JPH07143875A - 洗剤組成物用脂肪分解性酵素を生成できるシュードモナス株 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 洗剤組成物用脂肪分解性酵素を生成できるシ
ュードモナス株を提供する。 【構成】 受託番号ＣＢＳ４６７．８５を有するシュー
ドモナスシュードアルカリゲネスＳｐ９、受託番号ＣＢ
Ｓ４６８．８５を有するシュードモナスシュードアルカ
リゲネスＩＮＩＩ−５、受託番号ＣＢＳ４７１．８５を
有するシュードモナスシュードアルカリゲネスＧＲＶＩ
−１５及び受託番号ＣＢＳ４７３．８５を有するシュー
ドモナスシュードアルカリゲネスＭ−１から選択され
る、洗剤組成物用脂肪分解酵素を産生できるシュードモ
ナス株。

Description

【発明の詳細な説明】 〔技術分野〕本発明は油脂性物質の酵素化学的減成（ｄ
ｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）のための酵素に関する。更に詳
細には本発明は改善された油脂分解活性を洗浄条件下で
有することにもとづき洗剤への添加物としての用途に特
に適する油脂分解性新規酵素に関する。本発明は油脂分
解性新規酵素の製造方法、洗剤組成物に対する添加物と
しての用途及び該洗剤組成物を使用する洗浄方法をも指
向する。更に本発明は油脂分解性新規酵素を含有する洗
剤組成物を指向するものである。本発明の酵素は或種の
微生物、特に或種の細菌によって産生される多数の油脂
分解性酵素類の少なくとも一種の酵素を包含するがこの
酵素は物理化学的及び酵素化学的諸性質の点で他の酵素
と異なることが見出されている。

〔背景技術〕洗濯業におけるクリーニングに伴なう特別
な問題は油脂性のしみの除去である。この問題は洗浄湿
度が低い場合には更に深刻となる。現今では高温と高ア
ルカリ度との下での洗浄工程の結果として油脂含有汚染
物は乳化されて除去される。省エネルギーのための現時
の傾向として比較的低温度即ち約４０℃又はそれ以下の
洗浄温度の使用への強い傾向がある。従って低い洗浄温
度で有効であり、高アルカリ性洗剤溶液内で安定であっ
て固体及び液体の洗剤組成物中での保存条件下で安定で
あるリパーゼに対する要望がある。洗剤組成物中の油脂
分解性酵素の使用は長年にわたって公知である（例えば
英国特許第１４４２４１８号明細書第１頁３６〜３８行
の記載文を参照されたい）。けれども該酵素は洗浄条件
下で甚だ低いクリーニング効果を奏するのみであると共
に現時の安定性要件に適合しないので実際面で不満足で
あるようである。包括的な参考文献としてアンドレ等の
著書〔Ａｎｄｒｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．，２（１９８０）２１８−２２９，“Ｌ
ｉｐａｓｅｓａｓ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ Ｃｏｍｐｏｎ
ｅｎｔｓ”〕を挙げ得る。洗剤用の油脂分解性添加物も
又例えば英国特許第１２９３６１３号及びカナダ特許第
８３５３４３号各明細書から公知である。米国特許第３
９５０２７７号及び英国特許第１４４２４１８号各明細
書は活性化剤とカルシウムイオン及び（又は）マグネシ
ウムイオンの夫々と組合わされたリパーゼ酵素を開示す
るが該リパーゼ酵素は汚染織物の予備浸漬のため及びポ
リエステル又はポリエステル／コットン混合織物の夫々
からトリグセライドのしみ又は汚れの除去のために使用
される。本発明で使用される適切な微生物由来のリパー
ゼ（動物由来リパーゼ及び植物からみちびかれるリパー
ゼではない）はプソイドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、プ
ノイモコッカス（Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃ−ｕｓ）、スタ
フイロコッカス（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）から
みちびかれるもの、及びスタフイロコッカス トキシン
ス（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｓｕｓ ｔｏｘｉｎｓ）、
ミコバクテリウム ツベルクロシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、ミコトルラ
リポリチカ（Ｍｙｃｏｔｏｒｕｌａ ｌｉｐｏｌ
ｙｔｉｃａ）及びスクレロチニア（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎ
ｉａ）からみちびかれるものとされ得る。英国特許第１
３７２０３４号明細書はプソイドモナス ステュツエリ
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｔｚｅｒｉ）に属す
る株ＡＴＣＣ １９１５４により産生される細菌由来の
リパーゼを含有する洗剤組成物を開示している。更に該
明細書は油脂分解性好適酵素として最適ｐＨ６〜１０を
有すべきこと、及び活性が該ｐＨ範囲内にあり、好まし
くはｐＨ７〜９にあるべきことを推奨した。１９７０年
項にこのプソイドモナス ステュツエリに属すると推測
された株はプソイドモナス エルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に属する株として
再分類されたがこのことは例えばＡＴＣＣカタログから
判明する。欧州出願ＥＰ−Ａ−０１３００６４号明細書
はフサリウム オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏ
ｘｙｓｐｏｒｕｍ）から単離されたリパーゼを含有する
洗剤用の酵素化学的添加物を開示する共にその中で慣用
のリパーゼよりも高い油脂分解性洗浄力を有することを
主張している。広汎な研究及び実験の結果適切に選択さ
れた微生物の培養により驚異的なリパーゼ製品が得られ
ること、即ちこのリパーゼは現今の洗浄条件下でリパー
ゼ活性を発揮し得ると共に高い洗剤濃度、高いｐＨ及び
低い洗浄温度の下で安定で有効であることが本発明にお
いて見出された。

