JPH0959303A - Biocompatible hyaluronic acid gel and its application - Google Patents

Biocompatible hyaluronic acid gel and its application

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JPH0959303A
JPH0959303A JP7234598A JP23459895A JPH0959303A JP H0959303 A JPH0959303 A JP H0959303A JP 7234598 A JP7234598 A JP 7234598A JP 23459895 A JP23459895 A JP 23459895A JP H0959303 A JPH0959303 A JP H0959303A
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gel
hyaluronic acid
example
crosslinking agent
di
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JP7234598A
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Inventor
Yuko Kiyota
Norio Ueno
則夫 上野
優子 清田
Original Assignee
Shiseido Co Ltd
株式会社資生堂
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Publication date
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To obtain a water-insoluble hyaluronic acid gel prepared by the condensation reaction of hyaluronic acid with a crosslinking agent such as dihydrazine, almost free from cytotoxicity, expressing appropriate elasticity, excellent in transparency, get stability and biocompatibility and suitable for vitreous body, etc. SOLUTION: This gel is prepared by the condensation reaction of hyaluronic acid with a crosslinking agent such as di(or bi)hydrazine or di(or bi)hydrazide such as succinic acid dihydrazide of formula I R is 4-8C alkylenedicarbonyl, a (substituted) bicyclic condensed-ring residue containing a six-membered heterocyclic ring group having two nitrogen atoms or formula II [X is a lower alkylene or SO2 ; (n)=0, 1]}.

Description

【発明の詳細な説明】 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【0001】 [0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、新規なヒアルロン酸ゲル及びその生体適合性材料としての用途に関する。 The present invention relates to relates to the use as a novel hyaluronic acid gel and biocompatible materials.

【0002】 [0002]

【従来の技術】ヒアルロン酸は、次式 BACKGROUND OF THE INVENTION hyaluronic acid, the following equation

【0003】 [0003]

【化3】 [Formula 3]

【0004】で表わされるβ−D−N−アセチルグルコサミンとβ−D−グルクロン酸が交互に結合してできた直鎖状の高分子多糖である。 [0004] is a beta-D-N-acetylglucosamine and beta-D-glucuronic acid linear with Deki bonded alternately polymeric polysaccharide represented by. ヒアルロン酸は哺乳動物の結合組織に多量に分布するほか、ニワトリのとさか、カイコの胃腔膜、連鎖球菌の莢膜などにも存在が知られている。 Hyaluronic acid addition distributed in large quantities connective tissue of a mammal, combs chicken, silkworm gastric luminal membrane, also exist such as the capsule of Streptococcus are known. 臍帯、関節液、硝子体等が抽出材料として用いられているほか、連鎖球菌の培養物からも精製物が調製されている。 Cord, synovial fluid, in addition to glass and the like is used as the extraction material, purified product is prepared from cultures of Streptococcus.

【0005】天然産のヒアルロン酸は、分子量について多分散性であるが、種及び臓器特異性をもたず、生体に移植または注入した場合であっても優れた生体適合性を示すことが知られている。 [0005] Hyaluronic acid naturally occurring is the polydispersity for molecular weight, species and no organ specificity, it is known that shows a biocompatibility excellent even when implanted or injected into the living body It is. さらに、生体に適用する場合のヒアルロン酸自体に随伴する短所、例えば、生体内滞留時間が比較的短いこと、などから多種多様なヒアルロン酸の化学修飾物も提案されている。 Moreover, disadvantages that accompany the hyaluronic acid itself in the case of applying to a living body, for example, in vivo residence time is relatively short, chemical modifications of a wide variety of hyaluronic acid have also been proposed, such as.

【0006】これらの代表的なものとしては、ジビニルスルホン、ビスエポキシド類、ホルムアルデヒド、ビスハロゲン化物等の二官能性試薬を架橋剤に使用して、得られた高膨潤性の架橋ヒアルロン酸ゲルを挙げることができる(米国特許第4,582,865号明細書、特公平6−37575号公報、特公平5−37575号公報参照)。 [0006] Typical of these are divinyl sulfone, bisepoxides such as formaldehyde, using a bifunctional reagent such as bis halide crosslinking agent, the highly swellable crosslinked hyaluronan gel obtained it can be mentioned (U.S. Patent No. 4,582,865, Kokoku 6-37575 discloses, see Japanese Patent Kokoku 5-37575).

【0007】また、主として、ドラッグデリバリーシステムの担体としての使用を意図するが、一定のカルボジイミドとヒアルロン酸との反応により安定なヒアルロン酸アシルウレアが製造できることも知られている(国際公開第45/02517号パンフレット参照)。 Further, mainly, but intended for use as a carrier for drug delivery systems it is also known to be produced a stable hyaluronic acid acylurea by reaction with certain carbodiimide and hyaluronic acid (WO 45/02517 see pamphlet). ところで、かかる反応系で活性化されたヒアルロン酸に求核性試薬(例えば、アミン類)を反応させることにより、水不溶性の生体適合性ゲルが製造できることも知られている(米国特許第4,937,270号明細書参照)が、反応条件次第では、アミン成分による分子間カップリング物は観察されないともいわれている(J.Kuo,等、 Meanwhile, activated nucleophile to hyaluronic acid in such a reaction system (e.g., amines) by reacting the water-insoluble biocompatible gels are also known to be produced (U.S. Pat. No. 4, see Pat 937,270) is, depending on the reaction conditions, intermolecular coupling thereof with the amine component is said to be not observed (J.Kuo, etc,
Bioconjugate Chem. Bioconjugate Chem. 1991 ,2, 1991, 2,
232−241)。 232-241). 後者の研究結果は、求核性試薬の不存在下で特定のカルボジイミドを用いてもヒアルロン酸の架橋生成物が得られるとの上記J. The latter findings, the J. of crosslinked products of hyaluronic acid may be used a specific carbodiimide in the absence of a nucleophilic reagent to obtain Kuo等の国際公開第93/07106号パンフレットに記載の発明に符合する。 Consistent to the invention described in WO 93/07106 pamphlet such as Kuo.

