JPH11337547A - タンパク質測定用乾式分析要素およびタンパク質測定法 - Google Patents
タンパク質測定用乾式分析要素およびタンパク質測定法Info
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- JPH11337547A JPH11337547A JP11114537A JP11453799A JPH11337547A JP H11337547 A JPH11337547 A JP H11337547A JP 11114537 A JP11114537 A JP 11114537A JP 11453799 A JP11453799 A JP 11453799A JP H11337547 A JPH11337547 A JP H11337547A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 タンパク質を鋭敏かつ迅速に検出し定量する
のに使用できる乾式分析要素を提供する。 【解決手段】 検定は、タンパク質およびモリブデン酸
イオンと反応する色素を用い、その色素のスペクトル吸
収の測定可能な変化を起させて実施する。また、検定の
精度を安定化しかつ高める重合体類および重炭酸塩によ
る妨害を少なくする化合物類も開示する。
のに使用できる乾式分析要素を提供する。 【解決手段】 検定は、タンパク質およびモリブデン酸
イオンと反応する色素を用い、その色素のスペクトル吸
収の測定可能な変化を起させて実施する。また、検定の
精度を安定化しかつ高める重合体類および重炭酸塩によ
る妨害を少なくする化合物類も開示する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、乾式分析要素お
よびその要素を用いて流体試料中のタンパク質を定量す
る方法に関する。さらに詳しく述べると、この発明は、
特定の色素とモリブデン酸イオン、アクリルアミド含有
重合体およびヒドロキシカルボン酸の、前記分析要素に
おける使用に関する。
よびその要素を用いて流体試料中のタンパク質を定量す
る方法に関する。さらに詳しく述べると、この発明は、
特定の色素とモリブデン酸イオン、アクリルアミド含有
重合体およびヒドロキシカルボン酸の、前記分析要素に
おける使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】医学の方法と研究および分析法と診断法
に対し、生体液などの各種流体中に存在する化学物質と
生物学的物質を迅速かつ正確に測定する方法が引続き要
望されている。例えば、タンパク質の存在と量は、多種
類のヒトの疾患の効率的な研究、診断および治療を行う
ために、迅速かつ正確に確認しなければならない。
に対し、生体液などの各種流体中に存在する化学物質と
生物学的物質を迅速かつ正確に測定する方法が引続き要
望されている。例えば、タンパク質の存在と量は、多種
類のヒトの疾患の効率的な研究、診断および治療を行う
ために、迅速かつ正確に確認しなければならない。
【０００３】注目すべき物質を検出する多種類の分析方
法が最近の数十年間に開発されている。これらの方法は
信頼性が高く、場合によっては、キットの形態で使用す
るのに適しているだけでなく、自動化にも適している。
タンパク質の検定は、伝統的に、溶液または試験装置で
行われており、この場合、流体は、検定に関連する反応
物質から何らかの方法で除去される。溶液法は、この技
術分野で広く容認されているが、一般に、分析装置が必
要であり、この分析装置は溶液の取扱いや移送性能が複
雑な場合が多い。さらに、このような検定に使用される
分析装置には、複雑な液体処理が含まれることがあり、
そして操作ならびに試料どおしの汚染を避けるために必
要な精密な洗浄の両者に熟練者が必要である。
法が最近の数十年間に開発されている。これらの方法は
信頼性が高く、場合によっては、キットの形態で使用す
るのに適しているだけでなく、自動化にも適している。
タンパク質の検定は、伝統的に、溶液または試験装置で
行われており、この場合、流体は、検定に関連する反応
物質から何らかの方法で除去される。溶液法は、この技
術分野で広く容認されているが、一般に、分析装置が必
要であり、この分析装置は溶液の取扱いや移送性能が複
雑な場合が多い。さらに、このような検定に使用される
分析装置には、複雑な液体処理が含まれることがあり、
そして操作ならびに試料どおしの汚染を避けるために必
要な精密な洗浄の両者に熟練者が必要である。
【０００４】溶液化学法に代わって、乾式分析要素を使
う方法がある。物質の付着、試料の濡れを促進しもしく
は容易にしかつ乾式分析要素の構造の一体性を維持する
のに必要な、例えば結合剤、界面活性剤などの試薬のコ
ーティング剤の妨害があるので、すべての溶液ベースの
分析検定法が、乾式分析要素に使用するのに適応できる
わけではないと解すべきである。さらに乾燥分析要素
は、不適合成分を分離するためその場で区分する方法を
利用しなければならない。別個の液体の保管および連続
的な液体の添加を行える溶液化学の場合、上記のような
ことはない。
う方法がある。物質の付着、試料の濡れを促進しもしく
は容易にしかつ乾式分析要素の構造の一体性を維持する
のに必要な、例えば結合剤、界面活性剤などの試薬のコ
ーティング剤の妨害があるので、すべての溶液ベースの
分析検定法が、乾式分析要素に使用するのに適応できる
わけではないと解すべきである。さらに乾燥分析要素
は、不適合成分を分離するためその場で区分する方法を
利用しなければならない。別個の液体の保管および連続
的な液体の添加を行える溶液化学の場合、上記のような
ことはない。
【０００５】乾式分析要素とその使用については多数の
刊行物に記載されており、 Pierceらの米国特許第４，
１３２，５２８号、同第４，７８６，６０５号、同第
３，９９２，１５８号、同第４，２５８，００１号； F
rickeyらの米国特許第４，６７０，３８１号；国際特許
願公開第ＷＯ８２／２６０１号（１９８２年８月５日公
開）；ヨーロッパ特許願第０５１１８３号（１９８２年
５月１２日公開）；およびヨーロッパ特許願第０６６６
４８号（１９８２年１２月５日公開）がある。なおこれ
ら引用文献の内容はすべて本明細書に援用するものであ
る。
刊行物に記載されており、 Pierceらの米国特許第４，
１３２，５２８号、同第４，７８６，６０５号、同第
３，９９２，１５８号、同第４，２５８，００１号； F
rickeyらの米国特許第４，６７０，３８１号；国際特許
願公開第ＷＯ８２／２６０１号（１９８２年８月５日公
開）；ヨーロッパ特許願第０５１１８３号（１９８２年
５月１２日公開）；およびヨーロッパ特許願第０６６６
４８号（１９８２年１２月５日公開）がある。なおこれ
ら引用文献の内容はすべて本明細書に援用するものであ
る。
【０００６】患者の腎臓の機能を評価し監視するのに有
用な診断指標は、尿中に存在する全タンパク質の濃度で
ある。尿中に存在するタンパク質の性質と量は、変化
し、そして、タンパク質が尿中に移行するのを腎臓が防
止できなくなる特定の症状に左右される。尿中に認めら
れるタンパク質類の例としては、限定されないが、アル
ブミン、無傷の免疫グロブリン類、κ遊離鎖類（κ fre
e-chain)、λ遊離鎖類、レチノール結合タンパク質、α
1 ミクログロブリンおよびβ1 ミクログロブリンがあ
る。これらのタンパク質は、アミノ酸の組成と分子量が
広範囲に異なっている。尿の全タンパク質のスクリーニ
ング検定法を利用する臨床医にとって興味深い情報は、
尿試料の単位容積当りのタンパク質の全質量である。診
断検定法、すなわち、測定されたシグナルは、理想をい
えば、存在しているタンパク質の性質またはタイプと無
関係でなければならない。例えば５０mg／dLのアルブミ
ンは、５０mg／dLの他の任意のタンパク質と同じシグナ
ルを生成しなければならない。ヒトの尿の正常なタンパ
ク質濃度の範囲は、約５〜１００mg／dLである。
用な診断指標は、尿中に存在する全タンパク質の濃度で
ある。尿中に存在するタンパク質の性質と量は、変化
し、そして、タンパク質が尿中に移行するのを腎臓が防
止できなくなる特定の症状に左右される。尿中に認めら
れるタンパク質類の例としては、限定されないが、アル
ブミン、無傷の免疫グロブリン類、κ遊離鎖類（κ fre
e-chain)、λ遊離鎖類、レチノール結合タンパク質、α
1 ミクログロブリンおよびβ1 ミクログロブリンがあ
る。これらのタンパク質は、アミノ酸の組成と分子量が
広範囲に異なっている。尿の全タンパク質のスクリーニ
ング検定法を利用する臨床医にとって興味深い情報は、
尿試料の単位容積当りのタンパク質の全質量である。診
断検定法、すなわち、測定されたシグナルは、理想をい
えば、存在しているタンパク質の性質またはタイプと無
関係でなければならない。例えば５０mg／dLのアルブミ
ンは、５０mg／dLの他の任意のタンパク質と同じシグナ
ルを生成しなければならない。ヒトの尿の正常なタンパ
ク質濃度の範囲は、約５〜１００mg／dLである。
【０００７】生体物質中の全タンパク質濃度を測定する
のに各種の方法が利用されている。多くの分析検定法で
は、試料中のタンパク質濃度に比例する光学的シグナ
ル、例えばスペクトルの可視光または紫外光の領域の吸
収などが測定される。しかし、一般に、そのシグナル
は、望ましくないことであるが、試料中のタンパク質の
性質の関数であり、単に、存在するタンパク質の質量と
だけ相関関係があるわけではない。これらの方法は、通
常、検出可能な光学的シグナルを発する以下の方法のう
ちの一つに依存している。
のに各種の方法が利用されている。多くの分析検定法で
は、試料中のタンパク質濃度に比例する光学的シグナ
ル、例えばスペクトルの可視光または紫外光の領域の吸
収などが測定される。しかし、一般に、そのシグナル
は、望ましくないことであるが、試料中のタンパク質の
性質の関数であり、単に、存在するタンパク質の質量と
だけ相関関係があるわけではない。これらの方法は、通
常、検出可能な光学的シグナルを発する以下の方法のう
ちの一つに依存している。
【０００８】１．ビウレット反応によって生成するタン
パク質とＣｕ（II）の錯体は、スペクトルの可視光領域
の、検出可能であるが小さい吸収を起こす。 ２．タンパク質の芳香族アミノ酸類による、スペクトル
の紫外光領域の吸収を測定することができる。 ３．タンパク質の量は、特定のアミノ酸類を、固有の吸
光性または蛍光を利用して定量できる発色団を含有する
分子で誘導体化することによって測定できる。
パク質とＣｕ（II）の錯体は、スペクトルの可視光領域
の、検出可能であるが小さい吸収を起こす。 ２．タンパク質の芳香族アミノ酸類による、スペクトル
の紫外光領域の吸収を測定することができる。 ３．タンパク質の量は、特定のアミノ酸類を、固有の吸
光性または蛍光を利用して定量できる発色団を含有する
分子で誘導体化することによって測定できる。
【０００９】４．タンパク質と非共有結合で結合しうる
色素であって、色素の吸収スペクトルの摂動を起こす色
素−タンパク質の錯体を生成する色素は、試料中のタン
パク質の存在またはその量を測定するのに利用できる。
いくつかの色素は、色素、金属イオンおよびタンパク質
の非共有結合錯体が生成してその色素の吸収スペクトル
の摂動をもたらし、その摂動が試料中のタンパク質の存
在または量を測定するのに利用できる場合、モリブデン
またはタングステンなどの金属のイオンの存在が必要で
ある。
色素であって、色素の吸収スペクトルの摂動を起こす色
素−タンパク質の錯体を生成する色素は、試料中のタン
パク質の存在またはその量を測定するのに利用できる。
いくつかの色素は、色素、金属イオンおよびタンパク質
の非共有結合錯体が生成してその色素の吸収スペクトル
の摂動をもたらし、その摂動が試料中のタンパク質の存
在または量を測定するのに利用できる場合、モリブデン
またはタングステンなどの金属のイオンの存在が必要で
ある。
【００１０】５．タンパク質が、Ｃｕ（II）の配位に対
して色素と競合すると、そのタンパク質濃度に比例する
吸収シグナルが生成する（Ｃｕ（II）／色素配位錯体
は、遊離色素すなわちＣｕ（II）に配位していない色素
と異なる吸収スペクトルを有している）。米国特許第
４，１３２，５２８号は、ビウレット反応に基づいたタ
ンパク質の検定法に関する特許である。 '５２８特許の
乾式検定要素は、Ｃｕ（II）のビウレット試薬とキレー
ト化剤、例えばＣｕＳＯ4 と酒石酸、またはこれら２者
の錯体およびpHを約１２より高くする緩衝剤を含んでい
る。水性体液、例えば血清または脳脊髄液（ＣＳＦ）中
のタンパク質が、１２を超えるpH下においてビウレット
