JPS59169498A - 分離蛋白質の染色反応の停止法 - Google Patents
分離蛋白質の染色反応の停止法Info
- Publication number
- JPS59169498A JPS59169498A JP4424783A JP4424783A JPS59169498A JP S59169498 A JPS59169498 A JP S59169498A JP 4424783 A JP4424783 A JP 4424783A JP 4424783 A JP4424783 A JP 4424783A JP S59169498 A JPS59169498 A JP S59169498A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hydrogen peroxide
- protein
- hemin
- support
- staining
- Prior art date
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- Pending
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は、支持体中に電気泳動分離した蛋白質スポット
の染色法に係り、発色反応を停止させ分離蛋白質を正確
に、かつ、高速に検出する方法に関する。本発明は医用
検体検査の分野において特に有効である。
の染色法に係り、発色反応を停止させ分離蛋白質を正確
に、かつ、高速に検出する方法に関する。本発明は医用
検体検査の分野において特に有効である。
従来、電気泳動において泳動分離された蛋白質スポット
のペルオキシダーゼ活性による染色は、発色反応の停止
は行なわれていない。このため、染色反応は高速である
が、時間とともに染色は進みバックグランドも染色され
、ついには支持体全体が染色され蛋白質スポットが検出
できなくなる欠点があった。
のペルオキシダーゼ活性による染色は、発色反応の停止
は行なわれていない。このため、染色反応は高速である
が、時間とともに染色は進みバックグランドも染色され
、ついには支持体全体が染色され蛋白質スポットが検出
できなくなる欠点があった。
本発明の目的は、電気泳動により分離した蛋白質スポッ
トのペルオキシダーゼ活性を利用した発色法において、
発色反応を停止する新技術を提出する事にある。この反
応停止により蛋白質スポットは長時間発色強度が変化せ
ず安定な状態で検出できる。
トのペルオキシダーゼ活性を利用した発色法において、
発色反応を停止する新技術を提出する事にある。この反
応停止により蛋白質スポットは長時間発色強度が変化せ
ず安定な状態で検出できる。
電気泳動により分離した蛋白質のペルオキシダーゼ活性
を利用した染色は、蛋白質を含むゲル支持体を、ヘミン
溶液、次いで色素前駆体溶液、に浸したのち、過酸化水
素で発色させる方法である。
を利用した染色は、蛋白質を含むゲル支持体を、ヘミン
溶液、次いで色素前駆体溶液、に浸したのち、過酸化水
素で発色させる方法である。
過酸化水素によシ発色させたのち、酵素カタラーゼによ
シ過酸化水素を分解すれば発色反応を停止することが可
能である。
シ過酸化水素を分解すれば発色反応を停止することが可
能である。
以下、本発明の一実施例を説明する。まず常法により人
血清１０μｔを、１次元目を等電点分離、２次元目を分
子量分離とするポリアクリルアミドゲルを支持体とする
２次元電気泳動を行ない。血清タンパク質をゲル中に分
離する。このゲルを５０％メタノール・０．０７ Ｍシ
ん酸緩衝液（ｐＨ７，５）で５分間処理し、タンノくり
質をゲル中に固定する。次に０．１ ｍ Ｍヘミンを含
む５０％メタノール・０．０７ Ｍりん酸緩衝液（ｐＨ
７，５） で２０分間処理し、ヘミンをタンパク質に
吸着させる。
血清１０μｔを、１次元目を等電点分離、２次元目を分
子量分離とするポリアクリルアミドゲルを支持体とする
２次元電気泳動を行ない。血清タンパク質をゲル中に分
離する。このゲルを５０％メタノール・０．０７ Ｍシ
ん酸緩衝液（ｐＨ７，５）で５分間処理し、タンノくり
質をゲル中に固定する。次に０．１ ｍ Ｍヘミンを含
む５０％メタノール・０．０７ Ｍりん酸緩衝液（ｐＨ
７，５） で２０分間処理し、ヘミンをタンパク質に
吸着させる。
５０％メタノール・０．０７ Ｍりん酸緩衝液（ｐＨ７
，５）で２分間ゲルを洗浄した後、１ ｒｎ Ｍ ３
＋３′−ジアミノベレをン、２ｍＭ２．６−キシレノー
ルを含む５０％メタノール・０．０７ Ｍりん酸緩衝液
（ｐＨ７，５） で処理する。５分波過酸化水素を０
１１４となるように添加しゲル中のタンノくり質スポッ
トを発色させる。１５分間発色させたのち、ウシ肝臓か
ら抽出結晶化したカタラーゼ４μｇ／ｍｌを含む０．０
７ Ｍりん酸緩衝液にゲルを移し、過酸化水素を分離し
て発色反応を停止させる。
，５）で２分間ゲルを洗浄した後、１ ｒｎ Ｍ ３
＋３′−ジアミノベレをン、２ｍＭ２．６−キシレノー
ルを含む５０％メタノール・０．０７ Ｍりん酸緩衝液
