JPH0430927B2 - - Google Patents

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JPH0430927B2
JPH0430927B2 JP59242472A JP24247284A JPH0430927B2 JP H0430927 B2 JPH0430927 B2 JP H0430927B2 JP 59242472 A JP59242472 A JP 59242472A JP 24247284 A JP24247284 A JP 24247284A JP H0430927 B2 JPH0430927 B2 JP H0430927B2
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    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/07—Stiffening bandages
    • A61L15/12—Stiffening bandages containing macromolecular materials
    • A61L15/125—Mixtures of macromolecular compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0009—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials
    • A61L26/0052—Mixtures of macromolecular compounds
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    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
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    • Y10S128/00—Surgery
    • Y10S128/08—Collagen

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は手術や外傷などによる止血を迅速且つ
簡便に止血することを目的とした止血剤に関し、
外科領域で広く応用することができる止血剤に関
する。
（従来の技術） 外科手術では血管結紮による止血以外に微細な
毛細血管からの止血は手術時間の短縮、手術の管
理上大きな問題となつている。血管結紮で止血で
きない出血を迅速且つ簡便に止血できる止血剤の
開発は強く望まれているところである。また、こ
の止血剤は、生体内に残されても生体適合性が良
く、いずれは吸収されるような物質であることが
理想的である。他方、生体の結合組織の主要成分
であるコラーゲンが血液の凝固過程に関与してい
ることが従来より知られている。すなわち、コラ
ーゲンは一次止血における血小板の活性化に関与
し、血小板の粘着とそれに続く凝集とを誘導し最
終的に血栓を形成させることは広く認められてい
る。そして、このようなコラーゲンの止血作用を
利用して現在コラーゲン単独からなる止血剤が開
発されている。しかし、手術における止血作業は
現在でも長時間を要し、コラーゲン単独からなる
止血剤よりも更に短時間で止血を完了するような
止血剤が望まれている。
（発明が解決しようとする問題点） 本発明はコラーゲンの有する優れた止血作用を
更に増進させ、極めて短時間で止血できるような
止血剤を提供するものである。
（問題点を解決するための手段） すなわち、本発明はコラーゲン又はゼラチンに
プロタミン及び二官能性架橋剤を添加、混合した
ことを特徴とする止血剤である。
しかして、本発明で使用するコラーゲンは例え
ば仔牛真皮からコラーゲナーゼを除くタンパク質
分解酵素（例えばペプシン）で抽出したアテロコ
ラーゲンや、腱や胎盤から精製した不溶性コラー
ゲン及び変性コラーゲンであるゼラチンなど種々
の材料が使用できる。なお、アテロコラーゲンと
はテロペプチドのとれたコラーゲンに対して最近
つけられた名称であつて、コラーゲンの抗原性は
主にテロペプチドの存在に起因するので、このテ
ロペプチドのとれたコラーゲン、すなわちアテロ
コラーゲンは殆んど抗原性がなく、該止血剤の原
料として最も適している。また、不溶性コラーゲ
ンは分子末端に存在するテロペプチドを介して形
成されている分子間架橋によつて不溶性になつて
いるもので、タンパク質加水分解酵素であるペプ
シンを作用させることにより、テロペプチドが消
化されて分子間架橋が切断され、不溶性コラーゲ
