JPH02218700A - 双特異性抗体及びそれを用いる養子免疫療法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ｕ産業上の利用分野Ｊ 本発明は、抗ヒト腫瘍細胞抗体のＦａｂ’部分及び抗ヒ
トリンパ球抗体のＦａｂ’　部分の双方から構成されて
いることを特徴とする特異性抗体及びそれを用いる養子
免疫療法に係わる。

［従来の技術及び本発明が解決しようとするＷＲ題ｊ近
年腫瘍患者、例えば悪性グリオーマ腫瘍患者に対する免
疫療法として、ヒト　ｒＩＬ−２にて誘導したリンホカ
イン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞を患者患部の腫瘍内に
注入する養子免疫療法が注目されている。しかしながら
、患者より大量のリンパ球を採取し且つ長期培養にてＲ
ｏｓｅｎｂｅｒｇらのいう必要量（１０１０〜１０１１
個）のＬＡＫ細胞を得ることは容易ではない。またＫｉ
ｔａｈａｒａらによると大量のリンパ球注入によって水
頭症が誘発される危険があること、又ＬＡＫ細胞と！！
瘍細胞との親和性が乏しい場合もある等の未解決の問題
も多く残されている。

ところで、一般に二種類の異なる抗原認識能を有する合
成抗体である、いわゆる「双特異性抗体Ｊはこれまでに
様々な方法で製造、されてきている。

それらの方法のいくつかは以下に示す文献に記載されて
いる。

（１）　　　Ｎ１５ｏｎｏＨ，ｅｔ　ａ［、、５ｃｉｅ
ｎｃｅ、Ｖｏｌ、１３４．ｐ３７６−３７９　（１９６
４）。

（２）　　　Ｎ１５ｏｎｏｆｆ、ｅｔ　ａｌ、、　Ａｒ
ｃｈ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、。

Ｖｏｌ、８９．　Ｉ）２３０−２４４　（１９６０）及
びＶｏｌ、９３　　Ｄ４６０−４６２　（１９６０）。

（３）　　　　Ｒａ５ｏ　　ａｎｄ　　ＧＰｉｆｆｉｎ
、　　ａｔ　　ａｌ、、　　Ｆｅｄ、　　Ｐｒｏｃ。

Ｖｏｌ、３７．　ｐ１３５０　（１９７８）（４）　　
Ｈｉｌｓｔｅｉｎ、ｅｔ　ａｌ、、　Ｐｒｏｃ、Ｒ，Ｓ
ｏｃ、Ｌｏｎｄ、　Ｖｏｌ。

８２１１、ｐ　　３９３−４１２　　（１９８１）。

（５）　　特表昭５８−５０２１８２号公報。

（６）　　Ｈｉｌｓｔｅｉｎ　ａｎｄ　Ｃｕｅｌｌｏ、
ｅｔ　ａｌ、、Ｎａｔｕｒｅ、Ｖｏｌ。

３０５、ｐ５３７−５４０　　（１９８３）。

（７）　　米国特許４，４７４，８９３号明ｉｌｌ書（
８）　　特開昭５８−５９９９４号公報（９）　　Ｊ、
Ｒ，Ｆ、Ｃｏｒｖａｌａｎ、ｅｔ　ａｌ、、　Ｃａｎｃ
ｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ。

Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ、２４：　Ｉ）　１３３−１３７
　（１９８７）。

（１０）　　＾、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ、ｅｔ　ａ
ｉ、、Ｅｕｒｏｐ、Ｊ、Ｉｎ＋１ｕｎｏｌ。

Ｖｏｌ、１７．　ｐ　１０５−１１１　（１９８７）。

（１１）特表昭６１−５０１４１８号公報（１２）　　
Ｈ，Ｂｒａｎｎａｎｎ、ｅｔ　ａｔ、、　５ｃｉｅｎｃ
ｅ　Ｖｏｌ、２２９．　ｐ８１−８３　（１９８５）。

更に、最近本発明者等は、還元剤としてジチオスレイト
ール（ＤＴＴ）及びチオール基活性剤として５，５−ジ
チオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）を使用す
る双特異性抗体製造法を開発した。この方法は高収率で
純粋なＦ（ａｂ’）２モノマーが得られる点で以前の製
造方法に較べて優れたものである。

