JPWO2021243172A5

JPWO2021243172A5 -

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Publication number: JPWO2021243172A5
Application number: JP2022571787A
Authority: JP
Publication date: 2024-06-04

Description

本開示は、ピコルナウイルスゲノムおよび異種ポリヌクレオチドを含む組換えＲＮＡレプリコンを提供する。一部の実施形態では、異種ポリヌクレオチドが、２Ａコード領域と２Ｂコード領域との間に挿入される。一部の実施形態では、異種ポリヌクレオチドが、５’ＵＴＲと２Ａコード領域との間に挿入される。一部の実施形態では、異種ポリヌクレオチドが、３Ｄコード領域と３’ＵＴＲとの間に挿入される。一部の実施形態では、ピコルナウイルスが、セネカウイルス（ｓｅｎｅｃａｖｉｒｕｓ）、カルジオウイルス、およびエンテロウイルスから選択される。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ピコルナウイルスゲノムであって、一つ以上のタンパク質コード領域に欠失または切断を含むピコルナウイルスゲノム、および
異種ポリヌクレオチドを含む、組換えＲＮＡレプリコン。
（項目２）
前記ピコルナウイルスゲノムが、一つ以上のＶＰコード領域に前記欠失または前記切断を含む、項目１に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目３）
前記ピコルナウイルスゲノムが、ＶＰ１コード領域、ＶＰ３コード領域およびＶＰ２コード領域のそれぞれに欠失または切断を含む、項目１または２に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目４）
前記ピコルナウイルスゲノムが、ＶＰ１コード領域およびＶＰ３コード領域の欠失ならびにＶＰ２コード領域の切断を含む、項目１～３のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目５）
前記ピコルナウイルスが、セネカウイルス（ｓｅｎｅｃａｖｉｒｕｓ）、カルジオウイルス、およびエンテロウイルスから選択される、項目１～４のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目６）
前記欠失または前記切断は、少なくとも５００ｂｐ、少なくとも１０００ｂｐ、少なくとも１５００ｂｐ、少なくとも２０００ｂｐ、少なくとも２５００ｂｐ、または少なくとも３０００ｂｐを含む、項目１～５のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目７）
前記欠失または前記切断が、少なくとも２０００ｂｐを含む、項目６に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目８）
前記欠失の部位または前記切断の部位が、異種ポリヌクレオチドを含む、項目１～７のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目９）
前記異種ポリヌクレオチドが、２Ａコード領域と２Ｂコード領域との間に挿入される、項目１～７のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目１０）
前記異種ポリヌクレオチドが、３Ｄコード領域と３’非翻訳領域（ＵＴＲ）との間に挿入される、項目１～７のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目１１）
前記異種ポリヌクレオチドが、少なくとも１０００ｂｐ、少なくとも２０００ｂｐ、または少なくとも３０００ｂｐを含む、項目１～１０のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目１２）
前記ピコルナウイルスが、セネカバレーウイルス（ＳＶＶ）である、項目１～１１のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目１３）
前記欠失または前記切断が、配列番号１の番号付けに従って、上限下限を含めて、１２６１位および３４７７位のヌクレオチドの間の一つ以上のヌクレオチドを含む、項目１２に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目１４）
前記欠失または前記切断が、配列番号１の番号付けに従って、上限下限を含めて、１２６１位から３４７７位のヌクレオチドを含む、項目１２に記載の組換えＲＮＡレプリコ
ン。
（項目１５）
前記欠失または前記切断が、少なくとも５００ｂｐ、少なくとも１０００ｂｐ、少なくとも１５００ｂｐ、または少なくとも２０００ｂｐを含む、項目１２～１３に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目１６）
前記欠失または前記切断が、少なくとも２０００ｂｐを含む、項目１５に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目１７）
ＳＶＶゲノムが、５’リーダータンパク質コード配列を含む、項目１２～１６のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目１８）
ＳＶＶゲノムが、ＶＰ４コード領域を含む、項目１２～１７のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目１９）
ＳＶＶゲノムが、ＶＰ２コード領域またはその切断を含む、項目１２～１８のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目２０）
ＳＶＶゲノムが、５’から３’方向に、５’リーダータンパク質コード配列、ＶＰ４コード領域、およびＶＰ２コード領域またはその切断を含む、項目１９に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目２１）
５’リーダータンパク質コード配列、ＶＰ４コード領域、およびＶＰ２コード領域またはその切断を含むＳＶＶゲノムの部分が、配列番号１の１～１２６０位のヌクレオチドに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、項目２０に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目２２）
