JPH09508567A - 遠心分離チューブ及びアダプター - Google Patents

遠心分離チューブ及びアダプター

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Abstract

(57)【要約】 生物学的材料の分離を容易にし、遠心分離の後の画分の抽出を容易にする遠心分離チューブ及びアダプター装置を提供する。このチューブ(2)は、広い上部室(6)及び狭い下部室(14)を有する変形可能なチューブである。このチューブは、該チューブの狭い部分を包囲して支持する液体支持媒体(12)により、遠心機内の遠心ローター又は他の容器(10)内に支持され、これにより、高速遠心の間にチューブが崩壊することを防止する。

Description

【発明の詳細な説明】 遠心分離チューブ及びアダプター 本発明は、生物学的材料の分離のための遠心分離チューブ及びアダプターに関 し、更に詳しくは、狭い中央チューブ部分に液体支持体を有する遠心分離チュー ブに関する。 技術的背景 遠心機は、重力場の適用によって、構成物の質量、密度及び他の沈殿特性に従 って生物学的材料のサンプル中の構成物を分離するのに用いられる。遠心分離チ ューブは、適用される重力に耐えなければならず、典型的には、平面又は少し丸 い底を有する円柱状である。遠心分離チューブの壁の形は、このチューブ内のサ ンプルに分離特性を与える。付加的な分離特性は、このサンプルの温度及び化学 的組成、チューブが作製されている材料、及びこのサンプル構成物の相対質量及 び密度により与えられる。 多くの臨床的又は研究的適用において、サンプルの一部分は、更なる解析又は 精製のために回収されなければならない。回収されるべき部分又は画分がチュー ブの上側にある場合、単離は比較的簡単に、例えば吸引すること又はピペットで 取ることにより行うことができる。しかしながら、関心の画分がチューブの中央 又は下側の画分にある場合、この画分の回収は、他のチューブ内容物の再コンタ ミネーションがあり得ることにより複雑になり得る。 この問題を解決するための試みは、サンプルックらの論文(Sambrook et al.M olecular Cloning ,2nd Edition)に開示されるように、関心の画分を取り出すた めに、例えばシリンジで、チューブの側 壁に刺して穴をあけることを含む。この技術は、穴をあける過程に関係する固有 の安全危険性を有し、容易に穴をあけることができるチューブを必要とする。加 えて、この方法は、時間を浪費し、また頻繁にサンプルの損失を導く。他のチュ ーブは、例えば米国特許第4,861,477号に開示されるように、ストッパー、プラ グ、又はチューブ内容物の最下部分を他のサンプル容器へ注ぎ出す特殊な付属物 を有する。しかしながら、関心のサンプル画分がチューブの中央にある場合、こ れらの方法を用いるサンプルの回収は困難で時間を浪費し得る。更に、これらの 技術は、サンプルの他の生物学的画分とのコンタミネーション又は作業場の血液 サンプルそれ自体とのコンタミネーションの問題を完全に防ぐことはない。 それゆえ、血液サンプルの密度及び沈殿特性に従った、細胞を十分に分離する 速度での血液サンプルの遠心分離を許容し、最小限の相互のコンタミネーション での血液サンプルの抽出を容易にする遠心分離チューブ及び装置を有することが 要求されるであろう。驚くことに、本発明は、これら及び他の関連する必要性を 満足させる。 発明の概略 本発明は、チューブ内のサンプルへの容易なアクセスを許容するチューブを提 供し、チューブの内壁の形状のため増加された細胞分離を提供し、及びチューブ の狭い部分における束縛物を広げることによって関心の部分を回収することを容 易にする。 本発明の一つの実施形態において、サンプルの遠心分離のためのチューブ及び アダプター装置であって、該装置は、環状接続セグメントによりチャンネル上に 配設され、該チャンネルに一体的に接続された上部室を有する遠心分離チューブ 、ここで前記チャンネルの 径は前記上部室の径より小さい;並びに上部及び下部を有する外部容器、ここで 前記上部は開口を有し、該開口はその中に遠心分離チューブを受容することがで き、前記外部容器は、前記チャンネルと前記遠心分離チューブの前記環状接続セ グメントを包囲するのに十分な液体支持媒体を含む;を含むことを特徴とする装 置を提供する。 