〔発明の開示〕従って本発明は新規のリパーゼ製品を提
供するがこの製品はプソイドモナスプソイドアルカリゲ
ネス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｓｅｕｄｏａｌｃａ
ｌｉｇｅｎｅｓ）、プソイドモナス ステュツエリ（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｔｚｅｒｉ）及びアセト
バクテル カルコアセティクス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅ
ｒ ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）の種に属する或る株
である。該リパーゼは最適ｐＨ範囲約８〜１０．５を有
し、温度６０℃又はそれ以下、好ましくは３０〜４０
℃、及びｐＨ約７〜１１、好ましくは約９〜１０．５の
洗浄条件の下で約１０ｇ／ｌ以下の洗剤濃度を有する水
溶液の中で有効なリパーゼ活性を呈する。最適ｐＨはＴ
ＬＵ測定条件下でｐＨ−安定化装置の中で計測されたが
これについては後文（リパーゼ活性測定法）を参照され
たい。本発明の好適態様に従うと１９８５年８月８日に
オランダ国バルン（Ｂａａｒｎ）の中央微生物寄託所
〔Ｃｅｎｔｒａａｌ Ｂｕｒｅａｕ ｖｏｏｒ Ｓｃｈ
ｉｍｍｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＣＢＳ）〕に夫々ＣＢＳ
４６７・８５（７１８１）、ＣＢＳ ４６８・８５
（７１８２）、ＣＢＳ４７１・８５（７１８５）及びＣ
ＢＳ ４７３・８５（７１８７）の番号の下に寄託され
た社内記号ＳＰ ９、ＩＮ ＩＩ−５、Ｇｒ ＶＩ−１
５及びＭ−１を有する菌株から成る群から選ばれるＰ
ｓ．プソイドアルカリゲネスの新規単離株を通常の培養
条件下に培養することによってリパーゼ製品が得られ
る。これらの単離株は第１表に示す表現型の特性によっ
て同定される。本発明の他の好適態様によるとアメリカ
ンタイプ カルチュア コレクション（Ａｍｅｒｉｃａ
ｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏ
ｎ）にＡＴＣＣ ２９６２５の番号で寄託されているＰ
ｓ．プソイドアルカリゲネス亜種シトルリ（ｓｕｂｓｐ
ｅｃｉｅｓ ｃｉｔｒｕｌｌｉ）の菌株を通常の培養条
件下に培養することによってリパーゼ製品が得られる。
当業技術者に周知の通り菌株ＤＳＭ ５０１８８（菌株
ＡＴＣＣ １７４４０と同一）及びＤＳＭ ５０１８９
によって例示されるプソイドモナス プソイドアルカリ
ゲネス種はリパーゼを産生しない。けれども該種は異類
（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｏｕｓ）であることもまた公知で
ある。このものは新規の植物病原性細菌同定法によって
示され、シャド等〔Ｓｃｈａａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ
ｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２８（１９
７８）１１７−１２５〕により発見されてプソイドモナ
ス プソイドアルカリゲネス亜種シトルリと命名され、
ゴトウ等〔Ｍ．Ｇｏｔｏ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ．，３３（１９８３）５３９−５４５〕
によりプソイドモナス プソイドアルカリゲネス亜種コ
ンジャシ（Ｋｏｎｊａｃｉ）と命名された。上記２種の
シトルリ及びコンジャシの表現型特性は夫々幾らか異な
るけれども、また既述の種の菌株からも異なるけれど
も、上記亜種は菌株Ｐｓ．プソイドアルカリゲネスに属
すると当業界熟練技術者により考えられている〔例えば
パレロニの著書（Ｎ．Ｊ．Ｐａｌｌｅｒｏｎｉ，Ｂｅｒ
ｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉ
ｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１．ｅｄ．
Ｎ．Ｒ．Ｋｒｉｅｇ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗ
ｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ／Ｌｏｎｄｏｎ １
９８４，ｐ．１７３−１７４）参照〕。Ｐｓ．プソイド
アルカリゲネス種の表現型特性において天然の変異の起
ることが証明されている。Ｐｓ．プソイドアルカリゲネ
ス種の新規の亜種シトルリ及びコンジャシによるリパー
ゼ産生において、諸特性のうちの表現型特性について変
異が現われるのである。Ｐｓ．プソイドアルカリゲネス
の現在までに発見された亜種に関する特性記載事項とは
幾らか異なる新規の単離菌であるけれどもとにかく該種
に属するものであることもまた当業技術者に認識されて
いる。上文中に規定されたＰｓ．プソイドアルカリゲネ
スの選択された４株の夫々によって産生されるリパーゼ
は洗浄条件下で驚異的に良好な安定性と有効性とを示
す。上述のＰｓ．プソイドアルカリゲネス亜種シトルリ
の寄託株により産生されるリパーゼは同様に有用な諸性
質を有し、このリパーゼがシヤドの前掲文献の開示から
みちびかれることはあり得ない。本発明の他の好適態様
によれば社内記号Ｔｈａｉ ＩＶ １７−１を有し、１
９８５年８月８日にＣＢＳ番号４６１・８５（７１７
５）の下にＣＢＳへ寄託された新規株プソイドモナス
ステュツエリを慣用の培養条件下に培養することによっ
てリパーゼ製品を製造し得る。該菌株は第２表に示され
る表現型特性によって同定される。該プソイドモナス
ステュツエリ株が産生し得るリパーゼは３５℃、ｐＨ
９．０の場合に洗浄用溶液１ｌ当り洗剤量１０ｇ以下を
有する洗浄用溶液中で安定である。既述の通りプソイド
モナス ステュツエリ株（ＡＴＣＣ １９１５４）は洗
剤中に存在して使用される安定なリパーゼを産生し得る
ことが公知であった（米国特許第３５１１７５３号参
照）。けれども該寄託株はプソイドモナス エルギノサ
として再分類されている菌株である〔例えばＡＴＣＣ型
録（ＡＴＣＣ Ｃａｔａｌｏｇｕｅ ｏｆ Ｂａｃｔｅ
ｒｉａ，Ｐｈａｇｅｓ ａｎｄ ｒＤＮＡ Ｖｅｃｔｏ
ｒｓ，１６ｔｈ ｅｄ．，１９８５，ｐ，１３４，ｎ
ｏ．１９１５４）を参照されたい〕。真正のプソイドモ
ナス ステュツエリ株が本発明に規定された通りの安定
なリパーゼを産生し得ることは当業技術者にも確実に予
測又は予期され得なかった事実である。プソイドモナス
ステュツエリは長い間異類の種であるとして知られて
いた。これは幾つかの細菌株を包含するがそれらの酵素
産生能は著しく異なっている。更に現今の洗剤組成物中
に該リパーゼを使用する可能性については何らの示唆は
なく、更に詳細には指定の洗浄条件下での優れた安定性
についての示唆は全く無い。本発明の更に他の態様に従
うと社内記号Ｇｒ Ｖ−３９を有し１９８５年８月８日
にＣＢＳ番号４６０．８５（７１７４）の下にＣＢＳに
寄託されたアシネトバクテル カルコアセティクスの新
規単離株を常用の培養条件下に培養することによってリ
パーゼ製品を得ることができる。該株は第２表に示され
た表現型特性によって同定される。この寄託株から得ら
れるリパーゼ製品は４０〜５０℃、ｐＨ１０．３以下の
場合に１０ｇ（洗剤量）／ｌ（洗浄用溶液）以下におい
て安定で有効である。本発明の好適なリパーゼ製品は粉
末洗剤の場合に２ｇ／ｌの最低洗剤濃度において後文中
の例９に記載された条件下に回収脂肪の少なくとも約１
０％、好ましくは少なくとも約２０％、の加水分解を起
す製品である。

