JPS62167774A - 哺乳類コラゲナ−ゼおよびエラスタ−ゼ抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 コラーゲンは、角膜、皮膚、胃腸器官、関節粘膜および
他の身体部位を構成する表面組織の主要な有機構成要素
である。コラーゲン分子は分子量３００．０００であり
、３本のラセン状ポリペプチド鎖から構成されており、
共通軸を巻回してコイル状鎖を形成しでいる。溶液状態
ではコラーゲン分子は、約３００Ｘ１５Ａの長い棒状で
存在しているが、３７℃、ｐＨ７では、該分子は重合し
て不溶性原繊維となる。したがって、組織中に常に存在
するコラーゲンは原繊維として存在する。未変性コラー
ゲンのラセン構造は、タンパク分解酵素の攻撃に対して
著しい耐性を有するが、コラーゲン分子を、そのラセン
軸を横切って３／４および１／４の長さのフラグメント
に開裂することによってコラーゲンを分解し得る、動物
コラゲナーゼのごとき多数の天然酵素が発見されている
。

同様に、エラスチンは、結合組織、とくに、関節、椎骨
の靭帯、大動脈壁および肺の結合組織を構成する弾性繊
維の重要な構成要素である。エラスチンの重合構造は多
量のグリシン、アラニンおよびバリン残基を含有し、そ
の弾性は、その構造中のアミノ酸の架橋によって生じる
。エラスチンは、タンパク質をＮ−末端ペプチド結合を
有する脂肪族アミノ酸残基に加水分解し得るプロテアー
ゼ・エラスターゼによって分解される。

コラゲナーゼと、コラーゲンを基本とする組織の分解と
の間の関係は、多くの病状にて認められ、例えば、皮膚
、角膜、胃腸器官、関節粘膜などコラーゲンが主要構成
要素をなす点ｌこおいて基本的に類似した全ての身体の
部位に影響をおよぼす。

例えば、角膜組ｍｔｔこ関しては、アルカリで眼が火傷
を負った後に生ずる潰瘍の原因であることが判明してい
る。同様に、この関係は、例えば、単純ヘルペス、痘疹
などのウィルス性潰瘍、例えば、シュードモナスなどの
バクテリア性潰瘍、例えば、リューマチ性関節炎、モー
レン潰瘍、溝潰瘍（ｆｕｒｒｏｗ　ｕｌｃｅｒ　）　に
関連の変性潰瘍および原因未知の潰瘍、並びに例えば、
多形性紅斑（ステイーブンスージョンソン症候群）のよ
うな乾燥から派生する潰瘍などの角膜の他の潰瘍症状ｌ
こ対しでも存在する。

哺乳類においては、コラゲナーゼは、リューマチ性関節
炎による軟骨および関節破壊に関係する重要す酵素の一
つである（例えば、アルスライテイス・アンド・リウマ
テイズム（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ’　　ａｎｄ　Ｒｈｅｕ
ｍａｔｉｓｍ）　２０　（６）、　１２３１　（１９７
７）参照）。さらｆこ、ヒト関節軟骨の破壊がエラスタ
ーゼおよびコラゲナーゼ酵素の複合作用を介して進行す
るという結論を支持する最近の研究結果が報告されてい
る（ファーマコロジー・インターナショナル（Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌｏｇｙ　　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　）
　。

２．１１〜１６（１９８２）参照）。エラスターゼは、
コラーゲン架橋とともにコラーゲンにおけるコラゲナー
ゼの作用ｆこ対して障壁をなすプロテオグリカンを分解
する。エラスターゼは、また、コラーゲン原繊維の架橋
部を除去し、ついで、エラスターゼおよびコラゲナーゼ
の両方によってコラーゲンをさらに完全（こ分解しで、
コラーゲンを可溶化する。このように、エラスターゼお
よびコラゲナーゼはともにリューマチ性関節炎に見られ
る関節軟骨の破壊の重要な因子である。

また、哺乳類コラゲナーゼの作用は、哺乳類のいくつか
の他の疾患の原因としても関係している。

これらの疾患としては、歯周疾患、侵入性１ｋＭ瘍およ
び表皮水庖症が挙げられる（例えば、アメリカン・ジャ
ーナル・オブ・パソロジ−（ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒ
ｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ）、　９２（２）　
、５０９（１９７８）およびザ・ニュー・イングランド
・ジャーナル・オブ・メデイシン（Ｔｈｅ　Ｎｅｗ　Ｅ
ｎｇｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎ
ｅ　）　、　　２９１（１３）　、　６５２（１９７４
）参照）。

