combined with a microscope attached to a simple microscope or an imager and used as a microvolume reaction apparatus or a microorganism discriminator.

이때 광학현미경은, 예컨대, 미생물과 이물질의 외형이 구분될 수 있도록 적절한 배율의 것을 사용하는 것이 바람직하다. At this time, it is preferable to use an optical microscope having an appropriate magnification so that the appearance of the microorganism and the foreign matter can be distinguished.

본 발명에 의한 마이크로-웰 플레이트는 불투명한 재질(예를들면, 단결정 실리콘)이기 때문에, 일반적인 투광형 현미경(transmitted microscope)이 아닌 반사형 현미경(reflective microscope)이 적용된다. 일반적으로 반사형 현미경은 재료공학분야에서 많이 사용되지만, 본 발명자들이 확인한 결과 반사형 현미경이 반응액의 상태나 미생물을 관찰함에 있어 해상도 및 조작에 적절함을 알 수 있었다. Since the micro-well plate according to the present invention is an opaque material (for example, single crystal silicon), a reflective microscope is applied rather than a general transmitted microscope. In general, the reflective microscope is widely used in the field of materials engineering, but the inventors confirmed that the reflective microscope is suitable for resolution and manipulation in observing the state of the reaction solution or microorganisms.

상기 영상촬영기는, 종래 영상분야에서 개발되어 사용되고 있는 기기 중 적절한 것을 선택할 수 있다. 그러나 촬영된 영상은 추후 디지털 처리를 거치는 것이 바람직하므로, 디지털 영상촬영기인 것이 바람직하다. 상기 영상촬영기는 광학 현미경을 통해 관찰되는 영상을 입력받게 된다. 이 경우, 사용자는, 본 발명에 의한 마이크로-웰 플레이트의 웰에 피검액을 점적한 다음, 영상촬영기가 장착된 현미경을 사용하여 각 마이크로-웰의 영상을 촬영하고, 촬영된 각 마이크로-웰의 영상을 육안으로 확인하여 미생물의 수를 확인하는 과정을 통해 용이하게 미생물을 동정하거나 미생물의 수를 측정할 수 있게 된다. 이때 필요에 따라서 촬영된 영상을 확대증폭시키는 것도 바람직하다.The imager may select an appropriate device among devices developed and used in the conventional image field. However, since the captured image is preferably subjected to digital processing later, it is preferable that the image is a digital imager. The imager receives an image observed through an optical microscope. In this case, the user drops the test liquid into the well of the micro-well plate according to the present invention, and then photographs each micro-well using a microscope equipped with an imager, and photographs each micro-well. By visually checking the image to check the number of microorganisms, microorganisms can be easily identified or the number of microorganisms can be measured. At this time, it is also preferable to enlarge and amplify the captured image as necessary.

나아가 본 발명에 의한 마이크로-웰 플레이트는, 영상촬영기를 통해 입력된 마이크로-웰내의 반응액 영상을 분석하여 반응의 진행도를 측정하는 반응분석 프로그램이 장착된 컴퓨터를 추가함으로써 미세체적 반응장치 겸 미생물 판별장치에서의 반응상황을 자동으로 모니터링할 수 있는 장치에 적용될 수 있다. 예컨대, 반응이 진행되면서 반응액의 색상이 변화하는 반응인 경우, 촬영된 영상에서 반응액의 색상 변화를 분석함으로써 반응의 정도를 파악할 수 있게 되는 것이다.Furthermore, the micro-well plate according to the present invention is a micro-volume reaction apparatus and microorganism by adding a computer equipped with a reaction analysis program for measuring the progress of the reaction by analyzing the reaction solution image in the micro-well input through the imager. It can be applied to a device that can automatically monitor the reaction status of the discriminating device. For example, when the color of the reaction solution changes as the reaction proceeds, the degree of the reaction may be determined by analyzing the color change of the reaction solution in the photographed image.

또한 본 발명에 의한 마이크로-웰 플레이트는, 각종 미생물의 영상이 저장되어 있는 영상DB와, 영상촬영기를 통해 입력된 마이크로-웰의 영상을 패턴분석하여 피사물 중에서 배경과 미생물과 이물질을 구분하고, 영상DB를 참조하여 미생물을 동정 및/또는 계수하는 패턴분석 프로그램이 설치된 컴퓨터와 함께 사용될 수도 있다. 이때 패턴분석 프로그램은 종래 영상처리 분야에서 개발된 적절한 프로그램을 적용할 수 있을 것이다.In addition, the micro-well plate according to the present invention, pattern analysis of the image DB and the image of the micro-well input through the imager to store the image of various microorganisms to distinguish the background and microorganisms and foreign matter from the subject, It may be used with a computer equipped with a pattern analysis program for identifying and / or counting microorganisms with reference to the image DB. In this case, the pattern analysis program may apply an appropriate program developed in the conventional image processing field.

