JPH01261461A - 化学ルミネセンス性アクリジン誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は化学ルミネセンス性アクリジン誘導体、その製
法およびルミネセンスイムノアッセイにおけるその使用
に関する。

ルミネセンス性化合物はすでに多くの分野で使用されて
いる。これら化合物はバイオアッセイ、エンザイム　ノ
ムノアッセイおよびルミネセンスイムノアッセイにおけ
るインジケーターとして使用されるしく　Ｗ、Ｐ、　Ｃ
ｏ１１ｆｎｓ　”　ＡｌｔｅｒｎａｔｉｖｅＩｍｍｕｎ
ｏａｓｓａｙｓ”、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎ
ｓ　Ｌｔｄ、出版、（Ｃｈｉｃｈｅｓｔｅｒ　、　１９
８５参照）、核酸ハイゾリダイゼーションアッセイにお
いても使用される（Ｊ。

Ａ、Ｍａｔｔｈｅｗｓ　　他、　　’Ａｎａｌｙｔｉｃ
ａｌ　　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”、　１５１．２０
５〜２０９．１９８５参照）その他、化学ルミネセンス
性化合物＃ｉ７Ｔ：１−インジェクションアナリシス、
液体クロマトグラフィーにおけるポストカラム検出器、
７０−リサーチおよび人工光源においても使用される。

化学ルミネセンスイムノアッセイにおいては、特に２種
類の構造の化学ルミネセンス性［９物質が比較的重要で
ある。その５ちの一方はルミノールまたはイソルミノー
ル誘導体であってこれらはＨ，Ｒ，５ｃｈｒｏｅｄｅｒ
他、−Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”
、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　Ｉｎｃ、、Ｎｅｗ　
Ｙｏｒｋ　、　　Ｖｏｌ、　ＬＶＩＩ、１９７８．４２
４以下、ならびに英国特許第２００８２４７号および２
０４１９２０号、西ドイツ特許第２６１８４１９号およ
び２６１８５１１号、ならびにヨーロッノ特許出願第１
３５０７１号に記載されている。ルミネセンスインノケ
ーターとしてのイソルミノール化合物の実際的な使用に
関する概説はＷ、（）、Ｗｏｏｄ％Ｊ。

０１１ｎ、　Ｃ！ｈｅｍ、　Ｃ！ｌｉｎ、　Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ、　２２．１９８４９０５〜９１８に見られる。

一方アクリゾニウムエステル化合物も化学ルミネセンス
性標識物質として使用されている。

かかるアクリジニウムエステルは米国特許第３３５２７
９１号、英国特許第１３１６３６３号および１４６１８
７７号、ならびにヨーロッ・に特許串願第８２６３６号
から知られている。イムノアッセイにおける標識物質と
してのアクリゾニウムエステルの使用Ｆｉ　Ｗｅｅｋｓ
他、Ｃ！ｌｉｎ、　Ｃｈｅｍ、　２９／８（１９８３）
、１４７４〜１４７９に記載されている。ルミネセンス
イムノアッセイにおける標識物質としてのフエナントリ
ジニウムエステルの使用もヨーロッパ特許出願第１７０
，４１５号に記載されている。

アクリゾニウムエステルの化学ルミネセンスはアルカリ
性Ｈ２Ｏ２溶液の添加によシ開始され５る。化学ルミネ
センスのメカニズムに関してはＦ、　Ｍｃｃａｐｒａが
Ａｃｅ、　Ｃｈｅｍ、Ｒｐｓ、　９．２０１．１９７６
に説得性のある説明を記載している。それによれば光取
量にとってならびに加水分解安定性にとって明らかに離
脱基の性質が決定的である。

これまですでに知られているアクリジニウムエステルは
ルミノールおよびイソルミノール化合物に比較して光取
量が比較的高くかつそれがインジケーターに結合したタ
ンパク質によっても損われないという長所を有する（Ｗ
ｅｅｋｓ他、０１１ｎ、　Ｃｈｅｍ、　２９／８　（１
９８３）、１４７４〜１４７９）。

ヨーロッパ特許出願第８２６６６号に記載されるアクリ
ソニウムフェニルエステルＦｉｕ和な酸化剤により化学
ルミネセンスが励起される場合に検出感度の高いことが
きわ立っているとしても、それらは実際上の使用に障害
となる欠点を有する。とりわけフェニルエステル結合は
水性系中では室温ですらも非常に不安定である。その上
、そこに記載される酸化条件下ではアクリジニウムフェ
ニルエステルは約１０秒後にやつと実質的に、すなわち
９５チ以上が消失するような発光しか示さない。これに
比較して他の非アイソトープアッセイ法ではさらにはる
かに測定時間が短かく従って検体スルージットをより高
くできる。

光収量が高くかつより速やかな反応力学を有し従ってル
ミネセンスイムノアッセイに要する測定時間を短かくで
きる化学ルミネセンス性アクリノニウム訪導体の使用は
既に提案すれている（西ドイツ特許出願第Ｐ　３６２８
５７３．０号参照）。

それらは式 〔式中ＲＡは水素、１〜１０個の炭素原子を有するアル
キル、アルケニルまたはアルキニル基、またはベンジル
基またはアリール基であり、■（８およびＲｏは水素、
１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、置換または未
置換アミン基、カルボキシル基、アルコキシ基、シアン
基、ニトロ基またはハロゲンであり、ＲＤｌ二ｔスルホ
ンアミド基が窒素を介して直接にカル＋１−ニル基に結
合している基であるか、または式−Ｒ３−Ｙ　−Ｒ”　
（式中Ｙは分校状または直鎖状の脂肪族またはへテロ原
子をも含有していることができる芳香族基であシ、そし
てＲＥは生物学的に重要な物質中のアミン、カルブキシ
ル、チオールまたはその他の官能基と緩和な条件下に選
択的に反応しうる反応基である）を有するチオアルキル
またはチオアリール基であり、そしてＡｅは化学ルミネ
センスを損わないアニオンである〕を有するアクリジニ
ウム誘導体の形態をしている。

今、特定のアクリジニウム誘導体がそのすぐれた安定性
および予想外に高い検出感度ゆえに化学ルミネセンス性
化合物としての使用に特に適することが判明した。それ
ゆえ本発明は式Ｉα＝Ｏ−Ｒ” を有する化学ルミネセンス性アクリジニウム誘導体およ
び四級アンモニウム化合物に関する。

ここで上式Ｉ中、 Ｒ１は水素、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル、
アルケニルまたはアルキニル基、またはベンジル基また
はアリール基であり、Ｒ２およびＲ３け水素、１〜４個
の炭素原子を有するアルキル基、置換または未置換アミ
ン基、カルボキシル基、アルコキシ基、シアン基、ニト
ロ基またはハロゲンであり、 Ｒ４は式■または■ を有する基であり、 Ｒ５＃′ｉ生物学的に重要な物質中のアミン、カルブキ
シル、チオールまたはその他の官能基と綴和な条件下に
選択的に結合しうる反応性の基であり、 Ｔ（６は水素、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル
、アルケニルまたはアルコキシ基、置換アミ７４ｒ１ベ
ンノル基、アリ・−ル基、ヘテロアルギル基または複素
環式基であってこれらは渣だヒドロキシル、アミン、１
〜４個の炭素原子？有するアルキルアミノ、アルキル、
アルケニルまたはアルコキシ基、ポリアルコキシ基また
はアリールオキシ基または複素環式基で置換されていて
もよく、またここでこれら置換基はそれら自身が複素環
式化合物またはアミンで置換されていることができるし
または一緒になって０および／′またはＳお・よび／ま
たはＮＨまたＶｉＮ−アルキルを有する複素環を形成す
ることもできるものとし、そして Ｘは直接にかまたはアルキレン基もしくはオキシアルキ
レに基を介して窒素原子または硫黄原子に結合し、かつ
アルキレン基またはオキシアルキレン基を介してＲ５基
に結合しているアリーレン基（これはまたアルキル、ア
ルケニル、ヒドロキシル、アミン、アルコキシ、ポリア
ルコキシまたはアリールオキシ基および／またはへテロ
原子の１個ツたはそれ以上で置換されていることができ
る）であるかまたは脂肪族、芳香脂肪族または芳香族の
必ずしも天然でないアミノカルボン酸の残基を忌味する
か、またはＲ６が（Ｃ＋−ａＳ）−アルキルの１つまた
はそれ以上で置換されたフェニル基である場合はフェニ
レン基である。

生物学的に重要な物質とは特に抗原を意味することが理
解されるべきである。この用語には例、ｔばホルモン、
ステロイド、医薬、医薬代謝産物、トキシン、アルカロ
イドおよび抗体も包含される。

アミノカルボン酸として適当なものをあけれハｆｌｌえ
ばグリシン、アラニン、セリン、フェニルアラニン、ヒ
スチゾン、α−アミノ酪酸、メチオニン、バリン、ノル
バリン、ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、アス
パラギン酸、グルタミン酸、４−アミノ安息香酸、４−
アミノフェニル酢酸、４−アミノフェノキシ酢酸および
３−（４−アミン）−フェニルプロピオン酸である。

化学ルミネセンスを損わないアニオンは例えばテトラフ
ルオロボレート、バークロレート、ハライド、アルキル
スルフェート、ハロスルフェート、アルキルスルホネー
トまたはアリールスルホネートアニオンであることがで
きる。化学ルミネセンスを消光または弱化させない限り
他のどのアニオンも使用できる。

