JPS60186230A - ナス科植物の土壌病害防除方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、学名シュドモナス・ソラナシアラム（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ　）に属
する１系統の細菌を生きたまま植物に接種してタバコ立
枯病およびナス科植物青枯病を防除する方法に関するも
のである。

発明者等は、先に加熱殺菌処理した細菌シュドモナス・
ソラナシアラム・Ｍ２３Ｒ（以下単にｒ　Ｎ２５Ｊ＜　
Ｊと略記する）を土壌に施用することを特徴とするナス
科植物の土壌病害防除方法について特許出願（特願昭５
７−１０３９８２号）したが、本願発明は、タバコ立枯
病およびナス科植物の青枯病に対して、それ以上の効果
を有するコ老キ防除方法を提供　するｂ 本発明により病害防除対象とされる植物は、タバコ、ナ
ス、トマト、ピーマン、ジャガイモなどのナス科植物で
、対象とされる病害はシュドモナス・ソラナシアラム細
菌によって起こされるタバコ立枯病および、タバコ以外
のナス科植物青枯病である。

本発明者らは、シュドモナス中ソフナシアラム細菌の３
５系統の中から、病原性を有する系統の同細菌と競合し
てよく生育し、かつ、病原性を有する系統の同細菌の生
育を阻害し、さらにナス科植物に対して病原性を全く持
たない２系統を選びだした。そのような特徴をもつ２系
統のうちの、より防除効果の高い系統が、シュドモナス
φソラナシアラムＭ４Ｂ　（微工研菌寄託番号７３７０
号）である。このシュドモナス・ソラナシアラムＭ４Ｓ
　（以下、単にｒ　Ｍ４Ｓ　Ｊと略記する）の生菌を前
記対象植物の根部に接種することにより、前記立枯病及
び青枯病が有効に防除できる。Ｍ２Ｓを培養するには周
知の方法１例えば公知の液体培地（成分：カザミノ酸１
ｆ、ブドウ糖１　ｃｉ　ｔ　、ペプトンｌＯｆ、水ｔ０
００ｍｔ）に捗種し、２８℃〜３０℃で４Ｂ時間前後振
とり培養すれば良い。また寒天入りの斜面培地や平板培
地で培養しても良い。

次に培養した細菌を以下のように処理して懸濁液を調整
する。液体培地の場合には培養後遠心分Ｎ＃（たとえば
３０００回転、３０分間）してその沈殿物を蒸留水に懸
濁する。懸濁液中の細菌濃度Ｆｉ懸濁液１　ｍｌ当り１
０６〜１０”　、個好ましくはｌＯ，７〜ｉｏ’個であ
る。また平板や斜面培地の場合は細菌体を殺菌水中にか
き取り懸濁すればよい。

このようにして調整した懸濁液を、処理菌が小数の場合
には底が平面の容器などに、処理菌が多数の場合には４
隅を角材などで高くし、ポリエチレンフィルムなどで覆
った平らな地面などに深さ１ｃｍ〜３ｃｍ、好ましくけ
２ｃｙｎ程度になるように満たす。この満たされた懸濁
液中に本圃へ移植する苗の根部を３０分〜３時間、好ま
しく＃′ｉ１時間前後浸漬する。この処理時期は移植出
口も含め移植の３週間前までが効果があるが、好ましく
は移植当日である。ジャガイモの場合は、本州に植える
ために切うた梱イモを上記の懸濁液に１詩間前後浸漬す
ればよい。

本発明の作用機構については明確ではないが、Ｍ４８が
シ、Ｖモナス嗜ソラナシアラムの他の系統にくらべて防
除効果が高いことから考えると、Ｍ４Ｓの特異的作用に
より植物自身が持９ている防御反応が起こるためと考え
られる。

