JPS5915632B2 - 抗生物質の精製法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 １０本発明は、シデロケリン（Ｓｉｄｅｒｏｃｈｅｌｉ
ｎ）の精製法に関し、さらに詳しくは、式、、Ｈ″Ｎ−
□ 。

、、で示されるシデロケリンを非イオン性の多孔性スチ
レン系樹脂に吸着し、次いで、これを該抗生物質を溶解
し得る有機溶媒と水との混合溶剤で溶出することを特徴
とする、該抗生物質の精製法に関２０する。

シデロケリンは、グラム陽性菌類、グラム陰性菌類、マ
イコプラズマ及びトリコモナス等に対して活性を有し、
また鉄イオンと強いキレート作用を有する抗生物質とし
て近年開示された化合物で２５ある〔例えば、特開昭５
６−３４６８０号公報又はザ・ジャーナル・オブ・アン
チビオテイクス（ＴＨＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＮＴＩＢ
ＩＯＴＩＣＳ）ｖｏｌ、３４、慮７、７９１〜７９９頁
〕。

これらの公知文献によると、シテロケリン生産３０能の
あるノカルジア属に属する微生物を栄養培地に接種し、
培養せしめ、培養物から菌体等の固型物を除去処理をし
た培養液を濃縮した後、該抗生物質を溶解し得る有機溶
媒を用いる抽出法により該抗生物質を回収している。３
５−方、本発明者らもノカルジア属に属する微生物の生
産する抗生物質を検索する過程において、ノカルジア属
に属する、ＭＧ２５４−ＣＦ５菌株もまた上記シデロケ
リンを生産することを見い出した。

さらに、本発明者らは、ＭＧ２５４−ＣＦ５菌株の培養
液からのシデロケリン採集法について検討した結果、該
抗生物質は、含有液を濃縮処理すると容易に天然型シデ
ロケリン〔２，４−Ｔｒａｎｓ−３，４−ジヒトロー４
−ヒドロキシ−５−（３−ヒドロキシ−２−ピリジニル
）−４−メチル−２Ｈ一ピロール一２−カルボキサミド
、以下「シデロケリンＡ」という〕の２，４一位がＣｉ
ｓ型に変化したジアステレオマ一（以下「シデロケリン
Ｂ」という）になることを見い出した。このシデロケリ
ンＢはシデロケリンＡに比し活性が低いため、当該抗生
物質の製造法において、シデロケリンＡから同Ｂへの異
性化が生起しない精製法の開発が望まれていた。本発明
者らはシデロケリンＡがその水溶液から非イオン性の多
孔性スチレン系樹脂に、かなりの高選択性をもつて吸着
され、さらに吸着されたシデロケリンＡは該抗生物質を
溶解し得る有機溶媒と水との混合溶剤で溶出することに
より、高収率で、しかも、ジアステレオマ一であるシデ
ロケリンＢを副生することなく回収できることを見い出
し、本発明を完成した。本発明の方法に適用できるシデ
ロケリンＡ含有物は、シデロケリンＡを含む水溶液であ
れば混在する化合物の種類を選ばないが、実質的な意味
を考慮すると、該抗生物質の生産に係る培養液を好適な
ものとして挙げることができる。

また、本発明で使用される非イオン性の多孔性スチレン
系樹脂としては、スチレンージビニルベンゼンの共重合
体からなり、シデロケリンＡを吸着し得るものであれば
樹脂の種類を問わないが、該抗生物質の吸着に選択性を
付与するためには前記共重合体の比表面積が１５０〜１
０００Ｃ９の範囲で、かつ気孔率４０〜６５０１）及び
最多類度細孔径１０〜１０００オングストローム並び骨
格密度１．０５〜１．２６ｇ／ｍｌが好適に用いられる
。

