JPH09208486A - 血清アルブミンの部分構造を有する細胞障害物質 - Google Patents
血清アルブミンの部分構造を有する細胞障害物質Info
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- JPH09208486A JPH09208486A JP8020988A JP2098896A JPH09208486A JP H09208486 A JPH09208486 A JP H09208486A JP 8020988 A JP8020988 A JP 8020988A JP 2098896 A JP2098896 A JP 2098896A JP H09208486 A JPH09208486 A JP H09208486A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 新規で安全な抗腫瘍性物質を開発する。
【解決手段】 アルブミンまたはその断片と、場合によ
り緩衝液からなる抗腫瘍剤。
り緩衝液からなる抗腫瘍剤。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は腫瘍細胞に対する細
胞障害活性を有するタンパク質断片に関する。
胞障害活性を有するタンパク質断片に関する。
【０００２】
【従来の技術】癌細胞は正常細胞に比べて急速な増殖を
することを特徴とする。その特徴を利用して、増殖性の
細胞に対して毒性をもつ種々の薬剤を用いる化学療法が
行われている。これらの薬剤は癌細胞の核酸合成を抑制
したり、代謝を阻害することにより増殖を阻止する。
することを特徴とする。その特徴を利用して、増殖性の
細胞に対して毒性をもつ種々の薬剤を用いる化学療法が
行われている。これらの薬剤は癌細胞の核酸合成を抑制
したり、代謝を阻害することにより増殖を阻止する。
【０００３】現在使用されている抗癌剤には、シクロホ
スファミド、ブスルファン、チオテパなどのアルキル化
剤、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、５−フ
ルオロウラシル、シトシンアラビノシドなどの核酸合成
の拮抗阻害剤、アクチノマイシンＤ、ダウノマイシン、
アドリアマイシン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシ
ン、ネオカルチノスタチンなどの抗生物質、およびビン
ブラスチン、ビンクリスチンなどの植物アルカロイドな
どがある。
スファミド、ブスルファン、チオテパなどのアルキル化
剤、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、５−フ
ルオロウラシル、シトシンアラビノシドなどの核酸合成
の拮抗阻害剤、アクチノマイシンＤ、ダウノマイシン、
アドリアマイシン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシ
ン、ネオカルチノスタチンなどの抗生物質、およびビン
ブラスチン、ビンクリスチンなどの植物アルカロイドな
どがある。
【０００４】しかしながら、これらの抗癌剤は抗菌剤に
比べて選択毒性が低く、したがって正常細胞にも作用す
るために、副作用が強く、その使用は著しく制約を受け
ている。
比べて選択毒性が低く、したがって正常細胞にも作用す
るために、副作用が強く、その使用は著しく制約を受け
ている。
【０００５】また、これらの抗癌剤の他に、特定の癌の
栄養要求性の特徴を利用したものとしてアスパラギナー
ゼなどの酵素や、ホルモン依存性の組織の癌に対する性
ホルモンや副腎皮質ホルモンなども抗癌剤として用いら
れている。しかし、これらの薬剤もアレルギーなどの副
作用が強かったり、あるいはホルモン剤の場合には効果
が一過性であるなどの欠点を有している。
栄養要求性の特徴を利用したものとしてアスパラギナー
ゼなどの酵素や、ホルモン依存性の組織の癌に対する性
ホルモンや副腎皮質ホルモンなども抗癌剤として用いら
れている。しかし、これらの薬剤もアレルギーなどの副
作用が強かったり、あるいはホルモン剤の場合には効果
が一過性であるなどの欠点を有している。
【０００６】
【発明が解決すべき課題】本発明の目的は、上述した従
来技術の欠点を克服する新規な抗腫瘍性物質を開発する
ことにある。
来技術の欠点を克服する新規な抗腫瘍性物質を開発する
ことにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】血清アルブミンは、血液
から血球などの有形成分を除いた残りである血漿中のタ
ンパク質の約５０％を占める主要なタンパク質で、主に
肝臓で合成される。血清アルブミンは、血液の浸透圧の
維持、イオン、脂肪酸などの運搬、末梢組織へのアミノ
酸供給などの働きをするとされている。しかしながら、
血清アルブミンは、このように血漿の主要なタンパク質
であるにもかかわらず、他の血液成分に比較して疾病へ
の関わりという点からは研究者の興味がより希薄のよう
である。
から血球などの有形成分を除いた残りである血漿中のタ
ンパク質の約５０％を占める主要なタンパク質で、主に
肝臓で合成される。血清アルブミンは、血液の浸透圧の
維持、イオン、脂肪酸などの運搬、末梢組織へのアミノ
酸供給などの働きをするとされている。しかしながら、
血清アルブミンは、このように血漿の主要なタンパク質
であるにもかかわらず、他の血液成分に比較して疾病へ
の関わりという点からは研究者の興味がより希薄のよう
である。
【０００８】一方、近年、遺伝子配列の変化が生物の進
化のあとを物語るものとして注目されている。遺伝子配
列の変化は、ランダムな核酸の置換、付加あるいは欠損
が原因で、長い年月の間に一定の割合で観察されるが、
生体の機能に有用なタンパク質をコードする遺伝子配列
は保存される傾向にある。したがって、現存するタンパ
ク質の配列には、生体の生存に関わる何らかの意味ある
情報が刻まれていると推測される。
化のあとを物語るものとして注目されている。遺伝子配
列の変化は、ランダムな核酸の置換、付加あるいは欠損
が原因で、長い年月の間に一定の割合で観察されるが、
生体の機能に有用なタンパク質をコードする遺伝子配列
は保存される傾向にある。したがって、現存するタンパ
ク質の配列には、生体の生存に関わる何らかの意味ある
情報が刻まれていると推測される。
【０００９】タンパク質は、２０種のアミノ酸のランダ
ムな配列から成っているが、数種のタンパク質のアミノ
酸配列を分析すると、アミノ酸同士にも親和性があるも
のとないものが観察される。最近の研究によると、８種
類の相互に無関係なタンパク質のアミノ酸配列における
隣り合う２つのアミノ酸を調べた結果、１５ジペプチド
ごとにホモジペプチドが１つ現れ、同種のアミノ酸のジ
ペプチドは出現頻度がタンパク質の由来に無関係に高い
ことが明らかとなった（大野 乾、実験医学、12(3):89
-99, 1994）。一方、親和性の低い組み合わせの１つと
して、アルギニン−アスパラギン酸の組み合わせが挙げ
られ、実際の出現頻度はアミノ酸組成から計算した出現
期待頻度の１／３以下であった。
ムな配列から成っているが、数種のタンパク質のアミノ
酸配列を分析すると、アミノ酸同士にも親和性があるも
のとないものが観察される。最近の研究によると、８種
類の相互に無関係なタンパク質のアミノ酸配列における
隣り合う２つのアミノ酸を調べた結果、１５ジペプチド
ごとにホモジペプチドが１つ現れ、同種のアミノ酸のジ
ペプチドは出現頻度がタンパク質の由来に無関係に高い
ことが明らかとなった（大野 乾、実験医学、12(3):89
-99, 1994）。一方、親和性の低い組み合わせの１つと
して、アルギニン−アスパラギン酸の組み合わせが挙げ
られ、実際の出現頻度はアミノ酸組成から計算した出現
期待頻度の１／３以下であった。
【００１０】血清アルブミンのアミノ酸配列を調べる
と、この極めて稀なアルギニン−アスパラギン酸配列
が、ヒトでは２４−２５位の位置に存在し、しかもこの
配列はヒト、ラット、ウシ、ヒツジ、ブタ、ニワトリな
どに共通に観察される。このことは、この親和性の低い
（すなわち結合が切断され易い）配列が切断されたあと
のアルブミン断片に、何らかの生理的に重要な意味があ
ると推測された。
と、この極めて稀なアルギニン−アスパラギン酸配列
が、ヒトでは２４−２５位の位置に存在し、しかもこの
配列はヒト、ラット、ウシ、ヒツジ、ブタ、ニワトリな
どに共通に観察される。このことは、この親和性の低い
（すなわち結合が切断され易い）配列が切断されたあと
のアルブミン断片に、何らかの生理的に重要な意味があ
ると推測された。
【００１１】本発明者は、以上のような事実および植物
レクチン（リシンのようなアルブミン・ファミリーに属
するタンパク質を含む）に抗腫瘍活性があるとの報告