以下実施例をあげて本発明の内容□を詳細に説明するが
本−一一他の方法にくらべて以下のような長所がある。

１）　Ｍ４８＃′ｉ、全く病原性がなく、必東とする作
物にだけ働きかけ、作物がこの菌体を認識して防御反応
を行うものと考えられるので環境を害さない。

２）前記加熱殺菌処理菌体よりも有効濃度が１０分の１
から１００分の１低く、また加熱殺菌する手間も不用で
あり、低摩で簡便でありかつ効□ 来が高い 実施測長 １辺が２８．５ｍ（７）ビ↑−ル＠ｙＦ：、　）　（２
５本植）に栽培し、□本畑に移植する□大きさである本
葉９枚のタバコ苗（品＃Ｎ：白遠州１号）を供試した。

各処理区の処理液の調整は次のようにしておこなった。

・　本駄（発明Ｍ４８　（生！ｊ）区 Ｍ４Ｓの生菌が１０１０個／ｍｔ含まれる濃度に調整し
た。

Ｏシュドモナス・ソラナシアラムＭ１８系統　□（生菌
）区 同系統の生菌がｌｏ　１０１固／　ｍｅ含まれる１度に
ｍ：ｉ整した。

ｏ　Ｍ２３Ｒ（加熱死菌）区 同系統の生菌が１０　ｔｏ　ｌ囚／ｍｔ含まれる濃度の
水懸濁液を／Ｊ県し、これを１００℃で１０分間加熱し
て殺菌処理した後、常温まで放冷した。

このよ６に調整した各処理液を処理槽に入れて、深さ２
ｃｍとし、その中にビニール製ポットに植えた上記タバ
コ苗２０本ずつを１．１時間浸漬した。なお、対照区は
、殺菌蒸留水で同様の処理をした。それぞれ処理したタ
バコは直径１５備の植木鉢に移植して栽培した。４日後
、病原性の暮るタバコ立枯病菌が１０’個／ｍｔ含まれ
る濃ｇｏ水懸ｆ＠門を調整し、上記８０本の夕・・・苗
の根にナイフをさし込んで傷をつけた直後に１０ｍｔず
つこの懸濁液を潅門した。さらに１０日　′後発病状態
を観察した。発病一度は表−０のとお砂０かも５までの
６段階とし、以下の式によシ平均罹病指薮をめ防除率を
ｆｉｌ算した。　□表−１ ０無発病 １　・葉の一部が萎凋 ２　：　１〜３枚の葉が萎凋 ３　：　生長点に近い２〜３枚の葉を除　。

４　審葉萎凋 ただし　Ｎは供試個体数 ｎｇ−ｎｇは指数０〜５に属する個体数表〜２ Ｍ２３Ｒ（加熱死菌）区　８Ｕ’１　２．２０　４２．
ＩＪ対照区　ｉｏｏ％　３．８０　、− 結果は表−２に示すとおりＭ４Ｓが一番発病抑制効果が
高く、前記先願のｉＶｌ、２３Ｒ加熱死菌よシも発病抑
制効果が筒かった。

実施例２ 実施例１と同様に調整した１Ｖｉ４Ｓ　＃ｌＢ菌懸菌液
濁液菌濃度１０８個／ｍｌ　）およびＭ２３１１加熱死
菌懸淘液（同１０１０個／ｍＡ　）にタバコ２５本を実
施側１と同様に３０分間処理した。なお、対照区として
殺菌水で処理したタバコ２５本を用いた。それぞれ処理
したタバコは実施例１と同様に処理し、病原性を有する
タバコ立枯６菌を同様に接柚し、同様に発病状態を記録
しそれぞれの処理の効果を比較した。

Ｍ２３Ｒ（加熱化ｍ）区　６８％　１．９（３５１，３
％表−４ 実験結果は表−３（供試品種：白遠州１号）、表−４（
供試品ｇＩ：水戸３号）Ｋ示ず。２例ともＮ４Ｂ生菌処
理をしたタバコの発病率が最低孔 であり、つぎにＭ２３Ｒ加熱＃菌処理、そして対照区の
水処理したタバコの発病率が最高となった。

また、発病のひどさを示す平均罹病指数も同じ順序であ
り、対１１４区と各処理とのｕ４１の差は統計的に有意
であり（危険率１％）、またＭ２３Ｈ加熱几 Ｓ画処理とＮ４Ｂ生菌処理との差も統計的に有意１であ
った（危険率５％〕。このように、Ｍ４Ｓ生菌処ｊｊ＋
により大ＩＩ３に防除効果が改善された。

