JPS59177133A - 新規な化学修飾シクロデキストリン固定相及びこれを用いる高速液体クロマトグラフィ− - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な化学修飾シクロテキストリン固定相及
びこれを用いる高速液体クロマトグラフィーに関するも
のである。

シクロデキストリンは、ある一定の太ささと形をもった
疎水性の空洞を有し、有機化合物及び無機化合物からイ
オン徒で広範囲にわたる各種ゲスト化合物を包接すると
いう興味深い特徴を有していることが知られている。

本発明者らは、その包接作用における分子の形や大きさ
を認識する能力に着目し、散体クロマトグラフィーへの
応用について研究を進めてきた。

即ち、先ず、各種ジイソソアナートにより／クロテキス
トリン全架橋して得られたポリウレタン樹脂を用いて、
芳香族アミノ酸の分離を行なった。

Ｙ、Ｍｉｚｏｂｕｃｈｉ、Ｍ、Ｔａｎａｋａ　ａｎｄ　
Ｔ、Ｓｈｏｎｏ、Ｊ、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、２０８
：３５（１９８１）。次に分離能を向上させるために、
シクロテキストリン全化学結合させたポリアクリルアミ
ドゲル全合成し、ベンゼン二置侠体の異性体分離を行な
った。Ｍ、Ｔａｎａｋａ’。

Ｙ、Ｍｉｚｏｂｕｃｈｉ、Ｔ、Ｓｏｎｏｄａ　ａｎｄ　
Ｔ、Ｓｈｏｎｏ、Ａｎａｌ、Ｌｅｔｔ．、１４（Ａ４）
、２８１（１９８１）。川口、溝渕、田中、庄野、分析
化学会第３０年会　１Ａ１３（１９８１）。中江、川口
、溝渕、田中、庄野、日本化学会第４５春季年会　１Ｔ
３８（１９８２）。次いで、分離時間の短縮を目的とし
て、シリカゲルを支持体とする／クロデキストリン固定
相全台成し、各種芳香族化合物の分離を行なった。川口
、溝渕、田中、庄野、分析化学会第３０年会　１Ａ１３
（１９８１）。川口、溝渕、田中、庄野、日本化学会第
４５春季年会　ＩＴ３９（１９８２）。又、化学結合型
シクロデキストリン固定相による分離の結果について首
とめて、最近、報告している。川口、中江、溝渕、田中
、庄野、第４３回分析化学討論会　１Ｃ１５（１９８２
）。

このように、本発明者らは、シクロデキストリンのもつ
選択的な包接体形成能に着目し、シクロデキストリンを
利用しだ液体クロマトグラフィーの充填剤の開発を行な
ってきた。その結果、／クロデキストリンを化学結合に
より固定したポリアクリルアミドゲルやシリカゲルは芳
香族化合物の分離に非常に有効であることを明らかにし
た。

しかしながら、ただ単に、シクロデキストリンを化学結
合により固定した従来の固定相を用いる場合は、主とし
て、次の（１）乃至（３）の問題点が存在する。

（１）ジニトロベンゼンのｍ−体とｐ−体の分離が不可
能である。

（２）トルイジンのｏ−体とｍ−体の分離が不可能であ
る。

（３）安息香酸誘導体等のカルホキフル基をもつ化合物
を溶離させるにけ溶離時間との関係で、溶離液液にリン
酸緩衝液の混合が不可欠である。

川口、中江、溝渕、田中、庄野、第４３回分析化学討論
会　１Ｃ１５（１９８２）。

本発明者らは、上記問題点に鑑み鋭意研究の結果、その
ような問題点は、シクロデキストリンを化学結合により
固定した従来の固定相として、シリカゲルに固定した固
定相を選択し、その選択された固定相のシリカゲルに化
学結合により固定化されたシクロデキストリンの水酸基
を化学修飾によって修飾し、その修飾された、新規な化
学修飾シクロ・デキストリン固定相を用いることにより
、全て解消されることを見出だし、本発明を完成するに
至った。

即ち、本発明は、化学結合によりシリカゲルに固定化さ
れたシクロデキストリンの水酸基が化学修飾された、新
規な化学修飾シクロデキストリン固定Ａ目及びこれを用
いる高速液体クロマトグラフィーである。

本発明の本質を杷握する目的で、ノクロデキストリンを
化学結合によりシリカゲルに固定した後、／クロデキス
トリンの水酸基全化学修飾することによって化学修飾前
と保持挙動がどのように変化するか比較検討を行なった
研究祿果を、化学修飾基としてアセチル基全選定した代
表例について述べると、次のとおりである。