【0008】カルボジイミド類により活性化されたヒアルロン酸(オリゴマー)に求核性試薬として、コハク酸ジヒドラジド、アジピン酸ジヒドラジド又はスベリン酸ジヒドラジドを反応させた例が、T. [0008] As the nucleophilic reagent to the activated hyaluronic acid (oligomers) by carbodiimides, dihydrazide succinate, examples obtained by reacting an adipic acid dihydrazide or suberic acid dihydrazide, T. Pouyani Pouyani
等、BioconjugateChem. Etc., BioconjugateChem. 1994 1994,
5,339−347、に記載されている。 5,339-347, which is incorporated herein by reference. より具体的にはこの刊行物は、カルボジイミドの存在下でヒアルロン酸のオリゴ糖に大過剰(30モル倍)のジヒドラジドを反応させて、そのグルクロン酸部分へ側基(ペンダント)ヒドラジド基が結合された化合物、さらに側基ヒドラジド基を利用して一定のジスルホネート架橋剤で架橋したヒアルロン酸のヒドロゲルが得られることも公表している。 More specifically this publication, the oligosaccharide of hyaluronic acid in the presence of a carbodiimide is reacted with a dihydrazide of a large excess (30 times by mole), the side group (pendant) hydrazide group is bonded to the glucuronic acid moiety compounds, have also announced further that the hydrogel of hyaluronic acid crosslinked by utilizing the side groups hydrazide group at a constant disulfonate crosslinking agent are obtained. しかし、ジヒドラジド自体でヒアルロン酸を直接架橋できるか否かについては未載である。 However, for whether directly crosslink the hyaluronic acid in dihydrazide itself is placing un.

【0009】 [0009]

【発明が解決しようとする課題】本発明者らも、ヒアルロン酸自体の生体適合性材料としての使用について多角的に検討してた。 The present inventors have found 0005] Also, were multilateral examined for use as a biocompatible material itself hyaluronic acid. その中で興味深いものとしては、最新の顕微鏡手術器具の進歩と新しい考え方により、手術が可能になってきた重篤な網膜剥離に対する硝子体手術への適用が挙げられる。 As interesting in this, the new ideas and progress of modern microsurgical instrument, application to vitreous surgery and the like for the surgery can since becoming a severe retinal detachment.

【0010】元来、ヒアルロン酸は硝子体液中に含まれるものであるが、硝子体腔での滞留時間が短いため、重篤な増殖性網膜症などの硝子体手術後の硝子体腔への適用は満足できる結果をもたらさなかった。 [0010] Originally, although hyaluronic acid is included in the vitreous humor, shorter residence time in the vitreous cavity, the application of the vitreous cavity after vitreous surgery such severe proliferative retinopathy It did not lead to satisfactory results. その他、多種多様な高分子(天然物又は人工物)が網膜硝子体手術に用いられてきたが十分に満足できるものは未だ開発されていない。 Other, diverse polymer (natural or artificial material) is has not yet been developed which has been used in vitreoretinal surgery fully satisfactory.

【0011】すなわち、硝子体置換物として用いるには、材料が (1) 透明であり、屈折率は水に近似し、そして比重は水と同等か若干大きいこと、(2) 無菌、非抗原性、無毒性であること、(3) 剥離した網膜を複位させるのに充分な期間(2〜3箇月)硝子体内に存在できるだけの滞留性があること、及び(4) 手術中に切開部から注入、或いは移植できること、の要件を少なくとも具備する必要があるからである。 [0011] That is, in the use as a vitreous replacement, material is (1) a transparent, the refractive index approximate to water, and specific gravity is greater or slightly equivalent to the water, (2) a sterile, non-antigenic it is nontoxic, from (3) peeled sufficient time to cause the retina to be Fukui (2-3 months) that there is a retention of only be present in the vitreous, and (4) incision during surgery injection, or can be implanted, it is necessary to comprise at least the requirements.

【0012】これらの要件を具備する材料は、その他の生体での用途、例えば、治療用及び使い捨てコンタクトレンズ、人工乳房、人工関節の摺動部、並びに人工皮膚等へも適用可能であろう。 [0012] Materials comprising these requirements, in other biological applications, e.g., therapeutic and disposable contact lenses, artificial breast, the sliding portion of the artificial joint, and would also be applicable to the artificial skin and the like.

【0013】従って、本発明の目的は、上記要件を具備する生体適合性材料を提供することにある。 [0013] Therefore, an object of the present invention is to provide a biocompatible material comprising the above requirements.

【0014】 [0014]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的を達成するために、ヒアルロン酸の各種化学修飾を検討してきた。 Means for Solving the Problems The present inventors have found that in order to achieve the above object, have studied various chemical modifications of hyaluronic acid. その結果、上述のJ. As a result, the above-mentioned J. Kuo等、Bioco Kuo, etc., Bioco
njugate Chem. njugate Chem. 1991 ,2,232− 1991, 2,232-
241には、ジカルボジイミドの存在下でのヒアルロン酸とアミン類との反応ではアミド化合物(ヒアルロン酸のカルボキシル基とアミノ基との縮合反応生成物)が得られていないにもかかわらず、アミン類に代えて特定のジ(もしくはビ)ヒドラジン又はジ(もしくはビ)ヒドラジドを使用すると、ヒアルロン酸のゲルが効率よく得られることを本発明者らは見い出した。 The 241, even though not amide compound by the reaction of hyaluronic acid with amines in the presence of di carbodiimide (condensation reaction product of a carboxyl group and an amino group of hyaluronic acid) is obtained, amines with particular di (or bi) hydrazine or di (or bi) hydrazide in place of, the present inventors that the hyaluronic acid gel is obtained efficiently found. さらに、こうして得られたゲルは、上記硝子体置換物に要求される性質をほぼ具備することも確認された。 Further, thus obtained gel, it was confirmed that substantially includes the properties required for the vitreous body substitute.

【0015】従って、本発明によれば、ヒアルロン酸と架橋剤ジ(もしくはビ)ヒドラジン又はジ(もしくはビ)ヒドラジドとの縮合反応によって形成された水不溶性ヒアルロン酸ゲルが提供される。 [0015] Therefore, according to the present invention, the hyaluronic acid crosslinking agent di (or bi) hydrazine or di (or bi) formed by the condensation reaction of hydrazide water-insoluble hyaluronic acid gel is provided. また、そのようなゲルを含んでなる生体適合性組成物、特に、硝子体で使用できる組成物も提供される。 Further, the biocompatible composition comprising such a gel, in particular, compositions which can be used in glass are also provided.

【0016】 [0016]

【発明の具体的な態様】本発明によれば、ヒアルロン酸(以下「HA」と略記する場合もある)は、天然産のH According to specific embodiments of the present invention, (sometimes hereinafter abbreviated as "HA") hyaluronic acid, a naturally occurring H
Aであれば、その起源を問うことなく使用できるので、 If A, because it can be used without having to ask its origin,
その分子量は約6×10 4 〜約1.2×10 7ダルトンの範囲内のものであれば、いずれも使用することができる。 If the molecular weight is within the scope of the about 6 × 10 4 ~ about 1.2 × 10 7 daltons, either can be used. また、上記範囲内の分子量をもつものであれば、より高分子量のものから、加水分解処理等を介して得られた低分子量のものも同様に使用できる。 Further, as long as it has a molecular weight in the range from more that of high molecular weight, can be used as well as low molecular weight obtained through a hydrolysis treatment or the like. なお、本発明にいうヒアルロン酸(又はHA)は、そのアルカリ金属、 Incidentally, hyaluronic acid according to the present invention (or HA) is an alkali metal,
例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、の塩をも包含する概念で使用していることを理解されたい。 For example, it is to be understood as sodium, potassium, lithium, that are using the concept also encompasses salts.

