JPS60184021A - グルタミン酸レセプタ−阻害物質 - Google Patents
グルタミン酸レセプタ−阻害物質Info
- Publication number
- JPS60184021A JPS60184021A JP59038677A JP3867784A JPS60184021A JP S60184021 A JPS60184021 A JP S60184021A JP 59038677 A JP59038677 A JP 59038677A JP 3867784 A JP3867784 A JP 3867784A JP S60184021 A JPS60184021 A JP S60184021A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- water
- aqueous solution
- silica gel
- glutamic acid
- extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1767—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/10—Animals; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/16—Arachnids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はグルタミン酸レセプター阻害作用を有する新規
化合物またはその塩、ならびにその製造法に関する。当
該化合物はジョロウグモ（Ｊｏｒ。
化合物またはその塩、ならびにその製造法に関する。当
該化合物はジョロウグモ（Ｊｏｒ。
５ｐｉｄｅｒｓ Ｎｅｐｈｉｌａ ｃｌａｖａｔａ ）
の毒腺中に含まれる化合物である。〔グルタミン酸レセ
プターについての総説はＨ，Ｍ、 Ｇｅｒｓｃｈｅｎｆ
ｅｌｄ、 Ｐｈｙｓｉｏｌｏ−ｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅ
ｗｓ、 ５３巻、１〜９２頁（１９７３））昆虫などの
節足動物はジョロウグモに咬まれると麻痺状態となシ、
ついでクモの餌食となる。従ってジョロウグモの体中に
は昆虫などの節足動物の神経を麻痺させる物質が存在す
るであろうと古くから考えられていた。本発明の発明者
の１人である用台はジョロウグモの毒腺中にグルタミン
酸作動性シナプスを特異的に遮断する成分が存在するこ
とを、イセエビ（Ｐａ１ｉｎｕｓｕｓ ｊａｐｏｎｉｃ
ｕａ ）の歩脚の神経筋接合部を用いて証明した。〔Ｎ
。
の毒腺中に含まれる化合物である。〔グルタミン酸レセ
プターについての総説はＨ，Ｍ、 Ｇｅｒｓｃｈｅｎｆ
ｅｌｄ、 Ｐｈｙｓｉｏｌｏ−ｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅ
ｗｓ、 ５３巻、１〜９２頁（１９７３））昆虫などの
節足動物はジョロウグモに咬まれると麻痺状態となシ、
ついでクモの餌食となる。従ってジョロウグモの体中に
は昆虫などの節足動物の神経を麻痺させる物質が存在す
るであろうと古くから考えられていた。本発明の発明者
の１人である用台はジョロウグモの毒腺中にグルタミン
酸作動性シナプスを特異的に遮断する成分が存在するこ
とを、イセエビ（Ｐａ１ｉｎｕｓｕｓ ｊａｐｏｎｉｃ
ｕａ ）の歩脚の神経筋接合部を用いて証明した。〔Ｎ
。
Ｋａｗａｉ 、 Ａ、Ｎｉｗａ ａｎｃＬ Ｔ、 Ａｂ
ｅ、 Ｂｒａｉｎ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ。
ｅ、 Ｂｒａｉｎ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ。
２４７巻、１６９〜１７１頁（１９８２） ｉ Ｎ。
Ｋａｗａｉ 、 Ａ、 Ｍｉｗａ、 ＩＩＬ ５ａｉｔ
ｏ ａｎｄ ｋＬＹｏｓｈｉｏｋａ。
ｏ ａｎｄ ｋＬＹｏｓｈｉｏｋａ。
Ｍｉｃｒｏｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ Ｉｎｖｅ
ｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ ｏｆＭａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅ
ｎｔｒａｌ Ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ （１９８３−
８、２５，Ｃａｎｂｅｒｒａ、Ａｕ５ｔｒａｌｉａ ）
―購演要旨集、４頁； Ｎ、 Ｋａｗａｉ、 Ａ Ｍｉ
ｗａ、 Ｍ、 ８ａｉｔｏ ａｎｄ Ｍ。
ｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ ｏｆＭａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅ
ｎｔｒａｌ Ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ （１９８３−
８、２５，Ｃａｎｂｅｒｒａ、Ａｕ５ｔｒａｌｉａ ）
―購演要旨集、４頁； Ｎ、 Ｋａｗａｉ、 Ａ Ｍｉ
ｗａ、 Ｍ、 ８ａｉｔｏ ａｎｄ Ｍ。
Ｙｏｓｈｉｏｋａ、 ２９ｔｈ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ｏ
ｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒ −ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉ
ｏｎ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ５ｃｉｅｎ
ｃｅｓ（１９８３，８，２９、５ｙｄｎｅｙ、 Ａｕ５