即ち、シクロデキストリンを化学結合によりシリカゲル
に固定した従来の化学結合型シクロデキストリン固定相
（α−ｅｎ−ｏｒβ−ｅｎ−ＳｕＡＰＳ−Ｓ。川口、中
江、溝渕、、山中、庄野、第４３回分析化学討論会　１
Ｃ１５（１９８２）。）をピリジン中無水酢酸でアセチ
ル化することにより、そのンクロデキストリンの水酸基
がアセチル化された化学結合型／クロテキストリン固定
、相（Ａｃ−ｄ−ｅｎ−ＯｒＡＣ−β−ｅｎ−ｓｕＡＰ
ｓ−ｓＱ　）　’ｃ　（４ることができる。

揚られた固定相（Ａｃ−α−ｅｎ−ＯｒＡＣ−β−ｃｎ
−ＳｕＡＰＳ−Ｓ。）の推定構造を示すと、第１図に示
されるとおりである。

アセチル化によって生じた保持挙動の顕著な変化は次の
２点である。

（１）β−ｅｎ＝ＳｕＡｌ−Ｓでは異性体の完全分離が
不可能であった／ニトロベンゼンとトルイジンの異性体
分離が可能となった。第２図参照。

（２）アセチル化前にはカルホキフル基をもつ化合物を
溶離させるには、溶離液にリン酸緩衝溶液の混合が不可
欠であったが、アセチル化後は水による溶離が可能とな
った。

これら（１）及び（２）の変化は、シクロデキストリン
の水酸基がアセチル化によってキャップされたこととシ
クロデキストリン内孔が深くなったことに起因している
と考えられる。

これらのことは、本発明は、その本質か、化学結合によ
りシリカゲルに固定化されたシクロデキストリンの水酸
基がアセチル基等の化学修飾基によって化学修飾された
、化学修飾シクロデキストリノ固定相及びこれを用いる
高速液体クロマトグラフイーにあることを示している。

本発明は、特に、ジニトロベンゼン、クレゾール、トル
イジノ、ヨードアニリン、ニトロアニリン、ニトロフェ
ノール、ニトロ安息香酸、アミノ安息香酸のようなベン
ゼンニ置換体の全てについて例外なくそれら各々のｏ−
、ｍ−又はｐ−異性体を容易に分離することができる高
速液体クロマトグラフィー及びこれに用いられる新規且
つ極めて有用な化学修飾シクロデキストリン固定相を提
供するものであり、斯業に貢献するところ大なるものが
ある。

以下に実施例を示す。

実施例１ アセチル化シクロデキストリン固定相の合成Ｆｉｇ．１
参照 比較実験例の合成方法のようにして合成したシクロデキ
ストリン固定相（α−ｏｒβ−ｅｎ−ＳｕＡＰ−Ｓ）１
．７ｇを脱水ピリジン１０ｍｌ中に入れ、無水酢酸６ｍ
ｌを加えた後、４５℃で６時間加熱する。ろ別後、メタ
ノールでよく洗った後、８０℃で１２時間減圧乾燥する
。

得られた固定相（Ａｃ−α−ｏｒＡｃ−β−ｅｎ−Ｓｕ
ＡＰＳ−Ｓ）の推定構造は、Ｆｉｇ．１の最後の構造式
で示される。

測定方法 すべて、１５×０．４ｃｍＩ．Ｄ．のステンレスカラム
を使用した。その他の条件は、比較実験例の従来のシク
ロデキストリン固定相の場合と同じであるクロマトグラ
ム アセチル化シクロデキストリン固定相を用いて得られた
典型的なクロマトグラムをＦｉｇ．２（Ａｃ−α−（β
）−ｅｎ−ＳｕＡＰＳ−Ｓを用いた典型的液体クロマト
グラム）に示す。Ａｃ−α−ｅｎ−ＳｕＡＰＳ−Ｓ、Ａ
ｃ−β−ｅｎ−ＳｕＡＰＳ−Ｓ共、ほぼ対称的なピーク
で溶離しており、又、良好な分離が得られている。

