JPH04208836A - Reaction container kit - Google Patents
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Abstract
Description
［０００１１ [00011
【産業上の利用分野］この発明は、凝集反応を行なうた
めの反応容器キットに係り、特には免疫学的抗原抗体反
応を利用した血液分析に用いられる反応容器キットに関
する。
［０００２］
【従来の技術】従来、免疫学的な凝集反応を利用した検
出法に用いられる反応容器としては、例えば米国特許第
４、３０３．６１６号公報に記載されたものを挙げるこ
とができる。これらの反応容器は、一般に、マイクロプ
レートと総称されている。
［０００３］このような反応容器を用いる検出法として
は、免疫学的な凝集反応に基づいてサンプル中に存在す
る抗原または抗体を検出する方法である粒子凝集法が知
られている。この方法においては、被測定物質と特異的
に結合する抗体または抗原が表面に固定化されている特
定のマーカー粒子が用いられる。例えば、血液中のウィ
ルスを検出する場合には、ウィルスに対する抗体を固定
化した人工粒子がマーカー粒子として用いられる。この
方法は、上記反応容器を用いて以下の通りに行われる。
すなわち、反応容器内において上記マーカー粒子をサン
プルに混合し、サンプル中に含まれる抗原または抗体と
の間で免疫反応を行なわせ、反応容器の所定の壁面（例
えば底面）に集める。このようにして容器壁面に集めら
れたマーカー粒子は、サンプル中の被測定物質との間で
免疫反応が生じた場合と生じなかった場合とで分布パタ
ーンが異なる。したがって、容器壁面に集められたマー
カー粒子の分布パターンから、陽性または陰性の判定を
行なうことが可能となる。
［０００４］ これとは別の方法としては、Ａ、 Ｓ、
ｗｉｅｎｅｒおよびＭ、Ｈ，Ｈｅｒｍａｎによって、
混合凝集法が報告されている。この方法はその後次第に
改良され、血液型の判定が可能になるまでに確立されて
いる。例えば、血液型の判定は、上記反応容器を用いて
次のようにして行なう。まず、一定濃度の赤血球および
一定希釈率の血清を、それぞれ適量づつ反応容器内で混
ぜ合わせる。次いで、一定時間静置する。前述の方法と
同じように、赤血球が有する抗原と血清中の抗体との間
で免疫反応が生じた場合と生じなかった場合とでは、沈
殿した赤血球の分布パターンが異なる。したがって、沈
殿した赤血球の分布パターンから、陽性または陰性の判
定を行なうことが可能となる。
［０００５］これらの方法によって得られた血球の分布
パターンは肉眼で容易に判定することができるが、特開
昭５４−７８４９９号公報に記載されている方法を用い
て自動的に判定することも可能である。また、実公昭６
１−３９３２１号公報には、光学的に平坦な焦点面上に
粒子の凝集パターンを形成させ、凝集像の観察を容易に
する方法が開示されている。
［０００６］Ｌかしながら、米国特許第４．３０３．６
１６号公報に記載の反応容器は、安定でかつ正確な分布
パターンを形成させるために少なくとも５０μｍ程度の
液量を必要とする。液量が５０ＬＬｌより少ない場合に
は、液面が表面張力によって不規則に盛り上がり、分布
パターンが正確に形成されない。このため、この反応容
器においては、反応液の深さが３ｍｍ以上となる。これ
は、分布パターンの形成時間が長くなる原因となってい
る。すなわち、沈殿して分布パターンを形成する赤血球
等の粒子の移動距離が長くなり、その結果、分布パター
ン形成までの時間が長くなる。
［０００７］液量を少なくすると分布パターンが正確に
形成されないという上記の問題は、反応容器の内径を小
さくすることにより多少改善することが可能である。し
かし、その場合には反応溶液と反応容器壁面との間に表
面張力が働き、やはり液面が不規則に窪んだり、盛り上
がったりする。その結果、形成された分布パターンを正
確に測定することが困難になる。
［０００８］また、容器の内径を小さくすると液量が少
なくなり分布パターンの形成時間は短縮されるが、微量
の試薬を扱わなければならないという問題が生じる。特
に、液量が５μｍ以下である場合には、試薬の分注を再
現性よく正確に行なうことが技術的に非常に困難になる
。さらに、内径の小さな容器、例えば直径数百ミクロン
程度の窪みを精度良く作成するためには極めて微細な表
面加工が必要となり、効率よく作成することが困難にな
る。
［０００９］一方、実公昭６１−３９３２１号公報に記
載の方法は、反応容器への粒子浮遊液の注入にローリン
グポンプを用いるフロ一方式の測定法である。しかしな
がら、このようなフロ一方式の測定法では同時に測定で
きる検体または項目の数が限られるので、従来用いられ
ているマイクロプレートのように、多数の検体を多項目
にわたって同時に処理することは不可能である。また、
ローリングポンプを用いた分注は誤差が大きく、μｍの
オーダーの微散試料の分析には適していない。
［００１０１[Industrial Field of Application] The present invention relates to a reaction container kit for performing an agglutination reaction, and more particularly to a reaction container kit used for blood analysis using immunological antigen-antibody reactions. [0002] [0002] Conventionally, as a reaction container used in a detection method using an immunological agglutination reaction, for example, one described in US Pat. No. 4,303,616 can be mentioned. . These reaction containers are generally collectively referred to as microplates. [0003] As a detection method using such a reaction container, a particle agglutination method is known, which is a method of detecting an antigen or antibody present in a sample based on an immunological agglutination reaction. This method uses specific marker particles on the surface of which antibodies or antigens that specifically bind to the substance to be measured are immobilized. For example, when detecting a virus in blood, artificial particles on which antibodies against the virus are immobilized are used as marker particles. This method is carried out as follows using the reaction vessel described above. That is, the marker particles are mixed with a sample in a reaction container, causing an immune reaction with the antigen or antibody contained in the sample, and collected on a predetermined wall surface (for example, the bottom surface) of the reaction container. The marker particles thus collected on the container wall surface have different distribution patterns depending on whether or not an immune reaction has occurred with the analyte in the sample. Therefore, it is possible to determine whether the sample is positive or negative based on the distribution pattern of the marker particles collected on the wall of the container. [0004] Another method is A, S,
wiener and M.H. Herman.