実施側３ ｈ６　（１１＋後２回移む（（ジビニル鉢で栽培し本葉
が８枚で、播種後９０日を経過し、本州定植苗の天理し
た懸濁液とＭ４Ｓの生菌の懸濁液を調整した（刷１１菌
濃度：１０”ｆ同／ｍｌ）。この懸濁液に、それぞれ２
０本のナス苗を２時間浸漬した後直径１５ｍの針に定植
した。なお対照区のナス苗は殺菌蒸留水に２時間浸漬し
た。４日俊に病原性のある青枯病閑の懸濁液を実施例１
と同様に与えｐ−０さらに１４日後、発病状態を観察し
、実施例１と同様に発病率、平均罹病指数および防除率
をめた。結果は表−５に示す。

Ｍ４ｓ　（生菌）区　１５％　０．１５　９６．２％対
照区　８５％　３．９５　− いずれの処理区も発病率が低く、平均罹病指数も処理区
のほうが絖Ｂ１″的に有腫に低かった（危険率１％）。

またＮ４Ｂ生菌処理のほうがＭ２３Ｒ加４詣菌処理より
も発病率が低く、平均罹病指数も低かった。

実施例４ 実施例１と同様に育成したタバコ苗（品拙：白遠州１号
）を１区につき５４本ずつ供試した。

実施例！と同様に、Ｍ４Ｓの生菌の懸濁液（眉１１菌濃
度、１０　個／ｄ）Ｋタバコ苗の根部を３０分間浸漬し
た。なお対照区には何らの処理も行なわなかった。浸漬
処理終了後ただちに、当場内のタバコ立枯病汚染畑、２
か所に移植した。移植後は通常の方法で栽培、双極、乾
燥を行なっ＋０８ た。移植−ｔ−ｔｔ＝ａ＝日後に発病調査を実施例１に
準じ゛ノ′−ル当シの収量および代金を算出した。結果
は表−６および表−７に示す。

表−６ 処理区　７８％　２．７６　２ｂ、６ｖｂ２５５、ＯＫ
ｇ　３１８．１４５円対照区　９６チ　３．７６　−　
２２６．７ＫＦ　２９０，６６４円表−７ 処理区　４３チ　１．２２　５１．４チ　２８７．６Ｋ
Ｆ３ｇ４，４１９円対照区　７２チ　２．５１　−　２
８１．６Ｋｔ　３３２，９４６円発病率はいずれも処理
区のほうが低く、平均罹病指数も処理区のほうが統計的
に有意に低く（危険率５％）、防除率は２６．６％と５
１．４％であった０ 特許出願人　日本専売公社 「　わ℃　ネ市　・　−正　書 昭和６０年３月６０ 特ｄ１庁長官　志　賀　学　殿 １、事ヂ１の表示 ｌ持願閉５９−２１９１２号 ２、発明の名称 ナス科植物のト壌病害防除方法 ３、補ｉｔをする者 ・１７性との関係　特許出願人　□ １１本専売公ン１ ４、指定代理人 住所　東京都港１メー虎ノ門−１’　ＩＩ　２番１号５
、自発補止 ６、補正の対象 明細−； ；′１．。、：ｒ、ｔ；’ｊ！・　 ７、補正の内容 （１）すＪ細書第１Ｒ第１９行目ないし同第２頁第２゜
行目にある「したが、本願発明は、・会・提供、する。

」を削除し、この部分に、「した。また、シュドモナス
・ソラナビアラムの病原性株から誘発し、た突然変界株
、の生菌をタバコの根に接種する。

こと吟よって、タバコ立枯病の発病を抑制した例が米国
で報告された。その報告の中でタバコ）′１枯　、病の
抑制効果が最も高いとされたのはシュドモナス二、、ソ
ラナシアラム３０５菌株（以下、弔に「３０５菌」と略
記する）である。