【0017】HAを架橋するのに使用する架橋剤は、本発明の目的に沿うゲルを調製できる二官能性のジ(もしくはビ)ヒドラジン又はジ(もしくはビ)ヒドラジドであればその種類を問わないが、一般には、2個のヒドラジノ基が3個以上の原子により一定の間隔を保っていることが必要である。 The crosslinking agent used to crosslink the HA is not of any type as long as the bifunctional di (or bi) hydrazine or di (or bi) hydrazide gel along with the purpose can be prepared according to the present invention but, generally, it is necessary that the two hydrazino groups are kept a predetermined distance by at least three atoms. 具体的には、次式 H 2 NNH−R−NHNH 2 (式中、RはC 4-8のアルキレンジカルボニル又はヘテロ原子として窒素原子2個を有する6員の複素環式基を含む置換されていてもよい二環式縮合環残基であるか、 Specifically, in the formula H 2 NNH-R-NHNH 2 ( wherein, R is substituted includes a 6-membered heterocyclic group having two nitrogen atoms as the alkylene carbonyl or heteroatom C 4-8 or also may bicyclic fused ring residue optionally,
置換されている場合の置換基は、メチル、エチル等の低級アルキル基、フッ素、塩素等のハロゲン、スルホン酸基及びフェニル基からなる群より選ばれるか、或いは式 Or substituent when it is substituted, methyl, lower alkyl groups ethyl and the like, fluorine, halogens such as chlorine, selected from the group consisting of a sulfonic acid group and a phenyl group, or the formula

【0018】 [0018]

【化4】 [Of 4]

【0019】ここで、Xはメチレン、エチレン及びプロピレンからなる群より選ばれる低級アルキレン又はスルホニルであり、nは0又は整数1であり、ベンゼン環は上記置換基によって置換されていてもよい2価の基又は単結合である)で示されるジ(もしくはビ)ヒドラジン又はジ(もしくはビ)ヒドラジドである。 [0019] Here, X is lower alkylene or a sulfonyl selected from the group consisting of methylene, ethylene and propylene, n is 0 or an integer 1, the benzene ring of the divalent may also be substituted by the substituents di (or represented by a group or a single bond) bi) is hydrazine or di (or bi) hydrazide.

【0020】限定されるものでないが、より具体的には、コハク酸ジヒドラジド、アジピン酸ジヒドラジド及びスベリン酸ジヒドラジド、並びに式 [0020] Although not limited to, more specifically, succinic acid dihydrazide, adipic acid dihydrazide and suberic acid dihydrazide, and the formula

【0021】 [0021]

【化5】 [Of 5]

【0022】のジ(もしくはビ)ヒドラジンを挙げることができる。 [0022] may be mentioned of di (or micro) hydrazine.

【0023】これらのうち、硝子体置換物に使用するには、上記(1)〜(4)の性質に加え、生理食塩液での膨潤性が低いことも要求されることから、このような膨潤性が一般的に低いゲルを生成する上記ヒドラジン類によって架橋されたゲルが好ましい。 [0023] Among these, for use in vitreous replacement, in addition to the properties of (1) to (4), since the swellable in a physiological saline solution is also required low that, like this swelling is crosslinked by the hydrazines to produce a generally lower gel gel is preferred.

【0024】本発明のゲルは、上記HAのβ−D−グルクロン酸に由来するカルボキシル基と架橋剤に由来するヒドラジノ基との脱水縮合反応により製造されうるものである。 The gel of the present invention are those which can be prepared by dehydration condensation reaction between hydrazino group derived from the crosslinking agent with a carboxyl group derived from the beta-D-glucuronic acid of the HA. このような脱水縮合反応を起こし、目的のゲル化物を得ることができる反応様式であれば、どのような反応様式に基づいて得られたものでも本発明のゲルに包含される。 Cause such dehydration condensation reaction, it is encompassed gel if the reaction manner in which it is possible to obtain a gelled object, the present invention was obtained based on what reaction mode. しかし、生体適合性材料として使用することを考慮すれば、HAの特性に悪影響を及ぼすことなく、 However, considering the use as a biocompatible material, without adversely affecting the properties of HA,
未反応出発原料や副生成物から目的のゲルを容易に分離できる反応系を選ぶことが好ましい。 It is preferable to select the reaction system can be easily separated the desired gel from unreacted starting materials and by-products.

【0025】このような反応系としては、水性反応溶媒系で目的のゲルが得られるカルボジイミド類の存在下で、HAと架橋剤を反応させるのが好ましい。 [0025] As such a reaction, in the presence of a carbodiimide as the object of the gel is obtained in an aqueous reaction solvent system, it is preferred to react the HA with a crosslinking agent. 使用できるカルボジイミド類としては水に溶解する1−エチル− 1-ethyl The carbodiimides that can be used to be dissolved in water -
3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(以下「EDC」という)、シクロヘキシル−β−(N 3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (hereinafter referred to as "EDC"), cyclohexyl-.beta.-(N
−メチルモルホリノ)エチレンカルボジイミドp−トルエンスルホネート及び1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミドメチオダイドを好ましいものとして挙げることができるが、最も好ましいものはEDCである。 - methylmorpholino) may be mentioned as preferred ethylene carbodiimide p- toluenesulfonate and 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide methiodide, most preferably, EDC.

【0026】以下、この好ましい反応系でアジピン酸ジヒドラジド(以下「AAD」と略記する場合もある)又は上記式(a)で示される1,4−ジヒドラジノフタラジン[ジヒドララジン(以下「DHZ」と略記する場合もある)を架橋剤として用い、そしてHAとして約2× [0026] Hereinafter, the preferred reaction system (hereinafter sometimes abbreviated as "AAD") adipic acid dihydrazide in or represented by the above formula (a) 1,4-di hydrazinium Nof cod Jin [dihydralazine (hereinafter "DHZ used also) sometimes referred to as the "as a crosslinking agent, and from about 2 × as HA
10 6ダルトンのものを用いる場合を引用しながら本発明をさらに具体的に説明する。 Further illustrate the present invention citing the case of using the 10 6 daltons ones. なお、反応挙動は、HA Incidentally, the reaction behavior, HA
の分子量変化により殆んど影響を受けない。 Not subject to little effect by the change in molecular weight.