本発明の双特異性抗体もこの方法によって製造すること
が好ましい。

本発明は、双特異性抗体であって、抗ヒト腫瘍細胞抗体
のＦａｂ’部分及び抗ヒトリンパ球抗体のｌ”ａｂ’部
分の双方から構成されるものを末梢血単核細胞に添加す
ることによって、該単核細胞の細胞障害活性が著しく増
強されること、そして、細胞障害活性能が高められたこ
れらのエフェクター細胞が、該双特異性抗体を介して目
的とする腫１ｓｌｌｌ胞とＣｒｏｓｓ−１ｉｎｋされる
ことにより該腫ｆｓ、１ｉｌＩ胞との親和性を向上させ
、主要組織適合抗原系（ＭＨＣ）非拘束的に標的細胞の
溶解をひきおこすことができるという発見に基づいてな
されたものである。

［課題を解決するための手段］ 即ち、本発明は、抗ヒトリンパ球抗体のＦａｂ’部分及
び抗ヒトリンパ球抗体のＦａｂ’部分の双方から構成さ
れることを特徴とする特異性抗体及びそれを用いた養子
免疫療法を提供するものである。

ここで「養子免疫療法」とは、一般に、−度患者生体よ
り採取したリンパ球を、何らかの手段で活性化した後に
再度身体内に移入する治療法を指す。

治療対象としては全ての癌が考えられ、例えば脳腫瘍（
グリオーマ）及び白血病等、を挙げることができる。

本発明の双特異性抗体の作製に用いる抗ヒト腫瘍細胞抗
体の好適具体例として、全てのヒト腫瘍細胞に反応する
モノクローナル抗体）（Ｂ　Ｊ　１２７（マウスＩＱＧ
１．１本嘉幸等、Ｇａｎｎ、　７６、　ｐ３８６−３９
４（１９８５）参照）、肺小細胞癌及びグリオーマに特
異的なモノクローナル抗体ＬＵ−２４６（マウスＩｇ０
１日本化薬■）及びＮＥ１５０（マウス■ｑＧ１、愛知
ガンセンターの上田龍三博士より供与）がある。

これらのモノクローナル抗体は従来の通常方法に従って
、例えば次のようにして製造することができる。

即ち、これらのモノクローナル抗体が認識する抗原（抗
原を単離して用いてもよいが、該抗原を含む癌細胞又は
そのホモジネート等を用いてもよい。）でマウス又はラ
ット等の動物を免−し、免疫された動物から抗体産生細
胞を得、これと前部腫細胞を融合し、得られた融合細胞
をクローン化し、本発明で用いるモノクローナル抗体を
産生ずる融合細胞を選択し、これを培養しその培養上清
より抗体を回収する。免疫法、融合法、融合細胞の選択
等は通常の方法によって行うことかできる。

抗ヒトリンパ球抗体によって感作すべきリンパ球として
は、ＣＤ　３　（Ｃ１ｕｓｔｅｒ　Ｄｅｓｉｇｎａｔｉ
ｏｎ　３）表面抗原を担持する成熟Ｔ細胞及びＣＤ　１
６表面抗原を担持するナチュラル・キラー（ＮＫ）細胞
等がある（　ＲｈｅｉｎｈｅｒｔＺ、　Ｅ、　Ｌ、　、
Ｈａｙｎｅｓ、　Ｂ、　Ｆｌ、　Ｎａｄｌｅｒ　ＬＨ，
ａｎｄ　Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ、１．Ｄ、（ｅｄ、）：Ｌ
ｅｕｋｏｃ　ｔｅ　Ｔ　　ｉｎ　ＩＩ　。

ｓｐｒ＋ｎｇｅｒ−ｖｅｒ＋ａｇ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ
、　（１９８６）参照）。

従って、本発明の双特異性抗体の作製に用いる抗ヒトリ
ンパ球抗体の好適具体例としては、抗ＣＤ３モノクロー
ナル抗体である０ＫＴ３　（マウス■ｇＧ２ａ）及び抗
ＣＤ　１６モノクロ一ナル抗体である３０８（マウスＩ
ｐＧ１）を挙げることができる。

