JPH0894618A - Simple measurement method and device - Google Patents

Simple measurement method and device

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JPH0894618A
JPH0894618A JP25605394A JP25605394A JPH0894618A JP H0894618 A JPH0894618 A JP H0894618A JP 25605394 A JP25605394 A JP 25605394A JP 25605394 A JP25605394 A JP 25605394A JP H0894618 A JPH0894618 A JP H0894618A
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latex particles
immunological
colored latex
antibody
labeled
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Japanese (ja)
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Makoto Maeda
Eriko Matsuyama
Ritsuko Mochida
Yoshitami Ohashi
Hirokazu Suzuki
Masahiko Wakasugi
孚 前田
良民 大橋
立子 持田
恵理子 松山
昌彦 若杉
宏和 鈴木
Original Assignee
Wakamoto Pharmaceut Co Ltd
わかもと製薬株式会社
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Abstract

PURPOSE: To make simple type measuring by using target latex particles with different color tones and simultaneously detecting a plurality of materials in the different color tone by sight with an immunochromatography. CONSTITUTION: Two kinds of colored latex particles in different color tones are individually targeted to be an indicator material and one or more kinds of materials given an immunological reaction. On the other hand, two or more kinds of materials capable of immunologically reacting are solidified in advance in different positions of the same support. Then, a mixture of target colored latex particles consisting of the indicator material and one or more kinds of materials given an immunological reaction and specific one or more kinds of immunological materials in the specimen liquid are reacted. Next, colored latex particles targeted with the indicator material and target colored latex compound immunologically formed are expanded and moved in the specimen liquid as a solvent. The material is colored in different color tones with the target colored latex compound.

Description

【発明の詳細な説明】 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【0001】 [0001]

【産業上の利用分野】本発明は簡易な測定方法および簡易な測定装置に関し、詳しくは試料中の標的の存在の有無を決定する特異的な結合反応を用いる分析方法を応用して分析対象物を簡便かつ迅速に測定する方法および装置に関する。 The present invention relates to an simple measurement method and a simple measurement device, and more particularly specific binding reaction the analyte by applying the analytical method of using the to determine the presence or absence of target in a sample the method and apparatus for simply and rapidly measured. 本発明の対象とされる試料としては、例えば、血清、血漿、全血、尿、糞便などすべての生物学的流体およびその産物である。 As a sample to which the present invention, for example, serum, plasma, whole blood, urine, all biological fluids and products such as feces.

【0002】 [0002]

【従来の技術】従来、微粒子を用いたイムノクロマトグラフ法にはコロイド状金属粒子、コロイド状金属酸化物粒子、さらにはコロイド状非金属粒子が標識粒子として広く用いられており、特開昭55−15100および特開昭64−35372に記載されているごとくすでに公知である。 Conventionally, colloidal metal particles to the immunochromatographic method using fine particles, colloidal metal oxide particles, more and colloidal non-metallic particles are widely used as labeling particles, JP 55- a is already known as disclosed in 15100 and JP 64-35372. また、近年、合成高分子化学分野の発展と共に染色された合成高分子ラテックス粒子の技術開発にはめざましいものがあり、この微粒子を用いるイムノクロマトグラフ法も開発され、特開平6−18032および特開平6−160388に記載されているごとくすでに公知の方法である。 In recent years, there is one remarkable the technological development of the dyed synthetic polymer latex particles with the development of synthetic polymers chemistry, immunochromatography using the fine particles is also developed, JP-A 6-18032 and JP-A-6 -160388 is already known methods as are described in. 本法を利用した製品には妊娠診断薬(クリアブルーワンステップ〈登録商標〉ユニパス社製)によって代表される。 The products using this method is represented by pregnancy diagnostic agents (Clear Blue One step made <registered trademark> Yunipasu Co., Ltd.).

【0003】従来のイムノクロマトグラフ法を利用する検出方法においては、上述の妊娠診断薬にみられるように1種類の着色コロイド粒子や1種類の着色ラテックス粒子を用いて、抗原となるヒトゴナドトロピン(hC [0003] In the detection method utilizing a conventional immunochromatography, using one of the colored colloidal particles and one colored latex particles as seen in pregnancy diagnostic agents described above, the human gonadotropin comprising an antigen (hC
G)を検出して所期目的を達成するものであった。 G) detected by the was to achieve the intended purpose. しかしながら、本発明の最も重要な特許構成要件の1つである『色調の異なる着色ラテックスを用い、同一支持体上において同時に簡便、迅速、明確に測定する』と云う方法は未だ開示された例がない。 However, "using different colored latex color tones, at the same time conveniently on the same support, quickly, clearly determined" most important, one of the patents configuration requirements of the present invention is inventive method is that disclosed yet called Absent.

【0004】また、本発明の簡易測定装置は検体溶解部、検体採取部および検出部の3機能を有しそれぞれの機能が分割可能な部品より構成されているのが特徴である。 Further, simple measurement device of the present invention is the specimen melting section, it is characterized in each of the functions has three functions of specimen collection unit and the detection unit is configured from the divisible part. (図3) 測定時はそれぞれの部品を一体化または連結して使用し、測定後は検出部のみを取り外すことができるので、 (Figure 3) during measurement uses each component integrated or connected to, the measurement after can be removed only detection unit,
極めて簡単な操作で目的が達成され、衛生的、かつ、検査結果の保存などすぐれた特徴を有する簡易測定装置は未だ開示された例がない。 The purpose is achieved in a very simple operation, hygienic, and there is no example yet been disclosed a simple measuring device having the features excellent and saving test results.

【0005】 [0005]

【発明が解決しようとする課題】従来、イムノクロマトグラフ法を用いた体外診断薬分野への応用として、現在市販されている妊娠診断薬(クリアブルーワンステップ〈登録商標〉ユニパス社製)にみられるように、妊娠の重要なマーカーとして、尿中のヒトゴナドトロピン ペプチドホルモンの検出でもって妊娠の有無を判定もしくは診断の一助とする方法は体外診断薬の分野では操作が簡単、迅速、かつ、正確な情報が得られる点で画期的な製品である。 THE INVENTION Problems to be Solved by the past, be seen as an application of the in vitro diagnostics field using immunochromatography, in pregnancy diagnostic agents that are currently available on the market (Clear Blue One step made <registered trademark> Yunipasu Co., Ltd.) as such, an important marker of pregnancy, a method to help determine or diagnosing the presence or absence of pregnancy with the detection of human gonadotropin peptide hormone in urine easy to operate in the field of in vitro diagnostics, rapid and accurate information is a breakthrough product in terms obtained. しかしながら、クリアブルーワンステップなど市販のイムノクロマトグラフ法を用いた妊娠診断薬では尿中のヒトゴナドトロピンを検出するラインと反応終了を示す2本のラインで示され、これらのラインを示す色調が例えば、ブルーなどの同一色であるため、使用者は薬局、薬店あるいは医師による充分な説明あるいは能書などを充分理解していなければ、しばしば誤認あるいは判定結果を違えることにもなりうるもので大きな社会問題にもなりかねない。 However, the pregnancy diagnostic agents using commercially available immunochromatography like Clear Blue One step indicated by two lines indicating the end of the reaction with the line to detect the human gonadotropin in urine, the color tone indicating these lines is for example, since blue is the same color, such as, user pharmacy, if not well understood and sufficient description or package insert by pharmacies or physicians often serious social problem in what may also will be made different misidentification or determination results in could be also.

【0006】特に、我が国においては、妊娠診断薬は一般用の体外診断薬として薬局、薬店で購入が可能であるため、本製品は、いつでも、どこでも、誰にでも操作ができ、結果が間違うことなく明確に判定できることが最も重要なところである。 [0006] In particular, in Japan, because pregnancy diagnostic agent is available for purchase as an in vitro diagnostic agent for general use pharmacy, in drugstores, this product is, at any time, anywhere, anyone can be manipulated, that the result is incorrect there is no is where the most important to be able to clearly determine. 本発明はこの点を特に重視し、 The present invention is particularly focused on this point,
2種類以上の色調の異なる着色ラテックス粒子を用い、 Using different colored latex particles of two or more colors,
いつでも、どこでも、誰にでも操作が可能な簡易測定装置を考案し、結果の判定については陰性側および陽性側が明確に区別できる方法を開示するものである。 Anytime, anywhere, who devised a simple measurement apparatus can be operated even in, the determination result is to disclose a method of negative-side and positive-side can be clearly distinguished. 例えば、実施例2の1態様に従って説明すると、検査結果が陰性の場合は青色のインジケーターライン1本で示され、陽性の場合は青色のインジケーターラインと、例えば、ヘモグロビンが検出されたときに現われる赤色のラインの2本で示される。 For example, described in accordance with one aspect of the embodiment 2, if the test result is negative are indicated by a single blue indicator line, and the blue indicator line in the case of positive, for example, appears when the hemoglobin is detected red represented by two lines.

