JPS6270396A - ｒｅｔｒｏ逆転ヘキサペプチドニユ−ロテンシン類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 逆転ヘギ→ｊーベプヂドニコ−［１テンノン類似体、そ
の製法、該製法で使用される中間体及び前記類似体を含
Ｍ　ｌ−でｔｆろ医薬組成物に係る。

さらに詳述すイ］ば、本発明θ）第１の目的は、上記一
般式（Ｉ）７５表さイするｒｅｔｒｏ逆転へキサペプヂ
ドニ．：ｙ．　−　シフ５−ンンン（ｎｃｕｒｏｔｅｎ
ｓｉｎ）を提供上ることにある。

１１　　　ＩＩ Ｘ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｎ１１−Ｃ１１
−Ｎｌｌ−Ｃ−Ｃｌｌ−Ｃ−０１１　　（１）Ｒ．　　
　　＋７２ １式中、Ｘｆｊ水累水氷一叉（Ｊアノル括Ｉｉ，ＧＯ　
　（ここｃ〒Ｆしは的鎖状ｙは分枝状θ）（″Ｉ，．，
フルキル基である）であＣ）、ＩＮ＋　７及びＩｆ２は
、ＩＩ　Ｉｆに関連なく、グリシジの側鎖残括（ＩＩ）
、’どラニンの側鎖残厚（−ＣＨ３）、ハリンノ側鎖残
Ｊｌ（；（　　ＣＩｌ−Ｃｌ１．）、１ノインＣ　ＩＩ
　、ｔ ンの側鎖残ｊｉｌバ　Ｃｌｌ　２−Ｃｌｌ　−　Ｃｌｌ
　３　）　、”ｌはイソ１Ｊインン（’：　ｔｌ　：ｉ の側鎖残Ａｔｉ（−ｅｌｌ　　Ｃｌｌ，ＣｌｌＪ）を示
１−、Ａｒｇはアル曇 ＣＩｌ３ ギエンの省略荀弓−であり、Ｐｒｏはプロリンの省略符
号であり、ＴｙｒはヂＩＵノンの前略ｒ〕壮である。〕
本発明は、こイ１らの相当４′る薬学１，ｉ’ｌ容さイ
１ろ塩、低級アルキルエステル伎び）′ミドにち係る１
、ごの明細書で使用４”る用，！ｒｉ　ｊ低級アルキ７
１．、　Ｊ，％　、１は、直鎖状Ｖは分枝状の炭素数１
ない（２５のアルＡ・ル基を色味する。かかるアルギル
基の例と１〜ては、メヂルＪｉＯ　、工千ル括、プし１
ピル括、イソプ填ビル基、ブチル括、第２級ブヂル１，
（、、ペンヂル括等である。

薬学１，許容さイする塩とは、前記一般式（１）の化合
物と各種の白一機叉は無機の酸叉は塩基との塩である。

かかる塩（本発明のか法から直接に、又は塩が溶解ｌ−
ない溶媒又は媒体中、又は容易に除去される溶媒中にお
いてペプチドを１当量叉はそれ以１の適当な塩基又は酸
と反応さ且ろ、二とによって得られる）と１，では、ア
ンモニ「゛ノム塩、ナトリウｌ１、カリウノ、、カルシ
くノム、及びマグネシウムの如きアルカリ金属及びアル
カリ−１一類金属の塩、有機塩括、たとえばＮ−メヂル
−１）−グルタミン及びジンクロヘキザミンとの塩、ｌ
ｉｃｋ，　ｌｌＢｒ，　ＩＩ２Ｓｏ４、１１３Ｐ０４、
スルポン酸、カルポン酸（たとえば酢酸、シコウ酸、ピ
バル酸）等の如き打機又は無機の酸との酸ｆ−１加塩が
含よれろ。

１−記−・般式（Ｉ）で表されるペプチドは少なくとも
２個の塩基性窒素を含有１，、１ないＬ　２当Ｍの酸と
反応１，て付加塩を生成することに注目する必要がある
。必要によっては、特定の酸付加塩は、Ｒ．　Ａ．　Ｂ
ｏｉｓｓｏｎａｓら［ヘルヘティカ・ンミカ°アクタ（
Ｉｌｅｌｖ．　Ｃｈｉｍ．　Ａｃｔａ）ｌ　４３，　１
３４９　（１９６０）の記載の方法に？；（：−：−て
、適当なイオン交換樹脂に、１−る処理を介しで、他の
酸（・ｔ　ＩＪ１１塩に変化さイ１ろ３、ｌ１理学的に
許容さイ１ろ無４性の塩が望ましいが、たとえば、生成
物を中離又（５ｊ精製セる段階で（ｊ、ごイ１ら以外の
塩も使用で１きろ３、 他に特別に人事１〜ないかぎり、一般式（１）中のアミ
ノ酸Ａｒｇ，　ｌ’ｒｏ４！ＨびＴ　ｙ　ｒ　ｉ月７配
置をｆｉ　する。。

ニコーロテンノン（ＮＴ）は神経組織綬び腸組織中に存
在４−ろ入熱（ノ用・リフ１カベブヂドであ１）、その
配列は次のとおりである。

Ｇｌｐ−１ｅｕ　Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−１ｙｓ　Ｐ
ｒｏ−ＡｒｇＡｒｇ　Ｐｒ。

−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｌｅｕ−（１［１ かかる物質は、初め牛の視床下がら単離さｔ＋．ｌ。