これらモノクローナル抗体は夫々ＡＴＣＣ及びＭｏｕｎ
ｔ　５ｉｎａｉ大学のＪ、Ｃ，Ｌｌｎｋｅｌｅｓｓから
入手したものである。

抗ＣＤ３モノクローナル抗体はＴ細胞表面マーカーであ
るＣＤ３抗原と非共有結合することによって、ＩＬ−２
受容体の発現とともに細胞増殖、細胞障害活性を惹起す
る。また抗ＣＤ１６モノクローナル抗体はＮＫ細胞表面
上の免疫グロブリンＩａＧの受容体（ＦｃγＲ）と非共
有結合することによって抗体依存性細胞障害機構のトリ
ガーとなるものである。

本発明の双特異性抗体は以下のように作製することが好
ましい。

まず、出発材料である各抗体のＦ（ａｂ’）２を公知の
方法によって製造する。

たとえば、各抗体を、その免疫グロブリンの種類に応じ
て、ペプシンまたはパパイン等の蛋白分解醇素を使用し
て分解し、ＨｍのＦｃ側断片を除去することによって製
造できるくたとえばパルハム（Ｐａｒｈａｍ、　Ｐ、　
）ら１．Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｈｅｔｈｏｄｓ、　Ｖｏｌ、
５３゜１）１３３−１７３　（１９８２）参照）。

続いてＤＴＴでＦ（ａｔ＋’）２を還元した後、ＤＴＮ
Ｂで一方のＦａｂ’のチオール基を安定なチオニトロ安
息香？１ｌ（ＴＮＢ）誘導体とし、ＤＴＴで還元したも
う一方のＦａｂ’のチオール基と反応させる。

こうして得られたものをＨＰＬＣ（ＴＳに２０００（東
ソー■製）のゲルクロマトフィーで分析した結果、双特
異性抗体が約８０％の高効率で作製されたことが判明し
た。一方他の還元剤であるトサクシニミジル３−（２−
ピリミジルチオ）プロピオン酸エステル（ＳＰＤＰ）又
は無水Ｓ−アセチルメルカプトコハク酸（ＳＡＨ３Ａ　
）を用いる従来の方法ではその収率は高々２０〜３０％
である。また５Ｏ８−ＰＡＧＥで分析したところ、ＤＴ
ＮＢでは純粋な１００〜１１０にｄのＦ（ａｂ’）２モ
ノマーが得られるのに対し、５ＰＤＰ又は５ＡＨ８Ａを
用いる従来方法では４００に６以上のポリマーが主な種
であった。

こうして作製した双特異性抗体はイン・ビトロにおける
細胞障害試験において、Ｗ４瘍細胞に対する末梢血単核
細胞の細胞障害活性を著しく増強し得ることが判明した
。

更に、本発明の双特異性抗体を使用して養子免疫療法を
腫瘍患者に試みたところ、１ｍ−２にて誘導したＬＡＫ
ＩＩＩＩ胞のみを移入する従来の養子免疫療法°に較べ
より優れた抗腫瘍効果を得ることができたものである。

本発明による養子免疫療法の特徴は双特異性抗体を使用
することにあるが、その概略は以下のとおりである。

患者の末梢血約１００ｃｃからリンパ球を分離し、組換
え型ＩＬ−２約１０００／Ｉｄを添加した無血清培地で
約１週間程度培養する。こうして得られたＬＡＫ細胞約
１×１０８個を本発明の双特異性抗体約１００〜１００
（１＃、好ましくは約　１００／Ｊとともに患部に移入
する。この処置は患者の病状、腫瘍の種類及び患者の年
齢等にもよるが、およそ週に数回に分けて行なうのが好
ましい。

さらに、腫瘍組織周囲の湿潤リンパ球が著名な場合には
、末梢血や′ｒｓ腫瘍組織よりリンパ球を採取すること
なく、本発明の双特異性抗体を単独に局所投与すること
だ１すでもリンパ球の細胞障害性を体内で直接に増強し
うるちのと考えられる。