哺乳類エラスターゼの作用は、また、他の病状の原因で
あることも明確である。すなわち、肺気１）ｌｉ疾患の
過程の第一段階は、肺エラスチンの小ペプチドへの分解
であることが判明している。エラスターゼによる肺結合
組織エラスチンの非抑制的破壊ｌこより周辺気腔の拡大
および肺抱細胞壁の破壊がおこる。健康な肺は、自然ｆ
こ生産される正常なレベルのエラスターゼ抑制剤、α１
−アンチトリプシンｆこよってエラスターゼによる破壊
作用から保護されている。肺気、腫Ｉこ罹患した個体に
見られるようにα１−アンチトリプシンのレベルが約８
０η／ｄＬ以下ｌこ低下した場合、エラスターゼが肺を
破壊し始める。したがって、低レベルの内因性α、−ア
ンチｌ−ＩＪプシンを補うために外因性エラスターゼ抑
制剤を投与することが肺気１ｊｒｔの治療のためｔこ必
要である（ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・メディ
カル・アソシエーション（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈ
ｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　ＭｅｄｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａ
ｔｉｏｎ　）　、　２４９　（２２）　、　３００７　
（１９８３）参照）。

それ故、コラゲナーゼ／エラスターゼ抑制剤は。

コラーゲンおよびエラスチン含有結合組織の破壊が主要
な役割をなす疾病、例えば、歯周疾患、リューマチ性関
節炎、肺気腫、角膜潰瘍などの治療１こ都合よく用いる
ことができる。

発明の詳細 な説明は、式： Ｃ式中、Ｒ１は水素、ハロゲン、ニトロ、アミノ、低級
アルキル、低級アルコキシ、トリフルオロメチルまたは
ヒドロキシ；Ｒ２はハロゲン、低級アルキル、低級アル
コキシ、アミン、ニトロまたはトリフルオロメチルを意
味する〕 で示される新規化合物およびその医薬上許容される塩を
提供するものである。本発明は、さらに。

該化合物および医薬上許容される担体からなることを特
徴とするコラゲナーゼ／エラスターゼ抑制剤組成物を提
供するものである。また、本発明は、エラスターゼ右よ
びコラゲナーゼによってコラーゲンまたはエラスチン含
有組織が分解される病状ｌこ罹患している哺乳類ｌこ、
該エラスターゼ／コラゲナーゼ誘因コラーゲン分解を抑
制するに有効な量の式（１）： （：式中、Ｒ，は水素、ハロゲン、ニトロ、アミノ、低
級アルキル低級アルコキシ、トリフルオロメチルまたは
ヒドロキシ、Ｒ２はハロゲン、低級アルキル、低級アル
コキシ、アミン、ニトロまたはトリフルオロメチルを意
味する〕 で示されるエラスターゼ／コラゲナーゼ抑制剤またはそ
の医４１詐容され六市ヰ乃なすスこぶ、ｈ）久なる該哺
乳類における哺乳類のコラゲナーゼ／エラスターゼ抑制
方法を開示するものである。

本明細書で用いられる「低級アルキル」なる語は炭素数
１〜約６個の直鎖および分枝鎖炭化水素基を含む。「低
級アルコキシ」なる語は、炭化水素の部分が炭素数１〜
約６個である基を意味する。

本明細書で用いられる「ハロゲン」なる語は、フッ素、
塩素および臭素からなる基を意味する。

医薬上許容される塩とは、例えば、塩酸、臭化水素酸、
硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスル
ホン酸などの医薬上許容される有機酸および無機酸の塩
、アルカリ金属カルボキシレートおよびアンモニアまた
は塩基性アミンに由宋する医薬上許容されるカチオンの
カルボキシレートを含む。

本発明の化合物は、米国特許第４　、２７５　、０６５
号＋こ開示の三環式メンイオンジデヒドロ化合物と適当
な求核試剤を反応させることによって最も都合よく製造
される。

末端チアゾール環の環開裂を含む本反応は次式に示すと
おりである： 〔式中、Ｋ　およびに２は前記と同じ〕反応は、例えば
、塩化メチレンなどの適当な有機溶媒中、例えば、室温
〜還流条件下の温度範囲（こて行なわれる。

「医薬上許容される担体」なる語は、広義Ｉこは動物飼
料も含む製薬用として固体、経口投与単位に処方するた
めｌこ通常広く用いられる物質を意味し、また、単位用
量または複数回用量のいずれかの形態であっても、直接
または投与前（こ再生して経口および注射用懸濁液およ
び溶液１こ処方するためｌこ用いられるものも含む。