れている方法よりも効果が優れたタバコＳ”ｌ枯病及こ
の発明の目的は、」―記した従来より提案さびナス科植
物青枯病の呻除方法を提供することである。

、すなわち、この完、明は、シュドモナス・ソラナシで
ラム−Ｈ４Ｓの生菌を植物の根部に接種する。。

ことからケるタバコ立枯病及びナス科植物青枯病の防、
除ｐ法を提供μる。

この−明の方法によると、タバコ立枯病及びナス旧植物
青枯病を非常に効果的に防除することができる。しかも
、シュドモナスφソラナシアラム・ＭｄＳは全く病原性
がなく、必要とする作物にだけ（＠きかけるので環境を
害さない。

この発明の方ツノ、に用いられる菌株は、シュドモナス
−ソラナシアラム＠Ｍ４Ｓ　＋Ｗａである。この菌株は
後に訂述する方法によって、病原性のシュドモナス・ソ
ラナシアラムからの突然変異によってＣＩられたもので
あり、１９８３年１２／ＪＩ４Ｈに１゛業技術院微生物
Ｉ−業研究所に寄託されている（微Ｊ二研菌′８第７３
７０　！″ｆ） シュドモナス・ソラチシアラＪ、−Ｍ４Ｓは次の菌学的
性質を有する。

■、形態学的性質 グラム陰性桿菌　約０．５−０．８　ｇｍ　ｘ　０．９
−２．０　ｇｍの鞭ｔ１〜４木を４１し運動性がある。

Ｉｌ、培養基にの特性 ＴＺＣＶ１７−板培地（カザミノ酸１ｇ、ペプトン１０
ｇ、ブドウ糖１０ｇ、寒天１８ｇ、水１　ｊ７　ット／
Ｉｚ　＋、：　０．ＯＯ”ｄの２．３．５−）リフェニ
ル塩化テトランリウムを添加：ケルマン（Ｋｅｌｒａａ
ｎ、Ａ、）　７　イトバソｔｒジー（Ｐｈｙｔｏｐａｔ
ｈｏｌｏｇｙ）誌４４巻ｐｐ、８９３−［５（１９５４
）に記載）トで小型の流動性のない集落を形成する。

チロシンを含んだ寒天培地上で褐色色素をやや産生ずる
。

ＩＩｌ、生理学的性質 好気性 生Ｙｆ温度　ｌＯ〜３８℃ 生γｒ好適温度　２８〜３０℃ 亜硝酸の生成反応　陽性 デンプンの分解　陰性 ゼラチンの分解　陰性 ４ｌ−Ｙｒ　ＰＨ４，３〜９．０ ［Ｖ、利用する炭素源 ラクトース、グルコース、フルクＩ・−ス、シュクロー
ス、グルコン酎、パラヒドロヤシ安り１Ｊ香酸 利用しない炭素源 アラヒノース、マロン酸、エタノール、テストステロン これらの性質はＢｕｃｈａｎａｎ、Ｒ，Ｅ、　＆　Ｇｉ
ｂｂｏｎｓ。

Ｎ、Ｅ、ｍ　Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｒ　
ＤｅｔｅｒｍＩｎｒｓｔｒｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ
　８ｔｈ　ｅｄ、　ｐｐ、２３＋−２３３に記載されて
いるシュドモナス・ソラナシアラムの性質と同一であり
、同種細菌であることが確認された。

もっとも、シュドモナスΦソラナンアラム・ＭｄＳ　ｌ
オ、この文献に記載された周知の親菌株であるシュドモ
ナス・ソラナシアラムとは、流動性のない小型のコロニ
ーを形成する点（親菌株は流動＋１のあるコロニーを形
成する）、及び親菌株の生ｒｌをｌｉｔ！害する物質を
培地中に産生ずる点（親菌株Ｉオそれ１“１身の生ＹＦ
をｎｏ　ｒｓする物質を産生することがない）において
親菌株とその菌学的性質が異なる。」を挿入する。

（２）明細書第２頁第９行１−１ないし同第２頁第１７
行１１にある［本発明者らは、・拳・である。」を削除
する。

（３）明細書第４頁第２行ト１にある「浸漬する。」と
「この処理時期は」との間に、「なお、この明細書にお
いて「根部」とは土壌を用いて栽培した際に４：環中に
あって水分や栄養分の吸収を行なう部分であり、ジャガ
イモのＡ１１ｌ茎などをも包含する。」を挿入する。