Ｃａｒｒａｗａｙ及びＳ．　Ｈ．　ｌｅｅｍａｎ　Ｉ−
ジャーナル・オゾーバイオロジカル・ケミストリ−（Ｊ
．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．）η互，６８５４　（１９
７８）参照）、その後、特性が研究され（　ＩＪ．　Ｒ
ｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．　Ｊ　２５０　、　１９０７　（
１９７５）　）、薬理作用の広いスペクトルを示１こと
か完全に調査されている。

特に、ＮＴは咄乳動物の心臓血管系に対する多重作用を
示し、その２要な作用としては以下のものがある。

一ラット、家兎、豚、やぎ、及び犬における低血圧症の
発症。

一心搏度数の変化。

一うットにお（Ｊる血管透過性及び血管拡張の増大。

一ラット及びモルモットにおける単離した心房に対する
正の変力及び変時作用。

一犬の脂肪組織、ラットの環流心臓及び単離された門脈
における血管収縮、及び 一犬の腸管における血管拡張。

ＮＴにより、特にヒトにおいて、誘発される各種の心臓
血管に対する作用の特殊な役割は確立されてはいるが、
ＮＴと心臓血管系との間の相互作用は、必ずしも格別な
生理学的及び／又は病理学的な関係を持たない。

ＮＴは、各種の動物モデルの心臓血管系に対し、比較的
低用量（５０−１０００μモル）で活性であり、従って
、高血圧症の治療には特に興味深い化合物である。

しかＩ７ながら、ラットに関するインビボ実験では、Ｎ
Ｔノ生理活性（Ｊ急激ニＡｌ　；Ｅ　ｌ、　、半減１ｔ
ｌｌ　ＩＪ約０　、５分であるごとを示１７だ。

インビボ生理活１’ｌのごの、１−うな減退の理由は、
分子構造中に、ペプチダーゼに、１、−・てペプチド結
合が加水分解さイする特殊な部位が存在することである
。これらの酵素の加水分解作用（１分子を破壊し、生理
活性を全＜　（Ｔさないか、あるいはＮ１’自体よりも
低い生理活性を（１４′ろフラグメントを形成する。

ＮＴの主な代謝物と同様、酵素加水分解に関する特異部
位は、特殊な旧Ａ分析に、Ｌ）で明らかにされている。

これによれば、酵素１１１１水分解に最ら鋭敏なペプチ
ド結合部は、Ａｒｇ”−Ａｒｇ８及びＴｙｒＩ＋１１ｅ
１２であることがイ′）かっている。劣化を生じ易い矛
の部位は、１ｉｅ１２−１．ｅｕ１３（カルポギノペプ
ヂダーゼ）、Ｇｌｐ’　−１，ｅｕ’（Ｌ　　ピ［１グ
ルタミルヒトし１ラーセ）及びＴｙｒＪ−Ｇ’ｌｕ’　
（ギモトリプンン）である。

−１１＝ さらに、Ｔｙｒ”　−１１ｅ”ペプチド結合部の加水分
解によって得られるＮＴｌ−１１フラグメントは、Ｃ末
端ヂロシン残基を遊離させる特殊な酵素によってさらに
加水分解されることが観察されている（Ｒ。

Ｅ、　Ｃａｒｒａｗａｙ　ｒＮｅｕｒｏｔｅｎｓｉｎ　
、　ａ　Ｂｒａｉｎ　ａｎｄ　Ｇａ５−ｔｒｏｉｎｔｅ
ｓｔｉｎａｌ　ＰｅｐｔｉｄｅＪ　Ｃ，Ｂ、　Ｎｅｍｅ
ｒｏｆｒ及びＡ。

Ｊ、　Ｐｒａｎｇｅｌｉｉ＠、Ｔｈｅ　Ｎｅｗ　Ｙｏｒ
ｋ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　５ｃｉｅｎｃｅｓ発行、ニ
ューヨーク、１９８２　、１）１７　）。

それ故、ニューロテンシン又は持続性のインビボ生理活
性を有するその誘導体の合成は、この分野における研究
者の当面の目標の１つである。

特開昭５９−２１２４５３号によれば、１ｌｅＩｆｆｉ
−Ｌｅｕ１３ペプチド結合が逆転されているニューロテ
ンシン類似体が製造されている。

この結合の方向の逆転は、分子をペプチダーゼに対して
抵抗性あるものとし、これにより、そのインビボ生理活
性を持続化させる。さらに、誘発された配座変化効果に
より、この逆転は１１位及び１２位のアミノ酸を結合す
るペプチド結合の安定性を高めていることもわかってい
る。

しかしながら、これらのＮＴ類似体は、なおＮＴの不用
な二面的な作用を保有１，７ている。事実、インビボで
達成される降圧作用に続いて直しに昇圧作用が生ずるこ
とが観察されている。

それ故、−１，述の副作用を示さないニューロテンシン
類似体の合成が求めらイ］ている。

ＮＴの酵素加水分解によって得られる各種のフラグメン
トに３Ｌる構造−活性に関する研究では、アミノ酸配列
が Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｌｅｕであ
るＣ末端へキサペプチドが生理的応答を誘発するために
必要なすべての情報を含んでいることが明らかになった
。

しかしながら、Ｃ末端へキサペプチドはＮＴ自体よりも
かなり低いインビボ生理活性を有することが観察されて
いる。この事実は、かかるｌ＼キザペプチドの治療面で
の使用を強く開園している。

驚くべきことには、一般式（ｒ）で表されるｒｅｔｒ。

逆転ＮＴ−（８−１３）へキサペプチドは、ＮＴに匹敵
する降圧作用及び面前拡張作用を保有しているにムかか
イー）らオ、友然牛成物の欠点を示さｔ了いｔ、のであ
ろごとを１ジ出ノ】シ、本発明に至った。