試薬と相互作用を行うと、第二銅形の銅とタンパク質と
の間に反応が起こって紫色を呈する。この色の強さは血
清のタンパク質含量に比例するので、そのタンパク質の
レベルは、公知の比色分析法によって測定することがで
きる。上記特許の乾式スライド要素は、あいにく、感度
が、所望の感度より低い。すなわち、この要素は約２０
０mg／dL以下のタンパク質の濃度を検出できない。
して色素と競合すると、そのタンパク質濃度に比例する
吸収シグナルが生成する（Ｃｕ（II）／色素配位錯体
は、遊離色素すなわちＣｕ（II）に配位していない色素
と異なる吸収スペクトルを有している）。米国特許第
４，１３２，５２８号は、ビウレット反応に基づいたタ
ンパク質の検定法に関する特許である。 '５２８特許の
乾式検定要素は、Ｃｕ（II）のビウレット試薬とキレー
ト化剤、例えばＣｕＳＯ4 と酒石酸、またはこれら２者
の錯体およびpHを約１２より高くする緩衝剤を含んでい
る。水性体液、例えば血清または脳脊髄液（ＣＳＦ）中
のタンパク質が、１２を超えるpH下においてビウレット
試薬と相互作用を行うと、第二銅形の銅とタンパク質と
の間に反応が起こって紫色を呈する。この色の強さは血
清のタンパク質含量に比例するので、そのタンパク質の
レベルは、公知の比色分析法によって測定することがで
きる。上記特許の乾式スライド要素は、あいにく、感度
が、所望の感度より低い。すなわち、この要素は約２０
０mg／dL以下のタンパク質の濃度を検出できない。
【００１１】米国特許第４，７８６，６０５号には、ビ
ウレット試薬の代わりに、予め製造されたＣｕ（II）／
ピリジルアゾ色素配位錯体（または遊離Ｃｕ（II）と遊
離ピリジルアゾ色素）を用いることによって、 '５２８
特許の要素より感度が高い、タンパク質定量用乾式分析
要素の配合が記載されている。水性タンパク質が、この
検定要素に添加されると、第二銅イオンがタンパク質に
よって錯体から放出されて、Ｃｕ（II）／色素錯体の吸
収曲線が、非配位色素の吸収曲線に移行する。したがっ
て、タンパク質を添加すると、Ｃｕ（II）／色素錯体の
吸収ピークは添加されたタンパク質の量に比例して小さ
くなるので、既知濃度のタンパク質を含有する試料で適
切に校正することによって、液体試料中のタンパク質の
未知濃度を比色法によって測定できる。この特許は、こ
れらの要素が優れたダイナミックレンジと、ビウレット
反応に基づいた要素の約３０倍もの感度を有しているこ
とを教示している。
ウレット試薬の代わりに、予め製造されたＣｕ（II）／
ピリジルアゾ色素配位錯体（または遊離Ｃｕ（II）と遊
離ピリジルアゾ色素）を用いることによって、 '５２８
特許の要素より感度が高い、タンパク質定量用乾式分析
要素の配合が記載されている。水性タンパク質が、この
検定要素に添加されると、第二銅イオンがタンパク質に
よって錯体から放出されて、Ｃｕ（II）／色素錯体の吸
収曲線が、非配位色素の吸収曲線に移行する。したがっ
て、タンパク質を添加すると、Ｃｕ（II）／色素錯体の
吸収ピークは添加されたタンパク質の量に比例して小さ
くなるので、既知濃度のタンパク質を含有する試料で適
切に校正することによって、液体試料中のタンパク質の
未知濃度を比色法によって測定できる。この特許は、こ
れらの要素が優れたダイナミックレンジと、ビウレット
反応に基づいた要素の約３０倍もの感度を有しているこ
とを教示している。
【００１２】しかし、尿の試料中のタンパク質を定量す
るのに上記 '６０５特許の方法を使用すると、尿試料の
約１０〜２０％が、参照標準法として、タンパク質濃度
のクーマシーブルー溶液検定法を用いて得た測定値と比
べて許容できないランダムな正の偏りを一貫して示す。
すなわち、特定の患者の尿の試料（試料集団の約１０〜
２０％）の、 '６０５特許の方法を用いて測定された推
定タンパク質濃度は、クーマシーブルーに基づいた検定
法を用いて測定された濃度より大きい。このランダムな
正の偏りは、Ｃｕ（II）および色素のニトロ基などの還
元可能な基の両者の還元を起こすアスコルビン酸などの
還元剤が、特定の尿試料中に存在していることによって
起こると推定された。上記諸検定法の欠点に影響されな
い乾式分析要素が望ましい。
るのに上記 '６０５特許の方法を使用すると、尿試料の
約１０〜２０％が、参照標準法として、タンパク質濃度
のクーマシーブルー溶液検定法を用いて得た測定値と比
べて許容できないランダムな正の偏りを一貫して示す。
すなわち、特定の患者の尿の試料（試料集団の約１０〜
２０％）の、 '６０５特許の方法を用いて測定された推
定タンパク質濃度は、クーマシーブルーに基づいた検定
法を用いて測定された濃度より大きい。このランダムな
正の偏りは、Ｃｕ（II）および色素のニトロ基などの還
元可能な基の両者の還元を起こすアスコルビン酸などの
還元剤が、特定の尿試料中に存在していることによって
起こると推定された。上記諸検定法の欠点に影響されな
い乾式分析要素が望ましい。
【００１３】タンパク質と金属イオンが酸性条件下で錯
化する際に、測定可能な色の変化を起こす特定の指示薬
色素の溶液における反応は公知である。上記のように、
溶液で良好に作動する分析検定法は、この明細書で挙げ
た理由のため、乾式分析要素には容易に適応させること
ができない。
化する際に、測定可能な色の変化を起こす特定の指示薬
色素の溶液における反応は公知である。上記のように、
溶液で良好に作動する分析検定法は、この明細書で挙げ
た理由のため、乾式分析要素には容易に適応させること
ができない。
【００１４】
【発明が解決しようとする課題】異なるタンパク質が１
種の色素と等しく反応して、試料中に存在するタンパク
質の質量に関連し、タンパク質の性質とは無関係の光学
的シグナルを発生することが非常に望ましい。尿は各種
の量（約２００mMまで）の重炭酸塩を含有している。尿
試料中、高レベルの重炭酸塩は、希釈するかまたは試料
の前処理（例えば分子サイズ排除法）によって除去する
かしないと、非常にアルカリ性の状態を生成するのに十
分な重炭酸塩を検定に導入することになり、色素−金属
イオン−タンパク質の相互作用は低いpH（１．５〜３．
５）で起こりおよび／または重炭酸塩はその上に金属イ
オンの配位によって妨害するので、上記の非常にアルカ
リ性の状態は、検定法を、信頼できないかまたは役に立
たないものにする。以下のようなタンパク質測定用乾燥
分析要素が要望されている。すなわち、還元剤または重
炭酸塩の存在に影響を受けず、存在するタンパク質の質
量と実質的に相関関係があるシグナル測定値、すなわ
ち、実質的に（“実質的に”とは、尿試料中の全タンパ
ク質の測定のような特定のタンパク質の測定に適してい
るかまたは容認できることを意味する）タンパク質の性
質とは無関係のシグナル測定値を出し、そして約５〜約
３００mg／mLの範囲内のタンパク質を定量するのに使用
することができかつ前記妨害物を除くために試料の前希
釈、前濃縮または前処理を必要としない、タンパク質測
定用乾式分析要素が要望されている。
種の色素と等しく反応して、試料中に存在するタンパク
質の質量に関連し、タンパク質の性質とは無関係の光学
的シグナルを発生することが非常に望ましい。尿は各種
の量（約２００mMまで）の重炭酸塩を含有している。尿
試料中、高レベルの重炭酸塩は、希釈するかまたは試料
の前処理（例えば分子サイズ排除法）によって除去する
かしないと、非常にアルカリ性の状態を生成するのに十
分な重炭酸塩を検定に導入することになり、色素−金属
イオン−タンパク質の相互作用は低いpH（１．５〜３．
５）で起こりおよび／または重炭酸塩はその上に金属イ
オンの配位によって妨害するので、上記の非常にアルカ
リ性の状態は、検定法を、信頼できないかまたは役に立
たないものにする。以下のようなタンパク質測定用乾燥
分析要素が要望されている。すなわち、還元剤または重
炭酸塩の存在に影響を受けず、存在するタンパク質の質
量と実質的に相関関係があるシグナル測定値、すなわ
ち、実質的に（“実質的に”とは、尿試料中の全タンパ
ク質の測定のような特定のタンパク質の測定に適してい
るかまたは容認できることを意味する）タンパク質の性
質とは無関係のシグナル測定値を出し、そして約５〜約
３００mg／mLの範囲内のタンパク質を定量するのに使用
することができかつ前記妨害物を除くために試料の前希
釈、前濃縮または前処理を必要としない、タンパク質測
定用乾式分析要素が要望されている。
【００１５】
【課題を解決するための手段】予想外のことであった
が、アクリルアミドを含有する重合体およびヒドロキシ
カルボン酸化合物とともにモリブデン酸イオンの存在下
で指示薬の色素を含有してなり、生体液中のタンパク質
の量または存在を確認するため使用するのに適している
乾式分析要素を製造できることが発見されたのである。
が、アクリルアミドを含有する重合体およびヒドロキシ
カルボン酸化合物とともにモリブデン酸イオンの存在下
で指示薬の色素を含有してなり、生体液中のタンパク質
の量または存在を確認するため使用するのに適している
乾式分析要素を製造できることが発見されたのである。
【００１６】タンパク質の濃度を測定するのに用いる従
来技術の乾式分析要素の問題点は、この発明の乾式分析
要素において、アクリルアミド重合体とヒドロキシカル
ボン酸化合物を組合わせたモリブデン酸イオンの存在下
で指示薬の色素を使用して克服された。モリブデン酸イ
オンはこの発明の実施態様に用いる好ましい金属イオン
である。しかし、この発明の実施態様はモリブデン酸イ
オンだけに限定されない。タングステン酸イオンのよう
な他の適切な金属イオンも、この発明の範囲内にあると
考えられる。
来技術の乾式分析要素の問題点は、この発明の乾式分析
要素において、アクリルアミド重合体とヒドロキシカル
ボン酸化合物を組合わせたモリブデン酸イオンの存在下
で指示薬の色素を使用して克服された。モリブデン酸イ
オンはこの発明の実施態様に用いる好ましい金属イオン
である。しかし、この発明の実施態様はモリブデン酸イ
オンだけに限定されない。タングステン酸イオンのよう
な他の適切な金属イオンも、この発明の範囲内にあると
考えられる。
【００１７】異なるタンパク質が、色素と等しく反応し
て、試料中に存在するタンパク質の質量に関連しかつそ
のタンパク質の性質と無関係の光学的シグナルを生成す
ることが、上記のように非常に要望されている。予想外
であったが、乾式要素の各種試薬をコートするのに使用
される重合体ビヒクルが、指示薬の色素系と異なるタン
パク質との見掛けの反応性に影響することが発見された
のである。したがって、測定される光学的シグナルの大
きさは存在するタンパク質の性質またはタイプに左右さ
れる。しかし、タンパク質のタイプに対するこの依存性
は、アクリルアミドを含有する重合体が乾式分析要素中
に存在していると有意に低下する。
て、試料中に存在するタンパク質の質量に関連しかつそ
のタンパク質の性質と無関係の光学的シグナルを生成す
ることが、上記のように非常に要望されている。予想外
であったが、乾式要素の各種試薬をコートするのに使用
される重合体ビヒクルが、指示薬の色素系と異なるタン
パク質との見掛けの反応性に影響することが発見された
のである。したがって、測定される光学的シグナルの大
きさは存在するタンパク質の性質またはタイプに左右さ
れる。しかし、タンパク質のタイプに対するこの依存性
は、アクリルアミドを含有する重合体が乾式分析要素中
に存在していると有意に低下する。
【００１８】モリブデン酸アンモニウムの存在下、指示
薬の色素とタンパク質の錯体が生成する際に起こる適当
な濃度での反射濃度の変化を測定することに基づいて試
料中の全タンパク質を定量するのに用いる乾式分析要素
を本明細書に開示する。この発明の乾式要素は、あらゆ
る液体試料、特に生体液中のタンパク質の量を測定する
のに有用である。
薬の色素とタンパク質の錯体が生成する際に起こる適当
な濃度での反射濃度の変化を測定することに基づいて試
料中の全タンパク質を定量するのに用いる乾式分析要素
を本明細書に開示する。この発明の乾式要素は、あらゆ
る液体試料、特に生体液中のタンパク質の量を測定する
のに有用である。
【００１９】より具体的に述べると、一実施態様で、こ
の発明は、以下のような、タンパク質の確認と定量を行
うのに有用な乾式分析要素に関する。すなわち（ｉ）多
孔質展開層 (porous spreading layer）、（ii）上記多
孔質展開層と流体接触する一つ以上の追加の層、および
（iii ）支持体を含んでなる乾式分析要素であって、前
記要素は、前記追加の層のうちの少なくとも一つに、ア
クリルアミドを含有する重合体、指示薬の色素およびモ
リブデン酸イオンを含有し、その色素とモリブデン酸イ
オンは、前記要素が、タンパク質を含有していると推測
