KR0154280B1 - 피리딘을 함유한 티에노피리미돈 유도체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 포유동물의 위산분비 억제능력을 보유하고 있어 항궤양제의 유효성분으로서 매우 유용한 다음 구조식(I)로 표시되는 피라졸을 함유한 티에노피리미돈 유도체에 관한 것이다.

상기식에서, R¹및 R²는 각각 같거나 다른 것으로서 수소원자 또는 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기이고, R³은 할로겐원자이고, R⁴는 수소원자 또는 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기이고, R⁵는 수소원자, 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기 또는 탄소원자수 1 내지 3의 알콕시기이고, R⁶은 수소원자 또는 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기이고, n은 0 또는 1이다.

Description

피리딘을 함유한 티에노피리미돈 유도체

본 발명은 포유동무의 위산분비 억제능력을 보유하고 있어 항궤양제의 유효성분으로서 매우 유용한 다음 구조식(I)으로 표시되는 피리딘을 함유한 티에노피리미돈 유도체에 관한 것이다.

상기식에서,

R¹및 R²는 각각 같거나 다른 것으로서 수소원자 또는 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기이고,

R³은 할로겐 원자이고,

R⁴는 수소원자 또는 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기이고,

R⁵는 수소원자, 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기 또는 탄소원자수 1 내지 3의 알콕시기이고,

R⁶은 수소원자 또는 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기이고,

n은 0 또는 1 이다.

피리딘을 함유한 벤즈이미다졸 유도체들은 위산분비 억제능력을 보유하고 있는 것으로 잘 알려져 있고, 또한 위산분비 억제제로서 개발되어 상품화되어 있다. 그의 제조방법에 대해서는 미합중국특허 제4,182,766호, 유럽특허 제208,422호와 영국특허 제1,525,958호 등에 기재되어 있다. 그러나 오메프라졸(Omeprazole)로 상품화 되어 있는 피리딘을 함유한 벤즈이미다졸 유도체는 위의 위산분비 억제에 탁월한 약효를 보이지만, 장시간 투여시 체내에 축적되어 투약을 중단하여도 약효가 지속되거나, 위벽이 두꺼워지는 등의 문제점을 내포하고 있다. 이는 피리딘을 함유한 벤즈이미다졸 유도체 중의 피리딘기 그 자체가 강한 염기성을 띄고 있어, 약산성의 조건하에서도 쉽게 자리옮김반응(rearrangement)이 일어나 활성이 강한 화합물로 전환되기 때문인 것으로 판단되었다.

따라서, 이러한 문제를 부분적으로 해결하고자, 피리딘을 함유한 벤즈이미다졸 유도체중의 벤즈이미다졸 대신에 약산성의 조건에서 낮은 염기도에 따르는 안정도를 고려하여 보다 안정한 화합물을 형성할 것으로 기대되는 티에노피리미돈기(thienopyrimidone group)로 변환시키므로써 오메프라졸과 비슷한 성능의 위산분비 억제효과를 나타내는 신규 피리딘을 함유한 티에노피리미돈 유도체를 개발하게 되었다.

본 발명은 다양한 치환제를 갖는 치환된 티에노피리미돈이 결합된 새로운 구조를 나타내며, 이의 제조공정이 간편하고, 원료물질의 가격이 저렴하며, 오메프라졸의 약효와 유사한 위산분비 억제효과를 갖는 상기 구조식(I)로 표시되는 피리딘을 함유한 티에노피리미돈 유도체를 제공하는데 그 목적이 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 위산분비 억제효능을 갖는 다음 구조식(I)로 표시되는 벤즈이미다졸 유도체를 그 특징으로 한다.

상기식에서,

R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶및 n 각각은 상기에서 정의한 바와같다.

이와같은 본 발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 위산분비 억제효능이 우수하여 위궤양 치료제의 유효성분으로서 유용한 상기 구조식(I)로 표시되는 피리딘을 함유한 티에노피리미돈 유도체에 관한 것으로서, 이의 제조과정은 다음 반응식과 같이 나타낼 수 있다.

상기식에서

R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶및 n 각각은 상기에서 정의한 바와같다.