こイ１ら化合物は、事実、旧′に匹敵オろととｔ）に、
ご４１よりらＦＩＪ続１’ｌのある降圧作用を示−４゜
さらに、ＮＴと（」異なｌ）、反動的な臂１作用を何ら
生じない。

６にらに詳述−４゛ろため、後述の実施例１の化合物に
ついて行な−、八代人的な実験で得らイ］た結束を下記
の第１表に報告４−る。

ごの実験で（」、ウレタンで麻酔（１，７５’ｉ／に’
ｉ　ｉ。

ｐ、）Ｌ刀、二体重２［］０　３００７のｍラットを使
用し、ヘギザペブチト （）Ｏ ＩＩ　　　ＩＩ ｔｌ　　Ａｒｇ　　Ａｒｇ−Ｐｒｏ　　’ｌ’ｙｒ−Ｎ
ｉｌ　　Ｃ１１−Ｎｉ１　　ＣＣＩＩ　　Ｃ（翔１ｈＣ
ｃｎ　　　　ＣＨ２ ＩＩ １１２ＣＨ ｊ　　　／＼ Ｃ１１，ＣＩｌ、　　Ｃ１ｈ を、用＠　２０ｍｅｑ／　Ｋ！／（体重）で右側大腿静
脈に注射１７、酸１１゛後、各肋間で血［１゛を測定し
ている。なお、血［［の１．％底値は平均で８０−１３
０ｍｍ１１ｇである。

第　　１　　表 注射後の時間　　動脈＋１１１１Ｉ−血１１−の変化、
−（＋＋冒ｊｊｊ）、、　　、、−−−、、、、、（ｍ
ｍｔｌｇ）、、、−、−３０（分）　　　　　８０−１
２５　　　　　０　５２．５　　　　　７５　１２０　
　　　５　１０３．５　　　　　７５−１２０　　　　
５−１０４．５　　　　　７０−１１０　　　　　ＩＣ
ｌ−２０５７０−、＋１０　　　　１０−２０ 本発明の曲の［目的は、高１ｆｌｌ　ＩＥ　ｆ１’＋伎
びこれに関連する他の症状の治療に、１記ヘギ４ｊペブ
子ドを使用することにある。ご（ハへめ、本発明の化合
物は、治療にあたり最適な薬理り＋４果を発揮さ１１ろ
ために患者に１沙りさイする１［１当八ζ）の用Ｕｔは
１．小者毎に、病気の性質峻び軽重、！Ｅ、　ｉの体重
、投与−ｊｊ法等を考ｉ＠　１．、−Ｃ変えられろこと
は、当栗者にとっては容易に理解みれるであろ・）。

本発明のさらに他の目的は、−・般式（１）で表さイす
るｒ　ｅ　１．　ｅ　Ｏ逆転へギザベずヂド又は薬学１
．許容されろその塩、低級アルギルエステル又はアミド
の治療−１−の打効晴を、薬学−１−許容されろ液状又
は固状ギヤリヤー中に含有してなる医薬組成物を提供４
゛ろことにある。、これらギヤリヤー及び白゛効成分に
加えて、かかる医薬組成物は、安定剤、結合剤、潤滑剤
、着香剤等の如き通常の添加剤を含有していてもよい。

有効成分の割合は、ギヤリヤー中への溶解度、キャリヤ
ーの種類、投与経路及び薬学−１−の標準的処理法に応
じて定められる。１回分の用頃中に含ｋｒされる有効成
分の量は、上述の投！−ｊ＠範囲において効果な治療ス
ケジュールが達成されるように。

定められる。

一般式（１）力化合物は、下記１．稈を包含してなる田
川連続合成法をｆｌｌ用し１′、容易に調製される。

ａ）−・般式（１（） ％式％ （式中、Ｉ？Ｉ及びＹ工、は前記と同？Ｘ義である）で
表されるジペブヂト（ＩＩ）を活Ｖｌ化樹ｌ旨だ）一体
にＪ（（１”結合せしめろ工程、 １））樹脂結合ンベブチド（ｌ（）のカルバミルも（を
〔１，Ｉ−ヒス（）・リフルオＣｉアセトギノ）ヨード
］ベンゼン（ＴＩＢ）による反応を介１．てアミノ括に
変化させろ工程、 ψ Ｃ）前記−１４程１））で得られた樹脂結合ペプチドに
屹 各アミノ篠を順次結合１〜で、前記一般式（１）％式％ （式中、ｘ、ｎ、及びＲ２は前記と同意義である）で表
されるヘキサペプチド（１）を段階的に構成せしめる二
１−程。

ｄ）　このようにして得られたヘギザペプチトを前記樹
脂支持体から離脱せしめると共に、これを回収する７１
１程、及び ｅ）得られたヘキザペプチド（Ｉ）をクロマトグラフィ
ーによって精製する工程。

