JPH07196410A - Adventitious embryo and its preparation - Google Patents

Adventitious embryo and its preparation

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JPH07196410A
JPH07196410A JP35320693A JP35320693A JPH07196410A JP H07196410 A JPH07196410 A JP H07196410A JP 35320693 A JP35320693 A JP 35320693A JP 35320693 A JP35320693 A JP 35320693A JP H07196410 A JPH07196410 A JP H07196410A
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JP
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callus
carrot
dichloro
embryo
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JP35320693A
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Japanese (ja)
Inventor
Seiichi Fujii
Masao Kuwabara
正雄 桑原
清一 藤井
Original Assignee
Norin Suisan Sentan Gijutsu Sangyo Shinko Center
社団法人農林水産先端技術産業振興センター
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Abstract

PURPOSE: To efficiently carry out the culturing by adding a 5,6- dichloroindoleactic acid derivative to a culture medium in obtaining an adventitious embyro, induced from a carrot callus and having a high normal germination ratio.
CONSTITUTION: This adventitious embryo is obtained by culturing an explant of a carrot (a growing point, a seedling hypocotyl, a cotyledon, a root, etc.) or a callus induced from the explant of the carrot in a culture medium containing a 5,6-dichloroindoleacetic acid derivative therein. The adventitious embryo thus obtained is capable of normally germinating at a high frequency. 5,6-Dichloroindoleacetic acid or its salt or ester is especially preferred as the 5,6-dichloroindoleacetic acid derivative. The resultant adventitious embryo is useful as an embryo used in an artificial seed or for producing a healthy cultured seedling. Furthermore, the explant for obtaining the callus is preferably collected from a slice of the seedling hypocotyl germinated under aseptic conditions or a slice prepared by sterilizing a root and preferably punching the slice with a cork borer.
COPYRIGHT: (C)1995,JPO

Description

【発明の詳細な説明】 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【0001】 [0001]

【産業上の利用分野】本発明は、ニンジンカルスから誘導される正常発芽率の高い不定胚および該不定胚の作製方法に関するものである。 The present invention relates to a method for manufacturing a somatic embryo and unmoving Teihai high normal germination rate derived from the carrot callus.

【0002】 [0002]

【従来の技術】不定胚を誘導する前のカルスは従来より2,4−ジクロロフェノキシ酢酸(2,4−D)単独あるいは2,4ーDとサイトカイニン(カイネチンまたはベンジルアデニン)等の混合によって増殖され、不定胚を誘導する場合には通常オーキシンフリーの培地に移せば良いことが知られている。 BACKGROUND ART callus before inducing somatic embryo proliferation by mixing from 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) alone or 2,4-D and cytokinin (kinetin or benzyl adenine) such as a conventional is, that normally it Utsuse the medium auxin free known in the case of inducing somatic embryo. しかしながら、2,4ーD However, 2,4-D
で増殖されたカルスから誘導されたニンジン不定胚の正常発芽率が低いことが指摘されている(Kamada,et. al, In it has been pointed out normal germination rate carrot somatic embryos derived from proliferated callus is low (Kamada, et. Al,
In Vitro Cell. Dev. Biol.25:1163-1166.1989.)。 .. In Vitro Cell Dev Biol.25: 1163-1166.1989).. 正常に発芽する不定胚を誘導することは、健全な培養苗の生産に有用なことは勿論、人工種子の胚として使用する場合においても発芽に優れることは極めて重要なことである。 To induce somatic embryos germinate normally, be useful in the production of healthy culture seedlings of course, it is extremely important that excellent germination even when used as embryo artificial seeds.

