JPH085803B2 - 日本脳炎ワクチンの製造法 - Google Patents
日本脳炎ワクチンの製造法Info
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- JPH085803B2 JPH085803B2 JP1291443A JP29144389A JPH085803B2 JP H085803 B2 JPH085803 B2 JP H085803B2 JP 1291443 A JP1291443 A JP 1291443A JP 29144389 A JP29144389 A JP 29144389A JP H085803 B2 JPH085803 B2 JP H085803B2
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- JP
- Japan
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- japanese encephalitis
- virus
- ultrafiltration
- purification
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は日本脳炎ワクチンの製造法に関する。
（従来の技術および発明が解決しようとする課題） 従来、日本脳炎ウイルスのホルマリン処理による不活
化後の精製には密度勾配遠心法が用いられてきたが、不
活化処理中にホルマリンとマウス脳由来の不純蛋白との
凝集が生じるので、ウイルスと同じ粒子の形あるいは同
じ密度をもつ不純蛋白を分離することが不可能であっ
た。また、不活化処理前に生ウイルスを密度勾配遠心し
た場合には、ウイルス活性が著しく低下し、日本脳炎ワ
クチンの蛋白質含量当たりの力価を向上させることは困
難であった。
化後の精製には密度勾配遠心法が用いられてきたが、不
活化処理中にホルマリンとマウス脳由来の不純蛋白との
凝集が生じるので、ウイルスと同じ粒子の形あるいは同
じ密度をもつ不純蛋白を分離することが不可能であっ
た。また、不活化処理前に生ウイルスを密度勾配遠心し
た場合には、ウイルス活性が著しく低下し、日本脳炎ワ
クチンの蛋白質含量当たりの力価を向上させることは困
難であった。
一方、限外ろ過法は分離・精製・濃縮手段として用い
られているが、従来市販されている分画分子量100万以
下の限外ろ過膜では、蛋白質が吸着するため目づまりし
やすく、日本脳炎ウイルスの精製に使用することはでき
なかった。また、最近開発された疎水性樹脂ポリスルフ
ォンを原料とした分画分子量300万の限外ろ過膜（TS−3
000;東ソー社製）をセットした限外ろ過機では、膜表面
を高速で液循環させることによって目づまりを防止して
いるため、日本脳炎ウイルス感染マウス脳乳剤を精製原
料として適用することは可能となったが、該限外ろ過機
をそのまま使用しても日本脳炎ワクチンの蛋白質含量当
たりの力価を向上させることはできなかった。
られているが、従来市販されている分画分子量100万以
下の限外ろ過膜では、蛋白質が吸着するため目づまりし
やすく、日本脳炎ウイルスの精製に使用することはでき
なかった。また、最近開発された疎水性樹脂ポリスルフ
ォンを原料とした分画分子量300万の限外ろ過膜（TS−3
000;東ソー社製）をセットした限外ろ過機では、膜表面
を高速で液循環させることによって目づまりを防止して
いるため、日本脳炎ウイルス感染マウス脳乳剤を精製原
料として適用することは可能となったが、該限外ろ過機
をそのまま使用しても日本脳炎ワクチンの蛋白質含量当
たりの力価を向上させることはできなかった。
（課題を解決するための手段） 本発明者らは、日本脳炎ウイルス感染マウス脳乳剤か