먼저, 상기구조식(II)로 표시되는 2-아미노-3-카르보에톡시티오펜은 촉매량의 SnCl₂또는 디부틸틴 디아세테이트(n-BU₂Sn(OAc)₂) 존재하에 페닐 이소티오시아네이트 유도체와 반응시켜 상기 구조식(III)으로 표시되는 디오펜 유도체를 제조하는데, 이는 70∼90℃의 온도 그리고, 디클로로메탄 또는 디클로로에탄 등의 유기용매에서 진행된다.

그리고 구조식(III)의 티오펜 유도체는 통상적인 염기 예를들면 메톡시화나트륨, 에톡시화나트륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨 등의 존재하에 메탄올, 에탄올 등의 알콜용매에서 환류시킴으로써 고려화반응(cyclization)에 의해 상기 구조식(IV)로 표시되는 화합물을 제조한다.

그리고 상기 구조식(IV)의 화합물은 1-클로로메틸피리딘 유도체와 탄산칼륨, 탄산칼슘 등의 염기 그리고 N,N-디메틸포름아미드 용매하에서 반응시켜 n=0인 상기 구조식(I)로 표시되는 화합물을 제조한다.

또한, n=0인 상기 구조식(I)로 표시되는 화합물은 통상의 산화제 예를들면 메타-클로로과벤조산, 과산화수소 등을 사용하여 -30∼-40℃에서 산화시킴으로써 n=1인 상기 구조식(I)로 표시되는 화합물을 제조할 수도 있다.

본 발명에 따르는 상기 구조식(I)로 표시되는 피리딘을 함유한 티에노피리미돈 유도체의 대표적인 예를 들어보면 다음 표1과 같다.

이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 상세히 설명하면 다음과 같은 바, 본 발명이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1]

3-(2-플루오르-페닐)-2-(3-메톡시-2,4-디메틸-벤질설파닐)-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온 (화합물번호 1)

3-(2-플루오르-페닐)-2-머캅토-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(0.82g, 3.5mmol)을 디메틸포름아미드(15㎖)에 용해시킨 다음, 여기에 무수 탄산칼슘(0.48g, 3.5mmol), 1-클로로메틸-2,4-디메틸-3-메톡시피리딘·염산염(0.95g, 4.3mmol), 트리에틸아민(0.6㎖, 4.3mmol)의 순으로 부가한 후 상온에서 10시간 반응시켰다. 에틸아세테이트로 추출한 후, 물로 세척하고, 무수 MgSO로 건조시킨 다음 농축시켜 목적화합물(1.0g, 수율 82%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 2.20(s, 3H), 2.30(s, 3H), 2.50(s, 3H), 3.70(s, 3H), 4.52(d, 2H), 7.16∼7.52(m, 7H)

[실시예 2]

3-(2-플루오르-페닐)-2-(3-메톡시-2,4-디메틸-벤질설파닐)-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온 (화합물번호 2)

디클로로메탄(30㎖)에 상기 실시예 1에서 제조한 3-(2-플루오르-페닐)-2-(3-메톡시-2,4-디메틸-벤질설파닐)-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(0.70g, 1.6mmol)과 메타-클로로과벤조산(0.275g, 1.6mmol)을 가하고, -30℃에서 30분간 반응시켰다. 반응용매를 감압하에서 제거하고, 에틸아세테이트로 추출한 후, NaHCO로 세척시키고, 무수 MgSO로 건조시켜 목적화합물(0.588g, 수율81%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 2.20(s, 3H), 2.32(s, 3H), 2.52(s, 3H), 3.82(s, 3H), 4.42(d, 1H), 4.92(d, 1H), 7.14∼7.52(m, 7H)

[실시예 3]

3-(2-플루오르-페닐)-2-(3-메톡시-벤질설파닐)-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온 (화합물번호 11)