【0003】ニンジン不定胚誘導前の増殖培地中のオーキシンとしてはほとんどの場合2,4―Dであって、 [0003] A most cases 2,4-D as an auxin in the growth medium before the induction of the carrot somatic embryos,
5,6ージクロロインドール酢酸誘導体を使用した不定胚作製方法については知られていない。 It is not known somatic embryos manufacturing method using 5,6 over dichloro indole acetic acid derivatives. 5,6ージクロロインドール酢酸(5,6ーCl 2 −IAA)および5,6ージクロロインドール酢酸メチル(5,6―Cl 5,6 over dichloro indole acetic acid (5,6 over Cl 2 -IAA) and 5,6 chromatography dichloro indole acetic acid methyl (5,6-Cl
2 ―IAAMe)は公知の化合物であって、従来、オーキシン物質として挿し木の発根促進や果菜類の果実の着果促進・肥大促進効果等が認められている(片山正人, 2 -IAAMe) is a known compound, conventionally, fruits fruit set promoting and hypertrophy promoting effect of root promoting and fruit vegetables cuttings as auxin substances have been observed (Masato Katayama,
二谷文夫:植物細胞工学,第2巻,4号,487頁- 5 Fumio Nitani: Plant Cell Engineering, Vol. 2, No. 4, 487 pp. - 5
02頁, 1990年)。 02 pp., 1990). 5,6ーCl 2 −IAAを植物組織培養に応用した技術としては、ホウレンソウの不定芽形成促進(三位ら, 育種学雑誌,第37巻,別冊2, 5,6 over Cl 2 -IAA as technology applied to plant tissue culture, adventitious bud formation promotion of spinach (Trinity et al., Plant Breeding Journal, Vol. 37, Supplement 2,
1987)と植物の馴化促進剤および植物の馴化促進方法(特開平4−154703号公報)に関するのみである。 1987) that only relates conditioned promoters and conditioned method of promoting Botanical (JP-A-4-154703).

【0004】 [0004]

【発明が解決しようとする課題】本発明は、ニンジン不定胚が正常な形態を有し、健全で正常に発芽する不定胚および該不定胚を効率よく作製する方法を提供することにある。 [0008] The present invention has a carrot somatic embryos is normal form is to provide a method for efficiently produce adventitious embryos and unmoving Teihai to healthy normal germination.

【0005】 [0005]

【課題を解決するための手段】本発明者は、カルス増殖に使用するオーキシン類を鋭意検討することによって5,6―Cl 2 ―インドール酢酸誘導体の中から選ばれた化合物を用いて増殖させたニンジンカルスから誘導した不定胚が、従来の技術と比較し、より高い頻度で正常な発芽をすることを見い出して本発明を完成した。 Means for Solving the Problems The present inventors have, 5,6-Cl 2 by intensive studies auxins used for callus growth - were grown using a compound selected from among indole acetic acid derivatives somatic embryos derived from carrot callus, compared to the prior art, the present invention has been completed found that normal germination more frequently.

【0006】すなわち、本発明ではニンジン実生胚軸または根部から誘導されたカルスを5,6ーCl 2 −IA Namely, callus in the present invention derived from carrot seedling hypocotyl or roots 5,6 over Cl 2 -IA
Aもしくは5,6―Cl 2 ―IAAMeを含む培地でカルスを培養することを特徴とするニンジン不定胚の作製方法である。 A manufacturing method of a carrot somatic embryos, which comprises culturing the callus in media containing A or 5,6-Cl 2 -IAAMe.

【0007】本発明の方法によって得られたニンジン不定胚の発芽はカルス増殖に通常使用される2,4―Dで培養したカルスから得られた不定胚に比較し正常発芽率が著しく向上し発芽後の生長が促進される。 [0007] Germination of Carrot somatic embryos obtained by the process of the present invention is usually compared to the somatic embryos obtained from callus cultured in 2,4-D to be used increased significantly normal germination rate callus growth germination growth after is promoted. ここでいう正常発芽率とは、胚軸の膨潤、カルス化、肥大などの形態的異常がない不定胚の発芽の割合を示す。 Here, the normal germination rate referred shows the swelling of hypocotyl, callus, the percentage of germination of morphological abnormalities no somatic embryos, such as hypertrophy.