される流体と接触すると反応して、色素のスペクトル吸
収と反射濃度が測定可能な変化をし、そして色素、前記
モリブデン酸塩および前記アクリルアミド含有重合体
は、ともに同一層中に存在しているか、または前記要素
の別個の層中に、任意に組み合わされてもしくは個々に
存在していてもよい、乾式分析要素である。
の発明は、以下のような、タンパク質の確認と定量を行
うのに有用な乾式分析要素に関する。すなわち（ｉ）多
孔質展開層 (porous spreading layer）、（ii）上記多
孔質展開層と流体接触する一つ以上の追加の層、および
（iii ）支持体を含んでなる乾式分析要素であって、前
記要素は、前記追加の層のうちの少なくとも一つに、ア
クリルアミドを含有する重合体、指示薬の色素およびモ
リブデン酸イオンを含有し、その色素とモリブデン酸イ
オンは、前記要素が、タンパク質を含有していると推測
される流体と接触すると反応して、色素のスペクトル吸
収と反射濃度が測定可能な変化をし、そして色素、前記
モリブデン酸塩および前記アクリルアミド含有重合体
は、ともに同一層中に存在しているか、または前記要素
の別個の層中に、任意に組み合わされてもしくは個々に
存在していてもよい、乾式分析要素である。
【００２０】この発明は、タンパク質を確認し定量する
のに上記乾式分析要素を使用する、以下の方法を提供す
るものである。すなわち、 （Ａ）下記式：
のに上記乾式分析要素を使用する、以下の方法を提供す
るものである。すなわち、 （Ａ）下記式：
【００２１】
【化４】
【００２２】（式中、Ｒ1 とＲ2 は独立してＨ，−ＣＨ
3 ，−ＣＨ2 ＣＨ3 または−ＣＨ2 ＯＨであり、そして
ＭはＨまたは金属もしくは非金属の陽電荷の対イオンで
ある）で表されるヒドロキシカルボン酸を、タンパク質
を含有していると推測される流体試料に添加し； （Ｂ）上記ヒドロキシカルボン酸を含有する上記流体試
料を、前記分析要素と接触させ；次いで （Ｃ）色素のスペクトル吸収または反射濃度の変化を、
タンパク質の存在と量の尺度として測定する；ことを含
んでなる方法である。
3 ，−ＣＨ2 ＣＨ3 または−ＣＨ2 ＯＨであり、そして
ＭはＨまたは金属もしくは非金属の陽電荷の対イオンで
ある）で表されるヒドロキシカルボン酸を、タンパク質
を含有していると推測される流体試料に添加し； （Ｂ）上記ヒドロキシカルボン酸を含有する上記流体試
料を、前記分析要素と接触させ；次いで （Ｃ）色素のスペクトル吸収または反射濃度の変化を、
タンパク質の存在と量の尺度として測定する；ことを含
んでなる方法である。
【００２３】好ましい実施態様で、この発明は、以下の
ような、タンパク質の確認と定量を行うのに有用な分析
要素に関する。すなわち、（ｉ）多孔質展開層、（ii）
上記多孔質展開層と流体接触する一つ以上の追加の層、
および（iii ）支持体を含んでなる分析要素であって、
前記要素は、前記追加の層のうちの少なくとも一つに、
アクリルアミドを含有する重合体を含有し、そして前記
要素は、下記式：
ような、タンパク質の確認と定量を行うのに有用な分析
要素に関する。すなわち、（ｉ）多孔質展開層、（ii）
上記多孔質展開層と流体接触する一つ以上の追加の層、
および（iii ）支持体を含んでなる分析要素であって、
前記要素は、前記追加の層のうちの少なくとも一つに、
アクリルアミドを含有する重合体を含有し、そして前記
要素は、下記式：
【００２４】
【化５】
【００２５】（式中、Ｒ1 とＲ2 は独立してＨ，−ＣＨ
3 ，−ＣＨ2 ＣＨ3 または−ＣＨ2 ＯＨであり、そして
ＭはＨまたは金属もしくは非金属の陽電荷の対イオンで
ある）で表されるヒドロキシカルボン酸を含有し、そし
てさらに指示薬の色素とモリブデン酸イオンを含有し、
その色素とモリブデン酸イオンは、前記要素が、タンパ
ク質を含有していると推測される流体と接触すると反応
して、色素のスペクトル吸収または反射濃度が測定可能
な変化をし、そして前記色素、前記モリブデン酸塩、前
記アクリルアミド含有重合体および前記ヒドロキシカル
ボン酸は、ともに同一層中に存在しているか、または前
記要素の別個の層中に任意に組み合わされてもしくは個
々に存在していてもよい分析要素である。
3 ，−ＣＨ2 ＣＨ3 または−ＣＨ2 ＯＨであり、そして
ＭはＨまたは金属もしくは非金属の陽電荷の対イオンで
ある）で表されるヒドロキシカルボン酸を含有し、そし
てさらに指示薬の色素とモリブデン酸イオンを含有し、
その色素とモリブデン酸イオンは、前記要素が、タンパ
ク質を含有していると推測される流体と接触すると反応
して、色素のスペクトル吸収または反射濃度が測定可能
な変化をし、そして前記色素、前記モリブデン酸塩、前
記アクリルアミド含有重合体および前記ヒドロキシカル
ボン酸は、ともに同一層中に存在しているか、または前
記要素の別個の層中に任意に組み合わされてもしくは個
々に存在していてもよい分析要素である。
【００２６】この発明は、タンパク質を確認し定量する
のに上記好ましい乾式分析要素を使用する以下の方法を
提供するものである。すなわち、 （Ａ）タンパク質を含有していると推測される流体試料
を前記分析要素と接触させ； （Ｂ）スペクトル吸収または反射濃度の変化を、タンパ
ク質の存在および量の尺度として測定する；ことを含ん
でなる方法である。
のに上記好ましい乾式分析要素を使用する以下の方法を
提供するものである。すなわち、 （Ａ）タンパク質を含有していると推測される流体試料
を前記分析要素と接触させ； （Ｂ）スペクトル吸収または反射濃度の変化を、タンパ
ク質の存在および量の尺度として測定する；ことを含ん
でなる方法である。
【００２７】
【発明の実施の形態】この発明は、各種の水性流体中の
タンパク質の存在および／または濃度を確認するのに有
利に使用され、その水性流体としては、例えば、ヒトと
動物の生体液、食品、産業排水もしくは都市排水、およ
び通常このような検査を受けるその外の流体である。検
査できる生体液としては、限定されないが、全血、血
清、血漿尿、脊髄液、涙液、滑液、リンパ液、組織また
は血小板の懸濁液、歯肉液、膣液、頭蓋液および当業技
術者には容易に分かる他の体液がある。
タンパク質の存在および／または濃度を確認するのに有
利に使用され、その水性流体としては、例えば、ヒトと
動物の生体液、食品、産業排水もしくは都市排水、およ
び通常このような検査を受けるその外の流体である。検
査できる生体液としては、限定されないが、全血、血
清、血漿尿、脊髄液、涙液、滑液、リンパ液、組織また
は血小板の懸濁液、歯肉液、膣液、頭蓋液および当業技
術者には容易に分かる他の体液がある。
【００２８】測定できるタンパク質としては、限定され
ないが、ペプチド類、ポリペプチド類、タンパク質類
（例えば酵素類、抗体類、リポタンパク質類および糖タ
ンパク質類）、ならびにペプチド類、ポリペプチド類お
よび／またはタンパク質を含有しているかまたはこれら
に（共有結合または非共有結合で）結合している化合物
がある。この発明は、尿中のタンパク質を測定するのに
特に有用である。
ないが、ペプチド類、ポリペプチド類、タンパク質類
（例えば酵素類、抗体類、リポタンパク質類および糖タ
ンパク質類）、ならびにペプチド類、ポリペプチド類お
よび／またはタンパク質を含有しているかまたはこれら
に（共有結合または非共有結合で）結合している化合物
がある。この発明は、尿中のタンパク質を測定するのに
特に有用である。
【００２９】この発明は、多孔質の展開層、通常は、希
釈されているかまたは希釈されていない検査試料を（例
えば１〜５０μｌ）吸収させるのに適した多孔度のコー
トされ層を備えた分析要素を使用して実施する。この発
明の要素は、当該技術分野で公知の方法を用いて組み立
てられる。前記多孔質展開層は、等方的に多孔質である
方が好ましく、その多孔性は、層の粒子、繊維または他
の物理的成分の間の相互に接続された空間によって提供
される。等方的に多孔質ということは、流体が、層全体
に均一に広がることを意味する。このような層に有用な
材料は、水に不溶性であり、検定中、その構造の一体性
を維持している。分析要素を組み立てるのに用いる通常
の材料と方法は、例えば、Przybylowiczらの米国特許第
３，９９２，１５８号、Pierceらの米国特許第４，２５
８，００１号、Kitazimaらの米国特許第４，２９２，２
７２号、およびKoyamaらの米国特許第４，４３０，４３
６号に記載されている。なおこれら特許の全内容は本明
細書に援用するものである。好ましい多孔質展開層は、
Przybylowiczらの米国特許第３，９９２，１５８号に記
載されているようなＥＳＴＡＮＥ中の硫酸バリウムで製
造される。
釈されているかまたは希釈されていない検査試料を（例
えば１〜５０μｌ）吸収させるのに適した多孔度のコー
トされ層を備えた分析要素を使用して実施する。この発
明の要素は、当該技術分野で公知の方法を用いて組み立
てられる。前記多孔質展開層は、等方的に多孔質である
方が好ましく、その多孔性は、層の粒子、繊維または他
の物理的成分の間の相互に接続された空間によって提供
される。等方的に多孔質ということは、流体が、層全体
に均一に広がることを意味する。このような層に有用な
材料は、水に不溶性であり、検定中、その構造の一体性
を維持している。分析要素を組み立てるのに用いる通常
の材料と方法は、例えば、Przybylowiczらの米国特許第
３，９９２，１５８号、Pierceらの米国特許第４，２５
８，００１号、Kitazimaらの米国特許第４，２９２，２
７２号、およびKoyamaらの米国特許第４，４３０，４３
６号に記載されている。なおこれら特許の全内容は本明
細書に援用するものである。好ましい多孔質展開層は、
Przybylowiczらの米国特許第３，９９２，１５８号に記
載されているようなＥＳＴＡＮＥ中の硫酸バリウムで製
造される。
【００３０】この発明の分析要素には一つ以上の追加の
層があり、これらの層はすべて、前記多孔質展開層と流
体接触している。「流体接触」という用語は本明細書で
使用する場合、流体が一つの層から他の層へ容易に移動
できることを意味するものである。かような追加の層
は、好ましくはコートされた重合体層であり、下層 (su
b layer ）、試薬層および放射線遮層が含まれ、そして
ゼラチンおよびビニルピロリドン重合体などの当該技術
分野で公知の１種以上の親水性結合剤を含有している。
いくつかの層は水不溶性であり、一方、残りの層は水溶
性でもよい。
層があり、これらの層はすべて、前記多孔質展開層と流
体接触している。「流体接触」という用語は本明細書で
使用する場合、流体が一つの層から他の層へ容易に移動
できることを意味するものである。かような追加の層
は、好ましくはコートされた重合体層であり、下層 (su
b layer ）、試薬層および放射線遮層が含まれ、そして
ゼラチンおよびビニルピロリドン重合体などの当該技術
分野で公知の１種以上の親水性結合剤を含有している。
いくつかの層は水不溶性であり、一方、残りの層は水溶
性でもよい。
【００３１】この発明の要素のこれら追加の層は、自立
性でもよいが、これらの層は、寸法が安定していて化学
的に不活性の適切な支持体上に配置した方が好ましい。
その支持体は好ましくは、非多孔質でかつ電磁放射線に
対して透明である。選択される支持体は、目的とする検
出モード（例えば透過分光法または反射分光法）に適合
していなければならない。支持体の有用な材料として
は、限定されないが、紙、金属箔、ポリスチレン類、ポ
リエステル類、ポリカーボネート類およびセルロースエ
ステル類がある。
性でもよいが、これらの層は、寸法が安定していて化学
的に不活性の適切な支持体上に配置した方が好ましい。
その支持体は好ましくは、非多孔質でかつ電磁放射線に
対して透明である。選択される支持体は、目的とする検
出モード（例えば透過分光法または反射分光法）に適合
していなければならない。支持体の有用な材料として
は、限定されないが、紙、金属箔、ポリスチレン類、ポ
リエステル類、ポリカーボネート類およびセルロースエ
ステル類がある。
【００３２】この発明の要素の追加の層のうちの少なく
とも一つに、タンパク質およびモリブデン酸イオンと特
異的に反応できる色素が入っている。「タンパク質およ
びモリブデン酸イオンと反応する色素」という用語は、
本明細書で使用する場合、モリブデン酸イオンとタンパ
ク質の存在下での色素のスペクトル特性または吸光特性
が、タンパク質が存在しない場合の色素とモリブデン酸
イオンのこれら特性と異なっている色素化合物を意味す
る。望ましい上記特性を有する色素としては、モリブデ
ン酸イオンに配位できる官能基（限定されないが、芳香
族環の２個の隣接するヒドロキシル基など）を有する鎖