Ｔａｂｌｅ１、２に、アセチル化シクロデキストリン固
定相における各種ベンゼンニ置換異性体の保持時間を示
す。この場合も、シクロデキストリン固定相の場合と同
様に溶離液中のメタノール含量が増加するにつれて保持
時間が減少する。分離時間と分離度との兼ね合いにより
、これら７種のベンゼンニ置換体の異性体分離の際の最
適溶離液は、Ａｃ−α−ｅｎ−ＳｕＡＰＳ−Ｓで水、Ａ
ｃ−β−ｅｎ−ＳｕＡＰＳ−Ｓでメタノール／水　２０
／８０と決定した。この条件下で、Ａｃ−β−ｅｎ−Ｓ
ｕＡＰＳ−Ｓではアミノ安息香酸、ニトロ安息香酸以外
の異性体分離が完全に行なえた。β−ｅｎ−ＳｕＡＰＳ
−Ｓではジニトロベンゼンのｍ−体とｐ−体、トルイジ
ンのｏ−体とｍ−体が不分離、又、溶離液に水を用いれ
ば、アミノ安息香酸、ニトロ安息香酸も完全に異性体分
離できた。このことにより、ベンゼン二置換体異性体分
離用の充填剤としては、Ａｃ−β−ｅｎ−ＳｕＡＰＳ−
Ｓが最適であるといえる。

次に、アセチル化によって生じた変化について述べる。

Ｔａｂｌｅ３、４にシクロデキストリン固定量の等しい
固定相における、アセチル化前とアセチル化後の保持時
間を示す。この結果より次のような変化がわかる。

（１）少数の異性体を除いてアセチル化シクロデキスト
リン固定相のほうが保持が強い。

（２）アセチル化により溶離順序の変化したものがある
。

｛β−：ニトロフェノール　ｍ、ｏ、ｐ⇒ｏ、ｍ、ｐα
−：ニトロアニリン　ｏ、ｍ、ｐ⇒ｍ、ｏ、ｐ（Ｆｉｇ
．３の左図） （３）アセチル化前はカルボキシル基を有する化合物を
溶離する際には溶離液へのリン酸緩衝溶液の混合が不可
欠であったが、アセチル化後は水のみによって溶離が可
能となった。Ｆｉｇ．３の右図。

以上の変化は、アセチル化によって水素結合に関与する
シクロデキストリンの水酸基がキャップされたこと、お
よび、シクロデキストリン空洞が深くなったことに起因
していると考えられる。

以下余白 以下に、參考の目的で、従来のシクロデキストリン固定
相に関する、比較実験例を示す。

１、合成方法（Ｆｉｇ１．参照） 通常の方法１）によって合成した、末端にカルボキシル
基をもつシリカゲル（ＳｕＡＰＳ−Ｓ）５ｇを、ｍｏｎ
ｏ〔６−ｄｅｏｘｙ−６−〔Ｎ−（２−ａｍｉｎｏｅｔ
ｈｙ１）〕ａｍｉｎｏ〕−α−ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉ
ｍ（α−ｅｎ）２）または、ｍｏｎｏ〔６−ｄｅｏｘｙ
−６−〔Ｎ−（２−ａｍｉｎｏｅｔｈｙ１）〕ａｍｉｎ
ｏ〕−β−ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ（β−ｅｎ）３）
２ｇの０．１５ＭｐＨ５、５リン酸乾燥溶液１００ｍｌ
（α−ｅｎまたはβ−ｅｎ溶解後、ＩＮ　ＨＣｌでｐＨ
５．５に調整する。）に分散し、室温でモーターによっ
て撹拌しながら、１−ｅｔｈｙｌ−３−（３：ｄｉｍｅ
ｎｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙ１）ｃａｒｂｏｄｉ：
ｉｍｉｄｅを１ｇ、０．５ｇ、０．３ｇの順に２時間間
隔で添加する。撹拌を２４時間行なった後、ろ別、脱イ
オン水によってよく洗い、次いで、メタノールで洗った
後、８０℃で１２時間減圧乾燥する。

１）Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、３
４、５９（１９７４）２）Ｌ．Ｄ．Ｍｅｌｔｏｎ　ａｎ
ｄ　Ｋ．Ｎ．Ｓｌｅｓｓｏｒ、Ｃａｒｂｏｈｙｄ、Ｒｅ
ｓ．、１８、２９（１９７１） ３）Ｙ、Ｍａｔｓｕｉ、Ｔ、ＹｏＫｏｉ　ａｎｄ　Ｋ、
Ｍｏｃｈｉｄａ、Ｃｈｅｍ、Ｌｅｔｔ、Ｏｃｔ、１０３
７（１９７１）２、測定方法 カラムは、１５×０．４ｃｍＩ．Ｄ．（シクロデキスト
リン固定相の場合）または３０×０．４ｃｍＩ．Ｄ．（
対照として用いた、ＳｕＡＰＳ−Ｓの場合）のステンレ
スカラムを用い、平衝スラリー法によって充填を行なっ
た。