【0008】以下本発明をさらに詳細に説明する。 [0008] The present invention is described in more detail below. (ニンジンの種類とその外植片の部位)本発明で言うニンジンとはDaucus Carota L.の範疇に分類されるものであればよく、例えば黒田五寸、新黒田五寸、MS四寸、 The carrots in the present invention (part of carrot type and explant) as long as it is classified in the category of Daucus Carota L., e.g. Kuroda five cun, new Kuroda five cun, MS four cun,
US春蒔き五寸等の品種があげられる。 Varieties such as US spring sowing five cun, and the like. カルスを得るための外植片としては生長点、実生胚軸・子葉、根等を例示することが出来る。 Growing points as explants for obtaining callus, seedlings hypocotyl-cotyledons, can be exemplified roots and the like. 無菌条件下で発芽させた実生胚軸切片あるいは根を滅菌しコルクボーラで打ち抜いた切片から採取する方が好ましい。 How to collect the seedlings hypocotyl sections or roots germinated under sterile conditions from sterile sections punched by a cork borer is preferred.

【0009】(カルスの誘導)外植片からカルスを誘導する培地としては、無機塩、糖類、ビタミン、オーキシンを必須とし、アミノ酸類等を必要に応じて添加したものである。 [0009] As a medium to induce callus from (callus induction) explants, and inorganic salts, sugars, vitamins, and essential auxin is obtained by adding as necessary an amino acids and the like. 具体的には従来植物の組織培養に用いられている培地、例えばMurashige-Skoog 培地(MS培地)、 Medium Specifically used in the tissue culture of a conventional plant, for example, Murashige-Skoog medium (MS medium),
Linsmaier-Skoog 培地(LS培地)、White 培地等にオーキシンを添加して調整される個体培地もしくは液体培地を用いることが出来る。 Linsmaier-Skoog medium (LS medium), White medium such as auxin that can be used for solid medium or liquid medium is adjusted by adding a. 培地の糖類としてはスクロース、グルコース、フルクトース等があげられ、その濃度は0.1〜10%であり、好ましくは0.5〜5%である。 The medium sugars sucrose, glucose, fructose and the like, the concentration is from 0.1 to 10%, preferably 0.5% to 5%. オーキシンとしては2,4―ジクロロフェノキシ酢酸(2,4―D)、5,6―ジクロロインドール酢酸(5,6―Cl 2 ―IAA)、5,6―ジクロロインドール酢酸メチル(5,6―Cl 2 ―IAAMe)、ナフタレン酢酸(NAA)等があげられ、これらを単独で使用することもできるが組み合わせて使用することもできる。 The auxin 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), 5,6- dichloro indole acetic acid (5,6-Cl 2 -IAA), 5,6- dichloro indole acetic acid methyl (5, 6-Cl 2 -IAAMe), raised naphthalene acetic acid (NAA) is also possible but it is also used in combination using these alone. 2,4−Dの場合の培地濃度は0.1〜20ppm Media concentration in the case of 2,4-D is 0.1~20ppm
であり、好ましくは0.5〜5ppmである。 By weight, preferably 0.5~5ppm. アミノ酸類としては、グルタミン、アラニン等があげられ、好ましくは0.1mM〜50mMの濃度で培地に添加される。 The amino acids, glutamine, alanine and the like, are preferably added to the medium at a concentration of 0.1MM~50mM. 培地のpHは5.4〜6.4に調整するのが好ましい。 The pH of the medium is preferably adjusted to 5.4 to 6.4. 個体培地を調整する時のゲル化剤としては寒天、ジェランガム等を例示でき、これらの濃度は寒天0.8〜 The gelling agent when adjusting the solid medium can be exemplified agar, gellan gum, these concentrations agar 0.8
1.0%,ジェランガム0.2〜0.5%が好ましい。 1.0%, gellan gum 0.2 to 0.5 percent is preferred.
次に、外植片からカルスを誘導する場合には、上述した培地を調整し、無菌のまたは無菌化した外植片を置床する。 Then, in the case of inducing callus from the explant, by adjusting the medium described above will be plated explants or sterilized sterile. 外植片の無菌化は、常法に従いエチルアルコール、 Sterilization of explants, ethyl alcohol according to a conventional method,
次亜塩素酸ナトリウム等をもちいて実施できる。 It can be carried out using a sodium hypochlorite. 外植片を置床後、15〜35℃、好ましくは25〜30℃の温度下で静置もしくは浸とう培養することによりカルスが誘導される。 After plated explants, 15 to 35 ° C., and preferably induced callus by leaving or immersion shaking cultured at a temperature of 25 to 30 ° C..