ヘテロアルキル基またＦ′ｉ抜素環式基は本発明による
化合物の水溶性の増大に寄与し５るヘテロ原子、例えば
窒素、酸素、硫黄、燐またはそれらの岨み合せを含有す
るのが好ましい。特に適当な沙素環の例をあげればモル
ホリン、ピペリノン、ピペリノン、テトラヒドロフラン
、ノオキサン等である。

特に重要なアクリノニウム訪導体は、Ｘが式〔式中Ｒ７
は式＝（Ｃ■ｌ２）ｒｎ＝または式−（（ｃｒｒ２）ｍ
−ｏ−）ｍ−（ｎ＝０〜４そしてｍ　＝　１〜６）であ
り、Ｒ８けＲ７に対して０−ｌｍ−またはｐ−位にある
式＝（ＯＨ２）ｐ−を有する基、または−（ｏ−（ＣＨ
２）ｍ−）ｐまたは−（（ＣＨ２）ｍ−０）ｐ　（好ま
しくはｎ＝１〜６そしてｍ　＝　１〜６）を有するポリ
アルキレンオキサイド基、または１〜４個の炭素原子を
有する分枝状または直鎖状炭化水素基であり、そして置
換基Ｒ９〜Ｒ＋＋は水素、３０個までの炭素原子を有す
る直鎖またけ分枝状の炭化水素基（ここで１個またはそ
れ以上の−ＣＨ２−単位け０、Ｓ、３０、ＳＯ２、ＮＨ
またはＮ−アルキルで置換されていることができるし、
そしてこれら置換基の２個が環状に結合することもでき
る）である〕を有する基である化合物である。

本発明によるアクリジニウム誘導体の使用可能性にとっ
て特に重要なのＦ′ｉ置換基Ｒ５である。

この基を適当に選択することにより、反応性が非常に高
くて緩和な条件下ですらも検出すべき生物学的物質の官
能基と選択的に結合しうるアクリジニウム誘導体が得ら
れる。適当な反応基を以下に列挙する。

ｄ）　　　−８Ｏ２−ＣＨ＝ＣＨ２ ｆ）　　　−Ｎ＝Ｏ＝Ｓ ｇ）　ＧＮｓ Ｒ５が式Ｖ を有する基である本発明のアクリジニウム誘導体が多く
の場合に適当であることが判った。

さらに、式■を有するアクリジニウム化合物が特に適当
であることが判明した。

ここで上式中Ｘは式■ （ｎ＝２または４）を有する基でありそしてＲ１２およ
びＲ１３は相互に独立して水素、１〜４個の炭素原子を
有するアルキル基、 （−０−ＯＨ２−ＣＨ２）ｎ−ＯＲ基（ここでｎは０〜
８でありそしてＲｉｔモルホリノエチルまたＶｉ１〜４
個の炭素原子を有するアルキル基またＶｉＮ、Ｎ−ジメ
チルアミノエチル基である）または−緒になってエチレ
ンジオキシ基であり、そして Ａ（：）は前記した意味を有する。これら化合物は水に
容易に溶解する生成物である。

ここにあげた式■を有する化合物のうち、Ｘがｐ−エチ
レンフェニル基であり、Ｒ１２＝　ＨでありそしてＲ１
５＝ｐ−メトキシ基であるか、またはＲ１２＝オルトメ
トキシでありそしてＲ１３＝＝　ｐ−メトキシ基である
か、またはＲ１２およびＲ１５が一緒になって５，４−
エチレンソオキシ基である化合物、例えば式 を有する化合物が特に好ましい。

もう一つの特に適当なアクリゾニウム誘導体は式■ で示される。ここで上式■中Ｒ６Ｖｉ１〜４個の炭素原
子を有するアルキル基またはフェニル基（これはそれぞ
れ１〜４個の炭素原子を有するアルキルまたはアルコキ
シ基の３個までによって、１個の（−０−ＣＨ２−Ｃ！
Ｈ２）ｎ−ＯＲ基（ｎ＝ｏ〜８そしてＲはモルホリノエ
チルまたｌ’ｉ　Ｎ、Ｎ−ツメチルアミノエチル基また
Ｆｉｉ〜４個の炭素原子を有するアルキル基である）に
よって塘たはエチレンノオキシ基によって置換されてい
ることができる）でありそしてＸが前記した意味を有す
るか、またはＲ６がそれぞれ１〜４個の炭素原子を有す
る５個までのアルキル基で置換されていることができる
フェニル基でありセしてＸが。−１ｍ−４だＶｉｐ−７
エニレン基であるものとする。

これら化合物も水に容易に溶解しうる生成物である。

アミド窒素のところでスルホニルにより置換されたアク
リゾニウム−９−カルボキサミドが優れた化学ルミネセ
ンスを有することは駕くべきことである、何故ならアク
リ・ゾニウム−９−カル？キサミＰけアクリ・ゾニウム
−９−カルボン酸エステルと反対に何ら化学ルミネセン
スを示さないことが知られているからである（Ｆ。

ＭｃＣａｐｒａ　ｉｎ　Ｗ、　Ｃ！ａｒｒｕｔｈｅｒｓ
およびＪ　、に、　５ｕｔｈｅｒｌａｎｄ　：Ｐｒｏｇ
ｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｏｈｅｍ、、Ｖｏｌ
、　８．２６１〜２７７．１９７３、Ｂｕｔｔｅｒｗｏ
ｒｔｈ％Ｌｏｎｄｏｎ参照）。

ヨーロッパ特許出願第８２，６３６号に記載のアクリノ
ニウムフェニルエステルに比較した本発明によるアクリ
ゾニウム化合物の重要な利点は発光反応が相当に迅速な
ことである（　Ｐ　３６２Ｂ　５７３．０参照）。

もう一つの利点は本発明による化合物を用いて調製され
るトレーサーの安定性により与えられる。第１図は高め
られた温度（５０℃）で貯蔵後にそれぞれの化学ルミネ
センスシグナルの強度を測定した安定性試験の結果を示
す。曲線はそれぞれ ａ）化合物Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−［４−
（２−スクシンイミノルオキシカル、ｌ／ニルエチル）
−ベンゼンスルホニルニー１０−メチルアクリジニウム
−９−カルボキサミド−フルオロスルホネート（６）、 ｂ）化合物Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−［４−
（４−スクシンイミジルオキシカルボニルブチル）ベン
ゼンスルホニル）−’１０−メチルアクリゾニウムー９
−カルがキサミドーフルオロスルホネート（Ｎ）、およ
び Ｃ）化合物４−（２−スクシンイミソルオキシヵルポニ
ルエチル）−フェニル−１０−メチルアクリジニウム−
９−カルボキシレート−メトスルフェート（ヨーロツノ
’！ｔｈ許出Ｍ第８２６３６、第１０頁） から調製されたトレーサーに関する。

化合物ａ）およびｂ）から得られる本発明によるトレー
サーが化合物Ｃ）からの対応するトレーサーよシ安定で
あることが明らかに認められる。

４℃での相当する試験においても同様の結果が得られる
。第２図は４℃で貯蔵後のシグナル強度を示す。ここで
も化合物ａ）から調製されたトレーサーが化合物Ｃ）か
ら得られるものより明確に安定であることが判る。

本発明によるアクリノニウムスルホンアミド誘導体はア
クリジン−９−カルボニルクロライド（■）から出発し
て製造されうる。この後者を製造するには、例えばアク
リノンをＬｅｈｍｓ　ｔｅｄ　ｔおよび）’、ｕｎｄｅ
ｒ　ｔｍａｒｋのＢｅｒ、６３．１２２９（１９５０）
記載の方法に従いエタノール／氷酢酸中でシアン化カリ
ウムと反応させて９−シアノアシリ・シンとなす。この
ものから好ましくは再結晶後にＬｅｈｍｓｔｅｄｔおよ
びＷｉｒｔｈのＢｅｒ、６１．２０４４（１９２８）記
載の方法に従い硫酸および亜硝酸ナトリウムと反応させ
てアクリジン−９−カルボン酸を得る。このアクリノン
−９−カルボン酸を例えばチオニルクロライドと反応さ
せることにより式（式中Ｙは塩素を意味する）を有する
化合物が得られる。ハロゲンの代りに式■中のＹのとこ
ロニヒドロキシカルボニルアルキル、ヒドロキシカルボ
ニルアリールまたはイミダゾリド基を導入することもで
きる。

次にこの酸クロライド（■）を式Ｘ または式Ｘ ■ Ｒ６−Ｎ−５ｏ２−ｘ−ｃｏｏｚ　　　　　　　（ＸＩ
）を有する保護されたスルホンアミドカルボン酸と反応
させることができる。ここで上式中ＸおよびＲ６Ｖｉ前
記した意味を有しそしてＺけあとで除去されるカルｄ？
キシル保護基である。例えばこの反応に１ｉＮ−（４−
ペンジキシカルブニルフェニル）−Ｎ−４−トルエンス
ルホンアミトカ用いられうる。第三ブチルエステルの使
用が好都合であり、その保護基Ｖｉ特別に緩和な条件下
に導入および再び除去されうる。保護基の除去後に形成
される酸を次に適当な化合物例えばＮ　−ヒドロキシス
クシンイミドを用いて基Ｒ５に変換する。このものから
１０−位の窒素原子をアルキル化することにより化学ル
ミネセンス性アクリジン化合物が得られる。

