JPS6034395B2 - 滅菌法の改良 - Google Patents
滅菌法の改良Info
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- JPS6034395B2 JPS6034395B2 JP55500142A JP50014280A JPS6034395B2 JP S6034395 B2 JPS6034395 B2 JP S6034395B2 JP 55500142 A JP55500142 A JP 55500142A JP 50014280 A JP50014280 A JP 50014280A JP S6034395 B2 JPS6034395 B2 JP S6034395B2
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- B65B55/04—Sterilising wrappers or receptacles prior to, or during, packaging
- B65B55/10—Sterilising wrappers or receptacles prior to, or during, packaging by liquids or gases
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- A61L2/16—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor using chemical substances
- A61L2/18—Liquid substances or solutions comprising solids or dissolved gases
Description
【発明の詳細な説明】
明細書
本発明は微生物を生育不能にする滅菌法に関する。
現今、包装食物(foodpackaging)は過酸
化水素溶液を用いて処理することによって滅菌されてい
る。
化水素溶液を用いて処理することによって滅菌されてい
る。
しかしながら微生物のある菌株(strain)のもの
はこの処理に耐え、わずかであるが重大な量の胞子が内
容物の必然的な腐敗の危検を伴なつて生残る。
はこの処理に耐え、わずかであるが重大な量の胞子が内
容物の必然的な腐敗の危検を伴なつて生残る。
本発明者によって耐性微生物の生存胞子数をより能率的
に減少させる滅菌法が見出された。
に減少させる滅菌法が見出された。
本発明は、照射波長が完全にまたは主として326nm
以下で、過酸化水素溶液の濃度が1の重量%以下のもと
で紫外線照射した過酸化水素溶液を用いて微生物を処理
し、照射と過酸化水素との共働作用によって該微生物を
生長不能にすることを特徴とする滅菌法に係わる。過酸
化水素溶液(通常は水溶液)の濃度は一般に6重量%を
越えず、好ましくは3.の重量%を越えない。
以下で、過酸化水素溶液の濃度が1の重量%以下のもと
で紫外線照射した過酸化水素溶液を用いて微生物を処理
し、照射と過酸化水素との共働作用によって該微生物を
生長不能にすることを特徴とする滅菌法に係わる。過酸
化水素溶液(通常は水溶液)の濃度は一般に6重量%を
越えず、好ましくは3.の重量%を越えない。
この濃度は標準的には少なくとも0.01重量%であり
、微生物が胞子の形態で存在する場合には少なくとも0
.25重量%が特に好ましく、就中少なくとも0.5重
量%が好ましい。一般に、紫外線照射波長は完全にまた
は主として30Mmであり、通常は少なくとも20仇m
である。
、微生物が胞子の形態で存在する場合には少なくとも0
.25重量%が特に好ましく、就中少なくとも0.5重
量%が好ましい。一般に、紫外線照射波長は完全にまた
は主として30Mmであり、通常は少なくとも20仇m
である。
実際、照射は通常ピーク強度が325nm以下、特に2
54nmでの照射源からおこなう。源で放射される照射
エネルギーは通常少なくとも300マイクロワット/c
沼、好ましくは少なくとも500マイクロワット/c椎
である。溶液を処理する照射強度は簡単な実験によって
確立してもよいが、通常は少なくとも75マイクロワッ
ト/地、好ましくは少なくとも150マイクロワット/
めである。多くの微生物の胞子は室温における上述の処
理によって破壊されるが、特に耐性微生物を処理する場
合は照射中またはその後で溶液を高い温度に保持するの
が望ましい。
54nmでの照射源からおこなう。源で放射される照射
エネルギーは通常少なくとも300マイクロワット/c
沼、好ましくは少なくとも500マイクロワット/c椎
である。溶液を処理する照射強度は簡単な実験によって
確立してもよいが、通常は少なくとも75マイクロワッ
ト/地、好ましくは少なくとも150マイクロワット/
めである。多くの微生物の胞子は室温における上述の処
理によって破壊されるが、特に耐性微生物を処理する場
合は照射中またはその後で溶液を高い温度に保持するの
が望ましい。
一般にこの温度は120℃を越えてはならないが100
o0を越えてもよい。しかしながら、少なくとも耐性微
生物を処理する場合は、通常この温度は少なくとも85
ooにする。本発明方法は、カビ、酵母、バクテリア、
ウイルスおよび原生動物を含む広範囲の微生物に適用で
き、特に胞子形成性バクテリア、就中乳製品汚染菌(船
iryconねminants)に好適である。栄養生
殖形態(vegeねtiveform)の微生物を処理
してもよいが、本発明は特に胞子、就中耐性のバチルス
(母cillus)およびクロストリジウム(CIos
tridium)の菌株、例えばバルチス・スブチリス
(B.s肋tilis)(ATCC 9372)やバチ
ルス・ス テ ア ロ テ ル モ フ イ ル ス
( B.sにarothermophil雌)(NCD
O1096)のようなバチルス・スブチリスおよびバチ
ルス・ステアロテルモフィルス、菌株の胞子の破壊が特
に重要である。一般に、照射時間は有機体の耐性に伴っ
て増加し、少なくとも1硯砂間が一般に必要である。