3-(2-플루오르-페닐)-2-머캅토-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(0.460g, 3.3mmol)을 디메틸포름아미드(15㎖)에 용해시킨 다음, 여기에 무수 탄산칼슘(0.460g, 3.3mmol), 2-클로로메틸-4-메톡시피리딘(640mg, 3.9mmol), 트리에틸아민(0.54㎖, 3.9mmol)의 순으로 부가한 후, 상온에서 10시간 반응시켰다. 에틸아세테이트로 추출한 후, 물로 세척하고, 무수 MgSO로 건조시킨 다음 농축시켜 목적화합물(1g, 수율 75%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 2.52(s, 3H), 2.82(s, 3H), 4.45(s, 2H), 6.72(d, 1H), 7.12∼7.60(m, 6H), 8.32(d, 1H)

[실시예4]

3-(2-플루오르-페닐)-2-(3-메톡시-벤질설파닐)-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온 (화합물번호 12)

디클로로메탄(30㎖)에 상기 실시예 3에서 제조한 3-(2-플루오르-페닐)-2-(3-메톡시-벤질설파닐)-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(250㎎, 0.60mmol)과 메타-클로로과벤조산(100mg, 0.6mmol)을 가하고, -30℃에서 30분간 반응시켰다. 반응용매를 감압하에서 제거하고, 에틸아세테이트로 추출한 후, NaHCO로 세척시키고, 무수 MgSO로 건조시켜 목적화합물(190mg, 수율 79%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 2.52(s, 3H), 8.32(s, 3H), 4.45(d, 2H), 6.7(d, 1H), 7.02∼7.61(m, 5H), 8.04(m, 1H). 8.32(d, 1H)

[실시예 5]

3-(2-플루오르-페닐)-2-(2-메틸-3-메톡시-벤질설파닐)-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온 (화합물번호 21)

3-(2-플루오르-페닐)-2-머캅토-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(900mg, 3.3mmol)을 디메틸포름아미드(15㎖)에 용해시킨 다음, 여기에 무수 탄산칼슘(460mg, 3.3mmol), 2-클로로메틸-3-메틸-4-메톡시피리딘(680mg, 3.3mmol)의 순으로 부가한 후, 상온에서 10시간 반응시켰다. 에틸아세테이트로 추출한 후, 물로 세척하고, 무수 MgSO로 건조시킨 다음 농축시켜 목적화합물(1.12g, 수율 82%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 2.20(s, 3H), 2.52(s, 3H), 8.32(s, 3H), 4.45(d, 2H), 6.62(d, 1H), 7.12∼7.62(m, 6H), 8.32(d, 1H)

[실시예 6]

3-(2-플루오르-페닐)-2-(2-메틸-3-메톡시-벤질설피닐)-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온 (화합물번호 22)

디클로로메탄(30㎖)에 상기 실시예 5에서 제조한 3-(2-플루오르-페닐)-2-(2-메틸-3-메톡시-벤질설피닐)-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(300 ㎎, 0.7mmol)과 메타-클로로과벤조산(120mg, 0.70mmol)을 가하고, -30℃에서 30분간 반응시켰다. 반응용매를 감압하에 제거하고, 에틸아세테이트로 추출한 후, NaHCO로 세척시키고, 무수 MgSO로 건조시켜 목적화합물(235mg, 수율 77%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 2.20(s, 3H), 2.50(s, 3H), 3.82(s, 3H), 4.62(d, 2H), 6.67(d, 1H), 7.1∼7.6(m, 6H), 8.32(d, 1H)

[실시예 7]

3-(4-플루오르-페닐)-2-벤질설파닐-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온 (화합물번호 31)

3-(4-플루오르-페닐)-2-머캅토-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(0.30g, 1.02mmol)을 디메틸포름아미드(15㎖)에 용해시킨 다음, 여기에 무수 탄산칼슘(0.222g, 1.59mmol), 2-피콜릴클로라이드·염산염(0.19g, 1.15mmol), 트리에틸아민(0.16g, 1.14mmol)의 순으로 부가한 후, 상온에서 10시간 반응시켰다. 에틸아세테이트로 추출한 후, 물로 세척하고, 무수 MgSO로 건조시킨 다음 농축시켜 목적화합물(0.26g, 수율 67%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 2.54(s, 3H), 4.54(s, 2H), 7.21(s, 1H), 7.14∼7.77(m, 7H), 8.51(d, 1H)

[실시예 8]

3-(4-플루오르-페닐)-2-벤질설피닐-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온 (화합물번호 32)

