JPS5952745A - リンパ球の幼若化、活性化測定方式 - Google Patents
リンパ球の幼若化、活性化測定方式Info
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- JPS5952745A JPS5952745A JP57163675A JP16367582A JPS5952745A JP S5952745 A JPS5952745 A JP S5952745A JP 57163675 A JP57163675 A JP 57163675A JP 16367582 A JP16367582 A JP 16367582A JP S5952745 A JPS5952745 A JP S5952745A
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/403—Cells and electrode assemblies
- G01N27/414—Ion-sensitive or chemical field-effect transistors, i.e. ISFETS or CHEMFETS
- G01N27/4145—Ion-sensitive or chemical field-effect transistors, i.e. ISFETS or CHEMFETS specially adapted for biomolecules, e.g. gate electrode with immobilised receptors
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の技術分野
本発明は、リンパ球の幼若化および活性化測定方式に関
し、特にＦＥＴを用いてその自動化を図ろうとするもの
である。
し、特にＦＥＴを用いてその自動化を図ろうとするもの
である。
技術の背景
リンパ球の幼化反応は宿主の非特異的な細胞性免疫能を
診断する上で重要である。幼若化はリンパ球が周囲の物
質を吸収して肥大化することであるが、これを促進する
幼若化物質にはインゲン豆から抽出されたレクチンＰ
ＨＡ （ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）が有
名である。この他にもＰ Ｗ Ｍ （Ｐｏｋｅｗｅｅｄ
ｍｉｔｏｇｅｎ）やＬＰＳ等がある。活性化はリンパ球
が静止状態から活動状態に入ることで、幼若化はその一
種である。
診断する上で重要である。幼若化はリンパ球が周囲の物
質を吸収して肥大化することであるが、これを促進する
幼若化物質にはインゲン豆から抽出されたレクチンＰ
ＨＡ （ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）が有
名である。この他にもＰ Ｗ Ｍ （Ｐｏｋｅｗｅｅｄ
ｍｉｔｏｇｅｎ）やＬＰＳ等がある。活性化はリンパ球
が静止状態から活動状態に入ることで、幼若化はその一
種である。
従来技術と問題点
リンパ球の幼若化率を計測する方法には、（１）顕微鏡
によりカウントする方法、（２）チミゾンＩ（を用いて
計測するシンチレーションカウント法、（３）フローサ
イトメータ法、等がある。（１）の方法は例えば、末梢
血を採血し、ＰＢＳで稀釈し、試験管にＦｉｃ。
によりカウントする方法、（２）チミゾンＩ（を用いて
計測するシンチレーションカウント法、（３）フローサ
イトメータ法、等がある。（１）の方法は例えば、末梢
血を採血し、ＰＢＳで稀釈し、試験管にＦｉｃ。
１１− ｌ５ｏｐａｑｕｅ液をとり、その上に稀釈血液
を重層し、遠心して界面に分離されたリンパ球層を回収
し、これにＰＢＳを加えて混和し、遠心して血小板、血
漿成分を除去し、ペレソ１−上に単細胞浮遊液になるよ
うに拡げ、細胞数を計数してＩ Ｘ １０’個／ｍβに
調整する。次にマイクロテストプレート内に濾紙を置き
、ＰＢＳで湿らせ、該プレートの番孔にマイクロシリン
ジでリンパ球浮遊液を注入し、蓋をして静置する。この
間にリンパ球はすべて底面に付着する。次に指示細胞を
それぞれ必要とする孔に加え、遠心し、静置し、その後
プレートをＰＢＳに浸して余剰の赤血球を除去し、次い
でプレートを正置して番孔に固定染色液を加える。その
後プレートに蓋をして倒置の状態にしておく。判定は、
蓋を外して顕微鏡下でプレートを倒置し、青染した有核
細胞中のＥおよびＥＡＣロゼツト形成細胞の百分率を求
めて行なう、という過程を経る。
を重層し、遠心して界面に分離されたリンパ球層を回収