ンは可溶化されてアテロコラーゲンとなる。ま
た、アテロコラーゲンは希酸や中性塩の水溶液で
抽出された可溶性コラーゲンをペプシンで処理し
ても得られる。
本発明で使用するプロタミンは、魚類の精子核
から分離されるクルペイン、サルミン、イリジ
ン、チニン、ムギリン、ステリン、スコンブリ
ン、シプリニン、ラクストリンやニワトリの精子
核から単離されるガリンなど、一般名としてプロ
タミンと呼ばれる一群の細胞核塩基性タンパク質
であり、また、プロタミンと同族のヒストン型タ
ンパク質を含んでいるものでも使用可能である。
また、プロタミンは無機酸又は有機酸類と塩様結
合体を作り、塩酸塩、硫酸塩、炭酸塩、硝酸塩、
酢酸塩、リン酸塩等となる。しかして、これらの
塩様結合体は水にとけるので、本発明のプロタミ
ンとしてはこれらの塩様結合体を使うことが望ま
しく、特に硫酸プロタミン、塩酸プロタミンが好
ましい。
本発明におけるコラーゲンとプロタミンの混合
割合はコラーゲン１ｇに対してプロタミン0.001
〜２ｇであり、特に、好ましくは0.01〜１ｇであ
る。
又、コラーゲンとプロタミンとを結合させる二
官能性架橋剤としてはグルタルアルデヒド、ジイ
ソシアン酸ヘキサメチレン等である。しかして、
コラーゲンとプロタミンとを共有結合させる手段
の一例としては架橋剤の溶液の濃度0.001〜５％
好ましくは0.1〜２％の架橋剤溶液を用い、中性
以上のPH領域で10分〜24時間試料を浸漬して反応
させることによつて得られる。
このように、本発明の止血剤はコラーゲンとプ
ロタミンとを共有結合させることにより止血剤の
強度、比重、粘度などの物理的特性を容易に制御
することができ止血剤として多様な加工を施すこ
とができる。すなわち、本発明の止血剤は粉末状
として使用するばかりでなく、スポンジやフイル
ムに成型加工して使用したり、或は紡糸して用い
たり、または溶液もしくは繊維分散液として使用
したりする等種々の形態にして使用することがで
きる。
（作用） コラーゲンは先に述べたように一次止血におけ
る血小板の活性化に深く関与し、血小板の粘着と
それに続く凝集とを誘導し、最終的に血栓を形成
させるのであるが、血小板粘着反応のコラーゲン
側の反応サイトは塩基性の強いアルギニン残基の
グアニジノ基と考えられている。他方、プロタミ
ンは細胞核塩基性タンパク質であり、アルギニン
を多く含むために非常に塩基性が強く中性領域で
は正電荷を有し、このため負荷電を持つ血小板な
どはプロタミンに粘着し活性化される。したがつ
て、プロタミンをコラーゲンと同時に用いること
によつて、血小板粘着反応はコラーゲン側の反応
サイトと考えられているコラーゲンのアルギニン
残基のグアニジノ基と共にプロタミンのアルギニ
ン残基のグアニジノ基が大量に付与されるので止
血効果が向上するのである。しかも、プロタミン
は、内因系の血液凝固反応の反応阻害剤であるヘ
パリンと呼ばれる酸性ムコ多糖の中和剤として
も、広く臨床的に使われているので、特にヘパリ
ンを抗血栓剤として使用する手術中の止血に対し
て本発明の止血剤は著しい効果を示し、コラーゲ
ンのみを使用した場合に比して止血に要する時間
が著しく短縮されるのである。
次に本発明を実施例をもつて説明する。
実施例 １ 新鮮な仔牛の真皮を微細に粉砕し、この微細粉
を0.1M酢酸ナトリウム水溶液でくり返し洗浄後、
水洗した。次に水洗後の微細粉を0.5M酢酸水溶
液を用いて抽出処理を行ない、残渣である不溶性
コラーゲンをガラスフイルターでろ別した。この
不溶性コラーゲンを湿潤状態で100ｇ採取し、こ
れに0.5M酢酸1lを加え、さらにペプシン0.1ｇを
加えて、20℃で３日間撹拌を行なつた。この処理
によつて不溶性コラーゲンは溶解して粘稠なペプ
シン可溶性コラーゲン（即ちアテロコラーゲン）
溶液となつた。このアテロコラーゲン溶液をガラ
スフイルターでろ過後、ろ液に水酸化ナトリウム
水溶液を加えてPH7.5に調節したところ、線維状
の沈澱が生成した。この沈澱を遠心分離機によつ
て分離した後、蒸留水で３回洗浄を行ないアテロ
コラーゲンを得た。
濃度２％のアテロコラーゲンの塩酸酸性溶液
（PH３）を作り、コラーゲン１ｇに対して0.1ｇの
硫酸プロタミンを混合し、良く溶解した。これを
ホモジナイザーで撹拌しながら1N水酸化ナトリ
ウムでPH８に中和し、凍結乾燥してスポンジを得
た。次に２％のジイソシアン酸ヘキサメチレン−
メタノール溶液に浸して架橋を導入した。水で良
く洗い遊離のプロタミンを除去して再び凍結乾燥
をした。このとき、プロタミンは、アテロコラー
ゲンに共有結合されており、遊離のプロタミンは
含まれていない。
以上により本発明の止血剤であるスポンジを得
た。
実施例 ２ ゼラチンを２％濃度になるように60℃に加温し
