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JPH0873396A - Lipid having high natural menaquinone-7 content - Google Patents

Lipid having high natural menaquinone-7 content

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JPH0873396A
JPH0873396A JP19600795A JP19600795A JPH0873396A JP H0873396 A JPH0873396 A JP H0873396A JP 19600795 A JP19600795 A JP 19600795A JP 19600795 A JP19600795 A JP 19600795A JP H0873396 A JPH0873396 A JP H0873396A
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JP
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fermented
solvent
bacillus
lipid
food
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JP19600795A
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Shin Araki
Yosuke Isobe
Hisashi Murasawa
Toshiro Sato
俊郎 佐藤
久司 村澤
洋祐 磯部
伸 荒木
Original Assignee
Honen Corp
株式会社ホーネンコーポレーション
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Abstract

PURPOSE: To obtain the subject lipid having high safety as an (auxiliary)food, being colorless and odorless, free from problem on taste and useful for preventing and treating hemorrhage and osteoporosis by taking out from a food raw material fermented with Bacillus subtilis represented by Bacillus natto. CONSTITUTION: This lipid is taken out from a food raw material fermented, e.g. at >=42 deg.C for >=48hr with Bacillus subtilis such as Bacillus natto under conditions not causing decomposition of natural menaquinone-7 using a purification method such as solvent extraction with solvent, fractionation with solvent, absorption fractionation, molecular distillation, steam distillation, chromatography or separation with membrane. This lipid is obtained by adding isopropyl alcohol to fermented soybean, powdering the fermented soybean, adding n-hexane thereto, re-powdering the fermented soybean, filtering the filtrate, collecting n-hexane layer, distilling the solvent away to afford the residue and subjecting the residue to steam treatment so as to remove odor.

Description

【発明の詳細な説明】 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【0001】 [0001]

【発明の属する技術分野】本発明は納豆菌に代表される枯草菌で発酵せしめた食品素材を原料として得られる天然メナキノン−7高含量の脂質およびその製造方法、並びに該脂質を主成分とする骨粗鬆症の予防または/かつ治療用組成物に関するものである。 BACKGROUND OF THE INVENTION The present invention is mainly composed lipids natural menaquinone-7 high content and a method of manufacturing thereof obtained food material was allowed fermented with Bacillus subtilis typified by Bacillus natto as a raw material, as well as lipid it relates preventing or / and therapeutic composition for osteoporosis.

【0002】 [0002]

【従来の技術】ビタミンKは古くから血液凝固に関与するビタミンとして知られ、ビタミンK欠乏性出血症の治療に医薬品として合成ビタミンK 1およびK 2が用いられ、予防に食品として天然ビタミンK 1濃縮物が利用されている。 BACKGROUND ART Vitamin K is known as vitamin involved in the blood coagulation long, synthetic vitamin K 1 and K 2 as pharmaceuticals are used in the treatment of vitamin K deficiency hemorrhagic disease, natural vitamin K 1 as food for the prevention concentrate is utilized. 骨粗鬆症は、老化、疾病などの原因によって起こる、骨がもろくなる病態で、骨折したり、激しい痛みなどを伴い、老人医療の面から大きな社会問題となりつつある。 Osteoporosis, aging, caused by causes such as disease, in a condition where bone becomes brittle, fracture or, accompanied by such intense pain, is becoming a major social problem in terms of elderly health care. 骨粗鬆症の治療、予防には、主にカルシウム、ビタミンD類が医薬品あるいは食品として利用されているが、最近になって骨粗鬆症の治療、予防にビタミンKが単独、あるいは既知の有効物質との併用で有効であることが見いだされた。 Treatment of osteoporosis, the prevention, mainly calcium, vitamin D is utilized as a medicine or food, the treatment of osteoporosis Recently, vitamin K in preventing, alone or in combination with known active substances, it has been found to be effective. 出血症の治療、予防に必要なビタミンKは極めて微量(一日当たりμgオーダー)であるが、骨粗鬆症の治療、予防には一日当たり数〜数十 Treatment of bleeding disorders, vitamin K necessary for prevention is extremely small (per day μg order), treatment of osteoporosis, per day for several to several tens in preventing
mgのビタミンKを必要とする。 It requires a vitamin K of mg.

【0003】ビタミンK類の中で、自然界に存在するのはビタミンK 1およびK 2群のみである。 [0003] Among the vitamin K, is the only vitamin K 1 and K 2 group to exist in the natural world. 1は主に植物によって合成される。 K 1 is primarily synthesized by plants. 2群の中には側鎖長の違いによりメナキノン(MK)−1〜14までが知られており、MK−4は主に動物体内の腸内細菌によって合成され、MK−7は主に納豆菌によって合成される。 K Some two groups are known to menaquinone (MK) -1~14 by differences in side chain length, MK-4 is primarily synthesized by enterobacteria in the animal, MK-7 is mainly It is synthesized by Bacillus natto. 食品中では、K 1は特に緑色野菜、植物油、海藻等に多く含まれており、K 2の代表的な物質であるMK−7は納豆に多く含まれている。 The in foods, K 1 is particularly green vegetables, vegetable oils, are abundant in seaweed or the like, MK-7, which is a typical material of K 2 are included in many natto. 主な食品あるいは食品素材中のビタミンK含量は、海藻・海苔・茶葉などにビタミンK 1が数十ppm 、大豆油・ほうれん草・ブロッコリなどにビタミンK 1が数ppm 、納豆中にMK−7が数〜十数ppm である。 Vitamin K content of the main food or in food materials, vitamin K 1 is a few tens of ppm, such as in seaweed, laver, brown leaf, vitamin K 1 is a few ppm to, such as soybean oil, spinach, broccoli, MK-7 in natto it is several to several tens of ppm. 大豆油や納豆の原料である大豆中には1ppm 以下のビタミンK 1しか含有されていない。 Only vitamin K 1 following 1ppm during the soybean is a soybean oil and natto of the raw material does not contain.