本発明の他の実施形態において、チューブは、チャンネルと一体化され、該チ ャンネルの下に配設された下部室を含み、該下部室の径が前記チャンネルの径よ り大きいことを特徴とする。 本発明によれば、生物学的材料のサンプルの構成物を分離する方法であって、 該方法は、遠心分離チューブ内にサンプルを入れるステップ、ここで前記遠心分 離チューブがチャンネル上に配設され、該チャンネルに一体的に接続された上部 室を有し、前記チャンネルの径が前記上部室の径より小さい;外部容器内に前記 遠心分離チューブを入れるステップ、ここで前記外部容器が、前記遠心分離チュ ーブの環状接続セグメントを包囲するのに十分な量を有する液体支持媒体を含む ;前記サンプルを遠心するステップ;並びに関心の画分を回収するステップを含 むことを特徴とする方法を提供する。 図面の簡単な説明 図1は、本発明の遠心分離チューブ及びアダプター装置の側面図である。 図2は、図1の線3−3を通過する図1の装置の断面図を示す。 図3は、図1の線5−5を通過する図1の装置の断面図を示す。 図4は、本発明の遠心分離チューブ及びアダプター装置の他の実施形態の側面 図である。 図5は、全血液サンプルの遠心の後の、図1の装置を示す。 好ましい実施形態の記載 遠心分離チューブは、サンプルに適合するいずれの適した材料からも作製する ことができ、それらが使用された時における適用のため、遠心力に耐えることが できる。例えば、低重力(g)において用いるためのチューブは、ガラスのよう な堅い材料、又はポリエチレンもしくはポリプロピレンのようなフレキシブルな 材料から作製することができる。高速マイクロフージ(miclofuge)又は超遠心分 離チューブは、ポリプロピレン又はポリエチレンのようなポリマーから作製され る。 高い遠心速度において、フレキシブルチューブは、いくらかのチューブの変形 をおこし、チューブの下部分における支持物が必要とされ得る。支持物は、遠心 ローターにおけるキャビティー内のチューブの囲いにより供され得る。あるいは 支持物は、チューブをきちんと囲い、ローターにおけるキャビティー内に同様に きちんと当てはまる堅いチューブアダプターにより供され得る。スインギングバ ケット遠心機において、キャビティーを含むチューブは、ローター内に固定化さ がないが、このチューブは、遠心バケット内になお維持される。 チューブアダプターは、チューブの形に従い、例えば米国特許第4,032,066号 に開示されるような、アダプターが設計される特定の遠心機の形及び大きさに適 合する外部形状を有する。他のシステムにおいて、手の込んだアダプターは、米 国特許第4,692,137号、5,236,409号、及びPCT公報第WO/91/06373号(国際出願 番号第PCT/US90/06326号)に開示されるように、チューブの外部端の周りにす き間のない密閉を供するために、ヒンジが備えられるか、又は2つに分かれ得る 。 米国特許第4,451,250号は、円柱状サンプルチューブの内側に適合するための チューブアダプターを開示し、これは、チューブ内からチューブに対する構造的 な支持物を提供する。これらの型の支持物は、大量のサンプルを処理しなければ ならない時、実際に用いることが困難であり、サンプルの無菌性の維持が重要で ある時、実用的でない。 高遠心速度で用いられるチューブは、サンプルの損失及び生物学的材料での遠 心分離のコンタミネーションを導き得るチューブの変形及び崩壊の原因となり得 るので、円柱状である。 非円柱状遠心チューブは、特殊な使用のために開示されている。いくつかの適 用において、非円柱状チューブは低遠心速度で用いられる。例えば、米国特許第 4,861,477号のキムラ(Kimura)は、互いに結合した時、サンプル担体として作 用するダンベル形の空隙を規定する2つの半円柱状厚型プラスチックブロックか ら作製されるプラスチック遠心分離チューブを開示する。このサンプル担持体は 、ブロックの厚みが中間の領域において増加されているために、上部及び下部セ クションの径より重要に小さい径を有する中間のセクションを有する。いくつか のキムラの実施形態においては、細胞サンプルへのアクセスのためチューブの底 に除去可能プラグが提供される。 