用いた装置は次のとおりである。

検出器：応用分光機器　ＵＶ検出器ＵＶＩＬＯＧ−７ポ
ンプ：協和精密　　　ＫＨＤ−Ｗ−５２ダンパー：協和
精密　　ＫＨＰ−ＵＩ−１３０Ａインジェクター：協和
精密　ＫＤＩ 溶離液は、水／メタノールまたは０．１５Ｍリン酸緩衝
溶液（ｐＨ４．７、５．５、６．８）であり、混合比（
Ｖ／Ｖ）は１００／０、９０／１０、８０／２０、７０
／３０、５０／５０のいずれかに設定した。流速は、１
ｍｌ／ｍｉｎ（アミノ酸分離のときのみ０．５５ｍｌ／
ｍｉｎ）とした。

分離用のサンプルはすべて各０．２ｍＭの混合溶液を用
い、２０μｌを注入した。

３、実験結果 シクロデキストリン固定相によるベンゼンニ置換体の異
性体分離の一例をＦｉｇ．２（ニトロアニリン異性体の
クロマトグラム）に示す。このクロマトグラムからわか
るように、シクロデキストリン固定相では良好な分離が
なされている。

Ｔａｂｌｅ１〜３には、各種ベンゼン二置換体異性体の
保持時間を示す。これらの結果から次のような特徴が見
出される。

（１）保持にシクロデキストリンの包接作用が大きな役
割を果している。

・ＳｕＡＰＳ−Ｓ（Ｔａｂｌｅ４）では、カラムの長さ
が２倍で、かつ、溶離条件が最も弱い水であっても、あ
まり良好な分離はなされていないが、シクロデキストリ
ン固定相では保持が強く、分離も良好である。

・一部の溶質について、シクロデキストリンの包接平衝
定数を測定したところ、異性体に対する数値の順は溶離
順序と一致した。

（２）溶離液中のメタノール含量が増加するにつれて、
保持は弱くなる。Ｔａｂｌｅ１、２、・シクロデキスト
リンの包接力はメタノール濃度の増加により減少すると
いう事実と、逆相的挙動であるということで説明される
。

（３）イオンの存在により保持の弱くなる溶質がある。

ニトロフェノール、特に、カルボン酸類、ｃｆ、Ｔａｂ
ｌｅ３、 （４）溶離液のｐＨによって、保持時間が変化する。ｃ
ｆ、Ｔａｂｌｅ３ （５）構造の似かよった化合物の分離が可能である。ｃ
ｆ、Ｆｉｇ．３（アミノ酸のクロマトグラム）・ＳｕＡ
ＰＳ−Ｓでは分離不可能な２〜５のアミノ酸が良好に分
離されている。

本実験に使用した８種の二置換ベンゼンの異性体分離の
際の最適溶離液は次の通りである。

α−ｅｎ−ＳｕＡＰＳ−Ｓ：０．１５Ｍ　ｐＨ５．５Ｐ
ｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒ、ジニトロベンゼンｍ
−、ｐ−が不分離、最長はｐ−ヨードアニリンの７４分
、β−ｅｎ−ＳｕＡＰＳ−Ｓ：メタノール／０．１５Ｍ
ｐＨ５．５ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒ　３０／
７０、ジニトロベンゼンｍ−、ｐ−とトルイジンｏ−、
ｍ−が分離せず、最長はｐ−ヨードアニリンの２５分。

また、β−シクロデキストリン固定相の場合、フェノー
ル、芳香族アルコール類の分離（Ｆｉｇ４）、芳香族カ
ルボン酸の分離（Ｆｉｇ．５）にも使用でき、モノ置換
ナフタレンの分離もまた可能である（ナフトール、ナフ
タレンカルボン酸、ナフタレンスルホン酸ナトリウム）
。