状芳香族構造および三環式芳香族構造を有する色素があ
る。このような色素としては、限定されないがピロカテ
コールバイオレット、テトラブロモフェノールフタレイ
ンエチルエステル、トリヨードフェノールスルホンフタ
レイン、テトラブロモピロガロールレッドおよびピロガ
ロールレッドがある。
とも一つに、タンパク質およびモリブデン酸イオンと特
異的に反応できる色素が入っている。「タンパク質およ
びモリブデン酸イオンと反応する色素」という用語は、
本明細書で使用する場合、モリブデン酸イオンとタンパ
ク質の存在下での色素のスペクトル特性または吸光特性
が、タンパク質が存在しない場合の色素とモリブデン酸
イオンのこれら特性と異なっている色素化合物を意味す
る。望ましい上記特性を有する色素としては、モリブデ
ン酸イオンに配位できる官能基（限定されないが、芳香
族環の２個の隣接するヒドロキシル基など）を有する鎖
状芳香族構造および三環式芳香族構造を有する色素があ
る。このような色素としては、限定されないがピロカテ
コールバイオレット、テトラブロモフェノールフタレイ
ンエチルエステル、トリヨードフェノールスルホンフタ
レイン、テトラブロモピロガロールレッドおよびピロガ
ロールレッドがある。
【００３３】この発明の好ましい実施態様で、タンパク
質の存在および／または量を定量するのに用いる多重層
分析要素が提供される。具体的に述べると、その多重層
要素は、（ｉ）タンパク質およびモリブデン酸イオンと
反応する色素、モリブデン酸塩、アクリルアミドを含有
する重合体を含有する第一の試薬または緩衝剤の層（i
i）下層、および（iii ）多孔質展開層、を流体接触状
態で、非多孔質支持体の上に備えてなる要素である。
質の存在および／または量を定量するのに用いる多重層
分析要素が提供される。具体的に述べると、その多重層
要素は、（ｉ）タンパク質およびモリブデン酸イオンと
反応する色素、モリブデン酸塩、アクリルアミドを含有
する重合体を含有する第一の試薬または緩衝剤の層（i
i）下層、および（iii ）多孔質展開層、を流体接触状
態で、非多孔質支持体の上に備えてなる要素である。
【００３４】この発明の要素は、製造、流体の展開およ
び不要放射線の吸収に役立つことが、当該技術分野で知
られている各種の添加剤を、適当な層に含有させてもよ
い。この発明の要素は、従来技術の項に記載されている
従来のコーティング法と装置（グラビア法、カーテン
法、ホッパー法などのコーティング法がある）を用いて
製造できる。この発明の要素は、所望の幅の細長いテー
プ類、シート類、スライド類またはチップ類を含む各種
の形態で作製することができる。さらに、この発明の方
法は、適当な分析装置と分析手順を用いて手動でまたは
自動的に実施できる。一般に、この発明の方法は、多孔
質展開層上に、検査試料（例えば１〜５０μｌ）をスポ
ットすることによって、要素Ｐの試薬と接触させること
からなる方法である。要素内に流体が移動すると、試薬
を有効に混合して、反応が起こる。
び不要放射線の吸収に役立つことが、当該技術分野で知
られている各種の添加剤を、適当な層に含有させてもよ
い。この発明の要素は、従来技術の項に記載されている
従来のコーティング法と装置（グラビア法、カーテン
法、ホッパー法などのコーティング法がある）を用いて
製造できる。この発明の要素は、所望の幅の細長いテー
プ類、シート類、スライド類またはチップ類を含む各種
の形態で作製することができる。さらに、この発明の方
法は、適当な分析装置と分析手順を用いて手動でまたは
自動的に実施できる。一般に、この発明の方法は、多孔
質展開層上に、検査試料（例えば１〜５０μｌ）をスポ
ットすることによって、要素Ｐの試薬と接触させること
からなる方法である。要素内に流体が移動すると、試薬
を有効に混合して、反応が起こる。
【００３５】試料を塗布した後、この発明の要素に、タ
ンパク質−色素−モリブデン酸イオン錯体の生成を速く
するかさもなければ容易にするために望ましい、例えば
インキュベーション、加熱などの方法の状態調整を行
う。上記のように、この発明に採用される、タンパク質
およびモリブデン酸イオンと反応する色素としては、限
定されないが、モリブデン酸イオンに配位できる官能基
（限定されないが、芳香族環の２個の隣接するヒドロキ
シル基など）を有する鎖状芳香族構造および三環式芳香
族構造を有する色素がある。かような色素としては、限
定されないが、ピロカテコールバイオレット、テトラブ
ロモフェノールフタレインエチルエステル、トリヨード
フェノールスルホンフタレイン、テトラブロモピロガロ
ールレッドおよびピロガロールレッドがある。
ンパク質−色素−モリブデン酸イオン錯体の生成を速く
するかさもなければ容易にするために望ましい、例えば
インキュベーション、加熱などの方法の状態調整を行
う。上記のように、この発明に採用される、タンパク質
およびモリブデン酸イオンと反応する色素としては、限
定されないが、モリブデン酸イオンに配位できる官能基
（限定されないが、芳香族環の２個の隣接するヒドロキ
シル基など）を有する鎖状芳香族構造および三環式芳香
族構造を有する色素がある。かような色素としては、限
定されないが、ピロカテコールバイオレット、テトラブ
ロモフェノールフタレインエチルエステル、トリヨード
フェノールスルホンフタレイン、テトラブロモピロガロ
ールレッドおよびピロガロールレッドがある。
【００３６】上記色素化合物は、Eastman Organic Chem
ical Company, Aldrich Chemical Company, Sigma Chem
ical Companyなどの公知の化学薬剤製造業者から購入す
るか、または当業技術者にとって公知の通常の出発物質
と方法を用いて製造することができる。以下の指示薬色
素：ピロカテコールバイオレット〔ピロカテコール、
４，４′−（３Ｈ−２，１−ベンゾオキサチオール−３
−イリジン）−ジ−Ｓ，Ｓ−ジオキシド〕；ピロガロー
ルレッド〔２−（４，５，６−トリヒドロキシ−３−オ
キソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）ベンゼンスルホン
酸〕；ブロモピロガロールレッド｛スピロ〔３Ｈ−２，
１−ベンゾオキサチオール−３′，９′−〔９Ｈ〕−キ
サンテン−３′，４′，５′，６′−テトロール−２，
７−ジブロモ−Ｉ，Ｉ−ジオキシド〕｝；ガレイン
｛３′，４′，５′，６′−テトラヒドロキシスピロ
〔イソベンゾフラン−１（３Ｈ），９′−〔９Ｈ〕キサ
ンテン〕−３−オン｝を別個に含有する乾式分析要素を
製造した。乾式分析要素の一般的な特徴は、Przybylowi
czらの米国特許第３，９９２，１５８号および Frankと
Pierceの米国特許第４，２５８，００１号に記載されて
いる。これらの色素はすべて、物理化学的な環境の変化
に対して鋭敏である。
ical Company, Aldrich Chemical Company, Sigma Chem
ical Companyなどの公知の化学薬剤製造業者から購入す
るか、または当業技術者にとって公知の通常の出発物質
と方法を用いて製造することができる。以下の指示薬色
素：ピロカテコールバイオレット〔ピロカテコール、
４，４′−（３Ｈ−２，１−ベンゾオキサチオール−３
−イリジン）−ジ−Ｓ，Ｓ−ジオキシド〕；ピロガロー
ルレッド〔２−（４，５，６−トリヒドロキシ−３−オ
キソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）ベンゼンスルホン
酸〕；ブロモピロガロールレッド｛スピロ〔３Ｈ−２，
１−ベンゾオキサチオール−３′，９′−〔９Ｈ〕−キ
サンテン−３′，４′，５′，６′−テトロール−２，
７−ジブロモ−Ｉ，Ｉ−ジオキシド〕｝；ガレイン
｛３′，４′，５′，６′−テトラヒドロキシスピロ
〔イソベンゾフラン−１（３Ｈ），９′−〔９Ｈ〕キサ
ンテン〕−３−オン｝を別個に含有する乾式分析要素を
製造した。乾式分析要素の一般的な特徴は、Przybylowi
czらの米国特許第３，９９２，１５８号および Frankと
Pierceの米国特許第４，２５８，００１号に記載されて
いる。これらの色素はすべて、物理化学的な環境の変化
に対して鋭敏である。
【００３７】我々は、乾式分析要素中に、上記色素をモ
リブデン酸イオンと組み合わせて用いて、尿タンパク質
の定量分析を実施できることを発見したのである。モリ
ブデン酸イオンを組み合わせてピロカテコールバイオレ
ットを含有する乾式分析要素は、ヒトアルブミンを含有
する調製溶液に対し、最良の分析検出感度（すなわち３
００mg／dLまでの所望のタンパク質濃度範囲にわたる反
射濃度（Ｄｒ）の最良の変化）および最良の反復精度を
示した。
リブデン酸イオンと組み合わせて用いて、尿タンパク質
の定量分析を実施できることを発見したのである。モリ
ブデン酸イオンを組み合わせてピロカテコールバイオレ
ットを含有する乾式分析要素は、ヒトアルブミンを含有
する調製溶液に対し、最良の分析検出感度（すなわち３
００mg／dLまでの所望のタンパク質濃度範囲にわたる反
射濃度（Ｄｒ）の最良の変化）および最良の反復精度を
示した。
【００３８】予想外のことであったが、我々は、乾式要
素の各種試薬をコートするのに使用する重合体ビヒクル
が、指示薬色素系と異なるタンパク質との見掛けの反応
性、つまり測定される光学的シグナルの大きさの、存在
するタンパク質のタイプに対する依存性に影響すること
を発見した。この発明に使用するのに適切な重合体は光
学的シグナルを同等にする作用がある。すなわちその重
合体には、等しい質量または重量の異なるタンパク質で
得られる反射濃度の測定シグナルの差を減らす作用があ
る。異なる試料中のタンパク質のタイプは異なっている
ことが多くそして所望の測定量が試料の単位容積当りに
存在しているタンパク質の全質量（全タンパク質）であ
るから、上記のことは望ましいことである。理想をいえ
ば、全タンパク質の検定法は、すべてのタンパク質を等
しい感度で定量しなければならない。この発明の重合体
としては、限定されないが、水溶性の単独重合体、共重
合体および三元重合体があり、大部分（約４０重量％を
超える）アクリルアミドで構成されている。モリブデン
酸イオンに配位できる官能基は、この発明の重合体に存
在している場合、タンパク質の測定を妨害する量で存在
していてはならない。好ましい重合体はアクリルアミド
の単独重合体であり、すなわち、重量平均分子量が約２
０，０００〜２５０，０００ダルトンのポリアクリルア
ミド（以後ポリＡと呼ぶ）である。最も好ましい範囲は
約１００，０００〜１５０，０００ダルトンである。
素の各種試薬をコートするのに使用する重合体ビヒクル
が、指示薬色素系と異なるタンパク質との見掛けの反応
性、つまり測定される光学的シグナルの大きさの、存在
するタンパク質のタイプに対する依存性に影響すること
を発見した。この発明に使用するのに適切な重合体は光
学的シグナルを同等にする作用がある。すなわちその重
合体には、等しい質量または重量の異なるタンパク質で
得られる反射濃度の測定シグナルの差を減らす作用があ
る。異なる試料中のタンパク質のタイプは異なっている
ことが多くそして所望の測定量が試料の単位容積当りに
存在しているタンパク質の全質量（全タンパク質）であ
るから、上記のことは望ましいことである。理想をいえ
ば、全タンパク質の検定法は、すべてのタンパク質を等
しい感度で定量しなければならない。この発明の重合体
としては、限定されないが、水溶性の単独重合体、共重
合体および三元重合体があり、大部分（約４０重量％を
超える）アクリルアミドで構成されている。モリブデン
酸イオンに配位できる官能基は、この発明の重合体に存
在している場合、タンパク質の測定を妨害する量で存在
していてはならない。好ましい重合体はアクリルアミド
の単独重合体であり、すなわち、重量平均分子量が約２
０，０００〜２５０，０００ダルトンのポリアクリルア
ミド（以後ポリＡと呼ぶ）である。最も好ましい範囲は
約１００，０００〜１５０，０００ダルトンである。
【００３９】さらに、全く予想外のことであったが、我
々は、多重層の分析要素に、好ましくはプレコートして
グリコール酸に加えると、重炭酸塩による妨害が実質的
に減少することを発見した。下記一般構造式：
々は、多重層の分析要素に、好ましくはプレコートして
グリコール酸に加えると、重炭酸塩による妨害が実質的
に減少することを発見した。下記一般構造式：
【００４０】
【化６】
【００４１】（式中、Ｒ1 とＲ2 は独立してＨ，−ＣＨ
3 ，−ＣＨ2 ＣＨ3 または−ＣＨ2 ＯＨであり、そして
ＭはＨまたは金属もしくは非金属の陽電荷対イオンであ
る）で表される他のヒドロキシカルボン酸は、類似の作
用を有し、この発明に使用するのに適している。上記式