【0004】 [0004]

【発明が解決しようとする課題】市販の食品から骨粗鬆症に有効な量のビタミンKを摂取する場合、仮にビタミンKを1ppm 含有する食品あるいは食品素材より一日1 If you want to ingest vitamin K in an amount effective to osteoporosis from commercially available food [0006], if one than food or food material to 1ppm containing vitamin K days 1
0mgのビタミンKを摂取しようとすると、一日に10kg If you try to intake of vitamin K of 0mg, 10kg in one day
もの量を食する必要があり不可能である。 It is not possible it is necessary to eat the things amount. 十数ppm 含有する納豆でも一日数百gを食さなくてはならず、嗜好上、これだけの量を毎日食することは困難である。 Even natto containing tens of ppm must not not eaten the day several hundred g, preference on, it is difficult to eat this amount daily. 市販の、出血症予防のために調製粉乳に添加している天然ビタミンK 1濃縮物は高価であるため、大量のビタミンK For commercial, natural vitamin K 1 concentrate is added to the infant formula for bleeding prophylaxis is expensive, large amounts of vitamin K
1を摂取するには価格面で困難である。 To ingest 1 is difficult on price. 一方、医薬品の合成ビタミンKは食品に使用することはできない。 On the other hand, synthetic vitamin K of drugs can not be used in food.

【0005】天然MK−7は、自然界には極微量しか存在しないため、単離が非常に困難とされており、これまで、MK−7高含量の脂質を調製した例は知られていない。 [0005] natural MK-7 is, for in nature there is only a very small amount, isolation has been very difficult, so far, an example the preparation of the MK-7 lipid of high content is not known. 蛋白質との複合体の形で存在するMK−7を水による抽出によって分離した例はあるが、MK−7の一部しか複合体で存在していないので抽出効率に問題がある。 Examples of the MK-7 present in the form of a complex with proteins was separated by extraction with water, but which is a problem in the extraction efficiency because only a part of the MK-7 is not present in the complex.
納豆から、ステロールを主成分とする組成物を抽出した例もあるが、ステロール含量を高めるためにケン化反応を必須としており、使用する強アルカリによってMK− From natto, although there is an example of extracting compositions based on sterols, to increase the sterol content have been required saponification reaction, the strong alkali used MK-
7は分解してしまうため、得られた組成物中にMK−7 Since 7 will be decomposed, MK-7 in the composition obtained
はほとんど含有されない。 It not contained little.

【0006】 [0006]

【課題を解決するための手段】本発明の目的は、通常の食品からは充分な量の摂取ができない、または摂取困難な天然ビタミンK、特に納豆菌に代表される可食の枯草菌によって作り出された天然MK−7を、食品あるいは補助食品として簡単に日常的摂取ができるようにした天然MK−7高含量の濃縮脂質、およびそれを主成分とする食品あるいは補助食品を提供することにある。 An object of the present invention According to an aspect of the from normal food can not ingest sufficient amounts, or ingestion difficult natural vitamin K, produced by Bacillus subtilis edible that is particularly represented Bacillus natto natural MK-7 was to provide a food or enrichment lipids natural MK-7 high-content as to allow easy routinely ingested as supplements and food or supplements mainly it, .

【0007】本発明者らは、上記の目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、枯草菌で発酵した食品素材より脂質を取り出すか、あるいは抽出または抽出、精製することによって天然MK−7高含量脂質を得ることができることを見出して本発明を完成した。 [0007] The present inventors, as a result of intensive studies to achieve the above object may retrieve lipid from food material fermented with Bacillus subtilis, or extraction or extraction, natural MK-7 high by purification the present invention has been completed found that it is possible to obtain the content lipids. 本発明において、脂質の原料となるものは、納豆菌に代表される枯草菌を繁殖させ発酵させることができるものであれば使用できるが、発酵物より取り出した脂質を食用に供することから食品素材が好ましい。 In the present invention, which is a raw material of the lipids, can be used as long as it can be fermented bred B. subtilis typified by Bacillus natto, food materials lipids extracted from fermented material from subjecting the food It is preferred. 食品素材は、一般食品の材料となるものの他に、それらの加工過程で発生する粕や煮汁などの副産物を用いてもよい。 Food material, in addition to what the general food materials, may be used products such as cake and broth generated in their processing process. 一般食品としては、特に大豆などの穀類が好ましい。 As a general food, especially cereals such as soybean preferred. 上記の他にも、食することが可能で枯草菌が繁殖できるものであれば特に限定するものでない。 In addition to the above, not particularly limited as long as it is possible Bacillus subtilis can breeding be eaten.