本発明の他の態様によると本発明のリパーゼと共に洗剤
及び洗剤組成物中に通常使用される任意の他成分を含有
する洗剤組成物が提供される。本発明の洗剤組成物の諸
成分は必須成分であるリパーゼのほかに単数または複数
の下記物質を含有し得る： １． 酵素添加洗剤組成物中に通常使用される界面活性
剤。一般的には天然源又は合成の界面活性化合物例えば
水溶性セッケン、陽イオン性、陰イオン性、非イオン
性、両性即ち両イオン性界活を使用し得る。この型の常
用界活の一例はドデシルベンゼンスルホン酸塩である。
一般に単独又は混合されて使用され得る界活は洗剤組成
物の約４〜５０％ｗ／ｗで存在する。

２． 水の軟化剤例えば複合リン酸塩例えばアルカリ金
属トリポリホスフェート又はアルカリ金属ピロホスフェ
ート或いはゼオライト。好ましくは洗剤組成物の４０重
量％以下の量で使用。化合物例えばアルカリ金属シアノ
ートリアセテート又はアルカリ金属クエン酸塩も更に或
いは代替的に洗剤組成物に添加され洗剤組成物中で複合
作用（ｃｏｍｐｌｅｘ ａｃｔｉｏｎ）を示す。

３． アルカリ金属ケイ酸又は弱アルカリ性化合物例え
ばアルカリ金属重炭酸塩。通常２０重量％以下。

４． 充填剤例えばアルカリ金属硫酸塩。

５． 化合物例えばカルボキシメチルセルロース、香
料、螢光剤、緩衝用化合物、ポリアルキレングリコール
又はエタノール。

６．他の型の酵素例えばプロテアーゼ及びアミラーゼ。

本発明に従う酵素添加洗浄用組成物においてリパーゼ活
性は組成物１ｇ当り１〜２００００ＴＬＵの範囲内、他
方においてタンパク分解性酵素活性は洗剤組成物１ｇ当
り５０〜１００００デルフト単位（Ｄｅｌｆｔ Ｕｎｉ
ｔｓ）の範囲内にあることが好ましい。１ＴＬＵ〔Ｔｒ
ｕｅ Ｌｉｐａｓｅ Ｕｎｉｔ（真正リパーゼ単位）〕
は１分間当りＮａＯＨの１μｍｏｌｅ当りの脂肪酸滴定
値と定義される（後文中のリパーゼ活性測定法参照）。
デルフト単位は文献〔Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｏｉｌ Ｃｈｅ
ｍ．Ｓｏｃ．６０（１９８３），１６７２〕中に定義さ
れている。本発明に従う洗剤組成物に添加され得る化合
物の他の群は漂白剤例えばアルカリ金属過ホウ酸塩特に
過ホウ酸ナトリウム、アルカリ金属過炭酸塩例えば過炭
酸ナトリウム、過酸及びそれらの塩、並びに該漂白剤の
活性化剤例えばＴＡＥＤである。本発明による洗剤組成
物が過ホウ酸塩、過炭酸塩、活性化剤及び螢光剤を一方
に含み、プロテアーゼを他方に含む場合に本発明のリパ
ーゼ製品が上記諸成分の存在下で高安定性を継続して示
すことはまことに驚異的である。本発明による洗剤組成
物は常法によって、例えば諸成分の混合によって、又は
最初に予備的混合物を造り、次に他成分を混合して仕上
げることによって製造され得る。可能な製造ルートの一
例に従うと単数又は複数のリパーゼ製品と単数又は複数
の他の化合物とを混合して予定の酵素化学的活性をもつ
濃厚物を造り、次にこの濃厚物と他の所望成分とを混合
することができる。特に好適な態様によれば本発明の油
脂分解性酵素は洗剤用の酵素化学的添加物の形状をも
つ。この添加物は単数又は複数の他の酵素例えば現代的
洗剤組成物に使用され得るプロテアーゼ及び（又は）ア
ミラーゼ及び当業界で常用される単数又は複数の他成分
例えば非イオン性界活、塩、安定化剤及び（又は）被覆
剤をも含有し得る。該洗剤用の酵素化学的添加物は本発
明のリパーゼのほかにプロテアーゼ及び任意にα−アミ
ラーゼを含むことが好ましい。タンパク分解性酵素は本
発明の油脂分解性酵素を破壊しないことが見出されてい
る。本発明による洗剤用の酵素化学的添加物を一般に当
業界公知の単数又は複数の洗剤及び他成分と混合すれば
洗剤組成物が得られる。洗剤用の酵素化学的添加物を使
用する特別な態様に従うとリパーゼ活性は該添加物１ｇ
当り１０^２〜１０^６ＴＬＵの範囲にあり、一方、任意に
存在するタンパク分解活性は５×１０^４〜１０^６デルフ
ト単位／ｇの範囲にある。本発明の洗剤用の酵素化学的
添加物は当業界の特別な技術分野で一般に公知された方
法に従って製造される形状例えば顆粒（ｇｒａｎｕｌａ
ｔｅｓ ｏｒ ｐｒｉｌｌｓ）の形状であり得る。例え
ば英国特許第１３２４１１６及び１３６２３６５及び米
国特許第３５１９５７０、４１０６９９１及び４２４２
２１９号各明細書を参照されたい。本発明の特別な態様
においてこの洗剤用の酵素化学的添加物は酵素安定化剤
と共に液状で供給される。酵素安定化剤は例えばプロピ
レングリコールである。該液状添加物は液状洗剤組成物
中で使用されることが好ましい。本発明の安定で有効な
リパーゼ製品は適当条件下で既述の微生物を培養するこ
とによって適切に製造され得る。酵素の高収量の達成の
ために易同化性の炭素源及びエネルギー源、有機物由来
のチッ素源例えばカゼインを含有する培地が必要であ
る。更に好ましくは脂肪又は油脂並びにカルシウム塩及
びマグネシウム塩及びコン跡元素が培地に添加される。
本発明の好適態様に従うと１：１〜１：２．５ｗ／ｖの
比率に水で予め希釈された脱脂乳の中で培養操作を行な
う。発酵工程で良好な通気が必要である。培地のｐＨを
適切には６〜１０、好適には６．５〜９に維持する。本
発明は更に本発明の洗剤組成物を用いる洗浄方法を提供
する。洗浄方法は約６０℃又はそれ以下、好ましくは３
０〜４０℃においてｐＨ通常は７〜１１で満足に施行さ
れ得る。洗浄時間は一般に１０〜６０分間である。この
洗浄方法において更に好ましいこととして洗浄用溶液１
ｌ当り０．５〜１５ｇ、好適には１〜１０ｇ／ｌの量で
本発明の洗剤組成物を含む洗浄用溶液を使用する。洗浄工程におけるリパーゼの作用効果 現代的洗剤組成物は洗浄工程で最適効果を奏するように
選択された諸成分を含有している。現今の洗浄工程でリ
パーゼが使用されるべきであるならばそれは現代的洗剤
配合物中に見出される通常の活性成分及び有効成分と共
存可能でなければならない。この目的のために本発明の
リパーゼの洗浄条件下の活性及び有効性の表示に使用さ
れ得る数種の試験規準が選ばれている。これらの規準は
下記の通りである： １． 汎用の洗剤用ビルダー例えばトリポリリン酸ナト
リウム（ＴＰＰ）の存在下のリパーゼ活性。この規準は
重要である。というのはリパーゼがその活性と安定性と
のためにアルカリ金属イオン例えばカルシウムに依存す
るとひろく信ぜられているからである。該カルシウム依
存性リパーゼは現代的洗浄工程で適切に使用されないで
あろう。