さらに詳述すれば、一般式（Ｉ）で表されるジペプチド
を、適当なペプチド−樹脂結合剤による反ペプチド合成
で通常使用されるいかなるポリアミド支持体であっても
よい。好適な具体例によればこの支持体としては、Ｅ、
　Ａｔｈｅｒｔｏｎらによって開発されたもの（「ジャ
ーナル・オブ・）・アメリカン・ケミカル・ソザ電エテ
ィー（，１、Ａｍ、　Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、　）Ｊ　１９７５．９７．８５８５）又はＡｒ
５ｈａｄｙらによって開発されたもの（［ジャーナル・
オブ・ザ・ケミカル・ソザ％エティ−（Ｊ、　Ｃｈｅｍ
、　Ｓｏｃ、）　Ｉ　ＰｅｒｋｉｎＴｒａｎｓ、　　ｌ
、　（＋９８１）、　ｐｐ　５２９−５３６）　（’）
Ｅｆ−するペプチドの適当なｔｔｔｌ＞部位を提供する
第１級アミノ基により官能化されている）の如きポリジ
メチルアクリルアミド系樹脂がある。１−記官能基は、
適当なベンジルアルコール誘導体に、にる反応を介して
アミド化され、ついで縮合剤の存在下、ペプチド−樹脂
結合剤の水酸基によるＪ、ステル結合形成反応を介して
、樹脂にジペプチド（ＩＴ）を結合せしめる。縮合剤と
しては当分野で公知のものを広く使用できるが、好適な
具体例によれば、−・般式（ｎ）で表されるジペブチ１
゛の樹脂へのエステル化結合反応は温和な条件下でのエ
ステル結合形成に特に好適な触媒として公知の４−ツメ
チルアミノピリジンの存在下で行なわれる。この工程で
は、ジペプチド（ＩＴ）は、その活性化エステルとして
、好ましくは相当するベンゾトリアゾールエステルとし
て使用される。常法によれば、かかる活性化エステルは
、不活性有機溶媒、好ましくは塩化メチレン、テトラヒ
ドロフ゛ラン又はジメチルホルムアミド中、ジペプチド
（ＩＴ）を等モル量又はわずかに過剰のモル量の１−ヒ
ドロキシベンゾトリアゾール（＋１　（ｌ　Ｂ　Ｔ　）
と接触させ、つづいて実質的に等モル量のジシクロヘキ
シルカルボジイミド（ＤＣＣＩ）と接触させることによ
り容易に調製される。混合物を−２０ない１，１０°Ｃ
１好ましくは０℃に、１５分ないし２時間維持し、この
ようにして得られた活性化エステルを、官能化せしめた
樹脂、エステル化触媒（ＤＭＡＰ）及び酸受容剤として
作用するＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）又はＮ−エチ
ルモルホリン（ＮＥＭ）の如き等モル量の窒素含有節３
扱有機塩基を収容する反応容器に、直接に濾過、注入す
る。エステル化反応は室温において簡単に進行し、一般
に数時間で終了する。

つづ＜　ＴＩＨによる樹脂結合アミドのアミンヘノ変化
は、Ｅｌ’−Ａ−９７９９４及びＢＰ−Ａ−１２７２３
４の開示に従って、混合水性有機媒体中で行なわれる。

ついで、固相ペプチド合成で利用される常法（」ユ述の
如くして得られた重合体結合アミンに、適当に保護した
各アミノ酸を合成の完了まで段階的に順次付加せ１．め
ることにより、所望のペプチド配列を構成せしめる）に
従って、合成を完了せしν）る。カップリング反応は、
好適には、アミノ基りく相当するフルオレニルメ）・キ
シカルボニル（Ｐｍｏｃ）誘導体として適当に保護され
ている対称無水物を使用することによって行なわれる。

この際、好適には、極性の非プロ）・ン性溶媒（たとえ
ば）＼ロゲン化炭化水素）の存在下における０、５当慴
のジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣＩ）による
Ｎ−フルオレニルメトキシカルボニルアミノ酸の予活性
化法が利用され、沈殿したジンクロヘキシル尿素（ＤＣ
Ｕ）を濾去して、生成された対称無水物を単離し、濾液
を蒸発せしめ、樹脂への付加前にジメチルホルムアミド
（ＤＭＩ’）に溶解）１“しめる。チロシンの０１１基
及びアルギニンのグアニジノ基用の好適な側鎖保護基は
、それぞれ第３級ブチル又は第３級アミル、及び置換−
フェニルスルホニル基である。

中間体のＦｍｏｃ−ペプチド樹脂は、標準的な方法（Ｅ
、　Ａｔｈｅｒｔｏｎら［ジャーナル・オブ・ザ・ケミ
カル・ソサｆｉ　ｆｆ−ティー　Ｊ　Ｐｅｒｋｉｎ　Ｔ
ｒａｎｓ、　Ｉ、　１９８１　ｐ５３７以降参照）に従
ってツメチルポルムアミド中、２０％ピペリジンによ−
）で簡単に脱保護化さＡ１ろ。

合成終了後、ヂ１アニソールの６％トリフルオロ酢酸溶
液に３］、ろ処理を介して、ヘギザペプ千ドる。合成さ
イ］たへギサペブチドの離脱は、残留樹脂に関−４゛ろ
アミノ酸分析に６Ｌっで評価して、９０％以−１，の収
率で行なわＡする。

このように１．て得られたヘギサペプチドを、ついで、
クロマトゲラフィー（代表的にはイオン交換樹脂を使用
）によ−〕で精製する。

生成物の同定にあたってはＮＭＲを利用する。また、ヘ
ギサペブチド（ＩＩ）が純粋であることを、逆転相開）
１．Ｃによって確認する。

本発明の方法で原料物質として使用される−・般式（Ｉ
ｌ）のノペプチ）・は、適当に選択さイ］刀こ　般式（
ＩＩ） 肛Ｊ、Ｎｌｌ２ＣＩ＋　　（：　　Ｎｌ＋２１７゜ で表さイするアミノ酸アミドと−・般式（ＩＶ）ＣＧ ＋１０−　Ｃ−ＣＩＩ　　Ｃ−ＯＹ □ （ここで、Ｙはメチルに１、エチル括、ベンジル括又は
第３級ブチル基である）で表されるマロニル誘導体との
間の均一系縮合に３Ｆ′、−・て容易に調製されろ。