【0008】接種する枯草菌としては、上記素材と同様な理由から可食の枯草菌が好ましい。 [0008] The Bacillus subtilis inoculation, Bacillus subtilis edible for the same reason as the above materials are preferred. 可食の枯草菌としては、納豆菌が最も一般的である。 The Bacillus subtilis edible, natto is most common. 市販の納豆菌が使用できるが、その中でも天然MK−7産生能力の高いものが望ましい。 Whereas commercial Bacillus natto can be used, having a high natural MK-7 production capability among them is desirable. また、人為的に天然MK−7産生能力を高めたものも使用できる。 It can also be used those artificially enhanced natural MK-7 production capability. 発酵方法は、一般的に知られている納豆の発酵方法の他に液体培養などの公知の発酵方法を用いてもよい。 Fermentation process, in addition to be a known fermentation process, such as liquid culture fermentation method natto generally known. 通常、納豆の発酵は36〜39℃で15〜20時間かけて行われるが、さらに42℃以上の温度で、48時間以上の長時間発酵させることによって、脂質中の天然MK−7含量を高めることができる。 Usually, the fermentation of natto is performed over a period of 15 to 20 hours at 36 to 39 ° C., further 42 ° C. or higher, by prolonged fermentation over 48 hours, increasing the natural MK-7 content in lipids be able to.

【0009】取り出す方法は抽出、圧搾、遠心分離など物性の相違を利用して分ける方法を選択できるが、特に抽出法が効果的である。 [0009] method for extracting extraction, pressing, a method may choose to divide by using a difference in physical properties such as centrifugation, in particular extraction method effective. 抽出方法は、発酵物に対して最も効果的な方法を選択すればよく、特に限定されるものではないが、発酵物の固形分量が多ければ固−液抽出法が、少なければ液−液抽出法が効果的である。 Extraction method, the most effective way may be selected, but are not particularly limited, the more the solids content of the fermented product solid respect fermented - liquid extraction method, the less liquid - liquid extraction the law is effective. 固−液抽出法を選択する場合、発酵物は固体でも多量の水分を含有しているので、あらかじめ水分含量を測定して、その水分含量に対して等倍〜10倍量の親水性有機溶媒を混合するか、減圧下で100℃以下の温度で加熱するかして水を除去してから、親油性有機溶媒を等倍〜10倍量添加して、粉砕・抽出すると抽出効率が向上する。 Solid - When selecting the liquid extraction method, the ferment contains a large amount of water in the solid, previously measured moisture content, magnification 10 times the amount of the hydrophilic organic solvent for the water content or mixed, with or heated at 100 ° C. temperature below under reduced pressure after removal of water, was added an equal magnification to 10 times the lipophilic organic solvents, the extraction efficiency is improved with the grinding and extraction .

【0010】親水性有機溶媒と混合して脱水を行う場合は、親水性溶媒−水混液を分離・除去してから脂質を抽出してもまた除去せずに抽出してもよい。 [0010] If mixed with a hydrophilic organic solvent performs dehydration hydrophilic solvent - may be extracted also without removing the water mixture after separating and removing lipids were extracted. 親水性溶媒− Hydrophilic solvent -
水混液を除去してから抽出する場合は、分離した親水性溶媒−水混液を、親油性有機溶媒を用いて更に脂質分を抽出するとよい。 To extract after removal of water mixture is separated hydrophilic solvent - water mixture, it may further extracted lipid fraction by using a lipophilic organic solvents. 脱水後の発酵物を粉砕し、抽出した後、ろ過してろ液の親油性有機溶媒層を分取後、減圧下で溶媒を留去すると抽出脂質が得られる。 The fermented product after the dehydration was ground, after extraction, after preparative oleophilic organic solvent layer filtered to filtrate min, and extracted lipids distilling off the solvent under reduced pressure to obtain.

【0011】液−液抽出法では、水を除去せずに抽出を行うことができるが、水に対して親和性の低い溶媒か混合溶媒を選択して、抽出時に二層に分離させる必要がある。 [0011] solution - the liquid extraction method, it is possible to extract without removing water, by choosing a low solvent or solvent mixture having affinity for water, it must be separated into two layers during extraction is there. 発酵液に対して1/10〜10倍量の水との親和性の低い溶媒か混合溶媒を発酵液と混合後、静置、または加速度を与え強制的に二層を分離して親油性有機溶媒層を分取後、減圧下で溶媒を留去すると抽出脂質が得られる。 After mixing 1 / 10-10 times of low affinity solvent or mixed solvent of water with respect to the fermentation liquid and fermentation liquid, lipophilic organic separates left or forcibly bilayer give acceleration, after preparative solvent layer was, and extracted lipids distilling off the solvent under reduced pressure to obtain. 残った水層に同様の操作を繰り返すと一層効果的である。 The remaining aqueous layer and the same operation is repeated when it is more effective.

【0012】有機溶媒としては、炭素数1〜10の炭化水素あるいはアルコール、エーテル、エステル、ケトンの群から選ばれる単独あるいは2種以上の混合物が使用できる。 [0012] As the organic solvent, a hydrocarbon or an alcohol having 1 to 10 carbon atoms, ethers, esters, alone or a mixture of two or more selected from the group of ketones can be used. 抽出法は、固−液、液−液共にバッチ式でも連続式でもよい。 Extraction method, solid - liquid, liquid - may be in batch or continuous mode liquid both. 抽出温度は、溶媒の沸点以下であれば使用できるが、天然MK−7の化学的分解を抑えるためには室温〜100℃程度の温度が望ましい。 Extraction temperature may be used if higher than the boiling point of the solvent, a temperature of about room temperature to 100 ° C. in order to suppress chemical degradation of natural MK-7 is preferred.