또한, 상기 패턴인식 프로그램을 적용하는 경우, 마이크로-웰 플레이트에 피검액을 점적하고, 영상촬영기가 장착된 현미경을 사용하여 각 마이크로-웰의 영상을 촬영한 다음, 패턴분석 프로그램을 이용하여 상기 촬영된 각 마이크로-웰의 영상을 패턴분석하여 피사물 중에서 미생물과 이물질을 형태적으로 구분하고, 영상DB를 참조하여 미생물의 종류를 판별(동정)하거나 미생물의 수를 자동으로 계수하는 과정을 통한 미생물 동정 및 그 수의 측정방법이 가능하다.In addition, in the case of applying the pattern recognition program, drop the test liquid on the micro-well plate, take an image of each micro-well using a microscope equipped with an imager, and then take the image using a pattern analysis program. Microorganisms through pattern analysis of each micro-well image, which formally distinguishes microorganisms and foreign substances from the subjects, and identifies (identifies) microorganism types or counts the number of microorganisms automatically with reference to the image DB. Identification and measurement of the number are possible.

이하, 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 구체적으로 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 구체적으로 설명하는 것으로, 이들 실시예에 의해 본 발명의 범위가 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자들에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are only to specifically describe the present invention, it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not limited by these examples.

실시예 1 : 실리콘 웨이퍼를 재료로 한 마이크로-웰 플레이트의 제작Example 1 Fabrication of Micro-well Plates Made of Silicon Wafers

24,200 ×16,200㎛ 크기의 반도체용 단결정 실리콘 웨이퍼로부터 제작(dice)된 실리콘 칩의 표면에 가로200×세로200×깊이25㎛ 크기의 웰을 40 rows ×48 column 으로 1920개 형성시켰다. 제작공정을 도 1에 도시하였는데, 통상적인 반도체 제작공정에 적용되는 기술을 차용하였다. 구체적으로는 다음과 같은 단계를 거쳐 제작하였다.On the surface of a silicon chip manufactured from a single crystal silicon wafer for semiconductors having a size of 24,200 x 16,200 μm, 1920 wells having a width of 200 × length 200 × 25 μm were formed in 40 rows × 48 columns. The manufacturing process is shown in FIG. 1, but the technology applied to the conventional semiconductor manufacturing process was borrowed. Specifically, it was produced through the following steps.

① 결정구조가 <100>인 단결정 실리콘 웨이퍼(silicon wafer) 양 표면에 장시간 식각액(etchant 용액)에 견딜 수 있는 보호막(protection layer)을 증착시켰다.① A protection layer was deposited on both surfaces of a single crystal silicon wafer having a crystal structure of <100> to withstand an etchant for a long time.

② 웨이퍼의 일측면(polish side)에 포토레지스트(photo resist)를 얇게 코팅하였다.② A thin photoresist was coated on one side of the wafer.

③ 마이크로-웰 플레이트를 위한 패턴마스크를 인쇄한 후 노광(expose)하여 현상(develop)하였다.③ The pattern mask for the micro-well plate was printed and then exposed and developed.

④ 노광된 보호막을 식각(etch)한 후 남아있는 포토레지스트를 제거하였다.(4) After etching the exposed protective film, the remaining photoresist was removed.

⑤ 패턴이 식각된 웨이퍼를 식각액에 담가 약 25 ㎛ 정도 식각하였다.⑤ The wafer with the pattern etched was immersed in the etching solution and etched about 25 μm.

⑥ 보호막을 제거하여 소수성 마이크로-웰 플레이트를 완성하였다.⑥ The hydrophobic micro-well plate was completed by removing the protective film.

⑦ 필요한 경우 상기 소수성 마이크로-웰 플레이트의 표면을 산화시켜 친수성 마이크로-웰 플레이트를 제작하였다.⑦ If necessary, the surface of the hydrophobic micro-well plate was oxidized to prepare a hydrophilic micro-well plate.

1920개의 각 웰에는 각각 고유번호를 부여하였다. 제작된 마이크로-웰 플레이트의 평면사진과 부분 확대사진을 도 2에 A 및 B로 도시하였다.Each of the 1920 wells was assigned a unique number. Top and partial enlarged photographs of the fabricated micro-well plates are shown as A and B in FIG. 2.

추정실시예 2 : 압출성형에 의한 마이크로-웰 플레이트의 제작Presumed Example 2 Fabrication of Micro-Well Plates by Extrusion

실시예 1에서와는 반대로 패턴된 마스크를 이용하여 단결정 실리콘 재질로 된 금형(mold)의 제작이 가능할 것이다.Contrary to Example 1, it is possible to fabricate a mold made of a single crystal silicon using a patterned mask.