（Dietrich, JB et al., Anti-Cancer Drugs, 3:507-51
1, 1992）に基づいて、アルブミン関連タンパク質の抗
腫瘍活性を検討したところ、アルブミンまたはその断片
が腫瘍細胞に対して顕著な細胞障害性を有することを見
いだして本発明を完成した。
レクチン（リシンのようなアルブミン・ファミリーに属
するタンパク質を含む）に抗腫瘍活性があるとの報告
（Dietrich, JB et al., Anti-Cancer Drugs, 3:507-51
1, 1992）に基づいて、アルブミン関連タンパク質の抗
腫瘍活性を検討したところ、アルブミンまたはその断片
が腫瘍細胞に対して顕著な細胞障害性を有することを見
いだして本発明を完成した。
【００１２】すなわち、本発明は、アルブミンまたはそ
の断片と、場合により緩衝液からなる抗腫瘍剤を提供す
る。
の断片と、場合により緩衝液からなる抗腫瘍剤を提供す
る。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明で使用するアルブミンは、
動物の細胞あるいは体液中に含まれる可溶性タンパク質
であり、ヒトまたはウシの血漿から得られるヒトアルブ
ミンまたはウシアルブミンが好ましく、このようなアル
ブミンは市販品（例えばＳＩＧＭＡ社製）として入手し
うる。
動物の細胞あるいは体液中に含まれる可溶性タンパク質
であり、ヒトまたはウシの血漿から得られるヒトアルブ
ミンまたはウシアルブミンが好ましく、このようなアル
ブミンは市販品（例えばＳＩＧＭＡ社製）として入手し
うる。
【００１４】また、アルブミン断片としては、アルブミ
ンの分子量３０，０００以下の分画が好ましく、アルブ
ミンの分子量１０，０００以下の分画がより好ましい。
ンの分子量３０，０００以下の分画が好ましく、アルブ
ミンの分子量１０，０００以下の分画がより好ましい。
【００１５】さらにウシ血清アルブミンの公知のアミノ
酸配列を基にして合成したペプチドも顕著な細胞障害性
を有することが明らかとなり、これらも本発明のアルブ
ミン断片に含まれる。ペプチドは１〜６０７アミノ酸か
らなるものが好ましく、１〜４３５アミノ酸からなるも
のがより好ましく、１〜２０アミノ酸からなるものが最
も好ましい。このようなペプチドの例としては、例えば
配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列をもつペプチド
が挙げられる。なお、配列番号１に示すアミノ酸配列を
有するペプチドは天然ウシアルブミンの部分ペプチド
（アミノ酸残基２５〜４４）であり、このペプチドは上
述したように、ウシアルブミンの２４−２５位にあるア
ルギニン−アスパラギン酸の間で切断されたアスパラギ
ン酸を含む２０アミノ酸からなるペプチドである。これ
らの天然アルブミン断片のアミノ酸配列の一部を欠失、
付加あるいは置換したペプチドも本発明の示す細胞障害
活性を有する限り本発明のアルブミン断片に含まれる。
酸配列を基にして合成したペプチドも顕著な細胞障害性
を有することが明らかとなり、これらも本発明のアルブ
ミン断片に含まれる。ペプチドは１〜６０７アミノ酸か
らなるものが好ましく、１〜４３５アミノ酸からなるも
のがより好ましく、１〜２０アミノ酸からなるものが最
も好ましい。このようなペプチドの例としては、例えば
配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列をもつペプチド
が挙げられる。なお、配列番号１に示すアミノ酸配列を
有するペプチドは天然ウシアルブミンの部分ペプチド
（アミノ酸残基２５〜４４）であり、このペプチドは上
述したように、ウシアルブミンの２４−２５位にあるア
ルギニン−アスパラギン酸の間で切断されたアスパラギ
ン酸を含む２０アミノ酸からなるペプチドである。これ
らの天然アルブミン断片のアミノ酸配列の一部を欠失、
付加あるいは置換したペプチドも本発明の示す細胞障害
活性を有する限り本発明のアルブミン断片に含まれる。
【００１６】本発明において、アルブミンまたはその断
片とともに用いられる緩衝液としては、リン酸緩衝液ま
たはトリス−塩酸緩衝液が好ましいが、これに限定され
ない。緩衝液のｐＨは６．７〜９．０が好ましい。
片とともに用いられる緩衝液としては、リン酸緩衝液ま
たはトリス−塩酸緩衝液が好ましいが、これに限定され
ない。緩衝液のｐＨは６．７〜９．０が好ましい。