円錐チューブは、チューブの底におけるペレットのパッキングを増加させるの に用いられ得、これは上清の除去を容易にする。円錐チューブは、米国特許第4, 190,120号に開示されるように縮められた径の半球体と共に円柱状の基体を有し 、径の間の移動は円錐セクションを通して達成される。高速度でこれらのチュー ブを用いることは、遠心の間のチューブの支持を提供するために、チューブの下 側円錐部分に適合する特殊なアダプターを必要とする。円錐チュー ブのためのアダプターは、例えば米国特許第4,990,129号に開示される。 本発明によれば、チューブ内のサンプルへの容易なアクセスを許容し、チュー ブの内壁の形のため増加された細胞分離を供し、そしてチューブの狭い部分にお ける束縛物を広げることによって関心の部分の回収を容易にするチューブを提供 する。 本発明のサンプルチューブは、広い上部分と狭い下部分を有するいずれの非円 柱状チューブでもあり得る。しかしながら、チューブの一部分は円柱状とするこ とができる。例えば、チャンネル、下部室、及び上部室の少くとも一つは円柱状 とすることができ、この時チューブは非円柱状の全体の形をなお維持する。本発 明のチューブは、ポリプロピレン、可塑剤と共に用いるポリビニルクロライド、 又はポリエチレンのような変形可能な材料から構成される。本発明のチューブは 、好ましくは、2mm未満の壁厚を有する。 本発明の好ましい実施形態において、チューブは狭い接続チャンネルで一体的 に接続された上部室及び下部室を有し、これは砂時計の形のチューブを規定する 。本発明のこの実施形態を、図1に示す。図1のチューブ(2)は、砂時計の形 であり、上部(6)及び下部(8)室とともに狭い接続チャンネル(4)を含む 。該接続チャンネル及び前記上部室は環状接続セグメント領域(7)により一体 的に接続されている。該環状接続セグメントは平面状、又は一般的に凹面状もし くは凸面状とすることができる。前記セグメントは、好ましくは細胞又は他の生 物学的材料が沈殿し得るいずれの本質的に水平な表面をも供しないで上部室及び チャンネルの径の間の円滑な移動を供するべきである。前記下部室(8)は、底 において密閉されている一方、上部室(6)はサンプルのチューブ内への充填を 許容するため開口している。いくつかの実施形態において、上部室 は、除去可能キャップ及び熱シーリング等のようないずれの適当な密閉手段によ っても密閉され得る。 遠心の間、サンプルチューブ(2)は、液体支持媒体(12)を含むアダプター を含む外部容器(10)内に収容される。図2は、図1の線3−3を通過する断面 図における図1のチューブを示し、一方図3は、図1の線5−5を通過する断面 図における図1のチューブを示す。 高速遠心において、液体媒体は、チューブの変形及び崩壊を防ぐため、チュー ブの狭いチャンネル及び環状接続セグメントを支持する。いくつかの適用に適す る極めて低速度において、この液体媒体を省略することができる。液体支持媒体 がチューブの過剰な変形及び崩壊を防ぐために要求される速度の決定は、当業者 の範囲内であり、適用されるgの力、サンプルの量及び化学組成、並びにチュー ブ壁の化学組成及び厚さによる。 液体支持媒体は、遠心の間、サンプルチューブの支持を供するであろう。液体 支持媒体内へのチューブの挿入によりサンプルチューブ覆うのに十分な流動性を 有する、いずれの適した材料でもあり得る。前記の一般性を限定しないが、適し た液体支持媒体は、サンプルチューブを覆って支持することによりチューブの崩 壊を防ぐことができるいずれの液体又はゲル物質をも含む。好ましい液体支持媒 体は水である。 液体支持媒体は、サンプルチューブが外部容器内に挿入される前又は後に外部 容器に添加することができる。サンプルチューブにより置き換えられる液体の体 積の重量は、サンプル及びチューブの重量にほぼ等しい。遠心の間、外部容器の 内壁の径が、サンプルチューブの上部室に接触するのに十分に小さい実施形態に おいては、外部容器自体が上部室の支持を供する。このように、これらの実施形 態において、液体媒体は環状接続セグメント及び狭いチャンネルを好ましくは十 分に支持する。この実施形態において、液体支持媒体は、サンプルチューブの添 加の前に外部室内に予め挿入されるべきである。 いくつかの適用において、外部容器は、液体支持媒体がキャビティー内に含ま れてサンプルチューブがその中に挿入されるように、遠心ローター自体の開口又 はキャビティーとすることができる。