縮合反応は、不活性打機溶媒及びペプチド合成で公知の
ものの中から選ばイする縮合剤の存在下で行なわれろ。

好適な溶媒と１．では、ハロゲン化炭化水素（たとえば
塩化メヂレン）、アルカノン酸の低級アルキルエステル
（たとえば酢酸Ｊ、チル）、テトラヒドロフラン、Ｎ、
Ｎ’−ンメチフレホルｌ、アミＦ等の中から選ばれるも
のである。

縮合の反応温度は−１０ないし４０°Ｃである。　・般
に、反応は室温（２０、、−、２５８Ｃ）において、反
応が完ｒ叉は実質的に完了するに必要な長ざの時間で行
なわＡ１ろ。

ついで、溶媒を除去し、ジペプチドを晶出により回収す
る。その後、Ｃ末端ユ、ステルを、イ′）ずかに過剰槽
の適当な塩基（すなわちＫ　Ｏ１１のメタノール溶液）
による反応を介して除去し、さらに晶出又は凍結乾燥す
ることによってジペプチド（ｎ）を得る。

この３Ｌうにして得られたジペプチドは本発明の方法に
そのままで使用される。

下記の実施例は、一般式（＋）の代表的な化合物を製造
４′るための方法をさらに説明するものであるが、これ
らは本発明の精神を限定するものではない。

実施例１ ルー［フィシン ＩＩ　　　　１１ ｔｌ−４ｒｇ−Ａｒｇ−ｌ’ｒｏ−’ｌ”ｙ　ｒ−Ｎｌ
ｌ　−Ｃ１ｌ−Ｎｉｌ　　（：　−Ｃ１１−（：　−（
ｌｉｔｌ　　　　　　［ Ｉｔ　ｌ（’、　−ＣＩｔ　　　　　　（’、　Ｉｔ　
２Ｉ Ｃｌ１．Ｃ１１３Ｃｌ１ｌ＋ Ｂｃｃｋｍａｎ　９９０　合成機及び樹脂７当ｊ、：　
Ｆ）　４１−ルコシンＩ　、　Ｏｍｅｑを含ｆｒ　する
ポリアミド樹脂を使用し−（′、合成を行った。

樹脂を２０℃においてエチレンジアミンに３１；す１６
時間で活性化）７、ついで（Ｆｍｏｃ−Ｎｌ　ｅ）　、
０で官能化した。ついで、式（’Ｖ） で表さイする活性化誘導体（式（Ｖ）において、ＴＣＰ
は２　、４　、５−１−リフ０　［７フエニルを意味す
る）を使用するアミド結合杉成反応を介１．て、ベンジ
ルアルコール結合剤をアミノ官能化樹脂に結合せ１．め
ノこ。

ついで、樹脂と組込まれるべきペプチドとの間の酸レイ
ビル結合剤である活性化誘導体を、予じめＬ　ｅ　ｕの
カルボキシル基部で活性化せしめたＨＯ−ｍＬｅｕ　−
Ｄ　−ｌｉｅ　−Ｎ１１ｐ残基とエステル化結合された
。

かかる残基の活性化にあたっては、ジペプチドＨＯ−ｍ
Ｌｅｕ−Ｄ　−１１ｅ−Ｎｌ１２　（４９０１１９，１
，８ミリモル）をＣＩ！２（Ｊ２（３ｘｆ２）中に懸濁
化し、これにＨＯＢＴ　（２４４ｉｙ、１８ミリモル）
及びＤＣＣＩ（３６１ａｙ、１．８ミリモル）を添加し
た。このようにして得られた溶液を０℃に３０分間維持
し、ついで濾過した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を再
びＤＭＦに溶解し、樹脂を収容する反応器に直接添加し
、ＮＭＭ　（１８３，６ｍ９．１．８ミリモル）及び４
−ツメヂルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）　（２２屑９．
０．１８ミリモル）と接触させた。合計１６ｕ４のＤＭ
Ｐを使用した。

−１−記エステル化結合反応を２０°Ｃで１６時間行っ
た。

ついで、樹脂結合ペプチドをＤ肛／ｌＩ２０　（３／　
Ｉ　。

Ｖ／　Ｖ）中で膨潤せしめ、この樹脂に、ＤＭＦに溶解
したＴＩＢ（７７４朽、１．８ミリモル）を添加した。

６０分間撹拌した後、過剰の反応体を除去し、ＴＩＢ（
７７４ｘｙ、１．８ミリモル）をさらに添加するｎＱに
、樹脂を洗浄した。混合物を１６時間撹拌１．た。さら
にｒ１ＭＰ／ｌｌ２（１（３／Ｉ、ｖ／ｖ）で洗浄した
後、微…の水をも除去するため、樹脂を無水のＩ）ＭＰ
で洗浄ｊ７た。ついで、ＤＭＦ（１５Ｘ　１分）　ＤＩ
ＰＥＡの１０％Ｄ肛溶液（３×１分）、及び最後にＤＭ
Ｐ（ＩＯＸ　１分）で洗浄することにより、トリフルオ
ロ酢酸塩を中和した。

ついで、下記の化合物を順次添加した。すなわち、それ
ぞれＩ）ＭＰ　１６ｉｆＪ中に溶解した（　（Ｆｍｏｃ
　−Ｔｙｒ−（Ｂｕｔ））　２０　（１６４８ｍｇ、１
．８ミリモル）、（Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ）、０　（１２１
４ｍｇ、１．８ミリモル）、［（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍ
ｔｒ）’ＩＩ　２０　（２１Ｒｈ＋ｇ、１．８ミリモル
）及び（（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ））　Ｊｌ　（２
１８０ｘｙ、１８ミリモル）。