【0010】(カルスの増殖)カルスを増殖させるための増殖培地は、無機塩、糖類、ビタミン、オーキシンを必須成分とし、アミノ酸類等を必要に応じて添加したものである。 [0010] Growth medium for growing (callus growth) callus, inorganic salts, sugars, vitamins, auxins as essential components, is obtained by adding as necessary an amino acids and the like. 具体的には前記のMS培地、LS培地等があげられる。 Specifically said MS medium, LS medium and the like. 培地に添加するオーキシンは5,6―Cl 2 Auxin added to the medium is 5, 6-Cl 2
―IAAもしくは5,6―Cl 2 −IAAMeである。 A -IAA or 5,6-Cl 2 -IAAMe.
5,6―Cl 2 −IAAおよび5,6―Cl 2 −IAA 5,6-Cl 2 -IAA and 5,6-Cl 2 -IAA
Meの濃度は0.01〜50ppm であり、好ましくは0.1〜20ppm である。 Me concentration is 0.01~50ppm, preferably 0.1~20ppm. カルスを誘導する際に、誘導培地に添加すると好ましい結果がえられるアミノ酸類等は、カルス増殖においても良好なカルス増殖を促進する。 In inducing callus, amino acids and the like which preferably results will be obtained when added to the induction culture medium, also promote good callus growth in callus proliferation. 培地は、個体培地もしくは液体培地を用いることができるが、液体培地の方が好ましい。 Medium can be used solid medium or liquid medium, towards the liquid medium is preferred. カルス増殖の培養条件を以下に示す。 The culture conditions of callus growth is shown below. 具体的には、外植片から誘導されたカルスを増殖培地に移植し、誘導条件と同じ培養条件で静置もしくは浸とう培養することによりカルスが増殖される。 Specifically, implanted callus derived from the explant to the growth medium, callus is grown by leaving or immersion shaking cultured under the same culture conditions as induction conditions. また、増殖培地でのカルスの継代を1〜2週間毎に行うことにより好ましい結果がえられる。 Also, preferable results will be obtained by performing the passage callus growth medium every 1-2 weeks.

【0011】(カルスからの不定胚の誘導)カルスから不定胚を誘導する培地は、無機塩、糖類、ビタミンを必須成分とし、アミノ酸類等を必要に応じて添加したものである。 [0011] (induction of somatic embryos from callus) medium to induce somatic embryo from callus, inorganic salts, sugars, vitamins as essential components, is obtained by adding as necessary an amino acids and the like. 具体的には、前記MS培地、LS培地等があげられる。 Specifically, the MS medium, LS medium and the like. 培地の糖類としては、スクロース、グルコース、フルクトース等があげられ、その濃度は0.1〜1 As a medium sugars, sucrose, glucose, fructose and the like, the concentration from 0.1 to 1
0%であり、好ましくは0.5〜5%である。 0%, preferably 0.5% to 5%. アミノ酸類としては、グルタミン、アラニン等があげられ、好ましくは0.1mM〜50mMの濃度で培地に添加される。 The amino acids, glutamine, alanine and the like, are preferably added to the medium at a concentration of 0.1MM~50mM. 培地のpHは5. 4〜6. 4に調整するのが好ましい。 The pH of the medium is 5.4 to 6. preferably adjusted to 4. 個体培地を調整する時のゲル化剤としては寒天、ジェランガム等があげられ、これらの濃度は寒天では0. The gelling agent when adjusting the solid medium agar, gellan gum and the like, these concentrations in the agar 0.
8〜1.0%, ジェランガムでは0.2〜0.5%が好ましい。 8 to 1.0%, preferably from 0.2 to 0.5% in the gellan gum. 培地は、個体培地もしくは液体培地を用いることができるが、液体培地の方が好ましい。 Medium can be used solid medium or liquid medium, towards the liquid medium is preferred. 次に、不定胚を誘導するための具体的方法を以下に示す。 Next, a specific method for inducing adventitious embryo below. 増殖したカルスを集め不定胚誘導培地に移植する。 Collected proliferated callus transplanted into adventitious embryo induction medium. 好ましくは、3 Preferably, 3
0〜300μm の大きさの細胞塊をメッシュで選別し、 The size of the cell mass of 0~300μm screened in mesh,
圧縮細胞量が50〜2000倍の希釈濃度になるようにして移植する。 The amount of compression cells transplanted Ensure a dilution of 50 to 2000 times. 培養温度は15〜35℃、好ましくは2 Culture temperature is 15 to 35 ° C., preferably 2
5〜30℃下で静置もしくは浸とう培養することにより不定胚が誘導される。 Somatic embryos is induced by leaving or immersion shaking culture under 5 to 30 ° C..