【図面の簡単な説明】

第１図は、固定相（Ａｃ−α−ｅｎ−ｏｒＡｃ−β−ｅ
ｎ−ＳｕＡＰＳ−Ｓ）の推定構造を表わす。 第２図は、以下の分離条件で得られたＡｃ−β−ｅｎ−
ＳｕＡＰＳ−Ｓ（α）及びβ−ｅｎ−ＳｕＡＰＳ−Ｓを
用いたジニトロベンゼン異性体のクロマトグラムを表わ
す。 Ｃｏｌｕｍｎ：１５ｃｍ×４ｍｍＩ．Ｄ．Ｅｌｕｅｎｔ
：ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（０／１００−５０／５０）Ｆｌｏ
ｗ−ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ：ＵＶ（２０５ｏｒ２５４ｍｍ）Ｓａ
ｍｐｌｅ：０．２ｍＭ、２０μｌ 第３図は、第１図の推定構造に示されているα−ＣＤ（
α−シクロデキストリン）及びβ−ＣＤ（β−シクロデ
キストリン）の構造を表わす。 以下余白 手続補正書 １、事件の表示 昭和５８年特許願第５１３０４号 ２　発明の名称 新規な化学修飾シクロデキストリン固定相及びこれを用
いる高速液体クロマトグラフィー３　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 郵便番号　５４１ 住　所　大阪府大阪市東区道修町３丁目１０番地連絡先
　特許課（東京） 置　０３−２７０−８５７１ ５　補正の対象 明細書（８〜３４頁）及び図面。 ６　補正の内容 明細書及び図面を別紙のとおり補正する□。 以上 実施例１゜ アセチル化シクロデキストリン固定相σ３合成反応式１
　　参照 比較実験例の合成方法のようにして合成したシクロデキ
ストリン固定相（α−ｅｎ−又はβ−ｅｎ−８ｕＡＰＳ
−８）１．７ｇを脱水ピリジ７１０ｍ６中に入れ、無水
酢酸６ｍｌを加えた後、４５°Ｃで６時間加熱する。濾
別後、メタノールでよく洗った後、８０℃で１２時間減
圧乾燥する。 得られた固定相（Ａｃ−α−ｅｎ−又はＡｃ−β−ｅｎ
−８　ＬＩＡＰＳ　−８）の推定構造は、反応式１の最
後の構造式で示される。 以下にアセチル化シクロデキストリン固定相の合成反応
式を示す。 以下余白 すべて、’　５　Ｘ　０．４　ｃｍ　１．Ｄ、のステン
レス゛カラムを使用した。その他の条件は、比較実験例
の従来のシクロデキストリン固定相の場合と同じである
。 クロマトグラム アセチル化シクロデキストリン固定相を用いて得られた
典型的なりロマトグラムを第４図（Ａｃ−α（ロ）−ｅ
　ｎ　−８ｕＡＰｓ−８を用いた典型的液体クロマトグ
ラム）に示す。Ａｃ　−ｃｔ−ｅｎ−８ｕＡＰＳ　−８
、Ａｃ−β−ｅ　ｎ　−８ｕ　ＡＰ　Ｓ−８共、はぼ対
称的なピークで溶離しており、又、良好な分離が得られ
ている。 表１，２に、アセチル化シクロデキストリン固定相にお
ける各種ベンゼンニ置換異性体の保持時間を示す。この
場合も、シクロデキストリン固定相の場合と同様に溶Ｉ
Ｉ液中のメタノール含量が増加するにつれて保持時間が
減少する。分離時間と分離度との兼ね合いにより、これ
ら７種のベンゼンニ置換体の異性体分離の際の最適溶離
液は、Ａｃ〜ａ−ｃ　ｎ”−８ｕＡ、ＰＳ　−８で水、
Ａｃ−β−ｅｎ−８ｕＡＰＳ−８でメタノール／水　２
０／８０と決定した。 この条件下で、Ａｃ−β−ｅロー８　ｕ　ＡＰ、　Ｓ−
８ではアミノ安息香酸、ニトロ安息香酸以外の異性体分
離が完全に行なえた。β−ｅ　ｎ　−８ｕＡＰｓ−８で
はジニトロヘンゼンのｎ〕一体とｐ一体、トルイジンの
０一体とｎ］一体が不分離。又、溶離液に水を用いれば
、アミノ安息香酸、二）ｏ安息香酸も完全に異性体分離
できた。このことより、ベンゼンニ置換体異性体分離用
の充填剤としては、Ａｃ−β−ｅｎ−８ｕＡＰＳ−８が
