KR100548060B1

KR100548060B1 - 한방자원을 이용한 고기능성 균사체의 제조방법 및 그 균사체

Info

Publication number: KR100548060B1
Application number: KR1020030088100A
Authority: KR
Inventors: 배만종
Original assignee: 주식회사 오엠바이오텍; 배만종
Priority date: 2003-12-05
Filing date: 2003-12-05
Publication date: 2006-02-01
Also published as: KR20050055161A

Abstract

본 발명의 목적은 쑥과 칡뿌리를 배지로 이용함으로써, 면역증강효과, 항암효과, 간기능개선효과, 고콜레스테롤개선효과를 최대로 할 수 있는 한방균사체를 제공하는 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 균사체 제조방법은,

쑥과 칡뿌리를 정선해서 각각의 중량비가 20~80%가 되게 혼합한 다음 물에 침지시켜 수분이 20~30% 되도록 하는 단계;

침지시킨 쑥과 칡뿌리를 용기에 넣어서 121℃, 1.2기압하에서 15분 동안 찌는 단계;

상기 단계들을 통해 준비된 재료에 표고버섯(lentinus edodes (BERK.) Sing.), 상황버섯(Phellinus igniarius), 동충하초(Cordyceps poludosa), 영지(Ganoderma lucidum) 중 어느 하나의 원균을 준비해서 접종하는 단계;

를 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명은 또한,

쑥과 칡뿌리를 정선해서 각각의 중량비가 20~80% 되게 혼합한 혼합물에 물을 중량 대비 20배 부피 비율로 맞추어 넣어 2시간 끓이는 단계;

위 재료를 착즙한 다음 덱스토로스(dextrose)를 2%(w/v) 되게 넣고 pH 5.5로 맞춘 다음 여과하는 단계;

위 여과액을 121℃, 1.5기압에서 15분 동안 멸균처리한 후 30℃ 이하로 식히 는 단계;

를 포함하는 것을 특징으로 한다.

Description

한방자원을 이용한 고기능성 균사체의 제조방법 및 그 균사체{The manufacturing method of enhanced mycelium for function using herbs resources(Puerariae Radix, Artemisiae Vulgaris Folium) and its product}

본 발명은 한방소재인 칡뿌리와 쑥을 배지로 한 고기능성 균사체의 제조방법 및 그에 따라 제조되는 균사체에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 간기능개선 효과와 항고지혈증 효과를 가지고 있는 칡뿌리와 쑥을 배합한 것을 배지로 사용함으로써 면역증강효과, 항암효과, 간기능개선효과, 고콜레스테롤개선효과를 극대화시키도록 한 균사체의 제조방법 및 그 균사체에 관한 것이다.

최근 급속한 고도성장과 더불어 발생한 성인병, 만성질환, 스트레스성 질환 등과 같은, 소위 현대병에 위기를 느끼면서 이에 대한 해결책 연구에 관심이 증대되고 있다. 특히 일본은 기능성 식품을 21세기의 식품 산업계를 주도할 품목으로 예시하고 있으며, 미국도 새로운 산업으로 디자이너 푸드(designer foods)의 가능성을 주시하고 있다. 이러한 추세에 따라 국내에서도 천연물 소재를 이용한, 생체조절기능을 갖는 기능성식품의 개발에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. 면역강 화 및 조절기능을 갖는 천연소재로서 동물, 식물, 고등균류 및 미생물체 등에 이르기까지 광범위한 범위의 소재가 탐색·확인되고 있는데, 고등균류에서는 단백다당체, 식물체에서는 다당류 및 폴리페놀류 등과 같이 효능이 뛰어난 성분들이 많음이 밝혀지고 있다. 이와 같은 국내외의 상황을 고려할 때, 유용한 천연자원의 개발은 국내의 환경에 맞게끔 새로운 소재의 탐색과 함께 새로운 개념의 제품개발이 이루어져야 할 것으로 기대된다.