o0を越えてもよい。しかしながら、少なくとも耐性微
生物を処理する場合は、通常この温度は少なくとも85
ooにする。本発明方法は、カビ、酵母、バクテリア、
ウイルスおよび原生動物を含む広範囲の微生物に適用で
き、特に胞子形成性バクテリア、就中乳製品汚染菌(船
iryconねminants)に好適である。栄養生
殖形態(vegeねtiveform)の微生物を処理
してもよいが、本発明は特に胞子、就中耐性のバチルス
(母cillus)およびクロストリジウム(CIos
tridium)の菌株、例えばバルチス・スブチリス
(B.s肋tilis)(ATCC 9372)やバチ
ルス・ス テ ア ロ テ ル モ フ イ ル ス
( B.sにarothermophil雌)(NCD
O1096)のようなバチルス・スブチリスおよびバチ
ルス・ステアロテルモフィルス、菌株の胞子の破壊が特
に重要である。一般に、照射時間は有機体の耐性に伴っ
て増加し、少なくとも1硯砂間が一般に必要である。
上述のように照射と同時またはその後でおこなってもよ
い溶液の加熱は通常少なくとも1晩沙間おこない、少な
くとも3の砂、間、例えば6現砂、間またはそれ以上が
望ましい。本発明方法は液体、例えば廃水やかんずめ工
場の冷却水の滅菌にも適用できるが、表面例えば病院の
壁や備品の表面および食物容器の表面の滅菌に特に重要
である。
い溶液の加熱は通常少なくとも1晩沙間おこない、少な
くとも3の砂、間、例えば6現砂、間またはそれ以上が
望ましい。本発明方法は液体、例えば廃水やかんずめ工
場の冷却水の滅菌にも適用できるが、表面例えば病院の
壁や備品の表面および食物容器の表面の滅菌に特に重要
である。
後者の表面は過酸化物溶液を用いて処理してもよく、例
えば容器または容器を構成する材料を該溶液を含有する
タンク内を通過させるか、容器またはその構成材料の壁
部に該溶液を贋霧する。タンクから引上げまたは噴霧処
理した容器または包装材料が本発明方法に付されるよう
に配置したランプによって照射をおこなってもよい。微
生物に対する本発明方法の共働作用、即ち照射と過酸化
水素の加成効果以上のそれらの作用は比較試験を考慮す
るならば実施例1および以下の他の実施例から明らかに
なる。
えば容器または容器を構成する材料を該溶液を含有する
タンク内を通過させるか、容器またはその構成材料の壁
部に該溶液を贋霧する。タンクから引上げまたは噴霧処
理した容器または包装材料が本発明方法に付されるよう
に配置したランプによって照射をおこなってもよい。微
生物に対する本発明方法の共働作用、即ち照射と過酸化
水素の加成効果以上のそれらの作用は比較試験を考慮す
るならば実施例1および以下の他の実施例から明らかに
なる。
実施例1〜71において使用した原料および方法有機体
バチルスおよびクロストリジウムの菌株(実施例1〜4
0)、非胞子バクテリアの菌株(実施例41〜69)、
カビの菌株(実施例70〜71)および特定の場合には
そのソースを表−1に示す。
バチルスおよびクロストリジウムの菌株(実施例1〜4
0)、非胞子バクテリアの菌株(実施例41〜69)、
カビの菌株(実施例70〜71)および特定の場合には
そのソースを表−1に示す。
次の略号を使用する。
NIRD−ナショナル・インステイチユート・オブ・リ
サーチ・イン・デイリング(National Ins
titute of Research inDair
ying )、 シ ン フ イ ー ル ド( Sh
infield )、リ ー デ ィ ン グ(Rea
ding)、連合王国。
サーチ・イン・デイリング(National Ins
titute of Research inDair
ying )、 シ ン フ イ ー ル ド( Sh
infield )、リ ー デ ィ ン グ(Rea
ding)、連合王国。
NCDO−ナショナル・コレクション・オブ・デイリー
・オーガニズムズ(NationalCollecti
onofDairyOrganisms)。
・オーガニズムズ(NationalCollecti
onofDairyOrganisms)。
ATCCーアメリカン・タイプ・カルチヤー・コレクシ
ョン(AmencanTypeCultureColl
ection)。NCIB−ナショナル・コレクション
・オブ・インダストリアル・バクテリア(Nation
alCollectionoflnd船trial母c
teria)。
ョン(AmencanTypeCultureColl
ection)。NCIB−ナショナル・コレクション
・オブ・インダストリアル・バクテリア(Nation
alCollectionoflnd船trial母c
teria)。
FRI−アグリカルチユラル・リサーチ・カウンセル・
フード・リサーチ・インステイチュート(AgriCu
l−tmaI Research、CouncilFo
odResearchInstitute)、コルネイ
・レイン(CoineyWne)、ノルゥィッチ(No
Mjch)、連合王国。
フード・リサーチ・インステイチュート(AgriCu
l−tmaI Research、CouncilFo
odResearchInstitute)、コルネイ
・レイン(CoineyWne)、ノルゥィッチ(No
Mjch)、連合王国。
表−1
胞子の調製と培養の維持
クロストリジウム・スポロゲネスはロバートソンのクッ
クドミート培地中で維持させ、他の使用した菌株はオキ
ソィド培養寒天のスロープ上に維持させた。
クドミート培地中で維持させ、他の使用した菌株はオキ
ソィド培養寒天のスロープ上に維持させた。
胞子は次の培地のうちの一つの上での生長によって形成
させた:i)バチルス・スブチリスの黒色変種に対して
はゴールド(Go山d)、スタッブス(Stゆbs)お
よびキング(King)(1970手)のじやがし、も
寒天、ii)バチルス・ステアロテルモフイルス202
に対してはオキソィド培養寒天、iii)バチルス・リ
ケニフオルミス1092AOに対してはウアン(Wan
g)、シヤレー(Scharer)およびハンフレー(
Humphrey)(1964王)の寒天培地、iv)