ら得られるウイルス浮遊液を、限外ろ過精製（一次精
製）を行いマウス脳由来の不純蛋白を除去した後、ホル
マリンによるウイルス不活化処理に付し、さらに限外ろ
過精製（二次精製）を行うことによって、得られる日本
脳炎ワクチンの蛋白質含量当たりの力価が向上すること
を見い出し、さらに研究を進めた結果本発明を完成し
た。
ら得られるウイルス浮遊液を、限外ろ過精製（一次精
製）を行いマウス脳由来の不純蛋白を除去した後、ホル
マリンによるウイルス不活化処理に付し、さらに限外ろ
過精製（二次精製）を行うことによって、得られる日本
脳炎ワクチンの蛋白質含量当たりの力価が向上すること
を見い出し、さらに研究を進めた結果本発明を完成し
た。
すなわち本発明は、 日本脳炎ウイルス感染マウス脳乳剤から得られるウイ
ルス浮遊液を、安定剤の共存下に、疎水性限外ろ過膜で
回分ろ過し、ウイルス不活化処理後、強アルカリで処理
した限外ろ過膜で回分ろ過することを特徴とする日本脳
炎ワクチンの製造法を提供するものである。
ルス浮遊液を、安定剤の共存下に、疎水性限外ろ過膜で
回分ろ過し、ウイルス不活化処理後、強アルカリで処理
した限外ろ過膜で回分ろ過することを特徴とする日本脳
炎ワクチンの製造法を提供するものである。
日本脳炎ウイルス感染マウス脳乳剤から得られるウイ
ルス浮遊液は、公知の方法たとえば日本脳炎ウイルス感
染マウス脳を10,000rpm,8分間ホモジナイズして得られ
る脳乳剤を4,000rpm,15分間低速遠心後、硫酸プロタミ
ン1.2mg/mlを添加し、２時間後に再び4,000rpm,15分間
低速遠心することにより調製することができる。
ルス浮遊液は、公知の方法たとえば日本脳炎ウイルス感
染マウス脳を10,000rpm,8分間ホモジナイズして得られ
る脳乳剤を4,000rpm,15分間低速遠心後、硫酸プロタミ
ン1.2mg/mlを添加し、２時間後に再び4,000rpm,15分間
低速遠心することにより調製することができる。
本発明の製造法では、製造工程中の日本脳炎ウイルス
の失活を防止するため、安定剤の共存下に日本脳炎ワク
チンの製造を行うが、用いられる安定剤としては、約0.
1〜2.5w/v％好ましくは約0.2〜1.0w/v％の糖アルコール
（例、エリトリトール，マンニトール，ソルビトール，
イノシトールなど），約0.004〜0.1w/v％好ましくは約
0.01〜0.05w/v％のゼラチンなどがあげられ、なかでも
約0.5w/v％のソルビトールおよび約0.02w/v％のゼラチ
ンを安定剤として用いるのが好ましい。上記安定剤は、
通常日本脳炎ウイルス感染マウス脳乳剤から得られるウ
イルス浮遊液に添加されるが、以下の工程において共存
させ、また最終生産物である日本脳炎ワクチンにおいて
も共存させることが望ましい。
の失活を防止するため、安定剤の共存下に日本脳炎ワク
チンの製造を行うが、用いられる安定剤としては、約0.
1〜2.5w/v％好ましくは約0.2〜1.0w/v％の糖アルコール
（例、エリトリトール，マンニトール，ソルビトール，
イノシトールなど），約0.004〜0.1w/v％好ましくは約
0.01〜0.05w/v％のゼラチンなどがあげられ、なかでも
約0.5w/v％のソルビトールおよび約0.02w/v％のゼラチ
ンを安定剤として用いるのが好ましい。上記安定剤は、
通常日本脳炎ウイルス感染マウス脳乳剤から得られるウ
イルス浮遊液に添加されるが、以下の工程において共存
させ、また最終生産物である日本脳炎ワクチンにおいて
も共存させることが望ましい。
上記安定剤の添加後限外ろ過精製を行うが、限外ろ過
精製に先立ち、ポアサイズ約0.3〜0.8μｍなかでも約0.
45μｍのフィルターで除菌ろ過を行うのが望ましい。
精製に先立ち、ポアサイズ約0.3〜0.8μｍなかでも約0.