【0007】 [0007]

【課題を解決するための手段】以下、本発明の完成に至った経緯および課題を解決するための手段について詳細に述べる。 Hereinafter SUMMARY OF THE INVENTION, means for solving the circumstances and problems that led to the completion of the present invention will be described in detail. 近年、抗原−抗体反応を利用して、目的とする免疫学的能力を有する物質の検出は医療分野を中心としてすばらしい進歩を遂げている。 Recently, antigen - by using the antibody reaction, detection of a substance having immunological ability of interest have made great progress around the medical field. そもそも、抗原−抗体反応そのものは生体内あるいは自然界で必然性に応じて反応が生じているものであり、その原理・仕組みを人類が解明しつつあることによって多大な恩恵を受けている。 To begin with, the antigen - antibody reaction itself are those reactions according to necessity in vivo or nature occurs, which benefits greatly the principle and mechanics that while clarified mankind. 特に医療分野では診断の予測あるいは診断の一助として大きな意義をもっており、血液、尿、糞便、体液などを被検液として用いるため、患者への苦痛を与えることなく検査できる点が利点である。 Particularly in the medical field it has a great significance as an aid of the prediction or diagnosis of diagnostic, for use as blood, urine, feces, body fluids and the like as a test solution, a point that can be inspected are advantages without giving pain to the patient.

【0008】本来、抗原−抗体反応とは「錠前と鍵穴」 [0008] Originally, the antigen - the antibody reaction "lock and key"
の関係にたとえられるごとく、免疫学的な反応に授かる物質と対応する物質との結合によって特異的な結合体を形成するものであって、その大部分は共有結合のような強い結合ではなく、極く弱い結合を保持し成立している。 As likened to the relationship, be one that forms a specific binding member by the binding of a substance to bestow the immunological reaction with the corresponding substances, most of is not a strong binding such as covalent bond, It has been established to hold a very weak binding. このことから人為的に抗原−抗体反応複合体より抗原あるいは抗体をそれぞれ単独に回収することができる。 Artificially antigens from this that - can be recovered antigen or antibody alone respectively from the antibody reaction complex. したがって、抗原−抗体反応系には、丁度、酵素に対する基質の関係と同様にアフィニティー(親和性)の概念が成立する訳である。 Accordingly, the antigen - the antibody reaction system, just is why the concept of similar to the substrate of the relationship enzyme affinity (affinity) is established. すなわち、目的とする酵素を単離・精製したいときは、目的とする酵素の基質をあらかじめ樹脂(担体)に固定しておき、目的とする酵素のみが基質と結合するので、水洗後、溶離液で溶出することによって一挙に高純度の酵素が回収できる。 That is, when you want to isolate and purify the enzyme of interest, previously fixed in advance resin (carrier) substrate of the enzyme of interest, only the desired enzyme binds to a substrate, after washing with water, the eluent in it highly pure enzyme recovered at once by elution. このような単離・精製手段をアフィニティークロマトグラフィーと命名されている。 Such isolation and purification measures are named affinity chromatography. 本法の検出手段として用いるイムノクロマトグラフィーは、クロマトグラフィーの体系からみると、まさしくアフィニティークロマトグラフィーに包括されるべきものであって、一般にクロマトグラフィーの名称で述べられている溶質と溶媒との分配係数の差でもって物質を分離・精製するという手段とは異なるものである。 Immunochromatography used as the detection means of the present method, when viewed from the system of chromatographic, just be those to be inclusive in affinity chromatography, partition coefficient between the solute and solvent generally stated under the name chromatographic the means of the material separated and purified with a difference is different.

【0009】すなわち、あらかじめ支持体上に固相化した抗原もしくは抗体が存在し、支持体の下端に着色した標識微粒子が水などの溶媒を媒体として支持体のもつ毛細管現象の作用で順次拡散・移動し、その際、免疫的に形成せしめた複合体−着色標識粒子によって、先の抗原もしくは抗体を固相化しておいた位置にその複合体−微粒子が到達し、その場所で特異的に抗原−抗体反応を生じ、着色シグナルとして目視的に観察することができるものである。 [0009] That is, previously immobilized antigen or antibody is present on the support, in sequence spread-by the action of a capillary phenomenon with the support colored labeled microparticles to the lower end of the support a solvent such as water as a medium move, time, complex immune formed allowed - colored by the label particles, the complex in a position which had been immobilized the preceding antigen or antibody - particles reached, specifically antigen in situ - produce antibody reaction, it is those that can be visually observed as a colored signal.

【0010】以上のようなアフィニティークロマトグラフィーの原理に基づいて、本法をさらに発展せしめ鋭意研究を重ねた結果、以下、本発明の完成に至った。 [0010] Based on the principle of affinity chromatography as described above, the results of extensive studies further made to develop this method, the following, thereby completing the present invention. 本特許記載のイムノクロマトグラフィーに用いる微粒子には色調の異なる別々のコロイド状金属粒子、あるいは色調の異なる別々のコロイド状金属酸化物粒子、さらには色調の異なる別々のコロイド状非金属粒子を用いることができるが、色調の多様性やイムノクロマトグラフィー展開後の鮮明さを考慮すると合成高分子ラテックス粒子が好ましい。 Tone different separate colloidal metal particles to the fine particles used in the immunochromatographic of this patent described or separate colloidal metal oxide particles having different color tones, be further using separate colloidal non-metallic particles having different color tones, possible, and considering the sharpness after color tone of diversity and immunochromatographic development synthetic polymer latex particles are preferred. イムノクロマトグラフィーに用いる市販の合成高分子ラテックス粒子は当業者が本クロマトグラフィーを最適な条件で実施できるように設計されており、また、現在の高分子化学の合成技術水準からみても、高い水準の技術を駆使した高品質の製品である。 Commercially available synthetic polymer latex particles for use in immunochromatography are those skilled in the art is designed to be carried out under optimum conditions of this chromatography, also be seen from the synthetic techniques current levels of polymer chemistry, the high level is a high-quality products that make full use of technology. ちなみに、 By the way,
本発明者らの本特許記載の実施例における使用実績からみても、抗原もしくは抗体による標識粒子の調製、標識後の乾燥工程による安定性さらには支持体上での拡散・ Be seen from results using the embodiment of the present patent description of the present inventors, the preparation of labeled particles by antigen or antibody, the diffusion of the drying process stability further by after labeling on the support,
移動性および固相化位置における着色の鮮明性などに何ら問題を生じるものではない。 Not intended cause problems such as vividness of coloring in mobility and immobilized position. このような高品質のラッテクス粒子は当業者が容易に入手することができる。 Such high-quality latex particles can be those of skill in the art will readily available.

【0011】例えば、ブルーラテックス粒子分散液、グリーンラテックス粒子分散液およびレッドラテックス粒子分散液の色調の異なったラテックス粒子はポリマーラボラトリー社より容易に入手することができる。 [0011] For example, blue latex particle dispersion, different latex particles color tones of the green latex particle dispersion and red latex particle dispersion can be readily obtained from Polymer Laboratories Ltd.. その他、ローヌプーラン社、セラダイン社、インターナショナルダイナミクスコーポレーション社および積水化学工業株式会社などからも入手が可能である。 Other, Rhone Poulenc, Seradain company, it is possible to obtain from such as the International Dynamics Corporation and Sekisui Chemical Co., Ltd.. また、イムノクロマトグラフ用のラテックス粒子の大きさは0.05 The size of the latex particles for immunochromatography 0.05
〜5μmの範囲で市販されており、この範囲内の任意の大きさで使用も可能であるが、好ましくは標識する抗原もしくは抗体によって、適宜、粒子の大きさを選択することも感度・精度の上からも重要であり、通常0.45 Are commercially available in a range of 5 .mu.m, although used in any size within this range it is possible, preferably by antigen labeling or antibody, as appropriate, of the sensitivity and accuracy by selecting the size of the particles it is important also from the top, usually 0.45
μmの大きさが適している。 The size of μm are suitable.

【0012】次に本発明に用いるイムノクロマトグラフィーに使用する支持体について説明する。 [0012] Next, the support to be used in immunochromatography for use in the present invention will be described. 本発明に有用なイムノクロマトグラフィーに使用する支持体は毛細管現象を起こす作用を有し、かつ、合成高分子標識ラテックス粒子と検出しようとする物質との複合体がイムノクロマトグラフ用展開剤、例えば、水や緩衝液などですみやかに拡散・移動できるような支持体であれば良い。 Support for use in immunochromatographic useful in the present invention has the effect of causing the capillary phenomenon, and complex eluent immunochromatographic with a substance to be detected and synthetic polymer-labeled latex particles, for example, water and buffer may be a support, such as can be quickly diffused and moved like. 一般にイムノクロマトグラフィーに使用する担体としてガラス繊維状のシート、濾紙あるいはナイロンシート、ニトロセルロースシートなどが使用できるが、本発明に好適なシートはニトロセルロースシートである。 In general the glass fiber as a carrier for use in immunochromatographic sheet, filter paper or nylon sheets, but such nitrocellulose sheets may be used, preferred sheet in the present invention is a nitrocellulose sheet. ニトロセルロースシートはBAS−85(Schleicher Nitrocellulose sheets BAS-85 (Schleicher
& Schuell社製)、HAHY(Millip & Schuell, Inc.), HAHY (Millip
ore社製)として市販されており、当業者は容易に入手することができる。 Is commercially available as ore Co.), those skilled in the art can readily obtain.

