JPS62112000A - 水痘・帯状ヘルペスウイルス抗体に関する試験 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

水Ｍは、ヘルペスウィルス群の１種である水痘・’Ｆｒ
状ヘルペスウィルス（ＶＺＶ）により発生し、しかも、
予め免疫性をもたないか又は低レベルのＶ　７．　Ｖ免
疫性をもつヒトの場合に発生ずる。νＺＶ特異的抗体の
存在量は、罹患後直ちに証明することができ、回復期間
中は減少するが、但し長年にわたり検出可能な量のまま
であり、病気に対する免疫性と相互関係がある。水痘は
高度の感染性があり１９０％以上の人々は最初の２０年
間ＶＺＶにさられるようになる。この病気は、免疫反応
が抑制された人々及び士民を過ぎた人々に対する罹患率
が極めて高い。大半の場合、但しすべての場合ではない
が、ＶＺＶは後根神経節細胞中に潜伏するようになる。 この潜伏状態から、ＶＺＶは活発化し、特異的抗体存在
下でさえも、おそらく細胞性免疫の退行に起因して、帯
状庖疹を発生させる。免疫性のない人と活性水痘患者と
の接触管理は、水痘による罹患の危険性が高い人に感染
することを防止する上で、一定の情況下においてしＪ必
要とされる。 ＶＺＶは、その表面上に主に６種のＩｊとタンパク質：
即ち、ｇｐ１０５、ｇｐ９２、ｇｐ８３、ｇｐ６２、ｇ
ｐ５７、ｇｐｓｓを有していることが見出された。これ
らの糖タンパク質は、明らかに、３種の遺伝子からの産
物：即ち、ｇＡ　（ｇｐ１０５）　、ｇＢ　（ｇｐ６２
、ｇｐ５７）及びｇＣ（ｇｐ９２、ｇｐ８３、ｇｐ５５
）である。ｇＣ糖タンパク質はＶＺＶＩＪｉタンパク質
の大部分を占め、しかも最大の免疫原性を有している。 ｇＡ及びｇＢに対する一定のモノクローナル抗体はイン
・ビトロにおいてウィルス感染性の補体非依存的中和を
起こし、ｇＣに対するモノクローナル抗体は補体依存的
中和を起こす。 水痘・帯状ヘルペスウィルス（Ｖ　Ｚ　Ｖ）に対する抗
体の検出に関し現在知られている試験法としては、うイ
ルス感染細胞又はウィルス感染細胞の溶解物を固体担体
に付着させ、次いでこれらを生物学的液体に接触させ、
しかる後酵素又は蛍光プしＪ−ブで複合化された第二抗
体に接触させる方法、例えば、対膜抗原蛍光抗体法（Ｆ
ＡＭＡ）　、免疫付着血球凝集法（ＩＡＨＡ）、酵素結
合免疫ソルヘント試験法（Ｅｌ、ｌ５Ａ）がある。 市販の水痘診断具、即ちメリーランド州、ホイソテカー
・エム・ニー・バイオプロダクツ・オブ・つＡ−カース
ビル社（切目ｔｔａｋｅｒ　Ｍ、Ａ、Ｂｉｏ−Ｐｒｏｄ
ｕｃｔｓ　ｏｆ　Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ）のハリセ
リサ（ＶＡＲＩＣｌｊＬＩＳＡＲ）試験ギソトば、ヒｌ
−１１１１清中のＶＺＶに対するＩｇＧ抗体に関したＥ
Ｔ、ＩＳＡ型アッセイを利用している。試験では全体的
な感染細胞抗原を利用する。技術的結果報告書において
、診断具カタＩコグ第３０−３５２０号（プレート類）
及びイン・ビトロ操作に関する記載部分は、参考のため
に本明細書に絹み込まれるが、これらは本発明の糖タン
パク質及び方法と合わセで利用する場合において適用す
ることができる。 上記の関連試験では、各種ＶＺＶ抗原と反応する広範囲
の抗体を検出する。しかしながら、その試験では、イン
・ビトロにおいてウィルス感染性の中和が可能な抗体の
産生を促進することについて現在ではそれぞれ公知とな
っている３種のシＺシ糖タンパク質、即ちｇＡ、ｇＢ、
及びｇＣと反応する抗体群をグループに識別することが
できず、あるいはＶ　Ｚ　Ｖ　糖タンパク質と反応する
抗体群を他のタンパク質から識別することができないの
である。 したがって、本発明の目的は、精製されたｇＡ、ｇＢ、
及びｇｃｖｚｖｔＪ！タンパク質に対して特異的な抗体
群のザブグループを検出することができる改善された試
験法を提供することにある。もう１つの目的は、これら
精製された糖タンパク質と、抗原を検出する際のそれら
のコン１〜ロールに関して、分離方法及び診断的用途を
提供するごとにある。本発明のこれらの及び他の目的は
、下記記載から明らかとなるであろう。 本発明によれば、宿主哺乳類生物学的液体においテ水痘
・帯状ヘルペスウィルス（Ｖ　Ｚ　Ｖ）　ｇ　Ａ、ｇ　
ｎ及びｇＣ糖タンパク質に対する抗体の存否を調べるた
めの方法が提供されるが、この方法は下記工程からなる
： ｆａ）　　少なくとも１種の精製され未変性でかつ血清
学的に活性なｇＡ、ｇＢもしくはｇＣＶＺＶ糖タンパク
質又はその混合物を固体表面に永続的に付着させ； （ｂｌ　　Ｖ　Ｚ　Ｖ　ｇ　Ａ　、　　ｇ　Ｂ又はｇＣ
糖タンパク質と一緒に共精製された、精製され未変性で
かつ血清学的に活性な未感染細胞タンパク質もしくは糖
タンパク質又はその混合物を固体表面に永続的に付着さ
せ； （ｃ１工程（ａ）における１ユ起因体表面に付着したｌ
Ｊｉタンパク質及び工程（１１）における」−配置体表
面に付着したタンパク質もしくは糖タンパク質を生物学
的液体と接触させ、この場合において、糖タンパク質に
対する抗体は、もし液体中に存在しでいるとすれば、−
ヒ記糖タンパク質と結合して糖タンパク質−抗体複合体
を形成し； （ｄ）　　工程（ｂｌ及び（ｃ）における１、配置体表
面に付着した糖タンパク質をサブクラスもしくは全体的
免疫グロブリン又は特異的免疫グロブリンに対する抗免
疫グロブリン−指示薬複合体と接触さセ、この場合にお
いて、上記抗免疫グロブリンは、もし工程（ｂ）又は（
ｃ１で存在しているとすれば、Ｌ配糖タンパク質−抗体
複合体における１−記抗体と結合することにより、糖タ
ンパク質−抗体−抗免疫グロブリン−指示薬複合体を形
成し、しかもこの場合において、上記指示薬は結合体の
測定可能な応答を与え；次いで （ｅｌ　　工程ｆｄｌの操作終了後に指示薬応答を測定
し、かつ、個々のＶＺＶ［タンパク質又はその混合物に
対する応答から、その各々の未感染細胞タンパク質又は
糖タンパク質コントロールに対する応答を差引くことに
より補正する。 特に、ヒトの血清学的液体中における水痘・帯状ヘルペ
スウィルス（ＶＺＶ）ｇＡ、ｇＢ及びｇｃｔＦタンパク
質に対するヒト抗体の存否をインビトロで調べるための
方法が提供されるが、この方法番ＪＦ記二Ｆ稈からなる
： （ａ）ＶＺＶ感染感染細胞山積製され未変性でかつ血清
学的に活性なｇＡ、ｇＢ又はｇＣＶＺＶ糖タンパク質を
固体ポリスチレン表面に永続的に付着さ一１木； （ｂｌ　　Ｖ　Ｚ　Ｖ　ｇ　Ａ　、　　Ｂ　Ｂ又はｇ　
Ｃ糖タンパク質と一緒に」（精製された、精製され未変
性でかつ血清学的に活性な未感染細胞タンパク質もしく
はｌＪｉタンパク質ヌはその混合物を固体ポリスチレン
表面に永続的にイス１着させ； （ｃｌ　　−ｒ’程（ａ＋及び（ｂ）におい゛（得られ
た１−記表面にイ・１着した糖タンパク質を血清学的液
体 （ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ　　ｆｌｕｉｄ　）と接触さ
せ、この場合におい゛’−、！！タンパク質に対する抗
体は、もし液体中Ｏこ存在しているとすれば、上記糖タ
ンパク質と結合して糖タンパク質−抗体複合体を形成し
； （ｄ）−［“稈（

【］）における上記表面に付着した糖
タンパク質を、Ｉ−記抗体に応答して誘導されかつアル
カリホスファターゼで複合化された抗ヒト免疫グロブリ
ンと接触さセ、この場合おいて、上記抗免疫グロブリン
は、もし存在しているとすれば、１−配糖タンパク質−
抗体複合体の一１記抗体と結合し； （ｄａ）　　工程（ｃ）の複合体をｐ−二トロフヱニル
ポスフェート溶液と接触させ； （（つ）工程（ｄａ）における酵素基質溶液展開後のア
ルカリ溶液中でのｐ−二トロフェノールによる吸光度を
測定し、かつ酵素基質溶液展開後の吸光度を測定し、個
々のｖ　ｚ　Ｖ　ＩＩＮタンパク質又はその混合物に対
する応答から、その各々の未感染細胞タンパク質又は糖
タンパク質コン１川」−ルに対する応答を差引くことに
より補正する。 下配糖タンパク質についても開示する：精製され末変１
４の血清学的活性型のＶＺＶｇＡ糖タンパク質； 精製され未変性の血清学的活性型のＶ　Ｚ　Ｖ　１ｇ　
Ｂキ唐タンパク質； 精製され未変性の血清学的活性型のｖ　ｚ　ｖ　ｇ　ｃ
ｌ２ 専入ζタンパク質； 【／り千ンアフィニティークロマトグラフィー１．７　
Ｊ、り精製され、かつｇＡ及び／又はｇ　Ｒ及び／ソロ
に〇糖タンパク質を含有する、精製された感染細胞Ｖ　
７．　Ｖ糖タンパク質； 免疫アフィニティークロマトグラフィーによりＶＺＶ感
染細胞溶解物由来ＶＺＶｇＡ、ｇＢ又はｇ　Ｃと−・緒
に共精製された、精製され未変性である血清学的活性型
の未感染細胞タンパク質；し／クチンアフィニティーク
ロマトグラフィーによりＶＺＶ感染細胞溶解物出来ｖ　
ｚ　ｖ　１ｇタンパク質と−・緒に共精製された、精製
済未感染細胞糖タンパク質。 下記ＶＺＶ診断装置について更に開示する：固体表面に
永続的に付着した、精製され未変性である血清学的活性
型のＶ　Ｚ　Ｖ　ｇ　Ａ　ｌｊタンパク質からなる診断
装置； 固体表面に永続的に付着した、精製され未変性である＋
ｆｎ清学的活性型のｖ　ｚ　ｖ　ｇ　Ｂ糖タンパク質か
らなる診断装置； 固体表面に永続的にイス１着した、精製され未変性であ
る血清学的活性型のＶＺＶｇＣ１ｊタンパク質からなる
診断装置； 精製され未変性である血清学的活性型のＶＺＶ［！Ａ、
ｇＢもしくはｇＣ糖タンパク質、又Ｃ３ｔその混合物か
らなり、少なくとも２種の上記糖タンパク質が存在し、
かつ固体表面に永続的に付着し７ている診断装置； 免疫アフィユティークＬ１７１グラフィーによりＶＺＶ
感染細胞溶解物山来ＶＺＶｇＡ、ｇＢ又はｇＣと−１１
に共精製された、精製され未変性である血清学的活性型
の未感染細胞タンパク質からなり、固体表面ζこ永続的
ζに付着している診断装置；レクチンアフィニディーク
ロマトグラフィーにより精製され、かつ未変性のＩｆｉ
ｔ清学的活性型であるｇＡ、ｇＢ及びｇｃ＋Ｎタンパク
質を含有し、固体表面に永続的に付着している精製され
た感染細胞ｖｚＶ＄Ｊｉタンパク質からなる診断装置；
レクチンアフィニティーク［１７トグラフイーにより精
製され、かつ未変性の血清学的活性型である糖タンパク
質を含有り、、固体表面ｔ、二永続的に付着１−７でい
る精製された未感染細胞ｌＪｈタンパク質からなる診断
装置。 本発明（：１、生物学的液体において特異的ＩＫＡ、ｔ
＜　ｎ、ｌ５（ｉ；ＩｇＣｖ　ｚ　ｖｉＪｓタンパク質
に対する咄乳頻の抗体を検出するための試験法、更に詳
しくは、什物学的液体、特にヒト生物学的液体中のこれ
ら抗体を検出する高感度酵素結合試験法（Ｐ、１．Ｉｓ
へ）に関する。本発明において、公知のタンパク質凝隼
？容液力）ら得られるＶＺＶｇＡ、ｇＢ、ｇｃｉ店タン
パク質又はその混合物は、糖タンパク質を吸着すること
が可能な固体表面、例えばプラス千ツク表面に永続的に
付着ゼ（−められる。当該技術分野に才旨Ｉる糖タンパ
ク質の命名法によれば、参考のために本明細書にＫ、１