し、これにＰＢＳを加えて混和し、遠心して血小板、血
漿成分を除去し、ペレソ１−上に単細胞浮遊液になるよ
うに拡げ、細胞数を計数してＩ Ｘ １０’個／ｍβに
調整する。次にマイクロテストプレート内に濾紙を置き
、ＰＢＳで湿らせ、該プレートの番孔にマイクロシリン
ジでリンパ球浮遊液を注入し、蓋をして静置する。この
間にリンパ球はすべて底面に付着する。次に指示細胞を
それぞれ必要とする孔に加え、遠心し、静置し、その後
プレートをＰＢＳに浸して余剰の赤血球を除去し、次い
でプレートを正置して番孔に固定染色液を加える。その
後プレートに蓋をして倒置の状態にしておく。判定は、
蓋を外して顕微鏡下でプレートを倒置し、青染した有核
細胞中のＥおよびＥＡＣロゼツト形成細胞の百分率を求
めて行なう、という過程を経る。
また（２）の方法は採血し、試験管内でヘパリンと混和
し、Ｆｉｃｏｌｌ −Ｃｏｎｒａｙ液上に重層し、パス
ツールピペットで中間層にあるｍｏｎｏｎｕｃＡｅａｒ
ｃｅｌｌを採取し、培養液で洗浄し、５ Ｘ １０５
ｃｅｌｌ／ｍβに培養液で調整し、マイクロテストプレ
ートの番孔に分注し、５％ＣＯ２１ｎｃｕｂａｔｏｒで
培養、次いで］１３シミジンを添加しさらに培養し、ハ
ーベスタでリンパ球を採取し、１つずつの−ｅｌｆを切
り離し液ものである。更に（３）の方法は採血し、ＰＢ
Ｓで薄めかつ攪拌し、リンボプレソプ液上に重層し、遠
心し、生じたリンパ球層のみを取出してＰＢＳに混入し
、遠心し、リンパ球を沈殿さセる。このリンパ球に、Ｐ
ＨＡを加えたＲ Ｐ Ｍ １ １６４０培養液を加え、
シャーレに分注、ＣＯ２フラン器で培養、その後リンパ
球を小試験管に集め、遠沈、上清を捨て、トリプシン処
理を行なう。以後培養、遠沈、洗浄、ＲＮａｓｅ処理、
ペプシン処理、エチジウムブロマイド染色などを行なう
。よくピペソテングを行なった後、ＦＣＭ（フローサイ
トメータ）にかけ、ＤＮＡヒストグラムからコンピュー
タ解析により自動的にリンパ球幼若化率を求める、とい
うものである。
し、Ｆｉｃｏｌｌ −Ｃｏｎｒａｙ液上に重層し、パス
ツールピペットで中間層にあるｍｏｎｏｎｕｃＡｅａｒ
ｃｅｌｌを採取し、培養液で洗浄し、５ Ｘ １０５
ｃｅｌｌ／ｍβに培養液で調整し、マイクロテストプレ
ートの番孔に分注し、５％ＣＯ２１ｎｃｕｂａｔｏｒで
培養、次いで］１３シミジンを添加しさらに培養し、ハ
ーベスタでリンパ球を採取し、１つずつの−ｅｌｆを切
り離し液ものである。更に（３）の方法は採血し、ＰＢ
Ｓで薄めかつ攪拌し、リンボプレソプ液上に重層し、遠
心し、生じたリンパ球層のみを取出してＰＢＳに混入し
、遠心し、リンパ球を沈殿さセる。このリンパ球に、Ｐ
ＨＡを加えたＲ Ｐ Ｍ １ １６４０培養液を加え、
シャーレに分注、ＣＯ２フラン器で培養、その後リンパ
球を小試験管に集め、遠沈、上清を捨て、トリプシン処
理を行なう。以後培養、遠沈、洗浄、ＲＮａｓｅ処理、
ペプシン処理、エチジウムブロマイド染色などを行なう
。よくピペソテングを行なった後、ＦＣＭ（フローサイ
トメータ）にかけ、ＤＮＡヒストグラムからコンピュー
タ解析により自動的にリンパ球幼若化率を求める、とい
うものである。
しかし、（１１の方法はマニュアルで数をカウントする
ため時間がかかり、また（２）の方法は放射性物質３Ｈ
を必要とする難点がある。さらに（３）の方法は装置が
高価である欠点がある。加えてこれらの方法では連続し
て活性化、幼若化変化を計測できない欠点がある。
ため時間がかかり、また（２）の方法は放射性物質３Ｈ
を必要とする難点がある。さらに（３）の方法は装置が
高価である欠点がある。加えてこれらの方法では連続し
て活性化、幼若化変化を計測できない欠点がある。
発明の目的
本発明は、ポリトリジン処理等により表面が陽性荷電に
帯電したＦＥＴを用いてリンパ球の幼若化および活性化
変化を自動的に、且つ連続計測しようとするものである
。
帯電したＦＥＴを用いてリンパ球の幼若化および活性化
変化を自動的に、且つ連続計測しようとするものである
。
発明の構成
本発明は、ゲート電極を除いた電界効果トランジスタの
ゲート絶縁層上をポリしリジン処理等で陽性荷電とした
トランジスタを用い、該陽性荷電部にイオン結合でリン
パ球を弱く結合させかつＰＨＡ、ＰＷＭ、ＬＰＳ等の幼
若化または活性化物質を添加して該リンパ球の幼若化、
活性化を促がし、その際生じる該リンパ球の荷電変化を
該トランジスタで計測して幼若化、活性化を測定するが
、以下図示の実施例を参照しながらこれを詳細に説明す
る。
ゲート絶縁層上をポリしリジン処理等で陽性荷電とした