【0013】次に支持体上へ複数の抗原もしくは抗体の固相化方法について説明する。 [0013] Then on the support for solid phase method of a plurality of antigens or antibodies will be described. 本発明の完成に有用な支持体としてニトロセルロースシートを選ぶことができ、 The completion of the present invention can choose the nitrocellulose sheet as useful supports,
本支持体へ複数の抗原もしくは抗体を固相化するに当たっては、実施例に記載した態様を例にあげて具体的に説明すれば良く理解することができる。 In immobilizing a plurality of antigen or antibody to the support it can be better understood by specifically described by way of embodiments as described in Example Example.

【0014】本発明のインジケーター物質とは被検液中に存在する測定しようとする物質およびその物質と免疫学的に反応する能力のある物質と交差反応を示さない物質であれば本発明に用いることができるので、特に限定されないが、通常、他動物のイムノグロブリンが好適である。 [0014] The indicator material of the present invention used in the present invention as long as it is a substance that does not exhibit substance crossreactive capable of reacting substances and the substance immunologically to be measured present in the test liquid it is possible, is not restricted, and usually, is an immunoglobulin other animals are suitable. また、赤色のラインは交通標識の信号機の色と同様な解釈であり、警告あるいは異常を示し、青色のラインのみの場合は異常が認められなかったことを示す意味である。 The red line is the same interpretation as the traffic signs of a traffic colors, warning or indicates an abnormal, in the case of only the blue line is intended to indicate that the abnormality is not observed. したがって、このように色調の異なった色で陰性あるいは陽性を区別することは、誰にでも理解されやすいので誤った判定が避けられ安心して使用することができる。 Thus, in this manner to distinguish negative or positive in different colors shades, who because even easily understood judged erroneous is avoided can be assured to use.

【0015】すなわち、通常、イムノクロマトグラフィーを行うのに適した任意の大きさに整えたニトロセルロース支持体をあらかじめ準備し、本支持体の任意に選んだ一定のゾーンに第1の抗原もしくは抗体(実施例2では抗ウサギIgGポリクロナール抗体)を塗布またはスプレーで散布し、上記以外のゾーンに第2の抗原もしくは抗体(実施例2では抗ヒトヘモグロビン抗体)を塗布またはスプレーで散布するなどして固相化する。 [0015] That is, normally, in advance to prepare a nitrocellulose support trimmed to any size suitable to carry out the immunochromatography, arbitrarily fixed zone chosen for this support first antigen or antibody ( the embodiments example 2 anti-rabbit IgG polyclonal antibody) was sprayed in a coating or spray, a solid such as by spraying a second antigen or antibody (example 2 anti-human hemoglobin antibody) in coating or spray zone other than the to phasing. また第3、第4、第5などの抗原もしくは抗体の固相化も同様に為し得る。 The third, fourth, may be made immobilized antigen or antibody, such as the fifth likewise. なお、ここで支持体に固相化した抗原もしくは抗体は後のイムノクロマトグラフィーの展開によって、それぞれ位置の異なった固相化したゾーンで抗原− Here, the support immobilized antigen or antibody immunochromatographic development of post-antigen in different immobilized zones respectively located -
抗体反応を生じ着色する訳であるから、あらかじめ着色の形状を設定しておくことが望ましい。 Since the translation of coloring caused an antibody response, it is desirable to set the pre-colored shapes.

【0016】しかしながら、本発明においてはそれぞれのゾーンで色調の異なる着色を示すので着色の形状が●、−、+、◎、×、△、…などのいかなる表示方法であっても許容できる。 [0016] However, the shape of the colored exhibits a color tone different coloration on each zone in the present invention ●, -, +, ◎, ×, △, ... acceptable be any display method, such as. 好ましくは、スポット状(●)またはライン状(−)の表示が簡単、明瞭である。 Preferably, spot-like (●) or linear (-) appears simple, is clear.

【0017】次に、乾燥工程について説明する。 [0017] Next, a description will be given of the drying process. 通常の乾燥は室温放置で良いが、必要であれば30〜50℃の熱風による乾燥あるいは真空乾燥などの方法を適宜行っても差支えはない。 Conventional drying is good at room temperature standing, no harm in performing the method such as drying or vacuum drying by hot air 30 to 50 ° C., if necessary appropriately. 乾燥後、ニトロセルロース支持体上の第1および第2あるいは第3、第4、第5などの抗原もしくは抗体の固相化したゾーン以外の領域を不活化するために、別なタンパク質でもってマスキングすることが通常行われている。 After drying, the first and second or the third on the nitrocellulose support, the fourth, the antigen or immobilized regions other than zones of the antibody, such as the fifth to inactivate, with a different protein masking it is being carried out normally be. 一般にマスキング剤としては生理食塩水に0.2%を溶解したカゼイン溶液あるいは1% General casein solution The masking agent was dissolved 0.2% in saline or 1%
スキムミルク(DIFCO社製)、4%ブロックエース(明治乳業社製)などを用いるが、使用する抗原または抗体あるいは支持体の性質によって、その都度、適切なマスキング剤を選択する必要がある。 Skim milk (DIFCO Co.), (manufactured by Meiji Dairies Corporation) 4% Block Ace the like, but the nature of the antigen or antibody or a carrier used in each case, it is necessary to select an appropriate masking agent.

【0018】次に、合成高分子標識着色ラテックス粒子の調製法ならびに装着方法について説明する。 Next, preparation and method of mounting a synthetic polymer labeled colored latex particles will be described. 各々の色調を有する別々のラテックス粒子にそれぞれ複数の抗原もしくは抗体を標識するにあたっては、例えば、赤色のラテックス粒子には第1の抗原もしくは抗体、青色のラテックス粒子には第2の抗原もしくは抗体、さらに黄色、あるいは緑色のラテックス粒子には第3、第4の抗原もしくは抗体をそれぞれ個別に標識しておく。 When labeling is a plurality of antigens or antibodies in discrete latex particles having each color, for example, the first antigen or antibody to a red latex particles, a second antigen or antibody to blue latex particles, Furthermore yellow or green in the latex particles third, previously fourth antigen or antibody labeled individually. 標識方法は通常行われている方法であれば特に限定はしないが、一般にはラテックス粒子と標識する物質を室温約1 Although labeling methods are not particularly limited as long as it is a method that is usually performed, generally from about room temperature to a substance for labeling the latex particles 1
時間位混和することによって達成できる。 It can be achieved by time-position miscible. その後、各々標識した着色ラテックス粒子を個別に遠心分離などの方法またはミリポアフィルターによる吸引濾過法によって集め、通常使用されている緩衝液、例えば、リン酸緩衝液などでよく洗浄後、マスキング剤で各々の標識ラテックス粒子を個別にマスキングしておく。 Thereafter, each respectively to the labeled colored latex particles individually collected by suction filtration method using a method or Millipore filter, such as centrifugation, buffers are commonly used, for example, washed well with phosphoric acid buffer solution, a masking agent keep masking the labeled latex particles individually. マスキング剤は先の支持体で抗原もしくは抗体の固相化後に用いたマスキング剤と同様なもので良い。 Masking agent may be of the same as the masking agent used after immobilization of antigen or antibody in the previous support.

【0019】しかしながら、マスキング剤の選択は標識に使用した抗原または抗体および支持体の性質によって、その都度、適格か否かを判断する必要がある。 [0019] However, the choice of masking agents depending on the nature of the antigen was used for labeling, or antibody and a support, each time, it is necessary to determine eligibility or not. このようにして各々、個別に標識し得た着色ラテックス粒子を保存液に貯えておく。 Each, thus, keep stored in the storage solution colored latex particles obtained labeled individually. 各々の標識着色ラテックス粒子を保存した液より一定量ずつ取り出しよく混和後、よく洗浄して不織布などの多孔性ポリマーに含浸させて凍結乾燥を行う。 After good extraction by a fixed amount from the liquid stored each labeled colored latex particles mixed, lyophilization impregnated into a porous polymer, such as a nonwoven fabric washed well with. これを支持体の一定の場所に装着することによって本発明の検出可能な試験片が完成する。 This detectable test strip of the present invention is completed by attaching to a certain location of the support. なお、 It should be noted that,
標識ラテックス粒子の支持体への装着については特に限定されるものではなく、標識ラテックス粒子を直接支持体へ塗布する方法等も利用することができる。 Labeled latex for attachment of the particles to the support is not particularly limited, a method for applying the label latex particles directly support or the like can also be utilized. 装着位置についてはイムノクロマトグラフィーの展開方法によって定まるもので、例えば展開が上昇法の場合には下端部に、下降法の場合には上端に、水平方式の場合には両端部のどちらか一方に、円形方式の場合には同心円の中心部分に装着することになる。 For mounting position is intended to determined the deployment method of immunochromatography, the lower end portion in the case for example the deployment of rise method, the upper end in the case of lowering method, on either of the ends in the case of the horizontal type, It will be attached to the central portion of the concentric circles in a circular manner.

【0020】本発明においては展開方法を特に限定するものではないが、通常、一般に行われている上昇法が望ましい。 [0020] Although not particularly limited deployment method in the present invention, usually, generally elevated method being performed is desirable. この場合、試験者は装着した支持体部分を被検液に浸すのみで展開できるので有利である。 In this case, the tester is advantageously can be deployed only in immersing a support portion attached to the test liquid.