抗ヒトリンパ球抗体として抗ＣＤ３モノクローナル抗体
である０ＫＴ３（マウス■ｇＧ２ａ）又は抗ＣＤ　１６
モノクロ一ナル抗体である３０８（マウスＩｇＧ、）を
、抗ヒト腫瘍細胞抗体としては全ての腫瘍細胞に反応す
るＨ　Ｂ　Ｊ　１２７（マウスＩｇＧ、　）、肺小細胞
癌及びグリオーマに特異的なＬ　Ｕ　−２４６（マウス
ＩｇＧ、　）又はＮ　Ｅ　１５０（マウスＩＩＪＧ、　
）を使用した。Ｉ　ａＧｌは予め０．ＩＨＡｃｅｔａｔ
ｅ　ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ５，５ンで透析した後、１／２
０　ｗ／ｗ）活性化ハハインＢｏｒｔｈｔｎｇｔｏｎ社
）で消化しＦ（ａｂ’）２とした。

またＩａＧ２．は０．ＩＨｃｉｔｒａｔｅ　ｔ＋ｒｕＨ
ｅｒ　ｔ’透析した後１／８　ｗ／ｗのペプシン（Ｓｉ
ｇａ＋ａ　）で分解してＦ（ａｈ’）２とした。

次に抗ヒト腫瘍細胞抗体のＦ（ａｂ’）２を窒素ガスで
飽和させたＴＢＳ／ＥＤＴＡ溶液（０，１５Ｍの食塩と
３ａ＋ＨのＥＤＴＡを含有する１０１１Ｈトリス塩酸緩
衝液）に溶解させ、ＤＴＴを最Ｈ濃度が０．５ｗＭにな
るように加え、素早く窒素ガスを反応溶液に吹き付けな
がら銅量ジスルフィド結合を還元して遊離チオール基に
したＦａｂ’を１１製した。３０分間反応後、反応溶液
と等容置の５ｗＭ　ＤＴＮＢ　（和光純薬）含有ＴＢＳ
／ＥＤＴＡ溶液を加え還元反応を停止すると同時にＦａ
ｂ’とＤＴＮＢとの結合物であるＦａｂ’　−ＮＢを形
成させた。反応終了後、ＴＢＳ／　ＥＤＴ＾ＤＴＴ充分
に平衡化したセファデックスＧ２５の分子ふるいカラム
に通し、過剰の試薬を除去してＦａｂ’　−ＮＢを得た
。

一方、抗ヒトリンパ球抗体より得られたＦ（ａｂ’）２
についても、同様に窒素ガスで飽和したＴＢＳ／ＥＤＴ
Ａ溶液中でＯ，ＳｍＨＯＴＴを作用させ、ｔｌｉ間ジス
フィルド結合を還元して遊離チオール基にしたＦａｂ’
を調製した。還元後セファデックスＧ２５カラムによっ
て過剰のＤＴＴを除去した。

抗ヒトリンパ球抗体よりＦａｂ’を調製した直後に、抗
ヒト腫瘍細胞抗体より′ｇ４製したＦａｂ’−ＮＢを、
出発のＦ（ａｂ’）２の０Ｄ２８ｏから計算して等種混
合し、限外濾過で約ｔｏ＃Ｉｙ／ｄになるように濃縮し
、窒素ガス置換を続けながら室温で４時間反応させた。

反応溶液をゲル濾過することにより反応生成物であるＦ
（ａｉ＋’）２と未反応の化合物を分離した。これによ
り、出発物質の約８５〜９０％がＦ（ａｂ’）２として
回収された。

ヒトグリオーマ株（Ｕ２５１ＨＧ及びＡ１７２．　ＡＴ
ＣＣカラ入手）、並びにＮＫ抵抗性（７）　Ｄａｕｄｉ
　（ＡＴＣＣカら入手＞ＮＫ感受性のに５６２（ＡＴＣ
Ｃが’３人−Ｊ＝）を標的１ｌｌＩ１２！とし、正常人
末梢血単核ｉ胞をエフェクターとし、実施例１で作製し
た双特異性抗体を用いることにより細胞障害活性が増強
するが否かを標準遊離試験方法（矢田純−等、［リンパ
Ｍ機能検索法」第３５３頁、１９８０年、観中外医学社
発行）により検討した。