同様にスインギングバケットローターでの 使用において、該バケットは、液体支持媒体がスインギングバケット内に含まれ るように外部容器として作用することができる。 本発明の他の実施形態において、外部容器は、適用されるgの力に耐えること ができるいずれの適した容器でもあり得る。適した外部容器は、ガラスもしくは プラスチックテストチューブ、堅いプラスチックチューブアダプター、又は遠心 分離ボトル等を含む。外部容器の径は、サンプルチューブの径より著しく大きく なく、これにより、減速及び加速の間、外部容器内のサンプルチューブの過剰な 側方への動きを防止する。 本発明のいくつかの実施形態において、外部容器は、該外部容器内に配置され 、各々が液体媒体により支持された複数のサンプルを含むことができる。この実 施形態において、各々のサンプルチューブの狭いチャンネル部分、環状接続セグ メント、及び上部室を覆うのに十分な量の液体支持媒体を提供する。置き換えら れる液体の体積の重量はサンプルチューブの合わせた重量にほぼ等しい。 本発明のサンプルチューブは予備検査を行うことができるので、与えられた量 のサンプルに対して、設定された遠心機回転速度及び時間で、要求される画分を チューブの狭い部分において単離することにより、画分のバンドが広かり要求さ れる画分の回収が極めて容 易になる。 遠心後、チューブは外部容器から取り除かれる。チューブ内の関心の画分の位 置により容易に画分を得ることができる。特定のサンプルのタイプ及び量に対し て予備検定されたチューブの使用は、関心の画分が遠心後のチューブのチャンネ ル内に位置することを可能にする。チューブがポリプロピレンのような熱変形可 能かつ密閉可能なプラスチックである場合、関心の画分の上及び下のチューブの 部分は密閉が解かれ、画分を容易にチャンネルから単離することができる。同様 に、サンプルチューブの壁を外科用メス又は他の類似物で切断して、関心の画分 を他の画分から分離することができる。 関心のフラクションがチューブの下部分にある場合、この画分はチャンネルの 密閉を解くことにより回収され、より低い密度の画分は、回収されるべき画分に 混入しない。 使用において、チューブ内の関心のフラクションの位置は、サンプルより大き な密度を有する生物学的に許容される非水可溶性の液体の添加により処理され得 る。好ましい液体は、1.8g/mlの密度を有する、完全にフッ素化された脂肪族 の化合物であるフルオリナート(FluorinertTM)(Sigma Chemical Co.)である 。 本発明の他の好ましいチューブを図4に示す。このチューブ(2)は、その下 部端において密閉された狭い下部室(14)に接続された広い上部室(6)を有す る。このチューブは、該チューブの狭い下部分全体を浸漬するのに十分なレベル における液体支持媒体(12)を含む外部容器(10)内に浸漬される。図4に従う 、小量のサンプルを遠心するのに特に適したチューブは、狭い、加熱密閉された 底室とチューブの上部室として作用するバルブ部分内に切断された横の穴とを有 するプラスチック製ホールピペットである。本発明のこの実施形態において用い るのに適したホールピペットは、一般的 な目的の、目盛りのついた、微細チップの、及び狭い軸のホールピペットであり 、シグマケミカル(Sigma Chemical Co.,St.Louis,Mo)が得られる。 チューブは、いずれの遠心分離の適用にも用いることができる。好ましい適用 は、生物学的材料の構成物の分離においてである。本明細書において用いられる 生物学的材料は、一次細胞及び細胞培養物を含む原核細胞、真核細胞、及びいず れかのソースからの細胞片;細胞膜;ウィルス;核酸、蛋白質、脂質等のような 高分子及びその組合せ;核、リポソーム、リボソーム、及びミトコンドリア等の ような細胞構成物もしくはその組み合わせ;尿、唾液、血液、又はその画分もし くは組合せのような生物学的流体;並びにこれらのいずれの組合せも含む。 特に好ましい適用は、本明細書に引用によりその内容が組み込まれる同時係属 中の米国特許出願通し番号第08/190,327号(Attorney Dacxet 16249-1)に開示 されるような完全な血液構成物の分離である。