この種の吸着剤の例としては、商品名ダイヤイオンＬｌ
Ｏｌ同ＨＰ−２０、同ＨＰ−３０、同ＨＰ−４０及び同
ＨＰ−５０（それぞれの比表面積は５０１．３７ｒＩ／
９、７１８ｗ１／９、５７０イ／９、７０５ＴＩ／９及
び５９０ｗ１／ｆ！；最多頻度細孔径２００人〜１００
０λ）（三菱化成工業株式会社製）並びにアンバーライ
トＸＡＤ−２及びＸＡＤ−４（それぞれの比表面積３０
０ｍ″／９及び７８４イ／９；平均孔径は９０λ及び５
０Ａ）（ローム・アンド・ハース社製）が挙げられる。
本発明の方法において、上記樹脂に該抗生物質を吸着さ
せた後、これからの該抗生物質の溶出に用いられる溶剤
としては、アセトン、メタノール、アセトニトリル、ジ
メチルスルホキシドなどの溶媒又はこれらと水の混合物
の混合比を適宜調整して用いるのがよいが、水一有機溶
媒の糸で、有機溶媒の含有率が直線的に増大する、いわ
ゆるクレージェット法によるのが、発酵培養液のような
多成分系から該抗生物質を分離回収する場合には望まし
い。

ちなみに本発明で用いた培養液にはそれ自体公知のリス
トセチン抗生物質が混在する。以上によつて回収された
シデロケリンＡは、使用目的に応じて、再結晶その他の
方法によつて精製してもよい。本発明の方法に用いられ
る発酵培養物は、前記の公知文献（特開昭５６−３４６
８０号公報参照）に記載の方法に準じて調製できるか、
本発明者らによつて見い出されたＭＧ２５４−ＣＦ５菌
株を栄養培地で培養することによつても調製できる。

すなわち、ノカルジア属に属する微生物の培養により抗
生物質の生産に適した、それ自体公知の炭素源、窒素源
、無機塩などの同化できる栄養源にＭＧ２５４−ＣＦ５
菌株を接種して、好気的に増殖させることによつて生産
される。かかる栄養源としては、例えば、ぶどう糖、グ
リセリン、麦芽糖、庶糖、糖蜜等の炭水化物や、大豆油
、落花生油などの油脂、脂肪類の如き炭素源；ペプトン
、肉工キズ、大豆粉、綿実粉、乾燥酵母、コーンスチー
ブリカ一、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸ア
ンモニウムなどの窒素源；燐酸二カリウム、食塩、炭酸
カルシウムなどの無機塩が使用でき、必要により微量金
属、例えば硫酸マグネシウム、塩化マンガンなどを添加
することができる。また、栄養培地は培養に先立ち殺菌
することができ、この殺菌の前又は後で、培地のＰＨを
４．５〜８．５の範囲、特にＰＨ６．５〜７．０の範囲
に調節するのが有利である。かかる栄養培地でのＭＧ２
５４−ＣＦ５菌株の培養は原則的には一般のノカルジア
属に属する菌株による抗生物質の製造において通常使用
されている方法に準じて行うことができる。

通常好気的条件下に培養するのが好適であり、撹拌しな
がら及び／又は通気しながら行うことができる。また、
培養方法としては静直培養、振盪培養、通気攪拌を伴な
う液内培養のいずれも使用可能であるが液内培養が有利
である。使用しうる培養温度はシデロケリンＡ生産菌の
発育か実質的に阻害されず、シデロケリンＡを生産し得
る範囲であれば特に制限されるものではなく、一般に１
８〜３５℃好ましくは２６〜３０℃の範囲内の温度が好
適である。

培養は通常シデロケリンＡが充分に蓄積するまで継続す
ることができる。

その培養時間は、培地の組成や培養温度により異なるが
、通常１２０〜３６０時間の範囲である。なお、これら
の培養条件は使用する培地組成その他に応じて、当業者
であれば簡単な実験により最適条件を決定することがで
きる。かくして培養物中に蓄積されたシテロケリンＡは
、主として菌体外に存在するので有利には培養後、済過
または遠心分離等によつて菌体を除去することにより、
本発明の方法に供しうる培養液を調製することができる
。