ｔｒａｌｉａ ） 、講演要旨集、８９頁； Ｎ、 Ｋ
ａｗａｉ、 ８ ｔｈ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅｅｎ Ｎ
ｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ （１９８３，１１，２５、
Ｇｉｆ。
ｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒ −ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉ
ｏｎ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ５ｃｉｅｎ
ｃｅｓ（１９８３，８，２９、５ｙｄｎｅｙ、 Ａｕ５
ｔｒａｌｉａ ） 、講演要旨集、８９頁； Ｎ、 Ｋ
ａｗａｉ、 ８ ｔｈ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅｅｎ Ｎ
ｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ （１９８３，１１，２５、
Ｇｉｆ。
Ｆ’ｒａｎｃｅ ） ＊講演要旨集、１０頁〕。本発明
者らは上記の文献および講演要旨集に記載のグルタミン
酸作動性シナプスを特異的に遮断する成分をジョロウグ
モの毒腺からＱｆｆして手本し命婚果、この物質が新規
なグルタミン酸レセプター阻害作用を有する化合物であ
ることを見出しさらに検討を行なって本発明を完成した
。
者らは上記の文献および講演要旨集に記載のグルタミン
酸作動性シナプスを特異的に遮断する成分をジョロウグ
モの毒腺からＱｆｆして手本し命婚果、この物質が新規
なグルタミン酸レセプター阻害作用を有する化合物であ
ることを見出しさらに検討を行なって本発明を完成した
。
これまでグルタミン酸レセプター阻害作用を有する化合
物としては、Ｌ−グルタミン酸ジエチルおよびジメチル
エステｌ （Ｈ，Ｖ、 Ｗｈｅａｌ ａｎｄ Ｇ、 Ａ
。
物としては、Ｌ−グルタミン酸ジエチルおよびジメチル
エステｌ （Ｈ，Ｖ、 Ｗｈｅａｌ ａｎｄ Ｇ、 Ａ
。
Ｋｅｒｋｕｔ、 Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、 ５１
０巻、７９〜８１頁（１９７５））。
ｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、 ５１
０巻、７９〜８１頁（１９７５））。
Ｌ−グルタミン酸α−メチルエステル〔αＬｏｗａｇｉ
ｅ ａｎｄ Ｈ，Ｍ、 Ｇｅｒｓｃｈｅｎｆｅｌｄ、
Ｎａｔｕｒｅ。
ｅ ａｎｄ Ｈ，Ｍ、 Ｇｅｒｓｃｈｅｎｆｅｌｄ、
Ｎａｔｕｒｅ。
２４８巻、５３３〜５３５頁（１９７４））あるいはＬ
−プロリン〔ん７ａｎ Ｈａｒｒｅｖｅｌｄ、 Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆＮｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇ７＊ １１巻、
５１９〜５２９頁（１９８０）〕が知られているが、こ
れらの化合物がグルタミン酸レセプター阻害作用を示す
最低濃度がｉｏ ”Ｍ以上であるのに対して精製された
本発明の阻害物質は１０ Ｍという低濃度でも極めて特
異性の高いグルタミン酸レセプター阻害活性を示す。作
用部位はシナプス後膜である。この阻害作用は水洗して
も消失しない不可逆的な作用である。このことから本発
明の阻害物質のレセプターとの結合が既知のものにくら
べてはるかに強すことが示される。従って本阻害物質を
標識化することにょジグμタミン酸レセプターの単層、
構造解析９局所分析などの研究に有用になると考えられ
本阻害物質の利用価値は高い。−また本発明の阻害物質
は強い殺虫作用を有していて、稲・茶・野菜・果物など
の害虫に対し１０ｐｐｍの濃度で高い殺虫効果を示す。
−プロリン〔ん７ａｎ Ｈａｒｒｅｖｅｌｄ、 Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆＮｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇ７＊ １１巻、
５１９〜５２９頁（１９８０）〕が知られているが、こ
れらの化合物がグルタミン酸レセプター阻害作用を示す
最低濃度がｉｏ ”Ｍ以上であるのに対して精製された
本発明の阻害物質は１０ Ｍという低濃度でも極めて特
異性の高いグルタミン酸レセプター阻害活性を示す。作
用部位はシナプス後膜である。この阻害作用は水洗して
も消失しない不可逆的な作用である。このことから本発
明の阻害物質のレセプターとの結合が既知のものにくら
べてはるかに強すことが示される。従って本阻害物質を
標識化することにょジグμタミン酸レセプターの単層、
構造解析９局所分析などの研究に有用になると考えられ
本阻害物質の利用価値は高い。−また本発明の阻害物質
は強い殺虫作用を有していて、稲・茶・野菜・果物など
の害虫に対し１０ｐｐｍの濃度で高い殺虫効果を示す。
これらの重要害虫としてはたとえばニカメイチュウ、ア
オムシ、ツマグロロコパイ、ットムシ、イラガ、コナガ
、ウンカ、アブラムシ、ハダニなどがあげられる。前記
したグルタミン酸レセプターに関する総説にはこれらの
害虫がグルタミン酸レセプターを有していると記載され
ているので、本発明の阻害物質の殺虫作用はグルタミン
酸レセプター阻害作用に基くものと考えられる。
オムシ、ツマグロロコパイ、ットムシ、イラガ、コナガ
、ウンカ、アブラムシ、ハダニなどがあげられる。前記
したグルタミン酸レセプターに関する総説にはこれらの
害虫がグルタミン酸レセプターを有していると記載され
ているので、本発明の阻害物質の殺虫作用はグルタミン
酸レセプター阻害作用に基くものと考えられる。
本阻害物質は後記するように水溶性の化合物なので、主
に水溶液として謄写される。本阻害物質は従来の有機リ