【0013】以上の抽出操作のみによっても、得られた抽出脂質中の天然MK−7含有量は200ppm 〜1%程度にまで高まる。 [0013] by only more extraction operations, natural MK-7 content in the obtained extract lipids increases to about 200 ppm to 1%. このとき、脂質中に含有されるMK− In this case, it is contained in the lipid MK-
7以外の物質は、油脂、ステロールおよびその誘導体、 7 except substances, fats, sterols and derivatives thereof,
トコフェロール、リン脂質、炭化水素等である。 Tocopherols, phospholipids, a hydrocarbon or the like.

【0014】より高含有量の脂質を得るためには、さらに精製処理を施す必要がある。 To obtain a more high content of lipids [0014], it is necessary to further purification process is performed. 精製方法としては、溶媒分別、吸着分別、蒸留、クロマトグラフィー、膜分離の操作を単独もしくはそれらを2種以上複合した方法が効果的であるが、油脂中の脂質精製法として一般的なアルカリ精製法は、使用する強アルカリによってMK−7が分解してしまうため好ましくない。 The purification method may, for example, solvent fractionation, adsorption fractionation, distillation, chromatography, membrane a method that combines alone or their two or more operations of the separation is effective, common alkali refining as a lipid purification of fats and oils law is not preferable because the MK-7 by strong alkali used is decomposed. 溶媒分別法には、次の二種の方法がある。 The solvent fractionation method, there are the following two methods. 上記の抽出溶媒の範囲の溶媒もしくはその混合物で互いに混ざり合わない二種の溶媒を選択し、そのいずれか一方あるいは両方に抽出脂質を溶解し、二液相間でバッチまたは連続で混合−分離を繰り返し行うことによって、天然MK−7の分配率の高い溶媒層に天然MK−7を濃縮する。 Select two solvents immiscible with each other in a solvent or a mixture of the above-mentioned range of the extraction solvent, dissolving the one extracted lipids in one or both, mixed batch or continuous between two liquid phases - the separation by repeating, concentrated natural MK-7 in high distribution ratio of natural MK-7 solvent layer. それを分取して減圧下で溶媒を留去して天然MK−7高含量脂質を得る。 It was collected it min the solvent was distilled off under reduced pressure to obtain a natural MK-7 high-content lipids. 溶媒の混合比率は、一方の溶媒1倍量に対して、他方の溶媒を1/5〜5倍量とすることが望ましい。 The mixing ratio of the solvent is one of the solvent 1 times, it is desirable that the other solvent is 1 / 5-5 times. 別法として、抽出脂質1倍量に対して1/2〜10倍量の、上記の抽出溶媒の範囲の溶媒もしくはその混合物に抽出脂質を加熱溶解した後に、冷却して生成したステロール類を主成分とする不溶物を、ろ過、遠心分離等の方法により除去することによって、天然MK−7高含量の脂質を得る。 Alternatively, extraction lipids 1 1/2 to 10 times the times, after dissolved by heating extraction lipid solvent or a mixture of the above-mentioned range of extraction solvents, mainly sterols produced by cooling the insolubles whose components, filtering, is removed by a method such as centrifugation, to obtain a lipid natural MK-7 high-content.

【0015】吸着分別法は、MK−7が炭素系吸着剤に選択的に吸着される性質を利用して、吸着・溶離を行う方法である。 The adsorption fractionation is a method that utilizes the fact that MK-7 is selectively adsorbed on the carbonaceous adsorbent, a method of performing an adsorption-elution. 抽出脂質の有機溶媒溶液に活性炭を添加・ Adding activated carbon to the organic solvent solution of the extract lipid-
混合するか、活性炭を詰めたカラムに抽出脂質の有機溶媒溶液を通液するかして、活性炭にMK−7を吸着せしめた後、有機溶媒で活性炭を洗浄して不純物を洗い流し、有機溶媒でMK−7を溶離して、天然MK−7高含量の脂質を得る。 Or mixed organic solvent solution of extracted lipids a column packed with activated carbon and either passing liquid, after adsorbed the MK-7 in the activated carbon, washing away impurities by washing the activated carbon with an organic solvent, an organic solvent eluting the MK-7, to obtain a lipid of natural MK-7 high-content. ここで使用する有機溶媒は、上記の抽出溶媒の範囲の溶媒もしくはその混合物であるが、吸着・洗浄には溶離作用の弱い溶媒、主にアルコール類を、 The organic solvent used here is a solvent or a mixture of the above-mentioned range of the extraction solvent, a weak solvent having elution effect on adsorption and washing, primarily alcohols,
溶離には溶離作用の強い溶媒、主に炭化水素類を使用することによって、より効率的に濃縮を行うことができる。 Strong solvent having elution effect elution by using mainly hydrocarbons, can be carried out more efficiently concentrated.