１み込まれる論文：ダビソン（１）ａν１ｓｏｎ　）ら
のジャーナル・オブ・パイロロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　
ｏｆ　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　）　１９８６年３月、第１１
９５−１１９７頁に従い、ｇｐｌ（ｇｐＣ）、ｇｐｒｌ
（ｇｐＢ）及びｇｐｌＴＩ　（ｇｐＡ）とされる。 しかしながら、ｇｐＡ、ｇｐＢ及びｇｐＣの命名が本明
細書では使用される。本明細−１で用いられる“永続的
に付着している”という詔は、糖タンパク質が、水又は
クロマ１〜グラフイー溶出の際の緩衝液で争に洗浄する
だけの未変性的方法によっては固体表面から容易に除去
することができないことを意味する。糖タンパク質を除
去するには、水又は有機溶液中で煮沸するような過酷な
条件が必要とされるが、除去−■２程ではそれによって
糖タンパク質が変性される。 本明細書で用いられる“未変性”というＭ、　４１、天
然の未精製糖タンパク質に結合可能な抗体と溶液中で反
応し得ることを意味する。 本明細書において用いられる“血清学的に活性”という
語は、動物に注射した場合に、天然の末梢製糖タンパク
質と結合し得る抗体を誘導することができることを意味
する。 本明細書において用いられる“液体”という詔は４Ｅ物
から誘導される液体、例えば、血液、＋ｆｎ清又は血清
を意味する。 試験用抗原とし２て利用可能な糖タンパク質及びコント
ロールは下記のとおりである： １、Ｖ’？、Ｖｑ涛携久／バノ−質バーｇ−ＮｙＦＶ　
Ｚ　Ｖ　ｇ　Ａ糖タンパク質と反応するモノクローナル
抗体ＡＩを用いた免疫アフィニティークロマトグラフィ
ーにより、Ｖ　７．　Ｖ感染ヒト細胞〔例えば、ブロシ
ーデインダス・オブ・ザ・ソサエテー・フォア・イクス
ピアリメンタル・バイオロジー・アンド９メデイシン（
Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　５ｏｃｉｅｔ
ｙｆｏｒ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ
　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　）、第１６６巻、第３３
９−３４７頁に記載されているように、ＫＭｃＣ株活性
弱毒化■Ｚ■ウィルス４１０７１で感染されたＭＲＣ−
５細胞〕から精製される。Ｍ　ＲＣ−５ヒト肺繊維芽細
胞ΔＴＣ（＞１７１は公的に入手可能であり；Ｗ＋−３
８ヒト肺繊維芽細胞、ＡＴＣＣ−７５しよ、他の発癌性
ヒト肺繊維芽細胞と同様に使用可能であって、同等の結
果を与える。ＫＭＣＣ株は、ＯＫａ野生型株から誘導さ
れ、欧州において公的に入手可能なスミスクライン（Ｓ
ｍｉｔｈ〜ｋｌｉｎｅ）水痘ワクチンと同等の結果を与
える、例えば公的に入手可能な水痘・帯状ウィルスＯＫ
ａ株、ＡＴＣＣＶＲ７９５のような野４Ｌ型又は弱毒型
のいずれの７７７株に変更されてもよい。モノクローナ
ル抗体ＡＩの産生法は実施例１に挙げられ、Ｖ　Ｚ　Ｖ
　ｇ　Ａ　＋）Ｎタンパク質の産生法は実施例３に挙げ
られている。変ｔｅｌ型のこの糖タンパク質の同定につ
いては、下記文献中に更に記載されており、それら文献
はかかる目的のために本明細書中に参考として絹み込ま
れる二ケラ−（Ｋｅｌｌｅｒ）ら、ジャーナル・オブ・
パイロロジー、第５２巻、第２９３頁、１９８４年、即
ち、ｇｐ１０５ニゲロース（Ｇｒｏｓｅ　）ら、インフ
エクト・イムノ　（Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍｍｕｎ、　）　
、第４０巻、第３８目ｉ（，１９８３年、即ち、精製型
としてｇＡから単離されたｇｐＨ８；シラキ（Ｓｈｉｒ
ａｋｉ　）ら、ジエイ・ジェネ・ハイ口！１（Ｊ、Ｇｅ
ｎ、Ｖｉｒｏｌ、）　、第６１巻、第２５５頁、１９８
２年、即ら、ｇｐｌ及び、フォルガニ（Ｆｏｒｇｈａｎ
ｉ）ら、ジャーナル・オブ・ハイロロジー、第５２巻、
第５５頁、１９８４年、即ら、ｇｐＨＢ。 ２．未惑染細順し即りづに−チｔ：　　（７，−Ｈ−Ａ
、４ン！し！二）Ｌ／　７−）づ未感染の、例えばＭＲ
Ｃ−５細胞系から得られ、即ら、ＶＺＶｇＡ糖タンパク
質と反応する上記上ツク（７一ナル抗体ＡＩを用いた免
疫アフィニティークロマトグラフィーにより、実質的に
は、実施例５のような、アイゼンベルブ（Ｅｔｓｅｎｂ
ｅｒｇ＞ら、ジャーナル・オブ・ハイロロジー、第４１
巻、第１０９９頁、１９８２年に記載された方法により
精製される。 ３、−■〕−Ｙ　ｇ　Ｂ、、ｔａ、ｙ　７）＜外賓−，
，＜−１」”　）　　匙ＺシｇＢＩＪ、ｌｉタンパク質
と反応するモノクローナル抗体Ｂ１を用いた免疫アフィ
ニティークロマトグラフィーによりＶＺＶ感染細胞から
精製される。モノクロ−ナル抗体Ｂ１の産生法は実施例
１に挙げられ、ＶＺＶｇＢ？Ｊ！タンパク質の産生法は
実施例２に挙げられている。変性型のこれら糖タンパク
質の同定法については、下記文献中に更に記載されてお
り、それら文献はかかる目的のために本明細書中に参考
として組み込まれる：ケラ−ら、同上、即ち、ｇｐｌＩ
５、ｇｐ６２、ｇｐ５７；オクタ　（Ｏｋｕｒｏ　）　
ら、ウィルス学（ｖｔｒｏｌｏｇｙ）　、第１２９巻、
第３５７頁、１９８３年・即ち・ｇｐ２、ｇｐ５；グロ
ースら、ｇｐ１４０、ｇｐ６６、“ジスルフィド結合二
量体”；及び、フォルガニら、同一し、１２０Ｋ、１１
８に、６４−６５Ｋ。 ４、未恣逮Ｊｌ胞−泄史づｊ光−口で３．　Ｂ　：！　
７　ｔ７　ｔｌ二少−）：ＶＺＶｇＢ［タンパク質と反
応する−１−記モツクローナル抗体Ｂ１を用いた免疫ア
フィニティークロマトグラフィーにより、実質的には、
実施例６に記載された方法により精製される。 ５、　Ｖ　Ｚ　Ｖ　Ｉ　ＣＪ）Ｊ−久ンバノ−３１（、
−１−９”　）、　　：　ＶＺＶｇ　ｃ糖タンパク質と
反応するモノクローナル抗体ＣＩを用いた免疫アフィニ
ティークロマトグラフィーによりＶＺＶ感染細胞から精
製される。 モノクローナル抗体Ｃ１の産生法は実施例１に挙げられ
、ＶＺＶ＄Ｊ！タンパク質の産生法は実施例４に挙げら
れている。変性型のこれら糖タンパク質の同定法につい
ては、下記文献中に更に記載されている：ケラーら、同
上、即ち、ｇｐ９２、ｇｐ８３、ｇｐ５２・　ｇｐ４５
；グロースら、インフエクト・イムノ、第４０巻、第３
８１頁、１９８３年、即ち、ｇｐ９Ｂ、ｇｐ６３；オク
タら、同一１−１即ち、ｇｐ３、ｇｐ４、ｇｐ６；及び
、フォルガニら、同−ｈ、９０Ｋ。 ８０に、６０Ｋ。 ｆｉ、未感染細胞２町Ｌベブ汗」」二」Ｃコント町：ソ
１．））：Ｖ　Ｚ　Ｖ　ｇ　Ｃ’１１７４タンパク質と
反応する上記上ツク１１−ナル抗体Ｃ１を用いた免疫ア
フィニティークｌ’ｌマドグラフィーにより、実質的に
は、実施例７に記載された方法により精製される。 ７、−Ｖ−乙−Ｗ聡ｔａクレソＳ−久ｌ〕−−ヒ久チン
”）：すべでのｖＺＶ糖タンパク質と広く交差反応する
固定化レクチンを用いたレクチンアフィニティーク「１
マドグラフイーにより■Ｚ■感染細胞から精製される。 この方法は、実施例８のように、ハイマン（ｌｌａｙｍ
ａｎ）ら、エフ・イー・ビー・ニス・レター（ＦＥＢＳ
　Ｌｅｔｔ、）　、第２９巻、第１８５頁、１９７３年
に記載されている。 ８、末！ぎ東細胞総糖−久ンーペー久貫−（ご−？−ダ
ー±７マイートーｏ−２２；）上置様の固定化レクチン
を用いたレクチンアフィニティークロマトグラフィーと
、実施例９のような−Ｆ記７に記載された方法とによっ
て、未感染細胞から精製される。 ＶＺＶウィルス粒子の表面上に上記タンパク質が存在し
ていると、ウィルスに対する免疫性を賦活する。この免
疫性は、体液性免疫、即ち抗体を産生ずるものであって
も、又は細胞性免疫であってもよい。上記ｇＡ、ｇＢ及
びｇＣ抗原は、物理的及び化学的特性と、異なるモノク
ローナル抗体との反応性とによって区別されるが、上記
方法により細胞性免疫を測定する試験に際しての診断試
薬、診断装置及び精製ＶＺＶ！Ｊ！タンパク質として使
用することができる。このような試験法の例としては、
遅延型過敏症試験（皮膚テスト抗原）及びイン・ビトロ
Ｔ細胞増殖能試験がある。更に、精製ｇＡ、ｇＢ又はｇ
ＣＶＺＶ糖タンパク質は、単独又は組合せで、ポリクロ
ーナル東−特異性抗体又はポリクローナルヒト急性期も
しくは回復朋血清のいずれかを用いた免疫アフィニティ
ークロマトグラフィー等の方法により、診断試薬として
使用するために精製されかつ利用される。 本明細書に記載された本発明方法は、一般には、精製さ
れ未変性である血清学的活性型の上記糖タンパク質を、
ストリップ又は典型的にはポリスチレンマルチウェル試
験プレートのウェルの固体表面に永続的に付着させるこ
とにより、即ち約４〜８℃で典型的には約１８〜４８時
間インキュベートして表面を糖タンパク質で覆うことに
より実施することができる。表面はしかる後排水され、
適切な溶液、例えば、０．０５％ツイーン（Ｔｗｅｅｎ
　）２０”含有リン酸緩衝液（Ｐ　Ｂ　Ｓ　：　０．１
５Ｍ　ＮａＣ（！、０、０１　Ｍ　ＮａｚｌｌＰＯａ、
ＰＩＩ７．２）、で洗浄される。 Ｖ　Ｚ　Ｖ　糖タンパク質に対する抗体の存否について
試験される生物学的液体の一連の希釈は、１％うシ胎児
血清及び“グロブリン欠乏”ヤギ血清を含む０．０５％
ツイーン２０”含有ＰＢＳで行なわれ、ここで“グロブ
リン欠乏”ヤギ血清はペンシルバニア州デンバーのハズ
レトン・ラブズ社（ＨａｚｌｅｔｏｎＣａｂｓ）の正常
なりギ血清から下記のようにして得られる： ａ、正常なりギ血清を水で１：２に希釈し；ｂ、撹拌し
て滴下しながら等量の飽和 （ＮＨ４）２Ｓ０４と混合し； ｃ、４℃で一夜貯蔵し； ｄ、１０℃、１５００ｒｐｍで遠心分離し；ｅ、沈殿物
を捨て； ｆ、上澄を濾過滅菌する。 ウィルス学的液体のこれら一連の希釈液は洗浄された表
面と接触せしめられ、約０．５〜２．０時間約　２５〜
約４０℃でインキュベートされる。ウェルは次いで０．
０５％ツイーン２０”含有ＰＢＳで完全に洗浄され、存
在する未結合抗体が除去される。ウェルは次いで典型的
には抗免疫グロブリン−酵素複合体に接触せしめられ、
３７℃で１時間インキュベートされる。未結合複合体は
上記ＰＢＳ／ツイーン溶液で流去される。次いで、典型
的には、前工程と同様の条件下で酵素基質溶液が加えら
れるが、但し基質のインキュベートは１８〜２８℃で約
１時間行なわれ、しかる後塩基（ＩＮ　Ｎａ０１１　）
の添加により終了される。ウェルの光学濃度（Ａ）が次
いで４０５〜４９０ｒ＋ｍで測定される。 読取り値は次いで、未感染ＭＲＣ−５細胞糖タンパク質
に対し同一の方法を実施することにより得られたそれら
個々のコントロール値によって下記のように補正される
；例えば、抗体（ｇＡ）−吸光度（ｇＡ）　　（八（ｇ
八）　〕　−八　輸へ　コシ）リール）；　抗体　（ｇ
Ｂ）　　＝Ａ（ｇＢ）−＾（ｇＢ　　コントド１シ）；
抗体軸Ｃ）＝　Ａ（ｇＣ）−Ａ　（ｇＣコントトル）；
　抗体　（！、を糖タンパクｔｔ）・八　（レクチン）
