JPH04290819A

JPH04290819A - コラゲナーゼ活性阻害剤

Info

Publication number: JPH04290819A
Application number: JP3076710A
Authority: JP
Inventors: Shintaro Inoue; 紳太郎井上; Hideko Ota; 太田　英子; Mikio Tonomura; 幹雄外村; Masao Maeda; 前田　政雄; Keiji Iguchi; 井口　圭二
Original assignee: Kanebo Ltd
Current assignee: Kanebo Ltd
Priority date: 1991-03-15
Filing date: 1991-03-15
Publication date: 1992-10-15
Anticipated expiration: 2012-06-25
Also published as: JP2623489B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、コラゲナーゼ活性阻害
剤に係り、更に詳細には、特に、ガム，洗口剤，歯磨等
の口腔用組成物に好適なコラゲナーゼ活性阻害剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】歯周病は、歯周組織における種々の病態
を含む炎症性疾患の総称であるが、一般に炎症が歯肉部
分に限定される歯肉炎と、歯槽骨に達して慢性化する歯
周炎とに大別される。歯周炎は歯槽膿漏とよばれていた
が、慢性化に伴い歯肉及び歯槽骨の破壊をきたし歯の脱
落にいたる。歯を失う原因の５０％が歯周病であり、中
高年にかけては約８０％の人が罹患している。

【０００３】歯周病の原因として、歯周ポケットのプラ
ーク中の特定の細菌群、中でも黒色色素産生性のバクテ
ロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）菌群病原説が有力
視されている（例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉ
ｎｉｃａｌ　Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ、１３巻、
９１２　頁、１９８６年参照）。その歯周組織破壊作用
としては、細菌由来の直接作用因子（酵素やエンドトキ
シン等）や間接作用因子（宿主の免疫応答を介するもの
）が関与していると考えられているが、何れにせよ結果
的に歯肉および歯槽骨のコラーゲンが分解・吸収される
点は共通である（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　
ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ　、９２巻、５０９　頁、１
９７８年参照）。

【０００４】歯周病に関わるコラーゲン分解酵素（コラ
ゲナーゼ）としては、バクテロイデス由来のものと歯肉
の線維芽細胞由来のものが注目されている。前者は最近
部分精製された、金属とチオールを同時に要求する珍し
い酵素であるが、まだ不明な点が多い（Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆ　Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　
、２３巻、２５８　頁、１９８８年参照）。

【０００５】一方、線維芽細胞由来の間質型コラゲナー
ゼ（以下断りの無い限りコラゲナーゼと呼ぶ）は詳細に
解明され、１次構造も明らかにされている（Ｔｈｅ　Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ、２６１　巻、６６００頁、１９８６年参照）
　。

【０００６】コラゲナーゼは、結合組織中の間質型コラ
ーゲン（Ｉ型、ＩＩ型、およびＩＩＩ型コラーゲン）を
分解する際の律速酵素であり、コラーゲンの代謝に重要
な役割を果たしている。炎症の存在する歯肉ではコラゲ
ナーゼ活性が上昇すること（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｐｅ
ｒｉｏｄｏｎｔａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１６巻、４１
７　頁、１９８１年参照）、またコラーゲンが歯肉炎の
初期の段階から減少していること（Ａｒｃｈｉｅｖｅｓ
　ｏｆ　Ｏｒａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ、１８巻、８９９　
頁、１９７３年参照）を考慮すると、歯肉のコラゲナー
ゼが歯周病の進行に深く関わっていると考えられる。

【０００７】従来、歯周病の予防や治療には、スケーリ
ングやルートプレーニングによる歯周ポケット内のプラ
ークや歯石の除去、歯周ポケットの除去（歯肉切除）等
が用いられていた。

【０００８】また、最近薬物療法として抗菌剤ミノサイ
クリンを配合した治療剤が開発された。ミノサイクリン
には、抗菌活性のみならずバクテロイデスおよび好中球
由来コラゲナーゼをイン・ビトロで阻害する活性を有す
ることが報告されている（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈ
ｅ　Ｊａｐａｎｅｓｅ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｏｆ
　Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ　、３０巻、１８２　
頁、１９８８年参照）。

【０００９】上記公知の方法は、医師の指示に従った物
理的、外科的、あるいは薬剤による治療に基づくもので
ある。しかし、歯周病は日常的で罹患率の高い疾病であ
り、また、医師による治療に至るまでに病状が悪化し易
いことを考慮すると、ガム、飴、飲料のような食品や、
歯磨剤、洗口剤のような口腔素材に、前記の病因を除去
し歯周病の予防や治療に役立つ安全性の高い食品由来素
材を利用することが望まれる。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的と
するところは、歯周病の予防・治療効果が期待でき、し
かも安全性の高い、コラゲナーゼ活性阻害剤を提供する
にある。