ペプチド合成で公知の合成サイクル法に従−）で、アノ
ル化反応を行−）た３゜ ついで、ピペリノンの２０％ＤＭＰ溶液により、それぞ
れ３分及び７分間で２回洗浄することにより、Ｎ末端ア
ルギニン保護（を離脱ｕしめ、樹脂に結合したペプチド ＝２７− １１−　［Ａｒｇ８（Ｍｔｒ）、　Ａｒｇ８（Ｍｔｒ）
、　ｇ−１ｉｅ１２゜（Ｒ，Ｓ）ｍＬｅｕ１３］ＮＴ”
３ を得た。

てアミノ酸分析を行ったところ、下記の結果を得た。

Ｎｌｅ　　１．６１　；　　Ｔｙｒ　　１．００　；　
　Ｐｒｏ　　１．１８　；Ａｒｇ　　１．７８ 次に、樹脂からのペプチドの離脱を、６％チオアニソー
ルを含有するトリフルオロ酢酸（ＴＰＡ）（１０１１ρ
）により樹脂（９２ｉｙ）を２０°Ｃにおいて５時間処
理することによって実施した。

ついで、溶液を濾過し、溶媒を減圧下で除去し、残渣を
回収し、凍結乾燥した。

離脱反応の収率（残留樹脂のアミノ酸分析により測定）
は９５％であった。

このようにして得られたヘキサペプチドのアミノ酸分析
の結果は次のとおりである。

Ｔｙｒ　　１．００　　；　　Ｐｒｏ　　１．１２　　
；　　Ａｒｇ　　１．８０残渣を水で抽出し、ヘキサペ
プチドをカラム（７０Ｘ０．９Ｑｌｌ）でのクロマトグ
ラフィーににって精製した。カラムに樹脂Ｗｈａｔｍａ
ｎ　ＣＭ−５２を充填１７．０．０３−０．３Ｍ酢酸ア
ンモニウム（ｐＨ６，６）の直線状勾配を使用した（流
量１．ｏｘＱ／分）。

前記化合物１９．４μモルが得られた（４６％）。

１１ＰＩ、Ｃ及びＴＬＣ分析により、生成物（正確なア
ミノ酸含ｆｉｇ：Ｔｙｒ　１．００　；　Ｉ’ｒｏ　Ｏ
，９６；　Ａｒｇ　２．Ｏｆを示ず）が純粋であること
を確認した。生成物の構造については、ＮＭＲ分析によ
って確認した。

耕惣ｌｐ濃１ 八）　ｔｌｃＩ−Ｄ　　ｌｌｅ　　Ｎ１１２の調製（Ｄ
）０ ＨＣＪ・ＮＨ，−Ｃ１ｌ−Ｃ−Ｎｉ１２硼 Ｃｌ１−Ｃ１ｌ３ Ｂｏｃ−Ｄ　−１ｉｅ−Ｏｉｌ　（６，３９ｇ、２７．
４８ミリモル）及びテトラヒドロフラン（ＴＩＩＦ）　
（６０ｘ＆）を、撹拌機をμ備する反応フラスコ（２５
０ＭＦ）に充填１．た。溶液を一１５°Ｃに冷却し、反
応温度を一１０°Ｃ以下に維持１−２ながら、Ｎ−メチ
ルモルポリン（２，７８９，２７４８ミリモル）、イソ
ブヂルクロロポルメート（３，７５９，２７４８ミリモ
ル）及び３分後、３０％ＮＩ１．Ｏｔｌ　（５ｍ（１゜
４２．８５ミリモル）を順次添加した。このようにして
得ろ２１だ溶液を一■５℃に３０分間、２０℃に６０分
間放置した。ついで、水（１０００ｕＱ）を添加するこ
とによって反応生成物を沈殿させ、濾過により回収し、
減圧下で１６時間乾燥１．た。

得られた生成物からの第３級ブトギシ力ルポニル（Ｂｏ
ｃ）保護基の離脱を酢酸エヂル（ＡｃＯＥｔＸ２０ｉ１
２）中、生成物を４．８Ｍ　ｌｌＣｌで処理することに
よって実施１．た１、室温（２０’−２５°Ｃ）に３時
間放置１−だ後、溶媒を留ノ′：１７、残渣を濾過によ
−）で回収１．た。

ｍｐ　２４７−８°Ｃ及び（ａ　’３　ｏ０＝　　２１
．８８°（ｃ−１、ＩＩ２０）を有するＩＩＣＪ　・Ｄ
　　ｌｉｅ　　Ｎｌ＋２　（２，５２９，１５，１２ミ
リモル、５３％）を得た。

Ｂ）　ｔｌＯ−ｍＬｅｕ　−Ｄ　−１１ｅ　−ＮＩｌ、
の調製（’ｌ　　　　　　　０　　　　　　　　　０１
１　　　　　　ＩＩ　　　　　　　　ＩＩ＋１０−ＣＣ
ＩＩ　　　Ｃ−Ｎ１１−Ｃ１１（：　　　Ｎｉｌ。

