JPH06341990A - 抗原又は抗体固定化プレート及びそれを用いた免疫測定法 - Google Patents

抗原又は抗体固定化プレート及びそれを用いた免疫測定法

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JPH06341990A
JPH06341990A JP13187093A JP13187093A JPH06341990A JP H06341990 A JPH06341990 A JP H06341990A JP 13187093 A JP13187093 A JP 13187093A JP 13187093 A JP13187093 A JP 13187093A JP H06341990 A JPH06341990 A JP H06341990A
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JP
Japan
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plate
antigen
antibody
desirable
containing liquid
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JP13187093A
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English (en)
Inventor
Naonobu Yoshizuka
直伸 吉塚
Atsushi Ouchi
敦 大内
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Kao Corp
Original Assignee
Kao Corp
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Abstract

(57)【要約】 【構成】 抗原又は抗体含有液をプレートに添加後濃縮
乾燥する免疫測定用抗原又は抗体固定化プレートの製造
法、こうして得られるプレート、及びこのプレートを用
いる免疫測定法。 【効果】 プレートに抗原又は抗体が簡便な操作で、か
つ効率よく吸着するので、このプレートを用いた免疫測
定の感度が飛躍的に向上する。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は抗原又は抗体を固定化し
たプレートを用いる免疫測定法及びこれに用いるプレー
トに関する。
【0002】
【従来の技術】免疫測定法、特にエンザイムリンクトイ
ムノソルベントアッセイ(ELISA)法やラジオイム
ノアッセイ(RIA)法は操作が比較的簡便で測定感度
が高いことから広く採用されており、極めて重要な測定
法である。これらの測定法においては抗原又は抗体を固
相担体に固定化し、当該担体上で抗原抗体反応が行われ
るが、当該固相担体として24穴プレートや96穴プレ
ート等のプレートが広く用いられている。
【0003】プレートへの抗原又は抗体の固定化手段と
しては(1)抗原又は抗体含有液をプレートに添加し、
一定時間放置することにより抗原又は抗体をプレート上
に吸着せしめた後、過剰の抗原又は抗体の含有液を除去
する方法〔例えば、「A Practical gui
de to ELISA」D.M.Kemery,Pe
rgamon Press、特開平1−316662号
公報等〕、(2)プレート表面にアミノ基やカルボキシ
ル基等の官能基を導入し、グルタールアルデヒドやカル
ボジイミドなどの架橋剤を介して抗原又は抗体分子を共
有結合させる方法が知られている。
【0004】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、前記
(1)の固定化法では、吸着手段が受動的なものである
ことから吸着量が不充分であり、測定感度が低いという
欠点があった。また未吸着抗原又は抗体を除去すること
から、非経済的であるという欠点もあった。一方、前記
(2)の固定化法は、固定化効率は高いが官能基の導
入、架橋剤による架橋反応が必要であり、新たな試薬を
必要とし、かつ操作が煩雑であるという欠点があった。
【0005】従って、本発明の目的はこのような欠点が
なく、簡便な操作で効率よくプレートに抗原又は抗体を
固定化することのできる方法、さらにこうして得られた
抗原又は抗体固定化プレートを用いた免疫測定法を提供
することにある。
【0006】
【課題を解決するための手段】そこで本発明者らは抗原
又は抗体をプレートに簡便に吸着させるべく種々検討し
た結果、意外にもプレートに抗原又は抗体含有液を添加
した後、これを濃縮乾燥すれば容易で効率よく抗原又は
抗体がプレートに吸着固定化され、このプレートを用い
れば従来の溶液吸着法(前記(1)の吸着手段)で得た
プレートに比べ、測定感度が向上することを見出し、本
発明を完成するに至った。
【0007】すなわち、本発明は抗原又は抗体含有液を
プレートに添加後濃縮乾燥することを特徴とする免疫測
定用抗原又は抗体固定化プレートの製造法を提供するも
のである。
【0008】また、本発明は抗原又は抗体含有液をプレ
ートに添加後濃縮乾燥することにより得られる免疫測定
用抗原又は抗体固定化プレートを提供するものである。
【0009】さらに本発明は抗原又は抗体含有液をプレ
ートに添加後濃縮乾燥することにより得られる免疫測定
用抗原又は抗体固定化プレートを用いることを特徴とす
る免疫測定法を提供するものである。
【0010】本発明に用いられるプレートとしては、そ
の材質を問わず、通常のポリプロピレン、ポリスチレン
等のプラスチック製プレートが挙げられる。好ましく
は、24穴プレート、96穴プレート等が挙げられる。
【0011】また、抗原又は抗体含有液は、測定しよう
