JPH02184759A

JPH02184759A - 遊離脂肪酸測定試薬

Info

Publication number: JPH02184759A
Application number: JP396489A
Authority: JP
Inventors: Yoshisumi Ueno; 上野　義澄; Yorito Nakano; 中野　頼人; Tomoji Murata; 村田　友次
Original assignee: NIPPON SAAFUAKUTANTO KOGYO KK; SHINOTESUTO KENKYUSHO KK; Shino Test Corp
Current assignee: NIPPON SAAFUAKUTANTO KOGYO KK; SHINOTESUTO KENKYUSHO KK; Shino Test Corp
Priority date: 1989-01-10
Filing date: 1989-01-10
Publication date: 1990-07-19
Anticipated expiration: 2014-04-26
Also published as: JP2886542B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は生体成分中の遊離脂肪酸（以下、ＮＥＦＡと記
す）　）１１１１定試薬に関し、更に詳しくは同じ反応
容器、若しくは試薬分注ノズルを洗浄再生して複数種の
被検項目を測定する場合に有用な正確な測定を可能とす
るＮＥＦＡ測定試薬組成分に関する。

［従来技術］自動分析装置には、反応ライン系に被検項目数と同数の
反応容器列を備え、各反応容器列が各々の被検項目に対
応しているタイプとひとつの反応容器列上で複数種の項
目を反応させるタイプとがある。前者の場合、被検体と
試薬の反応に供した反応容器が洗浄されて、再び別の被
検体の反応に使われる。後者の場合、反応測定後、洗浄
再使用するときには一般的に前の被検項目と後の被検項
目が異なる。

また、試薬の分注においても４１す室毎に専用の分注ノ
ズルを有するタイプと複数種の試薬を共通のプルーブで
分注するタイプとがある。

これら自動分析装置において、被検体を測定する際。

分注ノズルがひとつの被検項目に専用である場合を除い
て、他項目の試薬が反応容器やプルーブからの吸着等で
混入し、測定値に大きな誤差を生じる原因となることが
既に報告されている。

ＮＥＦＡの測定においても例外ではなく、ＮＥＦＡ３１
定以外の試薬あるいは被検体にコレステロールエステラ
ーゼ、リパーゼ及びリボプロティンリパーゼ等の酵素が
含有されている被検項目の測定後に、又は同時にＮＥＦ
Ａを測定すると正誤差を生じる。

従来、コレステロール側室又はトリグリセライド測定な
どでリボプロティンリパーゼ、コレステロールエステラ
ーゼ等を含む酵素試薬組成分に、ポリオキシエチレンア
ルキルフェニルエーテル系界面活性剤を添加することに
よりリポプロティンリパーゼ、コレステロールエステラ
ーゼの反応容器への吸着をおさえ、他の被検項目の測定
誤差を解消せんとする方法［特開昭６１−１０４７９８
号］が報告されているが、この方法では反応容器に吸着
する酵素量はかなり低下するものの、完全ではなく。

ＮＥＦＡｉｌｌ！ｌ定においてはかなりの誤差を生じる
。

また、遊離コレステロール測定におけるリポプロティン
リパーゼ活性阻害剤としてオレイン酸ナトリウム、バル
ミチン酸す１−リウム等の脂肪酸アルカリ金属塩を共存
させる方法［特開昭５８−４１３５７号］が報告されて
いるが、この方法では阻害剤として高級脂肪酸塩を使用
するためＮＥＦＡを１ｌｌｌｌ定する反応系には使用す
ることができない。さらに、コレステロールエステラー
ゼ阻害剤としてトリトンＸ−４０５、フッ化ナトリウム
、ヨード酢酸等を共存させる方法［特開昭５８−６７１
９７号］も報告されているが、この方法では反応容器へ
吸着混入したコレステロールエステラーゼ及びリボプロ
ティンリパーゼによるＮＥＦＡ測定誤差を完全に抑制す
るに至らないことが判明した。

［発明が解決しようとする問題点］本発明者らは、上記問題に鑑み、ＮＥＦＡ！１１１１定
におけるコレステロールエステラーゼ、リパーゼ及びリ
ボプロティンリパーゼ等の酵素によって生ずる正誤差の
問題に対し１種々検討を重ねた結果、アルキレンオキサ
イド系非イオン性界面活性剤がそれらの酵素に対して阻
害作用があることを見出し、この界面活性剤をＮＥＦＡ
測定試薬中に使用することでＮＥＦＡ測定反応系にそれ
らの酵素が混入しても測定値に誤差を生じない正確なＮ
ＥＦＡ測定試薬を完成させるに至った。

［問題点を解決するための手段］即ち、本発明はＮＥＦＡｉｌｌｌｌ定試薬において、Ｎ
ＥＦＡのｄｌす室以外の被検項目から混入されるコレス
テロールエステラーゼ、リパーゼ及び又はリボプロティ
ンリパーゼの阻害剤としてアルキレンオキサイド系非イ
オン性界面活性剤を使用することを特徴とするＮＥＦＡ
３１ｑ定試薬である。