【００１７】本発明の抗腫瘍剤は、上記アルブミンまた
はその断片を緩衝液に溶解して使用する。緩衝液１ｍｌ
に対してアルブミンまたはその断片を３〜１０ｍｇで溶
解するのが好ましい。
はその断片を緩衝液に溶解して使用する。緩衝液１ｍｌ
に対してアルブミンまたはその断片を３〜１０ｍｇで溶
解するのが好ましい。
【００１８】本発明の抗腫瘍剤は腫瘍細胞ＦＭ３Ａに対
してインビトロで顕著な細胞障害性を示した。緩衝液を
用いずに生理食塩水で処理したウシアルブミンではこの
ような細胞障害性は観察されなかった。しかしながら、
後述する実施例５および６に示すように、短いペプチド
を用いた場合には、緩衝液を加えなくても細胞障害活性
を示した。この結果は、緩衝液がアルギニン−アスパラ
ギン酸間の切断に必要であることを示唆するものである
が、本発明の範囲はこのような作用機構には限定されな
い。
してインビトロで顕著な細胞障害性を示した。緩衝液を
用いずに生理食塩水で処理したウシアルブミンではこの
ような細胞障害性は観察されなかった。しかしながら、
後述する実施例５および６に示すように、短いペプチド
を用いた場合には、緩衝液を加えなくても細胞障害活性
を示した。この結果は、緩衝液がアルギニン−アスパラ
ギン酸間の切断に必要であることを示唆するものである
が、本発明の範囲はこのような作用機構には限定されな
い。
【００１９】なお、細胞障害性および生存率を測定する
には、試料を各種濃度で腫瘍細胞に添加し、１７時間ま
たは２４時間後に測定した。生細胞と死細胞の判別には
トリパンブルー染色液（０．４％）を用いて、非染色細
胞は生細胞と、染色細胞は死細胞と判別した。また、細
胞障害性（阻害率）の算出には以下の計算式を用いた。
には、試料を各種濃度で腫瘍細胞に添加し、１７時間ま
たは２４時間後に測定した。生細胞と死細胞の判別には
トリパンブルー染色液（０．４％）を用いて、非染色細
胞は生細胞と、染色細胞は死細胞と判別した。また、細
胞障害性（阻害率）の算出には以下の計算式を用いた。
【００２０】
【化１】
【００２１】本発明の抗腫瘍剤は上述した濃度で緩衝液
中にアルブミンまたはその断片を溶解して調製すること
ができる。あるいは、緩衝液とアルブミンまたはその断
片とを別々の容器に封入し、投与時に溶解してもよい。
本発明の抗腫瘍剤は注射剤として、静脈内、筋肉内、皮
下投与することができる。本発明の抗腫瘍剤の投与量
は、治療すべき腫瘍の種類、重症度、患者の年齢、体重
などにより変更でき、具体的には臨床医の判断により決
定する。
中にアルブミンまたはその断片を溶解して調製すること
ができる。あるいは、緩衝液とアルブミンまたはその断
片とを別々の容器に封入し、投与時に溶解してもよい。
本発明の抗腫瘍剤は注射剤として、静脈内、筋肉内、皮
下投与することができる。本発明の抗腫瘍剤の投与量
は、治療すべき腫瘍の種類、重症度、患者の年齢、体重
などにより変更でき、具体的には臨床医の判断により決
定する。
【００２２】以下に本発明を実施例によりさらに詳しく
説明するが、本発明の範囲はこれに限定されない。
説明するが、本発明の範囲はこれに限定されない。
【００２３】
【実施例】実施例において使用したウシアルブミンおよ
びヒトアルブミンは以下のものである。
びヒトアルブミンは以下のものである。
【００２４】ウシアルブミンはＳＩＧＭＡ社製のＡ−９
３０６、Ｌｏｔ５３Ｈ０２３６を用いた。これはニュー
ジーランド製ウシ血漿を塩析にて分画して得られる画分
Ｖであり、最低９９％の純度を有し、エンドトキシンの
含量は少なく（０．１ｎｇ／ｍｇ以下）、実質的にグロ
ブリンを含まない。また、窒素含量は１５．３％であ
り、水含量は４．９％である。
３０６、Ｌｏｔ５３Ｈ０２３６を用いた。これはニュー
ジーランド製ウシ血漿を塩析にて分画して得られる画分
Ｖであり、最低９９％の純度を有し、エンドトキシンの
含量は少なく（０．１ｎｇ／ｍｇ以下）、実質的にグロ
ブリンを含まない。また、窒素含量は１５．３％であ
り、水含量は４．９％である。
【００２５】ヒトアルブミンはＳＩＧＭＡ社製のＡ−３
７８２、Ｌｏｔ３２Ｈ９３００を用いた。これは実質的
に脂肪酸を含まず（脂肪酸含量：約０．００５％）、ま
た実質的にグロブリンを含まない純度約９９％の凍結乾
燥粉末である。
７８２、Ｌｏｔ３２Ｈ９３００を用いた。これは実質的
に脂肪酸を含まず（脂肪酸含量：約０．００５％）、ま