ながら水に溶解した。ゼラチン水溶液を室温まで
冷却し、ゼラチン１ｇに対して0.1ｇの硫酸プロ
タミンを加えて溶解した。これを凍結乾燥しスポ
ンジ状にした。２％のジイソシアン酸ヘキサメチ
レン−メタノール溶液に浸し、プロタミンとゼラ
チンに共有結合を導入した。以下実施例１と同様
の操作により、ゼラチンにプロタミンが共有結合
したスポンジを得た。
実施例 ３ 新鮮な牛の腱を水で良く洗い、ミキサーで線維
をほぐした。この線維を何度も水洗し、脱水機で
軽く水を切つた。湿潤状態の線維100ｇに1lのリ
ン酸緩衝液（PH7.0）を加え更にパンクレアチン
0.13ｇを加え室温で１日放置した。これを何度も
水洗し、水を切つてコラーゲン以外の不純物タン
パク質を除去した。次に１％NaHCO3水溶液に
浸した後、水洗し、水を切つた。70％、80％、90
％、100％エタノールで徐々に脱水したあと風乾
した。これにより不溶性の牛の腱のコラーゲンを
得た。
牛の腱から精製した不溶性コラーゲンを２％の
濃度になるように水に分散してIN塩酸でPH３に
調製した。コラーゲン１ｇに対して10％の硫酸プ
ロタミンを溶解した。以下実施例１と同様の操作
によりプロタミンが不溶性コラーゲンに共有結合
したスポンジを得た。
実施例 ４ アテロコラーゲンの10％酸性溶液を作り、飽和
NaCl溶液の中に細いノズルから押し出し、ロー
ラーで延伸し、乾燥機で乾燥させてから巻き取つ
た。以上により、コラーゲン分子が繊維軸方向に
配向した紡糸繊維を得た。糸の太さは１〜5d（デ
ニール）であつた。紡糸したコラーゲン糸を１％
濃度の硫酸プロタミン水溶液に浸し、プロタミン
を吸収させた。これを１％濃度のグルタルアルデ
ヒド水溶液に浸し、プロタミンをコラーゲン糸に
共有結合させた。良く水洗し、遊離のプロタミン
を除去し、風乾した。以上により本発明の止血剤
であるコラーゲンの糸を得た。
実施例 ５ ３％濃度のアテロコラーゲンの塩酸酸性溶液を
作りコラーゲン１ｇに対して0.1ｇの硫酸プロタ
ミンを加えて溶解した。INの水酸化ナトリウム
を加えてPHを10〜11に調整し、コラーゲンとプロ
タミンの沈澱を得た。これを遠心により集めメタ
ノールで脱水した。２％のジイソシアン酸ヘキサ
メチレン−メタノール溶液を加え、アテロコラー
ゲンとプロタミンを共有結合させた。メタノール
で良く洗浄してから風乾した。これを水で良く洗
い遊離のプロタミンを除去する。再びメタノール
で脱水してから風乾し、細かく粉砕した。以上に
より本発明の止血剤であるコラーゲンの粉末を得
た。
実施例 ６ 実施例５で得た粉末１ｇに0.03M酢酸を100ml
加え良く膨潤させた。これをホモジナイザーで分
散させて線維状の分散液を得た。以上により本発
明の止血剤を得た。
以上の各実施例によつて得た本発明に係る止血
剤を用いて動物実験をし、止血効果を確認した。
すなわち、犬の脾臓の表面をナイフで切り取りこ
こに止血剤を作用させて止血するまでの時間を測
定することにより効果を確認した。プロタミンを
混合しないコラーゲン単独からなるスポンジは、
止血するまでに158±68秒かかつたのに対し、実
施例１の止血剤（スポンジ）を用いると66±26秒
になり半分以下に止血時間が短縮した。また、ゼ
ラチンについてもプロタミンを共有結合した止血
剤（実施例２）は、ゼラチン単独のものより、止
血時間が半分以下に短縮した。この他不溶性コラ
ーゲンのスポンジ（実施例３）、コラーゲンの糸
（実施例４）、コラーゲンの粉末（実施例５）、コ
ラーゲンの線維分散液（実施例６）も、それぞ
れ、コラーゲン単独のものより止血時間が、半分
以下に短縮され、本発明の止血剤が極めて有効で
あることが確かめられた。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. １ コラーゲン又はゼラチンにプロタミン及び二
    官能性架橋剤を添加、混合してコラーゲン又はゼ
    ラチンにプロタミンを共有結合させたことを特徴
    とする止血剤。
JP59242472A 1984-11-19 1984-11-19 コラ−ゲン又はゼラチンとプロタミンとよりなる止血剤 Granted JPS61122222A (ja)

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DE8585114439T DE3573214D1 (en) 1984-11-19 1985-11-13 A hemostatic agent composed of collagen/gelatin and protamine
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