で表される代表的なヒドロキシカルボン酸としては、２
−ヒドロキシプロパン酸、２−メチル−２−ヒドロキシ
プロパン酸およびその塩がある。尿タンパク質の満足す
べき定量分析は、指示薬色素とモリブデン酸イオンを、
前記アクリルアミド重合体およびヒドロキシカルボン酸
と組み合わせて含有する乾式分析要素を使用することに
よって達成できる。モリブデン酸イオン含有のピロカテ
コールバイオレットを、分子量が約２０，０００〜２５
０，０００ダルトンのポリアクリルアミド重合体と組み
合わせて、またグリコール酸も組み合わせたものが好ま
しい乾式分析要素であり、３００mg／dLまでのタンパク
質濃度の鋭敏な測定を行いかつ反復精度が非常に優れて
いる。最も好ましい乾式要素は、試薬／緩衝剤層および
プレコートされたグリコール酸でコートされた重合体ビ
ヒクルとしてポリＡ（平均分子量が約１００，０００〜
１５０，０００ダルトン）を含有している。
3 ，−ＣＨ2 ＣＨ3 または−ＣＨ2 ＯＨであり、そして
ＭはＨまたは金属もしくは非金属の陽電荷対イオンであ
る）で表される他のヒドロキシカルボン酸は、類似の作
用を有し、この発明に使用するのに適している。上記式
で表される代表的なヒドロキシカルボン酸としては、２
−ヒドロキシプロパン酸、２−メチル−２−ヒドロキシ
プロパン酸およびその塩がある。尿タンパク質の満足す
べき定量分析は、指示薬色素とモリブデン酸イオンを、
前記アクリルアミド重合体およびヒドロキシカルボン酸
と組み合わせて含有する乾式分析要素を使用することに
よって達成できる。モリブデン酸イオン含有のピロカテ
コールバイオレットを、分子量が約２０，０００〜２５
０，０００ダルトンのポリアクリルアミド重合体と組み
合わせて、またグリコール酸も組み合わせたものが好ま
しい乾式分析要素であり、３００mg／dLまでのタンパク
質濃度の鋭敏な測定を行いかつ反復精度が非常に優れて
いる。最も好ましい乾式要素は、試薬／緩衝剤層および
プレコートされたグリコール酸でコートされた重合体ビ
ヒクルとしてポリＡ（平均分子量が約１００，０００〜
１５０，０００ダルトン）を含有している。
【００４２】ポリアクリルアミドには、指示薬色素のピ
ロカテコールバイオレット／モリブデン酸イオン系と異
なるタンパク質類との反応性を同等にする作用がある。
重量濃度が同じである異なるタイプのタンパク質に対す
る反射濃度シグナルの差は、好ましい重合体を用いる乾
式要素の場合、有意に減少する。ピロカテコールバイオ
レットとモリブデン酸イオンを使用する場合の前記重合
体の作用は、他のタイプの指示薬色素および金属イオン
を使用する場合にも観察される。この発明によれば、約
５〜３００mg／dLの範囲内の尿中全タンパク質を定量す
るのに用いる乾式要素を製造することができる。この発
明の乾式要素は、異なるタンパク質類に対する感度がほ
ゞ等しいので、その目的とする用途に適切でかつ従来技
術の溶液検定法および乾式要素に基づいた検定法より優
れた精度が得られる。尿の試料中に広範囲で各種のレベ
ルの重炭酸塩が存在していることが原因する主な妨害作
用は、ピロカテコール−モリブデン酸イオンの化学組成
を採用する乾式要素にグリコール酸を添加することによ
って克服された。先に開示された他のヒドロキシカルボ
ン酸類は、乾式要素に組み入れるかまたは試料に添加す
るかにかかわらず、同様の作用をもっている。このよう
な二つの非常に異なった予想外の発見は、液体試料中の
全タンパク質を定量するのに特に適切な鋭敏でかつ堅牢
な乾式検定要素を提供した。
ロカテコールバイオレット／モリブデン酸イオン系と異
なるタンパク質類との反応性を同等にする作用がある。
重量濃度が同じである異なるタイプのタンパク質に対す
る反射濃度シグナルの差は、好ましい重合体を用いる乾
式要素の場合、有意に減少する。ピロカテコールバイオ
レットとモリブデン酸イオンを使用する場合の前記重合
体の作用は、他のタイプの指示薬色素および金属イオン
を使用する場合にも観察される。この発明によれば、約
５〜３００mg／dLの範囲内の尿中全タンパク質を定量す
るのに用いる乾式要素を製造することができる。この発
明の乾式要素は、異なるタンパク質類に対する感度がほ
ゞ等しいので、その目的とする用途に適切でかつ従来技
術の溶液検定法および乾式要素に基づいた検定法より優
れた精度が得られる。尿の試料中に広範囲で各種のレベ
ルの重炭酸塩が存在していることが原因する主な妨害作
用は、ピロカテコール−モリブデン酸イオンの化学組成
を採用する乾式要素にグリコール酸を添加することによ
って克服された。先に開示された他のヒドロキシカルボ
ン酸類は、乾式要素に組み入れるかまたは試料に添加す
るかにかかわらず、同様の作用をもっている。このよう
な二つの非常に異なった予想外の発見は、液体試料中の
全タンパク質を定量するのに特に適切な鋭敏でかつ堅牢
な乾式検定要素を提供した。
【００４３】
【実施例】以下の実施例はこの発明の範囲を例示するた
めに提供するものである。これらの実施例は例示するこ
とだけを目的として提供するものであるから、これら実
施例で実施される発明はこの発明を限定するものではな
い。記載されている場合を除いて、すべての試薬と装置
は商業的供給源から入手した。
めに提供するものである。これらの実施例は例示するこ
とだけを目的として提供するものであるから、これら実
施例で実施される発明はこの発明を限定するものではな
い。記載されている場合を除いて、すべての試薬と装置
は商業的供給源から入手した。
【００４４】以下の実施例１〜４は、異なる指示薬色素
を含有する要素の分析検出感度と反復精度を比較した実
験結果を示す。実施例１ ピロカテコールバイオレット 追加して、以下の組成〔ポリ（アクリルアミド−ｃｏ−
Ｎ−ビニル−２−ピロリドン、５０：５０重量比）〕を
有するアクリルアミド重合体（以後重合体ＡＶＰと呼
ぶ）（１２ｇ／ｍ2 ）、緩衝剤としての界面活性剤Ｚｏ
ｎｙｌ ＦＳＮ（０．３６ｇ／ｍ2 ）とコハク酸（pH
２．５）（５．９ｇ／ｍ2 ）、モリブデン酸アンモニウ
ム（０．１８ｇ／ｍ2 ）およびシュウ酸カリウム（０．
１５ｇ／ｍ2）を含有する試薬層に、ピロカテコールバ
イオレット（０．１２ｇ／ｍ2 ）を入れてコートした。
ビーズ展開層（下記組成を有し、米国特許第４，２５
８，００１号に記載されている）を使用した。この展開
層と試薬層の間に、ポリ（Ｎ−ビニル−２−ピロリド
ン）の下層を設けた。その要素を刃先で１cm四方に切断
しスライドガラスに取り付けた。 Johnson & Johnson C
linical Diagnosticのスライドアナライザーを使用し
て、上記スライド要素に、タンパク質含有溶液をスポッ
トし、そのスライドガラスをインキュベートし次に反射
濃度（Ｄｒ）を読み取った。この要素評価法によれば、
職員は、多数の要素を試験しかつ便利に反復測定値を得
ることができる。スポッティング、インキュベーティン
グおよび光学的シグナル測定を行う他の方法も、乾式要
素を評価するのに適している。乾式要素の構造を以下に
示す。ピロカテコールバイオレットの要素 展開層（３０μｍビーズ） コポリ（ビニルトルエンメタクリル酸） ─────────────────────────────────── 下層 ポリ（Ｎ−ビニル−２−ピロリドン） ─────────────────────────────────── コポリ（アクリルアミド−ｃｏ−Ｎ−ビニル− ２−ピロリドン（５０：５０重量比） ピロカテコールバイオレット 試薬層 コハク酸 モリブデン酸アンモニウム シュウ酸カリウム Ｚｏｎｙｌ ＦＳＮ ─────────────────────────────────── 支持体 ─────────────────────────────────── Ｄｒは６７０nmで測定した。下記表１は、上記ピロカテ
コール要素を用いて得た試験結果を示す。既知重量のヒ
ト血清アルブミンを既知容積の０．１５Ｍ塩化ナトリウ
ム水溶液に添加することによって、タンパク質含有流体
を調製して表１に示すアルブミン濃度の流体を得た。ア
ルブミンを含有する上記流体の一部（１０μｌ）を、上
記要素の展開層上にスポットした。次にそのスポットさ
れた要素を３７℃で５分間インキュベートした。次いで
反射濃度を測定した。Ｄｒの測定値は、６回の反復測定
値（ｎ＝６）の平均値（＜Ｄｒ＞）である。％ＣＶはＤ
ｒの平均値の変動係数である。
を含有する要素の分析検出感度と反復精度を比較した実
験結果を示す。実施例１ ピロカテコールバイオレット 追加して、以下の組成〔ポリ（アクリルアミド−ｃｏ−
Ｎ−ビニル−２−ピロリドン、５０：５０重量比）〕を
有するアクリルアミド重合体（以後重合体ＡＶＰと呼
ぶ）（１２ｇ／ｍ2 ）、緩衝剤としての界面活性剤Ｚｏ
ｎｙｌ ＦＳＮ（０．３６ｇ／ｍ2 ）とコハク酸（pH
２．５）（５．９ｇ／ｍ2 ）、モリブデン酸アンモニウ
ム（０．１８ｇ／ｍ2 ）およびシュウ酸カリウム（０．
１５ｇ／ｍ2）を含有する試薬層に、ピロカテコールバ
イオレット（０．１２ｇ／ｍ2 ）を入れてコートした。
ビーズ展開層（下記組成を有し、米国特許第４，２５
８，００１号に記載されている）を使用した。この展開
層と試薬層の間に、ポリ（Ｎ−ビニル−２−ピロリド
ン）の下層を設けた。その要素を刃先で１cm四方に切断
しスライドガラスに取り付けた。 Johnson & Johnson C
linical Diagnosticのスライドアナライザーを使用し
て、上記スライド要素に、タンパク質含有溶液をスポッ
トし、そのスライドガラスをインキュベートし次に反射
濃度（Ｄｒ）を読み取った。この要素評価法によれば、
職員は、多数の要素を試験しかつ便利に反復測定値を得
ることができる。スポッティング、インキュベーティン
グおよび光学的シグナル測定を行う他の方法も、乾式要
素を評価するのに適している。乾式要素の構造を以下に
示す。ピロカテコールバイオレットの要素 展開層（３０μｍビーズ） コポリ（ビニルトルエンメタクリル酸） ─────────────────────────────────── 下層 ポリ（Ｎ−ビニル−２−ピロリドン） ─────────────────────────────────── コポリ（アクリルアミド−ｃｏ−Ｎ−ビニル− ２−ピロリドン（５０：５０重量比） ピロカテコールバイオレット 試薬層 コハク酸 モリブデン酸アンモニウム シュウ酸カリウム Ｚｏｎｙｌ ＦＳＮ ─────────────────────────────────── 支持体 ─────────────────────────────────── Ｄｒは６７０nmで測定した。下記表１は、上記ピロカテ
コール要素を用いて得た試験結果を示す。既知重量のヒ
ト血清アルブミンを既知容積の０．１５Ｍ塩化ナトリウ
ム水溶液に添加することによって、タンパク質含有流体
を調製して表１に示すアルブミン濃度の流体を得た。ア
ルブミンを含有する上記流体の一部（１０μｌ）を、上
記要素の展開層上にスポットした。次にそのスポットさ
れた要素を３７℃で５分間インキュベートした。次いで
反射濃度を測定した。Ｄｒの測定値は、６回の反復測定
値（ｎ＝６）の平均値（＜Ｄｒ＞）である。％ＣＶはＤ
ｒの平均値の変動係数である。
【００４５】 表１ ＨＳＡ（mg／dL） ＜Ｄｒ＞ ％ＣＶ １０ １．０２２ ４．８ ５０ １．２０９ １．０ １００ １．３７０ ２．３ １５０ １．４９８ １．９ ３００ １．７３２ ４．７ １０mg／dLのアルブミンと３００mg／dLのアルブミンの
間の反射濃度の変化（ΔＤｒ＝０．７１０）で評価され
るピロカテコール要素の検出感度は、非常に優れてい
る。％ＣＶは比較的小さく、優れた反復精度を示してい
る。実施例２ ピロガロールレッド ピロガロールレッド（０．１８ｇ／ｍ2 ）を、米国特許
第３，９９２，１５８号に記載されているような硫酸バ
リウムの展開層に入れてコートした。界面活性剤のＴＲ
ＩＴＯＮ Ｘ−１００（０．００１ｇ／ｍ2 ）、酒石酸
（６．０ｇ／ｍ 2 、pH２．５）およびシュウ酸（２ｇ／
ｍ2 ）を、アクリルアミドの単独重合体のポリＡ（平均
分子量が１００，０００ダルトン）を用いる試薬層に入
れて被覆度１０ｇ／ｍ2 でコートした。モリブデン酸ア
ンモニウム（０．９ｇ／ｍ2 ）を、硫酸バリウム展開層
に入れてコートした。ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリル
アミド）の下層を、上記展開層と試薬層の間にコートし