【0016】蒸留法は、天然MK−7が高沸点かつ高温で分解する物質であることから、高真空蒸留である分子蒸留法または水蒸気蒸留法が効果的である。 The distillation method, since natural MK-7 is decomposed substance with a high boiling and high temperature, molecular distillation or steam distillation is a high vacuum distillation is effective. 両方法とも、蒸発対象物の蒸気圧を小さくして、高沸点の物質でも低い温度で蒸発させることができる。 Both methods to reduce the vapor pressure of the evaporated object can be evaporated at a temperature lower by high boiling materials. これらの蒸留法は、バッチ式でも連続式でもよい。 These distillation methods may be a batch system or a continuous system. この方法を適用することによって得られた天然MK−7高含量の脂質は、溶媒の残留もなく、無臭であるためそのまま食用に供することができる。 Lipids natural MK-7 high-content obtained by applying this method, the residual solvent without, can be directly subjected to food because it is odorless. 分子蒸留法では、5Pa以下の圧力で20 The molecular distillation, 20 at pressures 5Pa
0℃〜300℃の温度範囲で、抽出脂質を分子蒸留装置に付し、段階的温度にて蒸発留分を分取することによって天然MK−7高含量の脂質を得る。 In a temperature range of 0 ° C. to 300 ° C., subjected extracted lipid molecular distillation apparatus, to obtain a lipid natural MK-7 high-content by preparative evaporated fractions min at stepwise temperature. 水蒸気蒸留法では、1kPa 以下の圧力で200〜350℃の温度範囲で、水または水蒸気を導入しながら蒸留を行い、段階的温度にて蒸発留分を分取することによって天然MK−7 The steam distillation, at a temperature range of 200 to 350 ° C. at pressures 1 kPa, subjected to distillation while introducing water or steam, natural MK-7 by preparative evaporated fractions min at stepwise temperature
高含量の脂質を得る。 Obtain a lipid of high content.

【0017】クロマトグラフィー法は、カラムクロマトグラフィー法が効果的である。 The chromatographic method, column chromatography method is effective. カラムに充填する固定相は、市販のクロマトグラフィー用充填剤でよい。 Stationary phase packed in the column may be a commercially available packing material for chromatography. 実用上、シリカゲルベースの吸着剤もしくは有機ポリマーを骨格に持った合成吸着剤が望ましい。 In practice, silica gel-based adsorbent or the synthetic adsorbent having an organic polymer backbone is desired. 移動相は、上記の抽出溶媒の範囲の溶媒もしくはその混合物から選択する。 Mobile phase is selected from a solvent or a mixture of the above-mentioned range of the extraction solvent. 以上の精製方法を、単独もしくはそれらを複合して行うことによって、天然MK−7高含量脂質を得ることができる。 More purification methods, by performing alone or they are combined, it is possible to obtain a natural MK-7 high-content lipids. このときのMK−7含有量は1%以上である。 MK-7 content of this time is at least 1%. 精製を重ねることによってほぼ100%のものも調製できる。 It can also be prepared that of nearly 100% by overlaying purification. 蒸留して得られた天然MK−7高含量脂質には脂質以外のものとして、若干量の溶媒が残留していると共に、発酵物由来の臭気も残留している場合がある。 As other than distilled naturally MK-7 high-content lipids obtained lipid, with a slight amount of the solvent remaining odor from fermentations even in some cases remaining.
これらの両方を完全に除去するためには、最後に100 To completely remove these both end 100
〜250℃にて水蒸気蒸留を行うとよい。 It may be carried out a steam distillation at ~250 ℃. 水蒸気蒸留は、流動性がないと適用が困難であるため、溶媒留去時にペースト状あるいは固体になる場合は、1/2〜5倍量の植物油に溶解してから水蒸気蒸留処理を行う。 Steam distillation, since it is difficult to apply and have no fluidity, if a paste or solid at evaporated performs steam distillation process after dissolving in 1 / 2-5 times the amount of vegetable oil.

【0018】 [0018]

【発明の効果】本発明により得られた天然MK−7高含量脂質は、原料が天然物であり、かつ食することのできるものであることから、出血症はもちろん骨粗鬆症の予防のために、食品あるいは補助食品として安全性が高く簡易に日常的摂取ができる。 Natural MK-7 high-content lipid obtained by the present invention exhibits, raw material is a natural product, and since it is those which can be eaten, for bleeding disease course of osteoporosis prevention, food or can daily intake in a simple high safety as a food supplement. また、この脂質は無味・無臭であることから、嗜好上の問題もなく、様々な形態の食品に応用することが可能である。 Also, the lipid is because it is tasteless, odorless, without taste problems, it can be applied to food products in various forms.

【0019】 [0019]

【発明の実施の形態】次に実施例によって本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Next will be described in detail by way of examples the invention, but the invention is not limited thereto. なお、以下の実施例においてMK−7含量は(財) Note that the MK-7 content in the following examples (Foundation)
日本食品分析センターの高速液体クロマトグラフ法に準じて測定した値を、その他の分析値は公定法に準じて測定した値を示す。 The value measured according to high-performance liquid chromatography of Japan Food Analysis Center, other analytical value indicates a value measured according to the official method.