【0012】(不定胚の発芽)不定胚の発芽培地は、無機塩、糖類、ビタミンを必須成分とし、アミノ酸類等を必要に応じて添加したものである。 [0012] (germination somatic embryo) germination medium adventitious embryo, inorganic salts, sugars, vitamins as essential components, is obtained by adding as necessary an amino acids and the like. 具体的には、前記M Specifically, the M
S培地、LS培地等があげられ、無機塩類は1/32〜 S medium, LS medium and the like, and inorganic salts is 1/32 to
6倍で用いることができ、好ましくは1/8〜2倍で用いることができる。 It can be used in a 6-fold, preferably in an fold 1 / 8-2. . 培地の糖類としては、スクロース、グルコース、フルクトース等があげられ、その濃度は0.1〜10%であり、好ましくは0.5〜5%である。 As a medium sugars, sucrose, glucose, fructose and the like, the concentration is from 0.1 to 10%, preferably 0.5% to 5%. アミノ酸類としては、グルタミン、アラニン等があげられ、好ましくは0.1mM〜50mMの濃度で培地に添加される。 The amino acids, glutamine, alanine and the like, are preferably added to the medium at a concentration of 0.1MM~50mM. 培地のpHは5. 4〜6. 4に調整するのが好ましい。 The pH of the medium is 5.4 to 6. preferably adjusted to 4. 個体培地を調整する時のゲル化剤としては寒天、ジェランガム等があげられ、これらの濃度は寒天では0.8〜1.0%, ジェランガムでは0.2〜 The gelling agent when adjusting the solid medium agar, gellan gum and the like, these concentrations 0.8 to 1.0% in agar, 0.2 in gellan gum
0.5%が好ましい。 Preferably 0.5%. 培地は、個体培地もしくは液体培地を用いることができるが、個体培地の方が好ましい。 Medium can be used solid medium or liquid medium, towards the solid medium is preferred.
次に、不定胚を発芽させるための具体的方法を以下に示す。 Next, a specific method for germinating somatic embryos below. 誘導された不定胚を発芽培地に移植し、15〜35 The induced somatic embryos were transplanted to germination medium, 15 to 35
℃、好ましくは25〜30℃の温度下で静置培養することにより発芽する。 ° C., preferably germinate by static culture at a temperature of 25 to 30 ° C..

【0013】以下に実施例を示すが、本発明はこれらの実施例に限定されるものでない。 [0013] While the following examples are set forth, the present invention is not limited to these examples.