−八（レクチンコントトル）。 上記の方法において、哺乳類生物学的液体は、水痘・帯
状ヘルペスウィルスに対して活性なネズミ、ウシ、ヤギ
、ヒト又はいずれかの哺乳類の液体である。好ましくは
、上記方法で使用される哺乳類生物学的液体はヒトの液
体である。 試験される液体自体は、哺乳類の全血液、血漿又は血清
である。好ましくは、血清が使用される。 本発明の方法に使用される固体表面は、ポリスチレン、
ナイロン、ポリエステル、ポリビニルクロリド、ポリア
クリロニトリル等をはじめとするいずれかの合成ポリマ
ーのものであっても、又はガラスもしくは炭素のような
物質からなる他の化学的に非反応性の固体粒子のもので
あってもよい。　　　　　−好ましくはポリスチレンで
あり、特に好ましくは、例えばナンク社（Ｎｕｎｃ）　
、リンブロー社（Ｌｉｎｈｒｏ　）又はディナテソチ社
（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）製造の市販マルチウェル試験プレ
ートのような平滑なポリスチレンである。 糖タンパク質−抗体複合体が形成されるのは、血清学的
に活性な抗体とそれらの各々のｇＡ、ｇＢ、ｇＣ又はそ
の混合物からなる抗原糖タンパク質との間の特異的相互
作用の結果であり；即ち、ｇＡ抗体はｇＡ抗原糖タンパ
ク質と反応する。 抗免疫グロブリン−指示薬複合体は、哺乳頻生物学的液
体宿主源以外の別の宿主から誘導される抗免疫グロブリ
ンを含有している。ヒト■Ｚ■抗体について試験する場
合に抗免疫グロブリンは別の供給源、例えば、マウス又
はウサギから誘導されるが、ヒト抗体はその動物体内に
導入されて抗免疫グロブリンを産生じ、これは当該技術
分野において公知の技術により単離精製することができ
る。好ましい抗免疫グロブリンはヤギ又はウサギ抗ヒｌ
−［ｇ　Ｇである。抗免疫グロブリンは、サブクラスの
抗体決定のために、ＩｇＭ又はＩ［Ａに対しても利用す
ることができる。他の指示薬複合体としては、抗体と特
異的に結合するスタフ（ｓｔａｐｈ　）　Ａタンパク質
又は他の物質の複合体がある。 複合体の指示薬は、燐光性プローブ又は燐光剤；ローダ
ミン又はフルオレセインのような蛍光剤；１１２５のよ
うな放射線標識、あるいはアルカリホスファターゼ、ビ
オチン−アビジン系、西洋ワザビベル第４−シダーゼ又
はβ−１〕−ガラクトースのような酵素結合免疫ソルヘ
ント試験（Ｅｌ、ＩＳＡ　”）用試薬であってもよい。 好ましくは、ＥＬ［ＳＡ試薬が高感度かつ特異性の故に
使用される。 −Ｌ−配力法における好ましい酵素試薬はアルカリホス
ファターゼである。 使用可能な酸素基質は、酵素により作用せしめられて、
抗体及び糖タンパク質の結合体、並びに抗体−ネノｈタ
ンパク′ｔ′ｉ？ｊｔ合体及び抗免疫グロブリンー酵素
もしくは他の指示薬複合体の結合体Ｃ，″、ついての存
在を示唆ずろ測定可能な応答を発／ｌするいずれかの基
質である。応答は、一般乙こし４、酵素）−２￥を溶液
における光学密度（Δ）即ら吸光亀の変化であり、通常
＋；ｔ　４００〜８００　ｍ　ｐ　可視ｅＮｊ、、：Ｑ
−Ｑノ変色である。応答は、標準的可視又ム４１紫外分
九光度系によって分光学的に測定される。 使用可能な酵素基質としては、３−アミノ−９−エチル
カルバゾール、３．３’、５．５’　−テトラメチルベ
ンジジン（ＴＭＨ）　、ｏ　　フ、二ｌ／ンジアミン（
０１）　Ｄ）　、２．　２　’−アジノジ〔３−エチル
ヘンズチアゾリンースルホネ−１−）（ＡＩ）ＴＳｌ）
及びｐ−二１０フェニルホスフェ−１・がある。上記方
法に使用される好まし２い酵素２１（質はｐ−ニトロフ
ηニルホスフェートである。 放射線標識が用いられた場合の応答は、α、β又はγ線
用の適切な放射線カウンタ　又はシンチレータ−により
定￥することができる。 燐光又は蛍光プローブが用いられた場合は、当該技術分
野で公知の適切な分光光度計を使用することができる。 本発明の好ましい方法において、アルカリホスファター
ゼ酵素は、０−ニトロフニニルホスフエートに作用して
アルカリ溶液中４０５ｎｍの吸収があるＯ−二１〜口フ
ェノールを放出し、光学的読取りのために結合体の存在
上について間接的測定値をりえる。 Ｉ゛記方法においては、糖タンパク質−抗体複合体の完
全な洗浄が必要であり、これによって、抗免疫グロブリ
ン−指示薬もしくは他の指示薬複合体と複合化さセる前
にすべての未結合抗体を除去し、読取りミスが多くなる
ことを避けることができる。 同様に、完全な洗浄は糖タンパク質−抗体−抗乾疫グ１
１ゾリン−酵素複合体又は抛タンパク質−抗体−指示薬
に対して必要であり、これによって、酵素基質と接触さ
セる前に未結合抗免疫グロブリン−酵素複合体を除去す
ることができる。 １−記のように、ｇＡ、ｇＢ及びｇＣコントロールは、
例えばＭＲＣ−５細胞系のＶＺＶ未感染細胞熔解物から
、零唐タンパク質を用いたＲＬＩＳＡ法により得られる
。ＶＺＶ未感染細胞溶解物から糖タンパク質を得るため
の方法についてはＩ−述されている。 上記方法において、使用される糖タンパク質は、各々の
ｇＡ，ｇＢもしくはｇＣ、又はいずれか２種もしくは３
種すべての各種割合の混合物である。 好ましくは、糖タンパク質は独立して使用され、例えば
ｇＡである。 総■Ｚ■感染細胞タンパク質は、Ｌ・り千ンク１１マド
グラフィーによって精製されるが、試験において永続的
に付着した糖タンパク質としー（使用することもできる
。 精製され未変性である面端学的活性型のＶＺνｇｔｉ、
Ｉｎ及びｇＣ糖タンパク質を同様に、新規な試薬及び組
成物として開示されている。 免疫アフィニティークロマトグラフィーによりＶＺＶ感
染細胞溶解物由来ＶＺＶｇＡ，ＩｇＢ及びｇＣと一緒に
共精製される、精製され未変性である＋ｆｌｔ清学的活
ｆ１型の未感染細胞タンパク質も同様に、新規な試薬又
は１１成物として開示されている。 免疫アフィニティークｒ１７トグラフイーに、（、ろこ
れら物質の精製及び１亡舗に−）い°（は実施例中に挙
げらｔｌている。 ｌ／クチンアフィニティークロマトグうフィーに、Ｌ　
＆）精製され、かつｇＡ、ｇＲ及びｇ　Ｃ−＃）、！！
タンパクｒｔを含有する総ＶＺＶ感染細胞ＩＪ、ｌｉタ
ンパク質も開示されている。この精ＩＩＪ混合物も本発
明におい″Ｃ利利用ることができる。 し・り千ン了フィニティークロマトグラフィ＝〇二、１
１’ｌ精製された総未感染細胞糖タンパク質も開示され
ている。この精製混合物も本発明において利用すること
ができる。 Ｌ・クチンアフィニティークロマトグラフィーに、Ｌる
Ｃ　ｔ’Ｌ　ｋ）物質の精製及び単離については実施例
中に記載されている。 固体、例えば本明細書に記載されているような合成ポリ
マー、好ましくはポリスチレンの表面トに永続的に付着
せしめられた、精製され未変性でかつ血清学的に活性な
ＶＺＶｇＡ、ｇＲもしくはｇｅｔＪＰ！タンパク質又は
その混合物からなる診断装置も開示されている。 免疫アフィユヲィークロマ１−グラフィーに３１．すＶ
ＺＶ感染細胞溶解物由来ＶＺＶ）；Ａ、［＋うソ、はｇ
　Ｃと−・緒に共精製され、固体、例えば本明細書に記
載されているような合成ポリマー、好ましくはポリスチ
レンの表面−１，に永続的に付着せしめることによって
抽出された、精製され未変性でかつ血清学的に活性な未
感染細胞タンパク質からなる診断具も開示される。 レクチンアフィニティークロマトグラフィーにより精製
された１、９　Ｖ　Ｚ　Ｖ感染細胞ｔＪｈタンパク質も
有用な診断具であって、固体表面に永続的に付着せしめ
られる。 レクチンアフィニティークロマトグラフィーにより精製
された総未感染細胞糖タンパク質も使用され、固体表面
に永続的にイ・１着せしめられる。 下記実施例は本発明を説明するための４）のであるが、
しかしながら、それと同一のものに限定さ廿るためのも
のではない。 実施例に事−りて−使用さ１℃不一試薬１、−アノＫ−
カーリ？ｉマ不−フーアーター＝−ず−に−結−合一ビ
ーなりギ抗し−１−免疫り一リーグーリン ２、−アール−カーλｌ−歩入−７にＵ予ａ二−ザに膚
吉合しラヘーヌーウ各（九」千−１＝免疫グｒ１ブ−リ
ーン」−カリフォルニア州９４０１０、バーリンゲーム
、タボ社（Ｔａｇｏ　Ｉｎｃ、　）から人手できる。 ３、−ｔ７．ヂ血清ア西フλ−引ンー社正常なりギ血清
から調製され、ペンシルバニア州、ハズレトン・ラブダ
＞＋から人手できるが、“グヱブＪ−ン欠−乏で一ヤ渾
−血清と称される方が適しており、下記のようにして調
製される： ａ、正常なりギ血清を水で１：２に希釈し；ｂ、Ｉ’Ａ
！拌して滴下しながら等量の飽和（ＮＨ４）　２ＳＯ。 と混合し； ０．４℃で一夜貯蔵し； ｄ、１０°ＣＣ１１５００ｒｐで遠心分離し；ｅ、ン尤
殿物を１舎て； ｆ、上澄を濾過滅菌する。 実施例Ｉ ＩτＡ、ｇＨ及びｇ（４Ｍタンパク質に対するモノクロ
ーナル抗体を産Ｌ１；するための一１ζ記操作Ｃ３１、
かかる目的のために５本明細書に参考のためにＮ１１１
め込まれるケラ−ら、同士に基づいていイ）。 １０週齢Ｂ　Ａ　１．、　Ｂ／　Ｃマウスを、完全ソｌ
’Ｊインドアジ１ハントで乳化された精製ウィルス〔ネ
フ・ビー・ジェイ、アール・イー　・？ｌエイベル、ブ
イ・エム・ビラレジョス、イー・ビー・バイナック、ニ
ー・ニー・マクリーン、デー・エッチ・モートン、ビー
・ニス・ウォランスキー及びエム・アール・ヒルマン＜
Ｎｅｆｆ、　Ｒ，Ｊ、、　Ｒ，Ｆ、、　Ｗｅｉｈｅｌ。 Ｖ、　　Ｍ、　　Ｖｉｌｌａｒｅｊｏｓ、　　Ｅ、　　
Ｂ、　　Ｒｕｙｎａｋ、　　Ａ、　　八、　　Ｍｃｌｃ
ａｎ。 １１、１＋、　Ｍｏｒｔｏｎ＋　Ｂ、　Ｓ、　Ｗｏｌａ
ｎｓｋｉ、　ａｎｄ　Ｍ、　Ｒ。 Ｈｉｌｌｅｍａｎ）　、１９８１年、”ＫＭＣＣＭＣＣ
弱活性弱毒化水痘ウィルス０７１）の臨床的及び実験室
的研究”、プロシーデインダス・オブ・ザ・ソサエテー
・フォア・イクスビアリメンタル・バイオロジー・アン
ド・メディシン（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ　ｏｆｔｈｅ　
５ｏｃｉｅｔｙ　ｆｏｒ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　
Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄＭｅｄｉｃｉｎｅ）　、第１６
６巻、第３３９−３４７百〇こ記載されたＶＺＶ　　Ｋ
ＭｃＣ株〕２０μｇ（ｏ−リー、オー・エッチ、エヌ・
ジェイ・ローズブロー、ニー・エル・ファール、及びア
ール・ジｔイ・ラント−ル（Ｌｏｗｒｙ、　０．　Ｈ，
、Ｎ、　Ｊ、　ＲｏｓｅｂｒｏｕｇｈＡ、　Ｌ、　Ｆａ
ｒｒ、　ａｎｄ　Ｒ，Ｊ、　Ｒａｎｄａｌｌ　）　、、
　１９５１年、“フォリンフェノール試薬によるタンパ
ク質測定”、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ゲミ
ストす（Ｊｏａｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　）　、第１９３巻、第２６５−