【００１１】

【課題を解決するための手段】上述の目的は、一般式（
Ｉ）

【化３】（式中Ｘは、水素，塩の残基，又は炭素数１〜４のアル
キル基を表す。）で示される化合物であるコラゲナーゼ
活性阻害剤，及び、一般式（Ｉ）

【化４】（式中Ｘは、水素，塩の残基，又は炭素数１〜４のアル
キル基を表す。）で示される化合物（Ａ）と、アスコル
ビン酸又はエリソルビン酸又はこれらの塩（Ｂ）とを含
むコラゲナーゼ活性阻害剤によって達成される。

【００１２】本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物の
うち、没食子酸は、例えば、粉砕した五倍子に温水を加
え、タンニン分解菌によって分解し、これを水に溶かし
て、ろ液を精製する等、公知の方法から適宜の方法を選
択して製造できる。又、没食子酸は、アルカリ金属，ア
ンモニア，アミン等との塩の形で用いることもできる。

【００１３】本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物の
うち、没食子酸アルキルエステルは、上記の没食子酸を
常法によりエステル化することによって製造することが
できる。

【００１４】エステル化に用いられるアルキル基として
は、メチル，エチル，プロピル，ブチル等の直鎖状の他
、イソブチル等の分岐鎖状のものも使用できる。炭素数
が５以上のアルキル基では、目的とするコラゲナーゼ阻
害活性が得られない。

【００１５】本発明に於いて、上記一般式（Ｉ）で表さ
れる化合物（Ａ）は、併用してもよい。

【００１６】一般式（Ｉ）で表される没食子酸（塩）又
は没食子酸アルキルエステルの、適用組成物中における
含有量は、適用対象物により異なり、一概には規定でき
ないが、対象組成物全体を１００重量％として、０．０
００１〜２．０重量％程度が好ましく、更に好ましくは
０．００１〜１．０重量％である。但し、後述するアス
コルビン酸又はエリソルビン酸と併用する際には、０．
００００１〜２．０重量％が好ましく、更に好ましくは
０．０００３〜０．５重量％である。

【００１７】本発明で用いるアスコルビン酸，エリソル
ビン酸，及びこれらの塩（Ｂ）は、公知の化合物であり
、その製造方法は、特に限定されるものではなく、通常
用いられている方法でよい。

【００１８】本発明に於いては、上記（Ｂ）は併用して
もよい。

【００１９】アスコルビン酸，エリソルビン酸，又はこ
れらの塩の、適用組成物中における含有量は、適用対象
物により異なり、一概には規定できないが、対象組成物
全体を１００重量％として、０．００１〜５．０重量％
程度が好ましく、更に好ましくは０．０１〜１．０重量
％である。

【００２０】本発明のコラゲナーゼ活性阻害剤には、そ
の種類に応じて通常使用される公知の成分を任意に配合
することができる。

【００２１】本発明のコラゲナーゼ活性阻害剤を適用す
る対象は、液剤、固形剤、半固形剤のいずれであっても
よく、好ましい組成物として歯磨剤、洗口剤、チューイ
ンガム、トローチ剤、塗布液剤等の口腔用組成物，或い
は飴類，飲料等の食品等が挙げられる。

【００２２】これらの組成物を製造するのに使用される
賦形剤または補助剤は、通常同目的に使用されるものか
ら剤形に応じて適宜選択すればよく、特に限定されるも
のではないが、例えば乳糖、ステアリン酸マグネシウム
、ソルビット、マンニット、カルボキシメチルセルロー
ス、ハイドロキシプロピルセルロース、ハイドロキシプ
ロピルメチルセルロース、サッカリン、ラウリル硫酸ナ
トリウム、ラウロイルサルコシンナトリウム、グリセリ
ン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、
カラギナン、アラビアゴム、エタノール、メントール、
脂肪酸、クエン酸、無水ケイ酸、第二リン酸カルシウム
、ハイドロキシアパタイト、炭酸カルシウム、二酸化チ
タン等が使用される。

【００２３】更に、通常食品に用いられる甘味料、着色
料、香料、保存料などを適宜使用することもできるし、
歯周病原因菌の増殖を抑制するビャクダン、カッシャ、
シンナモン、グアヤック、パチュリ等精油成分（特願平
−１２６３３１号公報）、クロルヘキシジンなどの殺菌
剤、アンピシリンなどの抗生物質を配合し、歯周病の予
防や改善効果を高めることもできる。

【００２４】

【発明の効果】本発明のコラゲナーゼ活性阻害剤は、没
食子酸または没食子酸アルキルエステルを含有している
為に、歯周病における歯肉および歯槽骨のコラーゲン吸
収の原因であるコラゲナーゼに対し優れた阻害活性を有
し、歯周病の予防および治療に有用で、且つ配合量の多
少に関わらず使用上の安全性も極めて高いものである。