２． 現今の洗剤溶液中でのリパーゼ活性。アルカリ
リパーゼの活性と有効性との試験に供される現代的洗剤
組成物は多種類である。多種類の中から使用のために選
ばれたものは現今汎用の洗剤配合物の代表的実例として
の粉末洗剤組成物と液状配合物とである。これらの典型
的現代的洗剤組成物は下記の通り（２種類）である： （ａ） ＡＬＬ^▲Ｒ▼（粉末洗剤）、オランダ国、ユニ
リバー製品。本発明における試験のためにＡＬＬ一基剤
〔オランダ国ユニリバー研究所（Ｕｎｉｌｅｖｅｒ Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，Ｔｈｅ Ｎ
ｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）提供品〕を使用したがこれは過
ホウ酸塩、漂白活性剤（ＴＡＥＤ）及び酵素を除けばＡ
ＬＬと同じ配合のものである。ＡＬＬは登録商標名であ
る。

（ｂ） ＴＩＤＥ^▲Ｒ▼（液体洗剤）プロクター アン
ド ギヤムブル（Ｐｒｏｃｔｅｒ ａｎｄ Ｇａｍｂｌ
ｅ）社製品で米国で市販中。本発明における試験のため
にこの配合物中に存在する酵素を熱処理によって不活化
した。ＴＩＤＥは登録商標名である。

３． プロテアーゼ含有のＡＬＬの中のリパーゼの活
性。プロテアーゼは現代的洗剤組成物の重要成分であ
る。リパーゼの活性と有効性とは該洗剤成分（界活のマ
トリクス共存下で）の存在下においても発現されねばな
らない。

４． 代表的漂白剤（例えば過ホウ酸塩）及び漂白活性
化剤（例えばＴＡＥＤ）の存在下のリパーゼ活性。漂白
剤（及び低い洗浄温度でのその活性化剤）は或種の現代
的洗剤組成物の重要成分である。該剤の存在下のリパー
ゼの活性及び有効性は重要な規準であると考えられる。

織物からの油脂及び脂肪の除去に対する本発明のリパー
ゼの評価と寄与とのために洗浄用溶液中の本発明のリパ
ーゼの活性を一義的に測定する適当な検査系が必要であ
る。常用の試験布、例えばＥＭＰＡ １０１及びＥＭＰ
Ａ １０２〔スイスの業者（Ｅｉｄｇｅｎｏｅｓｓｉｓ
ｃｈｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｐｒｕｅｆｕｎｇｓ ｕｎｄ
Ｖｅｒｓｕｃｈｓａｎｓｔａｌｔ，Ｓｔ．Ｇａｌｌｅ
ｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）からの市販品の商標名〕
は顔料の除去によって洗浄能を測定するという欠点をも
つ。ＥＭＰＡ １０１及び１０２からの顔料の除去が脂
肪又は脂肪酸の除去と直接的に相関するか否かは疑問で
あるからこの理由のみにより上記の試験布はリパーゼの
作用効果の評価のために適切であるとは考えられない。
他の検査系は例えばＥＰＡ−０１３００６４号明細書記
載のように人工的に汚染された布からの染料の除去に依
存する。これには前記のＥＭＰＡ １０１及びＥＭＰＡ
１０２試験布の使用回避と同じことがあてはまる。更
にこの特許出願における検査系ではアルカリ リパーゼ
に関して乳化脂肪を基質として使用する。この型の脂肪
は現代的洗浄用溶液によって除去されねばない脂肪性汚
染物の大部分と対応しない。その理由はかような汚染物
は乳化形を呈しておらず、布と接触するのは非乳化の脂
肪であるからである。アンドレ等〔Ａｎｄｒｅｅ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２（１９
８０）２１８−２２９〕によって記載された検査系は布
に沈積された放射性物質標識脂肪を使用する。洗浄工程
の後に布試料上の放射能を測定して油脂分解活性に関連
づける。けれどもこの検査系では脂肪にもとづく放射能
と脂肪酸にもとづく放射能とを区別し得ないので従って
この検査系は洗浄工程におけるアルカリリパーゼの作用
効果の信頼し得る測定方法ではない。本発明の目的のた
めに一新試験方法が開発されたのでこれを以後はＳＬＭ
−試験法と呼ぶ。これは洗浄工程でのアルカリリパーゼ
とその活性並びに有効性の評価のために使用される。Ｓ
ＬＭ−試験法はハシモト等〔Ｔ．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏｅ
ｔ ａｌ．，Ｙｕｋａｇａｋｕ３４（１９８５），６０
６−６１２〕によって開発された方法と同じプリンシプ
ルを採用しているが但し分析所要時間を著しく短縮した
ものである。この方法は試験用汚染物として布上で不動
態化されている非乳化の脂肪又は油脂を有する汚染布の
使用を含み、洗浄工程の後にこの布を抽出してから油脂
及び脂肪酸を分析する。使用条件によってはリパーゼ活
性作用の結果として生成された脂肪酸は、残留するトリ
グリセライド共に、洗浄工程において織物上に残留する
のである。従って試験布上に残留する生成物は洗浄工程
におけるリパーゼの作用効果の良い目安となる。ＳＬＭ
−試験法については一般分析方法に関連して後文中に詳
記される筈である。