ン系・有機塩素系・カーバメート系・ピレトリン系など
の殺虫剤よシも人畜毒性、魚毒性は低い。
に水溶液として謄写される。本阻害物質は従来の有機リ
ン系・有機塩素系・カーバメート系・ピレトリン系など
の殺虫剤よシも人畜毒性、魚毒性は低い。
つぎに本発明の阻害物質の製造法について説明する。製
造法は抽出、精製の各工程からなるが、く− 抽出操作を行う前に破砕の工程を加えるとによシ効果的
な抽出を行うことができる。
造法は抽出、精製の各工程からなるが、く− 抽出操作を行う前に破砕の工程を加えるとによシ効果的
な抽出を行うことができる。
１）破砕
ジョロウグモを捕集し破砕する。破砕は虫体そのままを
用いてもよいが、毒腺のみをとシ出して破砕するのがよ
り好ましい。破砕は非機械的に行なってもよいし機械的
に行なってもよい。破砕に用いられる機械としては通常
のアトマイザ−、ホモジナイザーのほか、超音波による
破砕も採用される。つぎの抽出工程で使用する溶媒中に
虫体もしくは毒腺を入れ、超音波処理をして破砕するの
が最適の方法である。
用いてもよいが、毒腺のみをとシ出して破砕するのがよ
り好ましい。破砕は非機械的に行なってもよいし機械的
に行なってもよい。破砕に用いられる機械としては通常
のアトマイザ−、ホモジナイザーのほか、超音波による
破砕も採用される。つぎの抽出工程で使用する溶媒中に
虫体もしくは毒腺を入れ、超音波処理をして破砕するの
が最適の方法である。
２）抽出
抽出溶媒は水、電解質水溶液または水と均一に混ざシう
る有機溶媒と水との混合溶媒などが用いられる。電解質
水溶液としては食塩水、塩化アンモニウム水溶液、硫酸
ナトリウム水溶液などが用いられる。電解質水溶液はＯ
〜１．５％（Ｗ／Ｖ ） 。
る有機溶媒と水との混合溶媒などが用いられる。電解質
水溶液としては食塩水、塩化アンモニウム水溶液、硫酸
ナトリウム水溶液などが用いられる。電解質水溶液はＯ
〜１．５％（Ｗ／Ｖ ） 。
好ましくは０．３〜０．９％（Ｗ／Ｖ ）の濃度範囲の
ものを用する。水と均一に混ざシうる有機溶媒としては
たとえばメタノール、エタノールなどのアμコーμ類が
あげられる。抽出溶媒として最も好ましくは０．３〜０
．５％（Ｗ／１食塩水が用いられる。
ものを用する。水と均一に混ざシうる有機溶媒としては
たとえばメタノール、エタノールなどのアμコーμ類が
あげられる。抽出溶媒として最も好ましくは０．３〜０
．５％（Ｗ／１食塩水が用いられる。
溶媒なしで破砕した場合は抽出溶媒を加え、また、溶媒
中で破砕したものはそのままで抽出操作を行なう。抽出
は長時間静置しておいてもよいし、機械を用いて短時間
で行なってもよい。ここで用いられる機械としては通常
の攪拌機や遠心分離機などがめげられる。抽出後の抽出
液と残渣部分との分離が容易なことから遠心分離機を使
用するのが有利である。遠心の速度は１．０００〜１０
０．０００回転／分、遠心の時間は１０分〜３時間がよ
い。
中で破砕したものはそのままで抽出操作を行なう。抽出
は長時間静置しておいてもよいし、機械を用いて短時間
で行なってもよい。ここで用いられる機械としては通常
の攪拌機や遠心分離機などがめげられる。抽出後の抽出
液と残渣部分との分離が容易なことから遠心分離機を使
用するのが有利である。遠心の速度は１．０００〜１０
０．０００回転／分、遠心の時間は１０分〜３時間がよ
い。
活性成分の追跡はのちに詳しく述べる試験法を用いて、
すなわちイセエビの歩脚の神経筋接合部のシナプスを用
いてその興奮性シナプス後電位（Ｅｐｓｐ）を測定する
ことによυ行う。測定の結果、活性成分が抽出液の方に
移行しているのがわかる。
すなわちイセエビの歩脚の神経筋接合部のシナプスを用
いてその興奮性シナプス後電位（Ｅｐｓｐ）を測定する
ことによυ行う。測定の結果、活性成分が抽出液の方に
移行しているのがわかる。
活性成分は酢酸エチμ、塩化メチレンなどの通常の有機
溶媒に転溶させようとしても実質的には転溶されずに水
層に残存する。
溶媒に転溶させようとしても実質的には転溶されずに水
層に残存する。
３） 精製
好ましくは上記抽出液から高分子の蛋白質を除去する。
高分子蛋白質の除去は抽出液に酸を加え、生ずる沈殿を
除去することによシ行なわれる。蛋白質の沈殿に用いら
れる酸としてはたとえば過塩素酸、過ヨウ素酸、トリク
ロル酢酸などがあげられる。酸は濃度０．２〜２Ｍのも
のを用い、沈殿を生成しなくなるまで加える。つぎに高
分子蛋白質を除いた抽出水溶液を減圧下に濃縮したのち
、通常用いられる精製操作を加える。精製操作としては
ゲμ−過、イオン交換樹脂による精製、シリカゲμ分取
薄層りロマトグフフイー、高速液体クロマトグラフィー
などが用いられるが、イオン交換樹脂による精製が好ま
しい。たとえば以下のように陰イオン交換樹脂と陽イオ
ン交換樹脂を用いて効率よく精製される。すなわち前記
の濃縮水溶液をまず陰イオン交換樹脂カラムに通すと不
純物は樹脂に吸着されるが活性部分は樹脂に吸着されず
に水溶液中に回収される。回収された活性部分を含む水
溶液を陽イオン交換樹脂カラムに通すと活性成分は樹脂
に＠着され、＠着された活性成分は前記の電解質水溶液
〔たとえば０．１〜１．５％（Ｗ／Ｖ）食塩水〕で溶出
されてくる。陰イオン交換樹脂としてはＤＥｉＡＥｉ−
セルロース、ＱＡＲニーセファデックス、ダウエックス
ＩＸ８など、陽イオン交換樹脂としてはＣＭ−セファデ
ツクヌ、ダウエックス５ｏｗなどが用いられる。またた
とえばシリカゲル分取薄層クロマトグラフィーによる精
製はつぎのように行なわれる。すなわち活性成分を含む
水溶液をシリカゲル薄層クロマトグラフィー用フレート
上にスポットしてたとえばフェノ−μ−水混合溶媒（ａ
：１（ｖ／ｙ））で展開すると、フルオレスカミンでけ
い光を発する本阻害物質がＲｆ値０．２０の位置に検出
される。そこで活性成分を含む水溶液をシリカゲル分取
薄層プレート上に塗布し、上記の混合溶媒などで展開後
、本阻害物質に相当する部分をかきとシ、水で抽出する