上記に使用したシテロケリンＡの生産菌は、昭和５４年
７月、微生物化学研究所において構内の土壌より分離さ
れた放線菌で、ＭＧ２５４｛Ｆ５の菌株番号が付された
。

その菌字的性質は次の通りである。１形態 ＭＧ２５４−ＣＦ５株を光学顕微鏡及び電子顕微鏡によ
り、菌糸の形態、分裂方式を観察すると、ストレプトミ
セスと同様な太さの真直ぐでよく伸長した気菌糸がみら
れる。

しかし、典型的な胞子の着生がみられず、又、特異的な
ジグザグ様の気菌糸の伸長が随所にみられる。基中菌糸
は桿菌または球菌状に分断し、きわめて多形性である。
グラム染色は陽性、抗酸性である。２各種培地における
生育状態 色の記載について〔〕内に示す標準は、コンテイナ一・
コーポレーシヨン・オブ・アメリカのカラー・ハーモニ
一・マニユアル（ＣＯｎｔａｉｎｅｒＣＯｒｐＯｒａｔ
ｌＯｎＯｆ，Ａｎｌｅｒｉｃａ（７）ＣＯｌＯｒｈａｒ
ｍＯｎｙｍａｎｕａｌ）を用いた。

（１）シユクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）無
色〜うす黄〜にぶ黄〔２１ｃ．Ｇ０１ｄ〕の発育上に、
うつすらと日の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめら
れない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培養
）うす黄〜うす黄だいだい〔２１ｃ．Ｈ０ｎｅｙＧ０１
ｄ〕〜灰昧オリーブ〔１１１，Ｌｔ０１ｉｖｅＤｒａｂ
〕 の発育上に、白の気菌糸をわずかに着生し、溶解性
色素はみとめられない。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ一培
地５，２７℃培養）うす黄だいだい〔２１ｃ．Ｈ０ｎｅ
ｙＧ０１ｄ〕〜暗いオリーブ〔１ｎ１，ＤＫ０１１ｖｅ
〕の発育上に、うつすらと白の気菌糸を着生し、溶解性
色素はみとめられない。

（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ一培地４，２
７℃培養）無色〜うす黄茶〔２１ｅ．Ｍｕｓｔａｒｄ〕
〜にぶ黄〔２ｎｅ，ＭｕｓｔａｒｄＧ０１ｄ〕の発育上
に、うつすらと白の気菌糸を着生し、溶解性色素はみと
められない。

（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ一培地７，２７℃培養
）無色〜うす黄だいだい〔２１ｃ，Ｈ０ｎｅｙＧ０１ｄ
〕〜にぶ黄〔２ｐ９，ＭｕｓｔａｒｄＧ０Ｉｄ〕の発育
上に、白の気菌糸をわずかに着生し、溶解性色素は培養
後１０日目頃からうすピック〜うす赤紫色をおびる。

（６）栄養寒天培地（２７℃培養） うす黄〜うす黄だいだい〔２１ｃ．Ｈ０ｎｅｙＧ０１ｄ
〕にぶ黄〔２ｎｅＭｕｓｔａｒｄＧ０１ｄ〕の発育上に
、白の気菌糸をわずかに着生し、溶解性色素はみとめら
れない。

（７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ一培地２，２７
℃培養）無色〜うすだいだい〔３ｇｃ．ＬｔＴａｎ〕〜
暗い黄だいだい〔３ｎｅ．Ｔ０ｐａ幻の発育上に、うつ
すらと白の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめられな
い。

（８）オートミール寒天培地（ＳＰ一培地３，２７℃培
養）無色〜うす黄〜うす黄だいだい〔２ｇｃ．Ｂａｍｂ
００〕の発育上に、うつすらと白の気菌糸を着生し、溶
解性色素はみとめられない。

（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）無色
〜うす黄だいだい〔２ｇｃ．Ｂａｍｂ００〕〜にぶ黄〔
２ｎｅ．ＭｕｓｔａｒｄＧ０１ｄ〕の発育周辺にうつす
らと白の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめられない
。Ｕスターチ寒天培地（２７℃培養） 無色〜うす黄だいだい〔２１ｃ．Ｈ０ｎｅｙＧ０１ｄ〕
の発育上に、うつすらと白の気菌糸を着生し、溶解性色
素はみとめられない。