本発明ｌこよれば投与用［１こ処方するため、式■の化
合物を例えば、錠剤、カプセルなどの経口投与形に配合
することが可能である。これは、該化トリノ、でんぷん
、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリ
ウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、カ
カオバターなどの公知の担体とを組み合せることｆこよ
り行なわれる。

希釈剤、フレーバー剤、安定剤、滑沢剤、懸濁剤、結合
剤、錠剤崩壊剤などを使用してもよい。該活性成分は他
の担体を用いてもしくは他の担体を用いずにカプセル化
できる。該化合物は、また、非経口的に注射でき、この
場合には、該化合物は、例えば、該溶液を等張１こする
に充分な生理食塩水またはグルコースなど他の溶質を含
有する滅菌溶液の形態にて使用される。全ての場合にお
いて、固体および液体いずれの組成物中であっても活性
成分の比率は、少なくとも、経口または非経口投与１こ
よってコラゲナーゼ抑制作用を与えるに充分なものであ
る。

本発明の方法の実施において、該組成物は、好ましくは
、経口または注射によって、単独または医薬上有効な担
体とともに、種々の投与形態にて、温血動物ｌこ投与す
ることができる。

投与用量は、用いられる個々の組成物、投与経路、表わ
れた症状の程度および治療される個々の患者により異な
る。治療は、通常、該化合物の最適用量より少ない用量
で開始する。その後、当該状況下にて最適効％ｉＣ達す
るまで用量を増加させる。一般ｌこ、本発明の化合物は
、通常、いかなる有害なまたは好ましくない副作用も引
き起こすことす＜、所望の効果をもたらす濃度水孕（こ
て投与するのか最も望ましい。大型の動物（体重約７０
ｋｇ　）に注射する場合ｌこは、該用量は約２５ｍ９〜
約５０ｍ？であり、経口投与では、該用量は、約５０η
〜約２００■、好ましくは、約５０η〜１００１１１９
（いずれも−日当りの単一単位用量として）であり、所
望により、その用量にて一日のうち数回の都合のよい供
用量に分割して投与してもよい。

エラスターゼおよびコラゲナーゼを抑制する本発明の化
合物の活性は、培養にて正常ヒト白血球または正常ヒト
繊維芽細胞ｔこよって産生じたコラゲナーゼを用いた酵
素検定並びにヒト白面法エラスターゼを用いた酵素検定
（こて試験することによって測定される。

実施例 つぎに実施例を挙げて本発明をさらｌこ詳しく説明する
。

実施例Ｉ Ｎ−（（（５−クロロ−２−ベンゾチアゾリル）チオ〕
フェニルアセチル〕−Ｌ−システィンＡ、α−（５−ク
ロロベンゾチアゾール−２−イルチオ）ベンゼン酢酸 ５−クロロ−２−メルカプトベンゾチアゾール５０．０
ｇ（０，２４８モル）およびα−ブロモフエニル酢酸５
３．０ｇ（０，２４８モル）をアセトン１．５１中に溶
解し、該溶液を氷酢酸５ｏｒｎｌの存在下ｆこて４時間
加熱する。該溶液を濃縮して少看（約２００ｍ／）とし
、残留固体９０ｇを集める。得られた塩を水１１１こ懸
濁し、該混合物を室温Ｉこて一夜攪拌する。固体を集め
、アセトニ）　ＩＪル２．５ｊから再結晶し、表記化合
物６４ｇ（収率８５％）を得る。融点１９０〜１９２℃ 元素分析、ＣＨｃｊＮｏ２ｓ２として、計算値＜９６）
　：　Ｃ，５３，６４：Ｈ，３，００：Ｎ、４．１７実
測値（％）：　Ｃ，５３，８３：Ｈ，３，１３：Ｎ、４
．１３Ｂ、　　５−クロロ−２−フェニルチアゾロ〔２
，３−ｂ」ベンゾチアゾリルレ−３（２Ｈ）−オンメン
イオンジデヒドロ誘導体 前記Ａ、の化合物３１ｇ（ｏ、０９２モル）を塩化メチ
レン３．５ｊ中ｌこ懸濁し、該混合物を無水酢酸２５−
の存在下ｆこで加熱し穏やかｌこ還流させる。