２７５頁に記載されているようにして測定〕で多段部位
に皮Ｆ的に免疫し、２週間後精製ＶＺＶ２５μｇをアジ
Ｊ、ハンドなし７で腹腔的に追加免疫した。すべての血
清は、二次注射の２週間後に分析され、活性細胞１１タ
フルオレセイン（ＦＡＭＡ）分析によると抗ウイルス力
価〉４００及び抗細胞力価〈５０であり、感染細胞抽出
物のウェスターン法において■Ｚｖタンパクｒｒと反応
した（データ示さず）。二次免疫のｌか列後のマウスに
精製ＶＺＶ２５μｇをアジュバントなしで静脈内投与し
た。３日後、最大の抗ＶＺＶ力価をもつ２匹のマウスか
ら肺臓を摘出した。肺臓細胞をＳ　Ｐ　２１０マウス骨
髄腫細胞〔インスディテヱート・フォア・メディカル・
リサーチネ１（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｍｅｄｉ
ｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）　）と融合させ、ハイブリ
Ｉ・−マ細胞を培養基に入れ、以前に公表された操作二
オイ・ブイ・チー、及びエル・ニー・ヘンゼンヘルグ（
Ｏｉ、ν、Ｔ、、　ａｎｄ　Ｉｌ、Ａ。 １１ｅｒｚｅｎｂｅｒｇ）　、１９８０年、“免疫グロ
ブリン産生ハイブリット細胞系”、第３５１−３７２頁
、ビー・ビー・ミシェル及びニス・エム・シーギ（編集
）　　（Ｂ、　Ｂ、　Ｍｉｓｈｅｌｌ　ａｎｄ　Ｓ、　
Ｍ、　Ｓｈｉｉｇｉ（ｅｄ、）に従い培養した。サンフ
ランシスコ、ダブル・エッチ・フリーマン・アント・カ
ンパニーネｌ：　（Ｗ、　ＩＩ。 Ｆｒｅｅｍａｎ　＆　Ｃｏ、、　Ｉｎｃ、　）の細胞性
免疫学に記載された方法を選択した。２週間後、活発に
増殖し′（いる細胞のウェルから得た上澄をＦＡＭＡ法
に、■、り抗ＶＺＶ反応性について試験した。ＶＺＶ膜
抗原と反応する細胞分泌性抗体を限界希釈法により複製
し、腹水中に拡散させた。一般に、各ポリクローン中の
２種の千ツク「１−ンを用いて腹水を得た。いずれの２
つの“姉妹”クローンに関しても、特異ｆ１１に差異の
ないことが観察された。 １１に水中において、ＶＺ■膜抗原を認識する１０種の
各々のモノクローナル抗体が産生せしめられた。ＶＺＶ
感染Ｍ　ＲＣ−５細胞に対する反応性について試験した
場合に、ＦＡＭＡ力価は１：３２、（１００〜１　：２
５６，０００の範囲であり、一方いずれの抗体もＦＡＭ
Ａ法においては未感染細胞と反応しなかった（表１）。 サブクラス抗体の特性についても調べた（表１）。各腹
水中での抗体濃度は約２■７ｍＩ！であった。 モノクローナル抗体の血清学的特異性を免疫沈隨法によ
り分析した。抗体を、コントロール腹水とともに、（３
５３）メチオニン標識感染細胞抽出物、（１４０）グル
コサミン標識感染細胞抽出物及び（３５Ｓ　）メチオニ
ン標識精製ウィルス粒子と反応させた。ドデシル硫酸ナ
トリウム（Ｓ　Ｄ　Ｓ）ポリアクリルアミドゲル電気泳
動分布を示しく図ＩＡ−Ｃ）、これら分布の解析結果を
要約する（表１）、我々は、モノクローナル抗体ＣＩ−
ＣＢがＶＺ■ポリペプチドに対し実質的に同一の反応性
を示しく但し、表１の脚注ｆで示されたものを除（）；
シたがって、抗体Ｃ８で示される分布（図ＩＡ２、Ｂ２
及びＣ２）がＣ１〜０８のグループの代表例であること
を観察した。１０種のモノクローナル抗体の中で３つの
反応パターンが観察された。（ｉ）クローンＡ１抗体は
、感染細胞及びウィルス粒子の両方から単一のポリペプ
チドｇｐ１０５　（分子量１０５，０００の糖タンパク
質）を認識した。（１１）クローンＢ１抗体は、感染細
胞からｐＨｏ　　（非糖タンパク質）、ａｐＨ５、ｇｐ
６２及びｇｐ５７を認識し、ウィルス粒子からはｇｐ６
２及びｇｐ５７のみを認識した。（ｉｉｉ　）８種のＣ
抗体は、感染細胞のみからｇｐ４５を認識し、感染細胞
及びウィルス粒子の両方からはｇｐ９２、ｇｐ８３及び
ｇｐ５２を言忍識した。 モノクローナル抗体の特異性について更に特徴づけるた
めに、精製ウィルス及び感染細胞の両袖出物を変性し、
ウェスターン法で分離し、腹水の反応性について試験し
た。Ａ１及びＢ１はいずれのポリペブチｌ−とも反応せ
ず、一方８種の０抗体の・）６７種は細胞↑１抗原ｇｐ
９２、ｇｐ８３、＋＋ｐ５２及びｇｐ４５のずべてのグ
ループと反応し２だ。キｈ製ウィルス粒子からは、免疫
沈降解析（図Ｉ　Ｃ２）の場合と同様に、ｇｐ９２及び
ｇｐ８３が反応性の面で主流を占めていた。７種のＣ）
ｆ１体反）、’ｉ；性グループのうら】つに関する代表
的分布を示す（図２）。重要なことは、ウェスターン法
のデータは、非特異的共沈の可能性があるものを除夕１
することによって、各種のポリペブチＩ゛、即らＩτｐ
９２、ｇｐ８３、ｇｐ５２及びｇｐ４ｓを中−の抗原群
に分類することに役立ったということである。ウェスタ
ーン法で反応した７種すべての０抗体は免疫沈降法にお
いても陽性であったことが注目される。このことは初期
の研究と異なっ′（おり、即らウェスターン法によるス
クリーニングのみで免疫沈降法によるスクリーニング単
独よりも多い数のモノクローナル抗体を検出したのであ
ったニブラウン・デー・ゲイ（Ｂｒａｕｎ、　Ｄ、　Ｋ
、）、Ｉ　Ｊｌ／　・ペリーラ（ｌｌ、　Ｐｅｒｅｉｒ
ａ）　、ビー・ノリル１（Ｂ、　Ｎｏｒｒｉｌｄ）及び
ビー・ロイズマン（Ｂ、　Ｒｏｉｚｍａｎ）、１９８３
年、“モノクローナル抗体の検出及びウィルスタンパク
質の性質の研究のための、単純ヘルペスウィルス感染細
胞における変性され電気泳動で分離されかつ固定化され
た溶解物の応用”、ジャーナル・オブ・ハイ−コロジー
、第４６巻、第１０３−１１２頁。 免疫沈降分析によっ゛Ｃ分類されたポリペプチドのうち
いくつかは、同様の電気泳動移動性を示した。ウィルス
遺伝子産物における抗原性の差異及び可能性のある血清
学的分類について更に研究するために、交差除去（ｃｒ
ｏｓｓ−ｃｌｅａｒｉｎｇ）免疫沈降法を、モノクロー
ナル抗体及び（”　Ｓ　）メチオニン標識感染細胞抽出
物間で実施した（図３）。抽出物をＡ１で２回除去した
後、抗体Ａ１はそれ以」二のｇｐ１０５を免疫沈降さセ
なかったが（図３Ａ３）、一方抗体Ｂ１はＡ１除去抽出
物か５）効果的にｇｐ　Ｉ　１５、ｇｐＨｏ及びｇｐ６
２を免疫沈降させた（図３Ｂ３）。抗体Ｂ１次いでＡＩ
（ｃ及びＤ列群）Ｉｆｔいて抗体Ｃ６（Ｅ及びＦ列群）
６：”、　ｊ、る逆の実験でも同様の識別性を示してい
る。 したがって、我々のモノクローナル抗体は抗原性におい
て区別される３種の糖タンパク質を識別しており、我々
はそれらをｇＡＸｇＢ及びｇＣと称する。 １−記のように分類された糖タンパク質と他の文献〔グ
ロース・シー（Ｇｒｏｓｅ、　Ｃ，）　、１９８０年、
“水痘・帯状ウィルスで感染されたヒト骨髄腫細胞にお
ける糖タンパク質の合成”、ウィルス学、第１０１巻、
第１−９頁；グロース・シー、１９８３年、“担癌の子
供における帯状庖疹：発病前後における血清の放射免疫
沈降分布”、ジェイ・インフェクｌ−ディジ（Ｊ、　Ｉ
ｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　）　、第１４７巻、第４７−
５６頁；シマー・ワイ・ニス・レヘ７１−ンークリス及
びアイ・サロフ（Ｓｈｅｍｅｒ、　Ｙ、。 Ｓ、　Ｌｅｖｅｎｔｏｎ−Ｋｒｉｓｓ、　ａｎｄ　１．
５ａｒｏｖ　）　、１９８０年、“水痘・帯状ウィルス
の単離とそのポリペプチドの特徴”、ウィルス学第１０
６巻、第１３３−１４０頁；シラキ・ケイ、チー・オク
タ、ケイ・ヤマニシ及びエム・タカハシ（Ｓｈｉｒａｋ
ｉ、　Ｋ、＋Ｔ、０ｋｕｎｏ、に、Ｙａｍａｎｉｓｈｉ
、ａｎｄ　Ｍ、Ｔａｋａｈａｓｈｉ）　　、１９８２年
、“水痘・帯状ウィルス（Ｖ　Ｚ　Ｖ）のポリペプチド
と■Ｚｖ及び単純ヘルペスウィルス（Ｈ３Ｖ）の免疫学
的関係”、ジエイ・ジェネ・パイロ口（Ｊ、　Ｇｅｎ、
　Ｖｉｒｏｌ、）　、、第６１巻、第２５５−２６９頁
；ツヴイーリンク・エッチ及びビー・ジェイ・ネフ（Ｚ
ｗｅｅｒｉｎｋ、　Ｉｔ、　ａｎｄ　Ｒ，Ｊ、　Ｎｅｆ
ｆ　）、１９８１年、“水痘・帯状ウィルスに接触させ
た後の免疫応答：ウィルス特異的抗体の特徴及びそれら
の対応する抗原”、インフェクトイムノ（Ｉｎｆｅｃｔ
、　Ｉｍｍｕｎ、）第３１巻、第４３６−４４４頁〕に
報告された糖タンパク質とのおおまかなＩＬ較では、全
体としての我々のモノクローナル抗体はすべての主なＶ
ＺＶｉ唐タンパク質を検出したことを示唆した。この問
題に直接答えるために、非免疫沈降性の（＋４ｃ）グル
コザミン標識ウィルス粒子を溶解し、電気泳動に付した
（図ＩＤＩ）。 同様に、（１４ｃ）グルコサミン標識感染細胞抽出物を
高力価ヒト帯状庖疹回復期血清で免疫沈降させた（図１
Ｄ２）。これら２つの実験におりる主な検出ＩＩＩ能な
糖タンパク質は、モノクローナル抗体によって検出され
たｇＡ、ｇ　Ｂ及びｇ　Ｏハンｌの全体と−ｊ’ｉた。 他のｊニス目１ｊ７タンパク質の存在Ｃ１″、ついては
この分析から除かれている。くれにもかかわらず、千ツ
ク１１−ナル抗体による１（々の分）バーでｌ；ｌ：、
　ｇＡ　、　ｇ　Ｂ及びｇ　Ｃが３種の主なＶＺＶ１１
Ｎタンパク質遺伝了乙４二２１（づいている、−とを強
く示唆し−Ｃいる。 千ツクｌコーナル抗体を、中和試験に、ｈって、ＶＺＶ
に月する生物活性に関し、試験した。クローンＡＩ抗体
は、補体の非存在ドで強く中和された。 Ｉ；Ｃポリペプチドと反応ずろ８種のモノクＩ：ノーナ
ル抗体は、補体存在士でのｙ）中和された。我々のｇＨ
反１．ｉ、；性抗体は中和されなかった。しかしながら
、１（々Ｇ、１シー　・工トソン（ｃ，［ｊｄｓｏｎ）
　　（マ毫ナチノーーＩＫツク州、ボス１−ンのタフツ
人学）から七ツク１１−ナル抗体を人手し、免疫沈降法
によっ−（り１−１−ンＢ　１抗体と同一の１１１１清
学的反応１／１かあることをｔ１１明することができた
〔データ示さず：エトランらの命名に、［、る（シー・
工ｌ−ソンが公表）ｇｐ６３、ｇｐ１２５と反応〕。、
これトンの抗体し、１種体の非存在下が感染１ノ［を中
和した（データ示さす：工］′ソンが公表）。したがっ
て、３種ずべ−この主なＶ　Ｚ　Ｖ　ＩＪ、’！タンパ
ク質遺伝了ｉｌｌ中和エピｌ−−ブをもつポリペブチ１
−について−１−１′している。 このような結果は、ｍ純ヘルペス・”ノイルス系Ｃ３−
おいては４種の異なる糖タンパク質遺伝子が中和エピト
ープをもつ零唐タンパク質について：Ｉ　−１”　して
いることが見出されていたことと矛盾ずろものではない
〔ハラカントラン・Ｊヌ、デー・ハーニソシュ、アール
・ニー・キリングトン、ニス・ハチエソディ及びダブル
・イー・ロールズ （Ｂａｌａｃｈａｎｄｒａｎ、　Ｎ、、　Ｄ、　ｔｌａ
ｒｎｉｓｈ、　Ｒ，Ａ。 Ｋｉｌｌｉｎｇｔｏｎ、　Ｓ、　Ｂａｃｃｈｅｔｔｉ、
　ａｎｄ　ｔ＋１．　Ｆ、、　ｌｉａｗｌｓ）、１９８
１　年、“ｑ１純ヘルペスウィルス２型の２種の糖タン
パク質に対するモノクローナル抗体°ジャーナル・オシ
・ハイｌ」ロジー、第３９巻、第４３８−４４６頁；ペ
リーラ・エル、デー・ｌ−ンデＬ１．ビー・ノリル［及