【0027】上記反応系による場合、HA濃度は0.5 In the case of the above reaction system, HA concentration 0.5
〜5.0重量/重量%に設定するのが反応液の処理上好都合であるが、好ましくは0.8〜1.5重量/重量%に設定するのがよい。 5.0 While to set the weight / weight% is advantageous over the treatment of the reaction solution, and it is preferably set to 0.8 to 1.5 wt / wt%. HAナトリウム塩濃度を約1.2重量/重量%に設定する場合を例にとると、そのβ−D− Taking a case of setting the HA sodium salt concentration of about 1.2 wt / wt% as an example, the beta-D-
N−アセチルグルコサミンとβ−D−グルクロン酸との2糖単位に換算すると、この2糖単位は約0.03mo In terms of disaccharide units of N- acetylglucosamine and beta-D-glucuronic acid, the disaccharide unit is about 0.03mo
l/lに相当する。 Corresponding to the l / l. この換算値を基準にして、カルボジイミドEDC並びに架橋剤AAD及びDHZの使用量を適宜選ぶことができるが、通常、EDCは、意図する架橋率に応じ、HAに対して約0.13〜0.67モル当量となるように使用するのがよい。 This was the converted value to the reference, it can be selected the amount of the carbodiimide EDC and crosslinking agent AAD and DHZ appropriate, usually, EDC, in response to the intended crosslinking rate, approximately against HA 0.13 to 0. it is preferable to use such a 67 molar equivalent. また、同様に架橋剤もHAに対して0.13〜0.67モル当量となるようにとなるように選ぶのがよい。 Similarly, cross-linking agents which may to choose such that such that 0.13 to 0.67 molar equivalent with respect to HA. 無論、架橋率は反応時間、反応温度によっても左右されるが、便宜上、それぞれ、反応がほぼ終了する時点まで進行する反応時間及び反応温度に従って説明する。 Of course, the degree of crosslinking reaction time, it also depends on the reaction temperature, for convenience, each reaction will be described in accordance with the reaction time and reaction temperature to proceed to the point where almost completed.

【0028】その他、反応の進行は、反応液のpHによっても影響を受けるので、通常、反応液はジ(もしくはビ)ヒドラジド類についてはpH3〜4に調整するのが好ましい。 [0028] Other, progress of the reaction, since even influenced by the pH of the reaction solution, usually, the reaction solution for di (or bi) hydrazides preferably adjusted to pH 3-4.

【0029】一方、ジ(もしくはビ)ヒドラジン類については、反応液をpH3〜8に調整して縮合反応を行うことができるので、通常、pHの調整を行う必要がない。 [0029] On the other hand, the di (or bi) hydrazines, since the reaction solution can be adjusted to a condensation reaction to pH 3-8, usually, it is not necessary to adjust the pH. 反応温度は、20〜25℃の室温が好都合であり、 The reaction temperature is conveniently ambient temperature of 20-25 ° C.,
この場合、AADを用いると、ほぼ40〜60分で完了し、DHZを用いると、ほぼ120〜140分で完了する。 In this case, the use of AAD, completed in approximately 40 to 60 minutes, using DHZ, completed in approximately 120 to 140 minutes.

【0030】このような反応条件は、経時的に反応液の各種吸光度、例えば紫外線吸収スペクトルや蛍光スペクトルを測定するかより確実を期すならば、赤外線吸収スペクトル(IR)を測定することにより所望の架橋度を達成できるか否かを判定することにより適宜選ぶことができる。 [0030] Such reaction conditions, various absorbance over time the reaction solution, if sake of certainty than or measuring the example, ultraviolet absorption spectrum and fluorescence spectrum, desired by measuring the infrared absorption spectrum (IR) it can be appropriately selected by determining whether the degree of crosslinking can be achieved. フーリェ変換赤外線吸収スペクトル(FT−I Fourier transform infrared absorption spectrum (FT-I
R)による場合、例えば、対照としてHAを選び、次に経時的変化する次の吸収の変化を観察すればよい。 If by R), for example, select the HA as a control, then it is sufficient observing changes in the next absorption changes over time. 例えば、DHZを使用する場合、 1413cm -1 :カルボキシル(−COO−)のC−O For example, when using a DHZ, 1413cm -1: C-O of the carboxyl (-COO-)
による吸収、及び 1377cm -1 :C−Hの変角振動の吸収に着目すれば、(1377cm -1の吸光度/1413cm -1の吸光度)の変化は、架橋の進行状況を反映するであろうし、 Absorption, and 1377 cm -1 by: paying attention to the absorption of deformation vibration of C-H, the change in (absorbance / 1413Cm absorbance -1 1377 cm -1) in the art will reflect the progress of cross-linking,
又 1650cm -1 :アミド(−CO−NH−)のC−Oによる吸収、及び 1614cm -1 :カルボキシル(−COO−)のC−O The 1650 cm -1: absorption by C-O amide (-CO-NH-), and 1614cm -1: C-O of the carboxyl (-COO-)
による吸収に着目すれば、(1650cm -1の吸光度/ If attention is paid to the absorption by, (1650cm -1 of absorbance /
1614cm -1の吸光度)の変化も架橋の進行状況を反映するであろう。 Change in absorbance) of 1614cm -1 will also reflect the progress of cross-linking.

【0031】こうして、所望の架橋率を示すゲルを調製することができる。 [0031] Thus, it is possible to prepare a gel showing the desired crosslinking rate.

【0032】一般的に、HAの上記二糖単位の換算モル数に対して、カルボジイミドと架橋剤を増加すればする程、架橋率を高めることができる。 [0032] In general, for conversion the number of moles of the disaccharide units of HA, the more you increase the carbodiimide crosslinking agent, it is possible to increase the crosslinking rate. 架橋率は、上記反応の進行に伴う吸光度の変化を考慮し、二糖単位の一対を架橋に関与する単位として使用架橋剤量及び未反応架橋剤量から概算すると、架橋率が約29%〜85%のものは、透明なゲルを形成し、適当な粘弾性を示し、生理食塩液による膨潤度の変化(上昇)もあまり認められず、 Crosslinking rate, taking into account the change in absorbance with the progress of the reaction, the two when a pair of saccharide units to estimate from the use amount of the crosslinking agent and unreacted crosslinking agent amount as a unit involved in the crosslinking, the crosslinking rate is about 29% 85% of those forms a clear gel exhibits appropriate viscoelastic change in degree of swelling by saline (increase) also not be too observed,
かつ培養細胞を用いる細胞毒性試験において殆んど毒性(細胞増殖抑制)を示さない。 And not toxic (cytostatic) almost in the cytotoxicity test using cultured cells.

