JPS58103397A - キヤツプされたオリゴヌクレオチド及びその抗ウイルス剤としの利用 - Google Patents
キヤツプされたオリゴヌクレオチド及びその抗ウイルス剤としの利用Info
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- JPS58103397A JPS58103397A JP57211533A JP21153382A JPS58103397A JP S58103397 A JPS58103397 A JP S58103397A JP 57211533 A JP57211533 A JP 57211533A JP 21153382 A JP21153382 A JP 21153382A JP S58103397 A JPS58103397 A JP S58103397A
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- methyl
- cap
- capped
- nucleotide
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はインフルエンザ ピリオン トランスクリゾタ
ーゼ抑制に低濃度（ｔｏ”’Ｍ）で有効な新規な￥ヤツ
プされたオリゴヌクレオチド化合物に―する・ これらの化合物はインフルエンザビールス感染の処置に
有用な効力を有する。
ーゼ抑制に低濃度（ｔｏ”’Ｍ）で有効な新規な￥ヤツ
プされたオリゴヌクレオチド化合物に―する・ これらの化合物はインフルエンザビールス感染の処置に
有用な効力を有する。
インフルエンザ ピリオンに対し特異的な抑制効力を有
するキャップされないリーポリ！−化合物はＫｒｕｇら
、Ｐｒｏｓ。Ｎａｔｌ、 Ａ＊ａｄ、 ！ｉ！＠１゜Ｕ
、１３゜Ａ、７７．８８７４（１９８０）； ８ｍ１ｔ
ｈら、Ｖｉｒ＋ｅｌｓｇｙ １０ｍ、 ２４Ｂ（１９１
１０）及びＰｌｅｔＩｋら、Ｃ＠ｌｌ ２８ ｅ ８
４７ （１１１１＄１１ ）により公知である。しかし
ながら、これらの化合物は４＞ ｇトνでトランスク
リプターゼの抑制（ｇｏｏ＠行わせるＫＩＧ−マＭｏ濃
度を必要とする。
するキャップされないリーポリ！−化合物はＫｒｕｇら
、Ｐｒｏｓ。Ｎａｔｌ、 Ａ＊ａｄ、 ！ｉ！＠１゜Ｕ
、１３゜Ａ、７７．８８７４（１９８０）； ８ｍ１ｔ
ｈら、Ｖｉｒ＋ｅｌｓｇｙ １０ｍ、 ２４Ｂ（１９１
１０）及びＰｌｅｔＩｋら、Ｃ＠ｌｌ ２８ ｅ ８
４７ （１１１１＄１１ ）により公知である。しかし
ながら、これらの化合物は４＞ ｇトνでトランスク
リプターゼの抑制（ｇｏｏ＠行わせるＫＩＧ−マＭｏ濃
度を必要とする。
前述のキャップされないソー−９マー抑制剤により必要
とするよりも１００倍の低濃度で有効な抑制力（１０−
抑制）七持つ化合物を得ることは毒性副作用の可能性を
なくすこと及びこれらの化合物が細胞に吸収され銀いＯ
で細胞内濃度の有効性を増大することという８つの点に
おいて重要であると考えられる〇 概要 本拠明の目約は職種の中ヤツプされたオリゴヌクレオチ
ドを提供することにある。このオリゴヌクレオチドはキ
ャップされないオリゴヌクレオチド中に存在する時はイ
ンフルエンザ ぜリオン トランスタリゾターゼ（後記
説明参照）を抑制するベース（ヌクレオチド）で構成さ
れている。５′市端キヤツプはピリオン トランスタリ
プターゼに対するオリゴヌクレオチドの親和性を増大さ
せるもので、これにより抑制効果が増大する。これらの
キャップされたオリゴヌクレオチドはトランスクリプタ
ーゼを抑制するよりもむしろ刺激等のプリミングを防止
するために次の如く意図されている！（ｌ）このオリゴ
ヌクレオチドは１０個のヌクレオチドより短かく作り、
且つ３′末端デオキシモノヌクレオチド又は３′−〇−
メチル化す−モノヌクレオチドを含ませてプリ！−とし
て利用できな（す４（後記説明参照）；又は（２）１Ｇ
ヌタレオチドよりも長いオリゴヌクレオチドでオリゴヌ
クレオチドを変成（糖及び／又は塩基部及び／又はヌク
レオチド結合において）することによってビリオンエン
ドヌタレアーゼで第１０から第１３番目のヌクレオチド
結合が切断できず、たとえ切断できても、プリマーとし
ての作用をできなくする・これらの変成は、これらのオ
リゴヌクレオチド中の残余のプリミング活性な除く必要
かあれば、１０個のヌクレオチドとすることも可能であ
る。
とするよりも１００倍の低濃度で有効な抑制力（１０−
抑制）七持つ化合物を得ることは毒性副作用の可能性を
なくすこと及びこれらの化合物が細胞に吸収され銀いＯ
で細胞内濃度の有効性を増大することという８つの点に
おいて重要であると考えられる〇 概要 本拠明の目約は職種の中ヤツプされたオリゴヌクレオチ
ドを提供することにある。このオリゴヌクレオチドはキ
ャップされないオリゴヌクレオチド中に存在する時はイ
ンフルエンザ ぜリオン トランスタリゾターゼ（後記
説明参照）を抑制するベース（ヌクレオチド）で構成さ
れている。５′市端キヤツプはピリオン トランスタリ
プターゼに対するオリゴヌクレオチドの親和性を増大さ
せるもので、これにより抑制効果が増大する。これらの
キャップされたオリゴヌクレオチドはトランスクリプタ
ーゼを抑制するよりもむしろ刺激等のプリミングを防止
するために次の如く意図されている！（ｌ）このオリゴ
ヌクレオチドは１０個のヌクレオチドより短かく作り、
且つ３′末端デオキシモノヌクレオチド又は３′−〇−
メチル化す−モノヌクレオチドを含ませてプリ！−とし
て利用できな（す４（後記説明参照）；又は（２）１Ｇ
ヌタレオチドよりも長いオリゴヌクレオチドでオリゴヌ
クレオチドを変成（糖及び／又は塩基部及び／又はヌク
レオチド結合において）することによってビリオンエン
ドヌタレアーゼで第１０から第１３番目のヌクレオチド
結合が切断できず、たとえ切断できても、プリマーとし
ての作用をできなくする・これらの変成は、これらのオ
リゴヌクレオチド中の残余のプリミング活性な除く必要
かあれば、１０個のヌクレオチドとすることも可能であ
る。
以上のような本発明のキャップされたオリゴヌクレオチ
ドは弐 ｍ’ ａ （ｓ’） ｐｐｐ ＣｍすＮｍ（式
中Ｎはム又はＧ、ｍは２′０−メチル リーース）を電
するキャップ；結合基Ｘ（但しＸは該キャップに結合し
たム、Ｇ、Ｃ又はυ）；及び験結合基Ｘに結合したポリ
マー鎖を含み、４リマー形の時はインフルエンザウィル
スＲＮＡ転写【抑制するヌクレオチドより成り、且つ該
ｌリマー鎖はキャップに結合した時に転写を刺激するプ
リマーとしての作用を防止するように変成されているこ
とを特徴とするものである。
ドは弐 ｍ’ ａ （ｓ’） ｐｐｐ ＣｍすＮｍ（式
中Ｎはム又はＧ、ｍは２′０−メチル リーース）を電
するキャップ；結合基Ｘ（但しＸは該キャップに結合し
たム、Ｇ、Ｃ又はυ）；及び験結合基Ｘに結合したポリ
マー鎖を含み、４リマー形の時はインフルエンザウィル
スＲＮＡ転写【抑制するヌクレオチドより成り、且つ該
ｌリマー鎖はキャップに結合した時に転写を刺激するプ
リマーとしての作用を防止するように変成されているこ
とを特徴とするものである。
なお本発明で用いられる式中の記号は下記のことを意味
する。
する。