45μｍのフィルターで除菌ろ過を行うのが望ましい。
本発明で用いられる限外ろ過膜は、分画分子量約100
〜300万の限外ろ過膜なかでも疎水性限外ろ過膜が好ま
しく、さらに分画分子量約300万の疎水性ポリスルフォ
ン樹脂を原料とする限外ろ過膜（例、TS−3000（東ソー
社製）など）が好ましい。上記した限外ろ過膜のなかで
も、牛血清γ−グロブリンの透過阻止率が約35〜62％と
りわけ約45〜60％の限外ろ過膜を用いるのが好ましく、
さらにウイルス透過量がマウスLD50で約105.5/0.03ml以
下とりわけ約105/0.03ml以下の限外ろ過膜を用いるのが
好ましい。
〜300万の限外ろ過膜なかでも疎水性限外ろ過膜が好ま
しく、さらに分画分子量約300万の疎水性ポリスルフォ
ン樹脂を原料とする限外ろ過膜（例、TS−3000（東ソー
社製）など）が好ましい。上記した限外ろ過膜のなかで
も、牛血清γ−グロブリンの透過阻止率が約35〜62％と
りわけ約45〜60％の限外ろ過膜を用いるのが好ましく、
さらにウイルス透過量がマウスLD50で約105.5/0.03ml以
下とりわけ約105/0.03ml以下の限外ろ過膜を用いるのが
好ましい。
ウイルス不活化処理前の限外ろ過精製（一次精製）で
用いられる限外ろ過膜としては、上記した限外ろ過膜を
そのまま用いてもよいが、次亜塩素酸ソーダ，苛性ソー
ダ，蛋白分解酵素などで再生（前処理）した膜を用いる
のが好ましく、なかでも次亜塩素酸ソーダで再生（前処
理）した膜を用いるのが好ましい。次亜塩素酸ソーダで
再生する場合、有効塩素濃度は約50〜1000ppmが好まし
く、作用時間約0.5〜５時間なかでも約１時間,2回処理
するのが好ましい。
用いられる限外ろ過膜としては、上記した限外ろ過膜を
そのまま用いてもよいが、次亜塩素酸ソーダ，苛性ソー
ダ，蛋白分解酵素などで再生（前処理）した膜を用いる
のが好ましく、なかでも次亜塩素酸ソーダで再生（前処
理）した膜を用いるのが好ましい。次亜塩素酸ソーダで
再生する場合、有効塩素濃度は約50〜1000ppmが好まし
く、作用時間約0.5〜５時間なかでも約１時間,2回処理
するのが好ましい。
一次精製における回分回数は１〜５回なかでも２〜３
回が好ましく、例えば、膜面積３m2の限外ろ過機を利用
した場合、流速は約10〜25l/分なかでも約16l/分が好ま
しい。
回が好ましく、例えば、膜面積３m2の限外ろ過機を利用
した場合、流速は約10〜25l/分なかでも約16l/分が好ま
しい。
一次精製では精製しすぎるとワクチンの力価が低下す
るので、ウイルス濃度をワクチンにおける濃度の約１〜
３倍なかでも約1.5倍とするのが好ましく、また一次精
製後の蛋白量が高すぎるとウイルス不活化処理後の限外
ろ過膜精製への適用が困難となるため、蛋白量を約500
〜2000μg/mlなかでも1000μg/mlとするのが好ましい。
るので、ウイルス濃度をワクチンにおける濃度の約１〜
３倍なかでも約1.5倍とするのが好ましく、また一次精
製後の蛋白量が高すぎるとウイルス不活化処理後の限外
ろ過膜精製への適用が困難となるため、蛋白量を約500
〜2000μg/mlなかでも1000μg/mlとするのが好ましい。
一次精製後ウイルス不活化処理を行うが、ウイルス不
活化処理に先立ち、ポアサイズ約0.2〜0.45μｍなかで
も約0.3μｍのフィルターで除去ろ過を行うのが望まし
い。
活化処理に先立ち、ポアサイズ約0.2〜0.45μｍなかで
も約0.3μｍのフィルターで除去ろ過を行うのが望まし
い。
ウイルス不活化処理としては、例えば約0.03〜0.2v/v
％好ましくは約0.02〜0.1v/v％のホルマリンを添加し、
４℃にて14日間以上かけて不活化するなどの公知の方法
があげられる。
％好ましくは約0.02〜0.1v/v％のホルマリンを添加し、
４℃にて14日間以上かけて不活化するなどの公知の方法
があげられる。
ウイルス不活化処理後の限外ろ過精製（二次精製）で
用いられる限外ろ過膜としては、上記した限外ろ過膜を
強アルカリ（例、苛性ソーダ，水酸化カリウムなど）好
ましくは苛性ソーダで処理した膜を用いるのが好まし
い。苛性ソーダで処理する場合、濃度は約0.05〜5.0w/v
％なかでも約1.0w/v％が好ましく、作用時間約0.5〜25