【0033】従って、本発明の架橋HAゲルは、生体適合性材料、例えば、人工硝子体(硝子体置換物)、人工水晶体(調節力を有する人工水晶体)、治療用コンタクトレンズ、使い捨てコンタクトレンズ、人工乳房、人工関節の摺動部、及び人工皮膚等に使用できるであろう。 [0033] Therefore, cross-linked HA gel of the present invention, a biocompatible material, for example, artificial vitreous (vitreous replacement), (artificial crystalline with an adjustable force) intraocular lens, a therapeutic contact lens, disposable contact lenses, sliding portions of the breast prosthesis, artificial joints, and could be used in artificial skin or the like.

【0034】 [0034]

【実施例】以下、具体例により本発明をさらに詳細に説明する。 EXAMPLES Hereinafter, a more detailed description of the present invention by the Examples. なお下記説明においてパーセンテージは特記しない限り(重量/重量)%を意味する。 Note percentage in the following description refers to% unless otherwise specified (wt / wt).

【0035】実施例1〜16:DHZを用いるゲルの調製 室温(25℃付近)で試験管に、1.2%HA水溶液1 [0035] Example 1~16: DHZ test tube in the preparation of the gel at room temperature (around 25 ° C.) using, 1.2% HA aqueous 1
mLを入れ、0.05〜0.2mol/LのEDC 0. Put mL, EDC 0 of 0.05~0.2mol / L.
1mLを加え、3分間撹拌した後0.05〜0.2mol 1mL was added, 0.05~0.2Mol After stirring for 3 minutes
/LのDHZ 0.1mLを、加え3分間撹拌した。 / L The DHZ 0.1 mL was stirred added 3 min. 得られたゲル1.2mLに生理食塩液120mLを加えて19時間透析した後、試験管内のゲルの状態を観察した。 The obtained 19 hours dialysis added saline 120mL gel 1.2 mL, was observed gel state in vitro. その結果を図1に略記する。 Abbreviated results in Figure 1. こうして得られたゲルは、すべて生理食塩水に不溶性であり、固有の膨潤性をもつことからハイドロゲルが生成していることがわかる。 Thus obtained gel are all insoluble in physiological saline, it can be seen that the hydrogel is produced because of its inherent swelling. また、DHZは波長310nm付近に吸収極大を示すが、上記透析により未反応DHZは容易にゲルから分離できることが確認されている。 Further, DHZ is shown an absorption maximum at a wavelength of around 310 nm, unreacted DHZ by the dialysis has been confirmed that it is possible to easily separated from the gel.

【0036】なお、図中の各組み合わせの例番号は、左から右へ、そして最上欄から、順次下欄に向かって、例1〜例16である。 [0036] The example numbers of each combination in the figure, from left to right, and from the top column, sequentially toward the lower row, a Examples 1 16. これらの例のうち、EDCの使用濃度が0.2mol/LでDHZの使用濃度が0.1mol Among these examples, the use concentration of DHZ use concentration is 0.2 mol / L of EDC 0.1 mol
/Lである例8によるゲルは、上述の架橋率の算出式によると、約56.4%の理論上の架橋率を示す。 / L gel from Example 8, according to the calculation formula of the above-mentioned crosslinking ratio shows the degree of crosslinking on approximately 56.4% of the theoretical.

【0037】実施例17〜20:生成ゲルの生理食塩液での透析による重量変化(試行2回の平均) 上記例4(使用濃度:DHZ=0.05mol/L、E [0037] Example 17-20: generating weight change by dialysis in saline gel (average of two attempts) above Example 4 (working concentration: DHZ = 0.05mol / L, E
DC=0.2mol/L)、例8(使用濃度:DHZ= DC = 0.2mol / L), Example 8 (use concentration: DHZ =
0.1mol/L、EDC=0.2mol/L)、例12 0.1mol / L, EDC = 0.2mol / L), Example 12
(使用濃度:DHZ=0.15mol/L、EDC=0. (Use concentration: DHZ = 0.15mol / L, EDC = 0.
2mol/L)及び例16(使用濃度:DHZ=0.2 2 mol / L) and Example 16 (working concentration: DHZ = 0.2
mol/L、EDC=0.2mol/L)に従ってそれぞれ得られたゲル3mlに対し、室温(25℃)下に生理食塩水300ml;で透析を行った。 mol / L, with respect to EDC = 0.2mol / L) gel 3ml obtained respectively according to, saline 300ml under room temperature (25 ° C.); dialysis was carried out at. 透析は、生理食塩液を使用して処理した後、ゲルを回収した。 Dialysis was treated using a physiological saline solution, it was recovered gel. 得られたゲルの重量を経時的に測定した結果を図2に示す。 The results measured over time the weight of the resulting gel is shown in Figure 2.

【0038】図からみられるように、DHZが0.05 [0038] As can be seen from the Figure, DHZ 0.05
mol/L(例4)のゲルは21日間の透析で膨潤したが、DHZが0.12及び0.2mol/L(それぞれ、 Gel mol / L (Example 4) was swelled with dialyzing for 21 days, DHZ 0.12 and 0.2 mol / L (respectively,
例12及び例16)のゲルは離水し凝縮した。 Examples 12 and Example 16) of the gel was condensed water separation. DHZが0.1mol/L(例8)のゲルは変化がなかった。 DHZ gel of 0.1 mol / L (Example 8) remained unchanged.

【0039】これらのゲルを眼内で使用することを考慮すると、透析による変化が少ない方が好ましいので、E [0039] When these gels consider using in the eye, since it is preferred that little change by dialysis, E
DC濃度を0.2mol/Lに設定する場合には、DH To set the DC concentration in 0.2mol / L is, DH
Z濃度は0.1mol/Lが適切である。 Z concentration 0.1 mol / L is suitable.

【0040】実施例21〜25:各種pH下でDHZを用いるゲルの調製 室温(25℃付近)で試験管に、あらかじめ透析法によりpHを調整した1%HA水溶液2mL(例21ではp [0040] Example 21-25: To a test tube in the preparation of a gel using DHZ under various pH at room temperature (around 25 ° C.), the 1% HA aqueous solution 2 mL (Example 21, the pH of which was adjusted beforehand by dialysis p
H1、例22ではpH2、例23ではpH4、例24ではpH6、例25ではpH8に調整)を取り、0.04 H1, Example 22 pH 2, pH 4 In Example 23, Example 24 pH 6, takes adjustment) in Example 25, pH 8, 0.04
mol/LのEDC 1mLを加え3分間撹拌し、次いで0.04mol/LのDHZ 1mLを加えてさらに3分間撹拌した。 It was added and stirred for 3 minutes EDC 1 mL of mol / L, and then stirred for a further 3 minutes by adding DHZ 1 mL of 0.04 mol / L. 波長400nmにおける経時的な反応液の吸光度変化を測定し、反応挙動を追跡した。 The absorbance change with time in the reaction solution at a wavelength of 400nm was measured and monitoring the reaction behavior. 結果を図3に示す。 The results are shown in Figure 3.