A mixed flocculation method has been reported. This method has since been gradually improved and has become established to the point where it is possible to determine blood type. For example, blood type determination is performed using the reaction container described above as follows. First, appropriate amounts of red blood cells at a certain concentration and serum at a certain dilution rate are mixed together in a reaction container. Then, it is left to stand for a certain period of time. As in the above-described method, the distribution pattern of precipitated red blood cells differs depending on whether or not an immune reaction occurs between the antigen possessed by red blood cells and antibodies in serum. Therefore, it is possible to determine whether the sample is positive or negative based on the distribution pattern of the precipitated red blood cells. [0005] The distribution pattern of blood cells obtained by these methods can be easily determined with the naked eye, but it can also be determined automatically using the method described in JP-A-54-78499. It is possible. Also, Jikosho 6
Japanese Patent No. 1-39321 discloses a method for forming an agglomerated pattern of particles on an optically flat focal plane to facilitate observation of an agglomerated image. [0006] U.S. Patent No. 4.303.6
The reaction vessel described in Publication No. 16 requires a liquid volume of at least about 50 μm in order to form a stable and accurate distribution pattern. If the liquid amount is less than 50LLl, the liquid level will rise irregularly due to surface tension, and a distribution pattern will not be formed accurately. Therefore, in this reaction vessel, the depth of the reaction liquid is 3 mm or more. This causes the time required to form the distribution pattern to become longer. That is, the movement distance of particles such as red blood cells that precipitate to form a distribution pattern becomes longer, and as a result, the time until the distribution pattern is formed becomes longer. [0007] The above-mentioned problem that a distribution pattern cannot be formed accurately when the liquid amount is reduced can be somewhat improved by reducing the inner diameter of the reaction vessel. However, in that case, surface tension acts between the reaction solution and the wall surface of the reaction container, and the liquid level also irregularly dips or rises. As a result, it becomes difficult to accurately measure the formed distribution pattern. [0008] Furthermore, if the inner diameter of the container is made smaller, the amount of liquid decreases and the time required to form a distribution pattern is shortened, but a problem arises in that a minute amount of reagent must be handled. In particular, when the liquid volume is 5 μm or less, it becomes technically very difficult to accurately dispense the reagent with good reproducibility. Furthermore, in order to accurately create a container with a small inner diameter, for example, a recess with a diameter of several hundred microns, extremely fine surface processing is required, making it difficult to create the container efficiently. [0009] On the other hand, the method described in Japanese Utility Model Publication No. 61-39321 is a one-flow measurement method in which a rolling pump is used to inject a particle suspension into a reaction vessel. However, with this type of flow-type measurement method, the number of samples or items that can be measured simultaneously is limited, so it is impossible to process a large number of samples and multiple items at the same time, unlike conventionally used microplates. It is. Also,
Dispensing using a rolling pump has large errors and is not suitable for analyzing finely divided samples on the order of μm. [00101
【発明が解決しようとする課題］この発明は、凝集反応
の有無を判定するための反応容器キットであって、微量
の試料を扱うことが可能であり、反応の有無の判定が短
時間でかつ高感度に得ることができ、および得られた分
布パターンを正確に測定することが可能な反応容器キッ
トを提供することを目的とする。
［００１１１
【課題を解決するための手段］上記目的は、毛管現象に
よってサンプルを吸引し得る断面積を有する反応部と該
反応部の少なくとも一部に設けられた平坦な表面を有す
る透明板とを具備する反応容器、および該反応容器を所
定の角度だけ傾斜させるための反応容器載置台とを具備
するキットによって達成される。前記反応部は、一般に
、２枚の平坦な表面を有する透明板と、この２枚の透明
板の間に所定の間隔を開けて挿入された２個のスペーサ
ーとによって形成された間隙である。
［００１２］前記反応容器載置台は、反応容器を所定の
角度に傾斜させてその角度を保持するものである。反応
容器は、傾斜させたときに、スペーサーを挿入した側面
のいずれか一方が下になるように、この載置台に置かれ
る。
［００１３］
【作用】この発明による反応容器では、サンプルの注入
は毛管現象によって行なわれる。すなわち、サンプルは
反応部の開口部から毛管現象によって反応容器内に導入
される。
［００１４］上述のように、この発明の反応容器キット
においては、反応容器の反応部は少なくとも一方が透明
な２枚の板およびこれら板を微小の距離に保持するスペ
ーサーによって周囲を囲まれている。加えて、反応時に
は、サンプルはこの反応部に充填されている。したがっ
て、反応部におけるサンプルの液面は常に反応部の内壁
に接しており、液面が平坦に保たれる。このため、粒子
の分布パターンが乱れることがない。また、反応部の断
面積は、毛管現象によってサンプルを反応部に導入する
ことができるようなものであり、非常に小さいものであ
る。このため、沈殿する粒子の移動距離が大幅に短くな
り、分布パターンの形成を短時間で行うことができる。
また、サンプルの注入は毛管現象を利用して行うので、
例えば、サンプルを反応部の開口部に滴下するだけでよ
い。この場合、滴下する液量に関係なく、反応部におけ
るサンプルの液量は常に一定である。このため、正確な
微量分注を特に必要とはしない。
［００１５］
ｒ実施例】以下、この発明による反応容器キットの態様
を図面を参照してより詳細に説明する。
［００１６］第１図（Ａ）はこの発明による反応容器キ
ットの斜視図、第１図（Ｂ）は第１図（Ａ）に示す反応
容器のＸ１方向からの平面図、第１図（Ｃ）は第１図（
Ｂ）に示す反応容器の断面を示す図である。これらの図
に示されるよう（−このキットの反応容器においては、
各々透明な部材からなる下板２と上板４とが２個のスペ
ーサー３を介してはほぼ平行に配置されている。下板２
．上板４および２個のスペーサーで囲まれた部分５は、
凝集反応が行なわれる反応部であり、かつサンプルを導
入するサンプル導入路でもある。スペーサー３が挿入さ
れていない２つの側面はサンプル導入口１２であり、こ
こからサンプルの注入もしくは吸引を行う。反応容器載
置台１には、水平面に対して所定の角度を有する傾斜面
が設けられている。前記反応容器は、この反応容器載置
台の傾斜面に載置される。
［００１７］このキットの反応容器においては、スペー
サー３の厚さ、すなわち下板２と上板４との距離は０．
０５−１．０ｍｍ、２個のスペーサー２の間隔は０．１
−１．０ｍｍが好ましい。また、反応部５の長手方向の
長さ、すなわち上板４の幅は３−ＬｏＭであることが好
ましい。さらに、このキットの反応容器載置台１に設け
られた傾斜面は、水平面に対して１０−６０°の勾配を
有することが好ましい。
［００１８］この反応容器は、凝集反応の有無を確認す
る試験に使用することができる。例えば、血球と血清中
の抗体との反応の有無を確認する試験にこの反応容器を
使用する場合には１次のように行なう。
［００１９］まず、一定濃度の血球浮遊液と一定希釈率
の血清を試験管中で混合する。次に、その混合液をピペ
ット等で採取し、反応容器のサンプル導入口１２に適量
を滴下する。滴下された混合液は、毛管現象によって反
応部５全体に広がる。このまま反応容器を一定時間静置
すると血球が沈殿する。しかしながら、反応容器が傾斜
しているので、沈殿した血球は下板２上に堆積すること
なく傾斜した下板２に沿って下方に転がり落ちる。この
ときに反応部の下方に形成される血球の分布パターンに
より、反応の有無を確認することができる。すなわち、
抗原抗体反応によって血球が凝集した場合には、第２図
（Ａ）に示すように、傾斜した下板２の上方まで血球が
一様に広がって沈殿した陽性パターン１０を形成する。
逆に、反応が起こらずに血球が凝集しなかった場合には
、全ての血球が傾斜した下板１を滑り落ちるために、第
２図（Ｂ）に示すように、容器最下端に血球が線状に集
積した陰性パターン９を形成する。[Problems to be Solved by the Invention] The present invention is a reaction container kit for determining the presence or absence of an agglutination reaction, which is capable of handling a minute amount of sample, and capable of determining the presence or absence of a reaction in a short time. It is an object of the present invention to provide a reaction container kit that can be obtained with high sensitivity and that can accurately measure the obtained distribution pattern. [00111] [Means for Solving the Problem] The above object is to provide a reaction section having a cross-sectional area capable of sucking a sample by capillary action, and a transparent plate having a flat surface provided in at least a part of the reaction section. This is achieved by a kit that includes a reaction container and a reaction container mounting table for tilting the reaction container at a predetermined angle. The reaction area is generally a gap formed by two transparent plates having flat surfaces and two spacers inserted at a predetermined distance between the two transparent plates. [0012] The reaction container mounting table is for tilting the reaction container at a predetermined angle and maintaining the angle. The reaction container is placed on this mounting table so that when it is tilted, one of the sides into which the spacer is inserted is facing down. [0013] In the reaction vessel according to the present invention, sample injection is performed by capillary action. That is, the sample is introduced into the reaction container through the opening of the reaction section by capillary action. [0014] As described above, in the reaction container kit of the present invention, the reaction part of the reaction container is surrounded by two plates, at least one of which is transparent, and a spacer that holds these plates at a small distance. . In addition, during the reaction, the sample is filled in this reaction section. Therefore, the liquid level of the sample in the reaction part is always in contact with the inner wall of the reaction part, and the liquid level is kept flat. Therefore, the particle distribution pattern is not disturbed. Further, the cross-sectional area of the reaction section is such that the sample can be introduced into the reaction section by capillary action, and is very small. Therefore, the moving distance of the precipitated particles is significantly shortened, and a distribution pattern can be formed in a short time. In addition, since the sample is injected using capillary action,
For example, it is sufficient to simply drop the sample into the opening of the reaction section. In this case, the amount of sample liquid in the reaction section is always constant regardless of the amount of liquid dropped. Therefore, accurate micro-dispensing is not particularly required. [0015] Examples [0015] Hereinafter, embodiments of the reaction container kit according to the present invention will be explained in more detail with reference to the drawings. [0016] FIG. 1(A) is a perspective view of a reaction container kit according to the present invention, FIG. 1(B) is a plan view of the reaction container shown in FIG. 1(A) from the X1 direction, and FIG. ) is shown in Figure 1 (
It is a figure which shows the cross section of the reaction container shown in B). As shown in these figures (- In the reaction vessel of this kit,
A lower plate 2 and an upper plate 4, each made of a transparent member, are arranged substantially parallel to each other with two spacers 3 in between. Lower plate 2
．． The portion 5 surrounded by the upper plate 4 and two spacers is
It is a reaction part where an agglutination reaction is carried out, and also a sample introduction path through which a sample is introduced. The two sides in which the spacer 3 is not inserted are sample introduction ports 12 through which the sample is injected or aspirated. The reaction container mounting table 1 is provided with an inclined surface having a predetermined angle with respect to a horizontal surface. The reaction container is placed on the inclined surface of this reaction container mounting table. [0017] In the reaction container of this kit, the thickness of the spacer 3, that is, the distance between the lower plate 2 and the upper plate 4, is 0.