ｍ？Ｇ：？−メチル グアノシン（リーヌタレオシド）
ム寞アデノシン（リーヌクレオシド） υ寡つリジン（リーヌタレオシド） Ｃ露シチジン（りぜヌクレオチド） Ｇ−グアノシン（リーヌクレオシド） ｇ４１Ｊｔ４−チオ ウリジン（リゼヌクレオシド）ｔ
ｆｌｔ ２’−０−メチル リーースｄ：デオキシリー
ース（即ち２’−Ｈ９／−ス）説 明 真核性メツセンジャー（拳ｕｋａｒｙｏｔｌ・ＷａＳ・
・ｎ−ｇ＠ｒ ） ＲＮＡＩ （及び何れのＲＮＡもＳ
′末端がメチル化されたキャップ構造を有している、ｍ
’Ｇ（５すＰｐＨ（”すＮｍｅ但しこＯＮは一般にム又
＆１Ｇである。）はインフルエンザウィルスのメッセン
ジャーＲＮＡの合成にプリマーとして作用し、またキャ
ップ構造及びウィルスのメツセンジャーＲＮＡ分子に対
し短かいヌクレオチドを与えることが示されている。（
Ｂｏｕｌｏ７ら、Ｐｒ・・、Ｎａｔｌ ＳＡ＠ａｄ％Ｓ
＊１ ｓ Ｕａ８．Ａｓ ７５． ４８ａ＠−４８９０
（１９７８） ｓ Ｂｏｗｌｅｒら、Ｊ＠ｉｆ・１．■
。
ム寞アデノシン（リーヌクレオシド） υ寡つリジン（リーヌタレオシド） Ｃ露シチジン（りぜヌクレオチド） Ｇ−グアノシン（リーヌクレオシド） ｇ４１Ｊｔ４−チオ ウリジン（リゼヌクレオシド）ｔ
ｆｌｔ ２’−０−メチル リーースｄ：デオキシリー
ース（即ち２’−Ｈ９／−ス）説 明 真核性メツセンジャー（拳ｕｋａｒｙｏｔｌ・ＷａＳ・
・ｎ−ｇ＠ｒ ） ＲＮＡＩ （及び何れのＲＮＡもＳ
′末端がメチル化されたキャップ構造を有している、ｍ
’Ｇ（５すＰｐＨ（”すＮｍｅ但しこＯＮは一般にム又
＆１Ｇである。）はインフルエンザウィルスのメッセン
ジャーＲＮＡの合成にプリマーとして作用し、またキャ
ップ構造及びウィルスのメツセンジャーＲＮＡ分子に対
し短かいヌクレオチドを与えることが示されている。（
Ｂｏｕｌｏ７ら、Ｐｒ・・、Ｎａｔｌ ＳＡ＠ａｄ％Ｓ
＊１ ｓ Ｕａ８．Ａｓ ７５． ４８ａ＠−４８９０
（１９７８） ｓ Ｂｏｗｌｅｒら、Ｊ＠ｉｆ・１．■
。
ｓｏｆ５−ｓｏｆ（１９７Ｇ）ｅ Ｐｌ＠ｔ＠ｈら、Ｐ
ｒｏ＠、 Ｎａ１１゜ムｗａｄｓ ８＠ｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ
、１ｆｉ＊ １４１１１１−１１１１雪（１９）＠ ）
ｔ ＲｏｂＩｒｔｓｏｍら、Ｎｕ・１１１ムｏｌｄ魯
勤１ｅｅ８ ＊ １１１ Ｉ −＄１４２ （１９１
１０） ； Ｋｒｕｇら％Ｐｒ＠＠５Ｎａｔｌ、ム＠ａ
ｄ ｓ ８＠ｌ ｓ Ｕ＠ ａｍ Ａｓｓ ’ ？ ＠
”マ４−！１８７Ｂ（１９８０）；ＰｌｏｔＩｈら
、Ｃｌ１１２ｍ、１１４？、５ａｓ（ｓｓｓｔ）］。こ
のプリミング反応＆まプリ！−と母製ピリオンＲＮＡと
の間の水嵩−結合に影曖を与えない。代りに、転写の始
動の刺激はプリーｒ −ＲＮ Ａとウィルスの）ランス
クリプターゼ コンプレックスと結合している１個又は
それ以上の蛋白質との特殊の相互作用によるものである
と考えられる・この特殊の相互作用はＳ′−メチル化で
中ヤップした構造が明らかに―係する・これはゾリミン
グ作用かこのキャップ構造の存在によるからである。こ
の反応の第１ＲＮＩは純粋ウィルス核に見出されたエン
ドヌクレアーゼによるプリマーＲＮムの切断である。
ｒｏ＠、 Ｎａ１１゜ムｗａｄｓ ８＠ｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ
、１ｆｉ＊ １４１１１１−１１１１雪（１９）＠ ）
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”マ４−！１８７Ｂ（１９８０）；ＰｌｏｔＩｈら
、Ｃｌ１１２ｍ、１１４？、５ａｓ（ｓｓｓｔ）］。こ
のプリミング反応＆まプリ！−と母製ピリオンＲＮＡと
の間の水嵩−結合に影曖を与えない。代りに、転写の始
動の刺激はプリーｒ −ＲＮ Ａとウィルスの）ランス
クリプターゼ コンプレックスと結合している１個又は
それ以上の蛋白質との特殊の相互作用によるものである
と考えられる・この特殊の相互作用はＳ′−メチル化で
中ヤップした構造が明らかに―係する・これはゾリミン
グ作用かこのキャップ構造の存在によるからである。こ
の反応の第１ＲＮＩは純粋ウィルス核に見出されたエン
ドヌクレアーゼによるプリマーＲＮムの切断である。
この特殊な酵素はＲＮム基質中にメチル化キャップ構造
の存在を必要とし、キャップから１０ないし１３ヌクレ
オチド プリン残基の所で優先的に切断し、３′−水酸
基により７ツグメントな生成する。これらのフラグメン
トは初期転写の実際のブリ！−である・ＲＮムゾリ！−
の公表と転写の開始とは必ずしも一緒になる必要はない
０なぜなら２′フラグメントは一つの反応から単■され
て次の反応に加えられる時、ブリ！−として用いること
ができるからである。ヌクレアーゼで発生したキャップ
されたフラグメントはウィルスのトランスクリブターゼ
コンプレックスと効果的に結合する。（０１ｍａｍＩ
ｒら、Ｐｒｏｓ 、 Ｎａ１ｌ ｓ Ａ＠ａｄ 、 Ｓ
ｅｔ 、 Ｕ、８６ム、７８゜（１９８１））。キャッ
プされたフラグメントは７個のヌクレオチドプラスキャ
ップぐらい短かくても（即ちエンドヌクレアーゼで発生
したフラグメントより短い）トランスクリブタ−４コン
ブレツタスと効果的に結合するが一プリ！−として用い
るには弱い・ しかしながら、極めて短いキャップされたフラグメント
（１個又は２Ｈのヌクレオチドの長さ）はトランスクリ
ブターゼ コンプレックスに弱く結合する〇 インフルエンザウィルスのＲＮム転写は低位の第二構造
な持った職種のキャップされないリーポリ！−により抑
制されることもまた示されている；ポリ８４Ｕ及び／９
ａＧはＫＷｕｇら、Ｐｒｏｓ ５Ｎａｔｌｓ＾＊ａｄ％
８＠ｉ 、Ｕｌｌ ８＠ム、（１９１１０）ｓｕｐｒ
ａｉ ｐｌｏｔ＠ｈら、Ｃ＠１１（１９８１） ５ｕｐ
ｒａでの試験で最も効果がある。その結果、分子内及び
分子間の水素結合の遊離の状態で見た場合はぼりリーヌ
クレオチドの抑制作用に寄与するヌクレオチドはυ、８
４Ｕ及びＧであり、ム及びＣではないことご示している
。ヌクレオチドの前者のグループはプリン（６−位）又
は♂り電ジン（４−位）Ｉｔ上の相肖する位置に（アミ
）基よりもむしろ）ｉ！！素又は硫黄基な有している・
本発明の主目的はキャップされないり一４９！−よりか
なり高い特異な抑制効果を有する化合物を合成すること
である＠後者は１上ヱ上四でインフルエンザ ぎりオン
トランスタリプターゼの・０％抑制を得るのに約ｔｏ
−’ＭＯ濃度を必要とする。本発明の化合物は同じ抑制
レベルを少くとも１００倍低濃度（ｔｏ−＠Ｍの範Ｂ）
で得ることができる。これは下記特徴を有するオリゴヌ
クレオチドの合成により行うことができるｘ （１）
ｔリオンエンドヌクレアーゼ及びトランスタリプターゼ
に対してオリゴヌクレオチドの親和性を増大させる６Ｉ
メチル化中ヤツゾ構造を有し、また（２）キャップされ
ないりＩポリ！−の抑制活性に寄与することが示されて
いる塩基を有している。更に変成は抑制剤よりもむしろ
ブリ！−の存在から、キャップされたオリゴヌクレオチ
ド【防止するために行わなければならない。このような
変成な（しては、本発明化合物は公知技術から、ブリ！