【0020】実施例1 室温下、市販の挽き割り納豆(MK−7含量17.2pp [0020] Example 1 at room temperature, commercial grits natto (MK-7 content 17.2pp
m ;水分57.7%)3kgにイソプロピルアルコール2.3Lを加えて粉砕後、n−ヘキサン4.6Lを加えて再度粉砕した。 m; water content 57.7%) after 3kg triturated with isopropyl alcohol 2.3L to and triturated again added n- hexane 4.6L. 全量をろ過した後に、ろ液を静置して分離したn−ヘキサン層(上層)を分取した。 After filtration the total volume, was collected n- hexane layer separated by standing the filtrate (upper layer). 上層は5.2Lであった。 The top layer was 5.2L. 上層の溶媒を2kPa ,60℃で留去し、153gの残渣を得た。 The upper layer of the solvent was distilled off 2 kPa, 60 ° C., to obtain a residue 153 g. この残渣を3hPa ,170 The residue 3 hPa, 170
℃,1.5g水蒸気/時間で60分間脱臭を行って、黄色、無味、無臭、油状の脂質()144gを得た。 ° C., and for 60 minutes deodorized 1.5g steam / hour to give a yellow, tasteless, odorless, lipid oil () to 144 g. この脂質には、MK−7 351ppm ,トコフェロール This lipid, MK-7 351ppm, tocopherol
135ppm が含有されており、TLC(薄層クロマトグラフィー)で観察したところ大部分はトリグリセライドで微量のステロールおよびその誘導体、リン脂質、炭化水素類がみられた。 135ppm are contained, the majority was observed by TLC (thin layer chromatography) Sterols and derivatives thereof traces in triglycerides, phospholipids, hydrocarbons were observed. この脂質の酸価は1.2、過酸化物価は0.6であった。 The acid value of the lipid 1.2, peroxide value was 0.6. MK−7の回収 MK-7 recovery of

【0021】実施例2 納豆製造時に副生成する大豆煮汁に納豆菌を接種し、納豆の製造と同じ条件で培養したもの(MK−7含量1 [0021] Example 2 natto were inoculated with Bacillus natto into soybean broth by-produced during the production, which were cultured in the same conditions as natto manufacturing (MK-7 content 1
0.8ppm )10kgにジエチルエーテル10Lを加えて震とう後、静置して分離したジエチルエーテル層(上層)を分取した。 After shaken by addition of diethyl ether 10L to 0.8 ppm) 10 kg, was collected diethyl ether layers were separated upon standing (upper layer). 上層の溶媒を2kPa ,60℃で留去し、7.9gの残渣を得た。 The upper layer of the solvent was distilled off 2 kPa, 60 ° C., to obtain a residue 7.9 g. この残渣を5hPa,180 The residue 5 hPa, 180
℃,0.08g水蒸気/時間で60分間脱臭を行って、 ℃, carried out 60 minutes deodorization in 0.08g water vapor / time,
黄色、無味、無臭、油状の脂質()7.2gを得た。 To give a yellow, tasteless, odorless, oily lipid () 7.2g.
この脂質には、MK−7 1.4%,トコフェロール This lipid, MK-7 1.4%, tocopherol
85ppm が含有されており、TLCで観察したところ上記の他にトリグリセライド、ステロールおよびその誘導体、リン脂質、炭化水素類がみられた。 85ppm are contained, in addition to triglycerides of the was observed by TLC, sterols and derivatives thereof, phospholipids, hydrocarbons were observed. この脂質の酸価は0.8、過酸化物価は0.2であった。 The acid value of the lipid 0.8, peroxide value was 0.2. MK−7の回収率は93%であった。 Recovery rate of MK-7 was 93%.

【0022】実施例3 市販の納豆(MK−7含量8.5ppm )10Kgを80℃ [0022] Example 3 Commercially available natto (MK-7 content 8.5 ppm) 10 Kg 80 ° C.
で24時間減圧乾燥して乾燥物4.75kgを得た。 In and dried under reduced pressure for 24 hours to give a dried product 4.75 kg. 乾燥物の温度が下がらない内に末広鉄工所製2軸エクストルーダーに付し、315gの粗油を得た。 Subjected to Suehiro Iron Works Ltd. biaxial extruder within the temperature of the dry matter does not drop to give a crude oil 315 g. 80℃で粗油に温水15mlを添加,攪拌し、遠心分離後上層の油層を分け取った。 Adding hot water 15ml coarse oil at 80 ° C., and stirred took divided upper oil layer after centrifugation. さらに20%水酸化ナトリウム水溶液6mlを添加,攪拌し、遠心分離後上層の油層を分け取った。 Further addition of 20% aqueous sodium hydroxide solution 6 ml, stirring took divided upper oil layer after centrifugation. 油層を真空乾燥後、100℃で活性白土15gを添加し, After vacuum drying the oil layer was added activated clay 15g at 100 ° C.,
攪拌,ろ過した。 Stirring, and filtered. ろ液を3hPa ,180℃,3g水蒸気/時間で60分間脱臭を行って、黄色、無味、無臭、油状の脂質296gを得た。 The filtrate 3 hPa, 180 ° C., and for 60 minutes deodorized 3g steam / hour to give a yellow, tasteless, odorless, oily lipid 296 g. この脂質には、MK−7 1 This lipid, MK-7 1
72ppm ,トコフェロール 752ppm が含有されており、TLCで観察したところ大部分はトリグリセライドで微量のステロールおよびその誘導体、リン脂質、炭化水素類がみられた。 72 ppm, tocopherol 752ppm are contained, the majority was observed by TLC sterols and derivatives traces in triglycerides, phospholipids, hydrocarbons were observed. この脂質の酸価は0.2、過酸化物価は0.1であった。 The acid value of the lipid 0.2, peroxide value was 0.1. MK−7の回収率は60%であった。 Recovery of MK-7 was 60%.