05-1.0mm, the distance between the two spacers 2 is 0.1
-1.0 mm is preferred. Further, it is preferable that the length of the reaction section 5 in the longitudinal direction, that is, the width of the upper plate 4 is 3-LoM. Further, it is preferable that the inclined surface provided on the reaction container mounting table 1 of this kit has an inclination of 10 to 60 degrees with respect to the horizontal surface. [0018] This reaction vessel can be used for a test to confirm the presence or absence of an agglutination reaction. For example, when this reaction container is used in a test to confirm the presence or absence of a reaction between blood cells and antibodies in serum, the reaction container is carried out as follows. [0019] First, a blood cell suspension at a constant concentration and serum at a constant dilution are mixed in a test tube. Next, the mixed solution is collected with a pipette or the like, and an appropriate amount is dropped into the sample introduction port 12 of the reaction container. The dropped mixed liquid spreads throughout the reaction section 5 by capillary action. If the reaction container is left undisturbed for a certain period of time, blood cells will precipitate. However, since the reaction container is inclined, the precipitated blood cells do not accumulate on the lower plate 2 but roll down along the inclined lower plate 2. At this time, the presence or absence of a reaction can be confirmed by the distribution pattern of blood cells formed below the reaction area. That is,
When the blood cells aggregate due to the antigen-antibody reaction, the blood cells uniformly spread to the upper side of the inclined lower plate 2 to form a precipitated positive pattern 10, as shown in FIG. 2(A). On the other hand, if no reaction occurs and the blood cells do not agglutinate, all the blood cells slide down the inclined lower plate 1, resulting in a line of blood cells at the bottom of the container, as shown in Figure 2 (B). A negative pattern 9 is formed.
【００２０】第１図（Ａ）ないし第１図（Ｃ）に示され
たキットの反応容器においては、スペーサー３は矩形の
ものが用いられている。しかしながら、スペーサーの形
状は矩形に限られるものではなく、第３図ないし第４図
に示されるスペーサー６または７のような形状のものを
用いることもできる。このような形状のスペーサーを用
いることにより、サンプル導入口を広くすることができ
、サンプルの分注が容易になる。
［００２１１この発明の反応容器キットにおいては、反
応容器と反応容器載置台を一体に成型することも可能で
ある。そのような一体型反応容器第５図（Ａ）および第
５図（Ｂ）に示す。これらの図に示されるように、一体
型反応容器８の傾斜面には、サンプルを毛管現象で吸引
することが可能な断面積を有する管状の反応部５が設け
られ、さらにこの反応部５の両端に凹状の液だより９が
設けられている。
［００２２］一体型反応容器は、棒状に成型することも
可能である。第６図（Ａ）ないし第６図（Ｃ）に示す角
柱型の棒状反応容器２７には、水平面に対して所定の角
度を有する貫通孔である反応部３２、およびこの反応部
３２に連通ずる空洞部２９が設けられている。反応部３
２は、サンプルを毛管現象によって吸引し得る断面積を
有している。凝集反応の試験にこの棒状反応容器２７を
使用する場合には、次のように行なう。まず、この棒状
反応容器２７の端部３０を予め調製した粒子浮遊液につ
ける。このとき、サンプル導入口２８から、毛管現象に
よって、粒子浮遊液が反応部３２に導入される。浮遊液
を反応部に導入した後、反応容器２７を浮遊液から取り
出し、水平に静置して１０分間反応させる。反応後、上
記方法と同様に、反応部３２に形成された粒子の分布パ
ターンを測定することにより、凝集反応の有無を測定す
ることができる。この棒状反応容器２７では、反応部３
２が空洞部２９に連通し、空洞部２９が開口部３１を通
して外界に通じているので、反応部３２に不必要な圧力
がかかることはない。また、開口部３１から陽圧をかけ
ることにより、サンプルや洗浄液を強制的に吸引するこ
とが可能である。反応部３２の洗浄は、開口部３１から
洗浄液を導入することによっても行なうことができ、ま
た開口部３１に陽圧をかけるだけでも行うことが可能で
ある。
［００２３］上述した種々の形状の反応部の開口部の断
面断は、毛細管現象（ｃａｐｉｌｌａｒｙ ａｃｔｉｏ
ｎ）によってサンプルを反応容器内部に吸引し得るもの
である。この断面積は、測定しようとするサンプルによ
って異なるが、サンプルが血液成分である場合には、０
．２〜５ｍｍ２であることが好ましい。以下、この発明
による反応容器キットを用いた凝集試験を説明する。
［００２４］実験例１
ヒトＡＢＯ型血液型の判定
第１図（Ａ）ないし第１図（Ｃ）に示す反応容器キット
を用いたヒトＡＢＯ型血液型の判定方法を第８図を用い
て説明する。
［００２５］まず、採血した血液を遠心等の方法で、血
球成分１５と血清成分１４とに分離する。この血清成分
１４は、血液がヘパリン等の抗凝固剤で処理されている
場合には血漿である。次に、２μｌの沈殿した血球成分
１５と、１８μｌの予め調製した溶液１７とを試験管１
９に入れて混合し、前反応させる。ここで、溶液１７は
、標準抗Ａ血清（オルソ社製）を生理食塩水で１／３０
に希釈した抗Ａ血清希釈液である。前反応させた後、５
μｍの血球浮遊液１８を、分注器２０で反応容器２１の
反応部５に分注する。
下板２と上板４との間隔が８０μｍ、２個のスペーサー
３の間隔が５００μｍ、および反応部５の長手方向の長
さが２５０μｍの反応容器を用い、反応容器載置台の傾
斜角が４５°である場合には、１０分程度で全てのヒト
赤血球が反応部の下部に沈殿する。したがって、血球浮
遊液１８の分注の後、反応容器を３６℃のインキュベー
ター中に約１０分間静置する。
［００２６］反応容器の上板と下板との距離および２個
のスペーサーの間隔は、粒子の沈殿に要する時間と密接
な関係がある。すなわち、粒子の沈殿を短時間で終了さ
せるためには両者とも短いことが好ましい。しかしなが
ら、２個のスペーサーの間隔を短くしすぎると、粒子の
分布パターンが形成される部分が少なくなるために測定
の誤差が大きくなる。また、反応部の長手方向の長さは
、微量のサンプルが反応中に乾燥しないような充分な長
さをとることが必要であり、しかも毛管現象でサンプル
が反応郡全体に充分に行き渡る長さであることが必要で
ある。
［００２７］反応が終了した後、反応容器２１を測定部
に移す。この測定部は、光源２３、および血球分布パタ
ーンを拡大観察するための顕微鏡光学系２５を具備し、
さらに拡大された反応部内の血球の分布を撮像する受光
素子２６を有することもできる。抗原抗体反応の有無の
判別は、反応容器２１の反応部５を光学系２５で拡大し