GI2菌株に対してはオキソィド培養肉汁No.2 3
.1夕/夕、MnS04・4日200.03夕/夕、K
2HP040.25夕/夕およびニュージランド寒天1
5夕/そを含有する培地、v)クロストリジウム・スポ
ロゲネスPA3679に対してはオキサィド脱脂乳粉末
50夕/夕、ディフコ(Difco)酵母抽出物3.0
夕/そ、オキソィドベプトン5.0夕/夕、BBLトリ
プチケース5.0夕/そ、MnC12・凪200.07
29/夕、BDH塩酸システン0.5夕/そ、およびデ
ービス(Davis)寒天15多/夕を含有する培地を
IM−NaOHを用いて最後のPHを7.0〜7.2に
調整し、日2:C02=9:1のもとで胞子を形成させ
たもの、の)他の菌株に対してはフランクリン(Fra
nkljn)らによって記載されたバチルス胞子寒天に
オキソィドラブレムコ(0xoidLabにmco)0
.1%(w/v)添加したもの。生長温度はバチルス・
スブチリスの黒色変種、バチルス・スブチリス738バ
チルス・グロビキィB17、GI2菌株、バチルス・セ
レウスTおよびバチルス・セレウス818に対しては3
0oo、クロストリジウム・スポロゲネスPA3679
に対しては3300、バチルス・プミルス312、バチ
ルス・スブチリスSA22、バチルス・スブチリス71
入バチルス・スブチリス700バチルス・リケニフオル
ミス100、バチルス・リケニフオルミス117および
バチルス・リケニフオルミス1092AOに対しては3
70、またバチルス・ステアロテルモフイルス202に
対して55ooである。バチルス・ステアロテルモフイ
ルス202の胞子は100机上のねじぶたをしたびん中
の30凧【スロープ上で生長させ、他の菌株の胞子はべ
トリ皿内の寒天上で生長させる。
させた:i)バチルス・スブチリスの黒色変種に対して
はゴールド(Go山d)、スタッブス(Stゆbs)お
よびキング(King)(1970手)のじやがし、も
寒天、ii)バチルス・ステアロテルモフイルス202
に対してはオキソィド培養寒天、iii)バチルス・リ
ケニフオルミス1092AOに対してはウアン(Wan
g)、シヤレー(Scharer)およびハンフレー(
Humphrey)(1964王)の寒天培地、iv)
GI2菌株に対してはオキソィド培養肉汁No.2 3
.1夕/夕、MnS04・4日200.03夕/夕、K
2HP040.25夕/夕およびニュージランド寒天1
5夕/そを含有する培地、v)クロストリジウム・スポ
ロゲネスPA3679に対してはオキサィド脱脂乳粉末
50夕/夕、ディフコ(Difco)酵母抽出物3.0
夕/そ、オキソィドベプトン5.0夕/夕、BBLトリ
プチケース5.0夕/そ、MnC12・凪200.07
29/夕、BDH塩酸システン0.5夕/そ、およびデ
ービス(Davis)寒天15多/夕を含有する培地を
IM−NaOHを用いて最後のPHを7.0〜7.2に
調整し、日2:C02=9:1のもとで胞子を形成させ
たもの、の)他の菌株に対してはフランクリン(Fra
nkljn)らによって記載されたバチルス胞子寒天に
オキソィドラブレムコ(0xoidLabにmco)0
.1%(w/v)添加したもの。生長温度はバチルス・
スブチリスの黒色変種、バチルス・スブチリス738バ
チルス・グロビキィB17、GI2菌株、バチルス・セ
レウスTおよびバチルス・セレウス818に対しては3
0oo、クロストリジウム・スポロゲネスPA3679
に対しては3300、バチルス・プミルス312、バチ
ルス・スブチリスSA22、バチルス・スブチリス71
入バチルス・スブチリス700バチルス・リケニフオル
ミス100、バチルス・リケニフオルミス117および
バチルス・リケニフオルミス1092AOに対しては3
70、またバチルス・ステアロテルモフイルス202に
対して55ooである。バチルス・ステアロテルモフイ
ルス202の胞子は100机上のねじぶたをしたびん中
の30凧【スロープ上で生長させ、他の菌株の胞子はべ
トリ皿内の寒天上で生長させる。
胞子分裂は位相差顕微鏡を用いて明るい胞子(bri熱
tspores)の出現によって検出し、培養は遊離の
胞子の最も高い割合が観察されるまで(菌殊に応じ1〜
9日後)続ける。培養物を採取し、一18000で保管
する前に滅菌ガラス器具を用いて蒸留水で5回洗浄する
。無胞子細菌細胞の調製および培養の維持 無胞子細菌を3300においてi)ェシェリヒア・コリ
およびストレプトコツクス・フアエカリスに対してはハ
ートインヒユージョンフロース(heartinfus
ionbroth)中で、ii)またセラシァ・マルセ
スセンスに対してはジミツク(Dimmick)(19
65)によるグリセロールー塩培地中で、旋回シェーカ
ー〔ガーレンカンプ(Gallen−kamp)、15
0反転/分〕を用いて1糊時間生長させる。
tspores)の出現によって検出し、培養は遊離の
胞子の最も高い割合が観察されるまで(菌殊に応じ1〜
9日後)続ける。培養物を採取し、一18000で保管
する前に滅菌ガラス器具を用いて蒸留水で5回洗浄する
。無胞子細菌細胞の調製および培養の維持 無胞子細菌を3300においてi)ェシェリヒア・コリ
およびストレプトコツクス・フアエカリスに対してはハ
ートインヒユージョンフロース(heartinfus
ionbroth)中で、ii)またセラシァ・マルセ
スセンスに対してはジミツク(Dimmick)(19
65)によるグリセロールー塩培地中で、旋回シェーカ
ー〔ガーレンカンプ(Gallen−kamp)、15
0反転/分〕を用いて1糊時間生長させる。
細胞を採取し、約1×1ぴ生育可能ユニット/の【の密
度で再懸濁する前に滅菌した25mM−燐酸カリウム緩
衝液(PH7.0)50の‘を用い、遠D分離によって
洗浄し、4時間以内に使用した。培養はハートィンヒュ
ージョン寒天培地(Heartlnf雌ionA鞍r)
(デイフコ)のスロープ上で維持する。カビ胞子の調製
および培養の総持 べニシリウム・クリソゲナムの胞子をスクロース30夕
/夕、K2HP〇41‐09/夕、NaN〇3 2.0
夕/夕、Mが04・7日200.5夕/そ、KCIO.