トランジスタを用い、該陽性荷電部にイオン結合でリン
パ球を弱く結合させかつＰＨＡ、ＰＷＭ、ＬＰＳ等の幼
若化または活性化物質を添加して該リンパ球の幼若化、
活性化を促がし、その際生じる該リンパ球の荷電変化を
該トランジスタで計測して幼若化、活性化を測定するが
、以下図示の実施例を参照しながらこれを詳細に説明す
る。
発明の実施例
ポリしリジン（ｐｏｌｙ Ｌ −１ｙｓｉｎｅ）処理さ
れた絶縁物の表面は陽性荷電となり、陰性に荷電してい
るリンパ球がイオン結合で弱く付着することが知られて
いる。このリンパ球をＰＨＡ、ＰＷＭ等で幼若化（また
は活性化）させると該リンパ球の径は肥大化する。この
ときリンパ球の表面荷電の絶対値は不明であるが、中心
部との間に５０ｍＶ程度の電位差が生ずることが知られ
ている。この現象はリンパ球へ出入りするＮａ＋＋ Ｋ
ａ＋、 Ｍｇ”等のイオン量の差にらるものと推測され
ている。本発明は、この荷電変化を上述したポリしリジ
ン処理したＦＥＴで検出しようとするものである。
れた絶縁物の表面は陽性荷電となり、陰性に荷電してい
るリンパ球がイオン結合で弱く付着することが知られて
いる。このリンパ球をＰＨＡ、ＰＷＭ等で幼若化（また
は活性化）させると該リンパ球の径は肥大化する。この
ときリンパ球の表面荷電の絶対値は不明であるが、中心
部との間に５０ｍＶ程度の電位差が生ずることが知られ
ている。この現象はリンパ球へ出入りするＮａ＋＋ Ｋ
ａ＋、 Ｍｇ”等のイオン量の差にらるものと推測され
ている。本発明は、この荷電変化を上述したポリしリジ
ン処理したＦＥＴで検出しようとするものである。
第１図は本発明の一実施例で、（ａｌは断面図、（ｂ）
は部分平面図である。１はプレート容器で、マトリクス
状に配列された多数の開口１ａを備え、開口底面には多
数のＦＥＴ（電界効果トランジスタ）２が配列されてい
る。ＦＥＴ２は第２図に示すようにゲート電極がなく、
ゲーＩ・絶縁膜３の表面ばポリトリジン処理で陽性に帯
電している。従って、ここに幼若化または活性化して陰
性の荷電を帯びたリンパ球４が静電気力により付着する
と、ｎ型シリコン基板５の表面にｐチャネルが形成され
る。
は部分平面図である。１はプレート容器で、マトリクス
状に配列された多数の開口１ａを備え、開口底面には多
数のＦＥＴ（電界効果トランジスタ）２が配列されてい
る。ＦＥＴ２は第２図に示すようにゲート電極がなく、
ゲーＩ・絶縁膜３の表面ばポリトリジン処理で陽性に帯
電している。従って、ここに幼若化または活性化して陰
性の荷電を帯びたリンパ球４が静電気力により付着する
と、ｎ型シリコン基板５の表面にｐチャネルが形成され
る。
６．７はｐ型のソースおよびドレイン領域で、これらの
リードは容器１の底面を貫通して個々に取出される。Ｆ
ＥＴ２のチャネルサイズはリンパ球４の径と同程度にし
てあり、該リンパ球が被着しＰＨ，Ａ、ＰＷＭ等の幼若
化物質に反応する（負電位が変ると）と、Ｆ ＥＴ ４
のソース・ドレイン電流が変り、該反応が検知される。
リードは容器１の底面を貫通して個々に取出される。Ｆ
ＥＴ２のチャネルサイズはリンパ球４の径と同程度にし
てあり、該リンパ球が被着しＰＨ，Ａ、ＰＷＭ等の幼若
化物質に反応する（負電位が変ると）と、Ｆ ＥＴ ４
のソース・ドレイン電流が変り、該反応が検知される。
上記構成により幼若化物質を入れてからどの程度の時間
でどれだけの幼若化反応が生ずるか（幼若化時間、活性
化時間）を計測できる。勿論、一定時間後の幼若化数か
ら幼若化率（活性化率についても同様）を計測すること
もできる。尚、入れるリンパ球はＦＥＴ１個当り１個と
なるようにしてもよいが、一定量のリンパ球を入れ、そ
れらが全て反応したときの電位変化の期待値を１００と
し、実際に得られた電位変化から何％のリンパ球が幼若
化（活性化）したかを求めてもよい。
でどれだけの幼若化反応が生ずるか（幼若化時間、活性
化時間）を計測できる。勿論、一定時間後の幼若化数か
ら幼若化率（活性化率についても同様）を計測すること
もできる。尚、入れるリンパ球はＦＥＴ１個当り１個と
なるようにしてもよいが、一定量のリンパ球を入れ、そ
れらが全て反応したときの電位変化の期待値を１００と
し、実際に得られた電位変化から何％のリンパ球が幼若
化（活性化）したかを求めてもよい。
尚、実施例ではリンパ球の幼若化を例としたが、白血球
、マクロファージを弱くイオン結合できる処理をＦＥＴ
に施せば、これらに細菌等を加えたときの賞金殺菌を起
す細胞電位変化を計測することができる。また生きてい
る細胞と死んだ細胞もそれらの電位差から判別すること
が可能である。