びビー・口・イズマン（Ｐｅｒｅｉｒａ、　Ｌ、、　Ｄ
、　１ｌｏｎｄｅｒｏ、　Ｂ、　Ｎｏｒｒｉｌｄ、　ａ
ｎｄ０、　Ｉｌｏｉｚｍａｎ）　、１９８１年、′へ口
（Ｖｅｒｏ）及びＩＩ　Ｉｃ　ｌ）　−２細胞において
産ルされたｉ１１純ヘルペス・す、イルスｌ型及び２型
の糖タンパク質ｇ　Ａ及び１＋１３にお＋）る竹巽的な
免疫学的反応↑４及びプロセッシング”、プロシーデイ
ンダス・オシ・ヂ・ナソー！ナル・アカデミ−・オシ・
ザイエンシス・オシ・”す′・ユナイテソ）・ステーク
・オシ・アメリカ　（Ｉ’ｒｏｃｃｅ旧ｎｇｓ　ｏｆ　
ｔｂｅ　Ｎａｔｉｏｎｌ八ｃａｄｅｍへ　ｏｆＳｃ　ｌ
（＋ｎｃｅｓ　　ｏｆ　　ｔｈｅ　　Ｕｎｉｔｅｄ　　
５ｔａｔｅｓ　　ｏｆ　　Ａｍｅｒｉｃａ）　　第７）
）巻、第５２０２−５２０６頁；ベリーラ・エル、チー
・クラセン及びジェイ・アール・バリンシャー（Ｐｅｒ
ｅｉｒａ、　Ｌ、、　Ｔ、　Ｋｌａｓｓｅｎ、　ａｎｄ
　Ｊ、　Ｉｆ。 ＲａｒｉｎＩ＋ｅｒ）　、１９８０年、″嚇純ヘルペス
ウィルス１型に対する型共通性かつ型特異性のモノクロ
ーナル抗体”、インフェクト・イムノ、第２９巻、第７
２４−７３７頁；ショワルクー・：［ス・デー。 工１３・ツヴアイク及びビー・バンパー（Ｓｈｏｉｙａ
ｌ　Ｌｅｒ。 Ｓ、　Ｄ、、　Ｍ、　Ｚｗｅｉｇ、　ａｎｄ　Ｒ，Ｉｌ
ａｍｐｅｒ）　、１９８１年、“即時型籾量タンパク質
Ｉ　ＣＰ　４を含む争純ヘルペスウィルス１型タンパク
質に対する千ツク

【−Ｉ−ナル抗体゛、インフェクト・
イ１、ノ、第３４仏、第６８４−６　！１２白〕。 標識細胞抽出物とウィルス”Ｌｅｒ了とにおける名挿糖
タンパク質の差異の発現は、胃なるポリペブチ１種の関
係るこりいて一定の仮説を立てることを１に我に可能な
らしめる。（ｉ）ｇΔ逍伝了産物のｇｐ１０５は、シラ
キ（Ｓｂｉｒａｋｉ　）ら（同１−）のｇ　ｐ　］　１
５　及ヒクロースら〔グロース・シー、デー・ビー・工
ｌ゛ワース、ダブル・イー・フレンドリソチス、ゲー・
ニー・うエイグル及びダブル・エル・マクギア（Ｇｒｏ
ｓｅ、　Ｃ，、ｎ、　Ｐ、　ｌｊｄｗａｒｄｓ、　ＬＨ
，Ｆｒ１ｅｄｒｉｃｈｓ、　Ｋ、　Ａ、　Ｗｅｉｇｌｅ
、　ａｎｄ　Ｗ、　ｌ、Ｍｃｇｕｉｒｅ）、１９８３年
、“水痘・帯状カイルスの３種の主な糖タンパク質に対
するモノクローナル抗体”、インフエクト・イムノ、第
４０巻、第３８１−３８８頁〕のｇｐＨ８におそらく相
当し、グロースらはｇｐＨＢに対するモノクローナル抗
体が補体の非存在下でも中和されると報告している。（
ｉｉ）ｇＢ遺伝了産物のｇｐ６２及びｇｐ５７は、ｇｐ
１１５及びｇ　ｐ　１　］、　Ｏが感染細胞においての
め存？１（２でいろ、二とから１．）ンそらくＩす０レ
ス粒子ζ、二お（１イ）ｇ１３のノ［４柊蝮製型を表わ
し７ている。史に、Ｊｌ−１１、’！タンパク質ｐＨＯ
ｉ；ｔｇｐＨ５の前駆体を表わ１−２でいるのであるも
。同様の結輪番、ｌ、他θ）者１１’ｌソン、公表済；
オクノ・チー、ゲイ・入・マムｇノ、））−イ・シラー
１−及びエム・タカハラ、１９８３年、”’ＶＺＶ抗原
に対する千ツク１１−ナル抗体と関連り、−（研究され
た水バｉ・帯状ウィルス（Ｖ　Ｚ　Ｖ）タンパク質の合
成及びプロセッシング゛、・リイルス学、第１２９巻、
第３５７−３６８（Ｌ）Ｇこよっても達成さねだが、各
グループし４分子量６３，０００〜・ｆｉ　４．　（１
００の申　・のウィＪレス’ｔｉｔ−７！１．”、タン
パク質種のノドを検出し、１つのグループは２神のより
高い分子量の糖タンパク質を検出Ｕ７たオクタら、同１
−）。同様ｏ＞　パルスチェイス関係がｆｉｊ　純ヘル
ペス１リイルス２型においても見出された（ハラカン１
ラン・エフら、同一１；ベリーラ・エル、同上）。 （ｉｉｉ）ｇＣｉＮ伝了産物のｆ、　ｐ　９２、ｐ１？
　８３、Ｈ＜　ｐ　５２及び＋ｇ　ｐ　４５は、精製さ
れたｒｌＣ：ｌグル、：ＩＩナミン標識ウィルスわ”ｉ
了のＳＤＳポリアクリ４フ ルアミ１゛ゲル電気泳動並びに帯状ｆｆＮ疹回復朋血清
の免疫沈降法による一トｆ【ウィルス糖タンパク質種を
代表する。それらシ４Ｆ、本研究で己。１１０種中８神
のｇ　Ｃ１１１！３の？［ｊ告では５種牛４神のｉ：ｃ
（ｇｐ９８、ｇｐ６３、ｇ　ｐ　５５及びｇｐ４５（グ
Ｉ−１−スら、インフェク１−・イムノ、同上）〕、更
に他の報ゼｊでは１２種８Ｂ種のｇＣ（ｇｐ９４、Ｕｐ
８３、ｇ　ｐ　５５及びｇｐ４５　　（オクタ・チーら
、同上）〕に対する千ツクｍｌ−ナル抗体を容易に乍離
できたことから、最大の免疫片性をもつ糖タンパク質の
ようである。ｇｐ９２及びｇｐ８３は、ウィルス粒子に
おいてｇｐ５５に比例した重用１−の高率で誘導される
ことから、成熟ウィルス粒子ポリペプチドを代表するよ
うである。ｇＣに対”づるモノクローナル抗体が２１ｕ
上の糖タンパク質を検出することは注目に埴するが、こ
のような観察は他のヘルペスウィルス種、例えば、生徒
ヘルペスウィルス〔ハラカントラン・エフ、同士；工へ
一ル・アール及びアール・ジェイ・二１−Ｋ−（Ｆｂｅ
ｒｌｅ、　Ｒ，、ａｎｄ　Ｒ，Ｊ、　Ｃｏｕｒｔｎｅｙ
）　、１９８２年、°゛多重結合型の準線ヘルペスウィ
ルス２型ＩＪｈタンパク質”、ジャーナル・オブ・パイ
ロ１コシ−１第４１巻、第４３８−３５１頁；ペリーラ
・エルら、インフェクト・イムノ、同上〕、エプスタイ
ン−バール（ｌｉｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ＞ウィルス〔
エトラン・シー・エム及びデー・ニー・ドーリ−・ロー
ソン（ｔｐｌｓｏｎ、　Ｃ，Ｍ、、　ａｎｄ　Ｄ、　Ａ
、　Ｔｂｏｒｌｅｙ−Ｌａｗｓｏｎ）、１９８３年、′
エプスタインーバールウィルスの３種の主なエンベロー
プ糖タンパク質の合成及びプｌ」セソシング、ジャーナ
ル・オブ・パイロ１コシ、第４６巻、第５４’ｌ−５５
６頁；ストランド・ビー・シー、チー・シュスター、ア
ール・クライン、アール・エフ・ボプキンス■、チー・
ウィツトマー、アール・エッチ・ノイハウアー及びエッ
チ・ラビン（Ｓｔｒａｎｄ、　Ｂ、　Ｃ，、Ｔ、　５ｃ
ｈｕｓｔｅｒＲ，Ｋｌｅｉｎ、　Ｒ，Ｆ、　１ｌｏｐｋ
ｉｎｓ　ｍ、Ｔ、　Ｗｉｔｍｅｒ、　Ｒ，ｔｌ。 Ｎｅｕｂａｕｓｅｒ、　＋ｉｎｄ　Ｉｔ、　Ｒａｂｉｎ
＋　１９８２年、“エプスタイン−ハールカイルス膜抗
原に対するモノクローナル抗体の産生及び特徴”、ジャ
ーナル・オブ・パイロ１コシー、第４１巻、第２５８−
２６４頁〕及びサイトメガｒ１ウィルス（ペリーラ・エ
ル、エム・ホフマン、デー・ガロ及びエフ・フレマー（
Ｐｅｒｅｉｒａ、　Ｉ７．、　Ｍ、　Ｉｌｏｆｆｍａｎ
、　Ｉｌ、　Ｇａ１ｌｏ、　ａｎｄ　Ｎ。 Ｃｒｅｍｅｒ）　、１９８２年、“ヒ１−ザイ１−メガ
１１１”ノイルスに対するモノクローナル抗体：独特な
免疫学的及び電気泳動的特性をもつ３種の膜表面タンパ
ク質が交差反応決定基を特異化させている”、インフエ
ク１−・イムノ、第３６巻、第９２４−９３２頁〕にお
いてなされたものである。これらの交差反応は自然界で
は非特異的でないようであるため、多数の型のポリペプ
チドは、関係があるものの区別される前駆体から産生ず
ることができ、パルスチェイス関係を有することができ
、あるいし４抛タンパク質パターンの異質性を表わすこ
とができる。 ｇＡ、、ｇＢ及びｇＣに対するこれらの千ツク「Ｊ−ナ
ル抗体は、ウィルス抗体を適切な基質、例えば、ニトロ
セルロースに結合させ、結合抗原をモノクローナル抗体
と一緒にインキュへ−１・し、しかる後この複合体を抗
−抗体／酵素複合体で処理し、次いで酵素基質と接触さ
せた後、反応した酵素基質の鼠を測定することにより、
ＶＺＶ糖タンパク質の定量のために使用することもでき
る。 脚＜す ａ。ハ、イゾリ１゛−マ細胞を、９６−■”ノ１、ルブ
【・−ト中のｈ々射５襟照ＪＪ（”ｃｏ源から１０．　
ｆｌ　ＯＯうＩ）されたＭｌ）（ニー５細胞−１で限界
希釈するこ、！：ｌこより掩製さ−０た。ＩＩ！水中で
抗体を産４１さ一１！るためＣ二、ブリスタン（２，（
ｉ、　　Ｉ　（１，Ｉ　４　−テトラ、メチルペンタデ
カン）を飽食さ［！タマ・ｌスに、マウス当人工り４’
ｘ：１０６１１１日１包を？ｉ−ｇｊ　Ｌ、た。 約１０Ｌｊ後、Ｉ均水を集めた。 ｂ　、免疫グロブリンのサブクうスＣ，二つさ、マウス
免疫グロブリンＧ　１　　（Ｉ　ｇ　Ｇ　１　）　、ｌ
　ｇＧ　２　ａ　。 ｌ　ｇＧ２　ｂ及びｌ　ｇＧ３に対するヤギ」ト−・特
Ｗ竹抗１［什ンＮ　Ｃリサーチ・ブ「１ダク゛ン・イン
ターづ゛ショナル（Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｄｕｃｔ
ｓ　ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｒｐ、　）　）を
用いて免疫拡散試験法に９１、り調べ人：。 ０、腹水中の抗体は１：２５０で試験された。これらの
手間では図１及び２のデータを要イ、勺している。 ｄ、下記力性はプラーク減少試験を（１’ｌ正したもの
Ｃあった（アサノ・リイ、ビー　・了ルブＬ／ヒ１゜エ
ル・〕ｌ゛〜・ウコシＪシル、ジー・ソ゛イ・−）＝ン
′−７：、／ルびコーノ、・タソノハシ（八５ａｎｏ、
　Ｙ、＋　Ｐ。 八１ｈｒｅｃ１１ｔ、　　１．に、Ｖｕｊｃ、ｉｌ、Ｇ
、Ｖ、（ｌｕｉｎｎｄｎ、　　ｃｉｎｄＭ、　Ｔａｋａ
ｈａｓｈｉ）　、　　１９８３イ１１　′強化中和試験
及び！１．．ｌ　ＩＩ９．Ｉん原螢光体試験による水泡
・（ｉ）状・リイルスに対する体液１１［免疫の３・１
価”　、−ｒｌ−キ・ハイ口ｌ’ｌ　（Ａｒｃｔ＋、　
Ｖｉｒｏｌ、）　、第７５を、第２２５２２８〔■］。 連続希釈されたＩＩ”、ｉ水を、１０％の新鶏イ／、／
干ル干ノド袖体（ｃ′）と−緒に又しｌ・祐ではなく、
等計の無細胞Ｖ　Ｚ　Ｖ　　Ｋ　Ｍ　（：　０株と／ｆ
？、合し、室温で１時間インキュ・＼−１し、た。 試へ１」、２５〜５０ＰＦ’ｌｌ（プラーク形成ｉｉｊ
イＩ″ｌ）が１リニル当たりで加えられるよろに設定さ
れ、４個のウアールが抗体希釈物当たりで分析された。 抗体　ウィルス７Ｙ１合物（０，１ｍｊりを、２４−ノ
ニル（１６重曹）プレート中のヘロ細胞の排水表面１に
接種した。１リイルスを３（′８°（′で１時間１！１
にイｉ　サ、１、細胞を再培養（ｒｅｆｅｄ　）　Ｉ、
、７　Ｆｌ　１Ｆｊｌ・イン−１−ユヘートした。抗体
価は、プう−ク数を５０％減少きせる希釈倍数の逆数と
り、て３）算され人工。 ｅ、ＦＡＭＡ試験む」、実質的に〔ガーソ」ン・コ一−
・ニー、アール・し・−カー、ニス・ンフ、タイン・＼
ルグ、ヒ゛−・トフーオスタ・イン及びコニル・エム・
］・ルシル（Ｇｅｒｓｈｏｎ、　Ａ、Δ、、　Ｒ，Ｒａ
ｋｅｒ＋Ｓ、　Ｓｌ、ｅｉｎｂｅｒｇ＋　Ｂ、　Ｔｏｐ
ｆ−Ｏｓｔｅｉｎ、　ａｎｄ　１．、　Ｍ。 Ｄｒｕｓｉｎ）　　］　９７６年、“臨月の婦人及び彼
女らのＩｔ後１年以内の７供の水痘、帯状ウィルスに対
する抗体”、小児科学（Ｐｅｄｉ＋１ｔｒｉｃｓ）　、
第５８巻、第６９２−６９６頁；・°ノイリアムス・ブ
イ、ニー・ガーション及びピー・ニー・ブルネＪしくＷ