5夕/〆、FeS04・7日200.01夕/そおよび
ニュージランド寒天20夕/そを含有するッアベックド
ックス塔地のスロープ上の2000で少なくとも7日間
生長させ、トウィーン(Tween)80を0.1%含
有する滅菌ガラス器具内蒸留水中へ採収する前に滅菌ガ
ラス器具内蒸留水を用いる遠心分離によって洗浄する。
度で再懸濁する前に滅菌した25mM−燐酸カリウム緩
衝液(PH7.0)50の‘を用い、遠D分離によって
洗浄し、4時間以内に使用した。培養はハートィンヒュ
ージョン寒天培地(Heartlnf雌ionA鞍r)
(デイフコ)のスロープ上で維持する。カビ胞子の調製
および培養の総持 べニシリウム・クリソゲナムの胞子をスクロース30夕
/夕、K2HP〇41‐09/夕、NaN〇3 2.0
夕/夕、Mが04・7日200.5夕/そ、KCIO.
5夕/〆、FeS04・7日200.01夕/そおよび
ニュージランド寒天20夕/そを含有するッアベックド
ックス塔地のスロープ上の2000で少なくとも7日間
生長させ、トウィーン(Tween)80を0.1%含
有する滅菌ガラス器具内蒸留水中へ採収する前に滅菌ガ
ラス器具内蒸留水を用いる遠心分離によって洗浄する。
細菌胞子、栄養細胞およびカビ胞子のU.V.照射細菌
胞子または栄養細胞3×107〜5×1ぴ/机‘、カビ
胞子1×1び泌を日202〔アナラー(Ahalar)
、B.D.日.)100m‘あたり2.5夕までの0.
1M燐酸ナトリウム緩衝液(PH7.0)中へ懸濁させ
る。ウエイテス(W.M.Waiにs)およびフライ(
B.A.Fry)によって記載されたようにして〔ジヤ
ーナル・オブ・ジエネラル・ミクロバイオロジ‐(J.
蛇n.Microbiol.)、第34巻、第413〜
426頁、196山王〕フィルターを除去したハノビア
・クロマトラィト・低圧水銀ランプ〔ハノビア社(比n
oviaLtd.)、スラゥ(Slough)、英国〕
から5.5肌、30肌または33肌離した直径9肌のべ
トリ皿基底部に置いた試料4肌‘を2000で3現砂、
間静かにあちらこちらへと揺り動かす。ランプは185
−57飢mの範囲においてピーク強度254nmで照射
する。後者の照射はこのランプによって作り出される重
要な実用的価値を有する唯一の照射であり、他のスペク
トル線およびスペクトル群はかなり低い強度である。照
射エネルギーはソースlc虎あたり300〜500マイ
クロワットである。試料2の‘を取り出し、フィルター
で滅菌したカタラーゼ溶液〔シグマ社(SigmaLt
d.〕2机上と混合し〔7650ユニット/似(200
0)〕、次いで氷中で少なくとも5分間保存し、希釈し
て平板培養する。熱処理 (実施例2〜16、33〜35 31〜41,61およ
び71)試料2の‘を前加熱したねじぶた付ビン内へ添
加することによって、細菌胞子の場合は85ooで6現
砂間、栄養細菌の場合は65午0で3の砂間、またカビ
胞子の場合は54ooで19砂間加熱し、次いで十1℃
まで前冷却したカタラーゼ2の‘を加え(7650ユニ
ット/机)、氷中に浸債する。
胞子または栄養細胞3×107〜5×1ぴ/机‘、カビ
胞子1×1び泌を日202〔アナラー(Ahalar)
、B.D.日.)100m‘あたり2.5夕までの0.
1M燐酸ナトリウム緩衝液(PH7.0)中へ懸濁させ
る。ウエイテス(W.M.Waiにs)およびフライ(
B.A.Fry)によって記載されたようにして〔ジヤ
ーナル・オブ・ジエネラル・ミクロバイオロジ‐(J.