−としての作用は予想されるであろうし、また事実この
場合も見られた。一つの方法はキャップされたオリゴヌ
クレオチドは長さで１０ヌクレオチドより短かく（長さ
でおそらく約６〜８ヌタレオチド）作ることである。こ
れによってＦフンスタリプターゼ コンプレックスに効
果的に結合するが、ブリ！−として用いられないであろ
う。これらのオリゴヌクレオチドはブリマーとして作用
しないことは確かである。これらは３′末端デオ中シ毫
ノヌタレオチド（例えば、ｐｄＣｐ）又は３′木端３′
−〇−メチル化りＩモノヌクレオチドｐＣ（３ＩＯ−メ
チル）を含むように拡張することもできる。
の存在を必要とし、キャップから１０ないし１３ヌクレ
オチド プリン残基の所で優先的に切断し、３′−水酸
基により７ツグメントな生成する。これらのフラグメン
トは初期転写の実際のブリ！−である・ＲＮムゾリ！−
の公表と転写の開始とは必ずしも一緒になる必要はない
０なぜなら２′フラグメントは一つの反応から単■され
て次の反応に加えられる時、ブリ！−として用いること
ができるからである。ヌクレアーゼで発生したキャップ
されたフラグメントはウィルスのトランスクリブターゼ
コンプレックスと効果的に結合する。（０１ｍａｍＩ
ｒら、Ｐｒｏｓ 、 Ｎａ１ｌ ｓ Ａ＠ａｄ 、 Ｓ
ｅｔ 、 Ｕ、８６ム、７８゜（１９８１））。キャッ
プされたフラグメントは７個のヌクレオチドプラスキャ
ップぐらい短かくても（即ちエンドヌクレアーゼで発生
したフラグメントより短い）トランスクリブタ−４コン
ブレツタスと効果的に結合するが一プリ！−として用い
るには弱い・ しかしながら、極めて短いキャップされたフラグメント
（１個又は２Ｈのヌクレオチドの長さ）はトランスクリ
ブターゼ コンプレックスに弱く結合する〇 インフルエンザウィルスのＲＮム転写は低位の第二構造
な持った職種のキャップされないリーポリ！−により抑
制されることもまた示されている；ポリ８４Ｕ及び／９
ａＧはＫＷｕｇら、Ｐｒｏｓ ５Ｎａｔｌｓ＾＊ａｄ％
８＠ｉ 、Ｕｌｌ ８＠ム、（１９１１０）ｓｕｐｒ
ａｉ ｐｌｏｔ＠ｈら、Ｃ＠１１（１９８１） ５ｕｐ
ｒａでの試験で最も効果がある。その結果、分子内及び
分子間の水素結合の遊離の状態で見た場合はぼりリーヌ
クレオチドの抑制作用に寄与するヌクレオチドはυ、８
４Ｕ及びＧであり、ム及びＣではないことご示している
。ヌクレオチドの前者のグループはプリン（６−位）又
は♂り電ジン（４−位）Ｉｔ上の相肖する位置に（アミ
）基よりもむしろ）ｉ！！素又は硫黄基な有している・
本発明の主目的はキャップされないり一４９！−よりか
なり高い特異な抑制効果を有する化合物を合成すること
である＠後者は１上ヱ上四でインフルエンザ ぎりオン
トランスタリプターゼの・０％抑制を得るのに約ｔｏ
−’ＭＯ濃度を必要とする。本発明の化合物は同じ抑制
レベルを少くとも１００倍低濃度（ｔｏ−＠Ｍの範Ｂ）
で得ることができる。これは下記特徴を有するオリゴヌ
クレオチドの合成により行うことができるｘ （１）
ｔリオンエンドヌクレアーゼ及びトランスタリプターゼ
に対してオリゴヌクレオチドの親和性を増大させる６Ｉ
メチル化中ヤツゾ構造を有し、また（２）キャップされ
ないりＩポリ！−の抑制活性に寄与することが示されて
いる塩基を有している。更に変成は抑制剤よりもむしろ
ブリ！−の存在から、キャップされたオリゴヌクレオチ
ド【防止するために行わなければならない。このような
変成な（しては、本発明化合物は公知技術から、ブリ！
−としての作用は予想されるであろうし、また事実この
場合も見られた。一つの方法はキャップされたオリゴヌ
クレオチドは長さで１０ヌクレオチドより短かく（長さ
でおそらく約６〜８ヌタレオチド）作ることである。こ
れによってＦフンスタリプターゼ コンプレックスに効
果的に結合するが、ブリ！−として用いられないであろ
う。これらのオリゴヌクレオチドはブリマーとして作用
しないことは確かである。これらは３′末端デオ中シ毫
ノヌタレオチド（例えば、ｐｄＣｐ）又は３′木端３′
−〇−メチル化りＩモノヌクレオチドｐＣ（３ＩＯ−メ
チル）を含むように拡張することもできる。
他の方法は少くとも１４ヌクレオチドの長さのキャップ
されたオリゴヌクレオチドを合成することである。これ
は糖及び／又は塩基部及び／又はヌクレオチド結合を変
成したもので１従つてこれらはぜリオン エンドヌクレ
アーゼにより切断することができないし、またたとえ切
断できるとしても、ウィルスのＲＮム転写のプリマーと
して作用し得ない◎ 以上の変成は本発明化合物の合成の面から重要なことで
あることに注目すべきである。
されたオリゴヌクレオチドを合成することである。これ
は糖及び／又は塩基部及び／又はヌクレオチド結合を変
成したもので１従つてこれらはぜリオン エンドヌクレ
アーゼにより切断することができないし、またたとえ切
断できるとしても、ウィルスのＲＮム転写のプリマーと
して作用し得ない◎ 以上の変成は本発明化合物の合成の面から重要なことで
あることに注目すべきである。
これらの変成はまた、もし残留プリミング作用を除く必
要があれば、長さがｌＯヌタレオチドより少いキャップ
されたオリゴヌクレオチドに導（であろう。
要があれば、長さがｌＯヌタレオチドより少いキャップ
されたオリゴヌクレオチドに導（であろう。
本発明の化合物は−りマーベースに式 ｒｍ’ Ｇ（５
つ１１１１ＰＣ！Ｉ’） ＮｍｐＸ （Ｎ ＝ Ａ又は
Ｇ及びＸ＝”Ａ。
つ１１１１ＰＣ！Ｉ’） ＮｍｐＸ （Ｎ ＝ Ａ又は
Ｇ及びＸ＝”Ａ。
Ｇ、Ｃ又はＵで、ｍ ｚ ２’ −０−メチルリーース
）を有する中ヤツプされたフラグメン）を結合させるこ
とにより製造する。結合グループｐＸには４リマ−１−
スを結合させる。
）を有する中ヤツプされたフラグメン）を結合させるこ
とにより製造する。結合グループｐＸには４リマ−１−
スを結合させる。
所望のキャップされたオリゴヌクレオチドを十分な量、
合成するには、まず代表的なキャップされたフラグメン
）、即ちｍ’Ｇ（８すｐｐｐ （５リムｒｔｈｐｃをｉ
ｏ−ｗｏｏダ合成する必要かある・この化合物の合成法
は公知である〔山口ら、Ｎｕｓｌ＊ｌ＠Ａｃ１ｄ Ｒ＊
ｓ。８ｐ、 ｐｕｂｌ、 ＃２ 、 ６１１１（１９７
６））ｏこれはＲＮムリガーゼの受容体又はポリヌクレ
オチド ホスホリラーゼに対するブリ！−として用いら
れる最゛小の分子である０そして１これら二つの酵素は
キャップされたフラグメントを拡大するに用いられる０
これら二つの酵素に対する最適条件は少臘のｍ’Ｇｐｐ
ｐＧｍｐｃを用いて決定されるが、このものはり−ヌタ
レアーゼ丁２及びアルカリ性ホスファター（の消化によ
るレオウィルス（ｒ＠ｏｖｉｒｕｓ）メツセンジャーＲ
ＮＡＩから誘導することができる。キャップされたオリ
ゴヌクレオチド抑制剤の実施例を下記に示す。なお実施
例で用いられる式１．２人、２Ｂ及び３についての説明
は下記の通りである。
合成するには、まず代表的なキャップされたフラグメン
）、即ちｍ’Ｇ（８すｐｐｐ （５リムｒｔｈｐｃをｉ
ｏ−ｗｏｏダ合成する必要かある・この化合物の合成法
は公知である〔山口ら、Ｎｕｓｌ＊ｌ＠Ａｃ１ｄ Ｒ＊
ｓ。８ｐ、 ｐｕｂｌ、 ＃２ 、 ６１１１（１９７
６））ｏこれはＲＮムリガーゼの受容体又はポリヌクレ