ことにより本阻害物質の水溶液が得られる。ここで得ら
れた本阻害物質はシリカゲル薄層クロマトグラフィー、
ゲルろ過、電気泳動によシ単一の化合物であることが確
認できる。
除去することによシ行なわれる。蛋白質の沈殿に用いら
れる酸としてはたとえば過塩素酸、過ヨウ素酸、トリク
ロル酢酸などがあげられる。酸は濃度０．２〜２Ｍのも
のを用い、沈殿を生成しなくなるまで加える。つぎに高
分子蛋白質を除いた抽出水溶液を減圧下に濃縮したのち
、通常用いられる精製操作を加える。精製操作としては
ゲμ−過、イオン交換樹脂による精製、シリカゲμ分取
薄層りロマトグフフイー、高速液体クロマトグラフィー
などが用いられるが、イオン交換樹脂による精製が好ま
しい。たとえば以下のように陰イオン交換樹脂と陽イオ
ン交換樹脂を用いて効率よく精製される。すなわち前記
の濃縮水溶液をまず陰イオン交換樹脂カラムに通すと不
純物は樹脂に吸着されるが活性部分は樹脂に吸着されず
に水溶液中に回収される。回収された活性部分を含む水
溶液を陽イオン交換樹脂カラムに通すと活性成分は樹脂
に＠着され、＠着された活性成分は前記の電解質水溶液
〔たとえば０．１〜１．５％（Ｗ／Ｖ）食塩水〕で溶出
されてくる。陰イオン交換樹脂としてはＤＥｉＡＥｉ−
セルロース、ＱＡＲニーセファデックス、ダウエックス
ＩＸ８など、陽イオン交換樹脂としてはＣＭ−セファデ
ツクヌ、ダウエックス５ｏｗなどが用いられる。またた
とえばシリカゲル分取薄層クロマトグラフィーによる精
製はつぎのように行なわれる。すなわち活性成分を含む
水溶液をシリカゲル薄層クロマトグラフィー用フレート
上にスポットしてたとえばフェノ−μ−水混合溶媒（ａ
：１（ｖ／ｙ））で展開すると、フルオレスカミンでけ
い光を発する本阻害物質がＲｆ値０．２０の位置に検出
される。そこで活性成分を含む水溶液をシリカゲル分取
薄層プレート上に塗布し、上記の混合溶媒などで展開後
、本阻害物質に相当する部分をかきとシ、水で抽出する
ことにより本阻害物質の水溶液が得られる。ここで得ら
れた本阻害物質はシリカゲル薄層クロマトグラフィー、
ゲルろ過、電気泳動によシ単一の化合物であることが確
認できる。
単離された本発明の阻害物質の諸性質はつぎのとおシで
ある。
ある。
■ 分子量 ５００±２００
■ 酢酸エチルに難溶、水に可溶
■ 水溶液を８０℃、２０分間加熱しても変化しない
■ ０．４Ｍ過塩素酸中で８（１，２０分間加熱しても
変化しない ■ ０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）を使用した電気
ネ動で中性電荷を示す ■ ニンヒドリンで発色、フルオレスカミンでけい光を
発する ■ シリカゲル薄層クロマトグラフィー〔シリカゲルメ
ルク６０．フェノール−水混合ＦＪｉｌｌＸ ３ ：１
（Ｖ／ｌで展開〕でＲｆ値０．２０ 試験法 活性成分の検定はイセエピ歩脚の神経筋シナプスを用い
て行う。イセエピ歩脚の伸張筋を露出し、３Ｍ塩化カリ
ウム水溶液をつめだガラス管微小電極を用いて電位を測
定する。阻害物質の活性はつぎの（１）または（２）の
いずれかによ請求めた。
変化しない ■ ０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）を使用した電気
ネ動で中性電荷を示す ■ ニンヒドリンで発色、フルオレスカミンでけい光を
発する ■ シリカゲル薄層クロマトグラフィー〔シリカゲルメ
ルク６０．フェノール−水混合ＦＪｉｌｌＸ ３ ：１
（Ｖ／ｌで展開〕でＲｆ値０．２０ 試験法 活性成分の検定はイセエピ歩脚の神経筋シナプスを用い
て行う。イセエピ歩脚の伸張筋を露出し、３Ｍ塩化カリ
ウム水溶液をつめだガラス管微小電極を用いて電位を測
定する。阻害物質の活性はつぎの（１）または（２）の
いずれかによ請求めた。
（１）伸張筋の支配神経を単一線維に分離し吸引電極に
よって電気刺激を行う。興奮性神経刺激によシ神経末端
よシグルタミン酸が放出されてレセプターと結合するの
でシナプス後膜に通常３〜５ｍＶの興奮性シナプス後電
位（ＥＰＳＦ）が発生する。
よって電気刺激を行う。興奮性神経刺激によシ神経末端
よシグルタミン酸が放出されてレセプターと結合するの
でシナプス後膜に通常３〜５ｍＶの興奮性シナプス後電
位（ＥＰＳＦ）が発生する。
グルタミン酸レセプター阻害物質はこのＥＰＳＰを５０
％以上低下もしくは消失させる。
％以上低下もしくは消失させる。
（２）グルタミン酸（ＬＭ、ｐＨ８）をガラス管微小電
極内につめ、神経筋シナプスに近づけ、１Ｏ−９Ａ程度
の内向き電流を加えて電気泳動的にＩＭ濃度のグルタミ
ン酸を流す。これによシナプス後膜には通常３〜５ｔｎ
Ｖの脱分極電位（グルタミン酸電位）が生じ、この電位
は加える電流の強さに比例する。グルタミン酸レセプタ
ー阻害物質はこのグルタミン酸電位を５０％以上低下も
しくは消失させる。
極内につめ、神経筋シナプスに近づけ、１Ｏ−９Ａ程度
の内向き電流を加えて電気泳動的にＩＭ濃度のグルタミ
ン酸を流す。これによシナプス後膜には通常３〜５ｔｎ
Ｖの脱分極電位（グルタミン酸電位）が生じ、この電位
は加える電流の強さに比例する。グルタミン酸レセプタ
ー阻害物質はこのグルタミン酸電位を５０％以上低下も
しくは消失させる。
実施例１ 破砕、抽出
国内に棲息するジョロウグモ４００匹から得られる毒腺
１９を超音波洗浄器（Ｂｒａｎｓｏｎ ｃｌｅａ−ｎｉ
ｎｇ ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ｃｏｍｐａｎｙ 製、 Ｂ
−１２）中に５ ｍｌｏ ０．３％（Ｗ／Ｖ）食塩水
とともに入れて１０分間超音波処理したのち、冷却遠心
機（サクマ製作所製、５０Ａ−１型、ローター６Ｂ）に
て１０．０００回転／分、３０分間遠心した。沈渣を５
ゴの０．３％（Ｗ／Ｖ ’）食塩水で上記と同様の方法
で再抽出した。再抽出は計２回行ない、それぞれの上清
を合して食塩水抽出液を得た。（０，３％以外にも０％