た実質的にグロブリンを含まない純度約９９％の凍結乾
燥粉末である。
【００２６】特記しない限り、アルブミンは各ｐＨの各
緩衝液に１０ｍｇ／ｍｌで溶解して使用した。
緩衝液に１０ｍｇ／ｍｌで溶解して使用した。
【００２７】また、腫瘍細胞としてはＦＭ３ＡまたはＫ
５６２細胞を用いた。これらの細胞は東北大学歯学部微
生物学教室から恵与されたものを使用した。
５６２細胞を用いた。これらの細胞は東北大学歯学部微
生物学教室から恵与されたものを使用した。
【００２８】なお、実験はすべて３回実施し、その平均
で表示した。
で表示した。
【００２９】実施例１：リン酸緩衝液処理ウシアルブミ
ンの細胞障害性 ｐＨ８．０のリン酸緩衝液で処理したウシアルブミン１
０ｍｇ／ｍｌを５０％、２５％濃度で腫瘍細胞に加え、
細胞障害性を検討した。陰性対照として培地（ＲＰＭＩ
１６４０）のみを、陽性対照として生理食塩水を用いて
同じ試験を行った。得られた結果を表１および図１に示
す。
ンの細胞障害性 ｐＨ８．０のリン酸緩衝液で処理したウシアルブミン１
０ｍｇ／ｍｌを５０％、２５％濃度で腫瘍細胞に加え、
細胞障害性を検討した。陰性対照として培地（ＲＰＭＩ
１６４０）のみを、陽性対照として生理食塩水を用いて
同じ試験を行った。得られた結果を表１および図１に示
す。
【００３０】
【表１】 生細胞数(２×１０4) 阻害率(％) 培地のみ ９．５ − 生理食塩水＋ ５０％アルブミン １２ ０ ２５％アルブミン ８．５ ０ リン酸緩衝液＋ ５０％アルブミン ５ ５８ ２５％アルブミン ７ １８
【００３１】これらの結果から明らかなように、リン酸
緩衝液で処理したウシアルブミンは５０％および２５％
濃度でそれぞれ５８％および１８％の細胞障害性を示し
た。生理食塩水で処理したウシアルブミンは細胞障害性
を全く示さなかった。
緩衝液で処理したウシアルブミンは５０％および２５％
濃度でそれぞれ５８％および１８％の細胞障害性を示し
た。生理食塩水で処理したウシアルブミンは細胞障害性
を全く示さなかった。
【００３２】実施例２：アルブミン各分画の細胞障害性 ウシアルブミンをウルトラフリーメンブレンフィルトレ
ーションシステムによって分子量３０，０００以上の分
画（Ｓ１）と、分子量３０，０００以下で１０，０００
以上の分画（Ｓ２）に分けてその細胞障害性を検討し
た。各分画（濃度５０％）をｐＨ８．２のリン酸緩衝液
で処理し、蒸留水で洗浄した。対照として、ＦＭ３Ａ／
Ｒ細胞３×１０4を５％ＦＣＳ（ウシ胎児血清）を含む
ＲＰＭＩ１６４０で培養したものを用いた。得られた結
果を表２および図２に示す。
ーションシステムによって分子量３０，０００以上の分
画（Ｓ１）と、分子量３０，０００以下で１０，０００
以上の分画（Ｓ２）に分けてその細胞障害性を検討し
た。各分画（濃度５０％）をｐＨ８．２のリン酸緩衝液
で処理し、蒸留水で洗浄した。対照として、ＦＭ３Ａ／
Ｒ細胞３×１０4を５％ＦＣＳ（ウシ胎児血清）を含む
ＲＰＭＩ１６４０で培養したものを用いた。得られた結
果を表２および図２に示す。
【００３３】
【表２】 生細胞数(１×１０4) 阻害率(％) 対照 ２９ − Ｓ１ １９ ３４ Ｓ２ １５ ４８
【００３４】いずれの分画にも細胞障害性が認められた
が、３０，０００以下の分画の方がより強い細胞障害性
を示した。
が、３０，０００以下の分画の方がより強い細胞障害性
を示した。
【００３５】実施例３：トリス−塩酸緩衝液処理ウシア
ルブミンおよびヒトアルブミンの細胞障害性 腫瘍細胞としてＫ５６２細胞を用いた。対照として腫瘍
細胞を５−１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で
培養したものを用いた。これに、ウシアルブミンまたは
ヒトアルブミン（１０ｍｇ／ｍｌ）を５０％濃度で加え
たもの、さらに０．２Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．
２）で処理したウシアルブミンおよびヒトアルブミン
（それぞれ１０ｍｇ／ｍｌ）を５０％濃度で加えたもの
を調製し、その細胞障害性を検討した。陽性対照として
５０％ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．２）のみ、および
２５％ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．２）のみを用いて