디클로로메탄(30㎖)에 상기 실시예 7에서 제조한 3-(4-플루오르-페닐)-2-벤질설파닐-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(0.14g, 0.46mmol)과 메타-클로로과벤조산(105mg, 0.60mmol)을 가하고, -30℃에서 30분간 반응시켰다. 반응용매를 감압하에서 제거하고, 에틸아세테이트로 추출한 후, NaHCO로 세척시키고, 무수 MgSO로 건조시켜 목적화합물(98mg, 수율 53%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 2.55(s, 3H), 4.23(d, 1H), 4.44(d, 1H), 7.12∼7.45(m, 4H), 7.65(t, 1H), 8.31(d, 1H)

[실시예 9]

3-(4-플루오르-페닐)-2-벤질설파닐-6-에틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온 (화합물번호 41)

3-(4-플루오르-페닐)-2-머캅토-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(0.30g, 0.97mmol)과 2-피콜릴클로라이드·염산염(0.17g, 1.03mmol), 트리에틸아민(0.16g, 1.14mmol)의 순으로 부가한 후, 상온에서 10시간 반응시켰다. 에틸아세테이트로 추출한 후, 물로 세척하고, 무수 MgSO로 건조시킨 다음 농축시켜 목적화합물(0.21g, 수율 54%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 1.18(t, 3H), 2.51(q, 2H), 4.53(s, 1H), 7.02(s, 1H), 7.10∼7.72(m, 7H), 8.47(d, 1H)

[실시예 10]

3-(4-플루오르-페닐)-2-벤질설피닐-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온 (화합물번호 42)

디클로로메탄(30㎖)에 상기 실시예 9에서 제조한 3-(4-플루오르-페닐)-2-벤질설파닐-6-에틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(0.18g, 0.46mmol)과 메타-클로로과벤조산(0.10g, 0.60mmol)을 가하고, -30℃에서 30분간 반응시켰다. 반응용매를 감압하에서 제거하고, 에틸아세테이트로 추출한 후, NaHCO로 세척시키고, 무수 MgSO로 건조시켜 목적화합물(0.11g, 수율 58%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 1.17(t, 3H), 2.54(q, 2H), 4.64(m, 2H), 7.04(m, 8H), 8.42(d, 1H)

[실시예 11]

3-(2-플루오르-페닐)-2-벤질설파닐-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온 (화합물번호 49)

3-(2-플루오르-페닐)-2-머캅토-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(0.50g, 1.71mmol)과 2-피콜릴클로라이드·염산염(0.30g, 1.81mmol)과 트리에틸아민(0.16g, 1.14mmol)의 순으로 부가한 후, 상온에서 10시간 반응시켰다. 에틸아세테이트로 추출한 후, 물로 세척하고, 무수 MgSO로 건조시킨 다음 농축시켜 목적화합물(0.44g, 수율 67%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 2.59(s, 3H), 4.54(s, 2H), 7.04(s, 1H), 7.10∼7.72(m, 7H), 8.49(d, 1H)

[실시예 12]

3-(2-플루오르-페닐)-벤질설피닐-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(화합물번호 50)

디클로로메탄(30㎖)에 상기 실시예 9에서 제조한 3-(2-플루오르-페닐)-2-벤질설파닐-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(0.25g, 0.65 mmol)과 메타-클로로과벤조산(0.15g, 0.86 mmol)을 가하고, -30℃에서 30분간 반응시켰다. 반응용매를 감압하에서 제거하고, 에틸아세테이트로 추출한 후, NaHCO로 세척시키고 무수 MgSO로 건조시켜 목적화합물(0.17g, 수율 65%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 2.51(s, 3H), 4.54(m, 2H), 7.08∼7.72(m, 8H), 8.44(d, 1H)

[실시예 13]

3-(2-플루오르-페닐)-2-벤질설파닐-6-에틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온 (화합물번호 57)