まず上記の標的廁胞（約１Ｘ１０５個／−）を５１Ｃｒ
　（１（ＩＯｃ　ｌ　　Ｎａ　　Ｑｒ　ｏ４、ニューイ
ングランドニューフレア）でラベルした（６０分間、３
１℃）。このラベルされた標的細胞をｃｏａｓｔｅｒの
９６穴プレートの各人に約１０４個（１００Ｊ１１）ず
つ入れ、本発明の双特異性抗体約１埒を多穴に添加し、
３０分間インキュベートした。次に、正常人末梢血から
Ｃｏｎｒａｙ−Ｆｉｃｏｌ）比重遠心法（同文献、第１
７頁）で分離した、標的細胞の０．５〜２０倍量の単核
細胞（１００ＩｉＮ）を多穴に加え４時間、３７℃５％
　Ｃｏ２下？培養し、各−ｅｌｆの培養上清１００ＩＩ
ｉの放射能活性を測定した。

その結果、ヒトグリオーマ細胞及びに５６２に対する末
梢血単核細胞の細胞障害活性は、本発明の双特異性抗体
を添加することにより著しい増強が認められ、さらにＮ
Ｋ抵抗性のＤａｕｄ　ｉに対しても細胞障害活性を誘発
し得た。

次いで、末梢血単核細胞をインターロイキン２（ｒＩＬ
−２，塩野義■）で３日間誘導して得られたＬＡＫＩＩ
胞に対する本発明の双特異性抗体の効果について同様な
方法で検討した。

その結果、細胞障害活性が２〜１０倍増強することが確
認された。

さらに担癌患者における細胞障害活性の誘導についても
検討を加えた。従来より担癌患者特に末期癌患者の末梢
血より十分なＬＡＫ活性が誘導できないことが指摘され
てきた。その原因としては、サプレッサーマクロファー
ジの出現並びに、腫瘍細胞由来の抑制因子等が挙げられ
ている（悪性グリオーマの場合ＧＩｉＯ１ａ−Ｃｅｌｌ
　ｄｅｒｉｖｅｄ　１ｎｈｉｂｉｔｏｒｖｒａｃｔｏｒ
と呼ばれてきたが、最近、遺伝子クローニングされ、Ｔ
ＧＦβ２と同一であることが分った。）。そこで、６例
の組織学的にＧｌ　ｉｏｂｌａｓｔｏｍａｍｕｌｔｉｆ
ｏｒｍｅ、　ａｎａｐｌａｓｔｉｃ　ａｓｔｒｏｃｙｔ
ｏｍａと診断された患者より採取したリンパ球のＬＡＫ
活性と双特異性抗体依存性の細胞障害活性とを検討して
みた。その結果、約半数で、健常者に比しＬＡＫ活性の
低下が見られたが、本発明の双特異性抗体を加えること
によって細胞障害活性は健常者に比しむしろ増強されて
いることが分った。これより担癌患者の末梢血単核球細
胞の抗証瘍活性は、本発明の双特異性抗体を加えること
により十分期待できるものであることが分った。

実施例　３ 双特異性抗体を用いた養子免　　法 前記のＬ　Ｕ　−２４６モノクロ一ナル抗体又はＮＥ１
５０と０ＫＴ３を用いて作製した本発明の双特異性抗体
を使用して以下のように養子免疫療法を悪性グリオーマ
患者に実施した。

外科的切除を行った際に、術中迅速診断で悪性グリオー
マと診断された症例について頭皮下にオンマヤー管と呼
ばれる腫瘍腔と交通するバルブを設置した。術後約１０
日を経て抜糸も終了し術後の全身状態も改善した時点で
、末梢静脈血、約１００ＣＣを採取、リンパ球を分離し
、ヒト型ｒｌＬ−２１０００／　ｄ加えた無血清培地で
約１週間培養した。