蛇n.Microbiol.)、第34巻、第413〜
426頁、196山王〕フィルターを除去したハノビア
・クロマトラィト・低圧水銀ランプ〔ハノビア社(比n
oviaLtd.)、スラゥ(Slough)、英国〕
から5.5肌、30肌または33肌離した直径9肌のべ
トリ皿基底部に置いた試料4肌‘を2000で3現砂、
間静かにあちらこちらへと揺り動かす。ランプは185
−57飢mの範囲においてピーク強度254nmで照射
する。後者の照射はこのランプによって作り出される重
要な実用的価値を有する唯一の照射であり、他のスペク
トル線およびスペクトル群はかなり低い強度である。照
射エネルギーはソースlc虎あたり300〜500マイ
クロワットである。試料2の‘を取り出し、フィルター
で滅菌したカタラーゼ溶液〔シグマ社(SigmaLt
d.〕2机上と混合し〔7650ユニット/似(200
0)〕、次いで氷中で少なくとも5分間保存し、希釈し
て平板培養する。熱処理 (実施例2〜16、33〜35 31〜41,61およ
び71)試料2の‘を前加熱したねじぶた付ビン内へ添
加することによって、細菌胞子の場合は85ooで6現
砂間、栄養細菌の場合は65午0で3の砂間、またカビ
胞子の場合は54ooで19砂間加熱し、次いで十1℃
まで前冷却したカタラーゼ2の‘を加え(7650ユニ
ット/机)、氷中に浸債する。
懸濁液を氷中に少なくとも5分間保ち、希釈して平板培
養する。生存体(smvlvoR)の測定希釈した胞子
懸濁液を、(iレゞチルス胞子寒天上に板状に延ばし(
Plated)、30oo(バチルス・スブチリス71
入バチルス・スプチリス700バチルス・セレウスTお
よびバチルス・セレウス818)または370(バチル
ス・リケニフオルミス1092A○、バチルス・リケニ
フオルミス100、バチルス・リケニフオルミス117
およびバチルス・プミルス312)で2日間培養する、
‘ii’プレートカウント寒天(オキソィド)に板上に
延ばし、33℃(バチルス・スブチリスSA22)また
は37qC(バチルス・グロピギイB17、バチルス・
スブチリス738およびバチルス・スブチリスの黒色変
種)で2日間培養する、‘iiiートリプトソ(オキソ
ィド)5多/夕、酵母抽出物(オキソィド)2.5タノ
ク、グルコース10タノ夕およびニュージランド寒天2
8夕/夕を含有する培地上に板状に延ばし、55午○(
バチルス・ステアロテルモフイリス202)で3日間培
養する。
養する。生存体(smvlvoR)の測定希釈した胞子
懸濁液を、(iレゞチルス胞子寒天上に板状に延ばし(
Plated)、30oo(バチルス・スブチリス71
入バチルス・スプチリス700バチルス・セレウスTお
よびバチルス・セレウス818)または370(バチル
ス・リケニフオルミス1092A○、バチルス・リケニ
フオルミス100、バチルス・リケニフオルミス117
およびバチルス・プミルス312)で2日間培養する、
‘ii’プレートカウント寒天(オキソィド)に板上に
延ばし、33℃(バチルス・スブチリスSA22)また
は37qC(バチルス・グロピギイB17、バチルス・
スブチリス738およびバチルス・スブチリスの黒色変
種)で2日間培養する、‘iiiートリプトソ(オキソ
ィド)5多/夕、酵母抽出物(オキソィド)2.5タノ
ク、グルコース10タノ夕およびニュージランド寒天2
8夕/夕を含有する培地上に板状に延ばし、55午○(
バチルス・ステアロテルモフイリス202)で3日間培
養する。
Ni}トリプトン(オキソィド)10夕/そ、グルコー
ス5.0夕/夕およびニュージランド寒天12夕/そを
含有する培地上に板状に延ばし、30qo(GI2)で
2日間培養する、またはMヒルシュ(Hirsch)と
グリンステェッド(Grinsted)の補強クロスト
リジアル寒天培地(1954年)(但し、ニュージラン
ド寒天は1.2%ではなく1.6%)(クロストリジウ
ム・スポロゲネスPA3679)上で平板培養する。栄
養細胞の懸濁液は維持培地(ディフロバクト−べプトン
1.0夕/そ、NaC15.0夕/1、pH7.0〜7
.1)中でION音‘こ希釈し、ハートィンフュージョ
ン寒天培地(ディフコ)(ェシェリヒア・コリおよびス
トレプトコツクス・フアエカリス)またはトリプチケー
ス大豆寒天塔地(BBL)(セラシア・マルセスセンス
)上に板状に延ばすことによつて、スパイラルプレート
マ−カー〔スパイラル・システムズ(SpiralSy
sにms)、シンシナチー、オハイオ、米国〕を用いて
計数し〔ギルキリスト(Oilchrist)ら、19
73年、ジャルビス(Jawis)ら、1977年〕、
3yoで3日間(ストレプトコツクス・フアエカリス)
、3000で2日間(エシエリヒア・コリ)または33
o○で2日間(セラシア・マルセスセンス)培養させた
後の集落を数える。
ス5.0夕/夕およびニュージランド寒天12夕/そを
含有する培地上に板状に延ばし、30qo(GI2)で
2日間培養する、またはMヒルシュ(Hirsch)と
グリンステェッド(Grinsted)の補強クロスト
リジアル寒天培地(1954年)(但し、ニュージラン
ド寒天は1.2%ではなく1.6%)(クロストリジウ
ム・スポロゲネスPA3679)上で平板培養する。栄
養細胞の懸濁液は維持培地(ディフロバクト−べプトン
1.0夕/そ、NaC15.0夕/1、pH7.0〜7
.1)中でION音‘こ希釈し、ハートィンフュージョ
ン寒天培地(ディフコ)(ェシェリヒア・コリおよびス
トレプトコツクス・フアエカリス)またはトリプチケー
ス大豆寒天塔地(BBL)(セラシア・マルセスセンス
)上に板状に延ばすことによつて、スパイラルプレート
マ−カー〔スパイラル・システムズ(SpiralSy
sにms)、シンシナチー、オハイオ、米国〕を用いて
計数し〔ギルキリスト(Oilchrist)ら、19
73年、ジャルビス(Jawis)ら、1977年〕、
3yoで3日間(ストレプトコツクス・フアエカリス)
、3000で2日間(エシエリヒア・コリ)または33
o○で2日間(セラシア・マルセスセンス)培養させた
後の集落を数える。
カビ胞子の懸濁液は滅菌したガラス器具内の蒸留水で希
釈し、ッアベクドックス寒天培地上に板状に延ばすこと
によって計数し、20qoで9日間培養後の集落を教え
る。
釈し、ッアベクドックス寒天培地上に板状に延ばすこと
によって計数し、20qoで9日間培養後の集落を教え
る。
今まで引用したすべての刊行文献を次に示す。
ジミツク(Dimmick,R.C.)、ジヤーナル.