【００２５】

【実施例】（試験例−１）　　没食子酸および没食子酸
アルキルエステルのヒトコラゲナーゼ阻害作用

【００２
６】１．　試験薬没食子酸（富士化学工業（株）製、天然物食品用）没食
子酸メチル（和光純薬工業（株）製）没食子酸エチル（
和光純薬工業（株）製）没食子酸ｎ−プロピル（和光純
薬工業（株）製）没食子酸ｎ−ブチル（東京化成工業（
株）製）没食子酸イソブチル（東京化成工業（株）製）

【００２７】２．　コラゲナーゼコラゲナーゼとしては、ヒト線維肉腫細胞由来の足場非
依存性細胞に、無血清無蛋白質培地中で産生させたヒト
プロコラゲナーゼを、ＣＭセファロースＴＭ（ファルマ
シア社製）および亜鉛キレーティングセファロースＴＭ
（ファルマシア社製）により精製して緩衝液に溶解し、
これに活性化剤としてトリプシン（シグマ社製、Ｔｙｐ
ｅ１２）を添加して、３５℃にて５分間インキュベート
した後、ダイズトリプシン・インヒビター（メルク社製
）を添加してトリプシンを失活させたものを用いた（特
願平１−２３８９４１号公報参照）。

【００２８】３．　コラゲナーゼ阻害活性の測定コラゲ
ナーゼに対する没食子酸または没食子酸アルキルエステ
ルの阻害活性の測定は、以下の通り行う。先ず、試験薬
をジメチルスルホキシドにて溶解して８重量％溶液を得
、ついで測定用緩衝液〔０．２Ｍ食塩、５ｍＭ　塩化カ
ルシウム、０．０５容量％Ｂｒｉｊ−３５（ＩＣＩ社製
ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル）、およ
び０．０２容量％アジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭ
トリス塩酸緩衝液、ｐＨ７．５　〕にて２００〜２００
００倍希釈する。

【００２９】各希釈液と、既知量（０．７　単位；　な
お１単位は、３５℃で１分間に１μｇのＩ型コラーゲン
を分解する酵素量を示す）の上記コラゲナーゼ溶液とを
等量混合し、フルオレッセインイソチオシアネートで標
識されたＩ型コラーゲン（コスモバイオ社製）を基質と
して、永井らの方法（Ｊａｐａｎｅｓｅ　　Ｊｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｆ　Ｉｎｆｌａｍａｔｉｏｎ、４巻、１２３　
頁、１９８４年参照）に準じコラゲナーゼ活性を測定す
ることにより、阻害曲線を求め、それより５０％阻害す
るに必要な試験薬量をＩＣ５０値として読み取った。

【００３０】４．　試験結果表１に結果を示す。全ての試験薬に用量依存的なコラゲ
ナーゼ阻害活性がみられ、そのＩＣ５０値は１．７０か
ら２．７０μｇ／ｍｌであった。

【００３１】

【表１】

【００３２】（比較例）没食子酸イソアミル、ブチルヒ
ドロキシアニソールおよびブチルヒドロキシトルエンの
コラゲナーゼ阻害

【００３３】１．　試験薬没食子酸イソアミル（東京化成工業（株）製）ブチルヒ
ドロキシアニソール（和光純薬工業（株）製）ブチルヒ
ドロキシトルエン（和光純薬工業（株）製）

【００３４
】２．　コラゲナーゼ試験例−１に同じ。

【００３５】３．　コラゲナーゼ阻害活性の測定試験例
−１に同じ。

【００３６】４．　試験結果いずれの試験薬も終濃度０．１ｍｇ／ｍｌ　で全くコラ
ゲナーゼを阻害しなかった。

【００３７】（試験例−２）　　アスコルビン酸または
エリソルビン酸のヒトコラゲナーゼ阻害作用

【００３８
】１．　試験薬Ｌ（＋）−アスコルビン酸（関東化学（株）製）エリソ
ルビン酸ナトリウム（和光純薬工業（株）製）

【００３
９】２．　コラゲナーゼ試験例−１に同じ。

【００４０】３．　コラゲナーゼ阻害活性の測定試験薬
を直接測定用緩衝液に溶解する他は試験例−１に同じ。

【００４１】４．　試験結果表２に結果を示す。両試験薬に用量依存的なコラゲナー
ゼ阻害活性がみられたが、没食子酸および没食子酸アル
キルエステルのＩＣ５０値に比して高値を示し、活性は
劣っていた。