１１）リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）無色〜うす
黄〜にぶ黄〔２１１ｅ．Ｍｕｓｔａｒｄ〕の発育上に、
うつすらと白の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめら
れない。

Ｕセルロース（Ｆｉ紙片添加合成液、２７℃培養）無色
の発育上に、培養後７日目頃からうつすらと白の気菌糸
を着生し、溶解性色素はみとめられない。

（自）ゼラチン穿刺培養 単純ゼラチン培地（２０℃培養）では、無色〜うす黄だ
いだいの発育上に、白の気菌糸を着生し、培養後１３日
目頃からうすピック〜にぶ赤紫の溶解性色素を産生する
。

グルコース・ペプトンゼラチン培地（２７℃培養）では
、無色〜うす黄〜にぶ黄の発育上にうつすらと白の気菌
糸を着生し、溶解性色素はみとめられない。

（自）脱脂牛乳（３７℃培養） 発育は無色〜うす黄だいだい〜にぶ黄だいだいで、気菌
糸は着生しない。

溶解性色素もみとめない。３ 生理的性質 （１）生育温度範囲 スターチ・イースト寒天（可溶性澱粉１．０％、イース
トエキス０．２％、紐寒天３．０％、ＰＨ７．Ｏ〜７．
２）を用い、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃
、５０℃の各温度で試験の結果、５０℃を除いてそのい
ずれの温度でも生育したが、最適温度は３０℃〜３７℃
付近と思われる。

（２）ゼラチンの液化（１５（ｆ）単純ゼラチン、２０
℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン・２７℃培養
）単純ゼラチン、グルコース・ペプトン・ゼラチン培地
共に培養後３日目頃から液化が始まりその作用は中等度
〜弱い方である。

（３）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
及びスターチ寒天培地、何れも２７℃培養）何れの培地
においても水解性はみとめられない。

（４）脱脂牛乳の凝固、ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃
培養）培養後５日目に凝固が完了し、同時にペプトン化
が始まり、培養後２１目頃にはほとんど完了する。

その作用は中等度〜強い方である。（５）メラニン様色
素の生成（トリフトン・イーストプロス、ＩＳＰ一培地
１；ペプトン・イースト・ 寒天、ＩＳＰ一培地６；チ
ロシン寒天、ＳＰ一培地７、何れも２７℃培養）何れの
培地においてもメラニン様色素の生成はみとめられない
。

（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培
地、ＩＳＰ一培地９、２７℃培養）Ｄ−グルコース、Ｌ
−アラビノース、Ｄ一キシロース、Ｄ−フラグドーズ、
イノシトール、Ｄ−マンニトールを利用してよく発育し
、Ｌ−ラムノース、ラフイノースは利用しない。

又、シユクロースはおそらく利用しないと思われる。（
７） リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天、２７℃
培養）培養後３日目頃から発育周辺のリンゴ酸石灰を溶
解し、その作用は強い方である。

（８）硝酸塩の還元反応（１％硝酸カリ゛含有ペプトン
水、ＩＳＰ一培地８，２７℃培養）陰性である。

以上の性状を要約すると、ＭＧ２５４−ＣＦ５株は顕鏡
下で基中菌糸は桿菌または球菌状に分断し、真直ぐに伸
長した気菌糸には典型的な胞子の形成はみとめられない
。

又グラム染色陽性で、抗酸性である。種々の培地で、う
す黄〜うす黄だいだい〜にぶ黄の発育上に、うつすらと
白の気菌糸を着生し、溶解性色素はほとんど産生しない
が、チロシン寒天培地（ＩＳＰ一培地７）、単細ゼラチ
ン培地では紫色味をおびる。メラニン様色素は何れの培
地においても陰性であり、蛋白分解力は中等度〜強い方
で、スターチの水解性はみとめられない。ＭＧ２５４−
ＣＦ５株は、リシバリエら （ＬｉｃｈｉｖａｌｉｅｒｅｔｃＩｎｔｅｒｎａｔｉＯ
ｎａｌｊＯｕｒｎａｌＯ．ｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａ
ｃｔｅｒｉＯｌＯｇｙ．２０巻、４３５頁、１９７０）
の提唱する細胞壁タイプのＡ型を示し、メソ一２，６−
ジアミノピメリン酸と細胞壁の糖成分としてアラビノー
ス、ガラクトースを有し、りポーズも多少有しているこ
とが確められた。