【0021】次に、試験片について説明する。 [0021] Next, a description will be given of the test piece. (図1参照) イムノクロマトグラフィーに関する試験片については、 For (see FIG. 1) immunochromatographic regarding specimen,
すでに数多くの発明が開示されているので、特に本発明で詳細に言及する必要はない。 Already since numerous inventions have been disclosed, there is no particular need to mention in detail the present invention. しかしながら、本発明の方法が確実に、また正確に当事者によって容易に実施できる「証」としてその1例を記す。 However, to ensure that the method of the present invention, also referred to the example as "testament" that can be easily carried out accurately by the parties. 実施例に示した試験片はニトロセルロースなど、使用しやすさなどを考慮して任意の長方形の大きさに裁断し支持体を作製する。 Specimen shown in the Examples such as nitrocellulose, in consideration of ease of use and cut into a size of any rectangular to prepare a support. 支持体の下端部分を被検液に浸して毛細管現象により水などの溶媒を媒体として微量に溶けている抗原もしくは抗体を吸い上げ、ニトロセルロース支持体上部へ移動せしめる不活性材質から選ばれる部分を装着する。 Siphoning the antigen or antibody are dissolved in small amount of solvent such as water as a medium by capillarity to the lower end portion of the support is immersed in the test liquid, fitted with a moiety selected from the inert material for moving to a nitrocellulose support upper portion to. 本不活性な材質には一般に濾紙、ガラス繊維シート、メンブランフィルターシートなどが用いられる。 Generally the present inert material filter paper, glass fiber sheet, such as a membrane filter sheet. ニトロセルロース支持体の下端部分には先に説明した不織布上に載せた標識混合着色ラテックス粒子の凍乾物(着色ラテックス粒子標識物質凍乾担体)を一定の大きさに裁断したものを、例えば、両面テープなどで軽く固定しておくか、最終的に試験片として組み終えた段階でセロテープなどで圧着固定しても差支えがない。 Those at the lower end portion of the nitrocellulose support and cut frozen dry matter of labeled mixed colored latex particles were mounted on a non-woven fabric described above (the colored latex particles labeled substance Koinui carrier) to a certain size, for example, double-sided either leave lightly fixing tape or the like, there is no harm in crimped fixed like scotch tape at the stage of finished assembled as the final test strip. また、図1に示したごとく、ニトロセルロース上のそれぞれ異なった位置にあらかじめ複数の抗原もしくは抗体を固相化しておく。 Further, as shown in FIG. 1, in advance immobilized a plurality of antigen or antibody respectively different positions on the nitrocellulose.

【0022】一方、ニトロセルロース支持体の上端部分には、図1に示すごとく吸水性の担体を装着することによって、イムノクロマトグラフィーの展開が正確に、また迅速に為し得るため、さらには展開し終えた後の液漏れなどを防ぐ目的で本担体を装着しておくことが望ましい。 On the other hand, the upper end portion of the nitrocellulose support by mounting a water resistant support as shown in FIG. 1, since the deployment of the immunochromatography can accurately and rapidly without further expands it is desirable to mount the present carrier in order to prevent such liquid leakage after finishing. このような吸水性担体はアドバンテック東洋社製の濾紙No. Such a water-absorbent carrier Advantech Toyo filter paper No. 526やワットマン社製の17Cr,3MM 526 and manufactured by Whatman of 17Cr, 3MM
などが市販されており容易に入手することができる。 Etc. can be easily obtained are commercially available. 以上、このような簡単な試験片で本発明の方法を検証または実施することができる。 Above, the method of the present invention in such a simple test strip can be verified or implement.

【0023】本明細書において記載の都合上、検出すべき物質が抗原である場合には、例えば、ニトロセルロース支持体上に検出すべき物質の一定部位を認識できる抗体を固相化し、一方、合成高分子ラテックス粒子への標識には先の抗体とは別な個所の抗原分子を認識できる抗体であれば本発明の方法は達成できる。 [0023] For convenience of described herein, when the substance to be detected is an antigen, for example, immobilized antibodies that can recognize certain sites of the substance to be detected on the nitrocellulose support, whereas, if the signs to synthetic polymer latex particles and antibody capable of recognizing the antigen molecule another location from the previous antibody method of the present invention can be achieved. また、本発明は上述とは逆に抗体の検出の場合には、固相化抗原−検出すべき物質−検出すべき物質の抗体からなる系でもって実施できることは当業者には容易に理解されよう。 Further, the present invention in the case of detection of antibodies to the contrary to the above, the solid-phase antigen - the substance to be detected - can be implemented with a system consisting of an antibody of the substance to be detected readily apparent to those skilled in the art Ocean. したがって、本発明は検出すべき物質が抗原である場合だけに限定されず、抗体をも包含するものであり、表現としては「抗原もしくは抗体」として記してあるが、どちらか一方が定まればおのずから対応する他方が定まることになり、「抗原」および「抗体」なる文字を適宜使い分けることにより、本発明の方法を実施することができる。 Accordingly, the present invention is not limited only if the substance to be detected is an antigen, which also include antibodies, but as the expression are marked as "antigen or antibody", if either is Sadamare naturally results in a corresponding other is determined, the "antigen" and "antibody" as characters by selectively appropriately, it is possible to implement the method of the present invention.

【0024】次に簡易測定装置について説明する。 [0024] Next, a simple measurement device will be described. 本装置の1例を図3に示したが、被検体が糞便など半固形の場合あるいは尿、血液、など流体の場合はそれらの物性に応じて、適宜、採取部分の形状を変える必要があることは自明である。 Although an example of the apparatus shown in FIG. 3, if the object is a fluid, such as when or urine, blood semisolid such as feces according to their physical properties, as appropriate, it is necessary to change the shape of the collection portion it is self-evident. 被検体が半固形状の場合は、例えば、 If the subject of the semi-solid, for example,
スパイラル状の溝や、○リング状の窪み、スポット状の窪みなどを設けることによって本目的が達成できる。 And spiral grooves, recesses of ○ ring, the object can be achieved by providing such spot-like recess. 一方、尿や血液などの流体の場合には、例えば、採取部分をスプーン状にしたり、一定量の液体が吸収できる濾紙やガラス繊維シートなどの不活性なシートをはさみ込むことによって目的が達成できる。 On the other hand, in the case of fluids, such as urine or blood, for example, the purpose can be achieved by the collecting portion or a spoon shape, interleave the inert sheet such as a certain amount of filter paper or glass fiber sheet liquid can absorb . 図3に示した本装置は被検体が糞便であって、糞便中のヒトヘモグロビンを測定する1形状を説明するが、本発明の装置はこれによって必ずしも限定されるものではない。 This apparatus shown in FIG. 3 subject a stool, but illustrating one configuration for measuring the human hemoglobin in feces, the device of the invention which is not intended to be necessarily limited by. 糞便の採取にあたっては、検体採取部品と検出部品を連結して先端部分を便に数ヶ所突き刺し、検体採取穴に便を容易に入れることができる。 When the stool collection, pierce several places the tip portion flights by connecting the detection components and sample collecting component can be placed easily stool specimen collection hole. そのとき、他の部分についた便はトイレットペーパーなどで拭き取り便の一定量を採取することが可能である。 At that time, flights were attached to the other part is it is possible to collect a certain amount of flights wiped off with, such as toilet paper. 便を採取した採取部先端で軽く押して検体溶解部のシールを破り、そのまま、さらに押し込んで連結密着させ、次いで一体化した簡易測定装置を上下に激しく振り混ぜて便を溶解する。 Breaking the seal of the sample dissolved portion by pressing lightly with sampling tip taken flights, as it is, it is further pushed in connecting contact, then dissolved flights shaken vigorously simple measurement apparatus that is integrated vertically.

【0025】その後、一体化した簡易測定装置を水平に保つことによって一定量の溶解液が検体取り込み口に入り、この溶解液量でもって展開・移動せしめ、3〜5分後に青色のラインと赤色のラインの2本が認められれば陽性、青色のラインのみの場合には陰性であると容易に判定することができる。 [0025] Then, integral constant amount of solution by keeping the simple measurement device horizontally enters the sample inlet, development and moved with this solution volume, the blue line and a red after 3-5 minutes as long recognized the two lines-positive, it can be easily determined if in the case of only the blue line are negative. また、検査結果の取り扱いについては、検出部を取り外すことができるので以下に示すメリットがある。 As for the handling of test results, there is a merit that the following it is possible to remove the detector. すなわち、簡易型の本装置は極めて簡単な操作で目的が達成され、検査結果の保存または郵送あるいは持ち運びが簡単であるため、従来、被検者が直接外来に便を提出することを考えれば、極めて衛生的であり、被検者に対する精神面の苦痛が取り除かれ、さらには、医療従事者へのバイオハザードの面からも極めてメリットの大きい装置である。 That is, the simple form of the device object is achieved in a very simple operation, for storage or shipment, or portable test result is simple, conventional, given to submit stool foreign subject directly, is very hygienic, pain mental for the subject is removed, and further, a very large apparatus merit in terms of biohazard to medical personnel.