とする抗原又は抗体を含有する溶液、すなわち被検液で
もよいし、測定しようとする抗原又は抗体に対する抗体
又は抗原を含有する溶液でもよい。また、これらの抗原
又は抗体含有液には、各種緩衝液、体液等の媒体中に溶
解又は懸濁している状態のいずれも含まれる。
【0012】本発明においては、プレートに抗原又は抗
体含有液を添加した後、当該抗原又は抗体含有液を濃縮
乾燥させるが、当該濃縮乾燥手段は抗原又は抗体が変成
しない条件であれば特に制限されない。例えば、減圧又
は常圧下、抗原又は抗体が変成しない温度に加熱するか
又は凍結乾燥するのが好ましい。このうち、加熱乾燥が
簡便性の点で、より好ましい。ここで加熱する場合の温
度は、40〜90℃が好ましい。
【0013】代表的な濃縮乾燥手段としては、40〜9
0℃程度に加熱した乾燥機の内部にプレートを静置又は
回転させておくことによって行う方法が挙げられる。こ
こに加熱する方法は、空気を加熱する方法、赤外線など
の放射線により加熱する方法のいずれを採用することも
できる。また、用いる乾燥機は換気型でなくともよいが
換気型のほうがより能率的である。さらに、試料の飛散
を防止するためにプレートの底の方向に遠心などの方法
で重力をかけた状態で乾燥することもできる。
【0014】かくして得られた抗原又は抗体固定化プレ
ートには、大量の抗原又は抗体が吸着しており、当該プ
レートを用いて通常の免疫測定法を実施すれば、高感度
で被検体の測定ができる。ここで、適用できる免疫測定
法としては、固相−液相等の抗原抗体反応を利用した免
疫測定法であれば特に限定されず、直接法、競合法、サ
ンドイッチ法等が挙げられるが、特にEIA又はRIA
によるサンドイッチ法が好ましく、さらにELISAが
好ましい。
【0015】
【発明の効果】本発明によればプレートに抗原又は抗体
が簡便な操作で、かつ効率よく吸着するので、このプレ
ートを用いた免疫測定の感度が飛躍的に向上する。
【0016】
【実施例】次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれに何ら限定されるものではない。
【0017】実施例 (1)材料及び試薬 ELISA用96穴プレートはFALCON 3910
U底プレート(Becton Dickinson
Co.)を、またELISA発色系試薬として、ビオチ
ン化抗マウスIgM、ビオチン化抗マウスIgG、AB
Cキット(VECTASTAINTM)はVector社
(Vector Laboratories,In
c.,)のものを、またパーオキシダーゼの基質として
ABTS溶液はKPL社(ABTS Peroxida
se substrate)のものを用いた。プレート
洗浄用の界面活性剤として、Tween 20(東京化
成工業)を用い、プレートのブロッキング剤としてスキ
ムミルク(DIFCO)を用いた。また、抗原として正
常マウス血清由来IgMを用いた。 (2)抗原固定化プレートの調製 抗原溶液をELISA用96穴プレートの各ウェルに5
0μl ずつ加え、換気型オーブンを用い、50℃、70
℃又は90℃の温度で1〜3時間加熱乾燥させた(本発
明プレート)。一方、比較例として抗原溶液をELIS
A用96穴プレートの各ウェルに50μl ずつ加え、室
温にて2時間放置することにより吸着させて溶液吸着プ
レートを得た。 (3)ELISA法 抗原に対する抗体、又は2次抗体としてビオチン化抗マ
ウスIgM、ビオチン化抗マウスIgGを用い、発色は
ABCキット(VECTASTAINTM)を用いてEL
ISAを行った。即ち、上記(1)で得られた抗原固定
化プレートに、ブロッキング剤としてリン酸緩衝生理食
塩水(PBS)に溶解させた1%スキムミルク200μ
l を加え室温で2時間以上放置した。その後、1次抗体
液を各ウェルに50μl ずつ加え30分放置し、1%T
ween 20含有PBS(TPBS)で5回洗浄し
た。さらにビオチン化2次抗体液を用い同様の操作を行
った。尚、抗原の種類によっては1次抗体を用いず、直
接2次抗体を反応させた。抗体を反応させた後、ABC
キット中アビチン・ビオチン・コンプレックス液50μ
l ずつ加え30分放置し、TPBSで5回洗浄した。パ
ーオキシダーゼの基質としてABTS溶液(ABTS
Peroxidase substrate)を100
μl 加え約10分発色後415nmにおける吸光度を測定
した。
【0018】(4)結果 (a)抗原含有液として正常マウス血清由来IgMの
8.3μg /ml PBS溶液を用いてELISAを行っ
た結果、本発明プレート(50℃2時間乾燥)の場合の
吸光度は1.43、溶液吸着プレートの場合の吸光度は
0.87であり、本発明プレートを用いた免疫測定法は
測定感度が向上することが明らかとなった。 (b)抗原含有液としてハプテン化蛋白質である2,4
−ジニトロフェニル(DNP)化牛血清アルブミンの2
00ng/ml PBS溶液を用いてELISAを行った結
果、本発明プレート(50℃2時間乾燥)の場合の吸光
度は1.46、溶液吸着プレートの場合の吸光度は0.
28であり、本発明プレートを用いた免疫測定法は測定
感度が飛躍的に向上することが明らかとなった。 (c)抗原含有液としてハプテン化蛋白質であるDNP
化卵白アルブミンの200ng/ml PBS溶液を用いて
ELISAを行った結果、本発明プレート(50℃2時
間乾燥)の場合の吸光度は1.48、溶液吸着プレート
の場合の吸光度は0.15であり、本発明プレートを用
いた免疫測定法は測定感度が飛躍的に向上することが明
らかとなった。 (d)抗原含有液として正常マウス血清由来IgMの1
5%FCS含有液(250μg /ml)を用いて、濃縮乾
燥条件の免疫測定結果に及ぼす影響を検討した。その結
果、吸光度は乾燥条件50℃3時間の場合0.55、7
0℃2時間の場合0.55、90℃1時間の場合0.4
5であり、いずれの場合も良好な発色率を示した。