得られるアクリジニウム化合物はそこで生物学的に重要
な物質、例えば抗原、抗体、ホルモン、医薬、医薬代謝
産物、トキシンまたはアルカロイドと反応してルミネセ
ンス性化合物を生成することができる。その場合、アク
リジニウム化合物を直接にかまたは架橋分子例えばアミ
ノ酸、オリゴアミノ酸、ポリアミノ酸、ペゾチドまたは
合成ポリマーを介して生物学的に重要な物質に結合させ
て安定した免疫学的に活性な接合体を形成させる。この
佇合体はまたトレーサーとも呼ばれ、以下に記載される
ルミネセンスイムノアッセイに用いられる。液体検体中
の抗原物質を競合法またはサンドインチ法により測定す
るための本発明によるルミネセンスイムノアッセイには
固相に固定された少くとも１種の免疫学的に活性な成分
およびそれに加えルミネセンス性トレーサーが必要であ
る。

免疫反応の終了および場合により必要とされる洗浄工程
後に１種またはそれ以上の試薬を逐次的にまたは同時に
添加することにより発光を開始させ、その際少くとも１
程の試薬は酸化剤を結合されたかまたは結合されない形
態で含有する。ルミネセンスイムノアッセイは種々の方
法で実施することができる。

一つの可能な方法は、抗原と特異的ｆ反応するものであ
って固定された抗体を、検査すべき液体検体、および抗
原と化学ルミネセンス性アクリジニウム誘導体（抗原−
トレーサー）とからなる接合体とインキュベートし、 検体および結合されなかったトレーサーを分離瞳 結合されたトレーサーを発光を惹起させるに必要な試薬
と接触させ、そして 測定された発光強度から存在する抗原量を測定する、 ことにある。

ルミネセンスイムノアッセイを実施するもう一つの可能
な方法は 抗原と特異的に反応するものであって固定された抗体を
、検査すべき液体検体、および第２の特異的に反応する
抗体と化学ルミネセンス性アクリジニウム訪導体とから
なる接合体とインキュベートし、 検体および結合されなかった標識された接合体を分離し
、 結合された標識された接合体を発光に必要な試薬と接触
させ、そして 測定された発’５を強度から存在する抗原量を測定する
。

ことからなる。

前記ルミネセンスイムノアッセイはまた標識された接合
体の添加に先立ち、検査すべき液体を固定された抗体か
ら分離するやυ方で実施することもできる。

本発明により実施されうるもう一つのルミネセンスイム
ノアッセイにおいては抗体でなく抗原が固定される。従
って抗体と特異的に反応するものであって固定された抗
原を、検査すべき液体検体、および抗体と化学ルミネセ
ンス性アクリゾニウム誘導体とからなる接合体の溶液と
インキュベートし、次に検体および結合されなかった標
識された接合体を分離し、そして次に結合された標識さ
れた接合体を必要な試薬と接触させることができる。そ
うすると発光が生じ、その強度から存在する抗原量が測
定されうる。

さらにもう一つの方法は、 抗体と特異的に反応するものであって固定された抗原を
、抗体と化学ルミネセンス性アクリジニウム誘導体とか
らなる接合体の溶液とインキュベートし、 未反応の標識された接合体を分離し、 検査すべき液体の検体を添加し、 次に検体を再び分離し、 結合された標識された接合体を発光を惹起させるに必要
な試薬と接触させそして次に発光から存在する抗原量を
測定する、 ことにある。

終りにルミネセンスイムノアッセイはまた、抗体と特異
的に反応するものであって固定された抗原を、抗体と化
学ルミネセンス性アクリゾニウム誘導体とからなる接合
体の溶液とインキュベートし、 検査すべき液体の検体を添加し、 検体および結合されなかった接合体を分離し、結合され
た標識された接合体を必要な試薬と接触させ、そして次
に 測定された発光強度から存在する抗ｉｎを測定する、 やり方で実施することもできる。

本発明によるアクリゾニウム化合物の製造を下記実施例
１〜７によｐ詳細に説明する。

実施例　１ Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−［４−（２−ベン
ジルオキシカルボニルエチル）ベンゼンスルホニルコア
クリジン−９−カルボキサミドジクロロメタン４００ｄ
中のベンジル４’−（Ｎ−（４−メトキシフェニル）ス
ルファミドツー３−フェニルプロピオネ−１）１７９に
４−（Ｎ、Ｎジメチルアミノ）ピリジン４６０ｒｔｑお
よびトリエチルアミン２２．１−を加え、１０分後にア
クリジン−９−カルボニルクロライド塩酸塩（２）１１
．１２７を加え、この混合物を６時間還流する。冷却さ
れた溶液を２Ｎ　ＮａＯＨと短時間攪拌し、有機相を分
離し、Ｈ２Ｏで洗い、硫酸マグネシウムで乾燥しそして
濃縮する。残留物を、カラムクロマトグラフィーにより
ｆ＃製する。

収４＝６０％　融点：１６０〜１３２℃ＮＭＲ（ＤＭＳ
ｏ、　１００ＭＨｚ）　：δ＝２．７−５．０ｐｐｍ（
ｄ、　ｂｒ。

２Ｈ）、δ＝３．０−３．３ｐｌ）ｍ（ｄｔ　ｂｒ、　
２Ｈ）、δ＝５．５ｐｐｍ（ｓ、　ｂｒ、　３Ｈ）、δ
＝５．１　ｐｐｍ（ｓ、　２Ｈ）、δ”６．５ｐ１）ｍ
（ｄ、　ｂｒ、　２Ｈ）、δ＝７１　ｐｐｍ　（ｄｏ　
ｂ　ｒｅ　２　Ｈ）、δ＝Ｚ６５ｐＩ）ｍ（８１５）（
）、δ＝７．５−８．３ｐｌ）ｍ（ｍｌ　１２Ｈ）Ｎ−
（４−メトキシフェニル）　−Ｎ　−［：４−（２−カ
ルボキシエチル）ヘンゼンスルホニル〕−アクリジン−
９−カルボキサミド−臭化水素酸塩６．３９の（３）を
３３％ＨＢｒ／氷酢酸３〇−中６０°Ｃに２時間加熱し
、冷却後にこれにジイソプロピルエーテル６０ｄを加え
、沈殿を吸引ＰＪ１４ｔ、そして真空下に乾燥する。収
率：９０％、融点：２６７℃（分解）。

ＮＭＲ（ＤＭＳｏ、　１００ＭＨ２）　：δ＝２−７　
ｐ　ｐｍ　（ｄｏ　ｂ　ｒｔ　２　Ｈ）、δ＝３．１ｐ
ｐｍ（ｄ、　ｂｒ、　２Ｈ）、δ＝＝３．５ｐｐｍ（ｓ
、　ｂｒ、　３Ｈ）、δ＝６．５ｐｐｍ（ｄ、　ｂｒ、
　２Ｈ）、δ＝７０−８．４１）ｐｍ（ｍｔ１５Ｈ） Ｎ−（４−メトキシフェニル）　−Ｎ−（：　４−（２
−スクシンイミジルオキシカルボニルエチル）−ベンゼ
ンスルホニルコアクリジン−９−カルボンキサミド（５
） テトラヒドロフラン５〇−巾の（４）３．Ｈ２にトリエ
チルアミン１．４１　ｄを加え、この混合物を一２０℃
に冷却しそしてクロロ蟻酸エチル０．４７４ｔｌＬｔを
加える。２０分間攪拌したのちこれにＮ−ヒドロキシス
クシンイミド５７５＃ＩＦを加え、−２０℃で３時間で
攪拌しそして攪拌下に一夜放置して室温まで戻す。沈殿
を吸引濾過し、Ｐ液を濃縮し、残留物をジクロロメタン
または酢酸エチル中にとり、得られる溶液を水、ＮａＨ
Ｃ○３溶液および水で洗いそしてＭｇＳＯ４で乾燥する
。有機相を濃縮しそしてＰａ留物をトルエンからＨ結晶
する。

収率：５０チ ＮＭＲ（ＤＭＳｏ、　１　（］ＯＭＨｚ）δ＝２．８ｐ
ｐｍ（ａ、　４Ｈ）、δ＝３．２ｐｐｍ（ｓｒ　ｂｒ、
　４Ｈ）、δ＝３．５ｐｐｍ（ｓ、　Ｂｒ、　３Ｈ）、
δ＝６．５ｐｐｍ（ｄ、　ｂｒ、　２Ｈ）、δ＝７．２
ｐｐｍ（ｄ、　ｂｒ。

２Ｈ）、δ＝７６−８．４ｐｐｍ（ｍ、　１２）（）。

ＩＲ：３４００ｃＷＩ（ｂｒ）、３０６０．２９３０．
１８１５（ｗ）、１７８０（Ｗ）、１７４０（ｓ）、１
６９０　（ｍ）、１６００（Ｗ）、１５１０（ｍ）、１
３７０（ｍ）、１２５０（ｍ）、１２０３（ｍ）、１１
７５（ｍ）。

Ｎ−（４−メトキシフェニル）　−Ｎ　−Ｃ４−Ｃ２−
スクシンイミジルオキシカルボニルエチル）−ベンゼン
スルホニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カル
ホキサミトーフルオロスルホネ　−　ト　（６） Ｈ５ ジクロロメタン６０ｗｄ中の（５）１２７ｇに一２０℃
でメチルフルオロスルホネート０．４−を加える。