【0026】 [0026]

【実施例】以下に実施例をあげて本発明をさらに詳細に、具体的に説明するが、本発明の方法および装置についてはこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。 EXAMPLES EXAMPLE The present invention further in detail by way below is a description, not intended to be limited to these examples for a method and apparatus of the present invention. 実施例1 ヘモグロビン、トランスフェリンの検出方法 Example 1 Hemoglobin method of detecting transferrin

【0027】(1) 抗ヒトヘモグロビンモノクロナール [0027] (1) anti-human hemoglobin monoclonal
抗体の作製 2回結晶ヒトヘモグロビン(Sigma社製)を滅菌蒸留水に溶解し、10mg/mlのヒトヘモグロビン溶液を調製した。 Antibody Preparation crystallized twice human hemoglobin (Sigma Co.) was dissolved in sterile distilled water to prepare a human hemoglobin solution 10 mg / ml. 次にヒトヘモグロビン溶液とFreund Then human hemoglobin solution and Freund
のコンプリートアジュバントを等量混合しオイルエマルジョンとした。 The complete adjuvant was a mixture of equal amounts and oil emulsion. これをBALB/cAマウス(BALB This BALB / cA mice (BALB
/cA jcl,7週齢、雌)の背部皮下に0.2ml / CA jcl, 7-week-old, 0.2ml subcutaneously into the back of the female)
ずつ投与した。 It was administered by. 初回免疫後、7日目と16日目に追加免疫を行い、さらに細胞融合3日前にヒトヘモグロビン溶液を0.25mg/0.2mlずつ腹腔内に投与した。 After the first immunization, a booster on day 7 and day 16, the human hemoglobin solution were administered intraperitoneally by 0.25 mg / 0.2 ml in further cell fusion 3 days ago.
最終免疫から3日目のマウス脾細胞とミエローマ細胞(P3x63−Ag−6,5,3)を10:1の割合で50%ポリエチレングリコール4000を用いて融合し、HAT培地により選択した。 Day 3 of mouse spleen cells with myeloma cells from the final immunization (P3x63-Ag-6,5,3) 10: fused using 50% polyethylene glycol 4000 in a ratio of 1, it was selected by HAT medium. 細胞融合後、14日目に培養上清のヒトヘモグロビンに対する抗体活性をEI After cell fusion, the antibody activity against human hemoglobin culture supernatant on day 14 EI
A法により測定した。 It was measured by the A method. 測定方法はヒトヘモグロビン10 The measurement method human hemoglobin 10
0μg/mlで固相化した96穴EIAプレート(コースター社製)を用い融合細胞の培養液200μlを添加した。 0 Pg / immobilized 96-well EIA plates ml (Costar) were added culture solution 200μl fused cells used. その後、37℃、1時間反応後、洗浄を行いペルオキシダーゼ標識抗マウスIgG(Cappel社製、 Thereafter, 37 ° C., after one hour of reaction, peroxidase-labeled anti-mouse IgG was washed (Cappel Co.,
1:500)200μlを添加した。 1: 500) was added to 200μl. 洗浄後、基質液(0.1M −フェニレンジアミンと0.012%過酸化水素水)を各ウエルに200μlずつ添加し、室温で5分間反応させた。 After washing, substrate solution - a (0.1 M O-phenylenediamine and 0.012% hydrogen peroxide) was added in 200μl to each well and reacted at room temperature for 5 minutes. 反応後、各ウエルに4 硫酸50 After the reaction, each well 4 N sulfuric 50
μlずつ添加し酵素反応を停止した。 Was added in μl enzymatic reaction was stopped. 次に492nmにおける吸光値を測定し、ヒトヘモグロビンに反応するクローンを限界希釈法により2回クローニングを行った。 Then measuring the absorbance values ​​at 492 nm, it was twice cloned by cloning limiting dilution to respond to human hemoglobin.
その結果、クローニング後に腹水として得られたモノクロナール抗体は10クローンであった。 As a result, monoclonal antibodies obtained as ascites after cloning was 10 clones. これらの得られた各々の腹水1mlをPBS1mlで2倍に希釈し、飽和硫酸アンモニウム2mlを滴加して4℃、4時間放置した。 Ascites 1ml of each these was diluted two-fold with 1 ml of PBS, 4 ° C. by the dropwise addition of saturated ammonium sulfate 2 ml, and allowed to stand for 4 hours. その後、3,000rpm,20分間遠心分離し沈査をPBS(リン酸緩衝生理食塩液)2mlに浮遊し透析を行った。 Then, 3,000 rpm, for 20 minutes centrifuged sediment was suspended dialyzed in PBS (phosphate buffered saline) 2 ml. この中で反応性の良い2クローン(K− Reactive good 2 clone in the (K-
6,K−8)を選択し以下の試験に用いた。 6, K-8) was used to select the following tests. なお、2クローンのイムノグロブリン サブクラスはIgG 1 ,L Incidentally, the immunoglobulin subclass of the 2 clones IgG 1, L
鎖はカッパー型であった。 Chain was kappa type.

【0028】(2) 抗体固相化支持体の作製ニトロセルロースシート(BAS−85,Schlei [0028] (2) Preparation nitrocellulose sheets (BAS-85 antibody immobilized support, Schlei
cher & Schuell社製)を5mm×50m cher & Schuell Co., Ltd.) 5mm × 50m
mに裁断し、その下端より10mmの位置に抗ヒトヘモグロビンモノクロナール抗体溶液0.5mg/ml(K Cut to m, the anti-human hemoglobin monoclonal antibody solution in the position of 10mm from the lower end 0.5 mg / ml (K
−6),15mmの位置に抗ヒトトランスフェリンモノクロナール抗体溶液0.5mg/ml(ケミコン社製)、20mmの位置に抗ウサギIgGポリクロナール抗体溶液0.5mg/ml(Cappel社製)を各々エアーブラシ(オリンポス社製)を用いて塗布し、抗ヒトヘモグロビン抗体と抗ヒトトランスフェリン抗体および抗ウサギIgG抗体のラインを作製した。 -6), anti-human transferrin monoclonal antibody solution 0.5 mg / ml (manufactured by Chemicon the position of 15 mm), each air brush anti-rabbit IgG polyclonal antibody solution 0.5 mg / ml (Cappel Co.) in the position of 20mm It was coated with (Olympus Corp.) to prepare a line of anti-human hemoglobin antibody and anti-human transferrin antibody and anti-rabbit IgG antibody. 室温で2時間乾燥後、1%スキムミルク(DIFCO社製)−0. After 2 hours drying at room temperature, 1% skim milk (DIFCO Co.) -0.
1%ツィーン20を含むPBSに37℃、2時間浸漬しマスキングを行った。 37 ° C. in PBS containing 1% Tween 20, was carried out for 2 hours immersion masking. その後、充分に乾燥し抗体固相化支持体を作製した。 Thereafter, to prepare a sufficiently dried antibody immobilized support.

【0029】(3) 着色ラテックス粒子標識物の調製 a. [0029] (3) Preparation of colored latex particle label a. レッドラテックス粒子標識抗ヒトヘモグロビン抗体レッドラテックス粒子分散液(PL−Latex,10 Red latex particle-labeled anti-human hemoglobin antibody Red latex particle dispersion (PL-Latex, 10
%,450nm,Polymer Laborator %, 450nm, Polymer Laborator
ies社製)300μlにPBS1.2mlを加え、1 ies Co., Ltd.) was added PBS1.2ml to 300μl, 1
3,000rpm,5分間遠心分離を行った。 3,000 rpm, centrifuged for 5 minutes was performed. 沈査に抗ヒトヘモグロビンモノクロナール抗体溶液(0.5mg Sediment anti-human hemoglobin monoclonal antibody solution (0.5 mg
/ml)(K−8)1mlを加え、充分混和して、室温1時間反応を行った。 / Ml) (K-8) 1ml was added and thoroughly mixed and subjected to room temperature for 1 hour the reaction. 未反応の抗ヒトヘモグロビンモノクロナール抗体を除去するため、13,000rpm, To remove the anti-human hemoglobin monoclonal antibody of unreacted, 13,000 rpm,
5分間遠心分離を行い、沈査をPBS1.5mlに懸濁し、再度遠心分離を行った。 It was centrifuged for 5 minutes and suspended sediment in PBS1.5Ml, and centrifuged again. 4%ブロックエース(明治乳業社製)1mlを加え、室温60分間反応させてマスキングを行った。 4% Block Ace (Meiji Dairies Corporation) 1 ml was added, was masked by reacting at room temperature for 60 minutes. その後、13,000rpm,5分間遠心分離を行い、沈査を1%スキムミルク−0.01% Thereafter, 13,000 rpm, and centrifuged for 5 minutes, 1% skim milk -0.01% the sediments
アジ化ナトリウムを含むPBS1.5mlに懸濁し冷蔵保存した。 Suspended and refrigerated to PBS1.5ml containing sodium azide. b. b. グリーンラテックス粒子標識抗ヒトトランスフェリ Green latex particle-labeled anti-human trans Ferri
ン抗体グリーンラテックス粒子分散液(PL−Latex,1 Emissions antibody green latex particle dispersion (PL-Latex, 1
0%,450nm,Polymer Laborato 0%, 450nm, Polymer Laborato
ries社製)および抗ヒトトランスフェリンモノクロナール抗体(0.5mg/ml,アドバンス イムノケミカル社製)を用いて上記と同様な操作で調製した。 ries, Inc.) and anti-human transferrin monoclonal antibody (0.5 mg / ml, with the advance immunoblot Chemical Co.) was prepared by the same procedure as described above. c. c. ブルーラテックス粒子標識ウサギIgGブルーラテックス粒子分散液(PL−Latex,10 Blue latex particles labeled rabbit IgG blue latex particle dispersion (PL-Latex, 10
%,450nm,Polymer Laborator %, 450nm, Polymer Laborator
ies社製)およびウサギIgG(0.5mg/ml, ies Co., Ltd.) and rabbit IgG (0.5mg / ml,
Cappel社製)を用いて上記と同様な操作で調製した。 Using manufactured by Cappel) was prepared in the same operation as above. d. d. 着色ラッテクス粒子標識物凍乾担体それら3種類の着色ラテックス粒子標識物を等量混和し、ベンリーゼ(登録商標)不織布(旭化成社製)5m The colored latex particles labeled product Koinui support their three colored latex particle label was equal volume mixed, Bemliese (manufactured by Asahi Kasei Corporation) (R) nonwoven 5m
m×5mmに10μl含浸させ凍結乾燥をして調製した。 Was prepared by a freeze-dried to 10μl impregnated into m × 5 mm.