、マクロファージを弱くイオン結合できる処理をＦＥＴ
に施せば、これらに細菌等を加えたときの賞金殺菌を起
す細胞電位変化を計測することができる。また生きてい
る細胞と死んだ細胞もそれらの電位差から判別すること
が可能である。
発明の効果
以上述べたように本発明によれば、リンパ球の幼若化（
活性化）反応を電気的に捉えることができるので、幼若
化（活性化）時間を連続的に測定することができ、また
幼若化率を自動算定できる利点がある。
活性化）反応を電気的に捉えることができるので、幼若
化（活性化）時間を連続的に測定することができ、また
幼若化率を自動算定できる利点がある。
第１図は本発明の一実施例を示す説明図、第２図はＦＢ
”Ｆ単体の説明図である。 図中、２はＦＥＴ、３はゲート絶縁膜、４はリンパ球で
ある。 出願人 富士通株式会社 代理人弁理士 青 柳 稔
”Ｆ単体の説明図である。 図中、２はＦＥＴ、３はゲート絶縁膜、４はリンパ球で
ある。 出願人 富士通株式会社 代理人弁理士 青 柳 稔
Claims (1)
- ゲート電極を除いた電界効果トランジスタのゲート絶縁
層上をポリＬリジン処理等で陽性荷電としたトランジス
タを用い、該陽性荷電部にイオン結合でリンパ球を弱く
結合させかつＰＨＡ、ＰＷＭ、ＬＰＳ等の幼若化または
活性化物質を添加して該リンパ球の幼若化、活性化を促
がし、その際生しる該リンパ球の荷電変化を該トランジ
スタで計測して幼若化、活性化を測定することを特徴と
する、リンパ球の幼若化、活性化測定方式。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57163675A JPS5952745A (ja) | 1982-09-20 | 1982-09-20 | リンパ球の幼若化、活性化測定方式 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57163675A JPS5952745A (ja) | 1982-09-20 | 1982-09-20 | リンパ球の幼若化、活性化測定方式 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5952745A true JPS5952745A (ja) | 1984-03-27 |
Family
ID=15778454
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57163675A Pending JPS5952745A (ja) | 1982-09-20 | 1982-09-20 | リンパ球の幼若化、活性化測定方式 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5952745A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005047878A1 (de) * | 2003-11-11 | 2005-05-26 | Endress+Hauser Conducta Gesellschaft Für Mess- Und Regeltechnik Mbh + Co. Kg | Sensoranordnung mit mehreren potentiometrischen sensoren |
-
1982
- 1982-09-20 JP JP57163675A patent/JPS5952745A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005047878A1 (de) * | 2003-11-11 | 2005-05-26 | Endress+Hauser Conducta Gesellschaft Für Mess- Und Regeltechnik Mbh + Co. Kg | Sensoranordnung mit mehreren potentiometrischen sensoren |
| US7394263B2 (en) | 2003-11-11 | 2008-07-01 | Endress + Hauser Conducta Gesellschaft Fur Mess-U. Regeltechnik Mbh +Co. Kg | Sensor arrangement with a plurality of potentiometric sensors |
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