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 抗原又は抗体含有液をプレートに添加後
    濃縮乾燥することを特徴とする免疫測定用抗原又は抗体
    固定化プレートの製造法。
  2. 【請求項2】 抗原又は抗体含有液をプレートに添加後
    濃縮乾燥することにより得られる免疫測定用抗原又は抗
    体固定化プレート。
  3. 【請求項3】 抗原又は抗体含有液をプレートに添加後
    濃縮乾燥することにより得られる免疫測定用抗原又は抗
    体固定化プレートを用いることを特徴とする免疫測定
    法。
JP13187093A 1993-06-02 1993-06-02 抗原又は抗体固定化プレート及びそれを用いた免疫測定法 Pending JPH06341990A (ja)

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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5537130A (en) * 1993-12-22 1996-07-16 Fujitsu Limited System for contracting bit map image data
DE10141387A1 (de) * 2001-08-16 2003-03-13 Inst Chemo Biosensorik Träger für immobilisierte Biomoleküle und Verfahren zur Immobilisierung von Biomolekülen

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5537130A (en) * 1993-12-22 1996-07-16 Fujitsu Limited System for contracting bit map image data
DE10141387A1 (de) * 2001-08-16 2003-03-13 Inst Chemo Biosensorik Träger für immobilisierte Biomoleküle und Verfahren zur Immobilisierung von Biomolekülen

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