【0030】(4) 試験片の作製抗体固相化支持体の下端から2.5mmの位置まで着色ラテックス標識物凍乾担体を重ねた。 [0030] (4) superimposed colored latex label Koinui carrier from the bottom of the prepared antibody immobilized support of the specimen to the position of 2.5 mm. さらに、着色ラテックス標識物凍乾担体上に被検液浸漬用担体を下端から2.5mmの位置まで重ねた。 Furthermore, it overlaid with a test fluid immersed carrier to a position of 2.5mm from the bottom to the colored latex label Koinui on the support. また、抗体固相化支持体の上端から5mmの位置まで吸水性担体5mm×20m Further, water soluble carrier 5mm × 20 m from the upper end of the antibody immobilized support to a position of 5mm
m(No.526,アドバンテック東洋社製)を重ね、 m (No.526, Advantech Toyo Co., Ltd.) a lap,
最後に透明なテープを上部に貼り固定して試験片とした。 Finally, attached fixed transparent tape on the top and a test piece. (図1) (Fig. 1)

【0031】(5) 標準液を用いた反応性試験ヒトヘモグロビン(2回結晶、Sigma社製)、ヒトトランスフェリン(ケミコン社製)を各々100μg/ [0031] (5) standard solution a reactive test human hemoglobin using (crystallized twice, manufactured by Sigma), each human transferrin (Chemicon) 100 [mu] g /
mlになるように0.1%BSAを含むPBSで溶解し2種類の標準液を調製した。 As will become ml dissolved in PBS containing 0.1% BSA to prepare two kinds of standard solutions. 標準液200μlを試験片の被検液浸漬用担体に滴加してのち展開した。 Developed later by the dropwise addition of standard solution 200μl to test liquid immersion carrier of the test strip. 5分後、 After 5 minutes,
あらかじめ固相化したライン部分の着色の有無により判定を行った。 It was determined by the presence or absence of coloring of the pre-immobilized line portion. なお、対照として0.1%BSAを含むP Incidentally, P containing 0.1% BSA as a control
BSのみを用いて同様に操作した。 It was operated in a similar manner using the BS only. 2種類の標準液を展開した場合には赤色のライン(ヒトヘモグロビン)、緑色のライン(ヒトトランスフェリン)青色のライン(インジケーター物質)が検出された。 If you deploy two standard solutions red line (human hemoglobin), green line (human transferrin) the blue line (the indicator material) was detected. また、ヒトヘモグロビン標準液では赤色と青色のライン、ヒトトランスフェリン標準液では緑色と青色のライン、対照では青色のラインのみが検出された。 Also, the human hemoglobin standard solution red and blue lines, the human transferrin standard solution green and blue lines, the control only the blue line is detected. (図2) (Fig. 2)

【0032】実施例2 便中ヒトヘモグロビンの検出方法(試験片) (1)抗体固相化支持体の作製 ニトロセルロースシート(BAS−85,Schlei [0032] Detection method (test piece) of human hemoglobin in stool Example 2 (1) Preparation nitrocellulose sheets (BAS-85 antibody immobilized support, Schlei
cher & Schuell社製)を5mm×50m cher & Schuell Co., Ltd.) 5mm × 50m
mに裁断し、その下端より10mmの位置に抗ヒトヘモグロビンモノクロナール抗体溶液0.5mg/ml(K Cut to m, the anti-human hemoglobin monoclonal antibody solution in the position of 10mm from the lower end 0.5 mg / ml (K
−6),20mmの位置に抗ウサギIgGポリクロナール抗体溶液0.5mg/ml(Cappel社製)を各々エアーブラシ(オリンポス社製)を用いて塗布し、抗ヒトヘモグロビン抗体および抗ウサギIgG抗体のラインを作製した。 -6), respectively 20mm anti-rabbit IgG polyclonal antibody solution 0.5 mg / ml in a position of (Cappel Co.) was applied using an air brush (Olympus Corporation), the anti-human hemoglobin antibody and anti-rabbit IgG antibody line It was produced. 室温で2時間乾燥後、1%スキムミルク(DIFCO社製)−0.1%ツィーン20を含むPB After 2 hours drying at room temperature, PB containing 1% skim milk (DIFCO Co.) -0.1% Tween 20
Sに37℃、2時間浸漬しマスキングを行った。 S to 37 ° C., it was carried out for 2 hours immersion masking. その後、充分に乾燥し抗体固相化支持体を作製した。 Thereafter, to prepare a sufficiently dried antibody immobilized support.

【0033】(2)着色ラテックス粒子標識物の調製 レッドラテックス粒子標識抗ヒトヘモグロビン抗体およびブルーラテックス粒子標識ウサギIgGは実施例1で調製した各々の標識ラテックス粒子を使用した。 [0033] (2) Preparation Red latex particle-labeled anti-human hemoglobin antibody and blue latex particles labeled rabbit IgG colored latex particle label was using labeled latex particles each prepared in Example 1. 着色ラテックス粒子標識物凍乾担体それら2種類の着色ラテックス粒子標識物を等量混合し、ベンリーゼ(登録商標)不織布(旭化成社製)5m The colored latex particles labeled product Koinui support two kinds of colored latex particles labeled were mixed in equal amounts, Bemliese (TM) non-woven fabric (manufactured by Asahi Kasei Corporation) 5 m
m×5mmに10μl含浸させ凍結乾燥をして調製した。 Was prepared by a freeze-dried to 10μl impregnated into m × 5 mm. (3) 試験片の作製実施例1と同様に作製した。 (3) was prepared in the same manner as in Production Example 1 of the test piece.

【0034】(4) 標準液を用いた反応性試験ヒトヘモグロビン(2回結晶、Sigma社製)を各々1mg/ml,1μg/ml,100ng/ml,10 [0034] (4) standard solution a reactive test human hemoglobin (crystallized twice, Sigma Co.) using respectively 1mg / ml, 1μg / ml, 100ng / ml, 10
ng/mlになるように0.1%BSAを含むPBSで溶解し標準液を調製した。 So as to ng / ml dissolved in PBS containing 0.1% BSA to prepare a standard solution. 標準液200μlを試験片の被検液浸漬用担体に滴加してのち展開した。 Developed later by the dropwise addition of standard solution 200μl to test liquid immersion carrier of the test strip. なお、対照として0.1%BSAを含むPBSを用いて同様に操作した。 Incidentally, the same operation as with PBS containing 0.1% BSA as a control. ヒトヘモグロビン濃度が100ng/mlまで赤色のラインを検出した。 Human hemoglobin concentration has detected red line to 100 ng / ml. また、インジケーター物質であるウサギIgGのラインは全例検出された。 The line of the rabbit IgG which is the indicator material was detected in all cases. なお、試験結果を表1に示した。 Incidentally, the test results are shown in Table 1.

【0035】 [0035]

【表1】 [Table 1]

【0036】(5)糞便中のヒトヘモグロビン検出試験 便潜血陰性便にヒトヘモグロビンを便1gあたり1, [0036] (5) per flight 1g human hemoglobin in human hemoglobin detection test fecal occult blood negative flights in feces,
0.1,0.05,0.01mgを添加し、よく混和した。 It was added to 0.1,0.05,0.01mg, and mix well. 次に各ヒトヘモグロビン添加便を10mgずつ採取して、各々0.005%ツィーン20−0.1%BSA And then collecting the human hemoglobin added service by 10 mg, respectively 0.005% Tween 20-0.1% BSA
を含むPBS2mlに懸濁し、よく混和後、スポンジですばやく濾過した液を便懸濁液とした。 Were suspended in PBS2ml comprising, after well mixed, quickly filtered liquid with a sponge was stool suspension. 便懸液200μ Flights suspension liquid 200μ
lを被検液浸漬用担体に滴加してのち展開した。 Developed later a l was added dropwise to the test liquid immersion carrier. ヒトヘモグロビン無添加便も対照として同様の測定を行った。 Human hemoglobin additive-free flights were also subjected to the same measurement as a control.
ヒトヘモグロビン添加便は0.05mg/g濃度まで赤色のラインが検出された。 Human hemoglobin added flight red line to 0.05 mg / g concentration is detected. また、インジケーター物質であるウサギIgGの青色のラインは全例検出された。 Further, the blue line of the rabbit IgG which is the indicator material was detected in all cases. なお、試験結果を表2に示した。 Incidentally, the test results are shown in Table 2.