この混合物を一２０℃で２時間攪拌し、そして室温で一
夜放置してＰｆｌｔＪＲさせる。トルエンを添加すると
黄色固形物が沈殿し、これを吸引濾過しそして真空下に
乾燥する。収遣：８０チＮＭＲ（ＤＭ８０．１０ＯＮＨ
ｚ）　：δ＝２．９ｐｐｍ（ｓ、　４Ｈ）、δ＝３．２
ｐｐｍ（ｓ、　ｂｒ、　４Ｈ）、δ＝３．５ｐｐｍ（ｓ
＋　ｂｒ、　”Ｈ）、δ＝４ｊ３ｐｐｍ（８，ｂｒ　ｔ
３Ｈ）、δ＝６．５ｐｐｍ（ｂｒ、　２Ｈ）、δ＝７．
２ｐｐｍ（ｂｒ、　２Ｈ）、δ＝７．６−９．０ｐｐｍ
Ｃｒｎ、　１２Ｈ）ＩＲ：３４００ｚ−’　（ｂｒ）、
３１６０．２９７０．１８１０（Ｗ）、１７８５（ｗ）
、１７４０（ｓ）、１６９５（ｍ）、１６００（Ｗ）、
１５５５（ｗ）、１５１０（ｍ）、１３７０（ｍ）、１
２９０（ｍ）、１２５０（ｍ）、１２１０（ｍ）、１１
７０（ｍ）マススペクトル：ｍ／Ｚ：６５２Ｍ　　（カ
チオン）実施例　２ Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−Ｃ４−（４−スク
シンイミジル−オキシカルボニルブチル）ベンゼンスル
ホニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボキ
サミド−フルオロスルホネート（１１）はベンジル４’
−（Ｎ−（４−メトキシフェニル）スルフアミ）’）−
５−フェニルノｑレレートＶ）およびアクリジン−９−
カルボニルクロライド塩酸塩（２）から出発して（６）
の合成と同様にして製造される。それぞれの合成段階で
の収率および分光特性を以下に示す。

Ｎ−（４−メトキシフェニル）　−Ｎ　−［４−（４−
ベンジルオキシ力ルポニルプチル）−ベンゼンスルホニ
ルコアクリジン−９−カルボキサミドり 収４：４０チ、粘稠な油状物、一部凝固ＯＮＭＲ（ＣＤ
ＣＩ、１００ＭＨｚ）：δ＝２．８５（ｍ、４Ｈ）、δ
：２．４５ｐｐｍ（ｔ、ｂｒ、２Ｈ）、δ＝２．８ｐｐ
ｍ（ｔ、　ｂｒ、　２ｕ）、δ＝３．５ｐｐｍ（ｓ、３
Ｈ）、δ＝５．１５ｐｐｍ（ｓ、２Ｈ）、δ−＝ｓ、ｓ
ｐｐｍ（＋Ｌ　２Ｈ）、δ＝６．９　ｐ　ｐ　ｍ　（ｄ
ｙ　２　Ｈ）、δ＝７．３−８．３ｐｐｍ　（ｍｌ　１
７Ｈ）Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−（４
−カルボキシブチル）ベンゼンスルホニル〕−アクリジ
ン−９−カルボキサミド臭化水素酸塩（９）収−＄：９
５％、融点；１５５〜５℃（分解）。

ｈＴＭＲ（ＤＬ４８０．１００ＭＨｚ）　：δ＝１．７
ｐｐｍ（ｓ、　ｂｒ、　４Ｈ）、δ＝２．３ｐｐｍ（ｔ
、ｂｒ、２Ｈ）、δ＝２．８ｐｐｍ（ｓ、ｂｒ。

２Ｈ）、δ＝３．５ｐｐｍ（ｓ、　ｂｒ、　３Ｈ）、δ
＝６．５ｐｐｍ（ｂｒ。

２Ｈ）、δ＝７．０５ｐｐｍ（ｂｒ、２Ｈ）、δ＝７．
５−８．５ｐｐｍ（ｍ　＋　１２　Ｈ） Ｎ−（４−メトキシフェニル）　−Ｎ　−Ｃ４−＜４−
スクシンイミジルオキシカルボニルブチル）−ベンゼン
スルホニルコアクリジン−９−カルボキサミド（１０） 収率：２５％、融点＝７５〜８０℃（分解）。

ＮＭＲ（ＤＭＳｏ、１００ＭＨｚ）：δ＝１８ｐｐｍ（
ｂｒ、４Ｈ）、δ＝２．３ｐｌ）ｍ（Ｓｔ　２Ｈ）、δ
＝２．８５ｐｐｍ（ｓ、ｂｒ、６Ｈ）、δ−”＋、５ｐ
ｐｍ（ｓ、ｂｒ、３Ｈ）、δ＝６．５ｐｐｍ（ａ、ｂｒ
。

２Ｈ）、δ＝７．０５ｐｐｍ（ｄ、ｂｒ、２Ｈ）、δ＝
７．５−８．３　ｐｐｍ（ｍ、１２Ｈ） Ｎ−（４−メトキシフェニル）　−Ｎ　−Ｃ４−（４−
スクシンイミジルオキシカルボニルブチル）−ベンゼン
スルホニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カル
ボキサミドーフルオロスルホネ　−　ト　（１１） ３Ｃ 収率：９０チ ＮＭＲ（ＤＭ８０，１００ＭＨｚ）：δ二１．８ｐｐｍ
（ｂｒ、４Ｈ）、δ＝２．３ｐｐｍ（ｓ、ｂｒ、２Ｈ）
、δ＝２．８ｐｐｍ（ｓ、ｂｒ。

６Ｈ）、δ＝３．５ｐｐｍ（ｓ、ｂｒ、３Ｈ）、δ＝４
．８ｐｐｍ（ｂ　ｒ　＊　３　Ｈ）、δ＝６．５ｐｐｍ
（ｂｒ＋　２Ｈ）、δ＝７．０５ｐｐｍ（ｂｒ、２Ｈ）
、δ＝７．５−９．０ｐｐｍ（ｍ、１２Ｈ）ＩＲ：＋３
４０ｍ−１（ｂｒ）、３０６０（Ｗ）、２９３０（ｍ）
、２８７０（ｗ）、１８１０（Ｗ）、１７８５（ｗ）、
１７４０（ｓ入１６９５（ｍ）、１６００（Ｗ）、１５
５０（ｗ）、１５１０（ｍ）、１４６０（ｗ）、１３７
０（ｍ）、１２９０（ｓ）、１２５０（ｓ）、１２０５
（Ｓ）、１１７０（ｓ） マススペクトル：　ｍ／ｚ＝６８０Ｍ＋（カチオン）実
施例　６ Ｎ　−（２，４−ジメトキシフェニル）　−Ｎ−（４−
（２−スクシンイミジルオキシカルボニルエチル）ヘン
ゼンスルホニル）ｄｏ−メチル−アクリジニウム−９−
カルボキサミドーフルオ０７、　／Ｉ／ホネート（１６
ａ）はベンジル４’　−［：Ｎ−（２，４−ジメトキシ
フェニル）スルファミド）−３−フェニルプロピオネー
ト（１２ａ）およびアクリジン−９−カルボニルクロラ
イド−塩酸１話（２）から出発して（６）の合成と同様
にして製造される。

それぞれの合成段階での収４−Ｈよび分光特性を以下に
示す。

Ｎ　−（２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−（４−（
２−ベンジルオキ・ジカルボニルエチル）−ベンゼンス
ルホニルコアクリジン−９−カルボキサミド（１３ａ） 収率：５０％、融点ニア４℃ ＮＭＲ（ＤＭ８０．１００ＭＨｚ）　：δ２．９ｐ１）
ｎｎ（ｄ、　ｂｒ、　２Ｈ）、δ＝３．１ｐｐｍ（ｄ、
　ｂｒ、　２Ｈ）、δ＝３．３　ｐｐｍ　（ｓ　＋　３
　Ｈ）、δ＝＝３．４ｐｐｍ（ｓ、　３Ｈ）、δ＝５．
１ｐｐｍ（ｓ、　２Ｈ）、δ＝＝ｓ、９−６．２ｐｐｍ
（ｍｅ　２Ｈ）、δ＝７．０ｐｐｍ（ｄ、　ＩＨ）、δ
＝７．５５ｐｐｍ（Ｓ、　５Ｈ）、δ＝７．５−８．２
　ｐｐｍ（ｍ　、　１２Ｈ）Ｎ−（２，４−ジメトキシ
フェニル）−Ｎ−（４−（２−カルボキシエチル）ヘン
ゼンスルホニル〕−アクリジン−９−カルボキサミド県
化水素醜塩（１４ａ） 収メ：９５ｔＳ ＮＭＲ（ＤＭ８０，１００ＭＨｚ）：δ＝２．７５　ｐ
　ｐ　ｍ　（ｄ　Ｔ　ｂ　ｒ　ｒ　２　’）、δ−＝３
．０５ｐｐｍ（ｄ、ｂｒ、２Ｈ）、δ＝３．：５ｐｐｍ
（ｓ、５Ｈ）、６２６．５９４ｍ（ｓ、６Ｈ）、’　＝
５．９５−６−５　ｐｐｍ　（Ｉｌｌ、　２　Ｈ）、δ
＝７．０５ｐｐｍ（ｄｏ　ＩＨ）、δ＝７．６−８．６
ｐｐｍ（ｍ、１２Ｈ）、δ＝９．２ｐｐｍ（ｓ、ｂｒ、
２Ｈ） Ｎ　−（２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−［：４−
（２−スクシンイミジルオキシカルボニルエチル）−ベ
ンゼンスルホニルコアクリジン−９−カルボキサミド（
１５ａ） 収量：４５チ、融点二〜１０５°Ｃ（分どイ）。