（４）明細書第４頁第６行［１にある「浸漬すればよい
。」の後に［また、適用時期は、本圃に移植する前のα
ｆの段階が好ましく、通常、タバコの場合は播種後４０
〜６ｏ［１、ナスの場合は播種後６０〜１２０　Ｂ、ト
マトの場合は播種後６０〜８゜１１、ピーマンの場合は
播種後５５〜８ｏ１１桿１ｗで）、ＱＩ あり、ジャガイモの場合は木旗に移植するために切った
時に適用することが好ましい。」を挿入する。

（５）明細書第５頁第２行目にある「効果が高い」と同
頁第３行［１にある「実施例１」との１１１１に次の文
仝を挿入する。

ｒ坏工上孟ｌ）２」じし江とＬムＡ　−Ｍ４針算鬼１１
、突然変Ｊ！！菌株コａニーの分離 タバコ立枯病菌として知られるシュドモナス・ソラナシ
アラム（ｕ−７菌株）を、試験管内でＣＰＧ培地（カザ
ミノｍ１ｇ、ブドウ糖１０ｇ、ペプト゛／ｌｏｇ、水１
００１００Ｏを用いて暗黒ドに３７℃で１週間静置培養
した。これを、滅菌した白金耳を用いてＣＰＧ寒天培地
、Ｊ＝に画線培養した。寒天培地上に白金Ｉ■で線を引
いた場合、線の起点付近は塗布される培養液の濃度が濃
いのでコロニーが密集しているが、線の末端付近になる
と塗布される培養液のｉ２１ＰＶが薄くなって、分離し
たコロニーが得られる。この方法により、３５個の分離
したコロニーがクリられた。

２、病原性ドア菌株と競合してよく生育する菌株のｒ択
　ＣＰ　（Ｊ寒天培地を作り、寒天が固化する直前の約
４５℃まで放冷し、シュドモナスΦソラナシアラムＵ−
７菌株の懸角液（１０９個／１）をｌす７）ル当たり１
　ｍ１Ｍ加後１ただちに直径９ｃｍのシャーレに１５ｍ
１づつ分注した。寒天が固化した後、先に得られた３５
の菌株をそれぞれ画線培養した。２７°Ｃで４８時間培
養後、各菌株の生Ｙｆ状態を調へたところ、１１の菌株
が良好に生育していた。

３、非病原性菌株の選択 先に得られた１１菌株の懸濁液（１０個／１）を葉肉注
射法によって、播種後ｌＯ週間以−にを経過したタバコ
の、子葉から８〜１０枚目の展開葉に接種した。Ｕ−７
菌株と異なり、いずれの菌株も接種葉以外には萎凋症状
を起こさなかったが、葉肉注射した葉全体を萎凋させる
菌株及び葉肉打射した部分の周囲を壊死させるものがほ
とんどであった。これらＩｆ菌株のうちｌ菌株のみが、
注入部位以外に壊死を引き起こさなかった。この最も病
原性の低い菌株が本発明に用いられるシュドモナス・ソ
ラナシアラム・Ｍ４Ｓである。

さらに、これら１１菌株のＦ二記懸濁液中に１：記タバ
コの根部を浸漬することによって各菌株を接種し、発病
状態を観察した。１１菌株のうち２菌株が全く病気を引
き起こさなかった。この２菌株の１つは本発明に用いる
Ｍ４Ｓ菌株であった。

４、病原性シュドモナスφソラナシアラムＵ−７生育阻
害菌株の選択 先に得られた１１菌株を、直背９ｃ＋ｍのシャ・−しに
分注したＴＺＣ平板培地Ｈに、各突然変異株を画線し２
７℃で３８時間培養した０次に、各菌株が生ＹＴ　した
これらの１１ｉ板ｌ−に、ＴＺＣ培地に寒天が固化する
直前にＵ−７菌懸濁、液（ｉｏ９個／１）を１リンドル
当たり１１のＭ合で加え混合したものを９１ずつ分注１
重層した。放冷後、直ちに２７℃でさらに３６時間培養
した。いずれの菌株も、それらが生１１　した用層培地
１−のＵ−７ｉＪの生育を阻止したが、その中で特に厳
しく　４；ｙ、ｒを阻害したものが２株あった。これら
のうちの１つは本発明に用いられるＮ１３菌株であった
。