（ｐＨ７，５） で処理する。５分波過酸化水素を０
１１４となるように添加しゲル中のタンノくり質スポッ
トを発色させる。１５分間発色させたのち、ウシ肝臓か
ら抽出結晶化したカタラーゼ４μｇ／ｍｌを含む０．０
７ Ｍりん酸緩衝液にゲルを移し、過酸化水素を分離し
て発色反応を停止させる。
このようにして本発明により発色反応を停止したゲルは
少なくとも一昼夜は発色強度は変化しなかった。本発明
によればゲルのバックグランド（蛋白の存在しない部分
）の発色は、カタラーゼ処理をしない場合に比して、無
視できる程に小さかった。
少なくとも一昼夜は発色強度は変化しなかった。本発明
によればゲルのバックグランド（蛋白の存在しない部分
）の発色は、カタラーゼ処理をしない場合に比して、無
視できる程に小さかった。
色素前駆体としては、上記実施例のほか、種々の公知の
物質を用いた場合も、同様の効果が得られた。
物質を用いた場合も、同様の効果が得られた。
以上、本発明によれば、ボリアクリルアｓ ト”ゲル中
の蛋白質のペルオキシダーゼ活性による染色のバックグ
ランドの上昇を停止することができる。
の蛋白質のペルオキシダーゼ活性による染色のバックグ
ランドの上昇を停止することができる。
また、染色後ゲルを発色強度を変化させずに保存するこ
とができるようになった。
とができるようになった。
本発明によれば、電気泳動法によシ支持体中に分離され
た蛋白を高速に、かつ、正確に定量することが可能にな
る。医用検体検査などの分野において特に本発明は有効
である。
た蛋白を高速に、かつ、正確に定量することが可能にな
る。医用検体検査などの分野において特に本発明は有効
である。
Claims (1)
- 電気泳動法により支持体中に分離された蛋白質を含む支
持体をヘミン溶液に浸し、ヘミンを蛋白質に吸着させ、
蛋白質にペルオキシダーゼ活性を持たせ、ついで色素前
駆体溶液に浸したのち、蛋白質スポットを過酸化水素で
発色させ検出する方法において、発色後、酵素カタラー
ゼによシ過酸化水素を分解することを特徴とする発色反
応の停止法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4424783A JPS59169498A (ja) | 1983-03-18 | 1983-03-18 | 分離蛋白質の染色反応の停止法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4424783A JPS59169498A (ja) | 1983-03-18 | 1983-03-18 | 分離蛋白質の染色反応の停止法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59169498A true JPS59169498A (ja) | 1984-09-25 |
Family
ID=12686200
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4424783A Pending JPS59169498A (ja) | 1983-03-18 | 1983-03-18 | 分離蛋白質の染色反応の停止法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59169498A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4752570A (en) * | 1984-10-22 | 1988-06-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for the determination of peroxidase |
| US5263534A (en) * | 1990-11-30 | 1993-11-23 | Shinagawa Refractories Co., Ltd. | Exothermic type mold additives for continuous casting |
-
1983
- 1983-03-18 JP JP4424783A patent/JPS59169498A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4752570A (en) * | 1984-10-22 | 1988-06-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for the determination of peroxidase |
| US5263534A (en) * | 1990-11-30 | 1993-11-23 | Shinagawa Refractories Co., Ltd. | Exothermic type mold additives for continuous casting |
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