ｉｌｌｉａｍｓ、　Ｖ、、八、　Ｇｅｒｓｔ＋ｏｎ、　
ａｎｄ　Ｐ、　Ａ。 Ｂｒｕｎｅｌｌ、　＋　９７４年、“間接免疫螢光法に
より測定された水痘、帯状ウィルス膜抗原に対するｍ１
清学的応答゛、ジェイ・インフェクト・ディス（Ｊ、　
Ｉｎｆｅｃｔ、、　ｌ１ｉｓ、　）　、第１３０巻、第
６６９−６７２頁において〕以前に記載されたように、
指示細胞としてＶＺＶ感染もしくは未感染Ｆ”　Ｓ−４
（ヒト包皮繊維芽細胞）を用い、第二抗体としてフルオ
レセイン標識ヤギ抗マ・リス免疫りＩＩプリン（γ・Ｉ
５鎖特異ｊ’１１；タイ″４１）を用いで行なわれた。 抗体価む」−検出ｎＪ能ノ「免疫螢光を発／Ｉｇする界
釈侑数の逆数とし゛（計算さ旧た。 ｆ、これらのクローンは、ｇｐ　８３より４）　ｇ　ｐ
９２対して高い血清学的反応１４Ｆをイ１する、−とが
証明された。 １（、この抗体（，４ウェスターンプロット法では未反
応であった。 図」−の説明 図１：ＶＺＶポリペブチ１′免疫沈降物の電気泳Φ１１
分析。ヒト二倍体繊維芽細胞（ＭＲＣ−５）を、イーグ
ル塩及び１０％ウシ胎児［ｆ１１清含有イーグル基礎代
謝培地中３６°Ｃで増殖さセ、細胞結合貯蔵物として粗
化されたＶ　Ｚ　Ｖ　　Ｋ　Ｍ　ｃ：　Ｃ株（ネフ・ビ
ー・ジェイら、同一１、）川の２５代〜３０代［１の１
リイルス宿主として使用した。７５０ｃ＋＋Ｉｏ−ラー
ボ］・ル中で５０％細胞変性効果を示したＶＺＶ感染細
胞を、無メチオニンダルヘノ＝ｒ　（１と化イーグルＨ
Ｈ１１！！　＋２％透析ウシつ児血清のＩｏｎＮ及びｒ
、−（″″８］８］メナ：４ニン５０ｉ／　ｍ（！　　
ＣＩ、　４５０Ｃｉ／ｍｍｏｅ；了メル２・′ヤム社（
Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｃｏｒｐ、）　１で、あるい！；ｔ
：　Ｉ　Ｏ％グルーＩ−ス、２％透析パノニ・胎児血清
含ｆ１−グル□　ソ’、−１イ）と正イーグル’ｉ’Ｈ
１！！　Ｉ　Ｏｍｐ及び１）−Ｃ”（：’Ｊ　グルー１
リミン塩酸塩１０メ＋Ｃｉ／ｍ１（５４Ｃｉ／ｍ　ｍｏ
ｅ　；アメルシャ／、ｌ：　）　で標識化した。２４時
間後、０．０４　Ｍリン酸す１リウム０、Ｉ５ＭＪｈＡ
化すトリウＪ、（リン酸緩ｉ◆ｉ液）でｉｉｊ層細胞を
２回洗浄する、−とにより超音波処理細胞抽出物をＪ）
へ］製し、ＳＰＧ緩衝液（０，（１４Ｍリン酸すｌ−Ｉ
Ｊ　１すＪｌ、５宍６スク１１−ス、０．１％グルタミ
ン酸・〕′トすｌリノ−）　　３　ｍ（！を各ローラー
ホ１ルに力１１えた。遠心管中水で絹ＩＩＩ、；を摩擦
し７、それぞれ６０秒間で３回超音波処理し、２，０Ｏ
ＯＸ、、でｌＯ分間４°Ｃａ＝て遠心分離りまた。ウィ
ルス精製に使用（７ないならば、超音波処理ｉ、１１胞
抽出物を一７０℃で貯１代ずろが、このような場合にそ
れらは直ち４１ｍ下記の如く処理さ、ｈた。抽出物を１
０〜３５％０〜３５％スフ１−１−スＳＩＩＧ緩衝液中
）Ｆに重層し、１（１４，０００×Ｈで２５分間４°（
′（こて遠心弁あ１１ｊ７た。下層の・′ノイルス帯を
管の側面からンリンミ／で除］ｍｌ１、（３５〜５５％
５〜５５％スフ１−１−ス（３１１ｆ；桜山？Ｉし中）
　　ｌ：？：１車層ｆ７．１３＋、００（ｌｘｇで８ｈ
１’ｉｉｌ　４　Ｃ（、二で遠心弁１ンｉｌｌ　Ｉ−、
た。ｌ−’層帯を集め、Ｓ　ｌ）　に緩衝？ｆ（で希釈
１−７、（（５〜５５％スク１１−ス密ＪＤｌ勾配ＩＣ
：′−１ｌｌ　Ｉ’３申層した。Ｉリイルス帯を次いで
集め、Ｓ　ｌ）　に緩衝液で希釈し、１３１．．０００
ｘｇで２時１ｉｉ１　、Ｉｏ（：　ｃ、：　−（ヘｌ／
　〕ｌ−化Ｌ、Ｓ　ｌ）　ｃ　ｌ′ｌ　ｆｆｉ　液−（
：　ｌｊ　：’！　濁し、必要■、鴇Ｆで一７０°（：
で貯蔵Ｕ７た。＋ｒｌｆ製１ｌｌｑ質のｅ’ｊ）　ｆ１
１自ＩＡ＆　ｌｉ：ｔｌ　ｊｕ察では、コーンへロープ
化した１リイルス＄１“１ｒｉ１８０％であった。別個
に標識化さ才また感染（・＋１１−標識）及び未感染（
１４Ｃ−標識）細胞溶解物の精製後、３５倍精製ウィル
ス調製物を評価１．た。免疫沈降分析、試料；！Ｉｉ、
Ｉ製及びＳ　Ｉ）Ｓポリ−、）クリルアミ［ゲル電気性
φ１１を図３の説明で記４・Ｍされている。１゛、うに
し”（実施した。これらの分析で使用された抗原は、（
Δ）（”Ｓ）メチメニン（・７識超イ゛１波処ｆ１１！
感染細胞抽出物、（＋（）　　Ｃ”　０）グルｍｌ　４
Ｊミン標識超畠波処理感染細胞抽出物、ヌば（ｃ，＝　
）　　Ｃ３５Ｓ〕メ’、ｆ−ｔ　ニー　、／　４１　ｉ
＆　ｂ＋　！！’すｌ”、７　イＪｌ／　スｌ’！−（
であった。こ＊１らの試料を次のモノクローナル抗体（
列）：即ら、１列、′：ＩントロールＩＩＭ水、２列、
Ｃ８；３列、Ｆ４１　；　４列、Δ１を用いて免疫沈降
させた。（１１）ＶＺＶの主な糖タンパク質４１１１の
電気泳動分ｔＪｉ′ｉ　１列、精製Ｃｌ４Ｃ）グル′：
１サミン標識・シイルス粒子；２及び３列、　　（１４
Ｃ）グルコ・す′ミン標識超音波処理細胞は、（２列）
帯状庖疹凹復朋抗血清（ＶＺＶ　　ＦＡＭＡ力価、１：
８００）又は（３列）正常ヒ］・血清（ＶＺＶ　　ＦＡ
ＭＡ力価、１：１０）で免疫沈降せしめられた。分子量
マーカーは、ミオシン（２００，０００（２００Ｋ）　
）　。 ホスホリラーゼｂ（９２Ｋ）、ウシ血清アルブミン（６
８Ｋ）及びオボアルブミン（４３Ｋ）である。 図−？−Ｑ説明 図２：ＶＺ■ポリペプチドに対するモノクロ−ナル抗体
の反応１１に関するウェスターン法分析。 試１羽製後、図３の説明で記載されているようにし７て
、ポリペプチドを還元条件下７．５％不連続Ｓ　Ｉ）Ｓ
ポリアクリルアミドゲルＱこよる電気泳動Ｇこ（＝ｌｔ
、、　（ラエＪ、す・ニー・ケー　（ｌａｅｍｍｌｉ、
　Ｕ、　Ｋ　）、１　！１７０年、“ハクテリオファー
ジゴ４の頭部の集ｉ’ｉ’ｌ喝３７おける構造タンパク
質の切断°゛、不一チ＋　−（Ｎａｔｕｒｅ）　　（ロ
ンドン）、第２２７巻、第６１１０−６８５頁〕、バー
ネットの方法により二ｌ〜１コセルロースに移動さ＝１
！た〔バーネット・ダブＪし　・コ一　ヌ　　（Ｉ（ｕ
ｒｎｅｔｔｅ、　　　Ｗ、　　　Ｎ、　　　）　　　、
　　Ｉ　　９　８　１　　’（”−“１”ノエスターン
法：ドデンル硫酸ナトリ１すＪ、　ポリアクリルアミ１
−ゲルから末変１）に１・１１セ月４−ドース・＼のタ
ンパク質の電気泳動移動と抗体及び放射性ヨウ素化タン
パク質入によるＸ線撮影検１１ビ、アナライティカル・
バイオ／、′ミストり一（Δｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　＞　、第１１２巻、第１９５−
２０３貞〕。しかる後のすべてのイン−１−ユヘ−１・
目室温で行なわれた。移動後、二１「Ｊセルｌ’ｌ−ス
を１妥衝ン夜Ａ（０，１５Ｍ　　Ｎａ（：ｅ、５０ｍＭ
）リス（ｐＨ７、６）　、Ｏ暑％ＮａＮ３］　１２０％
無γ−グｌ’ｌプリンウシ胎児血清ａ、Ｚ−夜浸漬し、
インキ７、へ−　１用緩衝液（１′に衝′／＆Ａ中θ）
５％無γ−グ１１ゾリンＩリシ胎児面清）で洗浄１−７
、インキツー・−ト用緩衝液で所望倍率に希釈された抗
血清中に２時間振盪しながら載置した。ニトロセルロー
スを次いで、１０分間緩衝ｉＡで１回、１０分間緩衝液
Ａ　＋０．０５％トリトンＸ−１００で２回、及び再び
緩衝液Ａで１回洗浄した。マウス抗体が使用された場合
は、この工程の後に、インキュヘート用緩衝液中ウサギ
抗マウス免疫グロブリンに・Ｔ（及びＩ、鎖の１：１０
００希釈物と一緒に１時間インキュベートシ、次いで上
記の洗浄処理を行なった。プロット（ｂｌｏｔ）をしか
る後インキュヘート用緩衝液中１２Ｊ−タンパク質Ａ〔
ニュー・イングランド・ヌクレアー社（Ｎｅｗ　Ｅｎｇ
ｔａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒｃｏｒｐ、　）　）　０．２
５　μｃｉ／　ｍｌ！と一緒に１時間インキユヘートし
、上記のように洗浄し、乾燥し、自動Ｘ線撮影を行なっ
た。精製ウィルス粒子（１列）又は超音波処理細胞溶解
物（２列）を電気泳動に付し、プロットし、モノクロー
ナル抗体Ｃ５と反応させた。 Ｖ　Ｚ　Ｖ　糖タンパク質間の抗原性識別。ホルマリン
固定スタフ（ｓｔ、ａｐｈ　）　Ａ細胞〔ヘセスダ・リ
ザーチ・ラボラトリーズ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ　Ｒｅ５ｅ
ａｒｃｈｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）　）をリチ＋−１
・ら〔リチャート・コース・デー、ピー・ジェイ・ニー
・デーヒ゛ス、ジー・ジエイ及びアイ・エッチ・パスタ
ン（Ｒｉｃｈｅｒｔ。 Ｎ、　ｎ、、　Ｐ、　Ｊ、　Ａ、　Ｄａｖｉｅｓ、　Ｇ
、　、Ｉａｙ　ａｎｄ　１．　ｔｌ。 Ｐａ５ｔａｎ）　、１９７９年、′トリ肉肺ウィルス形
質転換繊維芽細胞の免疫沈降における免疫複合体キナー
ゼに関する特徴”、ジャーナル・オブ・ハイ「目Ｉジー
、第３１巻、第６９５−７０６頁〕に記載されているよ
うにして洗浄し、６％（シ０１／シ０１）に１３Ｗ緩衝
液〔０，１％ＳＤＳ、０．５％デオキソコール酸、１％
トすｌ−ンＸ−１００，０，０１Ｍトリス　（ｐＨ８，
０＞　　、　０．１　　Ｍ　　　ＮａＣ１！、　　０．
０　０　２Ｍ　　ＢＤＴＡ　　）で懸濁し、ヒト抗体の
免疫沈降用Ｋ−７０℃で貯蔵した。マウス抗体による免
疫沈降の場合には、スタフＡ　８１ｊｌ製物をペレット
化し、ウサギ抗マウス免疫グロブリンＧ　−Ｈ及びＬｔ
）Ｗ〔キャベル・ラボラトリーズ（ｃａｐｐｅｌ　Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　）　）を加え、懸濁液をリン酸
緩衝液で元の容積に戻した。懸濁液を室温で２時間群合
した後、リン酸緩衝液で２回洗浄し、０．０４　Ｍ　ト
リス（ｐＨ８，Ｏ）　−０，０２％ＮａＮ３で６％（ｖ
ｏｌ／ｖｏｌ　）に戻し、使用前１か列以内４°Ｃで貯
蔵した。放射線標識超音波処理細胞抽出物又は精製ウィ
ルス粒子を１％トリトンＸ−１００及び０．５％デオキ
シコール酸に加え、１２．０００Ｘｇで２０分間４　’
ｃにて遠心分離することにより再清澄化した。約１０６
ｃｐｍ含有抗原画分を０．０２Ｍトリス塩酸（ｐＨ７，
４）　−０，１ＭＮａＣｌ−１％トリトン−Ｘ１００−
０．５％デオキシコール酸−０，００５Ｍ　　ＭｇＣβ
２３００μｌ及び様々な量の腹水（１〜１０μりに加え
た。混合物を４℃で２時間インキユヘートし、スタフＡ
調製物５０μｌを混合しなから４°Ｃで１時間インキュ
ベート中に加えた。混合物を次いで１８．０００Ｘｇで
３分間４℃にて遠心分離にすることによりペレット化し
、ベレットをＢＷ緩衝液１１１１７！で４回洗浄した。 最後の洗浄後、２％５Ｏ５−４％メルカプトエタノール
−１０％グリセロ−ルー０．０６３Ｍトリスリン酸（ｐ
Ｈ７，５）４０μｐを加え、３分間沸騰することにより
、抗原を溶出させた。除去免疫沈降を」１記のようにし
て行なったが、但し、最初の抗原−抗体−スタフＡ反応
による抗体処理上澄を保存し、第２及び第３回目の免疫