完全な血液はチューブの上部室に 添加される。このチューブは、密度による細胞の分離を容易にするため一連の増 加速度で回転される。図1のチューブを用いた完全な血液のサンプル分画結果を 図5に示す。遠心の後、チューブの下部は赤血球のペレット(16)を含む。まん 中の層(18)は赤血球層の最上部並びに白血球、顆粒球、及び他の単核細胞を含 む“バフィーコート(buffy coat)”層を含み、一方、主として上部室内に見い 出され上層(20)は、低密度血漿画分を含む。 遠心の間、サンプルチューブの壁の形は、サンプルに対する分離特性を与える 。いずれかの特定の理論に限定されることを意図しないが、狭まったチャンネル 部分へ向かうチューブを通してのサンプルの移動は、垂直でない経路での細胞の 移動を供すると確信される 。これは、上部室の下側部分における攪流のゾーンを導き、それらの密度及び分 離特性に従って細胞が分離する円柱状チューブで得られるより増加された傾向を 与える。チューブの可塑性は、遠心の間、少しの及びくり返しのチューブの変形 を導き、これは、チューブの壁に関係して、及び互いに関係して細胞の付加的な 動きを与える。このように、チューブ内において互いに関係する細胞の非直線的 な動き、及びこれによるチャンネルの上部の入り口における流体攪流を与えるこ とにより、細胞が共に凝集する(clump)傾向が減少し、代わりに異なる沈殿特 性を有する細胞が細胞の凝集(aggregation)において拘束されることの発生率 を減少させる。 本明細書内の全ての出版物、特許、及び特許出願は、あたかも各々の個々の出 版物又は特許出願が引用により組み込まれて詳細に及び個々に示されるのと同じ 程度まで、引用により組み込まれている。 本発明の上記の好ましい実施形態の記載は、実例及び説明の目的で提供されて いる。それらは、余す所のない記載であること、又は本発明を記載される正確な 形態に限定することを意図せず、多くの改良及び変化が、上述の教授の範囲で可 能であり、本発明の範囲内であることを意図する。 上述の発明は、理解を明確にする目的で実例及び実施例の手段によりいくらか 詳細に記載されているが、特定の変換及び改良が添付の請求の範囲の範囲内で行 われ得ることは明らかである。
【手続補正書】特許法第184条の8 【提出日】1996年2月2日 【補正内容】 請求の範囲 7.前記遠心分離チューブがポリエチレンであることを特徴とする請求項2に 記載の装置。 8.前記液体支持媒体が水であることを特徴とする請求項2に記載の装置。 9.生物学的材料のサンプルの構成物を分離する方法であって,該方法が、 a)前記サンプルを遠心分離チューブ内に入れるステップであって、該遠心分 離チューブが、チャンネル上に配設されかつ一体的に接続された上部室を有し、 前記チャンネルの径が前記上部室の径より小さいことを特徴とするステップと、 b)外部容器内に前記遠心分離チューブを入れるステップであって、前記外部 容器が、前記遠心分離チューブの環状接続セグメントを包囲するのに十分な液体 支持媒体を含むことを特徴とするステップと、 c)前記サンプルを遠心して、前記生物学的材料のサンプルの構成物を分離す るステップと、 を含むことを特徴とする方法。 10.前記生物学的材料のサンプルが血液であることを特徴とする請求項9に記 載の方法。 11.前記遠心分離チューブの前記チャンネルから、前記サンプルの構成物を回 収するステップを更に含むことを特徴とする請求項10に記載の方法。 12.前記液体支持媒体が水であることを特徴とする請求項9に記載の方法。 13.前記サンプルが、前記生物学的材料の少くとも一部分の密度 より大きい密度を有する生物学的に不活性な材料を更に含むことを特徴とする請 求項9に記載の方法。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 EP(AT,BE,CH,DE, DK,ES,FR,GB,GR,IE,IT,LU,M C,NL,PT,SE),OA(BF,BJ,CF,CG ,CI,CM,GA,GN,ML,MR,NE,SN, TD,TG),AP(KE,MW,SD,SZ),AM, AT,AU,BB,BG,BR,BY,CA,CH,C N,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,GB,GE ,HU,JP,KE,KG,KP,KR,KZ,LK, LR,LT,LU,LV,MD,MG,MN,MW,M X,NL,NO,NZ,PL,PT,RO,RU,SD ,SE,SI,SK,TJ,TT,UA,UZ,VN (72)発明者 ザロウイッツ,マイケル アラン アメリカ合衆国,カリフォルニア 94070, サン カルロス,サンセット ドライブ 981