１記したよ・うに、この発ＩＪＩＪに用いられるシュド
モナス・ソラナシアラム・Ｍ４Ｓは、病原性のンユドモ
ナス・ソラチシアラｌ、Ｕ−７株から１１られた３５の
突然変異株の中で、最も病原性が低く、がっ、Ｕ−７と
競合して最も皐〈生育し、かつ、Ｕ−７菌株のノ１イＩ
を最も厳しく阻害するという、３つの性質を兼ね備えた
理想的な菌株であることがわかる。」 （８）明細１り第１ｏ頁ドから４行１１にある「実施例
４」と同頁ドから３行目にある「実施例１と」との間に
次の、文ぐを挿木する。

、「　減菌蒸留水に、Ｍ４Ｓ生閑と、従来よりタバコケ
枯病防除に効果のあることが報告されている３０５閑株
の生菌をそれぞれ細菌濃度が１０’個１１になるように
懸濁した。対照として減ｌ３Ｉｉ蒸留水も用いた。タバ
コ２４本ずつをそれぞれの液に３０分間侵漬した。浸漬
後、実施例１と全く同様に操作及び評価を行なった。同
じ実験を２回行なった。結果を表６（実験Ｉ）及び第７
表（実験ＩＩ）に）Ｉ＼　□、す。

表　６ 表　７ ２種類の病原菌を接種したいずれの例とも。

ＭｄＳ生菌で処理をしたタバコの発病−Ｖの方が低く、
３０５菌の生菌で処理したタバコの発病率は対１ｉ（Ｉ
　ｌメーよりやや低い（実験Ｉ）か又はやや高かった（
実験Ｉ＋）。また、１ｉ均罹病指数も同じ順序であり、
対！！ぐ１バとＭ４Ｓ処理区との差は統Ａ１的に有意で
あったが（危険イ１１％）’、３０５菌処理１メ−と対
照じ−との間には統工１的に右、α、な差はなかった。

実ｊＬ例」 播種後４ｉ１！１間を経過したトマ）　＋’＋’ｉ　（
品種二福％ｐｌＯＯ号）を供試した。滅菌蒸留水で処理
した植物の数が２０木であることを除き、実施例４と同
様に１−２１−　ｉ°１゛１を処理した。処理後、１／
ｉ’、　ｆ￥１２ｃｍの植木鉢に鉢植えし、４１Ｊ後に
病原性のあるナス１１ν１物ｉ’ｆ枯病菌の懸濁液を実
施例１と同様にＵ、えた。

さらにｌ　ＯＩＩ後、発病状！ｌｉを観察し、実施例１
と同様に発病−↑イ、＝Ｐ均罹病指数及び防除率をめた
。結果を表８に示す。

表　８ いずれの処理１メも対照区に比べて発病率が低く、平均
罹病指数も処理区の方が低かった。特にＭＡＳ生菌で処
理したものの方が３０５’ｌ；ｉＭ＋で処理したものよ
りも発病率が低く、＝Ｆ均罹病指数も対照区に比べて統
３１的に有意に低かった（危険率Ｉχ）。

実施例６」 （７）明細書第１１頁第１０行トｊにある１表−６１を
ｒ表９」と訂１Ｆする。

（８）明細書ｆＢ　１１頁第１０行に１にある［表−７
１を［表−１０４と訂１［する。

（９）明細書第１１頁ｆｆＳ＋１１行１１にある１表−
６Ｊを「表−９」と訂正する６ （１０）明細書第１１頁ｆｆＳ１１行１−１以降にある
１表−７」を１表−１０Ｊと訂正する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 生きた細菌シュドモナス・ソラナシアラム・Ｍ４Ｓを植
   物の根部に接種することを特徴とするタバコ立枯病およ
   びナス科植物青枯病の防除方法。