同じ試験を行った。得られた結果を表３および図３に示
す。なお、Ｂ．ａｌｂ．はウシアルブミンを、Ｈ．ａｌ
ｂ．はヒトアルブミンを意味する。
ルブミンおよびヒトアルブミンの細胞障害性 腫瘍細胞としてＫ５６２細胞を用いた。対照として腫瘍
細胞を５−１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で
培養したものを用いた。これに、ウシアルブミンまたは
ヒトアルブミン（１０ｍｇ／ｍｌ）を５０％濃度で加え
たもの、さらに０．２Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．
２）で処理したウシアルブミンおよびヒトアルブミン
（それぞれ１０ｍｇ／ｍｌ）を５０％濃度で加えたもの
を調製し、その細胞障害性を検討した。陽性対照として
５０％ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．２）のみ、および
２５％ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．２）のみを用いて
同じ試験を行った。得られた結果を表３および図３に示
す。なお、Ｂ．ａｌｂ．はウシアルブミンを、Ｈ．ａｌ
ｂ．はヒトアルブミンを意味する。
【００３６】
【表３】 生細胞数(2×104) 阻害率(％) FCS添加RPMI1640（１） ９ − （１）＋B.alb. １４ ０ （１）＋B.alb.＋Tris-HCl ５ ４４ （１）＋H.alb. １１ ０ （１）＋H.alb.＋Tris-HCl ６ ３３ 50% Tris-HClのみ ９ ０ 25% Tris-HClのみ １０ ０
【００３７】これらの結果から、ウシアルブミンおよび
ヒトアルブミンはいずれもＴｒｉｓ−ＨＣｌで処理した
場合にのみ細胞障害性を示すことが明らかとなった。
ヒトアルブミンはいずれもＴｒｉｓ−ＨＣｌで処理した
場合にのみ細胞障害性を示すことが明らかとなった。
【００３８】実施例４：各分画および各ｐＨにおけるト
リス−塩酸緩衝液処理ウシアルブミンの細胞障害性 ウシアルブミンの分子量による分画と緩衝液のｐＨとが
細胞障害性に及ぼす影響を腫瘍細胞ＦＭ３Ａを用いて同
時に検討した。
リス−塩酸緩衝液処理ウシアルブミンの細胞障害性 ウシアルブミンの分子量による分画と緩衝液のｐＨとが
細胞障害性に及ぼす影響を腫瘍細胞ＦＭ３Ａを用いて同
時に検討した。
【００３９】ウシアルブミンをウルトラフリーメンブレ
ンフィルトレーションシステムによって分子量１０，０
００以上の分画と、分子量１０，０００以下の分画に分
け、各分画（濃度５０％）をｐＨ７．０〜９．０の各種
ｐＨのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液で処理し、細胞障害性を
検討した。対照として培地（ＲＰＭＩ１６４０）のみを
用いた。得られた結果を表４および図４に示す。
ンフィルトレーションシステムによって分子量１０，０
００以上の分画と、分子量１０，０００以下の分画に分
け、各分画（濃度５０％）をｐＨ７．０〜９．０の各種
ｐＨのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液で処理し、細胞障害性を
検討した。対照として培地（ＲＰＭＩ１６４０）のみを
用いた。得られた結果を表４および図４に示す。
【００４０】
【表４】ｐＨ（分子量） 生細胞数(1×104) 阻害率(％) 培養１７時間後のｐＨ 対照 （10,000以上） ３３ − ６．６ （10,000以下） ３３ − ６．６ pH7.0（10,000以上） １９ ４２ ６．５ （10,000以下） ３．５ ８９ ７ pH7.4（10,000以上） ２６ ２１ ６．５ （10,000以下） ８ ７６ ７．１ pH7.8（10,000以上） ２２ ３３ ６．５ （10,000以下） ９．５ ７１ ７．３ pH8.2（10,000以上） ２２ ３３ ６．５ （10,000以下） ５ ８５ ７．４ pH8.6（10,000以上） ２１ ３６ ６．５ （10,000以下） ５．５ ８３ ７．６ pH9.0（10,000以上） ２３ ３０ ７．２ （10,000以下） ６ ８２ ７．７
【００４１】いずれのｐＨにおいても細胞障害性が観察
されたが、いずれのｐＨにおいても分子量１０，０００
以下の分画では７１〜８９％と極めて高い細胞障害性