그런데 균사체의 폴리사카라이드-펩티드(polysaccharide-peptide) 성분은 면역세포 중 암세포와 최전선에서 싸우는 자연살생세포(natural killer cell, NK 세포)를 활성화시켜 암세포를 파괴하는 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 생물기능수식물질(biological response Modifier, BRM)으로는 렌티난(Lentinan), PSK(protein saccharide), Lentinus edodes mycelia 등이 이용되고 있는데, 田尺賢次 등은 이들에 대해서 간국소의 면역기능을 높이는 간 전이 재발의 예방적 치료법을 검토했었다. 암세포 전이형성과정에서 생물기능수식물질(BRM)의 효과는, 암세포가 자연살생세포(natural killer cell), 살세포(killer cell), 활성화 대식세포 등으로부터 공격을 받고, 또한 국소에 존재하는 면역담당세포를 총동원하도록 함으로써 암세포의 착상, 증식을 저지하는 데 있는 것으로 설명되고 있다.

또한 담자균에서 추출한 다당류의 항암효과에 대해서는, Tsukagoshi 등이 C. versicolor의 자실체로부터 추출한 단백다당류(PS-K)가 S-180에 대한 항암효과가 있음을 밝혔으며, Chihara 등이 Lentinus edoses의 자실체로부터 항암성 다당류를 추출하여 헤테로폴리사카라이드(heteropolysaccharide)라는 것을 밝히고, 항암능이 매우 뛰어난 중성다당류인 β-(1→3)-D-glucan을 분리하여 구조를 밝혔다. 그리고 Lentinus edoses의 자실체로부터 분리된 단백다당류가 sarcoma-180에 대해 억제효과가 뛰어났다고 보고하였다.

이상과 같이 고등균류의 자실체나 균사배양물에서 추출되는 수종의 다당류 또는 단백다당류는 우수한 항암효과를 나타내는 것으로 확인되고 있다. 다양한 소재로부터 회수한 단백다당류(polysacharideprotein)는 면역증강제나 항암보조제로서 실용화가 기대되며 건강식품, 의약품, 의약품보조제로의 이용성 또한 높을 것으로 기대된다.

한편, 콜레스테롤은 스테로이드계 지질의 일종으로, 세포막의 구성성분, 호르몬 및 비타민의 전구체로서 생명현상의 유지와 조절에 필수적인 생리물질이다. 생체 내에서 콜레스테롤은 혈장 중에 소량으로 존재하는데, 혈장 콜레스테롤, 특히 LDL(low-density lipoprotein) 콜레스테롤 농도의 증가는 흡연, 당뇨, 고혈압, 비만 등과 함께 동맥 경화와 심근 경색의 주요한 발병원인이 된다고 알려져 있으며, 이에 따라 혈장 내 콜레스테롤의 수준을 일정하게 유지하는 것은 상당히 중요한바, 혈장 콜레스테롤 농도를 효율적으로 조절하는 방법은 콜레스테롤의 생체 내로의 흡수 및 체내에서의 생합성을 억제하는 것이다.

이상과 같은 전제에서, 본 발명의 발명자는 균사체의 전술한 효용성에 더하 여, 간기능개선 효과와 고콜레스테롤개선효과를 가지고 있는 칡뿌리와 쑥을 배합한 것을 배양 배지로 하여 균사체를 제조함으로써, 균사체의 항암효과 및 면역증강 기능과, 칡뿌리와 쑥의 간기능개선 효과와 항고지혈증 효과를 동시에 극대화하는 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 쑥과 칡뿌리를 배지로 이용함으로써, 면역증강효과, 항암효과, 간기능개선효과, 고콜레스테롤개선효과를 최대로 할 수 있는 한방균사체를 제공하는 것이다. 즉 종전에 시도된 바 없는 방식으로, 균사체 본래의 기능성에 한방소재의 효능을 적절히 응용함으로써 효능 극대화 및 적용 다양화를 꾀하고자 하는 것이다.

상기한 목적을 갖는 본 발명의 균사체 제조방법은,

쑥과 칡뿌리를 정선해서 각각의 중량비가 20~80% 되게 혼합한 다음 물에 침지시켜 수분이 20~30% 되도록 하는 단계;

를 포함하는 것을 특징으로 한다.

위의 경우, 한방배지재료에 버섯균을 접종하기 전에, 준비된 한방배지지료를 밀기울과 톱밥을 포함한 종래의 일반배지에 한방배지재료의 함량이 50중량% 이상이 되도록 섞은 후 버섯균을 접종하는 것도 가능하다.

본 발명은 또한,

위 여과액을 121℃, 1.5기압에서 15분 동안 멸균처리한 후 30℃ 이하로 식히는 단계;

를 포함하는 것을 특징으로 한다.