沈降のために二次抗体と混合した。沈降タンパク質を上
記のようにスタフ八から各サイクル毎に溶出さ−［！た
。試料を還元条件下７．５％不連続Ｓ　Ｉ’）　Ｓポリ
アクリルアミドゲルの電気泳動にイ（］シた（ラエムリ
・ニー・ケイ、同上）。免疫沈降を行なう際に、ゲルを
７％酢酸−２５％メタノールで一夜固定し、１５分間ジ
メチルスルホキシド１００ｍ１１！で３回洗浄し、ジメ
チルスルホキシド中で２’、５’−ジフェニルオキサゾ
ール（２１ｇ／１００ｍｊりに１時間浸漬した。ゲルを
冷流水で洗浄した後、それらを減圧乾燥し、フルオログ
ラフィー用（３５３）メチオニン標識感染細菌抽出物を
３回までモノクローナル抗体で連続的に免疫沈降させた
。各３組の列（Ａ−Ｆ）は、それぞれ第二ｆｌｌ、第二
（２）及び第三（３）モノクローナル抗体による単一の
連続的実験を表わしている。各列で使用された千ツクＩ
７−ナル抗体は（Ａ）１、Ａｌ：２、Ａ１及びＡ１；３
、Ａ１．、ＡＩ及びＡｌ量（Ｂ）ｌ、Ａｌ；２、ＡＩ及
びＡ１；３、Ａ１、Ａ１及びＢｌ；（ｃ）］、Ｂ１；２
、Ｂ１及びＢ１；３、Ｂ１、Ｂ１及びΔ］　；　　（Ｄ
）ｉ　Ｂｌ　＋２、Ｂ１及びＢ１；３．１３１、Ｂｌ及
び＋３】；（Ｅ）］、Ｂｌ；２、＋３１及びＢ１；３、
［３１、Ｂ１及びＣ５；　　（Ｆ）］、Ａｌ　；２、Ａ
Ｉ及びＡ１；３、ＡＩ、ＡＩ及びＣ５であった。 実施例２ モノクロー−ノ゛ル抗体（Ｂ１）免疫アフィニティクロ
マトグラフィーによるＶ　Ｚ　Ｖ　ｇ　Ｂ　糖タンパク
質久詩製−−−−−−−−−−−−−−−−−−一実施
例１に記載されたモノクローナル抗体Ｂ　１を担持した
腹水をマウスから採取した。等量の０、　ｌ　５　Ｍ　
ＮａＣｅを加えた。次いで、飽和（ＮＩＩ４）２ＳＯ４
溶液を等量加え、４℃で一夜保持した。この混合物を２
００Ｏｒｐｍで１０分間４　’ｃにて遠心分離した。 ベレットを蒸留水（２ｍｇ／ｍβ）に再懸濁し、カップ
リング用緩衝液（０，１Ｍ　　Ｎ　ａ　ＨＣＯ３，０゜
５ＭＮａＣ１＋、ｐｌ＋８．４）に対して一段透析した
。臭化シアン活性化セファロース４Ｂにュージャージー
州、ビスキャットウェイ、ファルマシアネｌ：　（Ｉ’
ｈａｒｍａｃｉａ　）　）　　１　ｇを０．００１Ｎ　
　１（ｃｆｆで膨潤さ・ｌ、次いで６０ｍ６鉗焼結ガラ
ス漏斗に注いだ。ごれをＯ，０ＯＩＮ　　ＨＯ＃！２０
０　ｍｌ続いてカップリング用緩衝液５０ＩＩＩｅで洗
浄した。 セファ１１−スを次いでモノクローナル抗体溶液１０…
ｅと混合し、２３℃で２時間回転さセた。 次いで、エタノールアミン８０μｌを加え、溶液を２３
℃で１時間回転させた。樹脂をディスポーザシルクしＪ
マドグラフィーカラム〔ハイ４９２１社（ＢｉｏＲａｄ
）　）に注ぎ、次の溶液１０ｍ１！；１）カップリング
用緩衝液；　２　）　０．１　Ｍ　Ｎａ２Ｈｌ’０４．
０．５Ｍ　　ＮａＣ１’、　ｐＨ８，２；　３）　０．
１　Ｍ　Ｎａ０Ａｃ。 ０．５Ｍ　　Ｎａ（１、ｐＨ４，Ｏ；　４　）　０．　
Ｉ　Ｍ　Ｎａ１ＢＯ４、ｐＨ８，２；　５）　３Ｍ　　
ＫＳＣＮ；　６）　０．１Ｍ　Ｎａ）ｌＢｆ）、、ｐｌ
＋８．２で連続的に溶出・洗浄し、次いで使用するまで
は０．１　Ｍ　Ｎａ１ｌＢＯ４、ｐＨ８，２中４°Ｃで
貯蔵した。 ＶＺＶ糖タンパク質を、細胞変性効果８０％までＶＺＶ
で感染させたＭＲＣ−５ヒト二倍体繊維芽細胞から精製
した。７５０ｃ己ローラーボトル中の細胞をＯ，Ｉ　５
　Ｍ　ＮａＣｌ！、０．０１　Ｍ　　ＮａｚｌｌＰ（＋
４、ｐＨ１，２で１回洗浄し、十分に排水させた。５０
ｍＭトリス、ｐＨ７，５，２％トリトンＸ−１００，４
ｍＭフェニルメチルスルボニルフルオリＩ’（ＰＭＳＦ
）１０ｍｌをボトルに加え、回転しながら１５℃でイン
キュベートした。同様の１０ｍ１を次いで用い、更に９
個のローラーボトルに連続的に移した。 抽出物２０ｍ１が１０個のローラーボトル中の物質を含
有するように、調製したばかりの緩衝液１０ｍ１ずつを
用いて１０個のローラーボトルを連続的に洗浄し、最初
の緩衝液と一緒にプールした。抽出物を使用時まで一７
０℃で貯蔵した。 抽出物を解凍し、０．１５　Ｍ　　Ｎａ（Ｊ！、０．０
１ＭＮａｚＨＰＯ４，０，０５％トリトンＸ−１００，
ｐｌ＋７．２に対し４℃で一夜透析し、次いで１５００
ｒｐｍで１５分間４℃にて遠心分離することにより清澄
化した。抽出物２０ｍ１をモノクローナル抗体結合１１
脂１ｇに加え、４℃で振盪しながら−・夜インキプ、へ
−トシた。スラリーを１５００ｒｐ川で１５分間４℃に
て遠心分離し、Ｏ，］　Ｍ　　Ｎａ１ｌＢＯ，、ｐＨ８
，２で３回洗浄した。糖タンパク質を３Ｍ　　ＫＳＣＮ
ｌｏｍｌと一緒に２３℃でインキュへ−１・することに
より溶出させた。溶出物を４℃で一夜０．１５ＭＮａＣ
７＋、０．０１　Ｍ　　ＮａＪＰＯ４，０，０５％トす
］−ンＸ−１００、ｐＨ７，２に対して直ちに透析さセ
た。 精製ｇ　Ｉ−３糖タンパク質のおおよその収量はし１−
ラーボ１−ル１０個につき１■であった。純度は実施例
１０に記載されているとおりである。 実施例３ 実施例２に記載されているのと実質的に同一の方法に従
ったが、但し、実施例１に記載されているようにして産
生されたモノクローナル抗体Ａ１を使用してお幻、クロ
マトグラフィー的に純粋なｔｒ　Ａ　Ｖ　Ｚ　Ｖ糖タン
パク質を実施例ＩＯに記載されたようにして得た。 実施例４ 実施例２に記載されているのと実質的に同一のｈ゛法Ｃ
二従ったが、ｌ！１．、、実施例１に記載さＡ９人二本
う（にＵ７で産）Ｉされた干ツク１１−−ノ”ルｔｉｃ
体０１を使用１−７てお幻、り１１７１グうフィー的に
純粋なｇＣＶ　Ｚ　Ｖ糖タンパク質を実施例＋０４こ記
載さ、ｉ′また３（うにして（ｊｆだ。 実施例５〜７ （そｔｌぞれ＋ツクＩＩ−ナル抗体ＡＩ、［３１ソ（１
（ｃｌ　（，１よＩ’））Ｖ：／Ｖ感染絹胞溶解物由東
ＶＺＶｇＡ、バ［３土たｉｆ　ｇ　ｃと一祐にそれぞれ
独立（、て共精製されろ、未感染れｔｌ　Ｉ］ｊ９タン
パク質の精！！！操竹は、抗体を変更しかつ未感染Ｍ　
ＲＣ−５細■；・１を使用し７たことＩツタ（は、実施
例２と実質的に同一・に５行なわれた。対１．？、ｉす
る感染細１抱＜）Ｈタンパク質ηｆｉ分中６５１−；け
るこれら物質の存在についでは、実Ｊ＋ｆｉｉ例１０に
記載されている。 実施例８ Ｌ・クチンアフィニティークｌ’＋７１・々゛ラフイー
、ＬろＶ−Ｚ、、Ｖ感染細胞１ノｈタンパクＴ１の精製
−−−−−−−−−−−ｌツクチン結合マｌ−’Ｊ　ソ
クス〔−ノルトラケル・リアクティフス（Ｉｌｌｔｒａ
ｇｅｌ　１ｌｅａｃｔｉｆｓ　１１　１　ＢＦＬ・ン°
ス＼！【・り千ン、ｌ　Ｋ　Ｉ（）を充填用緩行ｉ夜〔
１〜１ト１ａ（：／！、０．１％１リドンＸ１００．５
０ｍＭ１！１ス、Ｔｉｌ＋　７．５　）でＹ・め平衡化
させた。実施例２Ｇ、二、ｉ１’、：小！され人：よ・
）にして９円製さね１人工感督！壮目貞）山出物を２（
１０ｎｌ容￥のカラ１．１こ充填した（　１０　（１個
のｌ’ｌ−ラーホ１ル）。カラＪ、をに、￥の充填用緩
衝液で）先浄し、曹タンパク質を０．２Ｍα−メチルマ
ンノシ１−含有充填用緩衝液で溶出さ一１！た。抽出物
を次いで０．１５　Ｍ　　ＮａＣｆｆ　、　０．０１　
Ｍ　　Ｎａ２ＩＩＰＯ４，０、０５％　　ｌ　　リ　Ｉ
　ンＸ　−１００、ｐＨ７，２（、：：　対し、　　４
　　”（’で一イシ透析り、た。精１．′月（、Ｉ！タ
ンパク質のおおよその収）ｄしよｌ　ｆｌ　（１（因の
ローラーホ１−ルＣ５二つき５０■であった。〕１成物
の特徴及び同定ｉＪ実施例］　０　？、二示されていイ
）。 実ｈｌ！ｉ例９ （ｉツクチン了フィニティークロマトグラフィー乙こ、
■、ろ）未（み染に、ｌｌＩ胞１ｉタンパク質の積り例
は、未感染細胞を使用したこと以り（、（Ｊ実施例８吉
完全６４同一である。 実施例１０ 積シフｖ２ｖ糖ターンペク質θ］免疫学的活性ｈ々のＶ
　Ｚ　Ｖ　ｉｔ、ｑタンパク質及び感染細胞ＧＩＮタン
パク質（“し））ナン“）を実施例２．３．４及び８に
記載したよ’ｌ　ｔ、二して精製した。各々の糖タンパ
ク質両分４１デシル硫酸−ノ・１−リウムーボリ〜メク
リルアミｔケル電気泳動（ＳＤＳ−Ｐ八〔）［・〕）に
３トリ分離（−２、銀染色した。こわらの分析でば、名
画分（，１純Ｉ店７５％である、−とを証明し７た。い
くつかの小ハン１が−メフィニティー精製未感染糖タン
パク質両分Ｃ＝おいて観察された。これらと同様の小ハ
ン１が相当するアソイニケイー精製感染糖タンパク質画
分乙こおいて観察さねたが、このこと（３１換７；ずれ
ば、１７　Ａアソイユティークｌ−１゛ントグラフィー
に付された未感染細胞溶解物ハン１が、精製さ相た感染
ｇＡｔ１．！ｉタンパク質画分中にも存在していること
を壕−味する。史に、精製琴唐タンパク質の分子り口公
表データと完全に−ｉ＆した（ツノ゛ラーら、同ｌ、実
施例１参照；グＩ′１−スら、同寸、；シラキら、同ｌ
；ヘイルガニら、同上；オクノら、同１）。 もう１つの実験では、（３５Ｓ）メチオニン標識ＶＺＶ
感染細胞の熔解物が、３種の各１１．１！タンパク質及
び【／クチン溶出物精製用の出発源とし２て使用された
。精製李ノ３タンパク質を、　（ゲラ〜ら、同士、実施
例Ｉ参照に）記載さ才９た。Ｌうにｊ〜て、３種の各々
の＊唐タンパク質ｇＡ、４ｒ（ルびｇ　Ｃに対する３■
４１の各モノクし１−ナル抗体（ＡＩ、Ｂ１、Ｃ１）と
それぞれ沈降さセた。免疫沈降物を８１）Ｓ　−１−）
　Ａ　Ｇ　Ｅにより分離し、自動Ｘ線撮影を打入′っだ
。 これらの分析では、各精製糖タンパク質訓製物はその均
一・モノクロー−ノール抗体に、１、一つでのｙノ免疫
沈鋒するこさができ、レクチン溶出物Ｉｔ免疫学的ｔ、
二活１１１型の３種すべての抛タンパク質を含有してい
た、−とを証明した。更に、免疫沈降したタンパク質の
分子−は−ｌ−記公表データ及び実施例１のデータと完
全Ｋ−致した。 ３種の各精製糖タンパク質及びし・クチン溶出物をアル
ミナに吸着させ、モル干ノドを免疫ずろために１０１ｎ
ｉｒ川にで使用した。免疫動物の血清を用い、（ゲラ−
ら、同）二、実施例１参照に）記載されたようにして、
（”　Ｓ　）メチオニン欅識ＶＺＶ感染１１１１胞の溶
解物からタンパク質を免疫沈降さ（４だ。史に、（／、
−ラーら、実施例１参照に）記Ｍさ４１だようにして、
血清をつΣスターン法に３１、すＳ　Ｉ）　Ｓ−Ｐ　Ａ
　Ｇ　Ｅ分離Ｖ　Ｚ　Ｖ感染細胞タンハク質と反１．１
・１、させた。、これらの試験ａ、１　、Ｌシ）、３種
の各精製糖タンパク質抗原はウェスターン法及び免疫性
Ｂ法のいずれによっても均一・糖タンパク質と反応する
１４体を抽出することができる、二とが見出された。更
に、均・のｉ！タンパクηに対する（４体のｊ！応性ｉ
Ｊ、実施例５及び６に記、４１されたＥｌ、ＩＳＡ法に
よって８＋ト明された。［／り千ン）容出液Ｇ［、免疫
沈降法、つｌスターン法及びＩ！、１．１５９Ａ法Ｇ、
−より３種の各糖タンパク質と反応する抗体を抽出−４
ろことができた。史乙二、各モルモソ］・面゛清を（ケ
ラ−ら、同りに）記載されたようにしてイン・ヒドロ中
和試験に使用した。、−の試験に３Ｌ、す、各精製ｇＡ