オチド ホスホリラーゼに対するブリ！−として用いら
れる最゛小の分子である０そして１これら二つの酵素は
キャップされたフラグメントを拡大するに用いられる０
これら二つの酵素に対する最適条件は少臘のｍ’Ｇｐｐ
ｐＧｍｐｃを用いて決定されるが、このものはり−ヌタ
レアーゼ丁２及びアルカリ性ホスファター（の消化によ
るレオウィルス（ｒ＠ｏｖｉｒｕｓ）メツセンジャーＲ
ＮＡＩから誘導することができる。キャップされたオリ
ゴヌクレオチド抑制剤の実施例を下記に示す。なお実施
例で用いられる式１．２人、２Ｂ及び３についての説明
は下記の通りである。
下記式ｌは立体障害効果による酵素切断の妨害（ｋ＋ｌ
ｏ＠ｋ）又はプリマーとしての利用の妨害を模式図で示
したものである。切断部位は矢印で示した・ 立体障害によゐ妨害 ここでｒ−ＯＣＲ，は切断部位又はプリマーとじての利
用を妨害する。
ｏ＠ｋ）又はプリマーとしての利用の妨害を模式図で示
したものである。切断部位は矢印で示した・ 立体障害によゐ妨害 ここでｒ−ＯＣＲ，は切断部位又はプリマーとじての利
用を妨害する。
下記式３ム及び３Ｂは糖部の化学的性質を変えることに
よる酵素切断の妨害又はプリマーとしての利用の妨害を
模式図で示したものである。
よる酵素切断の妨害又はプリマーとしての利用の妨害を
模式図で示したものである。
切断部位は矢印で示した。
（以下余白）
糖部の変化による妨害
ここで１−ｕは切断又はプリマーとしての利用【防止す
る。
る。
ここで対向位置のｒ−ｏｎ（アラＣノース）は切断又は
プリマーとしての利用を防止する。
プリマーとしての利用を防止する。
また下記式３は矢印で示した切断部位の位置を変えるか
又は化学的に変えることによる酵素切断の妨害又はプリ
マーとしての利用の妨害を模式図で示したものである〇 ここで矢印の部分の結合は３′の炭素原子位置の代りに
Ｖの炭素原子位置のため切断できない。
又は化学的に変えることによる酵素切断の妨害又はプリ
マーとしての利用の妨害を模式図で示したものである〇 ここで矢印の部分の結合は３′の炭素原子位置の代りに
Ｖの炭素原子位置のため切断できない。
実施例！
キャップされたオリゴヌクレオチドの切断は切断個所を
妨害することにより防止することができる（式１参照）
。一つの好適な方法は７−Ｏ−メｆｋ基で変成された糖
、列えはｍ’ＧｐｐＰ＆１１１ｐｃ（２’ −ｏ −ｘ
＠ｓ’ｕ）ｎ Ｃ式中れは１１より大）を用いる方法で
ある。これはｍ’Ｇ ｐｐｐ Ａｍ ｐ Ｃと１−Ｏ−
メチル化Ｓ’ＵＤＰ（Ｐ−Ｌ Ｂｉｏ＠ｈ＊ｍ１ｅａ１
社から市販されている）ｆ：Ｍ、ルテウス（Ｌｕｔ＠ｗ
＠ ）ポリヌクレオチド ホスホリラーゼの存在下、プ
ラマー彎ディベンゾン） （ｐｒ１ｍ＠ｒ ｄ＠ｐＩｍ
ｄ＠ｍｔ ）条件下で培養するか、又はＲＮＡリガーゼ
を用いてｍツＧｐｐｐＡｍｐＣと１−ｏ−メチル化８’
ＵＯ易′−リン酸化リーオリゴヌクレオチド〔Ｅ、；す
（５ｅｌｌ）又はＭ、ルテウス（Ｌｗｔ＠ｕｓ ） ／
リヌタレオチド ホスホリラーゼをプライ！−−インデ
イペンデント（Ｐｒ１ｍ＠ｒ−魚ｎｄ＊ｐ＊ｎｄ＠ｎｔ
）条件下でアルカリ ホスファターゼで脱リン酸化し
、ついで、−リヌタレオチドキナ′−七でＶリン酸化し
て合成。Ｂｏｔｈら、Ｊ、Ｍ＠ｌ、 Ｂｌ＠１．す）４
．＠Ｉｓマ（１１１？ ｆｉ ） ： Ｅｎｇｌａｎｄ
ａｎｄ Ｕｈｌ＠ｍｂ＊ｓｋ、 Ｂｉｏ＠に−ｓ −
４ｒＦ １７．！０６Ｇ（１１１７８）ｇＨｌｇｇｉ
ｍｓら、Ｎｗ＠ｌ・１＠Ａ＠１４＊ Ｒ＊ｓ、、 ６．
１０１３１（１９７９） ） トｉ結合させる何れか
の方法により行う。たとえ切断が妨害されなくても、該
化合物はプリ！−としての作用のない変成オリゴヌクレ
オチドにより抑制剤として作用する。
妨害することにより防止することができる（式１参照）
。一つの好適な方法は７−Ｏ−メｆｋ基で変成された糖
、列えはｍ’ＧｐｐＰ＆１１１ｐｃ（２’ −ｏ −ｘ
＠ｓ’ｕ）ｎ Ｃ式中れは１１より大）を用いる方法で
ある。これはｍ’Ｇ ｐｐｐ Ａｍ ｐ Ｃと１−Ｏ−
メチル化Ｓ’ＵＤＰ（Ｐ−Ｌ Ｂｉｏ＠ｈ＊ｍ１ｅａ１
社から市販されている）ｆ：Ｍ、ルテウス（Ｌｕｔ＠ｗ
＠ ）ポリヌクレオチド ホスホリラーゼの存在下、プ
ラマー彎ディベンゾン） （ｐｒ１ｍ＠ｒ ｄ＠ｐＩｍ
ｄ＠ｍｔ ）条件下で培養するか、又はＲＮＡリガーゼ
を用いてｍツＧｐｐｐＡｍｐＣと１−ｏ−メチル化８’
ＵＯ易′−リン酸化リーオリゴヌクレオチド〔Ｅ、；す
（５ｅｌｌ）又はＭ、ルテウス（Ｌｗｔ＠ｕｓ ） ／
リヌタレオチド ホスホリラーゼをプライ！−−インデ
イペンデント（Ｐｒ１ｍ＠ｒ−魚ｎｄ＊ｐ＊ｎｄ＠ｎｔ
）条件下でアルカリ ホスファターゼで脱リン酸化し
、ついで、−リヌタレオチドキナ′−七でＶリン酸化し
て合成。Ｂｏｔｈら、Ｊ、Ｍ＠ｌ、 Ｂｌ＠１．す）４
．＠Ｉｓマ（１１１？ ｆｉ ） ： Ｅｎｇｌａｎｄ
ａｎｄ Ｕｈｌ＠ｍｂ＊ｓｋ、 Ｂｉｏ＠に−ｓ −
４ｒＦ １７．！０６Ｇ（１１１７８）ｇＨｌｇｇｉ
ｍｓら、Ｎｗ＠ｌ・１＠Ａ＠１４＊ Ｒ＊ｓ、、 ６．
１０１３１（１９７９） ） トｉ結合させる何れか
の方法により行う。たとえ切断が妨害されなくても、該
化合物はプリ！−としての作用のない変成オリゴヌクレ
オチドにより抑制剤として作用する。
実施例２
ａ） キャップされたオリゴヌクレオチドの切断は糖
部分の化学的性質を変えることによって防止できる（式
２人参照）０一つの好適な方法はｌ−Ｈ基で変成された
糖（デオキシオリゴヌクレオチド）【用いることであゐ
。この掴の化合物の例はｆＥｌ’Ｇｌ）ｐｐＡｍｐＣ（
ｄ８’Ｕ）ｎ（但しｍ）１１ ）であるｏ ｍ’Ｇｐｐ
ｐＧｍｐｃは先ずＲＮＡリガーゼを用いてデオキシヌタ
レオシド！Ｉ／ 、 ！ｌ／ジホスフェート、例えばｐ
ｄＡｐに結合させる。この酵素はり〆ドナーと同様デオ
１キシ体を用いる（ Ｈｌｍｓｅｍらｓ Ｂｉｏ＠
ｈ＠ｍ１ｓｔｒｙ１？、！＄０９１（１９７８）；Ｈ１
ｗ＋ｔｏｎ及びＧｕｍｐｅｒｔ＊Ｎｕ＠ｌ＊ｉ＠Ａ＠亀
むＲ＠＊ −？ ＠ ４８ Ｂ （１９７’ ））。３
Ｉ−ＯＨ基【生じせしめるホスファターゼ処理に続き、
分子の拡大【ター電ナル Ｆランスフェラーゼ及び選択
されたデオキシ ヌクレオシド シリホスフェートの存
在下、培１１により行う（Ｂｏｌｌｕｍ＊ Ｊｈ＠Ｅｎ
ｓｙｍ＊ｓ ｌ Ｏｅ １４ Ｉ（ｌ ｉ１７４ ）
ｉ Ｒｏｙｅｈｏｕｄｈｕｒｙら、Ｎｕｅｌ＊ｌｅ Ａ
ｓ１ａｓＲ・−６！１ ８６Ｂ（１９７６））。添加さ
れるデオキシヌクレオチド結合の長さを適切に制御する
方法として本発明者らはＲＮＡリガーゼを用いてｍ”Ｇ
ｐｐｐＡｍｐｃ （ｇ所−の長さく＋ａ）１１）の５′
−リン酸化デオキシオリプヌタレオチド（Ｐ−Ｌ １
ｌｌｏ＊ｈ・ｍｌ・−１−社から市販されている）に結
合させた。この場合も、たとえ切断が妨害されなくても
、該化合物はプリマーとしての作用のない変成オリゴヌ
クレオチドにより抑制剤として作用す、る。
部分の化学的性質を変えることによって防止できる（式
２人参照）０一つの好適な方法はｌ−Ｈ基で変成された
糖（デオキシオリゴヌクレオチド）【用いることであゐ
。この掴の化合物の例はｆＥｌ’Ｇｌ）ｐｐＡｍｐＣ（
ｄ８’Ｕ）ｎ（但しｍ）１１ ）であるｏ ｍ’Ｇｐｐ