最適であるといえる。 次に、アセチル化によって生じた変化について述べる。 表３，４にシクロデキストリン固定量の等しい固定相に
おける、アセチル化前とアセチル化後の保持時間を示す
。この結果より次のような変化がわかる。 （１）少数の異性体を除いてアセチル化シクロデキスト
リン固定相のほうが保持が強い。 （２）アセチル化により溶離順序の変化したものがある
。 （第５図（ａｌ（ｂ）　） （３）アセチル化前はカルボキシル基を有する化合物を
溶離する際には溶離液へのリン酸緩衝液の混合が不可欠
であったが、アセチル化後は水のみによって溶離が可能
となった。（第５図（Ｃ）（ｄ））。 以上の変化は、アセチル化によって水素結合に開力する
シクロデキストリンの水酸基がキャップされたこと、お
よび、シクロデキストリン空洞が深（なったことに起因
していると考えられる。 表１　保持時間（分）に対するメタノール含量の影響（
Ａｃ−β−ｅｎ−８ｕＡＰＳ−８の場合）憂）５μｌ注
入 表２　保持時間（分）に対するメタノール含量の影響（
Ａｃ　−ａ　−ｅｎ−８ｕＡＰＳ−８の場合ンカラＡ　
：　１５Ｘ０．４Ｃ−ＩｒＬｌ、Ｄ。 ※）５μｌ注入 表３　アセチル化による保持時間（分）の変化（β−ノ
クロデキストリン固定相の場合）ツｙ　　ラ　ム　ニー
　　１５　Ｘｏ、４ｃｍ１．Ｄ。 溶離液：へ４ｅＯＨ／Ｈｚ０２０／８０−ニア０分以上 表４　アセチル化による保持時間（分）の変化（α−シ
クロデキストリン固定相の場合）カラム：　１５Ｘ０．
４ＣＩｒＬＩｊ）、　　　−：　７０分以上溶離液：Ｉ
−ＩｚＯ※）：５μｅ注入 以下に、参考の目的で、従来のシクロデキストリン固定
相に関する、比較実験例を示す１　合成方法（反応式２
参照） 通常の方法によって合成した、末端にカルボキソ／ｌ／
基をもツシリカゲル（５ｕＡＰＳ　−８）５９を、＋１
１０＋１０　Ｃ６−ｄｃｏｘｙ−６−（Ｎ−（２−ａｍ
ｉｎｏｃ　ｔｈｙｌ）］ａｍｉ　ｎｏ　］　−ａ−ｃｙ
ｃｌｏｄｅｘｉｒｉｎ（ａ−ｅｎ　）または、ｍｏｎｏ
　［６−ｄｅｏｘｙ　−６−［Ｎ　−（２−ａｍｉｎｏ
ｅｔｈｙｌ）’］ａｌｎｌｌＩＯ〕−β−ｃｙｃｌｏｄ
ｅｘｔｒｉｎ　（β−ｅｎ）２．ｊ９の０．１５Ｍ　　
ｐＩ−Ｉ５，５　　リン酸緩衝液１０　Ｑ　ｍｌ（ａ　
−ｅｎまたはβ−ｅ１１溶解後、１．Ｎ　　ＨＣｌでｒ
ｌ　１−４．５．５に調整する。）に分散し、室温でモ
ーターによって攪拌しながら、１−ｅｔｈｙｌ−３−（
３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ　　）ｃ
ａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅを１ｇ、０．５．９，０．３＋
！９の順に２時間間隔で添加する。攪拌を２４時間行な
った後、濾別、脱イオン水によってよく洗い、次いで、
メタノールで洗った後、８０℃で１２時間減圧乾燥する
。 １　）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ｌ’３ｎｚｙｍｏｌｏ
ｇｙ　、　３４　、５９（１９７４）２　）　、１ｒｊ
）、Ｍｅｌ　ｔｏｎ　ａｎｄ　Ｋ、Ｎ、５ｌｅｓｓｏｒ
　、　Ｃａｒｂｏｈｙｄ。 ３　　）Ｙ、Ｍａｔｓｕｉ　、Ｔ、Ｙｏｋｏｉ　　ａｎ
ｄ　　Ｋ、Ｍｏｃｈｉｄａ。 Ｃｈｅｍ　、　Ｌｅｆｔ、、　Ｏｃｔ、、　１．０３７
　（１９７１）以下にシリカゲルへのα〜又はβ〜　シ
クロデキストリンの固定化に至る合成反応式を示１−６
以下余白 ２　測定方法 カラムハ、１５　Ｘ　Ｏ，４ｃｍ　ＬＨＤ、（シクｏデ
キスト！Ｊ　７’ＪｊｊＪ定相）８合）　ｉ　ｆ＆＠　