、０．９％、１．５％でも抽出を行なったが、０．３％
、０．９％、１．５％の方が０％よシもよい抽出結果を
与えた。） １００μ！の上清を酢酸エチ／ｌ’ｌｏＯμ！で３回抽
出した。抽出液を合しこれを窒素ガスで乾固して残留物
を０６３％（Ｗ／Ｖ ）食塩水に溶解したのち前記の試
験法で検定したところグルタミン酸レセプター阻害活性
はなかった。
１９を超音波洗浄器（Ｂｒａｎｓｏｎ ｃｌｅａ−ｎｉ
ｎｇ ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ｃｏｍｐａｎｙ 製、 Ｂ
−１２）中に５ ｍｌｏ ０．３％（Ｗ／Ｖ）食塩水
とともに入れて１０分間超音波処理したのち、冷却遠心
機（サクマ製作所製、５０Ａ−１型、ローター６Ｂ）に
て１０．０００回転／分、３０分間遠心した。沈渣を５
ゴの０．３％（Ｗ／Ｖ ’）食塩水で上記と同様の方法
で再抽出した。再抽出は計２回行ない、それぞれの上清
を合して食塩水抽出液を得た。（０，３％以外にも０％
、０．９％、１．５％でも抽出を行なったが、０．３％
、０．９％、１．５％の方が０％よシもよい抽出結果を
与えた。） １００μ！の上清を酢酸エチ／ｌ’ｌｏＯμ！で３回抽
出した。抽出液を合しこれを窒素ガスで乾固して残留物
を０６３％（Ｗ／Ｖ ）食塩水に溶解したのち前記の試
験法で検定したところグルタミン酸レセプター阻害活性
はなかった。
実施例２ セファデックスＧ−１０カラム（ゲルろ過）
による精製 実施例１で得られた食塩水抽出液を４０１．減圧下で５
薄ｔまで濃縮した。濃縮液５ｗｔをセファデックスＣ−
１０カラム（２，６ｃｎ＋ｘ ６２ｃｍ）にのせ、精製
水（薬局方規準）を用いて溶出した。０．５ｇｔＺ分の
流速で溶出し、溶出液は５ゴずつ分取した。
による精製 実施例１で得られた食塩水抽出液を４０１．減圧下で５
薄ｔまで濃縮した。濃縮液５ｗｔをセファデックスＣ−
１０カラム（２，６ｃｎ＋ｘ ６２ｃｍ）にのせ、精製
水（薬局方規準）を用いて溶出した。０．５ｇｔＺ分の
流速で溶出し、溶出液は５ゴずつ分取した。
活性成分を含む分画は前記の試験法に従って検定した。
第３１〜３７分画に活性成分の溶出を認めた。
実施例３ ＣＭ−セファデックスＣ−２５カラムによる
精製 実施例２で得られた活性成分を含む分画な４０℃、減圧
下で濃縮・乾固したのち、あらためて０．１Ｍ酢酸アン
モニウム緩衝液（ｐＨ６）Ｏ１８ｒｔｔｌに溶かした。
精製 実施例２で得られた活性成分を含む分画な４０℃、減圧
下で濃縮・乾固したのち、あらためて０．１Ｍ酢酸アン
モニウム緩衝液（ｐＨ６）Ｏ１８ｒｔｔｌに溶かした。
この溶液をＣＭ−セファデックスＣ−２５カラム（２，
６ｃｍＸ ３７ｃｍ）にのせ溶出した。
６ｃｍＸ ３７ｃｍ）にのせ溶出した。
分取は実施例２と同様に行なった。まず０〜１．０Ｍ酢
酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６，グラジェント）で第１
〜１９０分画まで溶出し、ついで２．０）Ａ酢酸アンモ
ニウム緩衝液（ｐＨ６）で溶出すると第２１２〜２３０
分画に本阻害物質の溶出が認められた。
酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６，グラジェント）で第１
〜１９０分画まで溶出し、ついで２．０）Ａ酢酸アンモ
ニウム緩衝液（ｐＨ６）で溶出すると第２１２〜２３０
分画に本阻害物質の溶出が認められた。
実施例４ シリカゲル薄りクロマトグラフィーによる検
出 実施例１で得られた食塩水抽出液、実施例２および３で
得られた活性画分を別々にシリカゲル薄層プレート（シ
リカゲμメμり６０）上にスポットし、フェノ−μ−水
混合溶媒（３： １．Ｖ／Ｖ ）を用いて展開した。展
開後フルオレスカミンでけい光を発する物質を確認した
。フルオＶスカミンノ検出［１Ｌｔｉｔ ｏ ”２ モ
ｙテある。（Ｈ，Ｎａｋａ−ｍｕｒａ ａｎｄ Ｊ、
Ｊ＋Ｐｉａａｎｏ、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏ
ｍａ−ｔｏｇｒａｐｈ７．１２１巻、３３〜４０頁（１
９７６））実施例５ シリカゲル分取薄層クロマトグラ
フィーによる精製 実施例３で得られた活性成分を含む分画を合し、４０℃
、減圧下で濃縮・乾固したのち０．１ ｍｌの水にあら
ためて溶かしてシリカゲル分取薄層プｖ −ト（シリカ
ゲルメμり６０）上に塗布し、フェノ−／レー水混合溶
媒（３：１．Ｖ／Ｖ）を用いて展開した。展開後、本阻
害物質をかきとり￥１４製氷で抽出した。ここで得られ
た本阻害物質は実施例４の方法による純度検定において
薄層上に単一スポットを与えた。
出 実施例１で得られた食塩水抽出液、実施例２および３で
得られた活性画分を別々にシリカゲル薄層プレート（シ
リカゲμメμり６０）上にスポットし、フェノ−μ−水
混合溶媒（３： １．Ｖ／Ｖ ）を用いて展開した。展
開後フルオレスカミンでけい光を発する物質を確認した
。フルオＶスカミンノ検出［１Ｌｔｉｔ ｏ ”２ モ
ｙテある。（Ｈ，Ｎａｋａ−ｍｕｒａ ａｎｄ Ｊ、
Ｊ＋Ｐｉａａｎｏ、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏ
ｍａ−ｔｏｇｒａｐｈ７．１２１巻、３３〜４０頁（１
９７６））実施例５ シリカゲル分取薄層クロマトグラ
フィーによる精製 実施例３で得られた活性成分を含む分画を合し、４０℃
、減圧下で濃縮・乾固したのち０．１ ｍｌの水にあら
ためて溶かしてシリカゲル分取薄層プｖ −ト（シリカ
ゲルメμり６０）上に塗布し、フェノ−／レー水混合溶
媒（３：１．Ｖ／Ｖ）を用いて展開した。展開後、本阻
害物質をかきとり￥１４製氷で抽出した。ここで得られ
た本阻害物質は実施例４の方法による純度検定において
薄層上に単一スポットを与えた。
実施例６ 分子量の測定
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ジョロウグモの毒腺から得ることができ、以下の諸性質