さらに薄層クロマトグラフイ一法により脂質としてＬＣ
Ｍ−Ａ（りヒト・キヤラクタリステイツク・オブ・ノカ
ルデイア）は認められなかつたが、全菌体をガスクロマ
トグラフイ一法（０ｋａｍｉ９Ｙ，Ｍ．Ｈａｍａｄａ・
ＡｎｄＮ．Ｕｅｄａ：ＰｒＯｃ．ｌｓｔＩｎｔ．ＣＯｎ
ｆｅｒ．ＣｕｌｔｕｒｅＣＯｉｉｅ一ＣｔｉＯｎｓ，Ｈ
．ＩｉｚｕｋａａｎｄＴ．Ｈａｓｅｇａｗａ（Ｅｄ）Ｕ
ｎｉｖ．ＴＯｋｙＯＰｒｅｓｓ．ＴＯｋｙＯ，ｌ９７Ｏ
，Ｐ４５７）で試験した結果、Ｃｌ４，Ｃｌ５，Ｃｌ６
の脂肪酸が検出された。この成績は以前当研究所におい
て試験したＮＯｃａｒｄｉａｂｒａｓｉｌｌｅｎｓｉｓ
４Ｏ４ｌＯＦＭ８３）、ＮＯｃａｒｄｉａｂｒａｓｉｌ
ｉｅｎｓｉｓ４Ｏ５５（ＩＦＭ８９）等と脂肪酸のパタ
ーンが同一であり、ノーカルデイア（ＮＯｃａｒｄｉａ
）型と考えられる。次にシデロケリン（ＳｉｄｅｒＯｃ
ｈｅｌｉｎ）の生産菌であるノカルディア・エスビ一（
ＮＯｃａｒｄｉａｓｐ．）ＳＣｌｌ３４Ｏ株（Ｔｈｅｊ
ＯｕｒｎａｌＯｆＡｎｔｉｂｉ一０ｔｉｃｓ３４巻、７
９１頁、１９８１）とＭＧ２５４−ＣＦ５株を比較して
、形態学的性質、生理的性質、更に細胞壁の構成成分、
全菌体の構成分まで一致した。

両者が異なる点はＭＧ２５４−ＣＦ５株が気菌糸を着生
し、うす黄〜うす黄だいだいの発育を有することである
。しかしＭＧ２５４−ＣＦ５株も継代を重ねると気菌糸
の形成は悪くなり、発育の色については、ＳＣｌ，ｌ３
４Ｏ株が白昧灰と記載されているのは、色の観察の場合
の主観的問題も考慮される。故に両者は極めて近い関係
の菌種と言えよう。なお、シデロケリン生産菌の他に、
従来の記載中より、近い性質の菌種をあげると、ノカル
デイア０コエリアカ（ＮＯｃａｒｄｉａｃＯｅｌｌａｃ
ａ．Ｂｅｒ−Ｇｅｙ′ＳＭａｎｕａｌＯｆＤｅｔｅｒｍ
ｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔ−ＥｒｌＯｌＯｇｙ．第８版、
７３３頁）がある。

ノカルデイア・コエリアカは、白い気菌糸を有し、コロ
ニーの色は白〜にぶ黄を呈し、その他の性質もＭＧ２５
４−ＣＦ５株とよく類似しているが、生育温度の最適条
件が２５〜２８℃と記載されており、この点はＭＧ２５
４−ＣＦ５株と異なる。以上の点より、ＭＧ２５４−Ｃ
Ｆ５株は、ノカルデイア（ＮＯｃａｒｄｉａ）属に属し
、ノカルデイアエスピ一（ＮＯｃａｒｄｉａｓｐ．）Ｍ
Ｇ２５４−ＣＦ５と同定した。なお、ＭＧ２５４−ＣＦ
５株を工業技術院微生物工業技術研究所に寄託申請し、
昭和５６年９月２５日、微工研菌寄第６１６３号として
受託された。