【実施例】 【Example】

実験例1 無菌条件下で生育させたニンジン(品種:新黒田五寸) Carrots grown in Experimental Example 1 under aseptic conditions (variety: new Kuroda five cun)
実生の胚軸部分から約5mmの切片を作製し、所定濃度になるように5,6―Cl 2 ―IAAを加えたMS培地(30g/lショ糖, 8g/l寒天, pH5.8)に置床した。 To prepare a segment of about 5mm from the hypocotyl portion of the seedlings, MS medium supplemented with 5,6-Cl 2 -IAA to a predetermined concentration (30 g / l sucrose, 8 g / l agar, pH 5.8) to It was plated. 25℃、3000luxに保たれた培養室で3 25 ℃, 3 in a culture room maintained at 3000lux
0日間培養しカルスを誘導した。 And cultured for 0 days to induce callus. 誘導したカルスを5, The induced callus 5,
6―Cl 2 ―IAAを含むMS液体培地にいれ100r 100r placed in MS liquid medium containing 6-Cl 2 -IAA
pmで水平回転培養で増殖させた。 It was grown in a horizontal rotary cultured pm. 以後、2週間毎に継代培養を行った。 After that, it was subcultured every 2 weeks. 対照として、2,4−Dを含むMS液体培地で培養したカルスを用いた。 As a control, it was used calli cultured in MS liquid medium containing 2, 4-D. 培養開始後、継代1 After the start of the culture, passage 1
4日後の細胞懸濁液を75,32μmのメッシュで順番にろ過して32μm メッシュ上に残った細胞塊をホルモンフリーのMS液体培地で3回洗浄した。 The remaining cell mass on 32μm mesh cell suspension was filtered sequentially in mesh 75,32μm after 4 days and washed 3 times with MS liquid hormone-free medium. PCV(圧縮細胞量)の1000倍量のホルモンフリーMS液体培地で希釈し、その30mlを100mlの三角フラスコに移し、25℃、暗黒下で水平回転培養(100rpm) PCV was diluted with 1000-fold amount of hormone-free MS liquid medium (compressed cell mass), transferred to the 30ml Erlenmeyer flask 100 ml, 25 ° C., the horizontal rotary cultured in the dark at (100 rpm)
した。 did. 不定胚誘導開始14日後の魚雷型胚を発芽個体培地(1/2MS培地, 15g/lショ糖,8g/l寒天,pH5,8)に移し、25℃、3000LUX照明下で培養した。 Adventitious embryo induction start torpedo shaped embryos germination solid medium after 14 days (1 / 2MS medium, 15 g / l sucrose, 8 g / l agar, pH5,8) were transferred to, 25 ° C., and cultured under 3000LUX illumination. 1区50個体供試した。 District 1 tried 50 individuals today. 魚雷型胚置床後16日に正常発芽率、草丈および根長を測定した。 Normal germination rate 16 days after torpedo shaped embryos plated, were measured plant height and root length. 全ての操作は、無菌条件下で行った。 All operations were performed under sterile conditions. 測定結果の平均値を表1に示した。 The average value of measurement results are shown in Table 1. 正常発芽率が向上し、草丈、根の生長が促進された。 To improve the normal germination rate, plant height, root growth was promoted.

【0014】 [0014]

【表1】 ───────────────────────────────── 方法 化合物 濃度 正常 草丈 根長 (ppm) 発芽率(%) (mm) (mm) ───────────────────────────────── 本発明 5,6-Cl 2 -IAA 1 90 11.3 11.7 対照 2,4-D 1 60 7.5 7.5 ───────────────────────────────── TABLE 1 ───────────────────────────────── method compound concentrations normally plant height root length (ppm) Germination rate ( %) (mm) (mm) ───────────────────────────────── present invention 5,6-Cl 2 - IAA 1 90 11.3 11.7 control 2,4-D 1 60 7.5 7.5 ─────────────────────────────────

【0015】 [0015]

【発明の効果】5,6―ジクロロインドール酢酸誘導体を含む培地で培養したニンジンカルスから誘導される不定胚の正常発芽率が向上する。 Normal germination rate somatic embryos derived from carrot callus cultured in a medium containing 5,6-dichloro indole acetic acid derivatives according to the present invention is improved. 正常に発芽する不定胚を誘導できることは、人工種子に使用する胚として、あるいは健全な培養苗の生産に有用である。 It can induce somatic embryos germinate normally, as embryos used in artificial seeds, or useful in the production of healthy culture seedling.