を有するグルタミン酸レセプター阻害物質 ■ 分子ｔ ５００±２００ ■ 酢酸エチルに離溶、水に可溶 ■ 水溶液を８０ｔ、２０分間加熱しても変化しない ■ ０．４Ｍ過塩素酸中で８０℃、２０分間加熱しても
変化しない ■ ０．０１Ｍ！Ｊン酸緩衝液（ｐＨ７）を使用した電
気泳動で中性電荷を示す ■ ニンヒドリンで発色、フッＶオレスカミンでけい光
を発する ■ シリカゲル薄層クロマトグラフィー〔シリカゲμメ
μり６０．フェノ−μ・水混合溶媒３：１（Ｖ／ｌで展
開〕でＲｆ値０．２０
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59038677A JPH06794B2 (ja) | 1984-03-02 | 1984-03-02 | グルタミン酸レセプタ−阻害物質 |
| DE8585301459T DE3574665D1 (de) | 1984-03-02 | 1985-03-04 | Glutamatrezeptorshemmstoff. |
| EP85301459A EP0156540B1 (en) | 1984-03-02 | 1985-03-04 | A glutamate receptor inhibitor |
| US07/059,517 US4855405A (en) | 1984-03-02 | 1987-06-08 | Glutamate receptor inhibitor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59038677A JPH06794B2 (ja) | 1984-03-02 | 1984-03-02 | グルタミン酸レセプタ−阻害物質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60184021A true JPS60184021A (ja) | 1985-09-19 |
| JPH06794B2 JPH06794B2 (ja) | 1994-01-05 |
Family
ID=12531903
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59038677A Expired - Lifetime JPH06794B2 (ja) | 1984-03-02 | 1984-03-02 | グルタミン酸レセプタ−阻害物質 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4855405A (ja) |
| EP (1) | EP0156540B1 (ja) |
| JP (1) | JPH06794B2 (ja) |
| DE (1) | DE3574665D1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63218603A (ja) * | 1987-03-06 | 1988-09-12 | Takeda Chem Ind Ltd | 殺虫剤組成物 |
| JPH08504208A (ja) * | 1992-12-08 | 1996-05-07 | イー・アイ・デュポン・ドゥ・ヌムール・アンド・カンパニー | ヒドロフルオロカーボンおよびヒドロハロフルオロカーボンのフッ素含量を低減する方法 |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0208523A3 (en) * | 1985-07-08 | 1989-04-26 | Peter Norman Russell Usherwood | Glutamate antagonists |
| US5064657A (en) * | 1986-10-20 | 1991-11-12 | University Of Utah | Spider toxins and methods for their use as blockers of amino acid receptor function |
| US4925664A (en) * | 1986-10-20 | 1990-05-15 | University Of Utah | Spider toxins and methods for their use as blockers of calcium channels and amino acid receptor function |
| US5196204A (en) * | 1986-10-20 | 1993-03-23 | University Of Utah Research Foundation | Spider toxins and methods for their use as blockers of calcium channels and amino acid receptor function |
| US5246968A (en) * | 1987-02-03 | 1993-09-21 | Takeda Chimical Industries, Ltd. | Glutamate receptor inhibitor |
| JPH01207284A (ja) * | 1987-10-06 | 1989-08-21 | Takeda Chem Ind Ltd | アミド化合物 |
| WO1989007098A1 (en) * | 1988-02-08 | 1989-08-10 | The Trustees Of Columbia University In The City Of | Butyrl-tyrosinyl spermine, analogs thereof and methods of preparing and using same |