【0041】図より、反応はほぼ2〜3時間で終了し、 [0041] From the figure, reaction was completed in approximately two to three hours,
またpH1では反応が起こらないことがわかる。 In addition it can be seen that in pH1 reaction does not occur. 例21 Example 21
〜25で得られたゲルを例1〜16と同様に生理食塩液を加えて透析した後、ゲルを肉眼観察したところ、いずれも透明なゲルであるがpHが高くなるにつれて白色を帯びてくることが認められた。 It was dialyzed by adding physiological saline similarly obtained gel as Example 1 to 16 with 25, where the gel was macroscopically observed, although both are clear gel coming whitish as the pH is increased it was observed.

【0042】実施例26〜29:AADを用いるゲルの調製 室温(25℃付近)でそれぞれ試験管に1.2%HA水溶液1mLを入れ、0.04mol/LのEDC 0.1 [0042] Example 26 to 29: AAD placed 1.2% HA aqueous solution 1mL in test tubes in the preparation room temperature (around 25 ° C.) of the gel using, EDC 0.1 of 0.04 mol / L
mLを加え3分間撹拌した後、1N HClによりpH After stirring for 3 minutes adding mL, pH by 1N HCl
を3.1(例26)、3.3(例27)、3.5(例2 3.1 (Example 26), 3.3 (Example 27), 3.5 (Example 2
8)に調整するか、あるいは、無調整(例29)のまま0.06mol/LのAAD 0.1mLを加え3分間撹拌した。 Or adjusted to 8), or stirred without adjustment (Example 29) 3 minutes added AAD 0.1 mL remains 0.06 mol / L of.

【0043】例29の場合には白色のゲルを生成したが他の例はいずれも透明なゲルを生成した。 [0043] Having generated a white gel another example in the case of Example 29 yielded any clear gel. 例17〜20 Examples 17-20
の方法に従って、得られたゲルを生理食塩液で透析したときの、ゲルの経時的な重量変化を図4に示す。 According to the method, it is shown when the resulting gel was dialyzed against physiological saline, a temporal change in weight of the gel in FIG. なおこれらの結果は試行4回の平均値である。 Note These results are the average of 4 trials.

【0044】図から、架橋剤としてAADを用いるとD [0044] From the figure, the use of AAD as a crosslinking agent D
HZを用いた場合に比べ、ゲルが膨潤することが認められる。 Compared with the case of using HZ, gel is observed to swell.

【0045】実施例30:赤外線吸収スペクトルの測定 (1) DHZを用いたゲル 例4(EDC 0.2mol/L、DHZ 0.05mo [0045] Example 30: Infrared absorption spectrum measurement (1) Gel Example 4 using DHZ (EDC 0.2mol / L, DHZ 0.05mo
l/L)、例8(EDC 0.2mol/L、DHZ l / L), Example 8 (EDC 0.2mol / L, DHZ
0.1mol/L)、例12(EDC 0.2mol/ 0.1 mol / L), Example 12 (EDC 0.2 mol /
L、DHZ 0.15mol/L)、及び例16(ED L, DHZ 0.15mol / L), and Example 16 (ED
C 0.2mol/L、DHZ 0.2mol/L)に従って得たゲルを乾燥後粉末にし、それぞれKBr錠にしてFT−IRを測定した。 C 0.2 mol / L, and the gel dried powder obtained according DHZ 0.2mol / L), were measured FT-IR, respectively in the KBr tablet. なお対照としてHAのFT− It should be noted that as a control of HA FT-
IRを測定した。 It was measured IR.

【0046】使用した機器は、Magna IR(商標)spectrometer 550(Nicole The equipment used was, Magna IR (TM) spectrometer 550 (Nicole
t製)を用いた。 t Co., Ltd.) was used.

【0047】HAと例8に従って得られたゲルのFT− The gel obtained according to HA and Example 8 FT-
IRスペクトルを、それぞれ図5及び6に示す。 The IR spectra are shown in FIGS. 5 and 6.

【0048】HAに比べ、HA−ゲル(DHZ)は、1 [0048] compared to the HA, HA- gel (DHZ) is, 1
413cm -1付近のカルボキシル(−COO−)のC− 413cm -1 near the carboxyl (-COO-) C-
Oによる吸収の強さに対する1377cm -1付近のC− Against the strength of O by absorption 1377 cm -1 vicinity of C-
H変角振動による吸収の強さの比が大きくなり(すなわち、フリーのカルボキシル基の減少)、1614cm -1 H bending strength ratio of the absorption by vibration is increased (i.e., reduction of the free carboxyl groups), 1614cm -1
付近のカルボキシルのC−Oによる吸収の強さに対する1650cm -1付近のアミド(−CO−NH−)のC− Amides near 1650 cm -1 with respect to C-O in accordance with the absorption intensity of the carboxyl near the (-CO-NH-) C-
Oによる吸収の強さの比が大きくなる(すなわち、フリーのカルボキシル基の減少とアミド結合の形成が認められる)。 Strength ratio of O due to absorption increases (i.e., reduction and formation of the amide bond of the free carboxyl groups is observed).

【0049】対照、例4、例8、例12及び例16に従って調製したゲルについて、1650cm -1 /1614 [0049] Control, Example 4, Example 8, gel for prepared according to Example 12 and Example 16, 1650 cm -1 / 1614
cm -1及び1377cm -1 /1413cm -1の吸光度比をプロットしたグラフを図7に示す。 cm -1 and a plot of the absorbance ratio of 1377cm -1 / 1413cm -1 shown in Fig.

【0050】この図から、架橋剤DHZの使用濃度が高まるにつれて、フリーのカルボキシル基が相対的に減少し、架橋化がより進むことが認められる。 [0050] From this figure, as the increased use concentration of the crosslinking agent DHZ, free carboxyl groups is relatively decreased, it is recognized that crosslinking proceeds more.

【0051】(2) AADを用いたゲル 0.04mol/LのEDCと0.03、0.06及び0. [0051] (2) EDC of gel 0.04mol / L using the AAD and 0.03,0.06 and 0.
12mol/LのAADを用い、pHで反応させたこと以外、例26〜29と同様な方法でゲルを調製した。 Using AAD of 12 mol / L, except that the mixture was reacted at pH, gels were prepared in the same manner as in Example 26-29.
0.06mol/LのAADを用いて得たゲルのFT− Of the gel obtained using the AAD of 0.06mol / L FT-
IRスペクトルを図8に示す。 The IR spectrum is shown in Figure 8. 上記(1)と同様に−C -C Like the above (1)
O−NH−に由来する吸光度/−COO−に由来する吸光度の比、及び−C−Hに由来する吸光度/−COO− The ratio of the absorbance derived from absorbance / -COO- derived from O-NH-, and the absorbance derived from -C-H / -COO-
に由来する吸光度の比を使用したAADの濃度に対してプロットしたグラフを図9に示す。 A graph was plotted against the concentration of AAD using the ratio of the absorbance derived from FIG. 9. これらの図から、− From these figures, -
CO−NH−結合の形成によるゲル化は、AADの濃度に応じて進行することが認められる。 Gelling by the formation of CO-NH- bond is found to proceed in accordance with the concentration of AAD.