オフ・バクテリオロジ‐(J.欧cteriology
)、第89巻、第791〜798頁、1963王。ギル
クリスト(Gilchrist,J.E.)、キヤンベ
ル(Campbell,J.E.)、ドネリー(Don
nelly,C.B.)、ベーフー(Peeler,J
.T.)、デラニ(Delaney,J.M.)、アプ
ライド・ミクロバイオロジー(APPlIedMicr
obiol.)、第25巻、第244〜252頁、19
73王。
オフ・バクテリオロジ‐(J.欧cteriology
)、第89巻、第791〜798頁、1963王。ギル
クリスト(Gilchrist,J.E.)、キヤンベ
ル(Campbell,J.E.)、ドネリー(Don
nelly,C.B.)、ベーフー(Peeler,J
.T.)、デラニ(Delaney,J.M.)、アプ
ライド・ミクロバイオロジー(APPlIedMicr
obiol.)、第25巻、第244〜252頁、19
73王。
ジャルビス(Jarvis、B)、ラツハ(仏ch,V
.日.)、ウッド(Wood,J)、ジヤーナル・オブ
・アプライド・バクテリオロジー(J.Applied
舷cteriol.)、第4群篭、第149〜15刀頁
、1977年。
.日.)、ウッド(Wood,J)、ジヤーナル・オブ
・アプライド・バクテリオロジー(J.Applied
舷cteriol.)、第4群篭、第149〜15刀頁
、1977年。
コールド(G℃山d,G.W.)、スタツフス(Stu
bは,J.M.)、キング(KingW.L.)、ジヤ
ーナル・オブ・ジエネラル・ミクロバイオロジ−(J.
蛇neralMicrobiology)、第6碇登、
第347〜355頁、197位王。ウア ン(Wang
,D.1.C)、シヤレー(Scharer,J.G.
)、ハンフリー(Humphrey,A.E.)、アプ
ライド・ミクロバイオロジー(AppliedMicr
obiol.)、第12巻、第451〜454頁、19
64E。
bは,J.M.)、キング(KingW.L.)、ジヤ
ーナル・オブ・ジエネラル・ミクロバイオロジ−(J.
蛇neralMicrobiology)、第6碇登、
第347〜355頁、197位王。ウア ン(Wang
,D.1.C)、シヤレー(Scharer,J.G.
)、ハンフリー(Humphrey,A.E.)、アプ
ライド・ミクロバイオロジー(AppliedMicr
obiol.)、第12巻、第451〜454頁、19
64E。
フランクリン(Franklin,J.○.)アンダー
ウッド(UndeMood,日.M.)、パーキン(P
erkin,A.G.)、バートン(Bmめn,H)、
ジヤーナル.オプ・デイリー・リサーチ(J.Daiび
Res.)、第37巻、第219〜226頁、1970
王。
ウッド(UndeMood,日.M.)、パーキン(P
erkin,A.G.)、バートン(Bmめn,H)、
ジヤーナル.オプ・デイリー・リサーチ(J.Daiび
Res.)、第37巻、第219〜226頁、1970
王。
ヒルシユ(日船ch,A.)、グリンステツド(Gri
nsted,E)、ジヤーナル・オブ・デイリー・リサ
ーチ、第21巻、第101〜110頁、1954王。実
施例 1U.V.照射と過酸化水素によるバチルス・ス
フチリス706の胞子の滅菌率バチルス・スブチリス7
06の胞子を濃度1夕/100の‘の比02の存在下ま
たは不存在下(比較のため)において上記のようにして
照射した(Q02はこの濃度では同等の温度において胞
子を殺さない)。
nsted,E)、ジヤーナル・オブ・デイリー・リサ
ーチ、第21巻、第101〜110頁、1954王。実
施例 1U.V.照射と過酸化水素によるバチルス・ス
フチリス706の胞子の滅菌率バチルス・スブチリス7
06の胞子を濃度1夕/100の‘の比02の存在下ま
たは不存在下(比較のため)において上記のようにして
照射した(Q02はこの濃度では同等の温度において胞
子を殺さない)。
過酸化水素が存在しない場合、滅菌は対数的な速度でお
こなわれ、3硯砂後および6硯砂後での生存体はそれぞ
れ19%および2%であった。過酸化物が存在する場合
、滅菌はより一層急速な対数的速度でおこなわれ、3鼠
砂後にはわずかに0.01%の胞子が生存するのみであ
った。実施例 2〜16 バチルスおよびク。
こなわれ、3硯砂後および6硯砂後での生存体はそれぞ
れ19%および2%であった。過酸化物が存在する場合
、滅菌はより一層急速な対数的速度でおこなわれ、3鼠
砂後にはわずかに0.01%の胞子が生存するのみであ
った。実施例 2〜16 バチルスおよびク。
ストリジウムの菌株のいくつかを3現砂間照射する。上
記のように日202を2.5多/loo凧とで存在させ
ておこなった後、85ooで60秒間加熱する。結果を
表−2に示す。この表はU.V.照射のみおよびU.V
.照射の後熱処理して得られた結果を示す。表−2 *胞子懸濁液上5.5伽のところからランプを30秒問
照射。
記のように日202を2.5多/loo凧とで存在させ
ておこなった後、85ooで60秒間加熱する。結果を
表−2に示す。この表はU.V.照射のみおよびU.V
.照射の後熱処理して得られた結果を示す。表−2 *胞子懸濁液上5.5伽のところからランプを30秒問