た。その要素の構造を以下に示す。ピロガロールレッドの要素 硫酸バリウム 展開層 ピロガロールレッド モリブデン酸アンモニウム ────────────────────────────── 下層 ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド） ────────────────────────────── ポリアクリルアミド（ポリＡ） 試薬層 酒石酸 シュウ酸 ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１００ ────────────────────────────── Ｅｓｔａｒの支持体 ────────────────────────────── pH２．５のいくつもの緩衝剤をコートしたが、酒石酸
は、試験されたタンパク質濃度の範囲にわたって、最高
の直線的応答をした（５４０nmにて）。実験のプロトコ
ルは、Ｄｒを５４０nmで測定したことを除いて、ピロカ
テコールバイオレットの要素について記載したのと同一
であった。試験結果（ｎ＝６）を表２に示す。
間の反射濃度の変化（ΔＤｒ＝０．７１０）で評価され
るピロカテコール要素の検出感度は、非常に優れてい
る。％ＣＶは比較的小さく、優れた反復精度を示してい
る。実施例２ ピロガロールレッド ピロガロールレッド（０．１８ｇ／ｍ2 ）を、米国特許
第３，９９２，１５８号に記載されているような硫酸バ
リウムの展開層に入れてコートした。界面活性剤のＴＲ
ＩＴＯＮ Ｘ−１００（０．００１ｇ／ｍ2 ）、酒石酸
（６．０ｇ／ｍ 2 、pH２．５）およびシュウ酸（２ｇ／
ｍ2 ）を、アクリルアミドの単独重合体のポリＡ（平均
分子量が１００，０００ダルトン）を用いる試薬層に入
れて被覆度１０ｇ／ｍ2 でコートした。モリブデン酸ア
ンモニウム（０．９ｇ／ｍ2 ）を、硫酸バリウム展開層
に入れてコートした。ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリル
アミド）の下層を、上記展開層と試薬層の間にコートし
た。その要素の構造を以下に示す。ピロガロールレッドの要素 硫酸バリウム 展開層 ピロガロールレッド モリブデン酸アンモニウム ────────────────────────────── 下層 ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド） ────────────────────────────── ポリアクリルアミド（ポリＡ） 試薬層 酒石酸 シュウ酸 ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１００ ────────────────────────────── Ｅｓｔａｒの支持体 ────────────────────────────── pH２．５のいくつもの緩衝剤をコートしたが、酒石酸
は、試験されたタンパク質濃度の範囲にわたって、最高
の直線的応答をした（５４０nmにて）。実験のプロトコ
ルは、Ｄｒを５４０nmで測定したことを除いて、ピロカ
テコールバイオレットの要素について記載したのと同一
であった。試験結果（ｎ＝６）を表２に示す。
【００４６】 表２ ＨＳＡ（mg／dL） ＜Ｄｒ＞ ％ＣＶ １００ ０．２８１ ５．０ ５０ ０．３２７ ４．９ １５０ ０．３６３ ７．１ ３００ ０．３８２ ４．４ ピロガロールレッドの要素を用いて試験したアルブミン
濃度の範囲によるＤｒの変化は０．１０１であるので、
検出感度は、ピロカテコールバイオレット要素で得た検
出感度より小さい。％ＣＶは小さいが、ピロカテコール
バイオレットの要素を用いて得た値よりいくぶん大き
い。実施例３ ブロモピロガロールレッドの要素 ブロモピロガロールレッド（０．２４ｇ／ｍ2 ）を、ポ
リアクリルアミドビヒクル〔以後重合体ＡＡＭと呼ぶ、
ポリ（アクリルアミド−コ−Ｎ−（３−アセトアセトア
ミドプロピル）メタクリルアミド）９５：５重量比〕
（１２ｇ／ｍ2 ）を含有する試薬層に入れてコートし
た。界面活性剤ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１６５（０．２０ｇ
／ｍ2 ）、マロン酸（８．０ｇ／ｍ2 、pH２．５）およ
びモリブデン酸アンモニウム（０．４ｇ／ｍ2 ）も前記
ＡＡＭ層に入れてコートした。硫酸バリウムの展開層
を、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）の下層の
上にコートした。硫酸バリウムの展開層を有するこの要
素の構造を以下に示す。ブロモピロガロールレッドの要素 展開層 硫酸バリウム ─────────────────────────────────── 下層 ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド） ─────────────────────────────────── ポリ（アクリルアミド−コ−Ｎ−（３−アセトアセト アミドプロピル）メタクリルアミド） ブロモピロガロールレッド 試薬層 マロン酸 モリブデン酸アンモニウム シュウ酸カリウム ビスビニルスルホニルメチルエーテル（ＢＶＳＭＥ） ─────────────────────────────────── Ｅｓｔａｒベース ─────────────────────────────────── ブロモピロガロール要素を、ピロカテコールおよびピロ
ガロールレッドの指示薬色素を含有する要素について先
に述べたのと同様にして評価した。ブロモピロガロール
（ｎ＝６）要素を評価して得たデータを表３に示す。
濃度の範囲によるＤｒの変化は０．１０１であるので、
検出感度は、ピロカテコールバイオレット要素で得た検
出感度より小さい。％ＣＶは小さいが、ピロカテコール
バイオレットの要素を用いて得た値よりいくぶん大き
い。実施例３ ブロモピロガロールレッドの要素 ブロモピロガロールレッド（０．２４ｇ／ｍ2 ）を、ポ
リアクリルアミドビヒクル〔以後重合体ＡＡＭと呼ぶ、
ポリ（アクリルアミド−コ−Ｎ−（３−アセトアセトア
ミドプロピル）メタクリルアミド）９５：５重量比〕
（１２ｇ／ｍ2 ）を含有する試薬層に入れてコートし
た。界面活性剤ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１６５（０．２０ｇ
／ｍ2 ）、マロン酸（８．０ｇ／ｍ2 、pH２．５）およ
びモリブデン酸アンモニウム（０．４ｇ／ｍ2 ）も前記
ＡＡＭ層に入れてコートした。硫酸バリウムの展開層
を、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）の下層の
上にコートした。硫酸バリウムの展開層を有するこの要
素の構造を以下に示す。ブロモピロガロールレッドの要素 展開層 硫酸バリウム ─────────────────────────────────── 下層 ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド） ─────────────────────────────────── ポリ（アクリルアミド−コ−Ｎ−（３−アセトアセト アミドプロピル）メタクリルアミド） ブロモピロガロールレッド 試薬層 マロン酸 モリブデン酸アンモニウム シュウ酸カリウム ビスビニルスルホニルメチルエーテル（ＢＶＳＭＥ） ─────────────────────────────────── Ｅｓｔａｒベース ─────────────────────────────────── ブロモピロガロール要素を、ピロカテコールおよびピロ
ガロールレッドの指示薬色素を含有する要素について先
に述べたのと同様にして評価した。ブロモピロガロール
（ｎ＝６）要素を評価して得たデータを表３に示す。
【００４７】 表３ ＨＳＡ（mg／dL） ＜Ｄｒ＞ ％ＣＶ １０ １．４８２ ８６．１ ５０ １．４８７ ２０．６ １００ １．５４７ １１．３ ３００ １．６６０ ２．６ アルブミンの濃度範囲によるＤｒの変化は０．１７８で
あるから、ピロカテコールバイオレットの要素より検出
感度が低い。その％ＣＶは大きく、反復精度が有意に低
いことを示している。実施例４ ガレイン ガレインを、硫酸バリウムの展開層に０．１2 ｇ／ｍ2
入れてコートした。界面活性剤のＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１
６５（０．２ｇ／ｍ2 ）、マロン酸（８．０ｇ／ｍ2 、
pH２．５）およびシュウ酸（２．５ｇ／ｍ2 ）を、分子
組成がポリ（アクリルアミド−コ−Ｎ−ビニル−２−ピ
ロリドン）（５０：５０重量比）で以後重合体ＡＶＰと
呼ぶ共重合体（１０．０ｇ／ｍ2 ）中に入れてコートし
て緩衝剤層を形成させた。モリブデン酸アンモニウム
（０．９０ｇ／ｍ2 ）および界面活性剤のＴＲＩＴＯＮ
Ｘ−１００（１ｇ／ｍ2 ）を、色素に加えて、硫酸バ
リウム展開層に入れてコートした。その要素の構造を以
下に示す。ガレインの要素 硫酸バリウム 展開層 ガレイン モリブデン酸アンモニウム ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１００ ───────────────────────────────── 下層 ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド） ───────────────────────────────── ポリ（アクリルアミド−コ−Ｎ−ビニル−２− ピロリドン）（５０：５０重量比） 緩衝剤層 マロン酸 ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１６５ シュウ酸 ───────────────────────────────── Ｅｓｔａｒ支持体 ───────────────────────────────── 上記ガレインの要素を他の要素について先に述べたのと
同様にして評価し（ｎ＝６）、Ｄｒを５５０nmで測定し
た。測定結果を以下の表４に示す。
あるから、ピロカテコールバイオレットの要素より検出
感度が低い。その％ＣＶは大きく、反復精度が有意に低
いことを示している。実施例４ ガレイン ガレインを、硫酸バリウムの展開層に０．１2 ｇ／ｍ2
入れてコートした。界面活性剤のＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１
６５（０．２ｇ／ｍ2 ）、マロン酸（８．０ｇ／ｍ2 、
pH２．５）およびシュウ酸（２．５ｇ／ｍ2 ）を、分子
組成がポリ（アクリルアミド−コ−Ｎ−ビニル−２−ピ
ロリドン）（５０：５０重量比）で以後重合体ＡＶＰと
呼ぶ共重合体（１０．０ｇ／ｍ2 ）中に入れてコートし
て緩衝剤層を形成させた。モリブデン酸アンモニウム
（０．９０ｇ／ｍ2 ）および界面活性剤のＴＲＩＴＯＮ
Ｘ−１００（１ｇ／ｍ2 ）を、色素に加えて、硫酸バ
リウム展開層に入れてコートした。その要素の構造を以
下に示す。ガレインの要素 硫酸バリウム 展開層 ガレイン モリブデン酸アンモニウム ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１００ ───────────────────────────────── 下層 ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド） ───────────────────────────────── ポリ（アクリルアミド−コ−Ｎ−ビニル−２− ピロリドン）（５０：５０重量比） 緩衝剤層 マロン酸 ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１６５ シュウ酸 ───────────────────────────────── Ｅｓｔａｒ支持体 ───────────────────────────────── 上記ガレインの要素を他の要素について先に述べたのと
同様にして評価し（ｎ＝６）、Ｄｒを５５０nmで測定し
た。測定結果を以下の表４に示す。
【００４８】 表４ ＨＳＡ（mg／dL） ＜Ｄｒ＞ ％ＣＶ １０ ０．５４１ ８５．７ ５０ ０．５６９ ２０．３ １００ ０．５６５ ９３．１ ３００ ０．５８０ １９．５ アルブミンの濃度範囲によるＤｒの変化は０．０３９で
あり、ピロカテコールバイオレット要素と比べて検出感
度はかなり低下している。％ＣＶは非常に大きく、反復
精度が有意に低いことを示している。
あり、ピロカテコールバイオレット要素と比べて検出感
度はかなり低下している。％ＣＶは非常に大きく、反復
精度が有意に低いことを示している。
【００４９】この実施例では、好ましい色素のピロカテ
コールバイオレットおよびモリブデン酸アンモニウムを
含有する乾式分析要素を用いて、異なるタイプのタンパ
ク質を測定する際の試薬層の異なる重合体ビヒクルの効
果を試験した。この実験で比較した重合体は、ポリＡ