以上の如く調製したシデロケリンＡの培養液について実
施した比較試験例並びに実施例により本発明をさらに詳
細に説明する。

比較試験 上述のシデロケリンＡを含む培養液４．０１（力価約１
００ｍｃｇ消、ＰＨ７．ｌを２．０１ずつ２分し、以下
の２処理囚又は１３）を行つた。

（Ａ） （従来法）：培養液を減圧下、４５℃を越えな
い温度で約４０ＴｆＬ１まで濃縮する。

メタノール２５０ｍ１を撹拌しながらこれに濃縮発酵液
をゆつくり注ぎ、析出する不活性沈澱物を済別し、済液
を前記の条件下で約１０ｄに濃縮する。濃縮液よりシデ
ロケリンを酢酸エチルにより数回抽出を繰り返す。酢酸
エチルを減圧下で留去し、乾燥物質３８０ηを得た。１
３） （本発明）：培養液を非イオン性の多孔性スチレ
ン系樹脂（ダイヤイオンＨＰ−２０；１００ｍ１）を充
填したカラムに通誘し、吸着させた後、カラムを水洗す
る。

水−５０％アセトン水でアセトン濃度を直線的に高めな
がら、シデロケリンＡを溶出する。活性画分を集め減圧
下、４５℃を越えない温度でアセトンを留去した後、凍
結乾燥し乾燥粉末４２０ηを得た。以下、（４）及び（
８）の評価を明確にする目的で、上記（４）及び（自）
によつて得られた乾燥粉末を、それぞれ下記の処理に付
した。

即ち、各々の粉末は、そのメタノール可溶性区分のみを
それぞれ集めて濃縮し、セフアデツクスＬＨ−２０を充
填したカラムを通過させた後の活性画分を濃縮乾固し、
囚の乾燥粉末より１２５ｍｇ、（ＢＪのそれより１７６
ｍｇの精製粉末を得た。

この精製粉末をプロトン核磁気共鳴吸収分析法で測定し
、その１．７５ｐｐｍと１．６５ｐｐｍのＣＨ３プロト
ンの強度比を比較したところ、（４）の精製粉末は４：
１であり、（Ｂ）の精製粉末では１．６５ｐｐｍ０）Ｃ
Ｈ３プロトンのシグナルはほとんどが観察されなかつた
。（４）及び（Ｂ）の精製粉末は共にほぼ１００％の純
度をもつシデロケリンであると考えられるところから、
培養液中のシデロケリンから該精製粉末の収率は、それ
ぞれ囚が約６２．５（ｆ）、０３）が約８８％と換算さ
れる。両法を比較すると次の表の如くである。以上の結
果から明らかな如く、本発明の方法は精製収率が大巾に
上昇している上に、得られたシデロケリンＡ原末の純度
が従来の方法で得られたものに比し、飛躍的に向上して
いる。実施例 １ ＳＰ一培地２よりなる寒天斜面培地に維持されたＭＧ２
５４−ＣＦ５株をグルコース１０９、グリセロール１０
９、シユクロース１０１１オートミール５１、大豆粉２
０ｆ１、圧縮酵母５１、炭酸カルシウム１９に蒸留水を
加えて１１とし、ＰＨを７．４に調節後、１２１℃２０
分間殺菌した培地に接種する。

この培地１００ｍ１を５００ＴｆＬ１容フラスコ中回転
振盪機（２２０ｒｐｍ）上、２８℃で７２時間培養する
。別にグリセロール５０９、デキストリン５０９、バク
トソイトン（デイフコ社製）２５９、酵母エキス７．５
９、硫安５９、炭酸カルシウム５９に蒸留水を加え２．
５１とした培地をＰＨ７．４に調節する。