翌週から週２回に分けてＬＡＫ細胞約１×１０８個及び
上記双特異性抗体１００埒をオンマヤー管より注入し、
これを３週間計６回行った。

現在までに悪性グリオーマ患者１０例に対してこの養子
免疫療法（５ｐｅｃｉｆｉｃ　ｔａｒｇｅｔｉｎｇ療法
）を行ったが、１０例中８例で著効を示し、そのうちの
２例については、治療後１年が経つが、再発は全く認め
られていない。また、右側頭葉のｇｌｉｏｂｌａｓｔｏ
ｌａの例では、治療後、周部の組織は全く壊死所見を示
し、治療が有効であったことを示している。

また、治療後右片マヒが改善し、入院時は車椅子生活で
あったのが、退院時は独歩可能となっている例もある。

金側、ＣＴ上では、（注入した）局所に広範な壊死をみ
とめ、右前側頭葉の石灰化腫瘍では腫瘍隙影の縮小をみ
とめた。

また、副作用の面では、１例に一過性の発熱をみたのみ
で、他は全く問題なかった。

尚、一般には、切除標本の凍結切片もしくは、手術時に
採取した組織をカバーガラスで培養したものに、数種の
抗グリオーマモノクローナル抗体を用いた蛍光抗体法を
行って、反応性の最も高い抗体を決定し、治療に用いる
双特異性抗体を選択する。

以下、若干の臨床例を説明する。

第１例はＬＵ−２４６と０ＫＴ３から作製した双特異性
抗体を用いた例で、左前頭菓のａｎａｐｌａｓｔｉｃａ
ｓｔｒＯｃｙｔｏｌａの患者であるが、治療開始後１週
開目のＣＴｒＴ端に著名な旧ｇｈ　ｄｅｎｓｉｔｙが判
明した。

第２傍目以降はＮＥ１５０と０ＫＴ３から作製した双特
異性抗体を用いた例である。

第２例は右後頭菓のｌ；１ｌｉＯｔｌｌａｓｔｏｌａの
患者であるが、やはり同様の所見であった。

第３例は右前頭菓のｇｌｏｂｌａｓｔｏｍａ例であるが
、辺縁に沿って厚い旧ｇｈ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ｒｉａ＋
が出現した。

第４例は右前頭〜側頭部のａｎａｐｌａｓｔｉｃ　ａｓ
ｔｒｏｃｙｔｏｉａの例であるが、このケースには旧ｇ
ｈ　ｄｅｎｓｉｔＶａ　ｒｅａは出現せず、高吸収域の
退縮をみとめた。

第５例は、右側頭葉に脳腫を伴う！１ｌｉａｔ　ｃｅｌ
ｌ（ＪＩｉＯｂｌａＳｔＯｌａの実施例であり、高吸収
域の部は、悪性像を示すｍａｓｓ胞であった。手術後、
本発明の双特異性抗体の投与にて再度高吸収域が出現し
た。この症例は手術後、側脳至下角がトラップされ、Ｗ
４塁内圧六進状を呈したためＣＰシャントを予儀なくさ
れたが、その際、治療的に出現した高吸収域の組織を採
取し、鋭存できるチャンスがｌられた。

以上、この本発明の双特異性抗体としＡＫ［ｌ胞とを用
いた養子免疫療法で、殆どのケースで注入後断端に沿っ
て強い高吸収域の出現が認められた。

これは従来我々のＪ４１でも行っていたＬＡＫ治療法の
みでは全く認められない所見であった。

第５例で認められた養子免疫治療後の高吸収域部の組織
標本によれば、上段のオンマヤーチューブの周囲に出現
した高吸収域では完全な腫瘍壊死が認められた。頭頂菓
寄りのオンマヤー・チューブより離れた部位では内腔側
は壊死所見であったが、脳実質側には、活発なグリオー
マ細胞を認めた。

第６例の患者は６８オ男性で、頭痛を主訴として来院、
ＣＴスキャンで右側頭葉の占拠性病変が認められ、右前
側頭開頭腫瘍摘出術を行った。病理診断はＧｌｉｏｂｌ
ａｓｔｏｍａ　ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅであった。術後前
述したプロトコールで、養子免疫療法を行った。