、ｇＢ及びｇ　Ｃは中和抗体を抽出した。したがって、
；３種の各精製糖タンパク質調製物及びＬ・クチン溶出
物は、■）千ツク１１−ナル抗体による免疫沈降性、２
）イン・ヒドロでのウィルス中和抗体の抽出能力、及び
３）つｌスターン法及び免疫沈降法におい＝４血清学的
反応ｎが明らかζになったＩＡ体の抽出能力、といっｌ
−基準ｌこよると、免疫学的に活＋／ｌであることが示
された。 実施例１１ １’：　１．　Ｉ　Ｓへ法にζ、二お番ＪるＶＺＶ糖タ
ンパク質乙５二対するしｉ血？、〜゛リリ体の試験−−
−−−−−−−−−−−−−−−−各’ｉ　、ｘルノＷ
　ｈｔ　カ約ｏ、　３　ｍ　ｐのポリスチレンマルチウ
ェル試験プレー１からなる４個のつＬル各８紹ζに、０
．５４％　Ｎａ２ＣＯ３，１＋ｌｌ　９．８．０．１５
ｍρ、及び４￥１’シ的［Ａ、ｇＢもしく　ｌ、ｉ　ｉ
ｃ　ＣＶ　Ｚ　Ｖ　ｌ、ｉｊタンパ々ｔｒｙ、、は未感
染細胞タンパク質０．　］　ｐ　ｇを加えた。、これら
のタンパク￥ｒ調製物１１、−１記の力賞ｊ、により、
即ら、各ｇＡ、（＜ｒ３もしく　ｔｉｔ：　ｇ　ＣＶ　
Ｚ　Ｖ　ｌ）！タンパク質と特異的に反応するＹシなろ
モノク１−１−ナル１に体を用いたＶＺＶ感染もし７く
ば未感染り肛−５ピ］・二侑体繊紐芽細胞溶解物（各々
３種の調製物）の免疫アフィニティークｌ−１７トグラ
フイー（実施例２〜７）により、あるいは、すべてのＶ
　Ｚ　Ｖ　１．＋！タンパク質と法用に交差反１．ｔｌ
、ずろ固定化レクチンを用いたＶＺＶ感染もしくは未感
染細胞７容解物（各々１種の３）＞（製物）のレクチン
アフィニティークロマトグラフィー（実施例８．９）に
より得られたものである。ウェルを密封し、４℃で１８
時間インキュへ−１・Ｕ７な。抗原溶液を拮“（、永続
的に零）とタンパク質が付着したウェルを０．０５％ツ
イーン２０Ｒ含イ１ＰＩ３Ｓ？容ン夜０．２５ｍ１！で
３回洗浄した。試験すべき生物学的液体の血清を１０％
“グロブリン欠乏”ヤギ血清＆ｆｒ　ｐ　１３　Ｓで１
　：　１０　（＋及び１：１０００に希釈した。各希釈
血清０．１ｍｆｆを密封されたプレート中の各（＝Ｊ着
ウェルと一緒ムこ３７°Ｃで１時間インキュへ−１−し
た。 陰性のコントロールは、第三の付着ウェルに上記のＰ　
Ｂ　Ｓ緩衝液０．１ｍｉ！を加え上記のようにして洗浄
することにより得られた。陽性のコントロールは、第四
のヤギ血清付着ウェルに公知の力価のＶＺＶ抗体含有血
清１：１０，０００希釈物０．１ｍｌを加えることによ
り得られた。１［１１清溶液を捨て、空のウェルを０．
０５％ツイーン２０Ｒ含有ＰＢＳ溶液０．２５ｍ７！で
３回洗浄した。アルカリポスファターセに結召したヤギ
抗ヒｌ−１ｇに（カリフォルニア州、バーリンガム、タ
ゴネＩ：）０．１ｍｌを密↑、１されたプレート中の各
イ・１着ウェルと一緒に３７℃で１８、胃７１インキュ
へ−１−シた。？（合体？容ン夜を捨て、空のウェルを
０．０５％ツイーン２０１′含有Ｐ　Ｉ　Ｓ溶液０．２
５ｍｊ？で３回浪、浄し、緩衝液を除去した。４個すべ
てのウェルに、０．０２％（訂／ｖｏｌ　）　　ＭｇＣ
ｆｆ２・６１１２０含有０．５４％（呵／ｖｏｌ　）　
　ＮａｚＣＯ３緩衝液、ｐＨ９，８に溶解されたｐ−ニ
トロソｌニルホスフェ−１・１■／ｍ６からなる基質溶
液０．１ｍｌを加えた。この混合物を２２°Ｃで４５分
間インキ上べ−１−Ｌ、た。この酵素−７，％質反１．
１・７・をＩＮ水酸化すＩ・リウＪ、０．０５ｍ７！の
添加により停止さ…、光学密度（Ａ）を４０５ｎｍで測
定した。下記の結果が得られた： Ｇ “レクチン”調製物はほぼ等モル量のｇＡ、ｇＢ及びｇ
Ｃを含有しているため、Ａ（＋／クチン）値はある程度
Ａ　（ｇＡ）　、Ａ　（ｇＢ）及びＡ　（ｇＣ）値のお
およその鼠的平均値を表わしている。 実施例１２ Ｅ　Ｌ、　Ｉ　Ｓ　Ａ法におけるＶＺＶ糖タンパク質に
対すｉｉミグ−」Ｌんり一ロー＝−ナノＫ−抗体の１位
験−−−−−−−−−−−−実施例１１の操作を、２つ
の変更を加えて繰返した。最初に、実施例Ｉで産生され
たｇＡ、ｇＢ及びｇＣＶＺＶ［タンパク質に対してそれ
ぞれ特異的なネズミモノクローナル抗体Ａ１、Ｂ１及び
ＣＩを、“グロブリン欠乏”ヤギ血清で１：１０．００
０に希釈された抗体源として使用した。 第二に、酵素複合体はアルカリホスファターゼに結合し
たヤギ抗マウス免疫グロブリンＩ　ｇ　Ｇ　（カリフォ
ルニア州、バーリンガム、タボ社）からなっていること
である。ネズミモノクローナル抗体ＡＩ　　（ＶＺＶｇ
Ａに対し特異的）に関し、下記結果が得られたニ ア日 峰１鼾−腹水希釈倍率　Ａ（ｆ、、Ａ）　　１１−（硅
）Ｌ（ｇΩ）Ａ長り月）−１１：１０，０００　　０．
８４　　０．０　　　０．０　　０．０３２　（陰性コ
ント　　ｏ、ｏ　　　ｏ、ｏ　　　ｏ、ｏ　　　ｏ、。 ロール） ３　（陽性コント　　１．５０　　０．６０　　２．５
０　２．６０ロール） ネズミモノクローナル抗体Ｂｌ　　（ＶＺＶｇＢに対し
特異的）に関し、下記結果が得られた：つμ　　腹水希
釈−倍率Ａ　（ｆｌＡ）Ａ　（Ｍｕ）　　　へ軸Ω）」
身対才Ｙ１　　　１：１０，０００　　　ｏ、ｏ　　　
Ｏ，７Ｂ　　　０．０　　０．２４２　（陰性コント　
　０．０　　０．０　　０．０　　０．０ロール） ３　（陽性コント　　１．５０　　０．６０　　２．５
０　２．６０ロール） ネズミモノクローナル抗体ＣＩ　　（ＶＺＶｇＣに対し
特異的）に関し、下記結果が得られた：りＩ−腹−水５
希釈倍率　Ａ、（［＾）　　Ａ−軸棒）　　　、Ａ、（
ｇＣ）−＾（レクｔ−ン９１　　　　１：１０．ＯＯＯ
Ｏ，００，００，８４０，０８２（陰性コント　　ｏ、
ｏ　　　　ｏ、ｏ　　　　ｏ、ｏ　　　ｏ、。 ロール） ３　　（陽性コント　　１．５０　　０．６０　　２．
５０　２．６０ロール） これらの結果は、試験法が各々のｇＡ、ｇＢ又はｇＣ糖
タンパク質と反応する抗体に対し特異的であることを示
している。

【図面の簡単な説明】

図１は、ｇＡ、ｇＢ及びｇＣＶＺＶポリペプチドとＡＩ
、Ｂｌ及びＣＩモノクローナル抗体との免疫沈降物の電
気泳動分析について示す写真である。 図２は、Ｃ５モノクローナル抗体とＶＺ■ポリペプチド
との反応性に関するウェスターン法分析について示す写
真である。 図３は、交差除去免疫沈降法で証明された場合は同様の
ｇＡ、ｇＢ及びｇＣＶＺＶｌｉタンパク質間の抗原性の
差異を示すＳＤＳボリアクリルアミ１リノ１バノル第１
−１グラフを表わ１写！′（である。、ｔｌｆｌ！Ｑ人
、　　　メルク　エンド　カムバニーインτ１−ボレー
テッド 図面の浄書（内容に変更なし） ＦＩＧ、１ ｒ糸−：？　＊小組「−Ｈ（）１式） １１１１件の表小 ＋ｌ／ｌ和ＥｉＬ’ｌ特請願第１７８９９２４５２　発
明の名称 木ｌ？Ｉ・帯状・＼ルベス・″ノイルス抗体に関シる試
験３　補止をする者 １１１件との関係：特１着出願人 ４代理人 （１）別紙の通り、明細書１通を提出致します。 （２）別紙の通り、ｒｌ一式図面１通を提出致します。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、精製され未変性である血清学的活性型の、ｇｐ１０
   ５又はｇｐ１１８又はｇｐ１糖タンパク質としても分類
   される、ＶＺＶｇＡ糖タンパク質。 ２、精製され未変性である血清学的活性型の、ｇｐ１１
   ５−ｇｐ６２−ｇｐ５７もしくはｇｐ２−ｇｐ５もしく
   はｇｐ１４０−ｇｐ６６、又は１２０Ｋ−１１８Ｋ−６
   ４、６５Ｋ糖タンパク質、又は“ジスルフィド結合二量
   体”としても分類される、ＶＺＶｇＢ糖タンパク質。 ３、精製され未変性である血清学的活性型の、ｇｐ９２
   −ｇｐ８３−ｇｐ５２−ｇｐ４５もしくはｇｐ９８−ｇ
   ｐ６３もしくはｇｐ３−ｇｐ４−ｇｐ６又は９０Ｋ−８
   ０Ｋ−６０Ｋ糖タンパク質としても分類される、ＶＺＶ
   ｇＣ糖タンパク質。 ４、精製され未変性である血清学的活性型の未感染細胞
   タンパク質であって、 免疫アフィニティークロマトグラフィーにより、ＶＺＶ
   感染細胞溶解物由来の、特許請求の範囲第１項〜第３項
   において同様に分類されるようなＶＺＶｇＡ、ｇＢ又は
   ｇＣと一緒に共精製されたものである未感染細胞タンパ
   ク質。 ５、レクチンアフィニティークロマトグラフィーにより
   精製され、しかも、特許請求の範囲第１項〜第３項にお
   いて同様に分類されるようなｇＡ及び／又はｇＢ及び／
   又はｇＣ糖タンパク質を含有している、精製済感染細胞
   ＶＺＶ糖タンパク質。 ６、レクチンアフィニティークロマトグラフィーにより
   精製された、精製済未感染細胞糖タンパク質。 ７、特許請求の範囲第１項において同様に分類されるよ
   うな、精製され未変性である血清学的活性型の、固体表
   面に永続的に付着したＶＺＶｇＡ糖タンパク質からなる
   ＶＺＶ診断装置。 ８、特許請求の範囲第２項において同様に分類されるよ
   うな、精製され未変性である血清学的活性型の、固体表
   面に永続的に付着したＶＺＶｇＢ糖タンパク質からなる
   診断装置。 ９、特許請求の範囲第３項において同様に分類されるよ
   うな、精製され未変性である血清学的活性型の、固体表
   面に永続的に付着したＶＺＶｇＣ糖タンパク質からなる
   診断装置。 １０、宿主哺乳類生物学的液体において水痘・帯状ヘル
   ペスウィルス（ＶＺＶ）ｇＡ、ｇＢ及びｇＣ糖タンパク
   質に対する抗体の存否を調べるための方法であって、 （ａ）少なくとも１種の精製され未変性でかつ血清学的
   に活性なｇＡ、ｇＢもしくはｇＣ　ＶＺＶ糖タンパク質
   又はその混合物を固体表面に永続的に付着させ； （ｂ）ＶＺＶｇＡ、ｇＢ又はｇＣ糖タンパク質と一緒に
   共精製された、精製され未変性でかつ血清学的に活性な
   未感染細胞タンパク質もしくは糖タンパク質又はその混
   合物を固体表面に永続的に付着させ； （ｃ）工程（ａ）における上記固体表面に付着した糖タ
   ンパク質及び工程（ｂ）における上記固体表面に付着し
   たタンパク質もしくは糖タンパク質を生物学的液体と接
   触させ、この場合において、糖タンパク質に対する抗体
   は、もし液体中に存在しているとすれば、上記糖タンパ
   ク質と結合して糖タンパク質−抗体複合体を形成し； （ｄ）工程（ｃ）における上記固体表面に付着した糖タ
   ンパク質を抗免疫グロブリン−指示薬複合体と接触させ
   、この場合において、上記抗免疫グロブリンは、もし工
   程（ｃ）で存在しているとすれば、上記糖タンパク質−
   抗体複合体における上記抗体と結合することにより、糖
   タンパク質−抗体−抗免疫グロブリン−指示薬複合体を
   形成し、しかもこの場合において、上記指示薬は結合体
   の測定可能な応答を与え；次いで （ｅ）工程（ｄ）の操作終了後に指示薬応答を測定し、
   かつ、個々のＶＺＶ糖タンパク質又はその混合物に対す
   る応答から、その各々の未感染細胞タンパク質又は糖タ
   ンパク質コントロールに対する応答を差引くことにより
   補正する；工程からなる方法。