照射。
渋渋試料2秋を移し、85℃で60秒間加熱した。x×
渋過酸化水素2.5夕/100秋を含有する懸濁液上5
.5肌のところからランプを30秒間照射した後、85
℃で60秒間加熱した。実施例 17〜24バチルス・
スブチリス713に種々の濃度の過酸化水素の存在下、
2種の胞子濃度においてU.V.照射をおこなう。
渋過酸化水素2.5夕/100秋を含有する懸濁液上5
.5肌のところからランプを30秒間照射した後、85
℃で60秒間加熱した。実施例 17〜24バチルス・
スブチリス713に種々の濃度の過酸化水素の存在下、
2種の胞子濃度においてU.V.照射をおこなう。
条件および結果を表−3に示す。表−3
*胞子を1.2×107または12×107/地で過酸
化水素と共に懸濁し、該懸濁液上5.5cmのところか
らU.V.ランプを照射する。
化水素と共に懸濁し、該懸濁液上5.5cmのところか
らU.V.ランプを照射する。
実施例 25〜28
4種のバチルス菌種に過酸化水素の存在下でU.V.照
射し、2つの場合はさらに8500で6晩少間加熱する
。
射し、2つの場合はさらに8500で6晩少間加熱する
。
条件および結果を表−4に示す。U.V.照射をおこな
わないでH202を用いる従来法に・よって得られた結
果も比較のために表−4に示す。表 − 4 x99.99その滅菌をおこをうのに必要な時間。
わないでH202を用いる従来法に・よって得られた結
果も比較のために表−4に示す。表 − 4 x99.99その滅菌をおこをうのに必要な時間。
x*20℃で30秒間照射した胞子をさらに85℃で6
0秒間加熱する。実施例 28バチルス・スブチリス7
06の胞子を日202(1夕/100の‘)の存在下で
60秒間U.V.照射する。
0秒間加熱する。実施例 28バチルス・スブチリス7
06の胞子を日202(1夕/100の‘)の存在下で
60秒間U.V.照射する。
U.V.ランプは胞子懸濁液上30c机のところに設置
する。比較のため、日202の不存在下で菌株に照射す
る。上述のように試料を移し、希釈して板状に延ばす。
結果を表−5に示す。表−5 実施例 30〜35 バチルス・プミルス312の胞子を日202の存在下で
3晩沙間U.V.照射し、一部のものはさらに85qo
で6の秒・間加熱する。
する。比較のため、日202の不存在下で菌株に照射す
る。上述のように試料を移し、希釈して板状に延ばす。
結果を表−5に示す。表−5 実施例 30〜35 バチルス・プミルス312の胞子を日202の存在下で
3晩沙間U.V.照射し、一部のものはさらに85qo
で6の秒・間加熱する。
ランプは懸濁液の5伽上に設置する。比較のために胞子
を川過酸化水素と共に20qoで3の砂間培養し、また
は(ii}過酸化水素と共に3硯砂、間培養し次いで8
500で6硯砂間加熱する。上述のように間隔をおいて
試料を移し、希釈してから板状に延ばす。結果を表−6
に示す。表−6 実施例 36〜41 バチルス・プルミス312の代りにバチルス・スブチリ
ス713を用い、実施例30〜35の手順を繰返す。
を川過酸化水素と共に20qoで3の砂間培養し、また
は(ii}過酸化水素と共に3硯砂、間培養し次いで8
500で6硯砂間加熱する。上述のように間隔をおいて
試料を移し、希釈してから板状に延ばす。結果を表−6
に示す。表−6 実施例 36〜41 バチルス・プルミス312の代りにバチルス・スブチリ
ス713を用い、実施例30〜35の手順を繰返す。
結果を表−7に示す。表−7
実施例 42〜49
ェシェリヒア・コリK−12を種々の濃度の過酸化水素
の存在下で30秒間U.V.照射する。
の存在下で30秒間U.V.照射する。
ランプは懸濁液の30肌上に設置する。比較のため、細
胞をU.V.照射をおこなわないでH2021夕/10
0の‘と共に30秒間培養する。上述のようにして試料
を移し、希釈して板状に延ばす。結果を表−8に示す。
表−8 実施例 51〜59 ストレプトコツクス・フアエカリス・ss・リケフアシ
ェンスEB/F/30/39を種々の濃度の過酸化水素
の存在下で30秒間U.V.照射する。
胞をU.V.照射をおこなわないでH2021夕/10
0の‘と共に30秒間培養する。上述のようにして試料
を移し、希釈して板状に延ばす。結果を表−8に示す。
表−8 実施例 51〜59 ストレプトコツクス・フアエカリス・ss・リケフアシ
ェンスEB/F/30/39を種々の濃度の過酸化水素
の存在下で30秒間U.V.照射する。
ランプは懸濁液の30狐上に設置する。比較のためにU
.V.照射をおこなわないで細胞を日2021.0夕/
100の‘と共に3庇沙間培養する。上述のようにして
試料を移し、希釈して板状に延ばす。結果を表−9に示
す。表−9 *試験せず 実施例 60〜61 ェシェリヒア・コリK12の細胞を日2021.0夕/
100の‘の存在下で3疎沙間U.V.照射し、あるい
はさらに65ooで3の砂間加熱する。
.V.照射をおこなわないで細胞を日2021.0夕/
100の‘と共に3庇沙間培養する。上述のようにして
試料を移し、希釈して板状に延ばす。結果を表−9に示
す。表−9 *試験せず 実施例 60〜61 ェシェリヒア・コリK12の細胞を日2021.0夕/