【0052】実施例31:ゲルの光透過性(光散乱)の測定 硝子体注入後のHA−ゲルの光透過性を検討するため下記の実験を行った。 [0052] Example 31: gel was optically transparent below to study the optically transparent (light scattering) measurements vitreous after injection of HA- gel experiments. 2.5mL用シリンジ(テルモ製) 2.5mL syringe (made by Terumo)
の先端をカッターで切り落とし、そこにピペット用プラスチックチップ(C−5000/GILSON)の先を切ったもの(切り口の内径:7mm、2mm、1.2m Cut off the tip with a cutter, there shall cut ahead of the pipette plastic tip (C-5000 / GILSON) (cut inner diameter: 7 mm, 2 mm, 1.2 m
m)を付けた3種のアプリケーターを準備し、HA−ゲルをそれらのアプリケーターに入れた。 Prepare the three types of applicator with a m), the HA- gel was placed in them of the applicator. あらかじめ生理食塩液1mLを満たしたディスポーサブルキュベット(1cm×1cm×4.5cm)にそれらのアプリケーターからHA−ゲルを注入し、それぞれの光透過性を分光光度計により波長550nmで測定した。 Injecting them HA- gel from the applicator in advance disposable cuvette filled with physiological saline 1mL (1cm × 1cm × 4.5cm), it was measured at a wavelength of 550nm by the respective light transmissive spectrophotometer. 対照として1.2%のHA生理食塩溶液についても測定した。 It was also measured 1.2% HA saline solution as a control. ゲルは例8(0.2mol/LのEDC、0.1mol/LのDHZ)に従って調製したものを使用した。 The gel was used which was prepared according to Example 8 (0.2 mol / L of EDC, the 0.1mol / L DHZ). 対照(H Contrast (H
A)とゲル[HA−ゲル(DHZ)]の測定値の平均値を経時的にプロットしたグラフを図10の(a)と(b)にそれぞれ示す。 Respectively a graph plotted over time to an average of measured values ​​A) and gel [HA-gel (DHZ)] in FIG. 10 and (a) (b).

【0053】図により、パイプの開口径が大きい方がH [0053] by the view, the larger the aperture diameter of the pipe is H
A、HA−ゲルともに透過率は高く、HAと比べるとH A, HA-transmittance gel both are high, when compared to HA H
A−ゲルはやや透過率が低くなった。 A- gel is a little transmittance was lower. 2日目以降は90 The second day after 90
%以上の高い透過率が得られた。 % Or more of the high transmittance is obtained. 従って、HA−ゲルは硝子体腔に注入後も視力に大きな傷害を与えないと考えられる。 Therefore, HA-gel is considered after injection into the vitreous cavity also does not significantly damage vision.

【0054】実施例32:弾性の測定 例4(0.2mol/LのEDC、0.05mol/LのDHZ)、例8(0.2mol/LのEDC、0.1mo [0054] Example 32: Measurement Example 4 of elasticity (EDC of 0.2mol / L, DHZ of 0.05 mol / L), Example 8 (0.2 mol / L of EDC, 0.1mo
l/LのDHZ)、例12(0.2mol/LのED DHZ of l / L), Example 12 (0.2mol / L of ED
C、0.15mol/LのDHZ)及び例16(0.2m C, DHZ of 0.15 mol / L) and Example 16 (0.2 m
ol/LのEDC、0.2mol/LのDHZ)に従って調製したゲル、並びに対照(1.2%HA、0.2mo ol / L of EDC, gel prepared according DHZ) of 0.2 mol / L, and the control (1.2% HA, 0.2mo
l/LのEDC、0 mol/LのDHZ)及びHAの動的貯蔵弾性率(G')を求めた。 EDC for l / L, DHZ of 0 mol / L) and dynamic storage modulus of HA to (G ') was determined.

【0055】測定は、MR−101型レオメーター(レオロジー社製)測定モード:直径30mmのパラレルプレート、自動歪み制御、ギャップ2mm)を用いて行った。 [0055] measurement, MR-101 type rheometer (manufactured by Rheology Co., Ltd.) measurement mode: parallel plate, automatic distortion control with a diameter of 30mm, was carried out using a gap 2mm). 結果を図11に示す。 The results are shown in Figure 11.

【0056】図から、対照及びHAは角速度(ω)の上昇に伴ってG'が約150(dyn/cm 2 )から約1, [0056] From the figure, about from control and HA is the angular velocity (ω) G 'of about 150 with increasing (dyn / cm 2) 1,
200(dyn/cm 2 )に上昇するのに対し、HA− While increased to 200 (dyn / cm 2), HA-
ゲル(DHZ)は、ωの上昇に伴うG'の上昇は緩やかであることが認められる。 Gel (DHZ) is elevated G 'with increasing ω is recognized to be gradual. これらの結果から、HA−ゲルいずれも軟かい弾性体であり、生体への適用に適することがわかる。 These results, HA-gel Both are soft elastic body, it is found to be suitable for application to a living body.

【0057】実施例33:細胞毒性の測定 例8(0.2mol/LのEDC、0.1mol/LのD [0057] Example 33: Cytotoxicity measurement example 8 (0.2 mol / L of EDC, D of 0.1 mol / L
HZ)及び例27(0.04mol/LのEDC、0.0 HZ) and Example 27 (0.04 mol / L of EDC, 0.0
6mol/LのAAD、pH4.0)に従って1%HA 6 mol / L of AAD, 1% HA according pH 4.0)
水溶液を用い無菌的に調製したゲルの細胞毒性について検討する。 Consider cytotoxicity aseptically prepared gel using an aqueous solution.

【0058】HA−ゲル(例8由来及び例27由来) [0058] HA- gel (Example 8 derived from and Example 27)
0.2mLを、それぞれ24ウェルプレートの底、あるいはインターカップに入れ、ウェル内で生理食塩液により透析した。 The 0.2 mL, bottom of each 24-well plates or placed in Inter cup, and dialyzed by physiological saline in the well. そのウェルに2.5×10 4個のヒト皮膚由来線維芽細胞を播種し、培養した(培地RITC 80 As well it was seeded 2.5 × 10 4 pieces of human skin fibroblasts were cultured (medium RITC 80
−7、温度37℃、5%CO 2下)。 -7, temperature 37 ℃, 5% CO 2 below). 3、7、10日後に細胞の増殖の様子を倒立顕微鏡で観察した。 3, 7, the state of cell proliferation was observed with an inverted microscope after 10 days.