【0037】 [0037]

【表2】 [Table 2]

【0038】実施例3 便中ヒトヘモグロビンの検出法(一体型簡易測定装置を用いた測定) (1)一体型簡易測定装置の作製 本装置は検体溶解部(31)、検体採取部(32)、検出部(33)から構成されている。 [0038] Example 3 flights in human hemoglobin detection methods making the apparatus specimen lysis of (integrated measured using the simple measurement device) (1) integrated simple measurement device (31), specimen collection unit (32) , and a detecting unit (33). 検体溶解部(31) Sample lysis unit (31)
には溶解液(34)(0.1%BSA−0.005%ツィーン20を含むPBS)2mlを加え、開口部は液漏れを生じないようにアルミ製基材のシールで完全に接着した。 The solution (34) (including PBS with 0.1% BSA-0.005% Tween 20) 2 ml was added to the opening was completely bonded by seal aluminum substrate so as not to cause liquid leakage. 検出部(33)は上下に2分割できる構造であり、この中に実施例1で作製した試験片を装着した。 Detector (33) is a structure that can bisected vertically, equipped with a test piece prepared in Example 1 herein. 次に検体採取部(32)の検出部(33)側の開口部のところに、検体溶解液吸収性担体(37)として5mm× Then at the opening of the detection unit (33) side of the specimen collection unit (32), 5 mm × a sample solution absorbent carrier (37)
30mmに裁断した濾紙(No.526、アドバンテック東洋社製)を挿入した。 Filter paper (No.526, Advantech Toyo Co., Ltd.) was cut to 30mm was inserted. 連結部(38)を介して、検出部(33)と検体採取部(32)を連結して検体採取可能な装置とした。 Connecting portion via (38), and a specimen collection apparatus capable coupled detector (33) specimen collection unit (32).

【0039】(2)検査法 検体採取仕様の検体採取部(32)側で便を数回突き刺し、検体採取穴(35)に便を入れた。 [0039] (2) pierce several times flights in the inspection method sample collection portion of the specimen collection specification (32) side, put a stool specimen collection hole (35). 検体採取部(3 Specimen collection unit (3
2)の先端についた余分な便をトイレットペーパーでふきとり、検体溶解部(31)のシールを検体採取部の先端で破り、検体溶解部(31)と検体採取仕様にしたものを連結後、一体型簡易測定装置にして、その装置を上下に激しく振り便を溶解した。 Wipe excess stool tipped 2) with toilet paper, break the seal of the sample dissolved portion (31) at the tip of the sample collection unit, after connecting the those sample dissolved portion (31) to the specimen collection specification, one in the integrated simple measurement apparatus, it was dissolved violently shaken flights the device up and down. 判定部を上にした後、ただちに一体型簡易測定装置を水平に静置した。 After the determination section above, and allowed to stand immediately horizontally integrated simple measurement device. この操作により一定量(200μl)の検体溶解液が取り込み口より入り、展開・移動して、5分後反応が終了した。 The operation by entering from the sample lysate intakes a certain amount (200 [mu] l), expand, moving, after 5 minutes the reaction is complete. その後、検体採取部(32)と検出部(33)の連結部分から検出部(33)を取り外し結果を判定した。 Then, to determine the result of detaching the detection unit (33) from the connecting portion of the specimen collection unit (32) and the detection unit (33).

【0040】(3)糞便中のヒトヘモグロビン検出試験 便潜血陰性便にヒトヘモグロビンを便1gあたり、各々1,0.1,0.05,0.01mgを添加し、よく混和してヒトヘモグロビン添加便を調製した。 [0040] (3) per stool 1g human hemoglobin human hemoglobin detection test fecal occult blood negative flights feces each added 1,0.1,0.05,0.01Mg, mix well to added human hemoglobin flights was prepared. この添加便を実施例3(2)の検査法で測定した。 The addition flight measured in Example 3 tests (2). なお、表3に示すように一体型簡易測定装置を用いても、試験片のみの場合と同じ結果を示した。 Even with integrated simple measurement device as shown in Table 3 showed the same results as the only specimens.

【0041】 [0041]

【表3】 [Table 3]

【0042】(4)大腸がん患者便の測定 大腸がんと診断された患者の便10例について、一体型簡易測定装置を用いて測定を行った。 [0042] (4) The bottle 10 examples of patients diagnosed with measurement colon cancer colorectal cancer patients flight was measured by using an integrated simple measurement device. なお、対照として健常者便10例も同様に行った。 It should be noted, it was also carried out in the same manner as a healthy person flights 10 patients as a control. その結果、大腸がんの患者便では全例赤色のライン(ヒトヘモグロビン)と青色のライン(ウサギIgG)が検出され、便潜血陽性と判定された。 As a result, the line all cases red in patients flights colorectal cancer (human hemoglobin) and the blue line (rabbit IgG) was detected and determined to fecal occult blood positive. また、健常者便では全例青色のライン(ウサギIgG)が検出されたのみで便潜血陰性と判定された。 Moreover, all cases the blue line in normal subjects flight (rabbit IgG) is determined only by the fecal occult blood negative was detected.

【0043】比較例1 ラテックス法との比較 糞便検体140例を用い、ラテックス凝集法を原理とした便中のヘモグロビン測定試薬『OC−ヘモディア』 [0043] Using the comparison fecal specimens 140 cases of Comparative Example 1 Latex method, the hemoglobin measurement reagent in stool latex agglutination method based on the principle "OC- Hemodia"
(登録商標)(栄研化学社製)と一体型簡易測定装置を用いた便潜血測定法を比較した。 They were compared (TM) fecal occult blood assay using an integrated simple measurement unit (Eiken Chemical Co., Ltd.). 表4に示すように14 As shown in Table 4 14
0例中131例が両方で一致し、一致率は93.6%であり良好な結果を示した。 131 cases out of 0 patients the same on both, the matching ratio exhibited and good results 93.6%.

【0044】 [0044]

【表4】 [Table 4]

【0045】比較例2 従来法と本発明による判定結果の難易性の比較 インジケーターラインと検出すべき物質のラインが異なる色調の場合(本発明法)と同一の色調である場合(従来法)に対する判定結果の難易性についてパネラーを無作為に12名選び比較を行った。 [0045] When Comparative Example 2 line conventional method and the present invention the substance to be detected and comparing the indicator line of difficulty of the determination result by is the same color as that of different color tones (invention method) for (conventional method) panelists were randomized to 12 people select compare the difficulty of the decision result. (1)従来法(同一色調)試験片の作製 抗体固相化支持体は実施例2の抗ウサギIgGポリクロナール抗体溶液の代わりに抗マウスIgG抗体(Cap (1) conventional method (the same color) instead anti-mouse IgG antibody produced antibody immobilized support of the specimen anti-rabbit IgG polyclonal antibody solution of Example 2 (Cap
pel社製)を用いて同様に作製した。 It was produced in the same manner by using the made pel Co., Ltd.). 一方、ブルーラッテクス粒子標識抗ヒトヘモグロビン抗体は実施例1と同様に作製した。 On the other hand, blue latex particles labeled anti-human hemoglobin antibody was prepared in the same manner as in Example 1. この粒子をベンリーゼ(登録商標)不織布(5mm×5mm,旭化成社製)に10μl含浸させ凍結乾燥をして調製した。 The particles Bemliese (TM) non-woven fabric (5 mm × 5 mm, manufactured by Asahi Kasei Corporation) was prepared by a freeze-dried to 10μl impregnated into. 先の支持体と担体を用いて実施例1の方法に従って試験片を作製し、実施例2の標準液を用いて反応性試験を行ったところ、ヒトヘモグロビン濃度が100ng/mlまで青色のラインを検出した。 Preceding with support and carrier to produce a test piece according to the method of Example 1 was subjected to a reaction test using a standard solution of Example 2, the blue line human hemoglobin concentrations up to 100 ng / ml It was detected. また、インジケーターラインは全例青色のラインとして検出され、本試験片は正常に作動することが判った。 Further, the indicator line is detected as a line of all cases blue, the test piece was found to operate normally.

【0046】(2)本発明による方法と従来法の着色試験片の作製 実施例2で作製した本発明の試験片と従来法の試験片に各々ヒトヘモグロビン標準液(1μg/ml、0.1% [0046] (2) Each human hemoglobin standard solution to the test piece of the test piece and the conventional method of the present invention prepared in Preparation Example 2 of the colored test strip method and the conventional method according to the present invention (1 [mu] g / ml, 0.1 %
BSAを含むPBSで溶解)を実施例2(4)の方法に従って反応せしめ、両法による着色試験片を各々作製した。 It reacted according to the method described in the dissolution) Example 2 (4) in PBS containing BSA, and prepare each colored test strips according to both methods.