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1.サンプルの遠心分離のためのチューブ及びアダプター装置であって、該装 置が、 a)環状接続セグメントによりチャンネル上に配設されかつ一体的に接続され た上部室を有する遠心分離チューブであって、前記チャンネルの径が前記上部室 の径より小さいことを特徴とする前記遠心分離チューブと、 b)前記遠心分離チューブを中に受容することができる開き口を有する頂部、 及び底部を有する外部容器であって、該外部容器が前記遠心分離チューブの前記 チャンネル及び前記環状接続セグメントを包囲するのに十分な液体支持媒体を含 む前記外部容器と、 を含むことを特徴とするチューブ及びアダプター装置。 2.前記遠心分離チューブが、前記チャンネルと一体化されかつ該チャンネル の下に配設された下部室を更に含み、該下部室の径が前記チャンネルの径より大 きいことを特徴とする請求項1に記載の装置。 3.前記チューブ及び前記サンプルにより置き換えられた前記液体支持媒体の 体積の重量が、前記チューブ及び前記サンプルの体積の重量とほぼ同量であるこ とを特徴とする請求項1に記載の装置。 4.前記外部容器が遠心ローターキャビティーであることを特徴とする請求項 2に記載の装置。 5.前記外部容器がテストチューブであることを特徴とする請求項2に記載の 装置。 6.前記遠心分離チューブがポリプロピレンであることを特徴とする請求項2 に記載の装置。 7.前記遠心分離チューブがポリエチレンであることを特徴とする請求項2に 記載の装置。 8.前記液体支持媒体が水であることを特徴とする請求項2に記載の装置。 9.環状接続セグメントによりチャンネル上に配設されかつ一体的に接続され た上部室を含む遠心分離チューブであって、前記チャンネルの径が前記上部室の 径より小さく、前記チューブの厚みが2mm未満であることを特徴とする遠心分離 チューブ。 10.前記チャンネルと一体化されかつ該チャンネルの下に配設された下部室を 更に含む請求項9に記載の遠心分離チューブであって、前記下部室の径が前記チ ャンネルの径より大きいことを特徴とする遠心分離チューブ。 11.前記チューブがポリプロピレンであることを特徴とする請求項10に記載の 遠心分離チューブ。 12.前記チューブがポリエチレンであることを特徴とする請求項10に記載の遠 心分離チューブ。 13.生物学的材料のサンプルの構成物を分離する方法であって、該方法が、 a)前記サンプルを遠心分離チューブ内に入れるステップであって、該遠心分 離チューブが、チャンネル上に配設されかつ一体的に接続された上部室を有し、 前記チャンネルの径が前記上部室の径より小さいことを特徴とするステップと、 b)外部容器内に前記遠心分離チューブを入れるステップであって、前記外部 容器が、前記遠心分離チューブの環状接続セグメントを包囲するのに十分な液体 支持媒体を含むことを特徴とするステップと、 c)前記サンプルを遠心して、前記生物学的材料のサンプルの構 成物を分離するステップと、 を含むことを特徴とする方法。 14.前記生物学的材料のサンプルが血液であることを特徴とする請求項13に記 載の方法。 15.前記遠心分離チューブの前記チャンネルから、前記サンプルの構成物を回 収するステップを更に含むことを特徴とする請求項14に記載の方法。 16.前記液体支持媒体が水であることを特徴とする請求項13に記載の方法。 17.前記サンプルが、前記生物学的材料の少くとも一部分の密度より大きい密 度を有する生物学的に不活性な材料を更に含むことを特徴とする請求項13に記載 の方法。
JP52013695A 1994-01-31 1995-01-23 遠心分離管及び適合器 Expired - Fee Related JP3357369B2 (ja)

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