종래에는 균사체 생산 시 밀기울, 톱밥 등의 일반배지를 이용하였으나 본 발명은 항암과 면역증강 효과를 가지고 있는 균사체를 생산하기 위하여 쑥, 칡 소재의 효능을 응용하고자 하였으며, 실험 결과 실제로 기대했던 결과도 얻을 수 있었 다.

이하, 본 발명을 실시예를 통해서 상세히 설명한다.

1. 쑥, 칡 균사체의 제조

본 발명에 따른 균사체를 제조할 때 한방소재인 쑥, 칡뿌리를 세절하여 쑥, 칡뿌리로만 그대로 배양할 수도 있고(고체 배지), 쑥과 칡뿌리 추출액을 이용하여 액체배양 방법으로도 균사체를 제조할 수 있다(액체 배지).

구체적으로 본 발명에 따른 한방소재를 이용한 균사체의 제조방법은,

한방소재의 배지를 준비하는 단계(단계 1);

원균을 준비하는 단계(단계 2);

원균을 접종하여 한방균사체를 제조하는 단계(단계 3)로 이루어진다.

단계 1은 한방소재의 배지를 준비하는 단계이다. 고체 배지의 경우, 통상적으로 사용되는 배지는 밀기울, 톱밥 등을 소재로 하나 본 발명에서는 특정 기능성이 기대되는 한방소재인 쑥과 칡뿌리를 사용하는바, 이들 재료를 정선해서 각각의 중량비가 20~80%가 되게 혼합한 다음 물에 2시간 동안 침지시켜 수분이 20~30%가 되도록 한다. 그 다음 용기에 입병해서 121℃, 1.2기압하에서 15분 동안 찐다. 액체 배지의 경우에는 위 한방 소재에 대해서 물을 중량 대비 20배 부피 비율로 맞추어 넣고 2시간 끓이고, 착즙한 다음 덱스트로스(dextrose)를 2%(w/v) 되게 넣고 pH 5.5로 맞춘 다음 여액을 121℃, 1.5기압에서 15분 멸균처리 후 30℃ 이하로 식힌 다음 종균을 접종한다. 이때 덱스트로스를 넣는 것은, 실험 결과 동 물질을 넣을 경우 균사체의 성장 속도가 빨랐다는 발명자의 경험적 사실에 기초한 것이다.

단계 2는 멸균된 한방소재에 균사체 원균을 준비해서 접종하는 단계이다. 본 실험에 사용한 원균은 표고버섯(lentinus edodes (BERK.) Sing.)균사체, 상황버섯(Phellinus igniarius)균사체, 동충하초(Cordyceps poludosa)균사체, 영지(Ganoderma lucidum)균사체 중의 어느 하나로서, 본 실시예에서는 종균소에서 분양받아 사용했다. 다만 실시예에서, 분양종균은 균력이 약하기 때문에 YM배지 혹은 MS배지에 계대배양하여 균력을 키운 다음 고체배지 혹은 액체배지에 이식하여 배양했다.

단계 3은 상기 쑥, 칡 배지에 원균을 접종하여 균사체를 제조하는 단계이다. 쑥, 칡 균사체 생산을 위한 액체배양은 균주의 생장온도, 즉 표고버섯(lentinus edodes (BERK.) Sing.)균사체, 상황버섯(Phellinus igniarius)균사체, 영지버섯(Ganoderma lucidum)균사체 균종은 25~27℃에서, 그리고 동충하초(Cordyceps poludosa)균사체는 35~38℃에서, pH는 5.5~5.7로 하여 덱스트로스(dextrose, 단당류)를 2% 되게 넣고 배양했다. 배양 방법은 액체배양은 처음부터 2~4일간 정치배양 후 폭기배양하였다.

그리고 고체배양의 경우, 쑥과 칡은 각각의 중량비를 20~80% 범위 내에서 필요에 따라 조절할 수 있으며, 한방배지를 밀기울과 톱밥을 포함한 종래의 일반배지에 섞은 것을 배지로 할 수도 있다(이때 본 발명에 따른 소기의 목적을 달성하기 위해서는, 한방배지의 함량은 적어도 50중량% 이상으로 하는 게 바람직하다). 배양 병에 입병하고 멸균한 다음 균사체 균주를 접종한 후의 배양온도나 pH는 액체배양 조건에서와 동일하다.

배양기간은 액체배양은 1주~2주, 고체배양은 2주~3주의 기간이 소요된다.