３０　Ｘ　０．４　Ｃｒ／ＬＩ、Ｄ、（対照として用い
た、ＳｕＡ、ＰＳ−８の場合）のステンレスカラムを用
い、平衡スラリー法によって充填を行なった。 用いた装置は次のとおりで゛ある。 検出器：応用分光機器　　ＵＶ検出器ＵＶＩＬＯＧ−７
ホ７　フ：　ＩＧ和精密Ｋｌ（Ｄ　−Ｗ−５２ダンパー
：協和精密　　　ＫＨＰ−ＵＩ　−１３ＯＡインジェク
ター：協和精密　ＫＤＩ 溶離液ば、水／メタノールまたはＯ，］、５ＭＩＪン酸
緩衝液（ｐｌ−１４，７、５，５、６，８）であり、混
合比（ｖ／Ｖ）は１．００１０．９０／１０．８０／２
０゜７０／’３０．５０１５０のいずれかに設定した。 流速は、１ｍｌ／ｍ１ｎ（アミノ酸分離のときのみ０、
５５　ｍｅ／　ｍ１ｎ）とした。 分離用のザンプルはすべて各０．２　ｍＭの混合溶液を
用い、２０μｌを注入した。 ３　実験結果 シクロデキストリン固定相によるべ／ゼ／二置換体の異
性体分離の一例を第６図にトロアニリン異性体のクロマ
トグラム）に示す。このクロマトグラムかられかるよう
に、シクロデキストリン固定相では良好な分離がなされ
ている。 表５〜７には、各種ベンゼンニ置換体異性体の保持時間
を示す。これらの結果から次のような特徴が見出だされ
る。 （１）保持にシクロデキストリンの包接作用が大きな役
割を果たしている。 ｏ　　５ｕＡＰＳ−８（表８）では、カラムの長さが２
倍で、かつ、溶離条件が最も弱（・水であっても、あま
り良好な分離はなされていないが、シクロデキストリン
固定相では保持が強く、分離も良好である。 〇　一部の溶質について、シクロデキストリンの包接平
衡定数を測定したところ、異性体に対する数値の順は溶
離順序と一致した。 （２）溶離液中のメタノール含量が増加するにつれて、
保持は弱くなる。（表５，６）・０　シクロデキストリ
ンの包接力はメタノール濃度の増加により減少するとい
う事実と、逆相的挙動であるということで説明される。 （３）イオンの存在により保持の弱（なる溶質がアル。 ニトロフェノール、特に、カルボン酸類。 （表７ン （４）溶離液のｐＨによって、保持時間が変化する。　
　（表７ン （５）構造の似かよった化合物の分離が可能である。　
　（第７図　アミノ酸のクロマトグラム）ｏ　　５ｕＡ
ＰＳ−８では分離不可能な２〜５のアミノ酸が良好に分
離されている。 本実験に使用した８種の二置換ベンゼンの異性体分離の
際の最適溶離液は次の通りである。 ａ　−ｅｎ−８ｕＡＰＳ−８：０．１５Ｍ　　ｐＨ５，
５リン酸緩衝液。ジニトロベンゼンｍ−、ｐ−が不分離
。最長はｐ−ヨードアニリンの７４分。 β−ｅｎ−８ｕＡＰＳ　−８：メタノール１０．ｘｓＭ
ｐｌ−１５，５リン酸緩衝′ｏ、３０／７０ｏジニトロ
ベンゼンｍ〜、ｐ−とトルイジノＱ−，ｍ−が分離せず
。最長はｐ−ヨードアニリンの２５分。 また、β−シクロデキストリン固定相の場合、フェノー
ル、芳香族アルコール類の分離（第８図）。 芳香族カルボン酸の分離（第９図）にも使用でき、モノ
置換ナフタレンの分離もまた可能である（ナフトール、
ナフタレンカルボン酸、ナフタレンスルホン酸ナトリウ
ム）。 以下余白 表５．保持時間（分）に対するメタノール含量の影響（
β−ｅ　ｎ　−Ｓ　ｕＡＰＳ　−Ｓの場合）カラム：　
１５　Ｘ　０．４ＣＴＬＩ、Ｄ。 表６　保持時間（分）に対するメタノール含量の影響（
ａ−ｅｎ　−８ｕＡＰＳ−８の場合）カラム＝１５×０
４Ｃ７ｒＬ■、Ｄ。 −：６０分以上 （β−ＣＤ　−８ｕＡＰＳ−８の場合）カラム：　１５
＞ぐ０．４ｃｒｆＬＩ、Ｄ。 表８　ブランクである５ｕＡＰＳ−８における保持時間
（分） ｈ　ラム：　３０　Ｘｏ、４ＣＩｎＩ　、Ｄ。 ４、図面の簡単な説明 第１図は固定相（Ａｃ−α−ｅ’ｎ−又はＡｃ−β−Ｃ