상기 제작된 금형에 다양한 소재의 플라스틱 수지를 사출성형(injection molding)함으로써 플라스틱 재질의 마이크로-웰 플레이트를 다량 제조할 수 있을 것이다.By injection molding the plastic resin of various materials to the manufactured mold, a large amount of plastic micro-well plates may be manufactured.

적용예 : 마이크로-웰 플레이트를 이용한 미생물 개체의 확인Application Example: Identification of Microbial Individuals Using Micro-well Plates

실시예 1에서 제작된 마이크로-웰 플레이트를 이용하여 과연 미생물과 배경 및 이물질을 구분할 수 있는지를 확인하였다. 샘플 피검체로는 배양된 수 종의 미생물 배양액을 이용하였다.Using the micro-well plate prepared in Example 1 it was confirmed whether the microorganism can be distinguished from the background and foreign matter. As the sample subject, several cultured microbial cultures were used.

사용된 현미경 및 영상촬영장치는 Metallugical microscope(Nikon ME600D)였 으며, 촬영된 영상은 digital image capture system(Nikon DXM1200)을 이용하였다.The microscope and imager used were a metallugical microscope (Nikon ME600D), and the digital image capture system (Nikon DXM1200) was used.

필요한 경우 미생물의 가시화를 위해 미생물을 cristal violet(7% v/v)으로 염색하였다. If necessary, the microorganisms were stained with cristal violet (7% v / v) to visualize them.

피검액을 점적한 후 약 1∼2분 경과하면 세포가 웰의 바닥으로 침강하는 현상이 발견되었다. 이 상태에서 촬영된 영상을 도 3에 도시하였다. 도에서 좌측은 하나의 웰 사진이고, 우측은 좌측 웰의 확대사진이다. 도에서 A, B 및 C는 각각 Saccharomyces cerevisiae, Bacillus subtilisE. coli의 배양액을 점적한 것이다.About 1 to 2 minutes after the dropping of the test solution, the cells settled to the bottom of the well. 3 shows an image photographed in this state. In the figure, the left side is a picture of one well, and the right side is an enlarged picture of a left well. A, B and C in the figure is a drop of a culture solution of Saccharomyces cerevisiae , Bacillus subtilis and E. coli , respectively.

도 3에서 볼 수 있듯이, 이스트와 세균 모두 본 발명에 의한 마이크로-웰 플레이트를 이용한 웰에서 개략적인 세포의 형상을 확인할 수 있었으며(즉, 넓은 범주의 동정이 가능하였으며), 세포가 이물질 및 배경과 구분되어 계수가 가능하였다.As can be seen in Figure 3, both yeast and bacteria were able to confirm the approximate cell shape in the wells using the micro-well plate according to the present invention (that is, it was possible to identify a wide range of), the cells and the foreign matter and background Counting was possible.

이상에서 상세히 설명하고 입증하였듯이, 본 발명의 마이크로-웰 플레이트에 의하면 ① 각종 화학적, 생물학적 반응을 미세한 체적의 반응장치에서 수행할 수 있게 되어 실험의 경제성과 완전성을 얻을 수 있으며, ② 자동 또는 수동으로 피검액 중의 미생물을 동정하고, 미생물의 수를 측정할 수 있어 종래 미생물 분석방법에 비해 시간과 비용이 대폭 절약이 가능하게 된다.As described and demonstrated in detail above, according to the micro-well plate of the present invention ① various chemical and biological reactions can be carried out in a small volume of the reaction apparatus to obtain the economic and completeness of the experiment, ② automatically or manually The microorganisms in the test liquid can be identified and the number of microorganisms can be measured, which enables a significant time and cost saving compared to the conventional microbial analysis method.

따라서 특히 미생물학 연구 분야에서 유용하게 활용될 수 있을 뿐만 아니라, 대량생산된 식품, 유제품, 육류, 해산물, 화장품 및 약품의 생산 및 가공 공정시 발생될 수 있는 미생물로 인한 오염 검사시 산업현장에서 널리 이용될 수 있을 것이다.Therefore, it is not only useful in the field of microbiology research, but also widely used in the industrial field for the inspection of contamination by microorganisms that may occur during the production and processing of mass-produced foods, dairy products, meat, seafood, cosmetics and drugs. Could be.

Claims (2)

깊이가 2∼30 ㎛, 부피가 0.1 nℓ∼10 ㎕인 마이크로-웰이 복수 개 형성되어 있으며, 웰 입구의 변의 길이(정사각형일 때) 또는 직경(원형일 때)이 웰 깊이의 2~120배인 것을 특징으로 하는 플라스틱, 단결정 실리콘 또는 단결정 게르마늄 재질의 마이크로-웰 플레이트.A plurality of micro-wells having a depth of 2 to 30 µm and a volume of 0.1 nℓ to 10 µl are formed, and the length (when square) or the diameter (when round) of the sides of the well inlet is 2 to 120 times the depth of the well. A micro-well plate of plastic, monocrystalline silicon or single crystal germanium. 삭제delete
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