時間なかでも１時間,2回処理するのが好ましい。さらに
二次精製で用いる膜は、牛血清γ−グロブリンの透過阻
止率が約30％以下としておくことが望ましく、その目的
には一次精製で用いた限外ろ過膜をそのまま上記強アル
カリ処理に付して用いるか、あるいは正常マウス脳を日
本脳炎ウイルス感染マウス脳と同様に処理して得られる
正常マウス脳プロタミン精製材料を一次精製で用いる限
外ろ過膜表面に吸着させた後、上記強アルカリ処理に付
して用いるのがよい。
用いられる限外ろ過膜としては、上記した限外ろ過膜を
強アルカリ（例、苛性ソーダ，水酸化カリウムなど）好
ましくは苛性ソーダで処理した膜を用いるのが好まし
い。苛性ソーダで処理する場合、濃度は約0.05〜5.0w/v
％なかでも約1.0w/v％が好ましく、作用時間約0.5〜25
時間なかでも１時間,2回処理するのが好ましい。さらに
二次精製で用いる膜は、牛血清γ−グロブリンの透過阻
止率が約30％以下としておくことが望ましく、その目的
には一次精製で用いた限外ろ過膜をそのまま上記強アル
カリ処理に付して用いるか、あるいは正常マウス脳を日
本脳炎ウイルス感染マウス脳と同様に処理して得られる
正常マウス脳プロタミン精製材料を一次精製で用いる限
外ろ過膜表面に吸着させた後、上記強アルカリ処理に付
して用いるのがよい。
二次精製における回分回数は３〜８回なかでも５〜６
回が好ましく、例えば、膜面積３m2の限外ろ過機を利用
した場合、流速は約15〜30l/分なかでも約22l/分が好ま
しい。
回が好ましく、例えば、膜面積３m2の限外ろ過機を利用
した場合、流速は約15〜30l/分なかでも約22l/分が好ま
しい。
二次精製終了後のウイルス濃度をワクチンにおける濃
度の約５〜10倍なかでも約７倍とするのが好ましく、蛋
白量を約70〜300μg/mlなかでも約140μg/mlとするのが
好ましい。
度の約５〜10倍なかでも約７倍とするのが好ましく、蛋
白量を約70〜300μg/mlなかでも約140μg/mlとするのが
好ましい。
かくして得られる日本脳炎ワクチン原液は、例えばリ
ン酸塩緩衝塩化ナトリウム液等で希釈して最終バルクと
するが、ポアサイズ約0.3〜0.8μｍなかでも約0.45μｍ
のフィルターで除菌ろ過することが望ましく、さらに適
当な安定剤，保存剤（例、0.01w/v％チメロサールな
ど）などを加えてもよく、また必要であれば分注，凍結
乾燥してもよい。
ン酸塩緩衝塩化ナトリウム液等で希釈して最終バルクと
するが、ポアサイズ約0.3〜0.8μｍなかでも約0.45μｍ
のフィルターで除菌ろ過することが望ましく、さらに適
当な安定剤，保存剤（例、0.01w/v％チメロサールな
ど）などを加えてもよく、また必要であれば分注，凍結
乾燥してもよい。
本発明の日本脳炎ワクチンの製造法によれば、蛋白質
含量20μg/ml当たりの力価（プラック中和抗体価）が10
3以上好ましくは103.5以上の高純度で熱安定性に優れた
高品質の日本脳炎ワクチンを、高収率で得ることができ
る。
含量20μg/ml当たりの力価（プラック中和抗体価）が10
3以上好ましくは103.5以上の高純度で熱安定性に優れた
高品質の日本脳炎ワクチンを、高収率で得ることができ
る。
（実施例） 以下に実施例をあげて本発明をさらに具体的に説明す
るが、本発明はこれらに限定されるものでないことは言
うまでもない。
るが、本発明はこれらに限定されるものでないことは言
うまでもない。
実施例１ （１）ウイルス浮遊液の調製 日本脳炎感染マウス脳に５倍量のM/150リン酸塩緩衝
塩化ナトリウム液（pH8.0）を加え、10,000rpm,8分間ホ
モジナイズして得られる脳乳剤を4,000rpm,15分間低速
遠心後、上清に1.2mg/mlの硫酸プロタミンを添加し、２
時間後に4,000rpm,15分間低速遠心して上清よりウイル
ス浮遊液を得た（蛋白含有：約3300μg/ml）。
塩化ナトリウム液（pH8.0）を加え、10,000rpm,8分間ホ
モジナイズして得られる脳乳剤を4,000rpm,15分間低速
遠心後、上清に1.2mg/mlの硫酸プロタミンを添加し、２
時間後に4,000rpm,15分間低速遠心して上清よりウイル
ス浮遊液を得た（蛋白含有：約3300μg/ml）。