ＳＶＶゲノムが、５’から３’方向に、５’リーダータンパク質コード配列、ＶＰ４コード領域、ＶＰ２コード領域またはその切断、および異種ポリヌクレオチドを含む、項目２０または２１に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目２３）
ＳＶＶゲノムが、シス作用性複製エレメント（ＣＲＥ）を含む、項目１～２２のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目２４）
ＣＲＥが、１０～２００ｂｐを含む、項目２３に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目２５）
ＣＲＥが、配列番号１に従う１０００位のヌクレオチドから１２６０位のヌクレオチドに対応する領域内に一つ以上のヌクレオチドを含む、項目２３または２４に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目２６）
ＣＲＥが、配列番号１に従う１１１７位のヌクレオチドから１２６０位のヌクレオチドに対応する領域内に一つ以上のヌクレオチドを含む、項目２３または２４に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目２７）
ＣＲＥが、配列番号１４９に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む、項目２３～２６のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目２８）
ＳＶＶゲノムが、２Ａコード領域をさらに含む、項目１２～２７のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目２９）
２Ａコード領域が、ＶＰ２コード領域またはその切断と異種ポリヌクレオチドとの間に位置している、項目２８に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目３０）
ＳＶＶゲノムが、２Ｂコード領域、２Ｃコード領域、３Ａコード領域、３Ｂコード領域、３Ｃｐｒｏコード領域、および３Ｄ（ＲｄＲｐ）コード領域のうちの一つ以上を含む、項目１２～２９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目３１）
ＳＶＶゲノムが、２Ｂコード領域、２Ｃコード領域、３Ａコード領域、３Ｂコード領域、３Ｃｐｒｏコード領域、および３Ｄ（ＲｄＲｐ）コード領域を含む、項目１２～２９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目３２）
ＳＶＶゲノムが、５’から３’方向に、２Ｂコード領域、２Ｃコード領域、３Ａコード領域、３Ｂコード領域、３Ｃｐｒｏコード領域、および３Ｄ（ＲｄＲｐ）コード領域を含む、項目３１に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目３３）
２Ｂコード領域、２Ｃコード領域、３Ａコード領域、３Ｂコード領域、３Ｃｐｒｏコード領域、および３Ｄ（ＲｄＲｐ）コード領域を含むＳＶＶゲノムの部分が、配列番号１に従う３５０５位から７３１０位のヌクレオチドに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、項目３２に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目３４）
ＳＶＶゲノムが、５’から３’方向に、異種ポリヌクレオチドと２Ｂコード領域を含む、項目３０～３３のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目３５）
ピコルナウイルスが、コクサッキーウイルスである、項目１～１１のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目３６）
前記欠失または前記切断が、配列番号３の番号付けに従って、上限下限を含めて、７１７位から３３３２位のヌクレオチドの間の一つ以上のヌクレオチドを含む、項目３５に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目３７）
前記欠失または前記切断が、配列番号３の番号付けに従って、上限下限を含めて、７１７位から３３３２位のヌクレオチドを含む、項目３５に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目３８）
前記欠失または前記切断が、少なくとも５００ｂｐ、少なくとも１０００ｂｐ、少なくとも１５００ｂｐ、少なくとも２０００ｂｐ、または少なくとも２６００ｂｐを含む、項目３５または３６に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目３９）
コクサッキーウイルスゲノムが、５’ＵＴＲを含む、項目３５～３８のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目４０）
５’ＵＴＲを含むコクサッキーウイルスゲノムの部分が、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、項目３５～３９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目４１）
コクサッキーウイルスゲノムが、２Ａコード領域、２Ｂコード領域、２Ｃコード領域、３Ａコード領域、３Ｂコード領域、ＶＰｇコード領域、３Ｃコード領域、３Ｄｐｏｌコ
ード領域、および３’ＵＴＲのうちの一つ以上を含む、項目３５～４０のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目４２）
コクサッキーウイルスゲノムが、２Ａコード領域、２Ｂコード領域、２Ｃコード領域、３Ａコード領域、３Ｂコード領域、ＶＰｇコード領域、３Ｃコード領域、３Ｄｐｏｌコード領域、および３’ＵＴＲを含む、項目３５～４０のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目４３）
コクサッキーウイルスゲノムが、５’から３’方向に、２Ａコード領域、２Ｂコード領域、２Ｃコード領域、３Ａコード領域、３Ｂコード領域、ＶＰｇコード領域、３Ｃコード領域、３Ｄｐｏｌコード領域、および３’ＵＴＲを含む、項目４２に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目４４）