3-(2-플루오르-페닐)-2-머캅토-6-메틸-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(0.50g, 1.63mmol)과 2-피콜릴클로라이드·염산염(0.28g, 1.71mmol)과 크리에틸아민(0.6g, 4.3mmol)의 순으로 부가한 후, 상온에서 10시간 반응시켰다. 에틸아세테이트로 추출한 후, 물로 세척하고, 무수 MgSO로 건조시킨 다음 농축시켜 목적화합물(0.41g, 수율 64%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 1.25(t, 3H), 2.80(q, 2H), 4.58(s, 2H), 7.04∼7.73(m, 8H), 8.54(d, 1H)

[실시예14]

3-(2-플루오르-페닐)-2-벤질설파닐-6-에틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온 (화합물번호 58)

디클로로메탄(30㎖)에 상기 실시예 13에서 제조한 3-(2-플루오르-페닐)-2-벤질설파닐-6-에틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온(0.25g, 0.62 mmol)과 메타-클로로과벤조산(0.14g, 0.81 mmol)을 가하고, -30℃에서 30분간 반응시켰다. 반응용매를 감압하에서 제거하고, 에틸아세테이트로 추출한 후, NaHCO로 세척시키고, 무수 MgSO로 건조시켜 목적화합물(0.15g, 수율 58%)을 얻었다.

H NMR(CDCl) : δ 1.32(t, 3H), 2,89(q, 2H), 4.40(d, 2H), 8.44(d, 1H)

본 발명에 따른 상기 구조식(I)로 표시되는 피리딘을 함유한 티에노피리미돈 유도체 및 이의 약제학적 허용가능한 염(예를들면 산부가염 또는 나트륨염)은 위산분비 억제능력을 보유하고 있어 위궤양 치료제로서 매우 유용하다.

따라서, 본 발명에서는 상기 신규 피리딘을 함유한 티에노피리미돈 유도체를 유효성분으로 하는 약제조성물을 포함하는 바, 이들 약제조성물은 상기 구조식(I)의 화합물에 통상의 무독성 약제학적으로 수용 가능한 담체, 보강제 및 부형제를 첨가하여 경구투여 또는 비경구투여 될 수 있다.

상기 구조식(I)로 표시되는 화합물을 유효성분으로 하는 약제조성물은 경구투여용 제형 예를 들면 정제, 트로케제(troches), 로젠지(lozenge), 수용성 또는 유성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제(elixirs)로 제제된다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로제제하기 위해 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제 ; 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제 ; 옥수수전분 또는 고구마전분과 같은 붕괴제 ; 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜왁스와 같은 윤활유가 함유된다. 캡슐제형의 경우는 상기에서 언급한 물질이외에도 지방유와 같은 액체담체를 함유한다.

또한, 상기 구조식(I)로 표시되는 화합무으 유효성분으로 하여 비경구투여할 수 있으며, 비경구투여는 피하주사, 정맥주사, 근육내주사 또는 흉부내주사 주입방식에 의한다. 비경구투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 상기 구조식(I)의 화합물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의 단위투여형으로 제제한다.

구조식(I)로 표시되는 화합물의 투여용량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환정도 등에 따라서 달라질 수 있으며, 일반적으로 성인남자를 기준으로 했을때 1일 투여량은 15∼25mg이 바람직하다.

[시럽제]

유효성분 2%(중량/부피)를 함유하는 시럽을 다음과 같은 성분들로 제조하였다.

3-(2-플루오르-페닐)-2-벤질설피닐-6-메틸-3H-티에노

[2,3-d]피리미딘-4-온·HCl 2g

사카린 0.8g

당 25.4g

글리세린 8.0g

향미료 0.04g

에탄올 4.0g

소르브산 0.4g

증류수 정량

당, 사카린, 부가염들은 온수 80g에 용해시켰다. 이 용액을 냉각시킨 후, 여기에 글리세린, 사카린, 향미료, 에탄올, 소르브산 및 물로 이루어진 용액을 제조하여 병에 넣었다. 이 혼합물에 물을 첨가하여 100㎖가 되게 하였다. 상기 부가염은 또 다른 염으로 대치시킬 수 있다.

[정제]

유효성분 15mg이 함유된 정제는 다음과 같은 방법으로 제조하였다.