ｐＧｍｐｃは先ずＲＮＡリガーゼを用いてデオキシヌタ
レオシド！Ｉ／ 、 ！ｌ／ジホスフェート、例えばｐ
ｄＡｐに結合させる。この酵素はり〆ドナーと同様デオ
１キシ体を用いる（ Ｈｌｍｓｅｍらｓ Ｂｉｏ＠
ｈ＠ｍ１ｓｔｒｙ１？、！＄０９１（１９７８）；Ｈ１
ｗ＋ｔｏｎ及びＧｕｍｐｅｒｔ＊Ｎｕ＠ｌ＊ｉ＠Ａ＠亀
むＲ＠＊ −？ ＠ ４８ Ｂ （１９７’ ））。３
Ｉ−ＯＨ基【生じせしめるホスファターゼ処理に続き、
分子の拡大【ター電ナル Ｆランスフェラーゼ及び選択
されたデオキシ ヌクレオシド シリホスフェートの存
在下、培１１により行う（Ｂｏｌｌｕｍ＊ Ｊｈ＠Ｅｎ
ｓｙｍ＊ｓ ｌ Ｏｅ １４ Ｉ（ｌ ｉ１７４ ）
ｉ Ｒｏｙｅｈｏｕｄｈｕｒｙら、Ｎｕｅｌ＊ｌｅ Ａ
ｓ１ａｓＲ・−６！１ ８６Ｂ（１９７６））。添加さ
れるデオキシヌクレオチド結合の長さを適切に制御する
方法として本発明者らはＲＮＡリガーゼを用いてｍ”Ｇ
ｐｐｐＡｍｐｃ （ｇ所−の長さく＋ａ）１１）の５′
−リン酸化デオキシオリプヌタレオチド（Ｐ−Ｌ １
ｌｌｏ＊ｈ・ｍｌ・−１−社から市販されている）に結
合させた。この場合も、たとえ切断が妨害されなくても
、該化合物はプリマーとしての作用のない変成オリゴヌ
クレオチドにより抑制剤として作用す、る。
Ｂ）他の好適な方法は＠部分としてりＩ−スの代りに７
ラビノース【含むキャップされたオリゴヌクレオチド（
式２Ｂ参照）ｔ−用いる方法である。これらの化合物の
合成に、本発明者らはＲＮＡリガーゼを用いてｍ’Ｇｐ
ｐｐＡｍｐｃ【所望の長さくｍ１ｌｌ）の５′−リン酸
化アラぜノーオリゴヌクレオチドに結合させた。
ラビノース【含むキャップされたオリゴヌクレオチド（
式２Ｂ参照）ｔ−用いる方法である。これらの化合物の
合成に、本発明者らはＲＮＡリガーゼを用いてｍ’Ｇｐ
ｐｐＡｍｐｃ【所望の長さくｍ１ｌｌ）の５′−リン酸
化アラぜノーオリゴヌクレオチドに結合させた。
これらの化合物の例はｍ’ＧｐｐｐＡｍｐｃ（ａｒａ−
Ｘ）ｎ （式中Ｘ−Ａ、Ｃ又はＵ）である。
Ｘ）ｎ （式中Ｘ−Ａ、Ｃ又はＵ）である。
実施例３
キャップされたオリゴヌクレオチドの切断はこの切断位
置の変成又は相互（ｌａｔ＠ｒ）ヌクレオチド結合の化
学的性質により防止することができる。酵素切断はきわ
めて特殊なので、酵素が切断位置ｔｗ４別することを妨
げている。
置の変成又は相互（ｌａｔ＠ｒ）ヌクレオチド結合の化
学的性質により防止することができる。酵素切断はきわ
めて特殊なので、酵素が切断位置ｔｗ４別することを妨
げている。
か（シて、インフルエンザ ピリオン エンＶ ヌクレ
アーゼは３′−水酸基でキャップされたフッグノン酬を
発生して、相互ヌクレオチド結合ｔａ’ｔａ’から１，
６′ヌクレオチド結合に変えて切断を防ぐものと思われ
る（式３参照）。
アーゼは３′−水酸基でキャップされたフッグノン酬を
発生して、相互ヌクレオチド結合ｔａ’ｔａ’から１，
６′ヌクレオチド結合に変えて切断を防ぐものと思われ
る（式３参照）。
キャップされたこの種のオリゴヌクレオチドの一ツの合
成法は２’−５’オリゴア９デ二レー）シンセターゼを
用いて（ｐｐｐ）ＡｐＡｐＡ又は（ｐｐｐ）ＡｐＡｐＧ
のような２’、Ｉｓ’オリゴヌクレオチドを作り（ｈｍ
ｉｓｓｅｓら１Ｐｒｏｓ、 Ｎａｔｌ、ムｔａｄ、８＠
ｉ 。
成法は２’−５’オリゴア９デ二レー）シンセターゼを
用いて（ｐｐｐ）ＡｐＡｐＡ又は（ｐｐｐ）ＡｐＡｐＧ
のような２’、Ｉｓ’オリゴヌクレオチドを作り（ｈｍ
ｉｓｓｅｓら１Ｐｒｏｓ、 Ｎａｔｌ、ムｔａｄ、８＠
ｉ 。
Ｕ、８．ム、？？、４６１８（１９８０））、ついでこ
れらのフラグメントな共にｆ、ｓ’結合を介して化学的
に結合させ長さ１１以上のオリゴヌクレオチドを生成さ
せることである。この化学反応は比較的簡単である。こ
れらのオリゴヌクレオチドは次にＲＮ＾リガーズ【用い
てｍ’ＧｐｐｐＧｍｐｃに結合（ａ’ 、 ａ’結合を
介して）される。この種の化合物の例はｍ’ＧｐｐｐＡ
ｍｐｃ （２’ 、 ８’ム）ｍ （ｍ＞１１）である
。たとえ切断が妨害されなくても、該化合物はプリマー
としての作用のない変成オリゴヌクレオチドにより抑制
剤として作用する。
れらのフラグメントな共にｆ、ｓ’結合を介して化学的
に結合させ長さ１１以上のオリゴヌクレオチドを生成さ
せることである。この化学反応は比較的簡単である。こ
れらのオリゴヌクレオチドは次にＲＮ＾リガーズ【用い
てｍ’ＧｐｐｐＧｍｐｃに結合（ａ’ 、 ａ’結合を
介して）される。この種の化合物の例はｍ’ＧｐｐｐＡ
ｍｐｃ （２’ 、 ８’ム）ｍ （ｍ＞１１）である
。たとえ切断が妨害されなくても、該化合物はプリマー
としての作用のない変成オリゴヌクレオチドにより抑制
剤として作用する。
実施例４
切断位置の化学的変換の他の方法及びか（して得られた
オリゴヌクレオチド抑制剤は構成塩基を変成することに
よりなされる。これは特殊なヌクレオチドの切断に対し
ピリオン エンドヌクレアーゼが表わす特性を利用した
ものである。ｂ′末端に比較的平均にプリン及びｅリセ
ジンが配列されているキャップされたＲＮＡ−は殆ど選
択的にプリンにおいて切断が起る。しかしり／−９”
’−”’ Ｐ Ｐ ＩＩ Ｇｍ ｌＩ Ｃ（ＩＢは職種
のプリミング活性を表わすので、エンドヌクレアーゼは
Ｃ残基において切断することができるが、ｒｍ’Ｇｐｐ
ｐＧｒａｐｃ（Ｃ％はシリ＜＞グ活性を備かに表わすか
又は全く表わさないので、Ｃ残基において切断すること
ができない。従って塩基の変成はぎリオン エンド ヌ
クレアーゼにより切断を妨害できる。
オリゴヌクレオチド抑制剤は構成塩基を変成することに
よりなされる。これは特殊なヌクレオチドの切断に対し
ピリオン エンドヌクレアーゼが表わす特性を利用した
ものである。ｂ′末端に比較的平均にプリン及びｅリセ
ジンが配列されているキャップされたＲＮＡ−は殆ど選
択的にプリンにおいて切断が起る。しかしり／−９”
’−”’ Ｐ Ｐ ＩＩ Ｇｍ ｌＩ Ｃ（ＩＢは職種
のプリミング活性を表わすので、エンドヌクレアーゼは
Ｃ残基において切断することができるが、ｒｍ’Ｇｐｐ
ｐＧｒａｐｃ（Ｃ％はシリ＜＞グ活性を備かに表わすか
又は全く表わさないので、Ｃ残基において切断すること
ができない。従って塩基の変成はぎリオン エンド ヌ
クレアーゼにより切断を妨害できる。
こ□のような塩基−変成されたキャップされたオリゴヌ
クレオチドの代表的構造は ｍ’ＧｐｐｐＡｍｐｃ（Ｂ）ｎ （式中１〉１１で、Ｂは変成塩基を示す。）である。な
お変成塩基はキャップされない４リリゼヌクレオチドを
下記条件下で反応させることにより構造される（その後
変成−４リヌクレオチドはＲＮＡリガーゼでキャップ構
造”ＧＰＰｐＡｍｐＣＫ結合させる。）。
クレオチドの代表的構造は ｍ’ＧｐｐｐＡｍｐｃ（Ｂ）ｎ （式中１〉１１で、Ｂは変成塩基を示す。）である。な
お変成塩基はキャップされない４リリゼヌクレオチドを
下記条件下で反応させることにより構造される（その後
変成−４リヌクレオチドはＲＮＡリガーゼでキャップ構
造”ＧＰＰｐＡｍｐＣＫ結合させる。）。
ａ） ４１９ ｓ’ｕと７クリ田ニトリルとでＳ−シア
ノエチル誘導体を得る反応（Ｃｈａｍｂ＠ｒｓ 、 ｍ
ｌ（１−ａｈ＠ｍ１ｓｔｒｙ ４． ｚｌＧ（ｌｕｌ