本発明で使用するアルキレンオキサイド系非イオン性界
面活性剤とは、その構造にポリオキシエチレン鎖を含み
、その平均モル数が１２以上有するものであるか、若し
くはオキシエチレン鎖とオキシプロピレン鎖又はオキシ
ブチレン鎖の和が１２モル以上のものである。平均付加
モル数が小さいもの、例えばＰＯＥ　（１０）オクチル
フェニルエーテル［但しＰＯＥ　（１０）とはエチレン
オキサイド平均付加モル数１０のオキシエチレン鎖を示
す。

（トライトンＸ−１００）］はコレステロールエステラ
ーゼ、リボプロティンリパーゼ及びリパーゼ等を活性化
させるため、ＮＥＦＡ測定値の誤差を大きくしてしまう
。

具体的なアルキレンオキサイド系非イオン性界面活性剤
としては自体公知のものを使用すればよいが、例えばポ
リオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテ
ル、ポリオキシエチレンフィトステロール、ポリオキシ
エチレン第二級アルキルエーテル、ポリオキシエチレン
第一級アルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキル
アミン、ポリオキシエチレン脂肪酸アミド、ポリオキシ
エチレンラノリンアルコール、ポリオキシエチレンアル
キルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンアルケニル
エーテル、ポリオキシエチレンアルキルグリセリンエー
テル、アルキルアリルホルムアルデヒド縮合ポリオキシ
エチレンエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシブチ
レンアルキルエーテル、アルキルチオポリオキシエチレ
ンエーテル、単一鎖長ポリオキシエチレンアルキルエチ
ル、ポリオキシエチレン多価アルコール脂肪酸エステル
等が挙げられる。

このようなアルキレンオキサイド系非イオン性界面活性
剤は通常０．００５％〜２０％程度の濃度範囲で選択し
てＮＥＩ”Ａ３１１定試薬に使用すれば有効である。

ＮＥＦＡｉｌｌｌｌ定試薬としては、酵素法におけるＮ
Ｅ　ＦＡ測定系のアシルＣｏＡシンセターゼの触媒によ
り生成される、アシルＣｏＡを追跡する系、若しくはア
デノシン−１−リン酸を追跡する系又はアシルＣｏＡシ
ンセターゼの触媒の際、残存するＣｏＡを追跡する系な
ど自体公知のＮＥＦＡ測定法に使用される試薬組成物を
示す。

本発明におけるＮ　Ｅ　ｌ？　Ａ　Ｈ１ｌｌ定の際、Ｎ
ＥＦＡの測定以外の被検項目から混入されるコレステロ
ールエステラーゼリパーゼあるいはリボプロティンリパ
ーゼとは、自動分析装置にてＮＥＦＡｉｌｌ’ｌ定以前
の他の被検定日前例えばコレステロール、遊離コレステ
ロールあるいはトリグリセライド等測定に使用される試
薬及び被検体中に含有されていたものがＮＥＦＡ測定時
に混入されるものである。

［作用］本発明で使用するアルキレンオキサイド系非イオン性界
面活性剤は、反応容器や分注ノズルなどから混入してＮ
ＥＦＡ測定値に影響を与えるコレステロールエステラー
ゼ、リパーゼあるいはリポプロティンリパーゼ等の脂肪
酸エステル加水分解酵素を阻害するため、これらの酵素
の影響が解消された。

第１表は、各酵素に対するアルキレン系オキサイド系非
イオン性界面活性剤の阻害率を遊離してくる脂肪酸にて
測定したもので、非イオン性界面活性剤無添加を１００
％として残存活性を示したものである。

第２表は、各種アルキレンオキサイド系非イオン性界面
活性剤の酵素に対する阻害率として示したものである。

第１表 ×界面活性剤としてポリオキシエチレンベヘニルエーテ
ル０．３％を使用。

第２表これらの表から明らかなように、これらのアルキレンオ
キサイド系非イオン性界面活性剤を使用することで各酵
素が阻害されることがわかる。

※ＰＯＥはポリオキシエチレン鎖を表し、（）の数字は
エチレングリコールの平均モル数を表す。またＰＯＰは
ポリオキシプロピレン鎖を表し、（）の数字はプロピレ
ンゲルコールの平均モル数を表す。

阻害率はコントロール（無添加）を１００％として残存
活性の２として表す。

以下１本発明を実施例により説明する。

実施例１（１）試薬 ■第一試薬トリスヒドロキシメチルアミノメタンポリオキシエチレン（４０）ベヘニルエーテル塩化マグ
ネシウム４−７ミノ７ンチビリンＡＴＰ−２Ｎａ７シルＣｏＡシンセターゼコエンザイムＡ以上を水で溶解して塩酸で量１００軸Ｑとする。

■第二試薬リン１２．ｌ［Ｊ！ｌカリウムＮ−エチルマレイミド６．０６ｇｇ２．０３ｇ０．２７ｇ０．６１　ｇ５００　ＵＯ，１６ｇｐＨ７，６に調製した後、水で全１．８１ｇ０．２ｇバーオキシターゼ　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　５３３０　　ｊ１７
シｈＣｏＡオキシダーゼ　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　１８０００　　Ｌ１以上を水
に溶解して水酸化カリウムでＰＩ４７．０に調製した後
、水で全量１０００ｍ　Ｕとする。