（２）限外ろ過精製（一次精製） 限外ろ過膜の再生 疎水性ポリスルフォン樹脂限外ろ過膜TS−3000（東ソ
ー社製；分画分子量:300万）から、牛血清γ−グロブリ
ン透過阻止率が45〜60％，ウイルス透過量がマウスLD50
で105/0.03ml以下の膜を選択し、膜面積を３m3（10×10
cm2の膜を300枚使用）として限外ろ過機にセットした。
ー社製；分画分子量:300万）から、牛血清γ−グロブリ
ン透過阻止率が45〜60％，ウイルス透過量がマウスLD50
で105/0.03ml以下の膜を選択し、膜面積を３m3（10×10
cm2の膜を300枚使用）として限外ろ過機にセットした。
限外ろ過機の貯槽タンク内および配管内の泡あるいは
蛋白の凝集塊を完全に取り除くために蒸留水の循環運転
および排出を５回以上繰り返し行なった。有効塩素濃度
500ppmの次亜塩素酸ソーダ液を限外ろ過機の貯槽タンク
内に満たし、１時間,2回繰り返し循環運転を行なった
後、限外ろ過機系内の次亜塩素酸ソーダを完全に取り除
くため、限外ろ過機の貯槽に蒸留水を満たし、循環運転
および排出を５回以上繰り返し行なった。さらに消毒の
ため、1v/v％のホルマリン液を限外ろ過機の貯槽に満た
し、10分間,2回繰り返し循環運転を行ない、密閉し消毒
した。約12時間以上消毒した後、系内に充填されたホル
マリンを取り除くため、限外ろ過機の貯槽に満たした滅
菌蒸留水で循環運転および排出を５回以上繰り返して系
内を洗浄し、以下の精製に用いた。
蛋白の凝集塊を完全に取り除くために蒸留水の循環運転
および排出を５回以上繰り返し行なった。有効塩素濃度
500ppmの次亜塩素酸ソーダ液を限外ろ過機の貯槽タンク
内に満たし、１時間,2回繰り返し循環運転を行なった
後、限外ろ過機系内の次亜塩素酸ソーダを完全に取り除
くため、限外ろ過機の貯槽に蒸留水を満たし、循環運転
および排出を５回以上繰り返し行なった。さらに消毒の
ため、1v/v％のホルマリン液を限外ろ過機の貯槽に満た
し、10分間,2回繰り返し循環運転を行ない、密閉し消毒
した。約12時間以上消毒した後、系内に充填されたホル
マリンを取り除くため、限外ろ過機の貯槽に満たした滅
菌蒸留水で循環運転および排出を５回以上繰り返して系
内を洗浄し、以下の精製に用いた。
限外ろ過精製 実施例１−（１）で得たウイルス浮遊液に、ゼラチン
およびＤ−ソルビトールを最終濃度がそれぞれ0.02w/v
％および0.5w/v％となるように添加し、ポアサイズ0.45
μｍのフィルターで除菌ろ過を行ない、ろ液20lを上記
で調整した限外ろ過機にて流速約16l/分で循環運転を
開始した。透過液側に15lを排出したところで限外ろ過
機の循環運転を停止し、循環内液5lに対して２倍量の希
釈液（0.02w/v％ゼラチンおよび0.5w/v％Ｄ−ソルビト
ールを含有するM/30リン酸塩緩衝塩化ナトリウム液,pH
7.1）10lを加え、循環運転を開始した。透過液側に10l
を排出したところで循環運転を停止し、循環内液に上記
希釈液を添加して蛋白含量を約1000μg/mlとし、ポアサ
イズ0.3μｍのフィルターで除菌ろ過した。
およびＤ−ソルビトールを最終濃度がそれぞれ0.02w/v
％および0.5w/v％となるように添加し、ポアサイズ0.45
μｍのフィルターで除菌ろ過を行ない、ろ液20lを上記
で調整した限外ろ過機にて流速約16l/分で循環運転を
開始した。透過液側に15lを排出したところで限外ろ過
機の循環運転を停止し、循環内液5lに対して２倍量の希
釈液（0.02w/v％ゼラチンおよび0.5w/v％Ｄ−ソルビト
ールを含有するM/30リン酸塩緩衝塩化ナトリウム液,pH
7.1）10lを加え、循環運転を開始した。透過液側に10l
を排出したところで循環運転を停止し、循環内液に上記
希釈液を添加して蛋白含量を約1000μg/mlとし、ポアサ
イズ0.3μｍのフィルターで除菌ろ過した。
（３）ウイルス不活化処理 実施例１−（２）で得たろ液に、ホルマリンを最終濃
度が0.1v/v％となるように添加し、４℃にて14日間以上
かけてウイルスを不活化処理した。
度が0.1v/v％となるように添加し、４℃にて14日間以上
かけてウイルスを不活化処理した。
（４）限外ろ過精製（二次精製） 限外ろ過膜の再生 実施例１−（２）−で調整した限外ろ過機を用い、