【0059】培養10日後、細胞はいずれも良好に増殖した。 [0059] After culturing 10 days, the cells are both grew well. HA−ゲル(例8由来、あるいは例27由来)をインターカップに入れ、細胞とは非接触下で培養すると、細胞増殖は対照群に比べてほぼ同様かあるいはやや抑制の傾向がみられた。 HA- gel (Example 8 from, or Example 27 derived) placed on inter cup, when the cell is cultured in a non-contact under cell growth trend substantially the same as or slightly suppressed as compared to the control group was observed.

【0060】 [0060]

【発明の効果】本発明によれば、一定範囲の架橋度において透明であり、細胞毒性が殆どなく、適度な弾性を示し、かつ安定なゲルが提供される。 According to the present invention is transparent in the crosslinking of a range, cytotoxicity little show appropriate elasticity, and stable gel is provided. このゲルは生体適合性材料として利用可能である。 This gel can be used as a biocompatible material.

【図面の簡単な説明】 BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

【図1】本発明のゲルの使用架橋剤濃度変化及び使用カルボジイミド濃度変化に応じた外観を示す略図である。 1 is a schematic diagram showing an appearance use according to crosslinker concentration change and use carbodiimides changes in the concentration of the gel of the present invention.

【図2】架橋剤にDHZを使用し、各架橋剤濃度で得られたゲルの生理食塩液で透析した場合の経時的膨潤特性を示すグラフである。 [2] Using the DHZ crosslinking agent is a graph showing the time swelling characteristics when dialyzed against saline gel obtained in the cross-linking agent concentration.

【図3】架橋剤としてAADを使用する場合のゲル調製時におけるpH変化が、ゲル生成に与える影響を示すグラフである。 [Figure 3] pH change during gel preparation when using AAD as a crosslinking agent is a graph showing the effect on gel formation.

【図4】架橋剤にAADを使用し、各種pHで得られたゲルの生理食塩液で透析した場合の経時的膨潤特性を示すグラフである。 [4] using the AAD crosslinking agent is a graph showing the time swelling characteristics when dialyzed against saline gel obtained in various pH.

【図5】HAのFT−IRスペクトルを表す図である。 FIG. 5 is a diagram showing the FT-IR spectra of HA.

【図6】架橋剤にDHZを使用して得られたゲルのFT [6] FT gel obtained using DHZ crosslinkers
−IRスペクトルを表す図である。 It is a diagram illustrating a -IR spectra.

【図7】各種使用架橋剤(DHZ)濃度を使用して得られたゲルのFT−IRスペクトルの特定波長における吸光度比を前記濃度変化に対してプロットしたグラフである。 7 is a graph of the absorbance ratio was plotted against the concentration changes at specific wavelengths of FT-IR spectra of the various uses crosslinking agent (DHZ) gel obtained using concentrations.

【図8】架橋剤にAADを使用てし得られたゲルのFT [Figure 8] FT of was obtained by Te using AAD cross-linking agent gel
−IRスペクトルを表す図である。 It is a diagram illustrating a -IR spectra.

【図9】各種架橋剤(AAD)濃度を使用して得られたゲルのFT−IRスペクトルの特定波長における吸光度比を前記濃度変化に対してプロットしたグラフである。 9 is a graph of the absorbance ratio was plotted against the concentration changes at specific wavelengths of FT-IR spectra of various crosslinking agents (AAD) concentration was obtained using gel.

【図10】HA(対照)及び架橋剤にDHZを使用して得られたゲルの透過率をそれぞれ表すグラフである[(a):対照、(b):ゲル]。 10 is a graph representing HA (control) and obtained using DHZ crosslinkers gel transmittance, respectively [(a): control, (b): Gel.

【図11】各種架橋剤(DHZ)濃度で得られたゲルの弾性率を示すグラフである。 11 is a graph showing the various crosslinking agents (DHZ) elastic modulus of the gel obtained at a concentration.

Claims (5)

    【特許請求の範囲】 [The claims]
  1. 【請求項1】 ヒアルロン酸と架橋剤ジ(もしくはビ) 1. A hyaluronic acid crosslinking agent di (or bi)
    ヒドラジン又はジ(もしくはビ)ヒドラジドとの縮合反応によって形成された水不溶性ヒアルロン酸ゲル。 Hydrazine or di (or bi) is formed by a condensation reaction with hydrazide water-insoluble hyaluronic acid gel.
  2. 【請求項2】 架橋剤が、次式 H 2 NNH−R−NHNH 2 (式中、RはC 4-8のアルキレンジカルボニル又はヘテロ原子として窒素原子2個を有する6員の複素環式基を含む置換されていてもよい二環式縮合環残基であるか、 2. A crosslinking agent, in the formula H 2 NNH-R-NHNH 2 ( wherein, R 6 membered heterocyclic group having two nitrogen atoms as the alkylene carbonyl or heteroatom C 4-8 a either optionally substituted bicyclic fused ring residue including,
    或いは式 【化1】 Or the formula: 1] ここで、Xは低級アルキレン又は−SO 2 −であり、 nは0又は整数1であり、そしてベンゼン環は置換されていてもよいで示される2価の基又は単結合である)で表わされる請求項1記載のヒアルロン酸ゲル。 Here, X is lower alkylene or -SO 2 - is, n is 0 or an integer 1, and a benzene ring is represented by divalent radical or a single bond) represented by may be substituted claim 1, wherein the hyaluronic acid gel.
  3. 【請求項3】 架橋剤がコハク酸ジヒドラジド、アジピン酸ジヒドラジド、及びスベリン酸ジヒドラジド並びに式 【化2】 Wherein the crosslinking agent is succinic acid dihydrazide, adipic acid dihydrazide, and suberic acid dihydrazide and formula ## STR2 ## で示されるジ(もしくはビ)ヒドラジン類からなる群より選ばれる化合物又はその塩である請求項1記載のヒアルロン酸ゲル。 In shown are di (or bi) compound selected from the group consisting of hydrazines or claim 1, wherein the hyaluronic acid gel is a salt thereof.
  4. 【請求項4】 請求項1記載のヒアルロン酸ゲルを含んでなる生体適合性組成物。 4. A comprising hyaluronic acid gel according to claim 1, wherein the biocompatible composition.
  5. 【請求項5】 硝子体で使用するための請求項4記載の生体適合性組成物。 5. The biocompatible composition according to claim 4, wherein for use in vitreous.
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