（重量平均分子量が約１２０，０００ダルトン）、ポリ
（アクリルアミド−コ−Ｎ−ビニル−２−ピロリドン）
（５０／５０重量比）（重合体ＡＶＰ）および分子組成
がポリ（アクリルアミド−コ−アクリル酸）（９０／１
０重量比）（以後重合体ＰＡＡと呼ぶ）である。展開層
は、すべての場合、前記米国特許第３，９９２，１５６
号に記載されているのと同じ硫酸バリウムであった。こ
れらの重合体は同じ乾燥被覆量（１２ｇ／ｍ2 ）でコー
トした。タンパク質を含有する溶液は、ＩｇＧ、レチノ
ール結合タンパク質およびκ軽鎖を含む主要な精製ヒト
タンパク質の既知重量を、０．１５Ｍ塩化ナトリウムを
含有する水溶液の既知容積に添加することによって調製
した。上記諸要素は、さきに述べたのと同様にスライド
に取り付けた。検定法の校正は、精製ヒトアルブミンを
含有する溶液（以後、校正液と呼ぶ）を使って実施し
た。試験タンパク質を１００mg／dL含有する各溶液の１
０μｌずつを、別個の乾燥分析（スライド）要素の上
に、個々にスポットした。上記スライドを３７℃で５分
間インキュベートした後、６７０nmでの反射濃度を測定
した。試料中の全タンパク質のレベルを、測定した反射
濃度および上記校正液を用いた検定法校正によって算出
した。結果を表５に示す。
コールバイオレットおよびモリブデン酸アンモニウムを
含有する乾式分析要素を用いて、異なるタイプのタンパ
ク質を測定する際の試薬層の異なる重合体ビヒクルの効
果を試験した。この実験で比較した重合体は、ポリＡ
（重量平均分子量が約１２０，０００ダルトン）、ポリ
（アクリルアミド−コ−Ｎ−ビニル−２−ピロリドン）
（５０／５０重量比）（重合体ＡＶＰ）および分子組成
がポリ（アクリルアミド−コ−アクリル酸）（９０／１
０重量比）（以後重合体ＰＡＡと呼ぶ）である。展開層
は、すべての場合、前記米国特許第３，９９２，１５６
号に記載されているのと同じ硫酸バリウムであった。こ
れらの重合体は同じ乾燥被覆量（１２ｇ／ｍ2 ）でコー
トした。タンパク質を含有する溶液は、ＩｇＧ、レチノ
ール結合タンパク質およびκ軽鎖を含む主要な精製ヒト
タンパク質の既知重量を、０．１５Ｍ塩化ナトリウムを
含有する水溶液の既知容積に添加することによって調製
した。上記諸要素は、さきに述べたのと同様にスライド
に取り付けた。検定法の校正は、精製ヒトアルブミンを
含有する溶液（以後、校正液と呼ぶ）を使って実施し
た。試験タンパク質を１００mg／dL含有する各溶液の１
０μｌずつを、別個の乾燥分析（スライド）要素の上
に、個々にスポットした。上記スライドを３７℃で５分
間インキュベートした後、６７０nmでの反射濃度を測定
した。試料中の全タンパク質のレベルを、測定した反射
濃度および上記校正液を用いた検定法校正によって算出
した。結果を表５に示す。
【００５０】 表５ タンパク質の反応性に対する重合体のタイプの効果 ─────────────────────────────────── 重合体 アルブ κ軽鎖 λ軽鎖 ＩｇＧ レチノール結 α1 ミクロ ミン 合タンパク質 グロブリン mg／dL mg／dL mg／dL mg／dL mg／dL mg／dL ─────────────────────────────────── ＡＶＰ １００ ３３ ３３ ６４ ６２ ４４ ポリＡ １００ ４４ ５２ ７３ ７３ ６６ ＰＡＡ １００ N.D. ** ３４ ５９ N.D. N.D. ─────────────────────────────────── ** 実施せず 表５の結果は、重合体が、ピロカテコールおよびモリブ
デン酸イオンのタンパク質類との相互作用に影響するこ
とを示している。特に、ポリＡは、タンパク質のタイプ
間で観察されるＤｒの差、したがって、ヒトアルブミン
を含有する流体を使用する校正で測定される推定タンパ
ク質濃度の差を小さくする作用がある。この作用によっ
て、タンパク質の濃度推定値が、流体に加えられたタン
パク質の量に基づいて期待される１００mg／dLに近くな
った。最良の性能、すなわち、測定されるシグナルの、
試験されるタンパク質のタイプに対する依存性が最小で
あるという性能を、ポリＡが提供したことは明らかであ
る。実施例６ この実施例では、重炭酸塩の妨害作用に対するグリコー
ル酸の効果を評価した。グリコール酸と、ポリＡ（１２
ｇ／ｍ2 ）も含有する試薬層に入れてプレコートした。
グリコール酸は、表６に示すレベルで試薬層に入れてコ
ートした。プールしたヒトの尿の試料に、重炭酸ナトリ
ウムを添加して、重炭酸塩の最終濃度を１００mMまたは
２００mMにした（両方の場合の最終のプールされた尿試
料のpHは８．５）。そのpHは、調節してこの最終測定値
にしたのではなく、重炭酸塩を添加した後に得られた測
定値である。未処理尿のプール対照物の全タンパク質は
１８mg／dLであった〔米国ペンシルベニア州 １９３４
１ エクストン所在の Merck Biotrol Diagnosticsから
入手可能な、ピロガロールレッド／モリブデン酸アンモ
ニウム色素結合法を用いる溶液ベース検定法である、全
タンパク質測定用ＢＩＯＴＲＯＬ（登録商標）キット
（カタログ番号：Ａ０１２１７Ｕ）を使用して測定し
た〕。反射濃度は上記実施例５と同様にして測定した。
そして全タンパク質濃度は、実施例５と同じ校正液のヒ
トアルブミン含有液体を用いて検定要素の校正を行った
後に測定したＤｒを利用して推定した。対照の尿素につ
いて得られたタンパク質推定値を、重炭酸塩で処理した
尿試料に対して得たタンパク質推定値から差引いた。デ
ータを表６に示す。
デン酸イオンのタンパク質類との相互作用に影響するこ
とを示している。特に、ポリＡは、タンパク質のタイプ
間で観察されるＤｒの差、したがって、ヒトアルブミン
を含有する流体を使用する校正で測定される推定タンパ
ク質濃度の差を小さくする作用がある。この作用によっ
て、タンパク質の濃度推定値が、流体に加えられたタン
パク質の量に基づいて期待される１００mg／dLに近くな
った。最良の性能、すなわち、測定されるシグナルの、
試験されるタンパク質のタイプに対する依存性が最小で
あるという性能を、ポリＡが提供したことは明らかであ
る。実施例６ この実施例では、重炭酸塩の妨害作用に対するグリコー
ル酸の効果を評価した。グリコール酸と、ポリＡ（１２
ｇ／ｍ2 ）も含有する試薬層に入れてプレコートした。
グリコール酸は、表６に示すレベルで試薬層に入れてコ
ートした。プールしたヒトの尿の試料に、重炭酸ナトリ
ウムを添加して、重炭酸塩の最終濃度を１００mMまたは
２００mMにした（両方の場合の最終のプールされた尿試
料のpHは８．５）。そのpHは、調節してこの最終測定値
にしたのではなく、重炭酸塩を添加した後に得られた測
定値である。未処理尿のプール対照物の全タンパク質は
１８mg／dLであった〔米国ペンシルベニア州 １９３４
１ エクストン所在の Merck Biotrol Diagnosticsから
入手可能な、ピロガロールレッド／モリブデン酸アンモ
ニウム色素結合法を用いる溶液ベース検定法である、全
タンパク質測定用ＢＩＯＴＲＯＬ（登録商標）キット
（カタログ番号：Ａ０１２１７Ｕ）を使用して測定し
た〕。反射濃度は上記実施例５と同様にして測定した。
そして全タンパク質濃度は、実施例５と同じ校正液のヒ
トアルブミン含有液体を用いて検定要素の校正を行った
後に測定したＤｒを利用して推定した。対照の尿素につ
いて得られたタンパク質推定値を、重炭酸塩で処理した
尿試料に対して得たタンパク質推定値から差引いた。デ
ータを表６に示す。
【００５１】 表６ 重炭酸塩の妨害に対するグリコール酸の効果 重炭酸塩で処理した対照と重炭酸なしの対照との間のタンパク質濃度の差 グリコール酸 重炭酸塩 ｇ／ｍ2 １００mM ２００mM ０ ３５ １１０ ０．１２５ ２２ ７７ ０．２５ １３ ５４ ０．３７５ ８ ３０ ０．５ ４ ２０ ０．７５ N.D. １３ １．０ N.D. −２ （N.D.＝測定せず） 重炭酸塩は、タンパク質に似た光学的シグナルを出す作
用がある。例えば、グリコール酸が存在しないと、重炭
酸塩の濃度が２００mMの尿試料の推定タンパク質濃度
は、実際のレベルより約１１０mg／dL高い。表６に示す
ように、グリコール酸は、重炭酸塩による作用を劇的に
低下させる。グリコール酸（または、先に述べたような
他の適切なヒドロキシカルボン酸類）は、実施例６のよ
うに乾式分析要素に直接添加してもよく、または、代わ
りに、乾式分析要素を試料と接触させる前に試料に添加
してもよい。要素に入れてコートされるグリコール酸の
有用な濃度範囲は、約０．１２５〜２．０ｇ／ｍ2 であ
る。好ましくは、その範囲は０．１２５〜１．５ｇ／ｍ
2 であり、より好ましい範囲は０．２５〜１．２５ｇ／
ｍ2 である。好ましい乾式分析要素の構造を以下に示
す。 展開層 硫酸バリウム ─────────────────────────────────── 下層 ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド） ─────────────────────────────────── ポリアクリルアミド（ポリＡ） グリコール酸 ピロカテコールバイオレット色素 試薬／緩衝剤層 モリブデン酸アンモニウム シュウ酸カリウム Ｚｏｎｙｌ−ＦＳＮ、界面活性剤 マロン酸、緩衝剤、pH＝２．５ ─────────────────────────────────── 支持体 ─────────────────────────────────── 上記実験と実施例はこの発明の範囲と精神を例示するた
めに与えられるものである。これらの実施態様と実施例
によって、他の実施態様と実施例は、当業技術者にとっ
て明らかになるであろう。これらの他の実施態様と実施
例は、この発明の考慮範囲内にあり、したがって、この
発明は添付した特許請求によってのみ限定される。
用がある。例えば、グリコール酸が存在しないと、重炭
酸塩の濃度が２００mMの尿試料の推定タンパク質濃度
は、実際のレベルより約１１０mg／dL高い。表６に示す
ように、グリコール酸は、重炭酸塩による作用を劇的に
低下させる。グリコール酸（または、先に述べたような
他の適切なヒドロキシカルボン酸類）は、実施例６のよ
うに乾式分析要素に直接添加してもよく、または、代わ
りに、乾式分析要素を試料と接触させる前に試料に添加
してもよい。要素に入れてコートされるグリコール酸の
有用な濃度範囲は、約０．１２５〜２．０ｇ／ｍ2 であ
る。好ましくは、その範囲は０．１２５〜１．５ｇ／ｍ
2 であり、より好ましい範囲は０．２５〜１．２５ｇ／
ｍ2 である。好ましい乾式分析要素の構造を以下に示
す。 展開層 硫酸バリウム ─────────────────────────────────── 下層 ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド） ─────────────────────────────────── ポリアクリルアミド（ポリＡ） グリコール酸 ピロカテコールバイオレット色素 試薬／緩衝剤層 モリブデン酸アンモニウム シュウ酸カリウム Ｚｏｎｙｌ−ＦＳＮ、界面活性剤 マロン酸、緩衝剤、pH＝２．５ ─────────────────────────────────── 支持体 ─────────────────────────────────── 上記実験と実施例はこの発明の範囲と精神を例示するた
めに与えられるものである。これらの実施態様と実施例
によって、他の実施態様と実施例は、当業技術者にとっ
て明らかになるであろう。これらの他の実施態様と実施
例は、この発明の考慮範囲内にあり、したがって、この
発明は添付した特許請求によってのみ限定される。
フロントページの続き (72)発明者 デービッド ビー．ラタート アメリカ合衆国，ニューヨーク 14617, ロチェスター，シナバー ロード 285 (72)発明者 ジョン シー．モック アメリカ合衆国，ニューヨーク 14610, ロチェスター，クロイドン ロード 184 (72)発明者 リチャード シー．サットン アメリカ合衆国，ニューヨーク 14617− 5216，ロチェスター，トワイライト ドラ イブ 24 (72)発明者 ウェイン ウェーバー アメリカ合衆国，ニューヨーク 14472, メンドン，パートリッジ ヒル ロード 38 (72)発明者 ロバート ウィンターコーン アメリカ合衆国，ニューヨーク 14609, ロチェスター，ウエストチェスター アベ ニュ 330 (72)発明者 ジェームス スカファー アメリカ合衆国，ニューヨーク 14526, ペンフィールド，ジャクソン エクストラ ロード 49
Claims (10)
- 【請求項１】 タンパク質の測定に使用する乾式分析要