ｌ）； ｂ）ポリｓ４υとエチレンイミン又はＮ−エチ
ルマレインイセドとで各々のＳ−置換誘導体を得る反応
（Ｃａｒｋ＋＠ｍａｎｄ Ｄａｖｉｄ ｅ Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ ？ ｅ １８！Ｉ ｌ （１＊＠Ｉ）
； Ｒ＠１（１，Ｂ１ｏａｈ＠ｍｏ Ｂｉｏｐｈｙｓ、
Ｒ＠Ｉｌｌ Ｃｏｍｍｕｅ ３ Ｍ ｔａｚｙ（ｔｅ
ａｓ）；ｃ）／リムＧにおけるＣ残基のケ）キシル化及
びグリオキシル化（Ｌｉｔｔ ａｎｄｌ（ａｎｅｅｅｋ
ｅ Ｂ１ｏｃｈ＊ｔｎｉｓｔｒｙ ６ ＊ １８４ ｇ
（１９６？ ）：Ｌｌｔｔｅ Ｂｌｏ＊ｈ＠ｍ１ｓｔ
ｒｙ ８．１２４Ｇ（１９１１Ｇ）；及びｄ）ＧのＮ−
７位及び−りＡＧＯＡの１−位【ジメチル硫酸によりメ
チル化する反応（ｐＨｌｌｑ・ｒら、Ｂ１ｏｅｂｍ＠Ｊ
＊ １１４，４２９（１ｆＪｆＪ９）：ＨａｙｓＢ１ｏ
＠ｈ＠ｍ、Ｊ、１１４ｓ２ＳＰ（１９８Ｇ））である。
ノエチル誘導体を得る反応（Ｃｈａｍｂ＠ｒｓ 、 ｍ
ｌ（１−ａｈ＠ｍ１ｓｔｒｙ ４． ｚｌＧ（ｌｕｌ
ｌ）； ｂ）ポリｓ４υとエチレンイミン又はＮ−エチ
ルマレインイセドとで各々のＳ−置換誘導体を得る反応
（Ｃａｒｋ＋＠ｍａｎｄ Ｄａｖｉｄ ｅ Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ ？ ｅ １８！Ｉ ｌ （１＊＠Ｉ）
； Ｒ＠１（１，Ｂ１ｏａｈ＠ｍｏ Ｂｉｏｐｈｙｓ、
Ｒ＠Ｉｌｌ Ｃｏｍｍｕｅ ３ Ｍ ｔａｚｙ（ｔｅ
ａｓ）；ｃ）／リムＧにおけるＣ残基のケ）キシル化及
びグリオキシル化（Ｌｉｔｔ ａｎｄｌ（ａｎｅｅｅｋ
ｅ Ｂ１ｏｃｈ＊ｔｎｉｓｔｒｙ ６ ＊ １８４ ｇ
（１９６？ ）：Ｌｌｔｔｅ Ｂｌｏ＊ｈ＠ｍ１ｓｔ
ｒｙ ８．１２４Ｇ（１９１１Ｇ）；及びｄ）ＧのＮ−
７位及び−りＡＧＯＡの１−位【ジメチル硫酸によりメ
チル化する反応（ｐＨｌｌｑ・ｒら、Ｂ１ｏｅｂｍ＠Ｊ
＊ １１４，４２９（１ｆＪｆＪ９）：ＨａｙｓＢ１ｏ
＠ｈ＠ｍ、Ｊ、１１４ｓ２ＳＰ（１９８Ｇ））である。
実施例１−４の組合せ
塩基変成の有効性を高め有用な抑制剤を製造するため、
変成（及び未羨成）塩基と変成軸部及び／又は相互（ｉ
ｎｔ＠ｒ）ヌクレオタイド納金を組合せたキャップされ
たオリゴヌクレオチド抑制剤を用いることができる。こ
れらの化合物０組の三例ハｍ曾ＧｐｐｐＡｍｐＣ（２’
−ｏ −Ｍ＠８’−シアノエチルＵ ）ｔ ｓ ｍ’
Ｇ１１１１１１Ａｍｐｃ （１−ＩＮ−メチルＡ、Ｎ−
メチルＧ）−及びｍ’ＧｐｐｐＡｍｐｃ（２’−ＩＮＩ
−メチＡ’ＡＴｈＣＩ＆＞１１）である。
変成（及び未羨成）塩基と変成軸部及び／又は相互（ｉ
ｎｔ＠ｒ）ヌクレオタイド納金を組合せたキャップされ
たオリゴヌクレオチド抑制剤を用いることができる。こ
れらの化合物０組の三例ハｍ曾ＧｐｐｐＡｍｐＣ（２’
−ｏ −Ｍ＠８’−シアノエチルＵ ）ｔ ｓ ｍ’
Ｇ１１１１１１Ａｍｐｃ （１−ＩＮ−メチルＡ、Ｎ−
メチルＧ）−及びｍ’ＧｐｐｐＡｍｐｃ（２’−ＩＮＩ
−メチＡ’ＡＴｈＣＩ＆＞１１）である。
実施例墨
インフルエンザ ウィルス ）ランスタリプターゼは７
〜１３又はそれ以上の長さのヌクレオチドのキャップさ
れたオリゴヌクレオチドには結合することができるか、
１０〜１３ヌクレオチドの長さのキャップされたオリゴ
ヌクレオチドはプリ！−として効果的に用いているに過
ぎないので、１〜９ヌクレオチドの長さのキャップされ
たオリゴヌクレオチドは特殊な抑制剤の作用をしなけれ
ばならない。３′末端デオキシモノヌタレオチド又は３
′末端３′−〇−メチル化す−オリゴヌクレオチドをこ
のようなオリゴヌクレオチドに加えることは明らかにブ
リ！−よりも抑制剤としての作用が増大する。この種の
化合物の例はｍツＧｐｐｐＡｍｐＣ（８’Ｕ）ｓ ｐｄ
Ｃｐ及びＧｐｐｐＡｏ＋ｐＣ（８’Ｕ）＠ ｐＣ（ｍ’
−０−メチク）である。これらの化合物の合成はｐ（
Ｓ’Ｕ）ｓ （８４ＵＤＰ。
〜１３又はそれ以上の長さのヌクレオチドのキャップさ
れたオリゴヌクレオチドには結合することができるか、
１０〜１３ヌクレオチドの長さのキャップされたオリゴ
ヌクレオチドはプリ！−として効果的に用いているに過
ぎないので、１〜９ヌクレオチドの長さのキャップされ
たオリゴヌクレオチドは特殊な抑制剤の作用をしなけれ
ばならない。３′末端デオキシモノヌタレオチド又は３
′末端３′−〇−メチル化す−オリゴヌクレオチドをこ
のようなオリゴヌクレオチドに加えることは明らかにブ
リ！−よりも抑制剤としての作用が増大する。この種の
化合物の例はｍツＧｐｐｐＡｍｐＣ（８’Ｕ）ｓ ｐｄ
Ｃｐ及びＧｐｐｐＡｏ＋ｐＣ（８’Ｕ）＠ ｐＣ（ｍ’
−０−メチク）である。これらの化合物の合成はｐ（
Ｓ’Ｕ）ｓ （８４ＵＤＰ。
ポリヌクレオチド ホスホリラーゼ、アルカリ性ホスフ
ァターゼ及び−リヌクレオチドキナーゼな用い、前述の
方法で合成する） ｅ 、ｎ Ｎムリガーゼ【用いてｍ
マＧｐｐｐＡｍｐＣと結合させ、次にＲＮ＾リガーゼ【
用いてｐｄＣｐ ｔ ｍ’ＧｐｐＰムｍｐｃ（８’Ｕ）
ｌｋ結合させるか、又は（ｓ’−ｏ−メチル）ＣＤＰと
ｍ’ＧｐｐｐＡｍｐＣ（８’υ）ｌ とを４リヌクレオ
チド ホスホリラーゼを用いて反応させて得る。
ァターゼ及び−リヌクレオチドキナーゼな用い、前述の
方法で合成する） ｅ 、ｎ Ｎムリガーゼ【用いてｍ
マＧｐｐｐＡｍｐＣと結合させ、次にＲＮ＾リガーゼ【
用いてｐｄＣｐ ｔ ｍ’ＧｐｐＰムｍｐｃ（８’Ｕ）
ｌｋ結合させるか、又は（ｓ’−ｏ−メチル）ＣＤＰと
ｍ’ＧｐｐｐＡｍｐＣ（８’υ）ｌ とを４リヌクレオ
チド ホスホリラーゼを用いて反応させて得る。
実施例６と実施例１〜３との組合せ
３′末端デオキシリ−モノヌクレオチド又は３′末端３
′−〇−メチル化モノヌク゛レオチドを加えた中ヤツプ
された一７〜９ヌクレオチドの長ｔｆｔ持つキャップさ
れたオリゴヌクレオチド抑制剤を含む製の有効な抑制剤
はまた墳墓の変成及び／又は糖部分の変成及び／又は相
互ヌクレオナト結合を含むように親造することもできる
。これら化合物の二例は ””Ｉ）ＰＰＡＩＩＩＩＣ（２’−Ｓ’Ａ ）＠ ｐｄ
Ｃｐ及び ｍ’ＧｐｐｙＡｍｐｃ（１’０−メチルＢ４υ）ｓｐｃ
（３′０−メチル） である。
′−〇−メチル化モノヌク゛レオチドを加えた中ヤツプ
された一７〜９ヌクレオチドの長ｔｆｔ持つキャップさ
れたオリゴヌクレオチド抑制剤を含む製の有効な抑制剤
はまた墳墓の変成及び／又は糖部分の変成及び／又は相
互ヌクレオナト結合を含むように親造することもできる
。これら化合物の二例は ””Ｉ）ＰＰＡＩＩＩＩＣ（２’−Ｓ’Ａ ）＠ ｐｄ
Ｃｐ及び ｍ’ＧｐｐｙＡｍｐｃ（１’０−メチルＢ４υ）ｓｐｃ
（３′０−メチル） である。
一般に、上記実施例に記載の金層は二つの方法において
監視される。ラベルされたり一又はデオキシ リ−ヌク
レオチド又はラベルされたｍマＧｐｐｐＧｍｐＣの何れ
かを使用するＯ後者は本発明らが先にキャップされｔＲ
ＮＡＩで行った如＜ｍｍ寄れる。ｍ”ＧｐｐｐＧｍｐｃ
のｍ″Ｇはベーター除去により除去し、続いてワタシェ
ア ウィルスで（アルファー３２ｐ）ＧＴ？及びラベル
のないＳ−７デノシルメチオニンの存在下、酵素をキャ
ップ及びメチル化して再キャップする（ Ｐｌ＠ｌ＠に