〔発明を実施するための最良の形態〕下記の実施例によ
って本発明を更に例示する。実施例中の一般的分析方法
は下文の通りに行なわれた。リパーゼ活性測定法 Ａ．オリーブ油加水分解（ＴＬＵ法） 本発明のリパーゼ製品の活性はオリーブ油の加水分解又
はｐ−ニトロフェニル−ラウレートの加水分解にもとづ
いて測定された。前者の方法は、遊離された脂肪酸をｐ
Ｈ−安定化装置内でｐＨ８．０において２５℃で測定す
ること以外には本質的にネールの記載〔Ｇ．Ｎａｅｈｅ
ｒ（１９７４）：“Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｅｎｚｙｍ
ａｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ”Ｖｏｌ．ＩＩ，ｐｐ．８
１４−８１８，ＩＩ．Ｕ．Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ，ｅ
ｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｌｏ
ｎｄｏｎ）に従って行なわれた。真正リパーゼ単位の１
単位〔ｏｎｅ Ｔｒｕｅ Ｌｉｐａｓｅ Ｕｎｉｔ（Ｔ
ＬＵ）〕は１分間当り１μモル量のＮａＯＨに対応する
滴定可能の脂肪酸量として定義される。

Ｂ．ｐ−ニトロフェニル ラウレートの加水分解（ＮＰ
Ｌ法） この方法はｐ−ニトロフェニル ラウレートのｐ−ニト
ロフェノール及びラウリン酸への加水分解にもとづくも
のであってその操作は本質的に次の通りである：適当量
のリパーゼを０．０５ＭのＭＯＰＳ（３−Ｎ−モルホリ
ン プロパンスルホン酸）−ＮａＯＨ中でｐＨ８．０で
希釈して０．００３〜０．００８単位ＮＰＬ／ｍｌとす
る。ＮＰＬ単位の１単位は１μモルの量のｐ−ニトロフ
ェノールを遊離させるに必要なリパーゼ量として定義さ
れる。４ｍｌのリパーゼ溶液を１ｍｌのｐ−ニトロフェ
ニル ラウレート溶液（２５ｍｌエタノール中の２５ｍ
ｇのｐ−ニトロフェニル ラウレート及び２滴の１Ｎ
ＨＣｌ）と混合してから１０分間３０℃に恒温保持し
た。５ｍｌのアルコール性−トリス溶液〔エタノール１
ｌ中の２．５ｇのトリス−（ヒドロキシメチル−アミノ
−メタン）溶液〕の添加によって反応を停止させてから
室温に放冷した。４００ｎｍにおける吸収値の読みを測
り、リパーゼ無添加の場合の恒温保持における吸収値に
対して補正した。遊離したｐ−ニトロフェノールのμモ
ル量を検量曲線を用いて計測する。この検量曲線は適当
量のｐ−ニトロフェノールのエタノール溶液の１ｍｌを
４ｍｌの０．０５ＭＯＰＳ−ＮａＯＨ緩衝液及び５ｍｌ
のアルコール性−トリス溶液に対して添加したときの４
００ｎｍにおける吸収値を用いて作成されたものであ
る。上記の二方法のうちの一方法を用いて０、１５及び
３０分間（或場合には９０分間以下）後の活性を測るこ
とにより測定時間中のリパーゼの安定度を追跡した。洗浄用溶液中のリパーゼ安定度の測定法 洗浄用溶液中の本発明のリパーゼ（複数）の安定度を評
価するために下記の諸実験を行なった。例１記載のよう
にして得られたリパーゼ製品の適当量を下記の溶液に対
して加えた： （ａ） 合成水道水（ＳＴＷ）：このものは蒸留水１ｌ
当り０．４３３ｇのＣａＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏ、０．１４０
ｇのＭｇＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏ及び０．２１０ｇのＮａＨＣ
Ｏ_３を含む； （ｂ） 洗剤：これは下記の三種のうちから選択され
た： ＡＬＬ−基洗剤（＝過ホウ酸塩、ＴＡＥＤ及び酵素不
含） ＴＩＤＥ−プラス洗剤（＝トリポリリン酸ナトリウム含
有） ＴＩＤＥ−マイナス洗剤（＝トリポリリン酸ナトリウム
不含、他のビルダー含有） ＡＬＬ−基洗剤はオランダ国のユニリバー研究所から入
手された。ＴＩＤＥ−プラス及びＴＩＤＥ−マイナス洗
剤は米国プロクター アンド ギヤムブル社から市販品
として入手された。ＡＬＬ及びＴＩＤＥは登録商標名で
ある。実験をｐＨ９．０又は１０．３、温度４０又は５
０℃で行なった。０、１５及び３０分間（或場合に９０
分間以下）後の混合物から試料を採取し前記の二種試験
法のいずれかを用いて残留リパーゼ活性を測定した。使
用リパーゼはプソイドモナス プソイドアルカリゲネス
Ｓｐ ９（ＣＢＳ ４６７．８５）株、 ＩＮ ＩＩ
−５（ＣＢＳ ４６８．８５）株、Ｇｒ ＶＩ−１５
（ＣＢＳ ４７１．８５）株及びＭ−１（ＣＢＳ ４７
３．８５）株、プソイドモナス ステュツエリ Ｔｈａ
ｉ ＩＶ １７−Ｉ（ＣＢＳ ４６１．８５）株及びア
セトバクテル カルコアセティクス Ｇｒ Ｖ−３９
（ＣＢＳ ４６０．８５）株から生成された。結果を例
４−８に示す。洗浄条件下におけるリパーゼの作用効果の測定（ＳＬＭ
−試験法） ＳＬＭ−試験法を好適に施行する代表的実験例を下文に
示す。ＥＭＰＡ２１１モメン試験布を織物として使用
し、トリオレイン又は純化オリーブ油〔共に米国シグマ
（ｓｉｇｍａ）社の製品〕を基質として使用しな。。試
験布の抽出後にクロマトグラフ法によってトリオレイン
加水分解状況を追跡した。ＳＬＭ−試験法の目的に好適
に使用される洗浄操作は次の通りである：アセトン（２
５％）中に５ｍｇのオリーブ油を溶解して含む２０μｌ
の量をモメン試験布（３×３ｃｍ）上にスポットした。
この試験布を室温で風乾した。１０ｍｌのＳＴＷ（標準
水道水：蒸留水１ｌ当り０．４３３ｇ ＣａＣｌ_２、
０．１４０ｇ ＭｇＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏ及び０．２１０ｇ
ＮａＨＣＯ_３含有）又はＳＴＷ中に溶かされた洗剤の
溶液から成る洗浄用液を止栓付きのエルレンマイヤフラ
スコ（２５ｍｌ）中に入れ振盪水浴中で４０℃に保持し
た。エルレンマイヤフラスコへのリパーゼ添加とその直
後の汚染布の添加とによって洗浄工程を開始させ、４０
℃に４０分間振盪を続けた。対照試験フラスコに対して
はリパーゼを添加しない。洗浄後に試験済みの布をＳＴ
Ｗですすぎ、次に室温乾燥した。基質と生成物とのクロ
マトグラフィによる分別に使用される溶出液と同じ組成
をもつ溶剤の５ｍｌを有するガラス管内で回転させるこ
とによって上記の乾燥布を抽出した。抽出溶液中に残留
したトリグリセライドと生成した遊離脂肪酸とをＨＰＬ
Ｃで測定した。