【００４２】

【表２】　　　　─────────────────────
────　　　　　　　　　　　　試験薬　　　　　　
　　　　　　　　コラゲナーゼ阻害活性　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
（ＩＣ５０、μｇ／ｍｌ）　　　　─────────
────────────────　　　　　　Ｌ（＋
）−アスコルビン酸　　　　　　　　４４．０　　　　
　　エリソルビン酸ナトリウム　　　　　　　　６１．
０　　　　────────────────────
─────

【００４３】（試験例−３）　　没食子酸お
よび没食子酸アルキルエステルのヒトコラゲナーゼ阻害
作用に対する、アスコルビン酸およびエリソルビン酸の
増強効果。１．　試験薬試験例−１および２に同じ。

【００４４】２．　コラゲナーゼ試験例−１に同じ。

【００４５】３．　コラゲナーゼ阻害活性の測定アスコ
ルビン酸およびエリソルビン酸の効果を見るために、終
濃度０．０１％のアスコルビン酸またはエリソルビン酸
の存在下で、没食子酸および没食子酸アルキルエステル
のコラゲナーゼ阻害活性（ＩＣ５０値）を調べた。なお、アスコルビン酸およびエリソルビン酸にコラゲナ
ーゼ阻害活性があるので、用いた精製コラゲナーゼ量は
試験例−１の約２倍量（１．２単位）を用いた。

【００４６】４．　試験結果表３に結果を示す。アスコルビン酸およびエリソルビン
酸の存在下では、没食子酸および没食子酸アルキルエス
テルのコラゲナーゼ阻害のＩＣ５０値の低下（阻害活性
の増加）が見られた。

【００４７】

【表３】 ─────────────────────────
─────────　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　コラゲナーゼ阻害活性（ＩＣ５０、μｇ／
ｍｌ）　　　　　　試験薬　　　　　　───────
──────────────────　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　単独　　　　＋アスコ
ルビン酸　　　　＋エリソルビン酸─────────
─────────────────────────
　　没食子酸　　　　　　　　　　１．６０　　　　　
　　　０．５４　　　　　　　　　　　　０．５８　　
没食子酸メチル　　　　１．８０　　　　　　　　０．
５７　　　　　　　　　　　　０．５６　　没食子酸エ
チル　　　　１．８０　　　　　　　　０．５２　　　
　　　　　　　　　０．５８────────────
──────────────────────

【００
４８】以下に実施例を挙げる。

【００４９】実施例１（練歯磨き）

【００５０】常法に従って製造する。即ち、水、グリセ
リン、カラギナン、サッカリン、パラオキシ安息香酸ブ
チル、クロルヘキシジンジグルコネート、香料、没食子
酸メチル、エリソルビン酸ナトリウムの処方量を計量し
、混合して粘結剤を膨潤させたのち、第２リン酸カルシ
ウム、ラウリル硫酸ナトリウムを加え、更によく混合、
脱泡したのちチューブに充填して練歯磨き剤を得る。

【００５１】実施例２（練歯磨き）没食子酸メチルの代わりに没食子酸ｎ−プロピルを用い
、その添加量が１．０重量％である以外は実施例４と同
様にして練歯磨き剤を得る。

【００５２】実施例３（トローチ剤）常法に従い上記処方のトローチ剤を製造する。

【００５３】実施例４（洗口剤）常法に従い上記処方の洗口剤を製造する。

【００５４】実施例５（洗口剤）没食子酸イソブチルの代わりに没食子酸プロピルを０．
５重量％とし、更にエリソルビン酸ナトリウムを０．５
重量％配合する以外は実施例７と同様にして洗口剤を得
た。

【００５５】実施例６　　（チューインガム）

【００５
６】４０℃に保温した全量のチューインガムベースおよ
び全量の水飴をニーダーに投入して１０分間混練し粉糖
の１／３　量および全量のブドウ糖を投入して５分間、
次いで粉糖の１／３　量を投入して５分間混練した。次
に、没食子酸を残りの１／３　量の粉糖に混合してから
投入し５分間混練してガムミックスを得た。

【００５７】実施例７　　（チューインガム）

【００５
８】実施例８（ヌガー）

【００５９】■を混合し泡立てる。■は１３０℃まで煮
詰める。■に■を少しづつ加え、更に泡立てる。これに
、■を加え混合しながら９０℃まで冷却後、■を加えて
良く混合したのち冷却盤上に広げ成型してヌガーを得た
。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式（Ｉ）【化１】（式中Ｘは、水素，塩の残基，又は炭素数１〜４のアル
キル基を表す。）で示される化合物であるコラゲナーゼ
活性阻害剤
【請求項２】一般式（Ｉ）【化２】（式中Ｘは、水素，塩の残基，又は炭素数１〜４のアル
キル基を表す。）で示される化合物（Ａ）と、アスコル
ビン酸又はエリソルビン酸又はこれらの塩（Ｂ）とを含
むコラゲナーゼ活性阻害剤