ら、Ｃｌ１ｌ （１Ｇ ８１ ） ｍｕｐｒａ ）。
監視される。ラベルされたり一又はデオキシ リ−ヌク
レオチド又はラベルされたｍマＧｐｐｐＧｍｐＣの何れ
かを使用するＯ後者は本発明らが先にキャップされｔＲ
ＮＡＩで行った如＜ｍｍ寄れる。ｍ”ＧｐｐｐＧｍｐｃ
のｍ″Ｇはベーター除去により除去し、続いてワタシェ
ア ウィルスで（アルファー３２ｐ）ＧＴ？及びラベル
のないＳ−７デノシルメチオニンの存在下、酵素をキャ
ップ及びメチル化して再キャップする（ Ｐｌ＠ｌ＠に
ら、Ｃｌ１ｌ （１Ｇ ８１ ） ｍｕｐｒａ ）。
キャップされないりＩポリ！−で４＞ ｆ上ヱ転写【
最も有効に抑制するにはこれらはｌＯヌクレオチド又は
それ以上の長さを必要とするものと考えられていた。し
かし、本発明のキャップされたオリゴヌクレオチドは１
３ヌクレオチドより短か（ても有効である０ これほこの大きさの範囲においてキャップされたＲＮＡ
フラグメン）（ピリオンエンドヌタレアーゼによってプ
リマーＲＮＡＩから発生）はプリマーとして活性がある
からであるＯ更に、６〜８と短かいヌクレオチドのキャ
ップされたオリゴヌクレオチドはまたウィルスの核に結
合する能力かあるため効釆があるとも考えられている。
最も有効に抑制するにはこれらはｌＯヌクレオチド又は
それ以上の長さを必要とするものと考えられていた。し
かし、本発明のキャップされたオリゴヌクレオチドは１
３ヌクレオチドより短か（ても有効である０ これほこの大きさの範囲においてキャップされたＲＮＡ
フラグメン）（ピリオンエンドヌタレアーゼによってプ
リマーＲＮＡＩから発生）はプリマーとして活性がある
からであるＯ更に、６〜８と短かいヌクレオチドのキャ
ップされたオリゴヌクレオチドはまたウィルスの核に結
合する能力かあるため効釆があるとも考えられている。
か（して、本発明化合物の臆要な特徴はインフルエンザ
ウィルスＲＮムトランスクリプター（の抑制に効果的
な化合物の濃度及び大きさの低下である０ 本発明の化合物はそれらのシランスクリプターゼ活性の
抑制によりインフルエンザ ウィルスの感染の制御に有
用である。また、サイズか小さいため及び効果的濃度の
ために、これらの化合物の細胞吸収による間醜か減少す
る。
ウィルスＲＮムトランスクリプター（の抑制に効果的
な化合物の濃度及び大きさの低下である０ 本発明の化合物はそれらのシランスクリプターゼ活性の
抑制によりインフルエンザ ウィルスの感染の制御に有
用である。また、サイズか小さいため及び効果的濃度の
ために、これらの化合物の細胞吸収による間醜か減少す
る。
細胞吸収を容易にするため、キャップされたオリゴヌク
レオチドを９４′シーム中に入れることができ（Ｗｌｌ
ｓｏｎら、Ｃｌｌｌ １７，１？（１１１７Ｇ）、ま
たこれは医薬的許容担体中でなし得る。
レオチドを９４′シーム中に入れることができ（Ｗｌｌ
ｓｏｎら、Ｃｌｌｌ １７，１？（１１１７Ｇ）、ま
たこれは医薬的許容担体中でなし得る。
更に、これらの化合物は現在入手できる、ウィルス表面
抗原のコンスタンドリー シフティング ノ々ターン（
ｔ＠ｎ５ｔａｎｔｌｙ ｓｈｌｆｔｌｎｇ ｐａｔｔ＠
ｒｎ ）に対し操作するワクチンとは興なり、いかなる
種類のインフルエンザ ウィルスに対しても有効性が制
限されることがないばかりでなく、全ての現在及び将来
のウィルス植の生きた（マロａｌ）ウィルスに共通する
複製（ｒすｌｌ＠ａｔｌ・ｍ）作用に対しても管理する
ことができる。
抗原のコンスタンドリー シフティング ノ々ターン（
ｔ＠ｎ５ｔａｎｔｌｙ ｓｈｌｆｔｌｎｇ ｐａｔｔ＠
ｒｎ ）に対し操作するワクチンとは興なり、いかなる
種類のインフルエンザ ウィルスに対しても有効性が制
限されることがないばかりでなく、全ての現在及び将来
のウィルス植の生きた（マロａｌ）ウィルスに共通する
複製（ｒすｌｌ＠ａｔｌ・ｍ）作用に対しても管理する
ことができる。
特許出願人 ス胃−ンーケツタリンダインステイテ異
−Ｆ フォー
−Ｆ フォー
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、弐 ｍｑＧ（ｓす１１１１ （！ｉすＮｒｍ （式
中Ｎはム又はＧ、ｍはｔｏ−メチル リーース）ｆ：有
するキャップ；結合基Ｘ（但しＸは該キャップに結合し
たム、 Ｏ，Ｃ又はＵ）；及び該結合基ＸＫ結合したが
９マー鎖を含み、４リマー形の時はインフルエンザウィ
ルスＢＮム転写を抑制するヌクレオチドより成り、且つ
該４リマー鎖は今ヤツプに結合した時に転写【刺激する
プリマーとしての作用を防止するように変成され、てい
ることを特徴とするキャップされたオリゴヌクレオチド
。 ！Ｌ −リマー鎖がぜリオンー付随エンドヌタレアー
ゼによる第１０から第１３番目のヌクレオチドでの切断
を防止するように変成される特許請求の範囲第１項記載
のオリゴヌクレオチド０ ３、４リマー鎖が、切断されても、この切断部がプリマ
ーとして作用できないように変成される特許請求の範囲
第１項記載のオリゴヌクレオチド０ ４、 式 ｍ曾Ｇ （ＩＩ’）ＩＩＰＩＩ（Ｉｓ’
）ＮｍｐＸＱｌ）ｎ〔式中、ａ）１１で、１％ ｇｇ
１１’υ；Ｓ４ シアノエチル−Ｕ ； ８’−エチレ
ンイミン−υ；８４−（Ｎ−エチル！レインイミド）−
Ｕ；ム０１！１（ケシキシル化）；ムＧｉｓ＊ （グリ
オキシル化）有する特許請求の範囲第１項記載のオリゴ
ヌクレオチド。 ５、 ヌクレオチドが糖部分で変成される特許請求の範
囲第１項記載のオリゴヌクレオチド・６、糖変成が１−
０−メチル；ｖＨよりなるか、又は糖がり一−スの代り
にアラビノースである特許請求の範囲第Ｓ項記載のオリ
ゴヌタレオナドー １、 更に通常存在するＢｌ 、 ｆリン酸エステルの
代りにｌ−５′リン酸エステルのヌタレオチド内結合を
含む特許請求の範囲第１項記載のオリゴヌクレオチド。 Ｓ、結合基に結合しているポ９７−鎖が１−７ヌタレオ
チドであり、それの３′末端がデオキシモノヌクレオチ
ド又は３′−〇−メチ／＆／モノヌタレオチドの何れか
であり、該キャップされたオリゴヌクレオチドはインフ
ルエンザピリオンＦランスタリゾター（に対して特異的
抑制剤として作用し、同時に千ｏ ｍｌ末端ヌクレオチ
ドにより及び長さが１０オリプリ−ヌタレチドより短か
いことによりブリ！−として作用することができない特
許請求の範囲第１項記載のオリゴヌクレオチド。 ９、 式 ｍ嘗 Ｇ（Ｓリ ｐｐｐ（！！すＮｍｐ
Ｘｉ）ｍＭ〔式中、Ｂ−５ｉ４Ｕ：８番−エチレンイミ
ンーＵ；８番−（Ｎ−エチル！レインイ電ド）−Ｕｉム
Ｇｌ！ｌ（ケト中シル化）；ムＧＢＩＣグリコキＢｔａ
ｘ５．＠又は７ Ｍ閣ｐｄＡｐｓ ｐｄＧｐＳ ｐｄＵｐ又はｐム（３
′〇−メチル）、ｐＧ（Ｂ’Ｏ−メチル）、ｐｃ（１’
０−メチル）、ｐＵ（３’０−メチル）〕を有する特許
請求の範囲第ｓｒｊ！記載のオリゴヌクレオチド。 ｌＯｌ ヌクレオチドが軸部分で変成される特許請求
の範囲第８項記載のオリゴヌクレオチド・１１、糖変成
がｆ−ｏ−メチル、ｌ−■よりなるか又は糖がり一−ス
０代りにアラ−ノースである特許請求の範囲第１０項記
載のオリゴヌクレオチド。 １１ 更に通常存在する３′、 ｆリン酸エステルの
代りにｌ−がリン酸エステルのヌタレオチド内結合を含