ＮＭＲ（ＤＭ８０，１００ＭＨｚ）：δ＝２．９ｐｐｍ
（ｓ、４Ｈ）、δ；３ｐｐｍ（ｂｒ、２Ｈ）、δ＝３．
２ｐｐｍ（ｓ、３／Ｈ）、δ−＝３．４ｐｐｍ（ｓ、３
Ｈ）、δ＝５．９−６．３ｐｐｍ（ｍ、２Ｈ）、δ＝７
．０ｐｐｍ（ｄ、ＩＨ）、δ−＝７．５−８．４ｐｐｍ
（ｍ、１２Ｈ）ＩＲ（ＫＢｒ−ディスク）：　３４４（
ｂｍ　　（ｂｒ）、３０６０（ｗ）、２９３０（Ｗ）、
２８５０（ｗ）、１８１５（Ｗ）、１７８５（ｗ）、１
７４０（ｓ）、１６９５（ｍ）、１６００（Ｗ）、１５
１０（ｍ）、１４６０（Ｗ）、１４４０（Ｗ）、１３６
５（ｍ）、１３２０（ｗ）、１２９０（ｗ）、１２４０
（ｍ）、１２１０（ｓ）、１１６５（ｍ）、１０８５（
ｍ） Ｎ　−（２，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−（４−（
２−スクシンイミジルオキシ−カルボニルエチル）ベン
ゼンスルホニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−
カルポキサミドーフルオロスルホネ　−　ト　（１６ａ
） 収−＄：８０チ、融点：〜１５５℃（分ｍ）。

ＮＭＲ（ＤＭ８０，１００ＭＨｚ）：δ＝２−９　ｐ　
ｐ　ｍ　（ｓ　ｔ　４　Ｈ）、δ＝２．９５−４．２ｐ
ｐｍ（ｍ、　１０Ｈ）、δ＝４．８−５．０　ｐ　ｐ　
ｍ（Ｓ、　Ｓ、　３Ｈ）、δ＝６．０５−６．２５ｐｐ
ｍ（ｍ、ＩＨ）、δ＝７．６−９．０ｐｐｍ（ｍ、　１
４Ｈ）ＩＲ（ＫＢｒ−ディスク）　：　３４３０ｃｙ−
１（ｍ）、２９５０（？ｒ）、２８７０（ｗ）、２Ｂ２
５（ｗ）、１８１０（Ｗ）、１７８０（６）、１７５０
（ｓ）、１６９５（ｍ）、１６１０（ｍ）、１５５５ｍ
）、１５１０（ｍ）、１４６５（ｍ）、１３８０（ｍ）
、１２８５（ロ））、１２５０（ｍ）、１２１０（ｓ）
、１１７０（ｍ）実施例　４ Ｎ−（３，４−エチレンジオキシフェニル）−Ｎ−（４
−（２−スクシンイミジルオキシカルボニルエチル）ベ
ンゼンスルホニル）−１０−メチルアクリジニウム−９
−カルボキサミド−フルオロスルホネート（１６ｂ）は
ベンジル４’−（ｈｑ−（３，４−エチレンジオキシフ
ェニル）スルファミドツー３−フェニルプロピオネート
（１２ｂ）およびアクリジン−９−カルボニルクロライ
ド塩酸塩（２）から出発して実施例１と同様にして合成
される。それぞれの工程の収率ならびに分光特性を以下
に示す。

Ｎ　−（３，４−エチレンジオキシフェニル）−Ｎ−Ｃ
４−（２−ベンジルオキシカルボニルエチル）−ベンゼ
ンスルホニルコアクリジン−９−カルボキサミド（１５
ｂ） 収率：５０係、融点：９１．５℃。

ＮＭＲ（ＤＭ８０．１００ＭＨｚ）　：δ＝゛２．９ｐ
ｐｍ（ｄ、　ｂｒ、　２Ｈ）、δ３．１ｐｐｍ（ｄ、ｂ
ｒ、　２Ｈ）、δ＝４．０ｐｐｍ（ｓ、　Ｂｒ、　４Ｈ
）、δ＝５−１ｐｐｍ（ｓ、　２Ｈ）、δ＝６．５−６
．８ｐｐｍ（ｍ、　３Ｈ）、δ：Ｚ３ｐ　ｐ　ｍ　（５
ｗ　５　Ｈ）、δ＝７．６−８．３ｐｐｍ（ｍ、　１２
Ｈ）。

Ｎ　−（３，４−エチレンジオキシフェニル）−Ｎ−（
４−（２−カルボキシエチル）−ヘンゼンスルホニル〕
アクリジン−９−カルボキサミド−臭化水素酸塩（１４
ｂ） 収率：９５％、融点：　＞２００℃。

ＮＭＲ（ＤＭ８０．１００ＭＨ２）　：δ＝２．７ｐｐ
ｍ（ｍ、　２Ｈ）、δ＝３．０５ｐｐｍ（ｍ、　２Ｈ）
、δ＝４．０ｐｐｍ（Ｓ＋　ｂｒ、　４Ｈ）、δ＝６．
３−６．８ｐｐｍ（ｍ、　３Ｈ）、δ−ｚｓ−ａ、６ｐ
ｐｍ（ｍ。

１２Ｈ）、δ＝９．６ｐｐｍ（ｓ、　ｂｒ、　２Ｈ）。

Ｎ　−（３，４−エチレンジオキシフェニル）−Ｎ−［
４−（２−スクシンイミジルオキシカルボニル−エチル
）ヘンゼンスルホニル〕アクリジン−９−カルボキサミ
ド（１５ｂ） 収４：４５チ、融点：１４０℃（分解）。

ＮＭＲ（ＤＭＳｏ、　１００ＭＨｚ）　：δ＝２゜７−
２．９ｐｐｍ（ｄ、　ｓ、オーバーラツプ、６Ｈ）、δ
−＝３．０ｐｐｍ（ｄ、２Ｈ）、δ＝４．０ｐｐｍ（ｓ
、ｂｒ、４Ｈ）、δ＝６．５−６．８ｐｐｍ（ｍ、３Ｈ
）、δ＝７．５−８．４ｐｐｍ（ｍ、１２Ｈ）ＩＲ（Ｋ
Ｂｒ−ディスク：　５４２　（ｈｓ−’　（ｂｒ　）、
！０６０（ｍ）、２９８０（ｍ）、２９３０（ｍ）、１
８１０（ｗ）、１７９０（ｗ）、１７４０（ｍ）、１６
９５（ｓ）、１５９０（ｍ）、１４６０（ｗ）、１４３
０（ｗ）、１４１０（Ｗ）、１３７０（ｍ）、１′５０
０（ｍ）、１２２５（ｓ）、１１７５（ｓ） Ｎ　−（３，４−エチレンジオキシフェニル）−Ｎ−（
４−（２−スクシンイミジルオキシ−カルボニルエチル
）ヘンゼンスルホニル）−１０−メチルアクリジニウム
−９−カルボキサミド−フルオロスルホネート（１６ｂ
） 収＄＝８０チ、融点：〜１１０℃（分解）。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，１００ＭＨｚ）　：δ＝２．８５ｐ
ｐｍ（ｓ、　４Ｈ）、δ＝３．０−３．３ｐｐｍ（ｓ、
　Ｓ、　ｂｒ、　４Ｈ）、δ＝３．８−４．５　ｐｐｍ
（ｍｔ　ｂｒ＋　４Ｈ）、δ＝４．７５−５．１　ｐ　
ｐｍ　（ｓ、肩のあるｂｒ。

５Ｈ）、δ＝６．３−９０　ｐｐ　ｍ　（ｍ　＊　１５
　Ｈ）実施例　５ Ｎ−（４−カルボキシフェニル）−４−）ルエンスルホ
ンアミド（５−１） 水２．５を中の炭酸水素ナトリウム２５２ｇ（３モル）
および４−アミノ安、＠査酸１３９．ＨＩ（１モル）の
混合物中にイソプロピルエーテル６０〇−中の４−トル
エンスルホニルクロライド１９０．５９（１モル）の混
合物を２０〜６０℃で滴下する。この混合物をスルホニ
ルクロライドが消費されるまではげしく２〜４時間攪拌
する。水ｍ　ｒ＆を分離し、−塩酸を用いてｐＨ１にＡ
盛しそして沈殿を酢酸プロピル中にとる。抽出液を２ｎ
塩酸で２回そして水で１回洗い、硫酸す）　ＩＪウムで
乾燥しそして蒸発させる。２４０９　（理論罎の８２．
５チ）のＮ−（４−カルボキシフェニル）−４−）ルエ
ンスルホンアミドが得られる。

ＩＨ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）：δ＝２−５　（８，Ｃ
Ｈ３）　）　７．１　（ｄｅ芳香族、２Ｈ）；７．３（
ｄ、芳香族、　２Ｈ）　；７．６−７．９（ｍｌ芳香族
、４Ｈ）；１０．７５（巾広）　；　１２．７　Ｃ巾広
）Ｎ−（Ｓ−ベンジルオキシカルボニルフェニル）−４
−トルエンスルホンアミド（５−２）ジメチルホルムア
ミド１０〇−中の１１．６１（４０ミＩＪモル）のＮ−
（４−カルボキシフェニル）−４−トルエンスルホンア
ミド、５．０６ｇ（４０ミリモル）のベンジルクロライ
ドおよび５．２０９＜４４ミリモル）のジイソプロピル
エチルアミンの溶成を１４０℃で４時間加熱する。反応
終了後混合物を真空下に蒸発させ、残留物を酢酸プロピ
ル中にとり、この溶液を２ｎ塩酸で２回、そしてμ（υ
ＮａＨＣＯ３溶漱で２回洗い、硫酸す）　＋Ｊウムで乾
燥しそして蒸発させる。１１８９（理、Ｑ檜の７８チ）
のＮ−（４−−＜ンジルオキシカルポニルフェニル）−
４−トルエンスルホンアミドが得られ、これをメタノー
ルから再結晶する。