用具及び条件： ポンプ：２１５０型（ＬＫＢ） 検出器：屈折率観測モニター（Ｊｏｂｉｎ Ｊｖｏｎ） 注入系：ウイスプ（Ｗｉｓｐ（ＭＩＬＬＩＰＯＲ
Ｅ）〕：１０μｌ インテグレイター（Ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ）：ＳＰ ４
２７０（Ｓｐｅｃｔｒａ Ｐｈｉｓｉｃｓ） コラム：ミクロスフア型（ＣＰ Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒ
−Ｓｉ（ＣＨＲＯＭＰＡＣＫ）〕，１００×４．６ｍｍ 溶出液：ｎ−ヘキサン／イソプロピルアルコール／ギ
酸：９７５：２５：２．５（ｖ／ｖ），１ｍｌ／分 温 度：周囲温度 これらの条件下におけるトリオレイン及びオレイン酸の
保持時間は夫々１．２及び１．６分である。領域のピー
クと高さのピークとを測定した。これらは試験布の抽出
によるトリグリセライドと脂肪酸との回収値の目安であ
る。未洗試験布の抽出によるトリグリセライド回収値を
１００％とした。上記諸条件下でオリーブ油とオレイン
酸との間における屈折率応答の比率は領域ピークにもと
づく場合に０．８５であり、高さのピークにもとづく場
合に１．１であることが見出された。例 １ Ｓｐ ９株の発酵にもとづくリパーゼ上澄溶液の凍結乾
燥製品の製造 プソイドモナス プソイドアルカリゲネスＳｐ ９（Ｃ
ＢＳ４６７．８５）株を１００ｍｌ容円錐フラスコ中の
３０ｍｌの滅菌された脳−心臓浸出（ＢＨＩ）培地（Ｄ
ｉｆｃｏ）の中に接種した。培養物を軌道式（ｏｒｂｉ
ｔａｌ）振盪器中３００ｒｐｍで３０℃に１６時間振盪
した。ＢＨ１培地生育細胞群を５００ｍｌの滅菌された
脱脂乳培地を有する２ｌ容円錐フラスコの中へ接種し
た。脱脂乳培地は下記のようにして調製された：脱脂乳
（Ｄｉｆｃｏ）１００ｇ；脱イオン水を加えて１ｌとす
る；滅菌処理前にｐＨを７．０に調整；滅菌条件：１１
０℃に３０分間。接種された脱脂乳を軌道式振盪器中２
５０〜３００ｒｐｍにおいて４８時間振盪した。リパー
ゼ生成のための生育温度は２０℃であった。培養液をソ
ルバル遠心機（Ｓｏｒｖａｌｌ Ｒ ＧＳＡ ｒｏｔｏ
ｒ）を用い１００００ｇで８〜１０℃において遠心分離
した。遠心処理後に得られた上澄液を次に凍結乾燥して
リパーゼ製品を得た。他のリパーゼ産生性菌株例えばＣ
ＢＳ番号４６０．８５、４６１．８５、４６８．８５、
４７１．８５及び４７３．８５、ＡＴＣＣ番号２９６２
５並びにＤＳＭ番号２６７２（ＥＰ−Ａ−１３００６
４）の諸菌株の発酵を同様に行なったが但しＣＢＳ番号
４６８．８５については生育温度を３０℃とした。本例
に従って得られたリパーゼ製品を例４〜８の安定度試験
に使用した。例 ２ Ｔｈａｉ ＩＶ １７−１株の発酵にもとづくリパーゼ
上澄溶液の凍結乾燥製品の製造 プソイドモナス ステュツエリ Ｔｈａｉ ＩＶ １７
−１（ＣＢＳ ４６１．８５）株を１００ｍｌ容円錐フ
ラスコ中の３０ｍｌの滅菌されたＢＨＩ培地の中へ接種
した。培養物を軌道式振盪器中３００ｒｐｍで３０℃に
１６時間振盪した。ＢＨＩ培地生育細胞群を５００ｍｌ
の滅菌されたＧＳＭ培地を有する２ｌ容円錐フラスコの
中へ接種した。ＧＳＭ培地は下記のようにして調製され
た：脱脂乳（Ｄｉｆｃｏ 又はＯｘｏｉｄ）１００ｇ；
脱イオン水を加えて１ｌとする；滅菌処理前に４Ｎ Ｎ
ａＯＨ添加によりｐＨを７．８に調整；攪拌下に温度を
４０℃にする；次にマキサターゼ（ＭＡＸＡＴＡＳＥ
（Ｇｉｓｔ−ｂｒｏｃａｄｅｓ）（プロテアーゼ）〕溶
液を添加；温度とｐＨとを１時間かけて制御する；次に
ｐＨを７とする；１１０℃に３０分間滅菌処理する。上
記のマキサターゼ溶液は下文のようにして調製された：
マキサターゼ粉末（２．３７２×１０^６デルフト単位／
ｇ）の１ｇに対し脱イオン水を加えて２５ｍｌとした。
これを５〜１０分間よく振盪した。不溶性物質をソルバ
ル遠心機のＳＳ３４回転機内で１００００ｒｐｍの下で
遠心処理して除去した。上澄液を０．２２μのミリポア
（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ^Ｒ）フィルターへ通して濾過し
た。次に濾液を１０％脱脂乳の１ｌに対して添加した。
かように接種された脱脂乳を軌道式振盪器中２５０〜３
００ｒｐｍで４８時間２０℃の下に振盪フラスコ内で振
盪した。次に培養液をソルバルＧＳＡ回転機中１０００
０ｇで８〜１０℃の下に遠心処理した。得られた上澄液
を１０ｍＭトリス−ＨＣｌ緩衝液の５０容に対し、ｐＨ
８、４℃の下に、緩衝液を２回変更して、２４時間かけ
て、ＥＤＴＡ−処理透析管内で透析した。透析後の透析
用袋の内容物を貯蔵し凍結乾燥した。ＣＢＳ ４７３．
８５株を除く例１記載の他の全菌株を用いて上文と同様
にして発酵を行なった。本例で得られたリパーゼ含有上
澄液（但しＭ−１株からのリパーゼを除く）を例９及び
１０記載の実験に使用した。例 ３ Ｍ−１株の発酵にもとづくリパーゼ上澄液の凍結乾燥製
品の製造 プソイドモナス プソイドアルカリゲネス Ｍ−１（Ｃ
ＢＳ４７３．８５）株を５００ｍｌ円錐フラスコ中の５
００ｍｌの滅菌された脳−心臓浸出（ＢＨＩ）培地（Ｄ
ｉｆｃｏ）の中へ接種した。培養物を軌道式振盪器中２
８０ｒｐｍで３０℃に１８時間振盪した。ＢＨＩ培地生
育細胞群を滅菌された１０ｌの培地１又は培地２を有す
る２０ｌ容発酵器の中へ接種した。培地１は下記のよう
にして調製された：脱脂乳１０００ｇをミネラル除脱水
添加により懸濁させて９．５ｌとした。温度を３０℃と
してからＮａＯＨ溶液添加によりｐＨを７．８とした。
プロテアーゼ処理（３０℃、ｐＨ７．０〜７．８）のた
めに３３×１０^６ＡＤＵ（＝２６×１０^６ＤＵ）のマキ
サカル〔ＭＡＸＡＣＡＬ^▲Ｒ▼（ＧＩＳＴ−ｂｒｏｃａ
ｄｅｓ）〕を１時間かけて添加した。０．５〜１０ｍｌ
の消泡剤〔ＳＡＧ ４７１又は Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ
−８１（いずれも商標名）〕を添加した後に１１０℃で
３０分間オートクレーブ処理した。培地（２）は下記の
ようにして調製された：カゼイン４００ｇをミネラル除
脱水添加により懸濁させて５ｌとした。ｐＨを９．０
（ＮａＯＨ溶液使用）とし温度を５０℃とした。プロテ
アーゼ処理のために５×１０^７ＡＤＵ（＝４×１０^７Ｄ
Ｕ）のＭＡＸＡＣＡＬ^▲Ｒ▼を添加した。恒温保持（５
０℃、ｐＨ＝９．０において９０分間）してから急速加
熱（９０℃に５分間の恒温保持）した。２５℃に冷却し
てから硫酸添加によりｐＨを７．０に調整した。他成分
（バター５０ｇ；ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ ５ｇ；ＭｎＳ
Ｏ_４・４Ｈ_２Ｏ ０．１ｇ及び消泡剤ＳＡＧ ４７１
０．５〜１０ｍｌ）を添加してからミネラル除脱水を用
いて培地を１０ｌとし、オートクレーブ処理（１２０
℃、６５分間）した。培地を発酵温度（３０℃）にまで
冷却した。発酵条件は次の通りである： 通気：０．１６７ｖｖｍ； 攪拌：１０００ｒｐｍ； ｐＨ ：６．５〜１０．０（好適範囲は６．８〜８．
０）。