| US5770625A (en) * | 1988-02-08 | 1998-06-23 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Butyryl-tyrosinyl spermine, analogs thereof and methods of preparing and using same |
| US6001824A (en) * | 1988-02-08 | 1999-12-14 | The Trustees Of Columbia University | Butyryl-tyrosinyl spermine, analogs thereof and methods of preparing and using same |
| US4990511A (en) * | 1988-08-03 | 1991-02-05 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Amide compounds, their production and use |
| IT1232311B (it) * | 1989-09-04 | 1992-01-28 | Sclavo Spa | Metodo di purificazione di composti a struttura peptidica o pseudo peptidica a basso peso molecolare. |
| US5461032A (en) * | 1991-03-01 | 1995-10-24 | Fmc Corporation | Insecticidally effective peptides |
| PL168222B1 (pl) * | 1991-03-01 | 1996-01-31 | Fmc Corp | Sposób wytwarzania owadobójczego peptydu PL PL PL |
| SE9102890D0 (sv) * | 1991-10-07 | 1991-10-07 | Hans Evers | Insektsrepelleringsmedel |
| IL104419A0 (en) * | 1992-01-24 | 1993-05-13 | Fmc Corp | Insecticidally effective peptides |
| US5763568A (en) * | 1992-01-31 | 1998-06-09 | Zeneca Limited | Insecticidal toxins derived from funnel web (atrax or hadronyche) spiders |
| US5457178A (en) * | 1993-07-07 | 1995-10-10 | Fmc Corporation | Insecticidally effective spider toxin |
| US5756459A (en) * | 1995-06-07 | 1998-05-26 | Fmc Corporation | Insecticidally effective peptides isolatable from phidippus spider venom |
| ES2318576T3 (es) | 2004-11-04 | 2009-05-01 | University Of Connecticut | Polipeptidos insecticidas y procedimientos para su uso. |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4452888A (en) * | 1980-07-10 | 1984-06-05 | Terumo Corporation | Process for producing a low-molecular weight peptide composition and nutrient agent containing the same |
-
1984
- 1984-03-02 JP JP59038677A patent/JPH06794B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-03-04 DE DE8585301459T patent/DE3574665D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-03-04 EP EP85301459A patent/EP0156540B1/en not_active Expired
-
1987
- 1987-06-08 US US07/059,517 patent/US4855405A/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BRAIN RES=1982 * |
| J.PHYSIOL=1983GB * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63218603A (ja) * | 1987-03-06 | 1988-09-12 | Takeda Chem Ind Ltd | 殺虫剤組成物 |
| JPH08504208A (ja) * | 1992-12-08 | 1996-05-07 | イー・アイ・デュポン・ドゥ・ヌムール・アンド・カンパニー | ヒドロフルオロカーボンおよびヒドロハロフルオロカーボンのフッ素含量を低減する方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06794B2 (ja) | 1994-01-05 |
| EP0156540B1 (en) | 1989-12-13 |
| DE3574665D1 (de) | 1990-01-18 |
| US4855405A (en) | 1989-08-08 |