3-(2-플루오르-페닐)-2-벤질설피닐-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온·HCl 250g을 락토오스 175.9g, 감자전분 180g 및 콜로이드성 규산 32g과 혼합하였다. 이 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메시(mesh)체(sieve)를 통과시켰다. 이것은 건조시키고, 여기에 감자전분 160g, 활석 50g 및 스테아린산 마그네슘 5g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다.

[주사액제]

3-(2-플루오르-페닐)-2-벤질설피닐-6-메틸-3H-티에노[2,3-d]피리미딘-4-온·HCl 1g, 염화나트륨 0.6g 및 아스코르브산 0.1g을 증류수에 용해시켜서 100㎖를 얻었다. 이 용액은 유효성분 10mg을 함유하고 있으며, 이 용액을 병에 넣고, 20℃에서 30분간 가열하여서 멸균시켰다.

[생체약리활성검색]

In Vivo 검색

스프래그 다우리(Sprague Dawley)계 웅성흰쥐(150∼200g)의 복강을 절개하여 유문부를 결찰하고 30% 폴리에틸렌글리콜(PEG) 400 수용액에 시험물질을 현탁 또는 용해시킨 용액 20mg/kg의 양을 십이지장에 주사하였다. 다시 복강을 재봉합한 뒤 5시간 방치한 후, 경추탈골법으로 치사시켜 위를 검출하여 위액을 수거하였다. 원심분리로 침전물을 제거한뒤, 위액의 양과 pH를 측정하고 오리온(Orion) 960 자동분석기로 산도를 적정하여 대조군, 비교물질(Omeprazole) 및 시험물질간의 위액분비 억제효과를 비교 분석하였다. 이때 H /K -ATPase의 시험관내 효소반응실험은 Mg 으로 자극된 H /K -ATPase 활성도를 음성대조군으로 하고, Mg 과 K 으로 자극된 H /K -ATPase 활성도를 양성대조군으로 하였다.

In Vitro 검색

뉴질랜드 화이트계 웅성토끼(Female Newzealand white rabbit, 2∼3kg)를 두부강타법으로 치사시킨뒤, 위를 척출하여 내용물을 제거하고 위내벽을 생리식염수로 씻었다. 슬라이드 글라스로 위내벽의 벽세포를 긁은 다음, 슈크로오스 완충액(슈크로오스 250mM, HEPES 2mM, MgCl2mM, 40mM 트리염산 완축액중의 EDTA 1mM pH 7.4) 상에서 테프론-유리균질기(teflon-glass homogenizer)로 세포를 균질화 하였다. 이 균질액을 10,000g로 4℃에서 30분간 원심분리하고 윗층을 취하여 다시 100,000g로 4℃에서 1시간동안 초고속원심분리 한 뒤 윗층은 버리고 침전된 펠렛(pellet)층을 40mM 트리스염산 완충액(pH 7.4)에 재현탁시켜 토끼 위벽세포 마이크로솜 펠렛(mricrosomal pellet)을 제조하였다. 이 마이크로솜 펠렛을 H /K -ATPase의 시험관내 효소반응실험을 수행하는 효소원으로 사용하였다.

H /K -ATPase의 시험관내 효소반응실험은 Mg 으로 자극된 H /K -ATPase 활성도를 음성대조군(negative control)으로 하고, Mg 과 K 으로 자극된 H /K -ATPase 활성도를 양성대조군(positive control)으로 하였다. 즉, 음성·양성대조군 시험군과 시험물질군 시험관에 각각 20㎖를 넣고, 여기에 MgCl(100㎕)와 마이크로솜 펠렛(50㎍)을 가한다. 그리고 대조군 시험관들에는 각각 디메틸술폭사이드(DMSO) 10㎕를 가하고, 시험물질군 시험관에는 시험관내 효소 반응조건에서 DMSO에 녹인 시험물질을 최대 용해도가 보이는 농도로부터 5개 농도로 시험물질의 농도를 희석해서 각각 10㎕를 가한다. 그리고 음성대조군 시험관에는 40mM 트리스염산 완충액(pH 7.4) 10㎕을 가하고 양성대조군과 시험물질군 시험관에는 300mM KCl + 100mM NHCl 혼합용액 100㎕를 가한뒤 전체반응 부피가 400㎕ 되도록 40mM 트리스염산 완충액(pH 7.4)을 가한다.