2. 지방간 및 고지질대사 개선기능의 실험

1) 실험 동물

실험 동물은 국립보건원에서 분양받은 8-10주령의 BALB/C 웅성 마우스를 사용하였으며, 사육 기간 중 물과 사료는 충분히 섭취하도록 하였다. 사육실 온도는 22±2℃, 명암은 12시간 주기(06:00~18:00)로 자동 조절 장치를 부착하였다.

2) 시료의 조제

액체배지 배양액은 에탄올로 80% 농도로 한 다음 환류냉각 장치에서 3시간 끊인 다음, 여과지로 여과 농축하고, 동결건조한 것을 시료로 사용하였다. 고체배양 시료는 80% 에탄올로 3시간 끊인 다음 추출 여과지로 여과 농축하고, 동결건조한 것을 시료로 사용하였다.

3) 실험동물의 사육 및 시료의 채취

지방대사 개선효과 실험을 하기 위한 실험동물은 6주령된 Sprague Dawley계 수컷흰쥐를 식품안전관리청 동물실로부터 구입하여 난괴법에 의해 정상군(NOR), 대조군(CON), 0.1%밀배지균사체추출물투여군(WME), 0.1%쑥,칡배지균사체추출물투여군(PAME)으로 나누어 4주간 사육하였으며 물과 실험 식이는 자유롭게 공급하였다. 본 실험에 사용한 고지방 식이는 Table 1, Table 2에 나타나 있으며, 균사체 추출물은 상기의 방법에 의해서 준비된 것을 0.1% 되게 기본 식이에 더하여 공급하였다.

간독성 실험을 하기 위한 동물실험은 대조군 및 실험군에는 사염화탄소:올리브유를 1:1의 비율로 혼합한 액을 1mL/kg.bw.day씩 1일 간격으로 2회 복강 내로 투여하였고 정상군에는 동량의 올리브유를 동일한 방법으로 투여하였다.

실험동물은 처치 전 12시간 동안 물만 주고 금식시켰으며 에테르 마취하에 개복한 후 복부대동맥으로부터 채혈하고 간, 심장을 적출하여 식염수로 씻은 후 측정시 까지 -70℃에서 보관하였다. 채취한 혈청은 실온에서 1시간 이내로 방치시킨 다음 3000rpm에서 10분간 원심분리하여 혈청을 분리하였으며, 분식 전까지 -70℃에서 보관하였다.

4) 실험동물 및 고지방 식이의 구성

5) 혈청 및 간조직 중의 지질함량 측정

혈청 중 총콜레스테롤과 중성지방함량 측정 및 alkaline phosphotaseaaaaaa(ALP), GOT, GPT활성측정은 (주)삼광화학의 kit을 이용하여 분석하였다. 즉, 총콜레스테롤은 Cholestezyme-V, 중성지방은 Triglyzyme-V, HDL-콜레스테롤은 HDL-cholesterol E-kit를 이용하여 측정하였으며, ALT활성측정은 Reitman-Frankel법에 준한 혈청GOT, GPT세트로, ALP는 King-king개량법을 사용하여 활성을 측정하였다. 간조직 중의 지질함량 측정은 간 1g에 1.15% KCl 9mL을 가하여 Teflon Potter-Elvehjem homogenizer로 마쇄한 후 600×g에서 10분간 원심분리하여 그 상층액을 Folch법으로 추출한 후 분석kit를 사용하여 콜레스테롤과 트리글리세라이드의 함량을 측정하였다.

3. 항암 및 면역기능 검증 실험

1) 실험 동물

본 실험에 사용한 동물은 4주령의 ICR 마우스를 국립보건원 안전 연구원으로부터 분양받아, 일반 사료로 2주 이상 사육실에서 적응시겼다. BALB/C계 마우스(28±2ｇ, 6주령)는 면역세포활성화 관련 실험에 사용하였고, ICR계 마우스(28±2ｇ, 6주령)는 sarcoma 180의 복수암과 고형암을 유발하기 위한 숙주로 사용하였다. 마우스를 플라스틱 케이지에 6마리씩 넣고 사육하였다. 사육 온도는 22~24℃였으며 습도는 60~70%였다. 사료는 펠렛형 실험동물 사료[삼양사 (주)]였으며 자유 급식시켰다.