、分布パターンを肉眼で観察することによって行なう。
また、肉眼で観察する代わりに、受光素子２６によって
得られた画像をコンピューターで解析し、抗原抗体反応
の有無を判別することも可能である。
［００２８］測定された血球の分布が第２図（Ａ）に示
されるようなパターンを現わす場合には、サンプルの血
球表面にＡ型抗原が存在し、血球同士が抗Ａ抗体によっ
て凝集していることを示している。また、血球の分布が
第２図（Ｂ）に示されるようなパターンを現わす場合に
は、サンプルの血球表面にはＡ型抗原が存在せず、血球
が反応容器の傾斜面を自由に転がっていったことを示し
ている。
［００２９］同様にして、サンプルの抗Ｂ血清に対する
反応性を測定することができる。測定された抗Ａ血清お
よび抗Ｂ血清に対する反応性から、サンプルの血液型を
判定することができる。すなわち、抗Ａおよび抗Ｂ血清
の両者に対してサンプル中の血球が抗原抗体反応を示し
た場合には、サンプルの血液型はＡＢ型であり、抗Ａ血
清のみに対して反応した場合にはＡ型、抗Ｂ血清のみに
対して反応した場合にはＢ型、そしてどちらの抗血清に
対しても反応しない場合にはＯ型である。従来６０分を
要していた血液型の判定が、この発明による反応容器キ
ットを用いることにより、約１０分で行なうことが可能
となった。
［００３０１実験例２
ＨＩＶに対する抗体検査
第１図（Ａ）ないし第１図（Ｃ）に示す反応容器キット
を用いたＨＩＶに対する抗体検査を、第８図を参照して
説明する。
［００３１１まず、採血した血液を遠心等の方法で血球
成分１５と血清成分１４とに分離する。血液がヘパリン
等の抗凝固剤によって処理されている場合には、血清成
分１４は血漿である。分離後の上清である血清成分１４
の２μｍと予め調製された溶液１７の２５μｍとを試験
管１９に入れて混合し、前反応させる。ここで、溶液１
７は、感作粒子を生理食塩水で１．０％（Ｖ／Ｖ）に希
釈したものであり、この感作粒子の表面にはＨＩＶ抗原
と同一のアミノ酸配列を有する有機的に合成したペプチ
ドが固定化されている。この感作粒子としては、ポリス
チレンやゼラチンを化学修飾した人工粒子、動物の赤血
球をグルタルアルデヒドなどで固定したもの等を使用す
ることができる。また、この粒子の感作させるための抗
原として、不活性化したウィルスや、遺伝子操作を利用
することにより大腸菌などによって生成された組換えタ
ンパクを用いることもできる。前反応を終えた感作粒子
浮遊液５μｌを、分注器２０を用いて反応容器２１の反
応部５に分注し、２５〜３７℃で１０分間インキュベー
トする。
［００３２］反応が終了した後、実験例１と同様の方法
で、反応容器２１の反応部５に沈殿した粒子の分布パタ
ーンを観察する。測定された粒子の分布が第２図（Ａ）
に示されるようなパターンを現わす場合には、ＨＩＶに
対する抗体がサンプルの血清中に存在し、粒子同士が抗
ＨＩＶ抗体によって凝集していることを示している。ま
た、粒子の分布が第２図（Ｂ）に示されるようなパター
ンを現わす場合には、感作粒子の表面抗原に反応する抗
体がサンプル中に存在していないことを示している。
［００３３１粒子に固定化する抗原の種類を変えること
により、ＨＴＬＶ−１，ＨＢ、淋病のようなＨＩＶ以外
のウィルスや細菌に対する抗体検査を行なうことができ
る。また、抗体を感作した粒子を用いることにより、Ｈ
Ｂｓ、薬物、癌マーカー等に対する抗原検査を行なうこ
とができる。さらに、異なる複数の色の粒子にそれぞれ
異なる抗体または抗原を結合させ、受光素子２６に例え
ばカラーＣＣＤカメラを使用する場合には、−度に複数
の抗体検査あるいは抗原検査を行うことが可能である。
［００３４］この発明の反応容器キットを用いることに
より、従来の１／６の時間で、高い感度に判定を行なう
ことができる。また、高価な粒子試薬の使用量も従来よ
り少なくて済む。
［００３５］実験例３
抗体を予め固定化した反応容器を用いたＡＢＯ型の表検
査
まず、第１図（Ａ ）ないし第１図（Ｃ）に示した反応
容器キットの反応部５に、以下に記載の方法に従って血
球表面のＡ型抗原に対する抗血清を固定化する。
［００３６］初めに、標準抗Ａ血清（オルソ社製）を、
０．１５ＭのＮａＣｌを含む１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣ
Ｉ緩衝液、ｐＨ９で１／１０に希釈する。この希釈液５
μｌを、反応容器の下板２の反応部５に滴下する。滴下
した後、希釈液が乾燥しないように加湿状態を保ちなが
ら３７℃で１時間インキュベートする。次いで、０．１
５ＭのＮａＣｌを含有する１０Ｉｎ！Ｔｉリン酸緩衝液
、ｐＨ７，２を滴下することにより、反応部５を洗浄す
る。軽く下板２を振ることによって洗浄液を除去した後
、３％（Ｗ／Ｖ）ウシ血清アルミブンおよび０．１５Ｍ
のＮａＣｌを含有する１０ｍ１の１０ｍＭリン酸緩衝液
、ｐＨ７，２を反応部５に滴下し、加湿状態にして室温
で１時間インキュベートする。この操作によって、反応
部において非特異的に血球を吸着する部分がブロックさ
れる。インキュベート終了後、０．１５ＭのＮａＣｌを
含有する１０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７，２を用いて反
応部５を洗浄する。反応容器を長期にわたって保存する
場合には、最後の洗浄液に０．０２％（Ｗ／ ｖ） Ｎ
ａＮ３を添加して使用し、洗浄後には４℃で保存する。
下板２だけではなく上板４も血球の非特異的な結合が生
じないように処理をする。すなわち、３％（ｗ／Ｖ）ウ
シ血清アルミブンおよび０．１５ＭのＮａＣｌを含有す
る１０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７，２に室温で１時間漬
けた後、０．１５ＭのＮａＣｌを含む１０ｍＭリン酸緩
衝液、ｐＨ７，２で洗浄する。反応容器を長期間保存す
る場合には、下板の場合と同様に、最後の洗浄液に０．
０２％（Ｗ／ ｖ） ＮａＮ３を添加し、４℃で保存す
る。これらの下板２および上板４に加えて２個のスペー
サー３を用いて反応容器を組み立て、両面テープや接着
剤で固定する。
［００３７１次に、この抗血清を固定化した反応容器キ
ットを用いたＡＢＯ型の表検査を第８図を参照して説明
する。なお、ここで用いるキットは、スペーサーの厚さ
が８０μｍ、２個のスペーサーの間隔が０．５ｍｍおよ
び反応部の長手方向の長さが５ｍｍである反応容器と傾
斜角が４５°の反応容器載置台とからなるキットである
。
［００３８］採血した血液を遠心等の方法で血球成分１
５と血清成分１４とに分離する。このとき、血液がヘパ
リン等の抗凝固剤によって処理されている場合には、血
清成分１４は血漿である。次に、沈殿した２μｍの血球
成分１５と９８μｍの溶液１７とを試験管１９内で混合
し、２％血球浮遊液１８を調製する。ここで、溶液１７
は生理食塩水である。この血球浮遊液１８を、上述のよ
うに抗Ａ血清を固定化した反応容器２１の反応部５に、
分注器２０を用いて注入する。分注後、反応容器を反応
容器載置台１の傾斜面に載置し、反応容器に振動を与え
ないようにして、３６℃程度で１０分間インキュベート
する。サンプルの分注は、反応容器２１を予め反応容器
載置台１に載置した状態で行なうこともできる。
［００３９］反応が終了した後、実験例１と同様の方法
で、反応容器１９の反応部５に沈殿した粒子の分布パタ
ーンを観察する。サンプルの血球表面にＡ型抗原が存在
する場合には、血球と反応容器に固定化された抗Ａ血清
とが結合し、血球が反応部５のほぼ全体に一様に分布す
る。したがって、この場合の血球の分布は第７図（Ａ）
に示されるようなパターンを現わす。また、サンプルの
血球表面にはＡ型抗原が存在しない場合には、血球が反
応容器に固定化された抗Ａ血清と結合しないので、血球
が傾斜した反応容器２１の下板２上を自由に転がってい
く。したがって、この場合の血球の分布は第７図（Ｂ）
に示されるようなパターンを現わす。このように、反応
後の血球の分布パターンの違いから、サンプルの血球表
面のＡ型抗原の有無を判定することができる。同様にし
て、サンプルの抗Ｂ血清に対する反応性を測定すること
により血球表面のＢ型抗原の有無を判定することができ
る。
［００４０１測定された抗Ａ血清および抗Ｂ血清に対す
る反応性から、サンプルの血液型を判定することができ
る。すなわち、抗Ａおよび抗Ｂ血清の両者に対してサン
プル中の血球が抗原抗体反応を示した場合には、サンプ
ルの血液型はＡＢ型であり、抗Ａ血清のみに対して反応
した場合にはＡ型、抗Ｂ血清のみに対して反応した場合
にはＢ型、そしてどちらの抗血清に対しても反応しない
場合には０型である。
［００４１１従来６０分を要していた血液型の判定が、
この発明による反応容器を用いることにより、約１０分
で行なうことが可能となった。
［００４２１実験例４
抗原を予め固定化した反応容器を用いた、ＨＩＶに対す
る抗体検査
実験例３における抗血清の代わりに、種々の抗原を反応
容器に固定化することによって各種の抗体検査を行なう
ことができる。そのような方法による、ＨＩＶに対する
抗体検査方法を、第９図を参照して説明する。
［００４３１まず、実験例３と同様の方法で、反応容器
の反応部５にＨＩＶ抗原を固定化する。反応容器に固定
化するＨＩＶ抗原としては、化学的に合成されたＨＩＶ
ウィルスの表面抗原、大腸菌によって生産されたＨＩＶ
の組換えタンパク質、ＨＩＶウィルスそのものなどを使