２Ａコード領域、２Ｂコード領域、２Ｃコード領域、３Ａコード領域、３Ｂコード領域、ＶＰｇコード領域、３Ｃコード領域、３Ｄｐｏｌコード領域、および３’ＵＴＲを含むコクサッキーウイルスゲノムの部分が、配列番号３における３４９２位から７４３５位のヌクレオチドに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、項目４２に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目４５）
コクサッキーウイルスゲノムが、５’から３’方向に、５’ＵＴＲ、異種ポリヌクレオチドおよび２Ａコード領域を含む、項目４１～４４のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目４６）
ピコルナウイルスが、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）である、項目１～１１のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目４７）
組換えＲＮＡレプリコンが、異種ポリヌクレオチドと２Ｂコード領域との間に挿入される内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ（ｉｎｔｅｒｎａｌｒｉｂｏｓｏｍｅｅｎｔｒｙｓｉｔｅ））を含む、項目９および１１～４６のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目４８）
異種ポリヌクレオチドが、一つ以上のペイロード分子をコードする、項目１～４７のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目４９）
異種ポリヌクレオチドが、二つ以上のペイロード分子をコードする、項目１～４７のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目５０）
二つ以上のペイロード分子が、一つ以上の開裂ポリペプチドによって動作可能に連結される、項目４９に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目５１）
開裂ポリペプチドが、２Ａファミリーの自己開裂ペプチド、３Ｃ開裂部位、フーリン部位、ＩＧＳＦ１ポリペプチド、またはＨＩＶプロテアーゼ部位を含む、項目５０に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目５２）
開裂ポリペプチドが、ＩＧＳＦ１ポリペプチドを含み、また該ＩＧＳＦ１ポリペプチドが、配列番号７５に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目５１に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目５３）
開裂ポリペプチドが、ＨＩＶプロテアーゼ部位を含む、項目５１に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目５４）
開裂ポリペプチドが、２Ａファミリーの自己開裂ペプチドを含む、項目５１に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目５５）
開裂ポリペプチドが、フーリン部位を含む、項目５０～５４のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目５６）
異種ポリヌクレオチドが、Ｎ末端からＣ末端の方向に、Ｎ’－ペイロード分子１－開裂ポリペプチド－ペイロード分子２－Ｃ’を含む二つ以上のペイロード分子と開裂ポリペプチドとを含むポリペプチドをコードするものである、項目５０から５５のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目５７）
異種ポリヌクレオチドが、ＨＩＶプロテアーゼをコードするコード領域をさらに含み、また異種ポリヌクレオチドが、Ｎ末端からＣ末端の方向に、Ｎ’－ペイロード分子１－ＨＩＶプロテアーゼ部位－ＨＩＶプロテアーゼ－ＨＩＶプロテアーゼ部位－ペイロード分子２－Ｃ’を含むポリペプチドをコードするコード領域を含む、項目５３に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目５８）
異種ポリヌクレオチドが、第三のペイロード分子をコードするコード領域をさらに含み、また異種ポリヌクレオチドが、Ｎ末端からＣ末端の方向に、
Ｎ’－ペイロード分子１－ＨＩＶプロテアーゼ部位－ＨＩＶプロテアーゼ－ＨＩＶプロテアーゼ部位－ペイロード分子２－ＨＩＶプロテアーゼ部位－ペイロード分子３－Ｃ’を含むポリペプチドをコードするコード領域を含む、項目５７に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目５９）
当該コードされたポリペプチドのＣ末端に開裂ポリペプチドをさらに含む、項目５６～５８のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目６０）
ペイロード分子が、蛍光タンパク質、酵素、サイトカイン、ケモカイン、抗原、細胞表面受容体に結合することができる抗原結合分子、および細胞表面受容体に対するリガンドから選択される、項目４８～５９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目６１）
前記ペイロード分子が、
ａ）ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、およびＩＬ－３６γを含む一つ以上のサイトカイン、
ｂ）ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、およびＣＣＬ２１を含む一つ以上のケモカイン、
ｃ）抗－ＰＤ１－ＶＨＨ－Ｆｃ抗体、抗－ＣＤ４７－ＶＨＨ－Ｆｃ抗体、および抗－ＴＧＦβ－ＶＨＨ（またはｓｃＦｖ）－Ｆｃ抗体を含む一つ以上の抗体、
ｄ）ＤＬＬ３およびエフェクター細胞標的抗原と結合する二部位ポリペプチドと、ＦＡＰおよびエフェクター細胞標的抗原と結合する二部位ポリペプチドと、ＥｐＣＡＭおよびエフェクター細胞標的抗原と結合する二部位ポリペプチドとを含む、一つ以上の二部位ポリペプチド、
ｅ）サバイビン、ＭＡＧＥファミリータンパク質、および表６に記載のすべての抗原を含む一つ以上の腫瘍関連抗原、