ＩＨ−ＮＭＲ（ＤＭ８０　ｄ６）　：δ＝２．５　（１
３，ＣＨｓ　）　１５．３（Ｓ＋ＣＨｚ）；Ｚｌ−Ｚ３
（ｄｄｙ　４芳香族Ｈ）　’、　７．４　（ｓ、　Ｃ６
Ｈ３）　；７．７−７．９（ｄｄ、　４　ｙｆ香族Ｈ）
；１０．８（巾広、ＮＨ）Ｎ−（４−ベンジルオキシカ
ルボニルフェニル）−Ｎ−（４−トルエンスルホニル）
−アクリジン−９−カルボキサミド（５−３） 無水テトラヒドロフラン２０ゴ中の１．ｉ（４ミリモル
）のＮ−（４−ベンジルオキシカルボニルフェニル）−
４−）ルエンスルホンアミド、１２３９（４，４ミリモ
ル）のアクリジンカルボニルクロライド塩酸塩および０
．０２２のジメチルアミノヒリジンの溶液中にテトラヒ
ドロフラン１〇−中の２．１＋ｄ（１５ミリモル）のト
リエチルアミンを２５℃で滴下する。温度を６０℃まで
上界させる。反応終了後晶出した生成物をメタノールと
攪拌して吸引濾過しそして酢酸エチルから再結晶する。

収量：１５７ノ（理論量の６７．０チ）。

ＩＨ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）　：δ＝２．５　（ｓ、　
ＣＨ５）　’、　５．２　（ｓ、　ＣＨ２）　、’７３
（ｓ、　Ｃ６Ｈｓ）、７．０−８．２　（ｍ、　ｊ　６
芳否族Ｈ）Ｎ−（４−カルボキシフェニル）−Ｎ−（４
−トルエンスルホニル）−アクリジン−９−カルボキサ
ミド臭化水素酸塩（５−４） １．１７！ＩＩ’（２ミリモル）のＮ−（４−ベンジル
オキシカルボニルフェニル）　−Ｎ　−（４−）　ルエ
ンスルホニル）−アクリジン−９−カルボキサミ　ドを
６６チ　ＨＢｒ　／氷酢酸ヂ容故１０ｄとづ費ゴ半Ｆに
６元に４時間加熱する。冷却後沈殿を吸引濾過しそして
（組下に乾燥する。収１ｆ：１．００９（理論ｌの８７
チ）。

ＩＨ−ＮＭＲ（ＴＦＡ）　：δ：２．６（ｓ、　ＣＨｓ
）　；７．３−８，６（ｍ、　１６芳査族Ｈ）；１１．
６５（ｓ、ＮＨ）；ＭＳ：４９６（Ｍ＋）５Ｎ　−（４
−スクシンイミジルオキシカルボニルフェニル）−Ｎ−
（４−）ルエンスルホニル）−アクリジン−９−カルボ
キサミド（５−５）無水テトラヒドロフラン２５ｒｎｔ
中のＣ１，５７ｇ（１ミリモル）のＮ−（４−カルボキ
シフェニル）−Ｎ−（４−ｈルエンスルホニル）−アク
リジン−９−カルボキサミド臭化水素酸塩３よび０．２
Ｈ＋（２ミリモル）のトリエチルアミンの浴液に一１５
℃で攪拌しながら０．１１９（１ミリモル）のクロロ蟻
酸エチルを加える。この混合物を同じ温度で１詩間攪拌
し次に０，１２り（１ミリモル）のＮ−ヒドロキシスク
シンイミドを加える。さらに１時間後反応混合物を室温
で１５時間数１１する。

これを真空下に蒸発させ、残留物を酢酸エチル中にとり
、この６欣を水、炭を没水素ナトリウム溶戚によび水で
洗いそして硫酸ナトリウムで乾燥する。蒸発させると目
的化合物０．４２９（理論量の７０，８チ）が潜られる
。

＋　ＩＩ−ＮＭＲ（ＴＦＡ　）　：δ−２，６（ｓ、　
ＣＨ５）、３．１　（ｓ、ＣＨ２−ＣＨ２）、７．０−
８．６（ｍ、　１６芳δ族Ｈ）Ｎ　−（４−スクシンイ
ミジルオキシカルボニルフェニル）　−Ｎ　−（４−）
ルエンスルホニル）ｄｏ−メチルアクリジニウム−９−
カルボキサミドフルオロスルホネート（５−６）１．２
−　’５りｏロエタン２０Ｉｎ１．中の０．５９９（１
ミリモル）のＮ−（４−スクシンイミジルオキシカルボ
ニルフェニル）−Ｎ−（４−）ルエンスルホニル）−ア
クリジン−９−カルボキサミドの溶液中に攪拌下に２５
°Ｃで０．８５ｆ７（７，５ミリモル）のメチルフルオ
ロスルホネートを加える。反応生成物は４１１５間内で
沈殿する。Ｇ！引Ｆ　ｊ４Ｌ　を燥すると目的化合物０
．４１（理論量の６０．８チ）が得られる。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＴＦＡ）　：δ＝２．６（ｓ　＋　Ａ　
ｒ　−ＣＨｓ　）　ｓ　５−　’ｒ　（８ｙＣＨ２−Ｃ
Ｈ２）　；４．９（Ｓ、　Ｎ−ＣＨ５）　；７．５−８
．８（ｍ、　１６芳香夜Ｈ） 実施例　６ 実施例５と同じ方法でＮ−（４−カルボキシメチルフェ
ニル）−４−トＡ・エンスルホンアミドかうＮ　−（４
−スクシンイミジルオキシカルボニルメチルフェニル）
−Ｎ−（４−）ルエンスルホニル）−ｉｏ−メチルアク
リジニウム−９−カルボキサミドフルオロスルホネート
が得られる。

Ｎ−（４−カルボキシメチルフェニル）−４−トルエン
スルホンアミド（６−１） Ｉ　Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）　：δ＝２−５　（ｓｅ　
ＣＨ５）　ｔ　５−５　（Ｓ　Ｔ　ＣＨ２）　；７．０
（ＡＢ、　Ｃ６Ｈ４）；７．３−７．６（ＡＢ；Ｃ６Ｈ
４）　；１０．２（ｓ。

ＮＨ） Ｎ−（４−ベンジルオキシカルボニルメチルフェニル）
−４−）ルエンスルホンアミド（６−２）収４：理−ｔ
ｉｔの３５％。

１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ＝２．６（ｓ、ＣＨ３）
；３．６（Ｓ。

ＣＯＣＨ２）　ｓ　ｓ、１　（Ｓ、　０ＣＨ２）　ｔ　
６−９−１７　（ｍ、　１３芳香族）（）；１０．２（
３１ＮＨ） Ｎ−＜４−−：ンジルオキシカルボニルメチルフェニル
）−Ｎ−（４−）ルエンスルホニル）−アクリジン−９
−カルボキサミド（６−３）収率：理論量の３５チ ＩＨ−ＮＭＲ（ＣＤＣＨ５）　；δ＝２−５５　（ｓｔ
　ＣＨｓ　）　ｓ　３−６（Ｓ。

Ｃ０ＣＨ２）　；５．０（８，０−ＣＨ２）、６．７−
８．２　（ｍ、　２１芳ｉｉ頒Ｈ） Ｎ−（４−カルボキシメチルフェニル）　−Ｎ　−（４
−）ルエンスルホニル）　−７りＩＪ　’、５ンー９−
カルボキサミド−臭化水素酸塩（６−４）収４：理論壜
の９５チ。

ｊＨ−ＮＭＲ（ＴＦＡ）　；δ＝２．６５（ｓ、　ＣＨ
５）　；３．５５（ｓ、ＣＨ２）；６．８−８．６（ｍ
、　１６芳香族Ｈ）Ｎ−（４−スクシンイミジルオキシ
カルボニルメチルフェニル）−Ｎ−（４−）ルエンスル
ホニル）−アクリジン−９−カルボキサミド（６−５）
収イ：理−゛ａ口の７１チ。

ＩＨ−ＮＭＲ（ＴＦＡ）：δ”２−６５　（ｓｔ　　）
　）’：ｘ、　７−　ＣＨ３）　ｓ　３．０（ｓ、　Ｃ
Ｈ２−ＣＨ２）　；　３．（Ｓ　（ｒｉｊ広、ＣＯＣＨ
２）　；　６．９−８．５　Ｃｒｌｌｔ芳１シ族） Ｎ−（４−スクシンイミジルオキシカルボニルメチルフ
ェニル）−Ｎ−（４−）ルエンスルホ二＃）−１０−メ
チルアクリジニウム−９−カルボキサミドーフルオロス
ルホネー）　（６−６）収率：理涜Ｕの８０チ。

ＩＨ−ＮＭＲ（ＴＦＡ）：δ＝２．６　（ｓ、　）　ル
ｘ　ン−ＣＨ３）　；　２．９（ｓ　＊　ＣＨ２−ＣＨ
２）　ｔ　１６　（巾広、　ＣＯＣＨ２）　；　４．９
　（Ｓ。

Ｎ−ＣＨ５）；６．８−８．９（ｍ、芳香族）実施例　
７ 実施例５におけると同じ方法でＮ−（４−（２−カルボ
キシエチル）−フェニル）−４−トルエンスルホンアミ
ドからＮ−（４−（２−スクシンイミジルオギシ力ルポ
ニルエチル）−フェニル）　−Ｎ　−（４−トルエンス
ルホニル）−１０−メチル−アクリジニウム−９−カル
ボキサミド−フルオロスルホネートが優られる。