실험군은 대조군으로 생리식염수 투여군(이하 CON), 밀 배지 균사체 추출액 투여군(이하 WME), 쑥, 칡 배지 균사체 추출물 투여군(이하 PAME)으로 나누어 구성하였다. 사육실 온도는 22±2℃, 명암은 12시간 주기(06:00~18:00)로 조절하였다. 실험동물에 시료투여량은 Table 2의 정상군에 상기의 방법에 의해서 준비된 균사체 추출물을 0.1% 되게 기본식이에 더하여 공급하였다.

2) 시료투여 및 면역 유발과정

항원에는 SRBC를 사용하였다.

SRBC를 PBS로 3회 세척 후 면역응답을 행할 경우에는 최종적으로 1×10⁹cell/㎖이 되도록 조제한 SRBC 0.1㎖를 mouse 꼬리 정맥에 주사로 면역 시켰다. 면역 후 4일째 비장(spleen)을 적출해서 면역세포 부유액을 만들었다.

3) 비장세포(Spleen cells) 분리

Mouse의 복부를 절개하여 비장을 적출한 후, 분절하여 세포부유액으로 만들어 원심분리 하였다(1500rpm, 10min). 원심분리 후 상층액을 제거하고 적혈구를 용해하기 위하여 0.83% ammonium chloride tris(ACT) buffer(pH 7.2)로 처리한 다음에 RPMI 1640으로 3회 세척(1500rpm, 10min)하여 세포수를 조정하였다. 세포수 조정은 PEC와 비장세포를 trypan blue로 염색한 후, 혈구계산반(hemacytometer)을 사용하여 현미경 상에서 생세포수를 측정하여 사용한다.

4) Plaque forming cell(PFC)의 검출

생산세포의 검색은 Cunninghgam방법에 의하며, 약물투여는 10일간 행하고 6일째에 SRBC를 1×10⁹cells/㎖이 되도록 조정하여 mouse의 복강에 0.2㎖ 주사하였다.

4일 후 비장을 적출하여 세포부유액으로 만들어 3회 세척 후, 1×10⁶cell/㎖이 되도록 조정한 비장 세표(spleen cells) 200㎕와 10% SRBC 36㎕, complement 21㎕ 그리고 5% FCS-HBSS액 143㎕를 혼합하여, 제작한 Cunningham chamber에 넣어 37℃ 인큐베이터에서 1시간 배양하면 항체생산세포 주위에 적혈구가 용해된 투명한 용혈반(plaque)이 생성된다. 이때의 용혈반수를 세어 항체생산 세포수를 산정하였 다.

5) Rosette forming cell(RFC)의 검출

비장세포의 Rosette형성세포의 검사는 method in immunology에서 기술한 방법에 따라 행하였다. 즉, 비장세포 부유액(2×10⁷cell/㎖) 200㎕와 1% SRBC 부유액 200㎕를 시험관에 넣고 혼합하여 1700rpm에서 원심분리한 후, 이것을 다시 부유시켜 혈구계산반에 주입하여 RFC를 검경 관찰하였다. 현미경상에서 비장세포에 SRBC가 3개 이상 부착한 세포를 RFC로 판정하여 다음 공식에 준하여 계산하였다.

RFC per ㎖ in rosette mixture / Viability ×10 = RFC/10⁶ viable nucleated cells

6) 대식세포 탐식능 측정

탐식능 측정은 小松靖弘 등의 방법에 따라 행하였다. CP부유액 (8×10³cell/㎖) 50㎕와 식세포 부유액(8×10⁴cell/㎖) 50㎕, 그리고 5% 동계 생쥐 혈청 100㎕를 V-bottomed microtitre tray에 주입하여 CO₂incubator (37℃, 5% CO₂) 에서 3시간 배양하였다. 배양 후 그중 50㎕를 취해서 Sabouraud's dextrose agar배지에 옮겨 35℃에서 2일간 배양하여 살아있는 CP colony수를 세어 식세포에 의해 탐식된 CP의 생균수를 표시하였다.

4. 항암효과 실험

1) 암세포

Sarcoma 180(S-180) 세포는 한국세포주은행으로부터 분양받았다. S-180은 8~12주령된 ICR 마우스의 복강에서 계대 배양하였다. 복수암에 걸려서 복부가 팽만한 마우스의 복강 속으로 일회용 1㎖ 주사기로 찔러 노란색의 복수액 1㎖를 채취한 후, 그 원액을 0.1㎖씩 ICR 마우스의 복강 속에 접종하고 배양하면서 13일마다 계대하였다.