【0023】実施例4 上記実施例1で得られた脂質()50gを流下膜式分子蒸留装置に付した。 The lipid obtained in Example 4 above Example 1 () were subjected to 50g in falling film molecular distillation apparatus. 3Paの圧力で200℃から280 From 200 ℃ at a pressure of 3Pa 280
℃まで10℃刻みで昇温した。 It was heated at ° C. to 10 ° C. increments. 230℃〜280℃までに留出した蒸発物を分取して、黄褐色、無味、無臭、ペースト状の脂質10.3gを得た。 The vapors which distilled out up to 230 ° C. to 280 ° C. was fractionated to give a tan, tasteless, odorless, pasty lipid 10.3 g. この脂質には、MK This lipid, MK
−7 1560ppm 、トコフェロール 163ppm が含有されており、TLCで観察したところ上記の他にトリグリセライド、ステロールおよびその誘導体、炭化水素類がみられた。 -7 1560Ppm, tocopherol 163ppm are contained, in addition to triglycerides of the was observed by TLC, sterols and derivatives thereof, hydrocarbons were observed. この脂質の酸価は0、過酸化物価は0. Acid value 0 of this lipid, peroxide value 0.
1であった。 It was 1. MK−7の回収率は92%であった。 Recovery of MK-7 was 92%.

【0024】実施例5 市販の顆粒状活性炭50gをイソプロピルアルコールで充填したカラムに、上記実施例1で得られた脂質() [0024] column Example 5 Commercially available granular activated carbon 50g was charged with isopropyl alcohol, a lipid obtained in the above Example 1 ()
50gをイソプロピルアルコール150mlに溶解した溶液を、40℃、空間速度(SV)1.0で通液してMK The solution in isopropyl alcohol 150ml of 50 g, 40 ° C., and passed through the column at a space velocity (SV) 1.0 MK
−7を吸着せしめた。 -7 was adsorbed. 同様の温度および流速でイソプロピルアルコール1Lを通液してカラムを洗浄した後に、 After washing the column was passed through the isopropyl alcohol 1L at the same temperature and flow rate,
トルエン500mlを通液してカラムから流出した液の5 5 of the liquid flowing out from the column was passed through toluene 500ml
0〜500mlの画分を分取した。 The fraction of 0~500ml was fractionated. この画分を2kPa ,6 This fraction 2kPa, 6
0℃で溶媒留去し、4.5gの残渣を得た。 It evaporated at 0 ° C., to obtain a residue 4.5 g. この残渣に9mlのアセトンを加えて50℃で溶解後、−20℃で1 After dissolving the residue in 50 ° C. Acetone was added to the 9 ml, 1 at -20 ° C.
時間冷却して、生成した沈殿物をろ別した。 And time cooling, the precipitate formed was filtered off. ろ液を2kP 2kP the filtrate
a ,60℃で溶媒留去し、3.9gの残渣を得た。 a, 60 evaporated at ° C., to obtain a residue 3.9 g. この残渣に大豆油3gを加えて、3hPa ,180℃,0.0 And soybean oil 3g was added to the residue, 3hPa, 180 ℃, 0.0
7g水蒸気/時間で60分間脱臭を行って、黄色、無味、無臭、油状の脂質6.8gを得た。 7g steam / time in going for 60 minutes deodorization, to give a yellow, tasteless, odorless, lipid 6.8g of oil. この脂質には、 This lipid,
MK−7 2200ppm ,トコフェロール 12ppm が含有されており、TLCで観察したところ大部分はトリグリセライドで微量のステロールおよびその誘導体、炭化水素類がみられた。 MK-7 2200 ppm, and tocopherol 12ppm is contained, the majority was observed by TLC sterols and derivatives thereof trace hydrocarbons was observed in triglycerides. この脂質の酸価は1.5、過酸化物価は1.8であった。 The acid value of the lipid 1.5, peroxide value was 1.8. MK−7の回収率は85%であった。 Recovery rate of MK-7 was 85%.

【0025】実施例6 上記実施例2で得られた脂質()5gを20mlのn− [0025] obtained in Example 6 above Example 2 Lipid () 5 g of 20 ml n-
ヘキサンに溶解して、20mlの5%含水エタノールを加えて震とう後、ヘキサン層(上層)と含水エタノール層(下層)をそれぞれ分け取り、上層には20mlの5%含水エタノールを、下層には20mlのn−ヘキサンを加えて再度震とうした。 It was dissolved in hexane and shaken by adding 5% water-containing ethanol 20ml, hexane layer (upper layer) and aqueous ethanol layer (lower layer), respectively Wakedori, 5% water-containing ethanol 20ml in the upper layer, the lower layer It was shaken again by adding 20ml of n- hexane. それぞれの上層を分け取り、2kPa Each of up divided into an upper layer, 2kPa
,60℃で溶媒留去し、4.5gの残渣を得た。 , It evaporated at 60 ° C., to obtain a residue 4.5 g. 10 10
0gのシリカゲルをn−ヘキサンで充填したカラムに、 0g of silica gel column packed with n- hexane,
前記残渣を5mlのn−ヘキサンで溶解した溶液をSV A solution of the residue in 5ml of n- hexane SV
1.0で通液した後に、n−ヘキサン:ジエチルエーテル(20:1)500mlを通液してカラムから流出した液の320〜480mlの画分を分取した。 After it passed through the column at 1.0, n-hexane: diethyl ether (20: 1) was passed through a 500ml was collected fractions 320~480ml liquid flowing out from the column min. この画分を2 This fraction 2
kPa ,60℃で溶媒留去し、0.31gの脂質を得た。 kPa, 60 evaporated at ° C., to obtain a lipid 0.31 g.
この脂質には、MK−7 15.4%が含有されており、TLCで観察したところ上記の他にトリグリセライド、ステロールおよびその誘導体、炭化水素類がみられた。 The lipid, MK-7 15.4% are contained, in addition to triglycerides of the was observed by TLC, sterols and derivatives thereof, hydrocarbons were observed. MK−7の回収率は68%であった。 Recovery of MK-7 was 68%.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl. 6識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 A61K 31/12 ADT 9455−4C C07C 46/10 C11B 1/10 3/10 3/12 ────────────────────────────────────────────────── ─── of the front page continued (51) Int.Cl. 6 identification symbol Agency Docket No. FI technology display location A61K 31/12 ADT 9455-4C C07C 46/10 C11B 1/10 3/10 3/12