用することができる。
［００４４１次に、採血した血液を遠心等の方法で血球
成分１５と血清成分１４とに分離する。このとき、血液
がヘパリン等の抗凝固剤で処理されている場合には、血
清成分１４は血漿である。得られた血清成分１４を試験
管１９に２μｍ採取し、さらに生理食塩水１８７ｘｌを
添加して混合する。この血清希釈液２７の５μｍを、Ｈ
ＩＶ抗原を固定化した反応容器２１に、分注器３４を用
いて分注する。分注後、反応容器を３７℃で２分間イン
キュベートする。反応後、ノズル３５を用いて、洗浄用
の生理食塩水を反応容器２１の反応部５に送り込み、同
時に反対側からノズル３６で廃液を吸引する。これによ
り、反応部５を洗浄し、反応容器２１に固定化された抗
原と反応しなかった血清成分を洗い流すことができる。
反応部５に残存する洗浄液は、ろ紙を用いて拭い取った
り、ノズルから空気を吹付けて除去することが好ましい
。
［００４５１次いで、ヤギ抗ヒト抗体を固定化した粒子
試薬３３を、ノズル３７を用いて反応容器に分注し、３
７℃で１０分間インキュベートする。ここで用いる抗ヒ
ト抗体としては、マウス等が産生じたモノクローナル抗
体を用いることもでき、さらにプロティンＡ等の抗体に
結合する性質を有する物質を用いることもできる。また
、抗体を固定化する粒子には、グルタルアルデヒド等に
よって固定された赤血球やポリスチレン等の人工粒子を
用いることができる。
［００４６］反応が終了した後、実験例１と同様の方法
で、粒子の分布パターンを観察する。ＨＩＶに対する抗
体がサンプルの血清中に存在する場合には、この抗体が
反応容器に固定化されたＨＩＶ抗原に結合し、さらに、
表面に抗ヒト抗体が固定化された粒子が抗原に結合した
抗体に結合する、したがって、この場合の粒子の分布は
、第７図（Ａ）に示されるようなパターンを現わす。
また、サンプルの血清中にＨＩＶに対する抗体が存在し
ない場合には、粒子は反応を起こすことなく傾斜した反
応容器の下板上を自由に転がっていく。したがって、こ
の場合の粒子の分布は第７図（Ｂ）に示されるようなパ
ターンを現わす。
［００４７］この反応容器キットを用いることにより、
従来要した６０−１２０分を大幅に短縮した時間で、高
感度の検査を行なうことができる。反応容器に固定化す
る抗原の種類を変えることにより、ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴ
ＬＶＩＩのようなＨＩＶ以外のウィルスや細菌に対する
抗体の検出も可能になる。また、一般に、抗体は２ない
し１０個の抗原結合部位を有している。したがって、反
応容器に固定化した抗原と同じ抗原を固定化した粒子も
、粒子試薬３１として使用することができる。さらに、
反応容器と粒子の両者に抗体を固定化することにより、
従来サンドイツチ法として知られる抗原検査を行なうこ
とも可能である。
［００４８１
【発明の効果］本発明によれば、微量のサンプルを毛管
現象により反応部へ導入するから、反応部におけるサン
プル液量は常に一定である。したがって、再現性良く高
感度に凝集試験を行うことができる。In the reaction containers of the kits shown in FIGS. 1(A) to 1(C), a rectangular spacer 3 is used. However, the shape of the spacer is not limited to a rectangular shape, and spacers 6 or 7 shown in FIGS. 3 and 4 may also be used. By using a spacer having such a shape, the sample introduction port can be made wider, making it easier to dispense the sample. [00211] In the reaction container kit of the present invention, it is also possible to integrally mold the reaction container and the reaction container mounting base. Such an integrated reaction vessel is shown in FIGS. 5(A) and 5(B). As shown in these figures, a tubular reaction section 5 having a cross-sectional area capable of suctioning the sample by capillary action is provided on the inclined surface of the integrated reaction container 8. Concave liquid newsletters 9 are provided at both ends. [0022] The integrated reaction vessel can also be molded into a rod shape. The prismatic rod-shaped reaction vessel 27 shown in FIGS. 6(A) to 6(C) has a reaction section 32 which is a through hole having a predetermined angle with respect to the horizontal plane, and a reaction section 32 that communicates with the reaction section 32. A cavity 29 is provided. Reaction part 3
2 has a cross-sectional area that allows the sample to be aspirated by capillary action. When this rod-shaped reaction vessel 27 is used for an agglutination reaction test, the procedure is as follows. First, the end portion 30 of this rod-shaped reaction vessel 27 is immersed in a particle suspension liquid prepared in advance. At this time, the particle suspension liquid is introduced into the reaction section 32 from the sample introduction port 28 by capillary action. After introducing the floating liquid into the reaction section, the reaction container 27 is taken out from the floating liquid, left horizontally, and reacted for 10 minutes. After the reaction, the presence or absence of an aggregation reaction can be determined by measuring the distribution pattern of the particles formed in the reaction section 32, similarly to the above method. In this rod-shaped reaction vessel 27, the reaction section 3
2 communicates with the cavity 29, and the cavity 29 communicates with the outside world through the opening 31, so that unnecessary pressure is not applied to the reaction section 32. Furthermore, by applying positive pressure from the opening 31, it is possible to forcibly aspirate the sample or cleaning liquid. The reaction section 32 can be cleaned by introducing a cleaning liquid through the opening 31, or by simply applying positive pressure to the opening 31. [0023] The cross-sections of the openings of the various shapes of reaction sections described above are based on capillary action.