2) Solid form S-180의 성장저지 실험

ICR 마우스의 복강에 in vivo 계대 중인 S-180 세포를 멸균된 주사기로 채취하였다. 그 암세포들을 MEME 배지로 희석하여 S-180 세포의 농도가 4×10⁷cells/㎖되게 하였다. 이와 같이 희석한 S-180 세포액을 50μ(2×10⁶cells)씩 ICR 마우스(♂, 6주령, 28±2ｇ)의 우측 서혜부에 피하 이식한 후 실험시료를 경구투여 하였다. 종양세포 이식 29일째 되는 날 치사시켜 생성된 고형암을 적출하고 그 무게를 측정한 후 다음 식에 따라 종양성장저지 백분율(tumor growth inhibition ratio, I.R. : %)을 계산하였다.

5. 기능성 및 효능 실험 결과

1) 고지혈증 및 지방간의 개선효과

2)사염화탄소에 의한 간독성의 개선효과

3) 세포성면역 효과 실험 결과

① PFC 형성능

용혈반 형성에서는, 면양의 적혈구로 면역시킨 마우스의 비장세포를 cunningham chamber에 면양적혈구와 보체를 혼합하여 배양하게 되면 항체생산세포는 면역글로블린을 방출하게 되며, 방출된 면역글로블린은 주위의 적혈구에 결합하게 된다. 여기에 보체가 결합하면 항체가 붙은 적혈구는 용해되고 plaque가 형성하게 된다. 이러한 원리를 이용하여 시료를 동물에 10일 동안 급여한 후 비장을 적출하여 이들이 항체생성에 미치는 영향을 실험한 결과는 Table 6에서 보는 바와 같 다. 비장세포 항체 생성능은 대조군 145±11/5×10⁶spleen cell에 비해 실험군인 밀 배지 균사체 추출액은 173±19개/5×10⁶spleen cell, 쑥, 칡 배지 균사체는 204±25개/5×10⁶spleen cell로 비장세포의 항체생산 활성에 상당한 영향을 미치고 있음을 확인 할 수 있었다. 이들 시료 중 항체생산 활성능은 쑥, 칡 배지 균사체이 밀 배지 균사체 추출액 보다 현저하게 뛰어났다.

② RFC 형성능

임파구와 적혈구를 섞으면 T세포 둘레에는 적혈구가 부착하여 rossette를 형성한다. 이러한 원리를 이용하여 마우스에 면양 적혈구로 면역시킨 뒤, 10일간 실 험시료를 급여한 후 비장세포를 분리하여 세포부유액을 조제하였다. 이들에 면양적혈구를 혼합시켜 재부유한 후 rossette 형성을 관찰한 결과는 Fig.7과 같다. 즉 대조군은 20±5/1×107 spleen cell개의 rossette를 형성하였으며, 실험군인 밀 배지 균사체 추출액은 32±7, 쑥,칡배지 균사체 추출액은 40±4로 대조군에 비해 유의한 면역세포 활성효과를 나타내었고. T세포 활성능에 있어서도 쑥, 칡 배지 균사체가 밀 배지 균사체 추출액보다 현저하게 뛰어났다.

③ 탐식능 효과

Fig. 1은 생쥐의 복강에서 얻은 복강 침출세포(PEC)의 대식세포가 Candida parapsilosis에 대한 탐식작용을 나타낸 결과이다. 대조군의 탐식능이 32±7%에 비해 밀 배지 균사체 추출액 투여군 42±7%, 쑥, 칡 균사체 추출액 투여군 52±8%로 탐식작용이 유의하게 증가하는 경향을 보였다.

탐식능 실험에 사용된 Candida는 Aspergillus, Actinomyces 등과 같은 상재 비병원성 진균으로서 건강인에게는 병원성을 나타내지 않지만 신생아, 면역결핍증 환자, 면역억제 요법을 받은 사람, 백혈병이나 악성 임파종의 환자 등 숙주 측의 면역능 저하 또는 이상이 있는 경우 가끔 심한 감염을 초래하는 것으로 알려져 있다.

AHCC(active hexose correlated compound)는 담자균의 균사체 배양 추출물 중에서 얻은 다당류를 총칭하는 것으로 일본의 연구자들인 細川 등은 AHCC를 이용해서 동물모델 면역반응 실험에서 수명연장효과와 대식세포 활성화를 확인하였다. 水島裕 등은 항암제 부작용에 대한 경감작용, 岩本 등은 AHCC의 투여량을 1일 3g에 서 6g으로 증량함에 따라서 IPA:1,568㎍/㎖에서 IPA:500㎍/㎖으로 종양 표식인자가 저하됨을 확인하였다.