Claims (13)

    【特許請求の範囲】 [The claims]
  1. 【請求項1】 枯草菌で発酵した食品素材より取り出した天然メナキノン−7高含量脂質。 1. A natural menaquinone-7 high content of lipids was removed from the food material was fermented with Bacillus subtilis.
  2. 【請求項2】 取り出す方法が抽出することである請求項第1項記載の天然メナキノン−7高含量脂質。 2. A natural menaquinone-7 high content lipids of the first of claims methods is that the extract taken out.
  3. 【請求項3】 取り出す方法が抽出および天然メナキノン−7が分解しない条件下で精製することである請求項第1項記載の天然メナキノン−7高含量脂質。 3. A natural menaquinone-7 high content lipids of the first of claims methods extraction and natural menaquinone-7 is purified by conditions that do not decompose to retrieve.
  4. 【請求項4】 食品素材が食用植物あるいはそれらの加工過程で発生する粕、煮汁などの副産物である請求項第1項ないし第3項のいずれか一項記載の天然メナキノン−7高含量脂質。 4. lees food material occurs in edible plants or their processing process, natural menaquinone-7 high content lipid of any one of claims the first term to the third term is a by-product, such as cooking liquid.
  5. 【請求項5】 枯草菌による発酵条件が、温度42℃以上、時間48時間以上であることを特徴とする請求項第1項ないし第4項のいずれか一項記載の天然メナキノン−7高含量脂質。 5. The fermentation conditions by Bacillus subtilis, the temperature 42 ° C. or higher, natural menaquinone-7 high content of any one of claims first term to the fourth term, characterized in that at the time 48 hours or more lipid.
  6. 【請求項6】 枯草菌が納豆菌である請求項第1項ないし第5項のいずれか一項記載の天然メナキノン−7高含量脂質。 6. Natural menaquinone-7 high content lipid of any one of claims the first term through the fifth term Bacillus subtilis is Bacillus natto.
  7. 【請求項7】 天然メナキノン−7含有量が200ppm 7. 200ppm natural menaquinone-7 content
    以上である請求項第1項ないし第6項のいずれか一項記載の天然メナキノン−7高含量脂質。 By natural menaquinone-7 high content lipid of any one of claims the first term to the sixth term it is more.
  8. 【請求項8】 抽出および天然メナキノン−7が分解しない条件下における精製方法が、溶媒抽出、溶媒分別、 8. Extraction and purification of natural menaquinone-7 is in conditions which do not decompose, solvent extraction, solvent fractionation,
    吸着分別、蒸留、クロマトグラフィーまたは膜分離の単独もしくはそれらを2以上複合した方法である請求項第3項ないし第7項のいずれか一項記載の天然メナキノン−7高含量脂質。 Adsorption fractionation, distillation, either alone or natural menaquinone-7 high content lipid of any one of claims paragraph 3 to paragraph 7 are those of two or more composite and method of chromatography, or membrane separation.
  9. 【請求項9】 抽出または精製に使用する溶媒が、有機溶媒あるいは含水有機溶媒である請求項第2項ないし第8項のいずれか一項記載の天然メナキノン−7高含量脂質。 The solvent used to 9. extraction or purification, natural menaquinone-7 high content lipid of any one of claims second term to paragraph 8 which is an organic solvent or water-containing organic solvent.
  10. 【請求項10】 吸着分別法が、活性炭に対する吸着、 10. adsorption fractionation method, adsorption to activated carbon,
    溶離によって成される請求項第8項記載の天然メナキノン−7高含量脂質。 Natural menaquinone-7 high content lipid of claim 8 wherein wherein done by elution.
  11. 【請求項11】 蒸留方法が、分子蒸留、水蒸気蒸留等の高真空蒸留である請求項第8項記載の天然メナキノン−7高含量脂質。 11. A distillation method, molecular distillation, natural menaquinone-7 high content lipid of claim 8 wherein wherein the high vacuum distillation of the steam distillation.
  12. 【請求項12】 有機溶媒が、炭素数1〜10の炭化水素あるいはアルコール、エーテル、エステル、ケトンである請求項第9項記載の天然メナキノン−7高含量脂質。 12. organic solvent, natural menaquinone-7 high content lipid as in claim 9 wherein, wherein the hydrocarbons or alcohols, ethers, esters, ketones having 1 to 10 carbon atoms.
  13. 【請求項13】 請求項第1項ないし第12項のいずれか一項記載の天然メナキノン−7高含量脂質を主成分とする、骨粗鬆症の予防または/かつ治療用組成物。 13. a main component of natural menaquinone-7 high content lipid according any one of claims paragraph 1 to paragraph 12, prevention or / and therapeutic composition for osteoporosis.
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