n) allows the sample to be drawn into the reaction vessel. This cross-sectional area varies depending on the sample to be measured, but when the sample is a blood component, it is 0.
．． It is preferably 2 to 5 mm2. Hereinafter, an agglutination test using the reaction container kit according to the present invention will be explained. [0024] Experimental Example 1 Determination of human ABO blood type A method for determining human ABO blood type using the reaction container kit shown in Figures 1 (A) to 1 (C) will be explained using Figure 8. do. [0025] First, collected blood is separated into blood cell components 15 and serum components 14 by a method such as centrifugation. This serum component 14 is plasma if the blood has been treated with an anticoagulant such as heparin. Next, 2 μl of the precipitated blood cell component 15 and 18 μl of the previously prepared solution 17 were added to a test tube.
9 and mix to pre-react. Here, solution 17 was prepared by adding standard anti-A serum (manufactured by Ortho) to 1/30 in physiological saline.
This is a diluted anti-A serum solution. After pre-reaction, 5
A blood cell suspension 18 of μm size is dispensed into the reaction section 5 of the reaction container 21 using a dispenser 20. A reaction vessel was used in which the interval between the lower plate 2 and the upper plate 4 was 80 μm, the interval between the two spacers 3 was 500 μm, and the longitudinal length of the reaction section 5 was 250 μm, and the inclination angle of the reaction vessel mounting table was 45 μm. °, all human red blood cells will precipitate at the bottom of the reaction area in about 10 minutes. Therefore, after dispensing the blood cell suspension 18, the reaction container is left in an incubator at 36° C. for about 10 minutes. [0026] The distance between the upper plate and the lower plate of the reaction vessel and the distance between the two spacers are closely related to the time required for particle precipitation. That is, in order to complete the precipitation of particles in a short time, it is preferable that both of them be short. However, if the distance between the two spacers is too short, the area where the particle distribution pattern is formed will decrease, resulting in a large measurement error. In addition, the length of the reaction part in the longitudinal direction must be long enough to prevent a small amount of sample from drying out during the reaction, and must be long enough to allow the sample to spread throughout the reaction area by capillary action. It is necessary that [0027] After the reaction is completed, the reaction container 21 is transferred to the measurement section. This measurement unit includes a light source 23 and a microscope optical system 25 for magnifying observation of the blood cell distribution pattern,
It is also possible to include a light receiving element 26 that captures an image of the distribution of blood cells within the enlarged reaction area. The presence or absence of an antigen-antibody reaction is determined by enlarging the reaction area 5 of the reaction container 21 with the optical system 25 and observing the distribution pattern with the naked eye. Further, instead of observing with the naked eye, it is also possible to analyze the image obtained by the light receiving element 26 with a computer to determine the presence or absence of an antigen-antibody reaction. [0028] If the distribution of the measured blood cells shows a pattern as shown in Figure 2 (A), type A antigen is present on the surface of the blood cells of the sample, and the blood cells are agglutinated by anti-A antibodies. It shows that In addition, if the distribution of blood cells shows a pattern as shown in Figure 2 (B), there is no type A antigen on the surface of the blood cells of the sample, and the blood cells are freely rolling on the inclined surface of the reaction vessel. It shows that. [0029] In a similar manner, the reactivity of a sample to anti-B serum can be determined. The blood type of the sample can be determined from the measured reactivity to anti-A serum and anti-B serum. In other words, if the blood cells in the sample show an antigen-antibody reaction to both anti-A and anti-B serum, the blood type of the sample is AB type, and if it reacts only to anti-A serum, the blood type of the sample is type AB. Type A, if it reacts only to anti-B serum, it is type B, and if it does not react to either antiserum, it is type O. Blood type determination, which conventionally took 60 minutes, can now be done in about 10 minutes by using the reaction container kit of the present invention. [00301 Experimental Example 2 Antibody test for HIV An antibody test for HIV using the reaction container kit shown in FIGS. 1(A) to 1(C) will be explained with reference to FIG. [00311] First, collected blood is separated into blood cell components 15 and serum components 14 by a method such as centrifugation. Serum component 14 is plasma if the blood has been treated with an anticoagulant such as heparin. Serum component 14, which is the supernatant after separation
2 μm of the solution 17 prepared in advance and 25 μm of the solution 17 prepared in advance are mixed in a test tube 19 and pre-reacted. Here, solution 1
No. 7 is a sensitized particle diluted to 1.0% (V/V) with physiological saline, and the surface of the sensitized particle is coated with an organically synthesized peptide having the same amino acid sequence as the HIV antigen. is fixed. As the sensitizing particles, artificial particles obtained by chemically modifying polystyrene or gelatin, animal red blood cells fixed with glutaraldehyde, etc. can be used. Furthermore, as an antigen for sensitizing these particles, an inactivated virus or a recombinant protein produced by Escherichia coli or the like using genetic manipulation can also be used. After the pre-reaction, 5 μl of the sensitized particle suspension is dispensed into the reaction section 5 of the reaction container 21 using the dispenser 20, and incubated at 25 to 37° C. for 10 minutes. [0032] After the reaction is completed, the distribution pattern of the particles precipitated in the reaction section 5 of the reaction vessel 21 is observed in the same manner as in Experimental Example 1. The distribution of the measured particles is shown in Figure 2 (A).