Ｃ１１２ＣＩＩ　　Ｃ１１，。

ＣＩＩ　　　　　　　　　ＣＩＩ ／　＼　　　　　　Ｉ Ｃ１ｌ　３Ｃ１ｌ　１Ｃ１ｌ　３ ｍｌ、ｅｕ（０１シｔ）ＯＩＩ　（１，３５＠、　７．
２ミリモル）をＣ１１２ＣＪ２（３０ｘ（り中に溶解ｊ
７、溶液を０℃に冷却１．た。１ついで、この中に、Ｎ
、Ｎ′　　ツメ千ルホル１３アミド（ＤＭＦ）（Ｉ　ｚ
□中（こ溶解しへＮ−ヒト〔Ｊキノベンゾトリアゾール
（ＩＩＯＢＴ）　（１，０７＆、７，９２ミリモル）、
及びジシクロへギシル力ルポジｆミド（１）ＣＣ）　（
１，６３７，７，９２ミリモル）を添加１−刀、二。混
合物をゆっくりと撹拌ｊ２ながら０℃に３０分間維持１
７、約２０°（゛にさらに３０分間維持１．た。

一ついで、反応混合物を、ｌｌＣｆ１・Ｉｌ−ｌｉｅ　
−ＮＩＬ（０，６９，３６ミリモル）及びＩＩＭＭ　（
０，３６＆、３６ミリモル）を含有するＤＭＦ溶液（８
岬）中に濾過、注入）〜た。

この３Ｌうにして得られた混合物を２０°（゛で１２時
間撹拌した。ついで、反応溶媒を留去して乾固し、得ら
れた残渣をＡｃ０Ｅｔ（１００ｕ（７）で抽出し、５ｍ
　ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍρ）、０．１Ｍ　ｌｌｃ
ｇ（３０ＩｌＩＱ）及び飽和Ｎａ（１４水溶液で洗浄し
た。得られた溶液から有機相を分離し、無水Ｍｇ５Ｏｉ
で乾燥した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をＡｃ叶ｔ／
石浦エーテル（１／　１　、　ｖ／ｖ）（１００ｍＱ）
からの晶出により回収１．た。

このようにして得た生成物（１，０ｇ、３．３ミリモル
）をジオキサン／　Ｉｆ２０　（４／　Ｉ　、　ｖ／　
ｖ）（４０ｉ＆）に溶解１２、これにジオキサン／Ｉｔ
、Ｏ（１／　Ｉ　、ｖ／ｖ）　（５肩ρ）中に含まれる
ｌ　Ｍ　ＮａＯＨを添加ｊ７た。反応混合物を２０℃で
３０分間放置１．た。ついで、溶媒を減圧下で留去１７
、水相をＡｃ０Ｅｔ（６０ｉＣ）で抽出し、水相を１１
１ｃ！Ｑでｐｌ＋２に酸性化し、最後にＡｃＯＥｔ（１
００ｍＱ、）で抽出１２だ。この有機相を、洗液のｐＨ
が中性となるまで水で洗６１１７、Ｍ　ｇ　Ｓ　０４で
乾燥した。混合物を濾過し、減圧下で溶媒を除去１．た
。このＪ二うにして得られた油状残渣をジオキサン（２
００ｍ１２）で抽出し、凍結乾燥した。

ｍｐ　１４４−１４７℃を有するＨＯ−ｍＬｅｕ　−Ｄ
　−１１ｅ−Ｎｔｌｔ（０，８２０９，３０ミリモル）
が得られた（８３％）。この生酸物の構造をＭＡＳＳス
ペクトル及び’ＩＩＮＭＲで確認した。

実施例２ 祭ａ＼男−グチーｙン々−合ヵ（ １１ＩＩ　　　ｌＩ Ｃｌ１３　Ｃ−Ａｒｇ−八ｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｎｌ
ｌ−Ｃｌｌ−ＮＯ−Ｃ−Ｃ１ｌ−Ｃ−（７１１Ｃ１ｌＣ
１１３ＣＩＩ。

ＣＨ３Ｃｌｌ３　　Ｃｔｌａ 樹脂に結合されたヘギザペブチド １１→Ａｒｇ’（Ｍｔｒ）、＾ｒｇ’（Ｍｔｒ）、　ｇ
ｌｌｅ”。

（Ｒ，Ｓ）ｍＬｅｕＩ３］　ＮＴ”３ の調製まで、前記実施例１と同様に１７で合成を行った
。

ついで、Ｎ−末端アルギニンを無水酢酸でアセチル化し
た。この反応を、２０℃で１時間樹脂結合へキサヘフヂ
ドを無水酢酸（１，９ミリモル）と接触させることによ
り実施した。

ついで、樹脂からペプチドを収率９６％で離脱せしめた
。

離脱されたヘギサペプチド Ａｃ−（ｇｌｌｅ１２．　（Ｒ，Ｓ）ｍＬｅｕ１３）−
ＮＴ８−１３のアミノ酸分析の結果は次のとおりであっ
た。

Ｔｙｒ　　＋、００　；　　Ｐｒｏ　　１．２０　；　
　Ａｒｇ　　１．９８このヘキザペプチドを、樹脂Ｌｉ
ｃｈｒｏｐｒｅｐ　（登録商標）　Ｃ−１８（２５−４
０μｍ）を使用し、２４％ＣＨ３ＣＮを含有する０、０
２ＭΔｃＯＮｔ＋、により流量７＊（２／分で溶出する
逆転相肝１、Ｃによって精製した。