素であって； （Ａ）多孔質展開層、 （Ｂ）（ｉ）タンパク質およびモリブデン酸イオンと反
応してそのスペクトル吸収または反射濃度を変えること
ができる色素、 （ii）モリブデン酸塩、および （iii ）アクリルアミドを含む重合体、を含有する一つ
以上の追加の層（但し、前記色素、前記モリブデン酸塩
および前記アクリルアミド含有重合体は、同じ層中にと
もに存在しているか、または前記要素の別個の層に任意
に組み合わされてもしくは個々に存在していてもよ
い）；ならびに （Ｃ）支持体を備えてなる乾式分析要素。 - 【請求項２】 前記色素が、ピロカテコールバイオレッ
ト、ピロガロールレッド、ブロモピロガロールレッドお
よびガレインからなる群から選択される請求項１に記載
の乾式分析要素。 - 【請求項３】 前記色素がピロカテコールバイオレット
である請求項２に記載の乾式分析要素。 - 【請求項４】 前記モリブデン酸塩がモリブデン酸アン
モニウムである請求項１に記載の乾式分析要素。 - 【請求項５】 前記アクリルアミド含有重合体が、ポリ
Ａ、重合体ＡＶＰ、重合体ＰＡＡおよび重合体ＡＡＭか
らなる群から選択される請求項１に記載の乾式分析要
素。 - 【請求項６】 前記色素がピロカテコールバイオレット
であり、前記モリブデン酸塩がモリブデン酸アンモニウ
ムであり、そして前記アクリルアミド含有重合体が、１
００，０００〜１５０，０００ダルトンの範囲の分子量
を有するポリＡである請求項１に記載の乾式分析要素。 - 【請求項７】 前記多孔質展開層が硫酸バリウムを含む
請求項６に記載の乾式分析要素。 - 【請求項８】 （Ａ）タンパク質を含有していると推測
される流体を、下記一般構造式： 【化１】 （式中、Ｒ1 とＲ2 は独立してＨ，−ＣＨ3 ，−ＣＨ2
ＣＨ3 または−ＣＨ2 ＯＨであり、そしてＭはＨまたは
金属もしくは非金属の陽電荷の対イオンである）で表さ
れるヒドロキシカルボン酸と混合し； （Ｂ）前記ヒドロキシカルボン酸を含有しかつタンパク
質を含有していると推測される前記流体を、 （ａ）多孔質展開層、 （ｂ）（ｉ）タンパク質およびモリブデン酸イオンと反
応してそのスペクトル吸収または反射濃度を変えること
ができる色素、 （ii）モリブデン酸塩、および （iii ）アクリルアミドを含む重合体、を含有し、前記
多孔質展開層と流体接触する一つ以上の追加の層（但
し、前記色素、前記モリブデン酸塩および前記アクリル
アミド含有重合体は、同じ層中にともに存在している
か、または前記要素の別個の層に任意に組み合わされて
もしくは個々に存在していてもよい）、ならびに （ｃ）支持体、を含有してなる乾式分析要素と接触さ
せ；次いで （Ｃ）色素のスペクトル吸収または反射濃度の変化をタ
ンパク質の尺度として測定する；ことを含んでなるタン
パク質の測定方法。 - 【請求項９】 タンパク質の測定に使用する乾式分析要
素であって、 （Ａ）多孔質展開層； （Ｂ）（ｉ）タンパク質およびモリブデン酸イオンと反
応してそのスペクトル吸収または反射濃度を変えること
ができる色素、 （ii）モリブデン酸塩、 （iii ）アクリルアミドを含む重合体、および （iv）下記一般構造式： 【化２】 （式中、Ｒ1 とＲ2 は独立してＨ，−ＣＨ3 ，−ＣＨ2
ＣＨ3 または−ＣＨ2 ＯＨでありそしてＭはＨまたは金
属もしくは非金属の陽電荷の対イオンである）で表され
るヒドロキシカルボン酸、を含有し、前記多孔質展開層
と流体接触する一つ以上の追加の層（但し前記色素、前
記モリブデン酸塩、前記アクリルアミド含有重合体およ
び前記ヒドロキシカルボン酸は、同じ層中にともに存在
しているか、または前記要素の別個の層に任意に組み合
わされてもしくは個々に存在していてもよい）；ならび
に （Ｃ）支持体；を含んでなる乾式分析要素。 - 【請求項１０】 （Ａ）タンパク質を含有していると推
測される流体試料を、 （ａ）多孔質展開層、 （ｂ）（ｉ）タンパク質およびモリブデン酸イオンと反
応してそのスペクトル吸収または反射濃度を変えること
ができる色素、 （ii）モリブデン酸塩、 （iii ）アクリルアミドを含む重合体、および （iv）下記一般構造式： 【化３】 （式中、Ｒ1 とＲ2 は独立してＨ，−ＣＨ3 ，−ＣＨ2
ＣＨ3 または−ＣＨ2 ＯＨであり、そしてＭはＨまたは
金属もしくは非金属の陽電荷の対イオンである）で表さ
れるヒドロキシカルボン酸を含有し、前記多孔質展開層
と流体接触する一つ以上の追加の層（但し、前記色素、
前記モリブデン酸塩、前記アクリルアミド含有重合体お
よび前記ヒドロキシカルボン酸は、同じ層中にともに存
在しているか、または前記要素の別個の層に任意に組み
合わされてもしくは個々に存在していてもよい）、なら
びに （ｃ）支持体、を含んでなる乾式分析要素と接触させ；
次いで （Ｂ）色素のスペクトル吸収または反射濃度の変化をタ
ンパク質の尺度として測定する；ことを含んでなるタン
パク質の測定方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/065930 | 1998-04-24 | ||
| US09/065,930 US6046052A (en) | 1997-05-06 | 1998-04-24 | Dry analytical elements for the determination of protein |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11337547A true JPH11337547A (ja) | 1999-12-10 |
Family
ID=22066103
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11114537A Pending JPH11337547A (ja) | 1998-04-24 | 1999-04-22 | タンパク質測定用乾式分析要素およびタンパク質測定法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6046052A (ja) |
| EP (1) | EP0952451A1 (ja) |
| JP (1) | JPH11337547A (ja) |
| KR (1) | KR19990083443A (ja) |
| AU (1) | AU753135B2 (ja) |
| CA (1) | CA2269251A1 (ja) |
| NO (1) | NO991946L (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009513977A (ja) * | 2005-10-26 | 2009-04-02 | ゼネラル・エレクトリック・カンパニイ | 微小濃度の化学種を測定するセンサ用材料組成物及びセンサの使用方法 |
| WO2024154593A1 (ja) * | 2023-01-17 | 2024-07-25 | 日東紡績株式会社 | 蛋白質を定量する方法及び試薬 |
Families Citing this family (7)
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|---|---|---|---|---|
| JP4214271B2 (ja) | 2002-10-15 | 2009-01-28 | アークレイ株式会社 | クレアチニン測定用試験片 |
| US20050032141A1 (en) * | 2003-07-17 | 2005-02-10 | Dimagno Theodore John | Dry analytical element for high-density lipoprotein cholesterol quantification |
| US20070141597A1 (en) * | 2005-10-25 | 2007-06-21 | Harmon H J | Biomimetic Biodetector of Toxins, Viruses, Bacteria, and Biological Factors |
| US7883898B2 (en) * | 2007-05-07 | 2011-02-08 | General Electric Company | Method and apparatus for measuring pH of low alkalinity solutions |
| US7745153B2 (en) | 2008-02-06 | 2010-06-29 | Pierce Biotechnology, Inc. | Pyrocatechol violet-metal protein assay |
| US20150305612A1 (en) | 2014-04-23 | 2015-10-29 | Mark Hunter | Apparatuses and methods for registering a real-time image feed from an imaging device to a steerable catheter |
| BR112020012916A2 (pt) | 2018-01-09 | 2020-12-08 | Idexx Laboratories, Inc. | Métodos para medição de analito e/ou proteína em amostras biológicas |
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|---|---|---|---|---|
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| US5149416A (en) * | 1989-04-18 | 1992-09-22 | Eastman Kodak Company | Polymeric electrophoresis media |
| US5399498A (en) * | 1993-12-17 | 1995-03-21 | Miles Inc. | Reduction of background interferences in the molybdate-dye protein assay |
| CA2236350C (en) * | 1997-05-06 | 2007-05-15 | Thomas Arter | Dry analytical elements for the determination of protein |
-
1998
- 1998-04-24 US US09/065,930 patent/US6046052A/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-04-16 CA CA002269251A patent/CA2269251A1/en not_active Abandoned
- 1999-04-22 JP JP11114537A patent/JPH11337547A/ja active Pending
- 1999-04-23 AU AU23934/99A patent/AU753135B2/en not_active Ceased
- 1999-04-23 EP EP99303166A patent/EP0952451A1/en not_active Withdrawn
- 1999-04-23 KR KR1019990014634A patent/KR19990083443A/ko not_active Application Discontinuation
- 1999-04-23 NO NO991946A patent/NO991946L/no not_active Application Discontinuation
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009513977A (ja) * | 2005-10-26 | 2009-04-02 | ゼネラル・エレクトリック・カンパニイ | 微小濃度の化学種を測定するセンサ用材料組成物及びセンサの使用方法 |
| WO2024154593A1 (ja) * | 2023-01-17 | 2024-07-25 | 日東紡績株式会社 | 蛋白質を定量する方法及び試薬 |
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|---|---|
| AU753135B2 (en) | 2002-10-10 |
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