ｆ）一つ以上の腫瘍新生抗原、
ｇ）ＭＨＣ－ペプチド抗原複合体に結合する一つ以上の二部位ポリペプチド、
ｈ）単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＵＬ２７／糖タンパク質Ｂ／ｇＢ、ＨＳＶＵＬ５３／糖タンパク質Ｋ／ｇＫ、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆタンパク質、ＦＡＳＴｐ１５、ＶＳＶ－Ｇ、シンシチン（ｓｙｎｃｉｔｉｎ）－１（ヒト内在性レトロウイルス
－Ｗ（ＨＥＲＶ－Ｗ）由来）またはシンシチン－２（ＨＥＲＶＦＲＤＥ１由来）、パラミクソウイルスＳＶ５－Ｆ、はしかウイルス－Ｈ、はしかウイルス－Ｆ、および例えばテナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、メーソン－ファイザーモンキーウイルス（ＭＰＭＶ）およびウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）等であり、任意でＲ膜貫通ペプチドが除去されている（Ｒ－バージョン）、レトロウイルスまたはレンチウイルス由来の糖タンパク質を含む一つ以上の膜融合性タンパク質、
ｉ）ＩＬ１５Ｒ、ＰＧＤＨ、ＡＤＡ、ＡＤＡ２、ＨＹＡＬ１、ＨＹＡＬ２、ＣＨＩＰＳ、ＭＬＫＬ（またはその４ＨＢドメインのみ）、ＧＳＤＭＤ（またはそのＬ１９２Ａ変異体、またはそのアミノ酸１～２３３断片、またはＬ１９２Ａ変異を有するそのアミノ酸１～２３３断片）、ＧＳＤＭＥ（またはそのアミノ酸１～２３７断片）、ＨＭＧＢ１（またはそのボックスＢドメインのみ）、メリチン（例えば、アルファ－メリチン）、ＳＭＡＣ／Ｄｉａｂｌｏ（またはそのアミノ酸５６～２３９断片）、ヘビＬＡＡＯ、ヘビディスインテグリン、レプチン、ＦＬＴ３Ｌ、ＴＲＡＩＬ、ガスダーミンＤまたはその切断、およびガスダーミンＥまたはその切断、を含む一つ以上の他のペイロード分子、
ｊ）デングウイルス、チクングニヤウイルス、ヒト結核菌、ヒト免疫不全ウイルス、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、コロナウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、トガウイルス科ウイルス、フラビウイルス科ウイルス、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、および動物ウイルス（ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙｖｉｒｕｓ）を含む、病原体由来の一つ以上の抗原、または
ｋ）それらの任意の組み合わせ、から選択される、項目４８から５９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目６２）
二つ以上のペイロード分子が、蛍光タンパク質、酵素、サイトカイン、ケモカイン、細胞表面受容体に結合することができる抗原結合分子、および細胞表面受容体に対するリガンドからなる群から選択される、項目４９～５９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目６３）
異種ポリヌクレオチドが、
ａ．ＩＬ－２およびＩＬ－３６γ、
ｂ．ＣＸＣＬ１０ならびにＦＡＰおよびＣＤ３に結合する抗原結合分子、
ｃ．ＩＬ－２ならびにＤＬＬ３およびＣＤ３に結合する抗原結合分子、
ｄ．ＩＬ－３６γならびにＤＬＬ３およびＣＤ３に結合する抗原結合分子、または
ｅ．ＩＬ－２、ＩＬ－３６γならびにＤＬＬ３およびＣＤ３に結合する抗原結合分子、を含む二つ以上のペイロード分子をコードする、項目４９から５９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目６４）
一つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を含むマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）標的配列（ｍｉＲ－ＴＳ）カセットをさらに含む、項目１～６３のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目６５）
一つ以上のｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１２８、ｍｉＲ－２１９、ｍｉＲ－２１９ａ、ｍｉＲ－１２２、ｍｉＲ－２０４、ｍｉＲ－２１７、ｍｉＲ－１３７、およびｍｉＲ－１２６を含む、項目６４に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目６６）
５’から３’方向に、プロモーター配列、５’結合部開裂配列、項目１～６５のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコンをコードするポリヌクレオチド配列、および３’結合部開裂配列を含む、組換えＤＮＡ分子。
（項目６７）
プロモーター配列が、Ｔ７プロモーター配列である、項目６６に記載の組換えＤＮＡ
分子。
（項目６８）
５’結合部開裂配列がリボザイム配列であり、また３’結合部開裂配列がリボザイム配列である、項目６６または６７に記載の組換えＤＮＡ分子。
（項目６９）
５’リボザイム配列が、ハンマーヘッド型リボザイム配列であり、また３’リボザイム配列が、デルタ型肝炎ウイルスリボザイム配列である、項目６８に記載の組換えＤＮＡ分子。
（項目７０）
５’結合部開裂配列がリボザイム配列であり、また３’結合部開裂配列が制限酵素認識配列である、項目６６または６７に記載の組換えＤＮＡ分子。
（項目７１）
５’リボザイム配列が、ハンマーヘッド型リボザイム配列、ピストル型リボザイム配列、または改変されたピストル型リボザイム配列である、項目７０に記載の組換えＤＮＡ分子。
（項目７２）
３’制限酵素認識配列が、タイプＩＩＳ制限酵素認識配列である、項目７０または７１に記載の組換えＤＮＡ分子。
（項目７３）
タイプＩＩＳ認識配列が、ＳａｐＩ認識配列である、項目７２に記載の組換えＤＮＡ分子。
（項目７４）
５’結合部開裂配列がＲＮＡｓｅＨプライマー結合配列であり、また３’結合部開裂配列が制限酵素認識配列である、項目６６または６７に記載の組換えＤＮＡ分子。
（項目７５）
項目６６～７４のいずれか一項に記載のＤＮＡ分子のインビトロ転写、および結果として生じる組換えＲＮＡレプリコンの精製を含む、項目１～６５のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコンを産生する方法。