発酵を３５〜７２時間継続させた。発酵終了後にヘティ
ヒ（Ｈｅｔｔｉｃｈ）遠心機（４０００ｇ、８〜１０
℃）上で３０分間遠心処理した。上澄液を０℃に冷却し
てから７０％（ｗ／ｗ）の濃縮液に対し固体の（Ｎ
Ｈ_４）_２ＳＯ_４を攪拌下に添加した。生成沈殿をソルバ
ル遠心機（１００００ｇ、４〜５℃）上で２０〜２５分
間遠心処理して上澄液から分別した。沈殿物を０℃の１
０ｍＭトリズＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８）中に採り、２０分
間以内に冷却アセトン（＜−７℃）を加えて濃度６５％
（ｗ／ｗ）とした。遠心処理後にｐＨ８の１０ｍＭトリ
スＨＣｌ緩衝液中へ沈殿物を採り５０容の同一緩衝液に
対し４℃で緩衝液を２回交換して２４時間かけて沈殿物
を透析した。透析後の物質を凍結乾燥した結果得られた
活性度は６０００ＴＬＵ／ｇであった。同様にして例１
記載の他のすべての菌株を使用し得るけれども但し下記
の僅かな修正を要する：Ｓｐ ９株については培地１の
みを使用し得る。他のすべての菌株について発酵温度は
２０℃であるがＩＮ ＩＩ−５株については２０又は３
０℃である。例 ４ 温度３５、４０及び５０℃における１ｌ当り８ｇのＡＬ
Ｌ−基洗剤使用の場合のプソイドモナス プソイドアル
カリゲネス リパーゼの安定度試験 リパーゼ給源：上澄液の凍結乾燥物； 洗剤溶液 ：ＡＬＬ−基洗剤 ８ｇ／ｌ； ｐＨ ：下表参照。

例 ５ 温度４５及び５０℃における１ｌ当り４ｇのＡＬＬ−基
洗剤使用の場合のプソイドモナス プソイドアルカリゲ
ネス リパーゼの安定度試験 ａ．リパーゼ給源：上澄液の凍結乾燥物； 洗剤溶液 ：ＡＬＬ−基洗剤 ４ｇ／ｌ； ｐＨ ：下表参照； ｂ．リパーゼ給源：上澄液の凍結乾燥物； 洗剤溶液 ：ＡＬＬ−基洗剤 ４ｇ／ｌ； ｐＨ ：下表参照； 例 ６ 温度４０及び５０℃における１ｌ当り６ｇのＴＩＤＥ−
基洗剤使用の場合のプソイドモナス プソイドアルカリ
ゲネス Ｓｐ ９ リパーゼの安定度試験 リパーゼ給源：Ｓｐ ９による上澄液の凍結乾燥物； 洗剤溶液 ：下表参照、６ｇ／ｌ； ｐＨ ：下表参照。