Ｎ−［４−（２−カル・ビキシエチル）−フェニル）−
４−）ルエンスルホンアミ）’（７−１）収メ：理１−
１の４４チ ＩＨ−ＮＭＲ（ＤＭＳ＋））　：δ＝２．３（ｓ、　Ｃ
Ｈ５）　；２．４−２．８（ｍ。

ＣＨ２−ＣＨ２）　；７．０（Ａｆｆｌ、　４＋Ｑ　；
７．２−７．８（ＡＢ、　４Ｈ）　；１０．１　（ｓ、
　ＮＨ） Ｎ−（４−（２−ベンジルオキシカルボニルエチル）−
フェニル）−４−トルエンスルホンアミ　ド　（７−２
） 収＄：理１、脅主Ｊの７８俤。

ＩＨ−ＮＭＲ（ＣＤＣｔｓ　）　：δ＝２．３５（ｓ、
　ＣＨｓ）；２．４−３．０（ｍ、　ＣＨ２−ＣＨ２）
；５．１　（ｓ、　０−ＣＨ２）　；７．０−７８（１
５芳６叙Ｈ，ＮＨ） Ｎ−（４−（２−ベンジルオキシカルボニルエチル）−
フェニル］−Ｎ−（４−トルエンスルホニル−アクリジ
ン−９−カルボキサミド（７−収４：理論１の７７チ。

ＩＨ−ＮＭＲ（ＣＤＣ／ｓ　）　：δ＝２．２−２．８
（ｍ、　７Ｈ）　；５．０（ｓ。

ＣＨ２）；６．６５−７．０（ＡＢ、４芳香族ｕ　）　
；７．３−８．５（ｍ、１７芳香族Ｈ）、 Ｎ−［４−（２−カルボキシエチル）−フェニル）−Ｎ
−（４−）ルエンスルホニル）−アクリジン−９−カル
ボキサミド−臭化水素酸ｊ詔収率：理論はの６５チ。

＋Ｈ−ＮＭＲ（Ｃ’Ｄ５０Ｄ）：δ＝２−１−２．８　
（ｍ、　ＣＨ２−ＣＨ２）　ｐ２．５（８，ＣＨ３）；
６．７−８．５（１６芳香族Ｈ）Ｎ−（４−（２−スク
シンイミジルオキシカルボニルエチル）−フェニル）−
Ｎ−（４−１ルエンスルホニル）−アクリジン−９−カ
ルボキサミド（７−５） ○ 収率：理論量の９０チ ＩＨ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）：δ＝２．６　（Ｂ、　Ｃ
Ｈ３）　；　２．７　（巾広。

Ｃ）（２−ＣＨ２）　ｐ　２．８　（ｓ、　ｃＨ２−ｃ
Ｈ２）　；　６．６−８．３（１６芳香族Ｈ） Ｎ−（４−（２−スクシンイミジルオキシカルボニルエ
チル）−フェニル）−Ｎ−（４−）ルエンスルホニル）
−１０−メチル−７クリジニウムー９−カルポキサミド
ーフルオロスルホネ収率：理論値の８４チ。

ＩＨ−ＮＭＲ（ＴＦＡ）：δ＝２゜６（ｓ、ＣＨｓ）；
２．３−３．３（巾広）ζツククラランド、１１Ｈ；ｓ
、　３．１　）　；４．９（ｓ、　Ｎ−ＣＨ５）：６．
７−８．８　（１６芳査族Ｈ） 実施例　７ａ 前出実施例におけると同様にしてＮ−［４−（Ｎ−メチ
ルモルホリノ−Ｎ−２−エトキシ）−フェニル）−Ｎ−
４４−（２−スクシンイミジルオキシカルボニルエチル
）−フェニルスルホニル）　−１０−メチルアクリジン
−９〜カルボキサミドージイウムー：）−７／Ｉ／オロ
スルホネートが得られる。この方法における異なるニー
を以下の反応において記載する。

３−　（４−クロロスルホニルフェニル）−フロピオン
酸第三ブチルエステル（７−ａｌ）２５９　（０，１モ
ル）の３−（４−クロロスルホニルフェニル）−フロピ
オン酸、１２ｍの第三ブタノール、６０ｄのイソブチン
２よび３−の−硫酸を一１５℃で混合しそしてオートク
レーブ中至温で２４時間はげしく攪拌する。反応混合物
を再び一１５℃に冷却し、過剰の炭酸水素ナトリウムＢ
ｅ中にかきまぜ入れ、次にこれをメチレンクロライドで
抽出しそしてえ≦りに抽出ｌ！（７ｉｌ−真空下に蒸発
させる。収率：２０．４り（理論１４の６７チ）。この
生成物をヘキサンから再結晶する。

１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２　）　：δ＝１４　（ｓ　）
　；　２．６　（ｍ　）　；　Ｎｏ（ｔ）　；７．４　
（ｍ）　：　７．９５　（ｍ）ＭＳニー＝３０５（Ｍ　
　Ｈ） ３−（４−クロルスルホニルフェニル−プロピオン酸は
２−フェニルプロピオン酸およびクロルスルホン酸から
知られた方法でＡｄ’Ｌ、た。

４−（モルホリノ−Ｎ−２−エトキシ）アニリン（７−
ａ２） Ｈ２ ４−（モルホリノ−Ｎ−２−エトキシ）−二トロベンゼ
ン２５り（０，１モル）を５０％哉堪酸４００ゴ中匝船
ｑ貝粒７５７と４時間還流する。

この混合物を冷却後５５チ塩酸４００ｄ中に注入し、こ
の混曾物を・ｆソプロビルエーテルで抽出しそして有機
相を乾燥し蒸発させる。目的化合物２０９（理論はの９
０％）がｆｊもれる。

ＩＨ−ＮＭＲ（ＣＤＣｔｓ）：δ＝２．５　（ｔ　）　
ｓ　２−７　（ｔ　）　；　３，５　（１−１１広）；
’５．７　（ｔ）　ｐ　４．０　（ｔ）　ｐ　６−６　
（ｍ）ＭＳニー＝２２２（Ｍ　） ニトロ化合物をメタノール中パラジウム／獣炭を用いて
水素ｇ加することによっても同じ化合物が得られる。こ
のニトロ化合ヤＩはＢｕｌｌ、　Ｓａｃ。

Ｃｈｉｍ、　Ｆｒａｎａｅ　１９５５．１３５３〜６２
のｓ己ｄ　ｉ’ｃ従い、１１１ｄされた。

Ｎ−（４−（モルホリノ−Ｎ−２−エトキシ）−フェニ
ル：］−Ｎ−［４−（２−第三ブトキシカルボニルエチ
ル）−７エニルスルホンアミド〕（７−ａ３） ハ メチレンクロライド１５〇−中の９．３９　（３０ミリ
モル）の第Ｅブチルｌ−クロロスルホニルフェニルプロ
ピオネ−）、６．９９の４−（モルホリノ−Ｎ−２−エ
トキシ）−アニリンおよび０．６７のジメチルアミノピ
リジンの溶成を層温で１０時開放ばした透明なものを飽
和炭酸水素ナトリウム溶液で洗い、狛まで傭稲しそして
９０チメチレンクロライドおよび１０チメタノールのｌ
混合物を用（・てシリカゲルカラムでクロマトグラフィ
ーする。醪出液の主フラクションを蒸発させる。収量：
９）（理論量の６１２％）。

１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１５）：δ＝ｔ３５（ｓ）；２．
５（ｍ）；２．７−３．０（ｍ）；３．７（ｍ）；４．
０（ｔ）；６．７−７．０（ｍ）；７．２−７．７６ｒ
、）ＭＳ：三＝４９１（Ｍ　Ｈ） Ｎ−〔４−モルホリ／−Ｎ−２−エトキシ）−フェニル
）−Ｎ−（４−（２−ｉ三ブトキシカルボニルエチル）
−フェニルスルホニル）−９−アクリジンカルボキサミ
ド（７−ａ４）メチレンクロライド５〇−中の２．０９
　（４，１ミリモル）のＮ−（４−（モルホリノ−Ｎ−
２−エトキシ）−フェニル）−Ｎ−［１−（２−ｍＥブ
トキシカルボニルエチル）−フェニルスルホンアミド〕
のはげしく攪拌されているｒｄ　Ｄに６３％水酸化ナト
リウム水溶投５ｏ−、ジメチルアミ／ピリジン３０η、
テトラブチルアンモニウムクロライド１．２　Ｌｌ１１
６よび９−アクリジンカルボニルクロライド塩酸塩１５
５９（５，６ミリモル）’ｔ　＋１ｍ次加える。６時間
後、仔様相を分離し、水洗し、硫酸す）　ＩＪウムで乾
燥しそして蒸発させる。収ｉｊ１′：　２．　ａ　９　
（理、−けの９８肇）１　）（−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ　）
　：δ：　１４（ｓ）：２．３−２．５（ｍ）；２．５
−２．８（ｍ）　；３．０−３．３（す；３．６−３．
９（ｍ）　；６．３（（１）；６．９（ｄ）；７．４−
８．３（ｍ） ＭＳ二二＝６９５（Ｍ） Ｎ−［４−（モルホリノ−Ｎ−２−エトキシ）−フェニ
ル）−Ｎ−［４−（２−カルボキシエチル）−フェニル
スルホニル］−９−７り’）ジンカルボキサミド（７−
ａ５） ０、７９　（１ミリモル）のＮ−〔４−モルホリＯ）−
２−エトキシ）−フェニル］−Ｎ−１：４−（２−第Ｅ
７’トキ７カルポニルエチル）−フェニルスルホニルツ
ー９−アクリジンカルボキサミドをトリフルオロ酢酸５
１！ｉｔ中に溶（・イさせ、室温で−ダ装置する。この
混合物を水流ポンプ真空下に蒸発させ、９３留物を水に
浴屏させそして濾過した溶液を酢酸ナトリウムを用いて
ｐＨ４に中和する。得られる生成物をメチレンクロライ
ドで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥しそして蒸発させる
。収量：α６ｇ（理１鷹の９４％）。