（項目７６）
有効量の項目１～６５のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコンおよび哺乳類対象への投与に適した担体を含む、組成物。
（項目７７）
項目１～６５のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコンを含む、ベクター。
（項目７８）
ベクターがウイルスベクターである、項目７７に記載のベクター。
（項目７９）
ベクターが非ウイルスベクターである、項目７７に記載のベクター。
（項目８０）
項目１～６５のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコンを含む、粒子。
（項目８１）
当該粒子が、ナノ粒子、エクソソーム、リポソーム、およびリポプレックス（ｌｉｐｏｐｌｅｘ）からなる群から選択される、項目８０に記載の粒子。
（項目８２）
ナノ粒子が、カチオン性脂質、一つ以上のヘルパー脂質、およびリン脂質－ポリマーコンジュゲートを含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）である、項目８１に記載の粒子。
（項目８３）
カチオン性脂質が、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ、ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ（ＭＣ３）、ＣＯＡＴＳＯＭＥ（登録商標）ＳＳ－ＬＣ（旧名：ＳＳ－１８／４ＰＥ－１３）、ＣＯＡＴＳＯＭＥ（登録商標）ＳＳ－ＥＣ（旧名：ＳＳ－３３／４ＰＥ－１５）、ＣＯＡＴＳＯＭＥ（登録商標）ＳＳ－ＯＣ、ＣＯＡＴＳＯＭＥ（登録商標）ＳＳ－
ＯＰ、ジ（（Ｚ）－ノン－２－エン－１－イル）９－（（４－ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオアート（Ｌ－３１９）、またはＮ－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）から選択される、項目８２に記載の粒子。
（項目８４）
ヘルパー脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、およびコレステロールから選択される、項目８２または８３に記載の粒子。
（項目８５）
カチオン性脂質が、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＴＡＰ）であり、また中性脂質が、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）または１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）である、項目８２に記載の粒子。
（項目８６）
ＰＥＧ脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、１，２－ジパルミトイル－ｒａｃ－グリセロールメトキシポリエチレングリコール（ＤＰＧ－ＰＥＧ）、１，２－ジステアロイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン（ＤＳＧ－ＰＥＧ）、１，２－ジステアロイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン（ＤＳＧ－ＰＥＧ）、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン（ＤＭＧ－ＰＥＧ）、および１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン（ＤＭＧ－ＰＥＧ）、または１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－アミン）から選択される、項目８２～８５のいずれか一項に記載の粒子。
（項目８７）
ＰＥＧ脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）－５０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ５Ｋ）、１，２－ジパルミトイル－ｒａｃ－グリセロールメトキシポリエチレングリコール－２０００（ＤＰＧ－ＰＥＧ２Ｋ）、１，２－ジステアロイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン－５０００（ＤＳＧ－ＰＥＧ５Ｋ）、１，２－ジステアロイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン－２０００（ＤＳＧ－ＰＥＧ２Ｋ）、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン－５０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ５Ｋ）、および１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン－２０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ）から選択される、項目８２～８６のいずれか一項に記載の粒子。
（項目８８）
カチオン性脂質が、ＣＯＡＴＳＯＭＥ（登録商標）ＳＳ－ＯＣを含むものであり、一つ以上のヘルパー脂質が、コレステロール（Ｃｈｏｌ）およびＤＳＰＣを含み、またリン脂質－ポリマーコンジュゲートが、ＤＰＧ－ＰＥＧ２０００を含む、項目８２に記載の粒子。
（項目８９）
ＳＳ－ＯＣ：ＤＳＰＣ：Ｃｈｏｌ：ＤＰＧ－ＰＥＧ２Ｋの比（総脂質含量の百分率として）が、Ａ：Ｂ：Ｃ：Ｄであり、式中、
ａ．Ａ＝４０％～６０％、Ｂ＝１０％～２５％、Ｃ＝２０％～３０％、およびＤ＝０％～３％であり、且つ、Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ＝１００％、
ｂ．Ａ＝４５％～５０％、Ｂ＝２０％～２５％、Ｃ＝２５％～３０％、およびＤ＝０％～１％であり、且つ、Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ＝１００％、
ｃ．Ａ＝４０％～６０％、Ｂ＝１０％～３０％、Ｃ＝２０％～４５％、およびＤ＝０％～３％であり、且つ、Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ＝１００％、