５００ｍ１容フラスコに１２５ｍ１ずつ分注した後、１
２１℃で２０分間殺菌する。

前記培養液４ａを各フラスコに接種後、回転振盪機（２
２０ｒｐｍ）上２８℃で１３日間発酵させる。発酵液を
集め２．１１を得る。済過助剤１００９を加え済過瓶を
用いて済液と水洗液を合わせ２．５１とする。この液を
ダイヤイオンＨＰ−２０１−００ｍ１に吸着させ１００
ｄの水で水洗後、水と５０（ｆ）アセトンの直線濃度勾
配法を用いて溶出する。活性区分を集め減圧下４０℃な
いしはそれ以下でアセトンの大部分を蒸発せしめた後、
凍結乾燥し４３１．６ηを得る。この粉末中にメタノー
ル１００７ｎ１を加え一時間攪拌後ガラスフイルタ一で
Ｆ過し、済液を減圧下４０℃で乾固し３７８．２ηを得
た。乾固した物質を３ｍ１のメタノールに溶解し、メタ
ノールで充填したセフアデツクスＬＨ−２０のカラムに
展開する。活性区分を濃縮乾固し１５９ηを得る。この
物質をメタノール／ジエチルエーテル（１／５）よりな
る溶液から結晶化し、淡黄色板状結晶４６．９ηを得る
。この結晶は紫外線吸収スペクトル、赤外線吸収スペク
トル、質量スペクトル、元素分析、触点、核磁気共鳴ス
ペクトル、比旋光度（メタノール中）の全てにわたつて
シデロケリンＡと完全に一致した。実施例 ２ 実施例１と同様の操作をして得られた培養液２０１，．
ｐＨ６．８中に淵過助剤としてハイフロスーパーセル２
００９を加え、ハイフロスーパーセル２００９を塗布し
た淵過床で吸引淵過し菌体を除く、２２の水で済過床を
水洗した後、これを淵液と合わせる。

合わせた液はダイヤオンＨＰ−２０１．６１に吸着させ
、水２１を用い水洗後９１の０〜５０（ｆｌ）のアセト
ン水を直線濃度勾配法を用いて３００ｍ１／時間の速度
で溶出し、およそ３０％のアセトン濃度に達した時から
４０％の間にシデロケリンＡが溶出される。シデロケリ
ンＡの溶出が終つてから５０％に至る間にも活性物質が
溶出されるが、これはリストセチン群抗生物質である。
シデロケリンＡ区分およそ１２の収率を１００％と以下
の収率を計算する。活性区分１１を５０Ｔ１１１に濃縮
後凍結乾燥する。得られた茶褐色粗粉末２２１０ｍｇを
４４ｍ１のメタノールで溶解し、不溶区分４５４ηを除
去し可溶物を２０ｄに濃縮すると収率９６％のメタノー
ル溶液が得られる。溶液はメタノールで満たしたセフア
デツクス…−２０５００ｍ１のカラム中を展開させ、活
性区分７０ＴｆＬ１３を濃縮乾固して１３４０〜、収率
９１％の粗粉末を得る。粗粉末をメタノール／ジエチル
エーテル（１／５）より結晶化させ１２４０ワ収率８４
％の純粋なシデロケリンＡの淡黄色板状結晶を得る事が
できる。

稀に針状結晶を得る事があるが、その核磁気共鳴スペク
トルも又シデロケリンＡと全く同一でありシデロケリン
Ｂは本製法では得る事ができない。参考例シデロケリン
Ａは水溶液中では中性ないしは微酸性で扱うのが好まし
く、アルカリ性で取り扱うのは異性化の原因となるので
使用しない方が良い。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるシデロケリンを非イオン性の多孔性スチレン
   系樹脂に吸着し、次いで、これを該抗性物質を溶解し得
   る有機溶剤と水との混合溶剤で溶出することを特徴とす
   る該抗生物質の精製法。 ２ シデロケリンを蓄積した培養液から該抗生物質を非
   イオン性の多孔性スチレン系樹脂に吸着せしめた特許請
   求の範囲第１項記載の精製法。 ３ 非イオン性の多孔性スチレン系樹脂が比表面積１４
   ０〜１８０ｍ＾２／ｇの範囲で、かつ気孔率４０〜６０
   ％及び最多頻度細孔径１０〜１０００オングストローム
   並びに骨格密度１．０５〜１．２６ｇ／ｍｌである特許
   請求の範囲第１項及び第２項記載の精製法。