日本脳炎ウイルスに感染していない正常マウス脳を実施
例１−（１）と同様に処理して得られる正常マウス脳プ
ロタミン精製材料を、実施例１−（２）−と同様に処
理して限外ろ過精製を行なった。限外ろ過精製を行なっ
た限外ろ過機の貯槽および配管内の泡や蛋白の凝集塊を
取り除くために蒸留水の循環運転および排出を５回以上
繰り返し行なった。1w/v％の苛性ソーダ液を限外ろ過機
の貯槽内に満たし、１時間,2回繰り返し循環運転を行な
った後、限外ろ過機系内の苛性ソーダを完全に取り除く
ため、限外ろ過機の貯槽タンク内に蒸留水を満たし、循
環運転および排出を５回以上繰り返し行なった。さらに
消毒のため、1v/v％のホルマリン液を限外ろ過機の貯槽
タンク内に満たし、10分間,2回繰り返し循環運転を行な
い、密閉し消毒した。約12時間以上消毒した後、系内に
充填されたホルマリンを取り除くため、限外ろ過機の貯
槽に満たした滅菌蒸留水で循環運転および排出を５回以
上繰り返して系内を洗浄し、以下の精製に用いた。
日本脳炎ウイルスに感染していない正常マウス脳を実施
例１−（１）と同様に処理して得られる正常マウス脳プ
ロタミン精製材料を、実施例１−（２）−と同様に処
理して限外ろ過精製を行なった。限外ろ過精製を行なっ
た限外ろ過機の貯槽および配管内の泡や蛋白の凝集塊を
取り除くために蒸留水の循環運転および排出を５回以上
繰り返し行なった。1w/v％の苛性ソーダ液を限外ろ過機
の貯槽内に満たし、１時間,2回繰り返し循環運転を行な
った後、限外ろ過機系内の苛性ソーダを完全に取り除く
ため、限外ろ過機の貯槽タンク内に蒸留水を満たし、循
環運転および排出を５回以上繰り返し行なった。さらに
消毒のため、1v/v％のホルマリン液を限外ろ過機の貯槽
タンク内に満たし、10分間,2回繰り返し循環運転を行な
い、密閉し消毒した。約12時間以上消毒した後、系内に
充填されたホルマリンを取り除くため、限外ろ過機の貯
槽に満たした滅菌蒸留水で循環運転および排出を５回以
上繰り返して系内を洗浄し、以下の精製に用いた。
限外ろ過精製 実施例１−（３）で得た不活化処理後のウイルス浮遊
液60lを、上記で調整した限外ろ過機にて流速22l/分
で循環運転を開始した。透過液側に55lを排出したとこ
ろで循環運転を停止し、循環内液5lに対して４倍量の希
釈液（0.02w/v％ゼラチンおよび0.5w/v％Ｄ−ソルビト
ールを含有するM/100リン酸塩緩衝塩化ナトリウム液,pH
7.1）20lを加え、循環運転を開始した。透過液側に20l
を排出したところで循環運転を停止し、以下希釈液20l
添加，循環運転，透過液20l排出，停止の操作を３〜４
回繰り返し、回分ろ過を計５〜６回行なった後、循環内
液に上記希釈液を添加して約13lとし蛋白含量を約140μ
g/mlとした。
液60lを、上記で調整した限外ろ過機にて流速22l/分
で循環運転を開始した。透過液側に55lを排出したとこ
ろで循環運転を停止し、循環内液5lに対して４倍量の希
釈液（0.02w/v％ゼラチンおよび0.5w/v％Ｄ−ソルビト
ールを含有するM/100リン酸塩緩衝塩化ナトリウム液,pH
7.1）20lを加え、循環運転を開始した。透過液側に20l
を排出したところで循環運転を停止し、以下希釈液20l
添加，循環運転，透過液20l排出，停止の操作を３〜４
回繰り返し、回分ろ過を計５〜６回行なった後、循環内
液に上記希釈液を添加して約13lとし蛋白含量を約140μ
g/mlとした。
チメロサールおよびTween80を、最終濃度がそれぞれ
0.01w/v％および0.05v/v％となるよう添加した後、ポア
サイズ0.45μｍのフィルターで除菌ろ過して日本脳炎ワ
クチン原液を得た。
0.01w/v％および0.05v/v％となるよう添加した後、ポア
サイズ0.45μｍのフィルターで除菌ろ過して日本脳炎ワ
クチン原液を得た。
（５）ワクチンの調製 実施例１−（４）で得た日本脳炎ワクチン原液を0.02
w/v％ゼラチンおよび0.5w/v％Ｄ−ソルビトールを含有
するM/100リン酸塩緩衝塩化ナトリウム液で希釈し、更
にチメロサールおよびTween80を最終濃度がそれぞれ0.0
1w/v％および0.025v/v％となるように添加し、日本脳炎
ワクチンを調製した。
w/v％ゼラチンおよび0.5w/v％Ｄ−ソルビトールを含有