ｄ．Ａ＝４０％～６０％、Ｂ＝１０％～３０％、Ｃ＝２５％～４５％、およびＤ＝０％～３％であり、且つ、Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ＝１００％、
ｅ．Ａ＝４５％～５５％、Ｂ＝１０％～２０％、Ｃ＝３０％～４０％、およびＤ＝１％～２％であり、且つ、Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ＝１００％、
ｆ．Ａ＝４５％～５０％、Ｂ＝１０％～１５％、Ｃ＝３５％～４０％、およびＤ＝１％～２％であり、且つ、Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ＝１００％、
ｇ．Ａ＝４５％～６５％、Ｂ＝５％～２０％、Ｃ＝２０％～４５％、およびＤ＝０％～３％であり、且つ、Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ＝１００％、
ｈ．Ａ＝５０％～６０％、Ｂ＝５％～１５％、Ｃ＝３０％～４５％、およびＤ＝０％～３％であり、且つ、Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ＝１００％、
ｉ．Ａ＝５５％～６０％、Ｂ＝５％～１５％、Ｃ＝３０％～４０％、およびＤ＝１％～２％であり、且つ、Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ＝１００％、
ｊ．Ａ＝５５％～６０％、Ｂ＝５％～１０％、Ｃ＝３０％～３５％、およびＤ＝１％～２％であり、且つ、Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ＝１００％である、項目８８に記載の粒子。
（項目９０）
ＳＳ－ＯＣ：ＤＳＰＣ：Ｃｈｏｌ：ＤＰＧ－ＰＥＧ２Ｋの比（総脂質含量の百分率として）が、
ａ．約４９：２２：２８．５：０．５、
ｂ．約４９：１１：３８．５：１．５、または
ｃ．約５８：７：３３．５：１．５である、項目８８に記載の粒子。
（項目９１）
ＳＳ－ＯＣ：ＤＳＰＣ：Ｃｈｏｌ：ＤＰＧ－ＰＥＧ２Ｋの比（総脂質含量の百分率として）が、約４９：２２：２８．５：０．５である、項目８８に記載の粒子。
（項目９２）
カチオン性脂質が、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＴＡＰ）であり、また中性脂質が、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）または１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）である、項目８２に記載の粒子。
（項目９３）
ＰＥＧ脂質であって、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリ（エチレングリコール）（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、または１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－アミン）であるＰＥＧ脂質をさらに含む、項目８２または９２に記載の粒子。
（項目９４）
腫瘍崩壊ウイルスをコードする第二の組換えＲＮＡ分子をさらに含む、項目８０から９３のいずれか一項に記載の粒子。
（項目９５）
腫瘍崩壊ウイルスがピコルナウイルスである、項目９４に記載の粒子。
（項目９６）
ピコルナウイルスが、セネカウイルス（ｓｅｎｅｃａｖｉｒｕｓ）、カルジオウイルス、およびエンテロウイルスから選択される、項目９５に記載の粒子。
（項目９７）
ピコルナウイルスが、セネカバレーウイルス（ＳＶＶ）である、項目９５に記載の粒子。
（項目９８）
ピコルナウイルスが、コクサッキーウイルスである、項目９５に記載の粒子。
（項目９９）
ピコルナウイルスが、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）である、項目９５に記載の粒子。
（項目１００）
項目８２～９９のいずれか一項に記載の複数の脂質ナノ粒子を含む、治療組成物。
（項目１０１）
複数のＬＮＰが、約５０ｎｍ～約１２０ｎｍの平均サイズを有する、項目１００に記載の治療組成物。
（項目１０２）
複数のＬＮＰが、約１００ｎｍの平均サイズを有する、項目１００に記載の治療組成物。
（項目１０３）
複数のＬＮＰが、約２０ｍＶ～約－２０ｍＶ、約１０ｍＶ～約－１０ｍＶ、約５ｍＶ～約－５ｍＶ、または約２０ｍＶ～約－４０ｍＶ、－５０ｍＶ～約－２０ｍＶ、約－４０ｍＶ～約－２０ｍＶ、または約－３０ｍＶ～約－２０ｍＶの平均ゼータ電位を有する、項目１００～１０２のいずれか一項に記載の治療組成物。
（項目１０４）
複数のＬＮＰが、約－３０ｍＶ、約－３１ｍＶ、約－３２ｍＶ、約－３３ｍＶ、約－３４ｍＶ、約－３５ｍＶ、約－３６ｍＶ、約－３７ｍＶ、約－３８ｍＶ、約－３９ｍＶ、または約－４０ｍＶの平均ゼータ電位を有する、項目１０３に記載の治療組成物。
（項目１０５）
がん細胞を死滅させる方法であって、項目８０～９７のいずれか一項に記載の粒子、項目７７～７９のいずれか一項に記載のベクター、項目１～６５のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン、またはその組成物に、がん細胞を曝露することを含む、方法。
（項目１０６）
当該方法が、インビボ、インビトロ、またはエクスビボで実施される、項目１０５に記載の方法。
（項目１０７）
対象においてがんを治療する方法であって、項目８０～９７のいずれか一項に記載の粒子、項目７７～７９のいずれか一項に記載のベクター、項目１～６５のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン、またはその組成物の有効量を、前記がんに罹患している前記対象に投与することを含む、方法。
（項目１０８）
粒子、組換え型ＲＮＡレプリコンまたはその組成物が、静脈内、鼻腔内、吸入剤として投与されるか、または腫瘍に直接注射される、項目１０７に記載の方法。
（項目１０９）
粒子、組換えＲＮＡレプリコン、またはその組成物が、前記対象に繰り返し投与される、項目１０７または１０８に記載の方法。
（項目１１０）
前記対象が、マウス、ラット、ウサギ、ネコ、イヌ、ウマ、非ヒト霊長類、またはヒトである、項目１０７～１０９のいずれかに記載の方法。
（項目１１１）