Claims (6)

    【特許請求の範囲】 [The claims]
  1. 【請求項1】ニンジン外植片もしくはニンジン外植片から誘導されたカルスを培養する培地において、5,6− 1. A medium for culturing a callus derived from carrot explants or carrot explants, 5,6
    ジクロロインドール酢酸誘導体を含む培地。 Medium containing dichloro indole acetic acid derivatives.
  2. 【請求項2】5,6−ジクロロインドール酢酸誘導体が5,6−ジクロロインドール酢酸又は5,6−ジクロロインドール酢酸の塩もしくはエステルである請求項1記載の培地。 2. A 5,6-dichloro indole medium according to claim 1 wherein acetic acid derivative is a salt or ester of 5,6-dichloro-indoleacetic acid or 5,6-dichloro-indole acetic acid.
  3. 【請求項3】ニンジン外植片もしくはニンジン外植片から誘導されたカルスを5,6−ジクロロインドール酢酸誘導体を含む培地で培養して得られる不定胚。 3. A carrot explants or somatic embryos obtained by culturing a callus derived from carrot explants on a medium containing 5,6-dichloro indole acetic acid derivatives.
  4. 【請求項4】5,6−ジクロロインドール酢酸誘導体が5,6−ジクロロインドール酢酸又は5,6−ジクロロインドール酢酸の塩もしくはエステルである請求項3記載の不定胚。 4. A 5,6-dichloro indole claim 3 somatic embryos according acetate derivative is a salt or ester of 5,6-dichloro-indoleacetic acid or 5,6-dichloro-indole acetic acid.
  5. 【請求項5】ニンジン外植片もしくはニンジン外植片から誘導されたカルスを5,6−ジクロロインドール酢酸誘導体を含む培地で培養して得る不定胚の作製方法。 5. The method for manufacturing a somatic embryos may be cultured in a medium containing carrot explants or a derived callus from carrot explants 5,6-dichloro indole acetic acid derivatives.
  6. 【請求項6】5,6−ジクロロインドール酢酸誘導体が5,6−ジクロロインドール酢酸又は5,6−ジクロロインドール酢酸の塩もしくはエステルである請求項5記載の方法。 6. 5,6-dichloro-indole The method of claim 5, wherein acetic acid derivative is a salt or ester of 5,6-dichloro-indoleacetic acid or 5,6-dichloro-indole acetic acid.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO1997012512A3 (en) * 1995-10-04 1997-05-22 Calgene Inc Transformation of cotton plants
US6656733B1 (en) 1999-08-25 2003-12-02 President Of Nagoya University Method for efficiently producing redifferentiated plantlets by addition of thickening agent

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Gresshoff In vitro culture of white clover: callus, suspension, protoplast culture, and plant regeneration
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Parrott et al. Optimization of somatic embryogenesis and embryo germination in soybean
Malik et al. Rapid in vitro multiplication and conservation of Garcinia indica: a tropical medicinal tree species
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Rani et al. In vitro callus induction and regeneration studies in Withania somnifera
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Chengalrayan et al. Somatic embryogenesis from mature embryo-derived leaflets of peanut (Arachis hypogaea L.)
George et al. Organogenesis and embryogenesis from diverse explants in pigeonpea (Cajanus cajan L.)
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Lai et al. Somatic embryogenesis in longan [Dimocarpus longan Lour.]
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Pellegrineschi In vitro plant regeneration via organogenesis of cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.]
Khawar et al. Effect of thidiazuron on shoot regeneration from different explants of lentil (Lens culinaris Medik.) via organogenesis
Cheema Somatic embryogenesis and plant regeneration from cell suspension and tissue cultures of mature Himalayan poplar (Populus ciliata)
Fujii et al. Maturation and greenhouse planting of alfalfa artificial seeds
Pelah et al. Organogenesis in the vine cactus Selenicereus megalanthus using thidiazuron
Gray Somatic embryogenesis in grape
Lee et al. Plant regeneration from protocorm-derived callus of Cypripedium formosanum
Nayak et al. High frequency plantlet regeneration from cotyledonary node cultures of Aegle marmelos (L.) Corr.