（２）操作法透明なプラスチックを反応容器とするシングルマルチ・
ランダムアクセス・ディスクリートタイプ自動分析装置
（日立７１５０）を用いた。この装置は、−列の反応容
器が間欠移送され、停止時に第一の場所でサンプラーか
ら被検体試料を添加し、第二の場所で第一試薬を添加、
第三の場所で第二試薬を添加して、試料中の目的成分を
反応させ、第四の場所で反応後の吸光度を測定する。測
定後、反応容器内の反応液は廃棄され、水洗された後に
第一の場所に戻って第二回目の測定に使用される。

まず、第一回目の測定として血清３μΩ、前記第一試薬
２５０μＱ、前記第二試薬１２５μＱでＮＥＦＡ測定を
行なう０次に、第２回目の測定としてリボプロティンリ
パーゼを含む試薬で中性脂肪測定を行なう。そして、第
３回目の測定として、第１回目の測定の時と同じ試薬条
件で同一検体のＮ　Ｅ　Ｆ　Ａ測定を行なう。この時、
一つの反応容器に着目すると、ＮＥＦＡ、中性脂肪、Ｎ
ＥＦＡの順で測定に使用されたことになる。

第３表にＮＥＦＡ標準溶液から求めた血清中のＮＥＦＡ
測定値を示した。また、比較のため第１試薬中、非イオ
ン性界面活性剤無添加、ＰＯＥ　（１０）オクチルフェ
ニルエーテル（トライトンＸ−１００）も実施し、それ
らの結果も同時に示した第３表第３表から明らかな如く、本発明でのＮＥＦＡＨ１’ｌ
定値は中性脂肪測定前の第１回測定値と中性脂肪測定後
の第３回目測定値とでは、殆ど同じ測定値が得られたが
、無添加の場合やトライトンＸ−１００を含む試薬での
測定値は、第１回目測定値が大きな値となり中性脂肪測
定の影響を強く受けることが確認された。

実施例２゜（１）試薬 ■第一試薬実施例１のポリオキシエチレン（４０）ベヘニルエーテ
ルに代えてＰＯＩＥ（３０）フィトステロールを用いる
他は同様とする。

■第二試薬実施例１と同様。

（２）操作法実施例１と同様の自動分析装置を用いた。第１回目測定
、第３回目測定は実施例１と同様にＮＥＦＡ測定を行い
、第２回目測定は実施例１の中性脂肪測定の代わりにコ
レステロールエステラーゼを含む試薬で総コレステロー
ル測定を行った。その結果を第４表に示す。

第４表第４表から明らかな如く１本発明でのＮＥＦＡ測定値は
総コレステロール測定前の第１回測定値と総コレステロ
ール測定後の第３回測定値とでは、殆ど同じ測定値が得
られたが、無添加の場合やトライトンＸ−１００を含む
試薬での測定値は、第３回目測定値が大きな値となり、
総コレステロール測定の影響を強く受けることが確認さ
れたＯ実施例３゜（１）試薬 ■第一試薬実施例１のポリオキシエチレン（４０）ベヘニルエーテ
ルに代えてＰＯＥ　（６０）ラウリルエーテルを用いる
他は同様とする。

■第二試薬実施例１と同様。

（２）操作法実施例１と同様の自動分析装置で機種の異なる装置（Ｔ
ＢＡ６０Ｒ）を用いた。この装置は、第１試薬分注と第
２試薬分注がそれぞれ２木の分注プルーブによって行わ
れる。

多項目測定が設定されているとき、第１試薬分注プルー
ブはある項目の第１試薬を分注した後、１回の洗浄のみ
で別の項目の第１試薬を分注し、以後設定した項目だけ
同様に洗浄１分注を行う、第２試薬分注プルーブも同様
である。分注プルーブが試薬毎に分けられてはいない。

同一検体を試料とし、ＮＥＦＡ、総コレステロール、Ｎ
ＥＦＡの順で連続して測定（分注）されるように設定し
。

総コレステロール分注前に試薬が分注されて測定したＮ
ＥＦＡ値と総コレステロール分注後に試薬が分注されて
測定したＮＥＦＡ値を第５表に示す。

第５表第５表から明らかな如く、本発明でのＮＥＦＡ測定値は
総コレステロール分注前と分注後では殆ど同じ測定値が
得られたが、無添加やトライトンＸ−１００を含む試薬
では、総コレステロール分注の影響を強く受けることが
確認された。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）遊離脂肪酸測定試薬において、遊離脂肪酸の測定
以外の被検項目から混入されるコレステロールエステラ
ーゼ、リパーゼ及び／又はリポプロテインリパーゼの阻
害剤としてアルキレンオキサイド系非イオン性界面活性
剤を使用することを特徴とする遊離脂肪酸測定試薬。
（２）アルキレンオキサイド系非イオン性界面活性剤の
アルキレンオキサイドの平均付加モル数が１２以上であ
る請求項１に記載の遊離脂肪酸測定試薬。