例 ７ 温度４０℃における１ｌ当り５ｇのＡＬＬ−基洗剤使用
の場合のプソイドモナス ステュツエリ Ｔｈａｉ Ｉ
Ｖ １７−１リパーゼの安定度試験 リパーゼ給源：Ｔｈａｉ ＩＶ １７−１による上澄液
の凍結乾燥物； 洗剤溶液 ：ＡＬＬ−基洗剤 ５ｇ／ｌ； ｐＨ ：９．０； 例 ８ 温度４０及び５０℃における１ｌ当り８ｇのＡＬＬ−基
洗剤使用の場合のアシネトバクテル カルコアセティク
スリパーゼの安定度試験 リパーゼ給源：Ｇｒ Ｖ−３９（ＣＢＳ ４６０．８
５）による上澄液の凍結乾燥物； 洗剤溶液 ：ＡＬＬ−基洗剤 ８ｇ／ｌ； ｐＨ ：１０．３。

例 ９ 本例はＳＬＭ−試験法に従う洗浄工程におけるプソイド
モナス プソイドアルカリゲネス Ｓｐ ９、ＩＮ Ｉ
Ｉ−５、Ｇｒ ＶＩ−１５、Ｍ−１、ＡＴＣＣ２９６２
５、プソイドモナス ステュツエリ Ｔｈａｉ ＩＩ−
５及びアセトバクテル カルコアセティクス Ｇｒ Ｖ
−３９のリパーゼの作用効果を例示する。この場合に現
代的な洗剤組成物中に存在するビルダー成分（ＴＰ
Ｐ）、粉末洗剤（ＡＬＬ−基）及び液状配合物（ＴＩＥ
Ｄ液体洗剤）と該酵素との共存性についてチェックし
た。本明細書中に既述された通りにＳＬＭ−試験法を行
なった。使用条件の下では洗浄工程の際に残留するトリ
グセライドと共に、リパーゼにより生成されたかなりの
量の脂肪酸が織物上に残存することが予備試験において
示された。既述のリパーゼの作用効果と対照品とについ
て下記条件下にＳＬＭ−試験法によるテストを行なっ
た： 標準水道水（ＳＴＷ）：アルカリ使用下にｐＨ９．１に
調整； トリポリリン酸ナトリウム（ＴＰＰ）：１ｌ当り２及び
１０ｇ（ｐＨ９．１）； 液状のＴＩＤＥ洗剤 ：１ｌ当り２及び４ｇ（ｐＨ７．
５）； ＡＬＬ−基洗剤 ：１ｌ当り２、４及び８ｇ（ｐＨ
９．２〜９．６）。

添加されたリパーゼ活性単位（２０ ＴＬＵ）は例２に
従って、但しＭ−１株の場合には例３に従って、調製さ
れた凍結乾燥試料から得られた。これらの活性単位は次
の通りであった： 洗浄試験結果を下表に示す： 上掲の諸表から本発明のリパーゼは織布に対する脂肪分
解性を示すこと、特に洗浄条件下における液体洗剤並び
に粉末洗剤の中においてその優秀な作用効果を発揮する
ことが明かである。例 １０ 本例は本発明のリパーゼの洗浄条件下における漂白剤又
はタンパク分解性酵素との共存性を証明する例示であ
る。このリパーゼの作用効果を既述のＳＬＭ−試験法に
従い下記諸条件の下でテストした： ＡＬＬ−基洗剤＋漂白剤活性化剤（ＴＡＥＤ ３％）：
４ｇ／ｌ（ｐＨ９．１）； ＡＬＬ−基洗剤＋ＴＡＥＤ＋漂白剤（ＮａＢＯ_３・４Ｈ
_２Ｏ１３％）：４ｇ／ｌ（ｐＨ９．１）； ＡＬＬ−基洗剤＋ＴＡＥＤ＋プロテアーゼ（２０００
ＤＵ／ｇ洗剤）：４ｇ／ｌ（ｐＨ９．１）。

添加されたリパーゼ単位（２０ ＴＬＵ）は例２に従っ
て、ＭＩの場合には例３に従って（例９参照）、製造さ
れた凍結乾燥製品試料から得られた。リパーゼ産生菌株 ：ＩＮ ＩＩ−５、Ｍ１、Ｇｒ ＶＩ
−１５及びＡＴＣＣ ２９６２５。プロテアーゼ ：マキサターゼ（ＭＡＸＡＴＡＳＥ）。マ
キサターゼのタンパク分解活性はデルフト法（Ｄｅｌｆ
ｔ Ｍｅｔｈｏｄ）〔Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｏｉｌ Ｃｈｅ
ｍ．Ｓｏｃ．６０（１９８３）１６７２参照〕に従って
測定された。例９記載と同様にして得られた結果は下表
の通りである： 上掲の諸表からもまた本発明のリパーゼは織布に対する
脂肪分解性を示すこと、特に洗浄条件下における液体洗
剤並びに粉末洗剤の中においでその優秀な作用効果を発
揮することが明かである。

フロントページの続き (72)発明者 ラボウト ヨハネス ヤコブス マリア オランダ国 2106エーカー ヘームスティ ード アルベルディンク テイムラーン ８ (72)発明者 フェルスホール ヘリット ヨハネス オランダ国 2731エーヴェー ベンツーゼ ンローデ クルースストラート ５

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 受託番号ＣＢＳ４６７．８５を有するシ
   ュードモナスシュードアルカリゲネスＳｐ９、受託番号
   ＣＢＳ４６８．８５を有するシュードモナスシュードア
   ルカリゲネスＩＮＩＩ−５、受託番号ＣＢＳ４７１．８
   ５を有するシュードモナスシュードアルカリゲネスＧＲ
   ＶＩ−１５及び受託番号ＣＢＳ４７３．８５を有するシ
   ュードモナスシュードアルカリゲネスＭ−１から選択さ
   れる、洗剤組成物用脂肪分解酵素を産生できるシュード
   モナス株。