【0047】(3)本発明による方法と従来法による判定結果に対する難易性の比較 両法の判定結果に対する難易性を比較するため、パネラー12名(女性5名含む)を任意に選出し、2点嗜好試験法による官能検査(「官能検査ハンドブック」日科技連官能検査委員会(編)、1985)に準拠して判定を行った。 [0047] (3) To compare the degree of difficulty for the present invention the comparison determination result of both methods difficulty against the judgment result by the method and the conventional method by, elect a panel of 12 people (including 5 women) optionally, 2 sensory test by a point preference test method ( "functional inspection Handbook" JUSE functional inspection Commission (ed.), 1985) was determined in accordance with the. 表5に示したように本検査に準拠した方法から、12名ともに本発明による方法の方が「判定しやすい」との回答が得られ、明らかに本発明の方法が優れていた。 From a method in accordance with the present test, as shown in Table 5, and respond towards the process according to the present invention the "easy determination" is obtained in both twelve, how clearly the present invention was excellent.

【0048】 [0048]

【表5】 [Table 5]

【0049】 [0049]

【発明の効果】本発明によれば、色調の異なる標識ラテックス粒子を用い、イムノクロマトグラフィーによって複数の物質を目視的に別々の色調で同時に検出することができる。 According to the present invention, using different labeled latex particles color tones, it can be detected simultaneously visually distinct color a plurality of substances by immunochromatography. 本発明による簡易型の測定装置を提供することによって、例えば、一般用医薬品としての体外診断薬に応用すれば、いつでも、どこでも、誰にでも容易に実施することができる。 By providing a simple type measuring device according to the invention, for example, if applied to in vitro diagnostics as OTC, anytime, anywhere, by anyone it can be carried out easily. さらに、検査結果の判定には色調の異なるラテックス粒子を用いていることから、間違うことなく明確に判定できることが特徴である。 Further, since use different latex particles color tone to the determination of the test results, it is clearly determined can be characterized without mistakes. また、本簡易測定装置は連結可能な一体型の装置として考案しているので、検査終了後、すみやかに検出部品のみを切り離し、回収して検査機関や病院へ郵送したり、届けたりすることができる。 In addition, since this simple measurement apparatus has been devised as an integrated device that can be connected, after the completion of the inspection, immediately disconnect the only detection parts, or mailed recovered and to the inspection agencies and hospitals, be or deliver it can. このように本装置はきわめて衛生的である、また医療従事者に対するバイオハザードの面からも極めて優れた装置を提供するものである。 Thus, the present apparatus is extremely hygienic, also there is provided a very good device in terms of biohazard for medical personnel.

【図面の簡単な説明】 BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

【図1】本発明の試験片の1態様を示したものであり、 [1] it is limited to showing one embodiment of a test strip of the present invention,
該試験片上部図および断面図である。 The test piece top view and a cross-sectional view.

【図2】本発明の方法を用いた測定結果の1態様を示したものであり、ヒトヘモグロビン、ヒトトランスフェリンを同時に検出、測定した結果である。 [Figure 2] is limited to showing one embodiment of a measurement result of the method using the present invention, the detection human hemoglobin, human transferrin at the same time, the result of measurement.

【図3】本発明は連結一体型簡易測定装置の1態様を示したものであり、一体型(全体図)、検体採取仕様(断面図、上部図)、測定仕様(上部図)である。 [3] The present invention illustrates one embodiment of the connecting integrated simple measurement device, integrated (overall view), specimen collection specification (cross-sectional view, top view), a measurement specification (top view).

【符号の説明】 DESCRIPTION OF SYMBOLS

1 吸収性担体 2 抗体固相化支持体 3 着色ラテックス粒子標識物凍乾担体 4 被検液浸漬用担体 5 抗ウサギIgG抗体固相化ゾーン 6 抗ヒトトランスフェリン抗体固相化ゾーン 7 抗ヒトヘモグロビン抗体固相化ゾーン 21 ヒトヘモグロビン標準液とヒトトランスフェリン標準液の混合液を展開したクロマトグラム 22 ヒトヘモグロビン標準液を展開したクロマトグラム 23 ヒトトランスフェリン標準液を展開したクロマトグラム 24 対照を展開したクロマトグラム 31 検体溶解部 32 検体採取部 33 検出部 34 溶解液 35 検体採取穴 36 検体溶解液取り込み口 37 検体溶解液吸収性担体 38 連結部 39 試験片 40 判定窓 1 absorbent carrier 2 antibody immobilized support 3 colored latex particle label Koinui carrier 4 test liquid immersion carrier 5 anti-rabbit IgG antibody immobilized zone 6 anti-human transferrin antibody immobilized zone 7 anti-human hemoglobin antibody chromatogram 31 obtained by developing the chromatogram 24 controls the expansion of solid phase zone 21 human hemoglobin standard solution and the human transferrin standard solution chromatogram 23 human transferrin standard solution obtained by developing the chromatogram 22 human hemoglobin standard solutions mixture was deployment of sample dissolved 32 sample collection unit 33 detecting unit 34 lysates 35 specimen collection hole 36 specimen solution inlet 37 sample solution absorbent carrier 38 coupling portion 39 specimen 40 determination window

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 若杉 昌彦 東京都中央区日本橋室町1−5−3 わか もと製薬株式会社内 (72)発明者 松山 恵理子 東京都中央区日本橋室町1−5−3 わか もと製薬株式会社内 (72)発明者 前田 孚 東京都中央区日本橋室町1−5−3 わか もと製薬株式会社内 ────────────────────────────────────────────────── ─── of the front page continued (72) inventor Masahiko Wakasugi Nihonbashi, Chuo-ku, Tokyo Muromachi 1-5-3 young based pharmaceutical Co., Ltd. in the (72) inventor Eriko Matsuyama, Chuo-ku, Tokyo Nihonbashi Muromachi 1-5-3 young based pharmaceutical Co., Ltd. in the (72) inventor Makoto Maeda Nihonbashi, Chuo-ku, Tokyo Muromachi 1-5-3 young based pharmaceutical Co., Ltd. in

Claims (5)

    【特許請求の範囲】 [The claims]
  1. 【請求項1】 2種類以上の色調の異なる着色ラテックス粒子を用いる免疫学的測定方法において、 a. 1. A immunoassay using different colored latex particles of two or more tones, a. あらかじめ、2種類以上の色調の異なる着色ラテックス粒子をインジケーター物質および1種類以上の免疫学的反応に授かる物質に各々個別に標識せしめ、 b. Advance, each individually allowed labeled substance bestow two or more color tones different colored latex particles indicator substance and one or more immunological reactions, b. 一方、同一支持体上の異なる位置に少なくとも2種類以上からなる免疫学的に反応する能力のある物質を、 On the other hand, a substance capable of reacting at least 2 consists or more immunologically at different positions on the same support,
    あらかじめ固相化し、 c. Pre-immobilized, c. ついでインジケーター物質および1種類以上の免疫学的反応に授かる物質からなる標識着色ラテックス粒子の混合物と被検液中の特定の少なくとも1種類以上の免疫学的物質と反応せしめ、 d. Then indicator substance and one or more immunological bestow the reaction reacted with particular at least one or more immunological substance mixture and a test solution of labeled colored latex particles made of a material, d. ついで、インジケーター物質を標識した着色ラテックス粒子と免疫学的に形成させた標識着色ラテックス複合体との混合物に、被検液を媒体として展開・移動せしめ、 e. Then, the indicator substance in a mixture with a labeled colored latex particles and immunologically formed was labeled colored latex conjugate, allowed development and move the test liquid as a medium, e. 2種類以上の免疫学的に反応する能力を有する物質をあらかじめ固相化しておいた複数の位置に、それぞれ対応するインジケーター物質を標識せしめた着色ラテックス粒子と免疫学的に形成せしめた標識着色ラテックス複合体によって、別々の色調で着色することを特徴とする免疫学的測定方法。 2 to a plurality of positions which has been turned into pre-solid or more substances with immunologically ability to react, labeled colored latex corresponding allowed form an indicator substance colored latex particles and immunological which allowed labeling the complex immunological measurement method characterized by colored with different colors.
  2. 【請求項2】 被検液中の特定の免疫学的物質がヘモグロビンである請求項1の方法。 2. A process according to claim 1 specific immunological substances in a test sample fluid is hemoglobin.
  3. 【請求項3】 請求項1および請求項2の方法による試験片。 3. A test strip according to the method of claims 1 and 2.
  4. 【請求項4】 検体溶解部、検体採取部、検出部の3機能部品からなり、必要に応じて各機能部品を一体化あるいは連結できる簡易測定装置であって、 a. 4. A sample dissolution unit, the sample collecting unit, a three functional components of the detection unit, a simple measurement apparatus that can be integrated or connected to each functional parts as needed, a. 採取が採取部品と検出部品の連結によって達成され、 b. Collection is achieved by ligation of the detection part and collecting part, b. 採取後の検体の溶解と溶解液の一定量のサンプリングおよび免疫学的反応が検体溶解部品、採取部品、検出部品の一体化あるいは連結によって達成され、 c. A certain amount of sampling and immunological response analyte dissolved components and dissolution solution of the sample after collection, the collection part is achieved by integrating or coupling of the detection part, c. 免疫学的反応終了後、検出部品を切り離すことのできる簡易測定装置。 After completion of the immunological reaction, simple measurement device capable of disconnecting the detection part.
  5. 【請求項5】 請求項1および請求項2の方法による請求項3の試験片を内蔵する簡易測定装置。 5. A simple measurement device with a built-in test strip of claim 3 according to the method of claims 1 and 2.
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