＋１　Ｐ　Ｌ　Ｃ及びＴＬＣ分析では、生成物か純粋で
あることを示した。アミノ酸含量は次のとおりである。

Ｔｙｒ　　１．００　；　　Ｐｒｏ　　１．０６　；　
　Ａｒｇ　　１．９８精製収率は４１％であった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　下記一般式（ I ）で表されるｒｅｔｒｏ逆転ヘキ
   サペプチドニューロテンシン類似体及び薬学上許容され
   るその塩、低級アルキルエステル及びアミド。 一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｘは水素原子又はアシル基Ｒ＿３−ＣＯ−（こ
   こでＲ＿３は直鎖状又は分枝状のＣ＿１＿−＿７アルキ
   ル基である）であり、Ｒ＿１及びＲ＿２は、相互に関連
   なく、グリシンの側鎖残基（−Ｈ）、アラニンの側鎖残
   基（−ＣＨ＿３）、バリンの側鎖残基▲数式、化学式、
   表等があります▼、ロイシンの側鎖残基▲数式、化学式
   、表等があります▼又 はイソロイシンの側鎖残基▲数式、化学式、表等があり
   ます▼を 示し、Ａｒｇはアルギニンの省略符号であり、Ｐｒｏは
   プロリンの省略符号であり、Ｔｙｒはチロシンの省略符
   号である。〕 ２　Ｒ＿１がイソロイシンの側鎖残基であり、Ｒ＿２が
   ロイシンの側鎖残基である、特許請求の範囲第１項記載
   のｒｅｔｒｏ逆転ヘキサペプチドニューロテンシン類似
   体。 ３　一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｘは水素原子又はアシル基Ｒ＿３−ＣＯ−（こ
   こでＲ＿３は直鎖状又は分枝状のＣ＿１＿−＿７アルキ
   ル基である）であり、Ｒ＿１及びＲ＿２は、相互に関連
   なく、グリシンの側鎖残基（−Ｈ）、アラニンの側鎖残
   基（−ＣＨ＿３）、バリンの側鎖残基▲数式、化学式、
   表等があります▼、ロイシンの側鎖残基▲数式、化学式
   、表等があります▼又 はイソロイシンの側鎖残基▲数式、化学式、表等があり
   ます▼を 示し、Ａｒｇはアルギニンの省略符号であり、Ｐｒｏは
   プロリンの省略符号であり、Ｔｙｒはチロシンの省略符
   号である〕で表されるｒｅｔｒｏ逆転ヘキサペプチドニ
   ューロテンシン類似体の製法において、 ａ）一般式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１及びＲ＿２は前記と同意義である）で表
   わされるジペプチド（II）を活性化樹脂支持体に共有結
   合せしめ、 ｂ）樹脂結合ジペプチド（II）のカルバミル基を〔１，
   １−ビス（トリフルオロアセトキシ）ヨード〕ベンゼン
   （ＴＩＢ）による反応を介してアミノ基に変化させ、 ｃ）前記工程ｂ）で得られた樹脂結合ジペプチドに各ア
   ミノ酸を順次結合して、前記一般式（ I ）で表される
   ヘキサペプチド（ I ）を段階的に構成せしめ、 ｄ）このようにして得られたヘキサペプチド（ I ）を
   前記樹脂支持体から離脱せしめると共に、これを回収し
   、 ｅ）得られたヘキサペプチド（ I ）をクロマトグラフ
   ィーによって精製する、 ことを特徴とする、ｒｅｔｒｏ逆転ヘキサペプチドニュ
   ーロテンシン類似体の製法。 ４　特許請求の範囲第３項記載の製法において、前記一
   般式（II）で表される原料ジペプチド（II）が、一般式
   （III） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１は前記と同意義である）で表されるアミ
   ノ酸アミドと一般式（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿２は前記と同意義であり、Ｙはメチル基、
   エチル基、ベンジル基又は第３ブチル基である）で表さ
   れるマロニル誘導体との間の縮合を介して調製されたも
   のである、ｒｅｔｒｏ逆転ヘキサペプチドニューロテン
   シン類似体の製法。 ５　特許請求の範囲第４項記載の製法において、前記ア
   ミノ酸アミド（III）とマロニル誘導体（IV）との間の
   縮合を不活性有機溶媒の存在下、温度−１０ないし４０
   ℃で行なう、ｒｅｔｒｏ逆転ヘキサペプチドニューロテ
   ンシン類似体の製法。 ６　特許請求の範囲第５項記載の製法において、前記有
   機溶媒がハロゲン化炭化水素、アルカン酸の低級アルキ
   ルエステル、テトラヒドロフラン及びＮ，Ｎ′−ジメチ
   ルホルムアミドの中から選ばれるものである、ｒｅｔｒ
   ｏ逆転ヘキサペプチドニューロテンシン類似体の製法。 ７　特許請求の範囲第３項記載の製法において、前記樹
   脂支持体が官能化ポリアミド樹脂である、ｒｅｔｒｏ逆
   転ヘキサペプチドニューロアンリン類似体の製法。 ８　一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｘは水素原子又はアシル基Ｒ＿３−ＣＯ−（こ
   こでＲ＿３は直鎖状又は分枝状のＣ＿１＿−＿７アルキ
   ル基である）であり、Ｒ＿１及びＲ＿２は、相互に関連
   なく、グリシンの側鎖残基（−Ｈ）、アラニンの側鎖残
   基（−ＣＨ＿３）、バリンの側鎖残基▲数式、化学式、
   表等があります▼ロイシンの側鎖残基▲数式、化学式、
   表等があります▼又 はイソロイシンの側鎖残基▲数式、化学式、表等があり
   ます▼を 示し、Ａｒｇはアルギニンの省略符号であり、Ｐｒｏは
   プロリンの省略符号であり、Ｔｙｒはチロシンの省略符
   号である〕で表される　ｒｅｔｒｏ逆転ヘキサペプチド
   ニューロテンシン類似体を有効成分として含有すると共
   に医薬用として許容されるキャリヤーを含有してなる、
   高血圧症治療用医薬組成物。