본 실험의 결과로 볼 때 밀 배지 균사체 추출액 투여군과 쑥, 칡 균사체 추출액 투여군은 PEC의 면역기능 활성으로 탐식효과가 증강되었음을 보여 주고 있음을 확인하였으며 쑥, 칡 균사체 추출액 투여군이 밀 배지 균사체 추출액 투여군보다 탐식능이 현저히 우세한 것으로 나타났다.

4) S-180에 의한 고형암 항암효과

S-180 세포를 ICR 생쥐의 우측 서혜부 피하에 접종한 후 23일째에 마우스로부터 적출한 고형암괴의 무게는 table 8에서 보는바와 같다. 대조군에서 2.67±1.1g인데 비하여 시료를 급여한 실험군인 밀 배지 균사체 추출액 투여군은 1.85±0.4g, 쑥, 칡 배지 균사체 추출액 투여군은 1.43±0.4g으로 각각 31%, 46%로 유의한 고형암 억제효과를 보였다. 고형암 억제효과에 있어서도 쑥, 칡 배지 균사체가 밀 배지 균사체 추출액보다 현저한 차별을 보였음을 확인하였다.

상기한 바와 같이, 본 발명에 따르면 한방소재, 즉 쑥과 칡의 기능성과 균사체의 효과를 결합하여 극대화함으로써 기능성을 배가시킬 수 있는바, 면역증강효과, 항암효과, 간기능개선효과, 고콜레스테롤개선효과를 최대로 할 수 있는 한방균사체를 획득할 수 있다.

Claims

쑥과 칡뿌리를 정선해서 각각의 중량비가 20~80% 되게 혼합한 다음 물에 침지시켜 수분이 20~30% 되도록 하는 단계;

침지시킨 쑥과 칡뿌리를 용기에 넣어서 121℃, 1.2기압하에서 15분 동안 찌는 단계;

상기 단계들을 통해 준비된 한방균사체고체배지에 표고버섯(lentinus edodes (BERK.) Sing.), 상황버섯(Phellinus igniarius), 동충하초(Cordyceps poludosa), 영지(Ganoderma lucidum) 중 어느 하나의 원균을 준비해서 접종하는 단계;

를 포함하는 것을 특징으로 하는, 한방자원을 이용한 기능성이 향상된 균사체의 제조방법.
제1항에 있어서,

침지시킨 쑥과 칡뿌리를 용기에 넣어서 121℃, 1.2기압하에서 15분 동안 찌는 단계;까지 수행된 한방배지재료를, 밀기울과 톱밥으로 된 종래의 일반배지에 한방배지재료의 함량이 50중량% 이상, 100% 미만이 되도록 섞은 후,

상기 단계들을 통해 준비된 한방균사체고체배지에 표고버섯(lentinus edodes (BERK.) Sing.), 상황버섯(Phellinus igniarius), 동충하초(Cordyceps poludosa), 영지(Ganoderma lucidum) 중 어느 하나의 원균을 준비해서 접종하는 단계;

를 포함하는 것을 특징으로 하는, 한방자원을 이용한 기능성이 향상된 균사체의 제조방법.
쑥과 칡뿌리를 정선해서 각각의 중량비가 20~80% 되게 혼합한 혼합물에 물을 중량 대비 20배 부피 비율로 맞추어 넣어 2시간 끓이는 단계;

위 재료를 착즙한 다음 덱스토로스(dextrose)를 2%(w/v) 되게 넣고 pH 5.5로 맞춘 다음 여과하는 단계;

위 여과액을 121℃, 1.5기압에서 15분 동안 멸균처리한 후 30℃ 이하로 식히는 단계;

상기 단계들을 통해 준비된 한방균사체액체배지에 표고버섯(lentinus edodes (BERK.) Sing.), 상황버섯(Phellinus igniarius), 동충하초(Cordyceps poludosa), 영지(Ganoderma lucidum) 중 어느 하나의 원균을 준비해서 접종하는 단계;

를 포함하는 것을 특징으로 하는, 한방자원을 이용한 기능성이 향상된 균사체의 제조방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 방법에 의하여 제조되는, 한방자원을 이용한 기능성이 향상된 균사체.