冶ｍ終了後行ったＣＴでは断端残存腫瘍部に高吸収域が
出現した。この患者は側脳室下角がトラップされたため
に脳腫−腹腔短絡術を予儀なくされ病理診断の結果、著
名な腫瘍１１１１胞壊死の所見であり、治療の有効性が
承認された。

以上より、本発明の養子免疫療法の施用後に出現する高
吸収域は、活性化したＬＡＫｉａｌ胞が、残存グリオー
マ細胞に対して、はげしいキラー細胞としての反応を示
し、腫瘍壊死に敗らしめた部分であることが示された。

Claims (24)

【特許請求の範囲】
1. （１）抗ヒト腫瘍細胞抗体のＦａｂ′部分及び抗ヒトリ
   ンパ球抗体のＦａｂ′部分の双方から構成されることを
   特徴とする双特異性抗体。
2. （２）ヒト腫瘍細胞が脳腫瘍細胞であることを特徴とす
   る請求項１記載の双特異性抗体。
3. （３）脳腫瘍細胞がグリオーマ細胞であることを特徴と
   する請求項２記載の双特異性抗体。
4. （４）ヒト腫瘍細胞が白血病細胞であることを特徴とす
   る請求項１記載の双特異性抗体。
5. （５）ヒトリンパ球がＴ細胞であることを特徴とする請
   求項１ないし４のいずれか一項に記載の双特異性抗体。
6. （６）ヒトリンパ球がナチユラルキラー細胞であること
   を特徴とする請求項１ないし４のいずれか一項に記載の
   双特異性抗体。
7. （７）抗ＣＤ３モノクローナル抗体のＦａｂ′部分及び
   ＨＢＪ１２７のＦａｂ′部分の双方より構成されている
   ことを特徴とする請求項１記載の双特異性抗体。
8. （８）抗ＣＤ３モノクローナル抗体のＦａｂ′部分及び
   ＬＵ−２４６のＦａｂ′部分の双方より構成されている
   ことを特徴とする請求項１記載の双特異性抗体。
9. （９）抗ＣＤ３モノクローナル抗体のＦａｂ′部分及び
   ＮＥ１５０のＦａｂ′部分の双方より構成されているこ
   とを特徴とする請求項１記載の双特異性抗体。
10. （１０）抗ＣＤ３モノクローナル抗体がＯＫＴ３である
    ことを特徴とする請求項７、８又は９に記載の双特異性
    抗体。
11. （１１）抗ＣＤ１６モノクローナル抗体のＦａｂ′部分
    及びＨＢＪ１２７のＦａｂ′部分の双方より構成されて
    いることを特徴とする請求項１記載の双特異性抗体。
12. （１２）抗ＣＤ１６モノクローナル抗体のＦａｂ′部分
    及びＬＵ−２４６のＦａｂ′部分の双方より構成されて
    いることを特徴とする請求項１記載の双特異性抗体。
13. （１３）抗ＣＤ１６モノクローナル抗体のＦａｂ′部分
    及びＮＥ１５０のＦａｂ′部分の双方より構成されてい
    ることを特徴とする請求項１記載の双特異性抗体。
14. （１４）抗ＣＤ１６モノクローナル抗体が３Ｇ８である
    ことを特徴とする請求項１１、１２又は１３に記載の双
    特異性抗体。
15. （１５）請求項１記載の双特異性抗体を用いる養子免疫
    療法。
16. （１６）請求項７記載の双特異性抗体を用いる養子免疫
    療法。
17. （１７）請求項８記載の双特異性抗体を用いる養子免疫
    療法。
18. （１８）請求項９記載の双特異性抗体を用いる養子免疫
    療法。
19. （１９）請求項１０記載の双特異性抗体を用いる養子免
    疫療法。
20. （２０）請求項１１記載の双特異性抗体を用いる養子免
    疫療法。
21. （２１）請求項１２記載の双特異性抗体を用いる養子免
    疫療法。
22. （２２）請求項１３記載の双特異性抗体を用いる養子免
    疫療法。
23. （２３）請求項１４記載の双特異性抗体を用いる養子免
    疫療法。
24. （２４）グリオーマ患者に施すことを特徴とする請求項
    １５ないし２３のいずれか一項に記載の養子免疫療法。