（阻害率）が観察され、一方分子量１０，０００以上の
分画の細胞障害性は２１〜４２％であった。
されたが、いずれのｐＨにおいても分子量１０，０００
以下の分画では７１〜８９％と極めて高い細胞障害性
（阻害率）が観察され、一方分子量１０，０００以上の
分画の細胞障害性は２１〜４２％であった。
【００４２】実施例５：合成ペプチドの細胞障害性（Ｆ
ＣＳ不含ＲＰＭＩ１６４０培地） 腫瘍細胞ＦＭ３Ａを用いて合成ペプチドの細胞障害性を
検討した。
ＣＳ不含ＲＰＭＩ１６４０培地） 腫瘍細胞ＦＭ３Ａを用いて合成ペプチドの細胞障害性を
検討した。
【００４３】配列表の配列番号１のアミノ酸配列を有す
るペプチドを合成した。このペプチドは天然ウシアルブ
ミンのアミノ酸配列の一部である。
るペプチドを合成した。このペプチドは天然ウシアルブ
ミンのアミノ酸配列の一部である。
【００４４】腫瘍細胞４×１０4／ウエルに培地（ＦＣ
Ｓ不含ＲＰＭＩ１６４０）のみ、ペプチド（０．２５ｍ
ｇ／ウエル）添加培地、およびペプチド（０．１２ｍｇ
／ウエル）添加培地（※この実験では緩衝液は使用して
いないのでしょうか？）を加えて細胞障害性を検討し
た。得られた結果を表５および図５に示す。
Ｓ不含ＲＰＭＩ１６４０）のみ、ペプチド（０．２５ｍ
ｇ／ウエル）添加培地、およびペプチド（０．１２ｍｇ
／ウエル）添加培地（※この実験では緩衝液は使用して
いないのでしょうか？）を加えて細胞障害性を検討し
た。得られた結果を表５および図５に示す。
【００４５】
【表５】 生細胞数(1×104) 阻害率(％) 培養１７時間後のｐＨ 培地のみ ３．２ − ７．７ 0.25mgペプチド ０．５ ８４ ７．４0.12mgペプチド １ ６９ ７．３
【００４６】ＦＣＳ不含ＲＰＭＩ１６４０で培養した場
合には、いずれの用量においても極めて強い細胞障害性
（０．２５ｍｇで８４％、０．１２ｍｇで６９％）が観
察された。
合には、いずれの用量においても極めて強い細胞障害性
（０．２５ｍｇで８４％、０．１２ｍｇで６９％）が観
察された。
【００４７】実施例６：合成ペプチドの細胞障害性（Ｆ
ＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地） 細胞障害性に対する培地の影響を検討するために、実施
例５と同じ実験を１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培
地を用いて行った。得られた結果を表６および図６に示
す。
ＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地） 細胞障害性に対する培地の影響を検討するために、実施
例５と同じ実験を１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培
地を用いて行った。得られた結果を表６および図６に示
す。
【００４８】
【表６】 生細胞数(1×104) 阻害率(％) 培地のみ １０．４ − 0.25mgペプチド ５．６ ４６ 0.12mgペプチド ７．６ ２７
【００４９】１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０を培地
に用いた場合には、ＦＣＳ不含培地に比べて細胞障害性
は低下したが、なお０．２５ｍｇで４６％、０．１２ｍ
ｇで２７％の細胞障害性を示した。
に用いた場合には、ＦＣＳ不含培地に比べて細胞障害性
は低下したが、なお０．２５ｍｇで４６％、０．１２ｍ
ｇで２７％の細胞障害性を示した。
【００５０】
【発明の効果】本発明のアルブミンまたはその断片と緩
衝液からなる抗腫瘍剤は、腫瘍細胞に対して顕著な細胞
障害性を示した。
衝液からなる抗腫瘍剤は、腫瘍細胞に対して顕著な細胞
障害性を示した。
【００５１】アルブミンは動物体内に多量に存在するタ
ンパク質であるところから、本発明の抗腫瘍剤が正常細
胞に対して細胞障害性を示さず、腫瘍細胞に対してのみ
特異的に細胞障害性を示す安全な抗腫瘍剤たりうること
が期待される。
ンパク質であるところから、本発明の抗腫瘍剤が正常細
胞に対して細胞障害性を示さず、腫瘍細胞に対してのみ
特異的に細胞障害性を示す安全な抗腫瘍剤たりうること
が期待される。
【００５２】また、アルブミンは比較的大量かつ安価に
入手しうるので、経済的にもおおいに期待できる抗腫瘍
剤である。
入手しうるので、経済的にもおおいに期待できる抗腫瘍