100の‘の存在下で3疎沙間U.V.照射し、あるい
はさらに65ooで3の砂間加熱する。
ランプは懸濁液の30cm上に設置する。比較のため、
細胞を‘i’30秒間U.V.照射した後、日202と
共に30秒間培養するか、‘ii’6500で30秒間
加熱する。上述のようにして試料を移し、希釈して板状
に延ばす。結果を表一10に示す。表−10 実施例 62〜69 セラシア・マルセスセンスの細胞を種々の濃度の過酸化
水素の存在下で30秒間U.V.照射する。
細胞を‘i’30秒間U.V.照射した後、日202と
共に30秒間培養するか、‘ii’6500で30秒間
加熱する。上述のようにして試料を移し、希釈して板状
に延ばす。結果を表一10に示す。表−10 実施例 62〜69 セラシア・マルセスセンスの細胞を種々の濃度の過酸化
水素の存在下で30秒間U.V.照射する。
ランプは懸濁液の33伽上に設置する。比較のため、細
胞をU.V.照射をおこなわないで日2021.0夕/
100の‘と共に3晩沙間培養する。上述のようにして
試料を移し、希釈して板状に延ばす。結果を表一11に
示す。表−11 *試験せず 実施例 70〜71 べニシリウム・クリソゲナムを日2020.5夕/10
0の‘の存在下で3の砂間U.V.照射し、あるいはさ
らに5400で19秒問加熱する。
胞をU.V.照射をおこなわないで日2021.0夕/
100の‘と共に3晩沙間培養する。上述のようにして
試料を移し、希釈して板状に延ばす。結果を表一11に
示す。表−11 *試験せず 実施例 70〜71 べニシリウム・クリソゲナムを日2020.5夕/10
0の‘の存在下で3の砂間U.V.照射し、あるいはさ
らに5400で19秒問加熱する。
ランプは懸濁液の5cの上に設置する。比較のため、胞
子を【i’3の砂間U.V.照射した後、日202と共
に30秒間培養するか、‘ii’54り○で1錠沙間加
熱する。上述のように試料を移し、希釈して板状に延ば
す。結果を表−12に示す。表−12
子を【i’3の砂間U.V.照射した後、日202と共
に30秒間培養するか、‘ii’54り○で1錠沙間加
熱する。上述のように試料を移し、希釈して板状に延ば
す。結果を表−12に示す。表−12
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 紫外線照射波長が完全にまたは主として325nm
以下、過酸化水素濃度が10重量%以下のもとで紫外線
照射過酸化水素溶液微生物処理を行ない、照射と過酸化
水素との共働作用によつて該微生物を生育不能にするこ
とを特徴とする滅菌法。 2 紫外線照射波長が完全にまたは主として300nm
以下である第1項記載の方法。 3 照射が325nm以下にピーク強度を有する第1項
記載の方法。 4 紫外線照射波長が少なくとも200nmである第1
項〜第3項いずれかに記載の方法。 5 紫外線照射が254nmにピーク強度を有する第1
項〜第4項いずれかに記載の方法。 6 過酸化水素溶液の濃度が少なくとも0.01重量%
である第1項〜第5項いずれかに記載の方法。 7 過酸化水素溶液の濃度が少なくとも0.5重量%で
ある第1項〜第6項いずれかに記載の方法。 8 過酸化水素溶液の濃度が6重量%よりも高くない第
1項〜第7項いずれかに記載の方法。 9 過酸化水素溶液の濃度が3重量%よりも高くない第
1項〜第8項いずれかに記載の方法。 10 微生物が胞子形態で存在し、過酸化水素の濃度が
少なくとも0.25%である第1項〜第9項いずれかに
記載の方法。 11 微生物がカビ、酵母、バクテリア、ウイルスまた
は原生動物類である第1項〜第10項いずれかに記載の
方法。 12 微生物が乳製品汚染菌である第1項〜第11項い
ずれかに記載の方法。 13 微生物がバチルス・スブチリスまたはバチルス・
ステアロテルモフイルスの胞子形態で存在する第11項
記載の方法。 14 過酸化水素を照射中または照射後に高温に保つ第
1項〜第13項いずれかに記載の方法。 15 過酸化水素溶液を照射中または照射後に少なくと
も85℃に保つ第1項〜第14項いずれかに記載の方法
。 16 過酸化水素溶液を照射中または照射後に少なくと
も10秒間加熱する第1項〜第15項いずれかに記載の
方法。 17 微生物が食品包装材の表面上の汚染菌である第1
項〜第16項いずれかに記載の方法。 18 紫外線照射波長が200〜325nmの範囲内に
ピーク強度を有し、過酸化水素の濃度が少なくとも0.
5重量%から3重量%までの過酸化水素溶液を用いて微
生物の胞子を処理し、照射と過酸化水素との共働作用に
よつて該微生物を生長不能にすることを特徴とする第1
項記載の方法。
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GB7901091 | 1979-01-11 | ||
GB7901091 | 1979-01-11 |
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---|---|---|---|
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