Ｄ−８ｕＡＰＳ−８）の推定構造を表わす。 但しＡｃ　−ａ−ｅｎ−８ｕＡＰＳ−８についてはｍ　
＝　１２゜ｎ＝５．Ａｃ−β−ＣＤ−８ｕＡＰＳ−８に
ライてはｍ−７４、ｎ＝６を示す。 第２図（ａ）及び（ｂ）は夫々ＡＣ−β−ｅｎ−８ｕＡ
ＰＳ−８及びβ−ｅ　ｎ　−８ｕ　ＡＰ　Ｓ−８を用い
て以下の分離条件で得られたジニトロベンゼン異性体の
高速液体クロマトダラムを表わす。 カラム：　１５　ｃｒｒＬＸ　Ｏ，４ｃｍ　Ｉ、Ｄ。 溶離液：（ａ）メタノール／水−２０７８０（ｂ）メタ
ノール／１）Ｉ（５，５リン酸緩衝液＝３０／７０ 流速：１ｍｌ／ｍｉｎ 測定波長：　２５４　ｎｍ 試料：　０，２　ｍＭ　、　２０　μｌｌ第３図（ａ）
及び（ｂ）は夫々第１図の推定構造に示すしているα−
ＣＤ（α−シクロデキストリン）及びβ−ＣＤ　（β−
シクロデキストリン）の構造を表わ１−０ 第４図（ａ）及び（１））は夫々Ａｃ　−ａ−ｅｎ−３
ｕＡＰＳの典型的高速液体クロマトグラムを表わ１−０
第４図（Ｃ）及び（（１）は夫ｈ　Ａ、ｃ　−ａ−ｅｎ
−８ｕＡＰＳ　−８の典型的高速液体クロマトグラムを
表わす。 溶離ｏ、：　（ａ）（Ｃ）水　（１つ）　　メタノール
／水−２０／８０測定波長：　２５４　ｎｍ 第５図（ａ）及び（ｂ）は夫ｋ　Ａ　ｃ　−ａ　−ｅ　
ｎ　−８ｕＡＰｓ高速液体クロマトグラムを表わす。 第５図（Ｃ）及び（ｄ）は夫々Ａｃ−β−ｅｎ−８ｕＡ
ＰＳ　−８液体クロマトダラムを表わす。 溶離液：　（ａ）（ｂ）（Ｃ）水　（ｄ）メタノール／
　ｐＨ，５，５りン酸緩衝液−３０７７０ 測定波長：　２５４　ｎｍ 第６図（ａ）（ｂ）及び（Ｃ）は夫々５ｕＡＰＳ、ａ−
ｅｎ−８ｕＡＰＳ−８及びβ−ｅ　ｎ　−８ｕＡＰｓ−
８を用いたニトロアニリン異性体の高速液体クロマトグ
ラムを表わす。 溶離液：（ａ）水　（ｂ）　ｐｉ−１５，５リン酸緩衝
液（Ｃ）メタノール／　ＰＩ−Ｉ　５．５リン酸緩衝液
＝３０／７０ 」１１定波長：２５４ｎｍ 第７図（ａ）及び（ｂ）は夫ｈｓｕＡＰｓ−８及びβ−
ｅ　ｎ　−８ｕ　ＡＰ　Ｓ−８を用いた下記アミノ酸６
種の高速液体クロマトグラムを表わす。 溶離液：（ａ）水　（＋））　ｐｌ−Ｔ　６．８リン酸
緩衝液測定波長：　２０５　ｎｍ 第８図（ａ）及び（ｂ）は夫々５ｕＡ−ＰＳ−８及びβ
−ｅｎ−８ｕＡＰＳ−８を用いたフェノール及び芳香族
アルコール類ＣＣｅＣＨ２）ｎ　Ｏ）Ｉ、ｎ＝ｏ　、　
１　、２’。 ：つ〕の高速液体クロマトグラムを表わす。 溶離液：（ａ）水　（ｂ）メタノール／　１）Ｉ−１６
，８リン酸緩衝液＝３０／７０ 測定波長：　２０５　ｎｍ 第９図（ａ）及び（ｂ）は夫ｈｓｕＡＰｓ−８及びβ−
ｅ　１〕Ｓ　ｕＡＩ）ｓ　Ｓを用いた芳香族カルボン酸
類〔◎−（ＣＩｈ）ｍ　Ｃ００Ｉ（、、ｍ＝０　、１　
、２　、３　、４　〕の高速液体クロマトグラムを表わ
す。 溶離液：（ａ）水　（ｂ）メタノール／　ｐＨ６，８リ
ン酸緩衝液−３０７７０ 測定波長：　２０５　ｎｍ 特許出願人　和光純薬工業株式会社 第１図 第２図 （０）　　　　　　　　　　　　　　（ｂ）１３図 （０） （ｂ） 第５図 （０） （ｂ） （Ｃ） （ｄ）

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）化学結合によりシリカゲルに固定化されたシクロ
   テキストリンの水酸基か化学修飾された、新規な化学修
   飾シクロデキストリン固定相。
2. （２）化学結合によりシリカゲルに固定化されたシクロ
   テキストリンの水酸基が化学修飾された、新規な化学修
   飾／クロテキストリン固定相を用いる高速液体クロマト
   グラフィー。