前記がんが、肺がん、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、前立腺がん、精巣がん、結腸直腸がん、結腸がん、膵がん（例えば、去勢抵抗性神経内分泌前立腺がん）、肝がん、胃がん、頭頸部がん、甲状腺がん、悪性神経膠腫、膠芽腫、黒色腫、Ｂ細胞性慢性リンパ性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、肉腫、神経芽腫、神経内分泌がん、横紋筋肉腫、髄芽腫、膀胱がん、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、メルケル細胞がん、および腎細胞がんから選択される、項目１０７～１１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１２）

ａ．前記肺がんが、小細胞肺がんまたは非小細胞肺がんであり、
ｂ．肝がんが、肝細胞がん（ＨＣＣ）であり、および／または
ｃ．前立腺がんが、治療下で発現した神経内分泌前立腺がんである、項目１１１に記載の方法。
（項目１１３）
前記がんが、神経内分泌がんである、項目１１１に記載の方法。
（項目１１４）
疾患に対して対象を免疫化する方法であって、項目８０～９７のいずれか一項に記載の粒子、項目７７～７９のいずれか一項に記載のベクター、項目１～６５のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン、またはその組成物の有効量を、前記対象に投与することを含む、方法。
（項目１１５）
粒子、組換えＲＮＡレプリコンまたはその組成物が、静脈内に、筋肉内に、皮内に、鼻腔内に、または吸入剤として投与される、項目１１４に記載の方法。
（項目１１６）
粒子、組換えＲＮＡレプリコン、またはその組成物が、前記対象に繰り返し投与される、項目１１４または１１５に記載の方法。
（項目１１７）
前記疾患が、感染症である、項目１１４から１１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１８）
当該感染症が、デングウイルス、チクングニヤウイルス、ヒト結核菌、ヒト免疫不全ウイルス、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、コロナウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、トガウイルス科ウイルス、フラビウイルス科ウイルス、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、および動物ウイルス（ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙｖｉｒｕｓ）を含む病原体のうちのひとつに起因する、項目１１７に記載の方法。
（項目１１９）
ピコルナウイルスゲノムおよび異種ポリヌクレオチドを含む、組換えＲＮＡレプリコン。
（項目１２０）
前記異種ポリヌクレオチドが、２Ａコード領域と２Ｂコード領域との間に挿入される、項目0に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目１２１）
異種ポリヌクレオチドが、５’ＵＴＲと２Ａコード領域との間に挿入される、項目0
に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目１２２）
異種ポリヌクレオチドが、３Ｄコード領域と３’ＵＴＲとの間に挿入される、項目１１９に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
（項目１２３）
前記ピコルナウイルスが、セネカウイルス、カルジオウイルス、およびエンテロウイルスから選択される、項目１１９～１２２のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。

Claims

ピコルナウイルスゲノムであって、一つ以上のタンパク質コード領域に欠失または切断を含むピコルナウイルスゲノム、および
異種ポリヌクレオチドを含む、組換えＲＮＡレプリコン。
前記ピコルナウイルスゲノムが、一つ以上のＶＰコード領域に前記欠失または前記切断を含む、請求項１に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記ピコルナウイルスゲノムが、ＶＰ１コード領域、ＶＰ３コード領域およびＶＰ２コード領域のそれぞれに欠失または切断を含む、請求項１または２に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記ピコルナウイルスゲノムが、ＶＰ１コード領域およびＶＰ３コード領域の欠失ならびにＶＰ２コード領域の切断を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記ピコルナウイルスが、セネカウイルス（ｓｅｎｅｃａｖｉｒｕｓ）、カルジオウイルス、およびエンテロウイルスから選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記欠失または前記切断は、少なくとも５００ｂｐ、少なくとも１０００ｂｐ、少なくとも１５００ｂｐ、少なくとも２０００ｂｐ、少なくとも２５００ｂｐ、または少なくとも３０００ｂｐを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記異種ポリヌクレオチドが、２Ａコード領域と２Ｂコード領域との間または３Ｄコード領域と３’非翻訳領域（ＵＴＲ）との間に挿入される、請求項１～６のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記ピコルナウイルスが、セネカバレーウイルス（ＳＶＶ）である、請求項１～７のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記欠失または前記切断が、配列番号１の番号付けに従って、上限下限を含めて、１２６１位および３４７７位のヌクレオチドの間の一つ以上のヌクレオチドを含む、請求項８に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記欠失または前記切断が、少なくとも５００ｂｐ、少なくとも１０００ｂｐ、少なくとも１５００ｂｐ、または少なくとも２０００ｂｐを含む、請求項９に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