When a pattern like that shown in Figure 12 appears, it indicates that antibodies against HIV are present in the serum of the sample and that the particles are agglutinated with each other by the anti-HIV antibodies. Further, when the distribution of particles exhibits a pattern as shown in FIG. 2(B), this indicates that antibodies that react with the surface antigen of the sensitized particles are not present in the sample. [00331 By changing the type of antigen immobilized on the particles, it is possible to perform antibody tests against viruses and bacteria other than HIV, such as HTLV-1, HB, and gonorrhea. In addition, by using particles sensitized with antibodies, H
Antigen tests for Bs, drugs, cancer markers, etc. can be performed. Furthermore, if different antibodies or antigens are bound to particles of different colors and a color CCD camera is used as the light receiving element 26, it is possible to perform multiple antibody tests or antigen tests at the same time. . [0034] By using the reaction container kit of the present invention, determination can be performed with high sensitivity in 1/6 of the time required by conventional methods. Furthermore, the amount of expensive particle reagents used can be reduced compared to conventional techniques. [0035] Experimental Example 3 ABO type table test using a reaction container in which antibodies have been immobilized in advance First, the following was added to the reaction section 5 of the reaction container kit shown in FIGS. 1(A) to 1(C). Antiserum against type A antigen on the surface of blood cells is immobilized according to the method described in . [0036] First, standard anti-A serum (manufactured by Ortho),
10mM Tris-HC containing 0.15M NaCl
Dilute 1/10 with I buffer, pH 9. This diluted solution 5
μl is dropped onto the reaction section 5 of the lower plate 2 of the reaction container. After dropping, the diluted solution is incubated at 37° C. for 1 hour while maintaining a humidified state to prevent it from drying out. Then 0.1
10In! containing 5M NaCl! The reaction section 5 is washed by dropping Ti phosphate buffer, pH 7.2. After removing the washing solution by gently shaking the lower plate 2, add 3% (w/v) bovine serum aluminum and 0.15M
10 ml of 10 mM phosphate buffer, pH 7.2, containing NaCl was added dropwise to the reaction area 5, and the mixture was kept in a humidified state and incubated at room temperature for 1 hour. This operation blocks the part of the reaction part that nonspecifically adsorbs blood cells. After the incubation, the reaction section 5 is washed with 10 mM phosphate buffer containing 0.15 M NaCl, pH 7.2. When storing the reaction vessel for a long period of time, add 0.02% (W/v) N to the final washing solution.
Use with addition of aN3 and store at 4°C after washing. Not only the lower plate 2 but also the upper plate 4 is treated to prevent non-specific binding of blood cells. That is, after soaking for 1 hour at room temperature in 10 mM phosphate buffer, pH 7.2, containing 3% (w/v) bovine serum aluminum and 0.15 M NaCl, 10 mM phosphate buffer containing 0.15 M NaCl was added. Wash with solution, pH 7.2. When storing the reaction vessel for a long period of time, add 0.0% to the final cleaning solution as in the case of the lower plate.
Add 0.2% (w/v) NaN3 and store at 4°C. In addition to these lower plate 2 and upper plate 4, a reaction vessel is assembled using two spacers 3 and fixed with double-sided tape or adhesive. [00371] Next, a table test for ABO type using the reaction container kit immobilized with this antiserum will be explained with reference to FIG. The kit used here is a reaction vessel with a spacer thickness of 80 μm, an interval between two spacers of 0.5 mm, and a length of the reaction part in the longitudinal direction of 5 mm, and a reaction vessel with an inclination angle of 45°. It is a kit consisting of a stand. [0038] Blood cell component 1 is extracted from the collected blood by a method such as centrifugation.
5 and serum component 14. At this time, if the blood has been treated with an anticoagulant such as heparin, the serum component 14 is plasma. Next, the precipitated 2 μm blood cell component 15 and the 98 μm solution 17 are mixed in a test tube 19 to prepare a 2% blood cell suspension 18. Here, solution 17
is saline. This blood cell suspension 18 is transferred to the reaction section 5 of the reaction container 21 in which anti-A serum is immobilized as described above.
Inject using the dispenser 20. After dispensing, the reaction container is placed on the inclined surface of the reaction container mounting table 1, and incubated at about 36° C. for 10 minutes without applying vibration to the reaction container. The sample can also be dispensed with the reaction container 21 placed on the reaction container mounting table 1 in advance. [0039] After the reaction is completed, the distribution pattern of the particles precipitated in the reaction section 5 of the reaction vessel 19 is observed in the same manner as in Experimental Example 1. When type A antigen is present on the surface of the blood cells of the sample, the blood cells and the anti-A serum immobilized on the reaction container bind, and the blood cells are uniformly distributed almost throughout the reaction area 5. Therefore, the distribution of blood cells in this case is shown in Figure 7 (A).
A pattern like the one shown appears. In addition, if there is no type A antigen on the surface of the blood cells of the sample, the blood cells will not bind to the anti-A serum immobilized on the reaction container, so the blood cells will freely move on the lower plate 2 of the inclined reaction container 21. Rolling away. Therefore, the distribution of blood cells in this case is shown in Figure 7 (B).
A pattern like the one shown appears. In this way, the presence or absence of type A antigen on the surface of the blood cells of the sample can be determined from the difference in the distribution pattern of the blood cells after the reaction. Similarly, the presence or absence of type B antigen on the surface of blood cells can be determined by measuring the reactivity of the sample to anti-B serum. [00401 The blood type of the sample can be determined from the measured reactivity to anti-A serum and anti-B serum. In other words, if the blood cells in the sample show an antigen-antibody reaction to both anti-A and anti-B serum, the blood type of the sample is AB type, and if it reacts only to anti-A serum, the blood type of the sample is type AB. Type A, if it reacts only to anti-B serum, it is type B, and if it does not react to either antiserum, it is type 0. [00411 Blood type determination, which previously took 60 minutes,
By using the reaction vessel according to the present invention, it has become possible to carry out the reaction in about 10 minutes. [00421 Experimental Example 4 Antibody test for HIV using a reaction container on which antigens have been immobilized in advance Instead of the antiserum in Experimental Example 3, various antibody tests are performed by immobilizing various antigens on the reaction container. I can do it. A method for testing antibodies against HIV using such a method will be explained with reference to FIG. 9. [00431] First, in the same manner as in Experimental Example 3, an HIV antigen is immobilized on the reaction part 5 of the reaction container. As the HIV antigen to be immobilized in the reaction container, chemically synthesized HIV
Surface antigen of the virus, HIV produced by E. coli
recombinant proteins, the HIV virus itself, etc. can be used. [00441] Next, the collected blood is separated into blood cell components 15 and serum components 14 by a method such as centrifugation. At this time, if the blood has been treated with an anticoagulant such as heparin, the serum component 14 is plasma. 2 μm of the obtained serum component 14 is collected into a test tube 19, and 187xl of physiological saline is added and mixed. 5 μm of this serum dilution solution 27 was
The IV antigen is dispensed using the dispenser 34 into the reaction container 21 in which the IV antigen is immobilized. After dispensing, the reaction vessel is incubated at 37°C for 2 minutes. After the reaction, the nozzle 35 is used to send physiological saline for cleaning into the reaction section 5 of the reaction container 21, and at the same time, the nozzle 36 sucks the waste liquid from the opposite side. Thereby, the reaction section 5 can be washed and serum components that have not reacted with the antigen immobilized on the reaction container 21 can be washed away. The cleaning liquid remaining in the reaction section 5 is preferably removed by wiping it with a filter paper or by blowing air from a nozzle. [00451 Next, the particle reagent 33 on which the goat anti-human antibody is immobilized is dispensed into the reaction container using the nozzle 37.
Incubate for 10 minutes at 7°C. As the anti-human antibody used here, monoclonal antibodies produced in mice and the like can be used, and furthermore, substances such as protein A that have the property of binding to antibodies can also be used. Further, as particles for immobilizing antibodies, red blood cells fixed with glutaraldehyde or the like or artificial particles such as polystyrene can be used. [0046] After the reaction is completed, the distribution pattern of particles is observed in the same manner as in Experimental Example 1. If antibodies against HIV are present in the serum of the sample, this antibody binds to the HIV antigen immobilized on the reaction vessel, and
Particles having anti-human antibodies immobilized on their surfaces bind to antibodies bound to antigens. Therefore, the distribution of particles in this case exhibits a pattern as shown in FIG. 7(A). Furthermore, if there is no antibody against HIV in the serum sample, the particles will freely roll on the lower plate of the inclined reaction vessel without causing any reaction. Therefore, the particle distribution in this case exhibits a pattern as shown in FIG. 7(B). [0047] By using this reaction container kit,
High-sensitivity testing can be performed in a time significantly shortened from the 60-120 minutes conventionally required. By changing the type of antigen immobilized on the reaction vessel, HTLV-I, HT
It also becomes possible to detect antibodies against viruses and bacteria other than HIV, such as LVII. Additionally, antibodies generally have 2 to 10 antigen-binding sites. Therefore, particles on which the same antigen as that immobilized on the reaction container is immobilized can also be used as the particle reagent 31. moreover,
By immobilizing antibodies on both the reaction vessel and particles,
It is also possible to perform an antigen test, conventionally known as the Sanderutsch method. [00481] Effects of the Invention According to the present invention, a minute amount of sample is introduced into the reaction section by capillary action, so the amount of sample liquid in the reaction section is always constant. Therefore, an agglutination test can be performed with high reproducibility and high sensitivity.