剤である。
【００５３】
【００５４】配列番号：１ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【図１】リン酸緩衝液で処理したウシアルブミンの細胞
障害性を示す。
障害性を示す。
【図２】ウシアルブミン各分画の細胞障害性を示す。
【図３】トリス−塩酸緩衝液で処理したウシアルブミン
およびヒトアルブミンの細胞障害性を示す。
およびヒトアルブミンの細胞障害性を示す。
【図４】各分画および各ｐＨにおけるトリス−塩酸緩衝
液処理ウシアルブミンの細胞障害性を示す。
液処理ウシアルブミンの細胞障害性を示す。
【図５】合成ペプチドの細胞障害性（ＦＣＳ不含ＲＰＭ
Ｉ１６４０培地）を示す。
Ｉ１６４０培地）を示す。
【図６】合成ペプチドの細胞障害性（ＦＣＳ含有ＲＰＭ
Ｉ１６４０培地）を示す。
Ｉ１６４０培地）を示す。
Claims (6)
- 【請求項１】 アルブミンまたはその断片と、場合によ
り緩衝液からなる抗腫瘍剤。 - 【請求項２】 アルブミンがヒトアルブミンまたはウシ
アルブミンである請求項１記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項３】 緩衝液がリン酸緩衝液またはトリス−塩
酸緩衝液である請求項１記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項４】 アルブミン断片がアルブミンの分子量３
０，０００以下の分画である請求項１記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項５】 アルブミン断片がアルブミンの分子量１
０，０００以下の分画である請求項４記載の抗腫瘍剤。 - 【請求項６】 アルブミン断片が配列表の配列番号１に
示すアミノ酸配列を有するペプチドである請求項５記載
の抗腫瘍剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8020988A JPH09208486A (ja) | 1996-02-07 | 1996-02-07 | 血清アルブミンの部分構造を有する細胞障害物質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8020988A JPH09208486A (ja) | 1996-02-07 | 1996-02-07 | 血清アルブミンの部分構造を有する細胞障害物質 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09208486A true JPH09208486A (ja) | 1997-08-12 |
Family
ID=12042526
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8020988A Pending JPH09208486A (ja) | 1996-02-07 | 1996-02-07 | 血清アルブミンの部分構造を有する細胞障害物質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09208486A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020502203A (ja) * | 2016-12-21 | 2020-01-23 | プロメティック・ファーマ・エスエムティ・リミテッドＰｒｏｍｅｔｉｃ Ｐｈａｒｍａ Ｓｍｔ Ｌｉｍｉｔｅｄ | 上皮間葉転換を予防または最小限にする方法及び組成物 |
-
1996
- 1996-02-07 JP JP8020988A patent/JPH09208486A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020502203A (ja) * | 2016-12-21 | 2020-01-23 | プロメティック・ファーマ・エスエムティ・リミテッドＰｒｏｍｅｔｉｃ Ｐｈａｒｍａ Ｓｍｔ Ｌｉｍｉｔｅｄ | 上皮間葉転換を予防または最小限にする方法及び組成物 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060413 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060801 |