該固体は徐々に溶解し、溶液は赤色を帯びる。−夜加熱
後、該溶液を沖過し、濃縮して２００ｍ１ｌこする。残
留する橙色固体２９．５ｇ（定量的収率）を集める。融
点２１５〜２１６℃ Ｃ，Ｎ−Ｍ（５−クロロ−２−ベンゾチアゾリル）チオ
〕フェニルアセチル〕−Ｌ−システィン前記Ｂ、の化合
物６．３６ｇ（０，０２モル）、Ｌ−（−）−システィ
ン２．４　ｇ　（０，０２モル）およびトリエチルアミ
ン２．５ｇ（０，０２５モル）を塩化メチレン８００−
中１こ懸濁し、該混合物を５６時間加熱する。不溶物を
ρ過後、ｒ液を希塩酸溶液で洗浄し、ついで、無水硫酸
マグネシウムで乾燥する。溶媒除去後、残留する油状残
渣をエーテルでトリチュレートし、固体を集める。該エ
ーテル溶液を放置し、さら（こ固体を得る。固体を合し
、アセトニトリルから再結晶して、表記化合物１．５ｇ
（収率１７％）を得る。融点１５５〜１５８℃元素分析
、Ｃｌ３Ｆ■１５ＣＩＮ２０３Ｓ３として、計算値（％
）　：　Ｃ，４９，２５：ｌ゛［，３，４４：Ｎ、６．
３８実測値（％）：Ｃ，４９，３６：Ｈ，３，４５；Ｎ
、６．０実施例２ Ｎ−（（（５−クロロ−２−ベンゾチアゾリル）チオ〕
−フェニルアセチル）−Ｌ−システィンは、エイ・セラ
ーズおよびジェイ・ジェイ・レイノルズ、バイオケミカ
ル・ジャーナル（Ａ、５ｅｌｌｅｒｓａｎｄ　Ｊ、　Ｊ
、　Ｒｅｙｎｏｌｄｓ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、　）　
、　１６７　。

３５３〜３６０　（１９７７）に記載された方法１こ基
つきｉｎ　　ｖ首ｒｏ　検定ｆこてコラゲナーゼの抑制
を試験する。

細胞培養にて、正常ヒト白血球または正常ヒト皮膚繊維
芽細胞１こよって産生されたコラゲナーゼをコラーゲン
セファロース４Ｂカラムに吸着させて精製する。検定ｆ
こ用いる＠ｌこ、チモーゲンをトリプシンで活性化し、
一方、次ｔこトリプシンは、過剰の大豆トリプシン抑制
剤で不活性化する。

該検定法１こ従い、コラーゲン（０，０１％酢酸１−当
り１４Ｃ−アセチル化コラーゲン２ｍｇ）、２５μ！　
：　　０．１５Ｍ　トリス／　０．　Ｏ１５Ｍ　ＣａＣ
ｌ！２　（Ｐ’−■７．４）２５μ／：　　ｌ−リス緩
衝液（０，０５Ｍトリス／　ｏ、　Ｏ０５ＭＣａ　Ｃｚ
　２、ｐＨ７，４）　　中コラゲナーゼ７５μｌおよび
トリス緩衝液中コラゲナーゼ抑制剤２５μｊを含有する
総指約１５０μｌの溶液を含む微沿遠心分離チューブを
調製する。試料および対照を酵素の活性により１〜５時
間３５℃１こてインキュベートする。反応終了時に、該
チューブをベックマン微ｍ遠心分離機（こかけて遠沈さ
せる。ついで、それぞれのチューブから２５μｌずつを
とりシンチレーション・カウンターｌこて検定する。天
然のコラーゲンは、これらの条件下で不溶性細繊維を形
成するので、上清ｌこおいて検出された放射能はコラー
ゲン水解物の測定値である。

−組の実験ｆこおいて、実施例１の化合物は、該検定に
て試験され、そのコラーゲン抑制作用が測定される。第
一の実験において、コラーゲンエ（コラーゲンの最も優
勢な形態であり、皮膚１こ存在する）を基質として用い
た。第二の実験ではコラーゲン■（軟骨Ｅこ存在する）
を基質としで用いた。

その結果を以下に示す： 実験番号　　　　　　　　　ＩＣ５ｏ（ｌＬ〜１）２　
　　　　　　　　　　　１２．５ 結果は、試験化合物かコラゲナーゼの強力な抑制剤であ
ることを示し、その抑制作用は、異なるコラーゲン基質
を用いて試験した場合でも有意な差を示さない。