| EP0156540A1 (en) | 1985-10-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS60184021A (ja) | グルタミン酸レセプタ−阻害物質 | |
| Schoenenberger et al. | A naturally occurring delta-EEG enhancing nonapeptide in rabbits: X. Final isolation, characterization and activity test | |
| Adams et al. | Two classes of channel-specific toxins from funnel web spider venom | |
| Osborne et al. | Patterns of amino acid release from nerve‐endings isolated from spinal cord and medulla | |
| Rodrigues-Simioni et al. | The effects of Bothrops jararacussu venom and its components on frog nerve-muscle preparation | |
| DD262673A5 (de) | Verfahren zur extraktion von lipolhilen proteinen aus zellen der gattung pichia | |
| JPH02503202A (ja) | 膜カルシウムチャンネル類およびカルシウムチャンネルを遮断し、単離し精製する因子および方法 | |
| Aniksztejn et al. | Long-term potentiation in the hippocampus of the anaesthetized rat is not associated with a sustained enhanced release of endogenous excitatory amino acids | |
| Luttges et al. | Degenerative changes in mouse sciatic nerves: electrophoretic and electrophysiologic characterizations | |
| Dudel et al. | Gamma-aminobutyric acid and other blocking compounds in Crustacea: I. Central nervous system | |
| EP0095682B1 (de) | Verfahren zur Herstellung zell- und geweberegenerierender Stoffe | |
| Streeter | Simple partial purification of d‐pinitol from soybean leaves | |
| DE2456589C2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines Plasminogen-Aktivators und denselben enthaltendes Mittel | |
| EP0101063A2 (de) | Neues Polypeptid mit Wirkung auf das Immunsystem, Verfahren zu seiner Isolierung und Reinigung, seine Verwendung und dieses enthaltende Mittel | |
| Tasaki et al. | Abrupt depolarization and bi-ionic action potentials in internally perfused squid giant axons | |
| DE3117934A1 (de) | Neues peptid, verfahren zu seiner gewinnung und dieses enthaltendes arzneimittel | |
| DE69634955T2 (de) | Tripeptidylpeptidase-inhibitoren | |
| DE69508890T2 (de) | Verwendung eines Dekapeptids mit benzodiazepinischer Wirkung zur Herstellung von Arzneimitteln und Diätzusätzen | |
| DE2734150A1 (de) | Verfahren zur gewinnung von human- lysozym | |
| Gray | The electrophoresis and chromatography of plant viruses on filter paper | |
| Kaulen et al. | Metabolic Properties of Human Platelet Membranes | |
| DE2234832C2 (de) | Proteinfreies Hormonkonzentrat von Säugetier-Nebenschilddrüsen, dessen Herstellung und dieses Hormonkonzentrat enthaltende pharmazeutische Präparate | |
| DE2857166C2 (ja) | ||
| DE69838303T2 (de) | Derivate hydroxyprolin | |
| DE2550011A1 (de) | Antihaemophiles mittel und verfahren zu dessen herstellung |