【図１】第１図（Ａ）は、この発明の反応容器キットの
一実施態様を示す斜視図、第１図（Ｂ）は、第１図（Ａ
）に示したキットにおける反応容器のＸ１方向から見た
平面図、第１図（Ｃ）は、第１図（Ｂ）に示した反応容
器の断面を示す図、FIG. 1 (A) is a perspective view showing one embodiment of the reaction container kit of the present invention, and FIG. 1 (B) is a perspective view showing one embodiment of the reaction container kit of the present invention.
) is a plan view of the reaction container in the kit shown in FIG. 1(C) as seen from the X1 direction;
【図２】第２図（Ａ）は、第１図に示した反応容器キッ
トを用いた凝集試験において、凝集反応があった場合の
沈殿粒子の分布パターンを示す図、第２図（Ｂ）は、第
１図に示した反応容器キットを用いた凝集試験において
、凝集反応が無かった場合の沈殿粒子の分布パターンを
示す図、[Fig. 2] Fig. 2 (A) is a diagram showing the distribution pattern of precipitated particles when an agglutination reaction occurs in the agglutination test using the reaction container kit shown in Fig. 1; Fig. 2 (B) 1 is a diagram showing the distribution pattern of precipitated particles when there is no agglutination reaction in the agglutination test using the reaction container kit shown in FIG.
【図３】第３図（Ａ）は、スペーサーの形状が異なる変
形例を示す斜視図、第３図（Ｂ）は、第３図（Ａ）に示
すキットにおける反応容器の平面図、FIG. 3(A) is a perspective view showing a modified example in which the shape of the spacer is different; FIG. 3(B) is a plan view of the reaction container in the kit shown in FIG. 3(A);
【図４】第４図（Ａ）は、スペーサーの形状が異なる他
の変形例を示す斜視図、第４図（Ｂ）は、第４図（Ａ）
に示すキットにおける反応容器の平面図、FIG. 4(A) is a perspective view showing another modification example in which the shape of the spacer is different, and FIG. 4(B) is the same as FIG. 4(A).
A plan view of the reaction vessel in the kit shown in
【図５】第５
図（Ａ）は、反応容器と反応容器載置台とを一体に形成
した変形例を示す斜視図、第５図（Ｂ）は、第５図（Ａ
）に示すキットの平面図、[Figure 5] Fifth
FIG. 5(A) is a perspective view showing a modified example in which the reaction container and the reaction container mounting table are integrally formed, and FIG.
), the plan view of the kit shown in
【図６】第６図（Ａ）は、反
応容器と反応容器載置台とを一体に形成した別の変形例
を示す斜視図、第６図（Ｂ）は、第６図（Ａ）に示すキ
ットのＹ２方向から見た平面図、第６図（Ｃ）は、第６
図（Ａ）に示すキットのＸ２方向から見た平面図、FIG. 6(A) is a perspective view showing another modified example in which the reaction container and the reaction container mounting table are integrally formed, and FIG. 6(B) is the same as shown in FIG. 6(A). Figure 6 (C) is a plan view of the kit seen from the Y2 direction.
A plan view of the kit shown in Figure (A) seen from the X2 direction,
【図７】第７図（Ａ）は、反応部に抗体を固定化した第
１図で示した反応容器キットを用いた凝集試験において
、凝集反応があった場合の沈殿粒子の分布パターンを示
す図、第７図（Ｂ）は、反応部に抗体を固定化した、第
１図で示した反応容器キットを用いた凝集試験において
、凝集反応が無かった場合の沈殿粒子の分布パターンを
示す図、[Figure 7] Figure 7 (A) shows the distribution pattern of precipitated particles when an agglutination reaction occurs in an agglutination test using the reaction container kit shown in Figure 1 with antibodies immobilized on the reaction area. Figure 7 (B) is a diagram showing the distribution pattern of precipitated particles when there was no agglutination reaction in an agglutination test using the reaction container kit shown in Figure 1 with antibodies immobilized on the reaction part. ,
【図８】第８図は、第１図に示す反応容器キットを用い
た凝集試験の工程を示す図、FIG. 8 is a diagram showing the steps of an agglutination test using the reaction container kit shown in FIG.
【図９】第９図は、第１図に示す反応容器キットを用い
た凝集試験の別の工程を示す図である。FIG. 9 is a diagram showing another step of the agglutination test using the reaction container kit shown in FIG. 1.
１ 反応容器載置台 ２ 下板 ３ スペーサー ４ 上板 ５ 反応部 １２ サンプル導入路 1 Reaction container mounting stand 2 Lower plate 3 Spacer 4 Upper plate 5 Reaction section 12 Sample introduction path
【図３】[Figure 3]
Claims (5)
キットであって、毛管現象によってサンプルを吸引し得
る断面積を有する反応部と該反応部の少なくとも一部に
設けられた平坦な表面を有する透明板とを具備する反応
容器、および該反応容器を所定の角度だけ傾斜させるた
めの反応容器載置台とを具備するキット。1. A reaction container kit for determining the presence or absence of an agglutination reaction, comprising a reaction section having a cross-sectional area capable of sucking a sample by capillary action, and a flat surface provided on at least a portion of the reaction section. A kit comprising: a reaction vessel having a transparent plate having a transparent plate; and a reaction vessel mounting table for tilting the reaction vessel at a predetermined angle.
この２枚の透明板の間に挿入されたスペーサーとによっ
て形成された間隙である請求項１に記載のキット。2. The reaction section includes two opposing transparent plates,
The kit according to claim 1, wherein the gap is formed by a spacer inserted between the two transparent plates.
体に形成されている請求項１に記載のキット。3. The kit according to claim 1, wherein the reaction container and the reaction container mounting table are integrally formed.
有する物質を固定化した請求項１に記載のキット。4. The kit according to claim 1, wherein a substance having specific binding properties is immobilized on at least the bottom surface of the reaction vessel.
る方法であって、特異結合性を有する粒子および特異結
合性を有する物質を含有する粒子浮遊液を調製する工程
と、請求項１に記載のキットの反応容器の反応部に、該
粒子浮遊液を毛管現象により導入する工程と、該反応容
器を、請求項１に記載のキットの反応容器載置台に載置
して所定の時間静置する工程と、該反応容器の株に形成
される粒子の分布パターンの形成過程および拡がりの程
度を測定する工程とを有する方法。5. A method for determining the degree of aggregation of particles due to an agglutination reaction, comprising the steps of preparing a particle suspension containing particles having specific binding properties and a substance having specific binding properties; A step of introducing the particle suspension liquid into the reaction part of the reaction container of the kit according to claim 1 by capillary action, and placing the reaction container on the reaction container mounting table of the kit according to claim 1 and allowing it to stand still for a predetermined period of time. and measuring the formation process and degree of spread of the distribution pattern of particles formed in the strain in the reaction vessel.
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| DE69019326T2 (en) | 1995-11-09 |
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