実施例３ Ｎ−［：［：（５−クロロ−２−ペンゾチアソリル）チ
オ〕−フェニルアセチル〕−Ｌ−システィンについては
、以下のごと〈実施されるｉｎ　　ｖｉｔｒ。

検定ｌこてヒトエラスターゼ抑制を試験する：粗エラス
ターゼ製剤は、ヒト白血球顆粒〔アール・ジエイ・パー
クおよびジエイ・トラビス、バイオケミストリー（Ｒｏ
Ｊ、　Ｂａｒｙｋ　ａｎｄ　Ｊ、Ｔｒａｖｉｓ。

Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　）　、　１５　（４）　、
　８３７　（１９７６）の方法（こ従って調製〕を均二
化し、遠心分離し、ｐＨ８，０（こて冷０．０５Ｍ）リ
ス−ＨＣ／１０．０５ＭＮａＣ／ｉこ対して上清を透析
すること１こよって調製する。

このエラスターゼ製剤を二種類の検定法（こ用いてエラ
スターゼ抑制を試験する。

方法１ 該エラスターゼｉ剤４００μｌ、スクシニル−Ｌ−アラ
ニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｐ−二トロアニリ
ド（酵素基質）、緩衝液２０７μｊおよび試験を行なう
種々の指のエラスターゼ抑制剤を３７℃にて１９時間イ
ンキュベートする。該氷解物は、高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）を使用するか、吸光度測定法によっ
て、４１０１ｍの波長にて遊離ρＰ−ニトロアニリンを
測定する。

この方法において、実施例１の化合物は２．１μｇ／−
のＩＣ５ｏを示した。

方法２ この方法において用いる基質はエラスチン−フンゴーレ
ッド複合体である。この基質はエラスターゼＥこよって
加水分解されてコンゴーレッドを遊離し、これをＨＰＬ
Ｃｌこよって定量する。また、該検定系は、緩衝液およ
び実施例１の化合物２０μｇを含有するか、もしくは含
有しない。接糸を３７℃１こて１８時間インキュベート
する。標票試料は、ブタ膵臓エラスターゼによってエラ
スチン−コンゴーレッド複合体の完全な加水１分解を示
す。

サンプル量　　　　　　コンゴーレッドの相対的遊離標
準　　　　　　　　　　　　１．０ 抑制剤なし　　　　　　　　　０．１０４実施例１の化
合物　　　　　　ｏ、ｏｏ。

これらの検定の結果は、実施例１の化合物がヒト白血球
エラスターゼの酵素活性（こ強い抑制作用を及ぼすこと
を示している。

代理　人弁理士青山　葆　外２名 Ａ　６１　Ｋ　　３１／４２５　　　　ＡＣＫＡＥＤ

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＿１は水素、ハロゲン、ニトロ、アミノ、低
   級アルキル、低級アルコキシ、トリフルオロメチルまた
   はヒドロキシ；Ｒ＿２はハロゲン、低級アルキル、低級
   アルコキシ、アミノ、ニトロまたはトリフルオロメチル
   を意味する〕 で示される化合物またはその医薬上許容される塩。
2. （２）Ｎ−〔〔（５−クロロ−２−ベンゾチアゾリル）
   チオ〕フェニルアセチル〕−Ｌ−システインである前記
   第（１）項の化合物。
3. （３）前記第（１）項の化合物および医薬上許容される
   担体からなることを特徴とする哺乳類コラゲナーゼ／エ
   ラスターゼ抑制剤組成物。
4. （４）Ｎ−〔〔（５−クロロ−２−ベンゾチアゾリル）
   チオ〕フェニルアセチル〕−Ｌ−システインおよび医薬
   上許容される担体からなることを特徴とする前記第（３
   ）項の組成物。
5. （５）エラスターゼ／コラゲナーゼによつてコラーゲン
   またはエラスチン含有組織が分解される病状に罹患して
   いる哺乳類に、該エラスターゼ／コラゲナーゼ誘因コラ
   ーゲン分解を抑制するに有効な量の式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＿１は水素、ハロゲン、ニトロ、アミノ、低
   級アルキル、低級アルコキシ、トリフルオロメチルまた
   はヒドロキシ；Ｒ＿２はハロゲン、低級アルキル、低級
   アルコキシ、アミノ、ニトロまたはトリフルオロメチル
   を意味する〕 で示されるエラスターゼ／コラゲナーゼ抑制剤またはそ
   の医薬上許容される塩を投与することからなる該哺乳類
   における哺乳類のエラスターゼ／コラゲナーゼ抑制方法
   。
6. （６）抑制剤がＮ−〔〔（５−クロロ−２−ベンゾチア
   ゾリル）チオ〕フェニルアセチル〕−Ｌ−システインで
   ある前記第（５）項の方法。