ＳＶＶゲノムが、シス作用性複製エレメント（ＣＲＥ）を含み、前記ＣＲＥが、配列番号１に従う１１１７位のヌクレオチドから１２６０位のヌクレオチドに対応する領域内に一つ以上のヌクレオチドを含む、請求項８～１０のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記ＣＲＥが、配列番号１４９に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む、請求項１１に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記ピコルナウイルスが、コクサッキーウイルスである、請求項１～７のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記欠失または前記切断が、配列番号３の番号付けに従って、上限下限を含めて、７１７位から３３３２位のヌクレオチドの間の一つ以上のヌクレオチドを含む、請求項１３に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記欠失または前記切断が、少なくとも５００ｂｐ、少なくとも１０００ｂｐ、少なくとも１５００ｂｐ、少なくとも２０００ｂｐ、または少なくとも２６００ｂｐを含む、請求項１４に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記異種ポリヌクレオチドが、一つ以上のペイロード分子をコードする、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記異種ポリヌクレオチドが、二つ以上のペイロード分子をコードし、前記二つ以上のペイロード分子が、一つ以上の開裂ポリペプチドによって動作可能に連結される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記開裂ポリペプチドが、２Ａファミリーの自己開裂ペプチド、３Ｃ開裂部位、フーリン部位、ＩＧＳＦ１ポリペプチド、またはＨＩＶプロテアーゼ部位を含む、請求項１７に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
前記一つ以上のペイロード分子が、抗原である、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン。
５’から３’方向に、プロモーター配列、５’結合部開裂配列、請求項１～１９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコンをコードするポリヌクレオチド配列、および３’結合部開裂配列を含む、組換えＤＮＡ分子。
前記５’結合部開裂配列がリボザイム配列であり、また前記３’結合部開裂配列が制限酵素認識配列である、請求項２０に記載の組換えＤＮＡ分子。
請求項２０～２１のいずれか一項に記載のＤＮＡ分子のインビトロ転写、および結果として生じる組換えＲＮＡレプリコンの精製を含む、組換えＲＮＡレプリコンを産生する方法。
有効量の請求項１～１９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコンおよび哺乳類対象への投与に適した担体を含む、組成物。
請求項１～１９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコンを含む、ベクター。
請求項１～１９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコンを含む、粒子。
前記粒子が、カチオン性脂質、一つ以上のヘルパー脂質、およびリン脂質－ポリマーコンジュゲートを含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）である、請求項２５に記載の粒子。
腫瘍崩壊ウイルスをコードする第二の組換えＲＮＡ分子をさらに含む、請求項２５～２６のいずれか一項に記載の粒子。
請求項２５～２７のいずれか一項に記載の複数の粒子を含む、治療組成物。
がん細胞を死滅させるインビトロの方法であって、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の粒子、請求項２４に記載のベクター、請求項１～１９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコン、またはその組成物に、前記がん細胞を曝露することを含む、インビトロの方法。
がんに罹患している対象における前記がんの治療における使用のための、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の粒子を含む組成物、請求項２４に記載のベクターを含む組成物、または請求項１～１９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコンを含む組成物。
前記組成物が、静脈内投与、鼻腔内投与、吸入剤としての投与のものである、または腫瘍に直接注射されることを特徴とする、請求項３０に記載の使用のための組成物。
前記がんが、肺がん、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、前立腺がん、精巣がん、結腸直腸がん、結腸がん、膵がん、肝がん、胃がん、頭頸部がん、甲状腺がん、悪性神経膠腫、膠芽腫、黒色腫、Ｂ細胞性慢性リンパ性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、肉腫、神経芽腫、神経内分泌がん、横紋筋肉腫、髄芽腫、膀胱がん、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、メルケル細胞がん、および腎細胞がんから選択される、請求項３０～３１のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
疾患に対する対象の免疫化における使用のための、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の粒子を含む組成物、請求項２４に記載のベクターを含む組成物、または請求項１～１９のいずれか一項に記載の組換えＲＮＡレプリコンを含む組成物。
ピコルナウイルスゲノムおよび異種ポリヌクレオチドを含む、組換えＲＮＡレプリコン。
前記異種ポリヌクレオチドが、２Ａコード領域と２Ｂコード領域との間、５’ＵＴＲと２Ａコード領域との間、または３Ｄコード領域と３’ＵＴＲとの間に挿入される、請求項３４に記載の組換えＲＮＡレプリコン。