む特許請求の範囲第８項記載のオリゴヌクレオチド。 １３、 医薬的に許容された担体中に、式 ｖｍ”
Ｇ（Ｊ＄’） ｐｐｐ （ｓ’） Ｎ１１ｌ （式中Ｎ
はム又はＧｅｍは２’Ｏ−メチルリーース）を有するキ
ャップ；結合基Ｘ（但しＸは該キャップに結合したム−
Ｇ、Ｃ又はＵ）；及び該結合基Ｘに結合したぼり！−鎖
を含み、Ｉツマ−形の時はインフルエンザウィルスＲＮ
＾転写を抑制するヌクレオチドより成り、また該４リマ
ー鎖はキャップに結合した時に転写を刺激するブリ！−
としての作用から防御するように変成されているキャッ
プされたオリゴヌクレオチドを有効量含有する抗ウィル
ス剤。 １４、 インフルエンザウィルス感染細胞に、弐ｍ”
Ｇ （！Ｉ’） ｐｅｐ （ｓ’） Ｎｌｌ Ｃ式中
Ｎはム又はＧ。 ′ｍはｔｏ−メチルリｌ−ス）゛【有するキャップエ結
金基Ｘ（但しＸは該キャップに結合したム、Ｇ、Ｃ又は
υ）；及び該結合基Ｘに結合したｄす！−鎖を含み、−
９！−形の時はインフルエンザウィルスＲＮム転写を抑
制するヌクレオチドより成り、また該ポリ！−鎖はキャ
ップに結合した時に転写を刺激するブリ！−としての作
用から防御するように変成されているキャップされたオ
リゴヌクレオチドを有効蓋適用することより成るインフ
ルエンザ ピリオン ）ランスクリプターゼの抑制方法
◎
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US32752381A | 1981-12-04 | 1981-12-04 | |
| US327523 | 1981-12-04 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58103397A true JPS58103397A (ja) | 1983-06-20 |
Family
ID=23276889
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57211533A Pending JPS58103397A (ja) | 1981-12-04 | 1982-12-03 | キヤツプされたオリゴヌクレオチド及びその抗ウイルス剤としの利用 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0081099A3 (ja) |
| JP (1) | JPS58103397A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59130221A (ja) * | 1982-10-26 | 1984-07-26 | シ−テイエイ・フイナンツ・アクチエンゲゼルシヤフト | ヒトと動物の遺伝学的変動域内における器官の組織物質の改良剤と改良方法 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5276019A (en) * | 1987-03-25 | 1994-01-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products |
| JPH06501843A (ja) * | 1990-08-14 | 1994-03-03 | アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド | アンチセンスオリゴヌクレオチドによるインフルエンザａ型ウイルス，アン・アーバｈ２ｎ２株の阻害 |
| US5837852A (en) * | 1993-10-14 | 1998-11-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Capped nucleic acid oligomers that inhibit cap-dependent transcription of the influenza virus endonuclease |
| GB9511720D0 (en) * | 1995-06-09 | 1995-08-02 | Isis Innovation | Oligonucleotide phosphorylation method and products |
| SI2056845T1 (en) | 2006-08-08 | 2018-02-28 | Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universitaet Bonn | STRUCTURE AND USE 5 'PHOSPHATE OF OLIGONUCLEOTES |
| EP2297323A1 (en) | 2008-05-21 | 2011-03-23 | Hartmann, Gunther | 5' triphosphate oligonucleotide with blunt end and uses thereof |
| EP2508530A1 (en) | 2011-03-28 | 2012-10-10 | Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn | Purification of triphosphorylated oligonucleotides using capture tags |
| EP2712870A1 (en) | 2012-09-27 | 2014-04-02 | Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn | Novel RIG-I ligands and methods for producing them |
| SI4140491T1 (sl) * | 2015-09-21 | 2024-01-31 | Trilink Biotechnologies, Llc | Postopek sinteze 5'-omejenih RNK |
| WO2017066797A1 (en) | 2015-10-16 | 2017-04-20 | Modernatx, Inc. | Trinucleotide mrna cap analogs |
-
1982
- 1982-11-13 EP EP82110494A patent/EP0081099A3/en not_active Ceased
- 1982-12-03 JP JP57211533A patent/JPS58103397A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59130221A (ja) * | 1982-10-26 | 1984-07-26 | シ−テイエイ・フイナンツ・アクチエンゲゼルシヤフト | ヒトと動物の遺伝学的変動域内における器官の組織物質の改良剤と改良方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0081099A3 (en) | 1983-08-10 |
| EP0081099A2 (en) | 1983-06-15 |
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