이 반응 시험관들을 37℃에서 30분간 전반응(Pre-incubation)을 시켜 화합물(compound)과 H /K -ATPase와의 결합조건(binding condition)을 준뒤, 33.3mM ATP-트리스염산 완충액 100㎕을 가하여 효소반응의 최종조건이 전체반응부피 500㎕내에 MgCl(4mM), KCl(60mM), NHCl(20mM), DMSO-시험화합물 2%(v/v), ATP(6.7mM), 마이크로솜 펠렛 50㎍(0.2㎍ ㎕) 그리고 트리스염산(pH 7.4) 완충액 40mM 되게 하여 37℃에서 30분간 효소반응을 시켰다. 이때의 효소반응 산물로 나오는 무기인을 혈액자동분석기(GILFORD SBA-300)로 정량하여 음성대조군과 양성대조군의 차이를 K 으로 자극된 H /K -ATPase 활성도로 정하였다. 그리고 시험물질의 IC(H /K -ATpase 활성도 50% 억제하는 시험물질의 농도) 5개 농도로 가한 시험물질 시험관에서 효소활성도가 저해되는 각각의 %값에서 리치필드-윌콕슨(Liitchfield-Wilcoxon)법으로 산출하였다.

시험결과(in vivo test)는 다음 표 2에 나타내었다.

[급성독성시험]

본 발명에 따른 화합물에 대한 급성독성을 알아보기 위하여 ICR 수컷 마우스에 단회 경구투여하여 7일 간의 사망율, 일반증상, 체중변화 및 부검소견을 관찰하였다. 시험군은 5000, 3000, 1000, 500, 100 및 10 ㎎/㎏ 투여군의 6군으로 설정하였고, 각 군별 암수 각각 3마리씩 이었다.

본 실험결과 모든 투여군에서 사망동물은 관찰되지 않았다. 일반증상의 경우 투여 1시간째에 2000㎎/㎏ 이상의 모든 동물에서 활동력저하 증상이 관찰되는데 3∼4시간까지 상기 증상이 지속된 5000㎎/㎏ 투여군을 제외하고 모두 빠르게 회복되었다. 체중변화 및 육안적인 부검소견에 있어서 시험물질에 의한 영향으로 사료되는 증상은 관찰되지 않았다. 이상의 결과로 보아 수컷 마우스에 있어서 본 발명에 따른 화합물의 LD값은 5000㎎/㎏ 이상으로 사료된다.

Claims (7)

1. 다음 구조식(I)로 표시되는 티에노피리미돈 유도체.

   상기식에서, R¹및 R²는 각각 같거나 다른 것으로서 수소원자 또는 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기이고, R³은 할로겐원자이고, R⁴는 수소원자 또는 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기이고, R⁵는 수소원자, 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기 또는 탄소원자수 1 내지 3의 알콕시기이고, R⁶은 수소원자 또는 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기이고, n은 0 또는 1이다.
2. 제1항에 있어서, 상기 R¹및 R²는 각각 같거나 다른 것으로서, 수소원자, 메틸기 또는 에틸기인 것을 특징으로 하는 티에노피리미돈 유도체.
3. 제1항에 있어서, 상기 R³은 불소, 염소 또는 브롬원자인 것을 특징으로 하는 티에노피리미돈 유도체.
4. 제1항에 있어서, 상기 R⁴는 수소원자 또는 메틸기인 것을 특징으로 하는 티에노피리미돈 유도체.
5. 제1항에 있어서, 상기 R⁵는 수소원자, 메틸기 또는 메톡시기인 것을 특징으로 하는 티에노피리미돈 유도체.
6. 제1항에 있어서, 상기 R⁶는 수소원자 또는 메틸기인 것을 특징으로 하는 티에노피리미돈 유도체.
7. 다음 구조식(I)로 표시되는 티에노피리미돈 유도체 및 이들의 약제학적 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하고 있는 것을 특징으로 하는 위궤양 치료제 조성물.

   상기 식에서, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶및 n 각각은 상기 제1항에서 정의한 바와같다.