するM/100リン酸塩緩衝塩化ナトリウム液で希釈し、更
にチメロサールおよびTween80を最終濃度がそれぞれ0.0
1w/v％および0.025v/v％となるように添加し、日本脳炎
ワクチンを調製した。
得られた日本脳炎ワクチンは、蛋白質含量17μg/ml当
たりの力価（プラック中和抗体価）が103.6であった。
たりの力価（プラック中和抗体価）が103.6であった。
発明の効果 本発明の製造法によれば、蛋白質含量20μg/ml当たり
の力価が103以上の高純度で熱安定性に優れた高品質の
日本脳炎ワクチンを、高収率で製造することができる。
の力価が103以上の高純度で熱安定性に優れた高品質の
日本脳炎ワクチンを、高収率で製造することができる。
Claims (1)
- 【請求項１】日本脳炎ウイルス感染マウス脳乳剤から得
られるウイルス浮遊液を、安定剤の共存下に、疎水性限
外ろ過膜で回文ろ過し、ウイルス不活化処理後、強アル
カリで処理した限外ろ過膜で回文ろ過することを特徴と
する日本脳炎ワクチンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1291443A JPH085803B2 (ja) | 1988-11-10 | 1989-11-09 | 日本脳炎ワクチンの製造法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28556488 | 1988-11-10 | ||
| JP63-285564 | 1988-11-10 | ||
| JP1291443A JPH085803B2 (ja) | 1988-11-10 | 1989-11-09 | 日本脳炎ワクチンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02223531A JPH02223531A (ja) | 1990-09-05 |
| JPH085803B2 true JPH085803B2 (ja) | 1996-01-24 |
Family
ID=26555940
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1291443A Expired - Lifetime JPH085803B2 (ja) | 1988-11-10 | 1989-11-09 | 日本脳炎ワクチンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH085803B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69837211T2 (de) * | 1997-08-28 | 2007-12-06 | Cheil Jedang Corp. | Ein an vero-zellen angepasstes abgeschwächtes japanische enzephalitis virus und ein impfstoff gegen japanische enzephalitis |
| JP4540795B2 (ja) * | 2000-03-10 | 2010-09-08 | 一般財団法人阪大微生物病研究会 | 生ワクチンの細胞性免疫活性を不活化ワクチンにも起こさせる方法、及びこれより得られる混合ワクチン |
| JP2007068401A (ja) * | 2003-08-07 | 2007-03-22 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 西ナイルウイルスワクチン |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5048118A (ja) * | 1973-08-29 | 1975-04-30 |
-
1989
- 1989-11-09 JP JP1291443A patent/JPH085803B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02223531A (ja) | 1990-09-05 |
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