’Ｈ−ＮＭＲ（ｐＭＢ□）　：δ＝２．６−３．０（ｍ
）　；３．０−３．３（ｍ）　；３−６−４−０　（ｍ
　）　；４−０−４．４　（ｍ　）　ｐ　５．８−６．
６　（ｍ　）　ｔ　６．８−７、ＤＣｍ）　；７３−８
．４Ｃｍ） ＭＳニー＝６５９（Ｍ　　） Ｎ−［４−モルホリノ−Ｎ−２−エトキシ）−フェニル
］−Ｎ−Ｃ４−（２−スクシン−イミジルオキシカルボ
ニルエチル）−フェニルスルホニルツー９−アクリジン
カルボキサミド（７−ａ６）収率：理、補壕の９５俤。

ＩＨ−ＮＭＲ（ＣＤｆｊ３　）　：δ＝２．３−２．７
　（ｍ）　；２．８（ｓ）　；２．９−３．４（ｍ）　
；３．５−３．９（ｍ）　；３．９−４．５（ｍ）　；
６．２−７．０（ｍ　）　ｐ　７．３−８．３　（ｍ　
）Ｍｓニア５６（Ｍ　　） Ｎ−Ｃ４−（Ｎ−メチルモルホリ／−Ｎ−２−エトキシ
）−フェニル）−Ｎ−（：４−（２−スクシンイミジル
オキシカルボニルエチル）−２エニルースルホニル］−
１ｏ−メチル−アクリジン−９−カルボキサミドジイウ
ムージーフルオロスルホネート（７−ａ７） 収率：理論遣の８４チ この化合物は水中に誠色ツ明にＭ＋−ｉｌしうる。

ＩＨ−ＮＭＲ（ＤＭｓＯ）　：δ＝２．８５（ｓ）；３
゜１　（Ｓ）　；３．２−４．４（ｍ）：４−７５（ｓ
Ｌ６．４−８．３（ｍ）寿施例　８ ＴＳＨ化学ルミネセンスイムノアッセイのためのトレー
サーの調製 抗体９１μｔ（１００μ９）、実施例１で調製されたア
クリジニウム誘導体（化合物（，５））（アセトニトリ
ル中１岬／Ｎｔ）２０μりおよび接合１ｄ！衝液（０，
０１Ｍ燐酸塩、ｐＨ８，０）６００／’ｔを１５分間イ
ンキュベートする。次にリジン（接合緩衝液中１０■／
１Ｒｔ）２００μｔを加えそしてこの混合物をさらに１
５分間インキュベートする。この反応混合物をＰＤ　１
０カラム（８＠ｐｈａｄｅｘ”　Ｇ　−２５メデイウム
、ビーズ状の架橋デキストランゲル、Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａ社製、スウェーデン）に加え、移動相とシテｐＨ６，
３（１’）　０．１　Ｍｍ酸塩を用イテｍ１ｌｉＩする
。１フラクション当り１０ｒｒｉＪｔ−果める。個々の
フラクションをｄ当に希釈したのち化学ルミネセンス活
性について検査する（酸化剤：α１ＮＮａＯＨ中α１％
　Ｈ２Ｏ２，５５０１１１）。）レーサーフラクション
（第１の活性ビーク）をプールし、４°Ｃで貯蔵する。

ｈ−ＴＳＨ化学ルミネセンスイムノアッセイにすぐ使用
できるトレーサーはＪＪＪ　酸塩緩衝縁（０，ＩＭＪ酸
塩（ｐＨ６，３）、１チツイ一ン’Ｉ’ｗｅ　ｅ　ｎ■
２０（ボ昨チレンソルビタンモノラウレート、例えばＩ
ＣＩ　Ａｍｅｒｉａａｎ　Ｉｎｃ、　ｆＪ、米国）為０
．１％ウシ血清アルブミン、０．１　Ｍ　ＮａＣＬ　Ｎ
　ｏ、ｏ　１％ＮａＮ５　］で適当に希釈することによ
り調製される。

実施例　９ ｈ−Ｔ８Ｈ化学ルミネセンスイムノアッセイ操作標準物
／検体５０μｔおよびトレーサー２００μｔを抗−Ｔ８
Ｈモノクローナル抗体で披涜された試験・α中至温で２
時間振盪した。次に緩衝液および蒸留水を用い１１１ｄ
ずつ３回洗浄した。それぞれ３００μｔずつの活性化試
薬（ｐＨ１−唾液、０．５チＨ２Ｏ２）および３００１
１１の開始剤（０，２Ｎ　Ｎａ０Ｈ）をルミノメータ−
中に２個の分配ｄから試ｄｆに添加することにより発光
させた。測定時間は１秒である。

！３図＆！ヒト甲状腺刺激ホルモ７　（ｈ−ＴＳＨ）に
関するイムノ化学ルミツメトリックアッセイ（ＩＣＭＡ
）の標準プロットの代表的カーブを示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は高められた温度（５０℃）で貯蔵後にそれぞれ
の化学ルミネセンスシグナルの強度全測定した安定性試
験結果を示す。曲線はａ）およびｂ）が本発明によるト
レーサー、　　ａ）は従来法によるトレーサーに関する
。 第２図は４℃で貯蔵後のシグナル強度を示す。 ここでも化合物ａ）から調製されたトレーサーが化合物
０）から得られるものより決定的に安定であることが判
る。 第３図はヒト甲状腺刺激ホルモン（ｈ−ＴＳＨ）１関す
るイムノ化学ルミツメトリックアッセイ（ＩＣＭＡ）の
標準プロットの代表的カーブを示す。 特許出願人　　ヘキスト・アクチェンゲセルシャフト外
２名 ＦＩ（，２ 第０日目を基準とする％ ＦＩ（，３ 相対的な発光単位Ｘ　１０’／秒

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）　式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する化学ルミネセンス性アクリジニウム誘導体およ
   び四級アンモニウム化合物、ここで上式 I 中、 Ｒ＾１は水素、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル
   、アルケニルまたはアルキニル基、またはベンジルまた
   はアリール基であり、 Ｒ＾２およびＲ＾３は水素、１〜４個の炭素原子を有す
   るアルキル基、置換または未置換アミノ基、カルボキシ
   ル基、アルコキシ基、シアノ基、ニトロ基またはハロゲ
   ンであり、 Ｒ＾４は式IIまたはIII ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する基であり、 Ｒ＾５は生物学的に重要な物質中のアミノ、カルボキシ
   ル、チオールまたはその他の官能基と緩和な条件下に選
   択的に結合しうる反応性の基であり、 Ｒ＾６は水素、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル
   、アルケニルまたはアルコキシ基、置換アミノ基、ベン
   ジル基、アリール基、ヘテロアルキル基または複素環式
   基であつて、これらはまたヒドロキシル、アミノ、１〜
   ４個の炭素原子を有するアルキルアミノ、アルキル、ア
   ルケニルまたはアルコキシ基、ポリアルコキシ基アリー
   ルオキシ基または複素環式基の１つまたはそれ以上で置
   換されていてもよく、またここでこれら置換基はそれら
   自身が複素環式化合物またはアミンで置換されているこ
   とができるしまたは一緒になつてＯおよび／またはＳお
   よび／またはＮＨまたはＮ−アルキルを有する複素環を
   形成することもできるものとし、そして Ｘは直接にかまたはアルキレン基もしくは オキシアルキレン基を介して窒素原子または硫黄原子に
   結合し、かつアルキレン基またはオキシアルキレン基を
   介してＲ＾５基に結合しているアリーレン基（これはま
   たアルキル、アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、アル
   コキシまたはアリールオキシ基および／またはヘテロ原
   子の１個またはそれ以上で置換されていることができる
   ）であるかまたは脂肪族、芳香脂肪族またけ芳香族の必
   ずしも天然でないアミノカルボン酸の残基を意味するか
   、またはＲ＾６が（Ｃ＿１−Ｃ＿６）−アルキルの１つ
   またはそれ以上で置換されたフエニル基である場合はフ
   エニレン基であり、そして Ａ＾−は化学ルミネセンスを損わないアニオンである。 ２）　Ｘが式IV ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｒ＾７は式−（ＣＨ＿２）＿ｎ−または式−（（
   ＣＨ＿２）＿ｍ−ｏ−）＿ｎ−（ｎ＝０〜４そしてｍ＝
   １〜６）であり、 Ｒ＾８はＲ＾７に対してｏ−、ｍ−またはｐ−位にある
   式−（ＣＨ＿２）ｐ−、−（ｏ−（ＣＨ＿２）＿ｍ−）
   ＿ｐまたは−（（ＣＨ＿２）＿ｍ−ｏ）＿ｐ（ｐ＝１〜
   ６そしてｍ＝１〜６）を有する置換基、または１〜４個
   の炭素原子を有する分枝状または直鎖状炭化水素基であ
   り、そして 置換基Ｒ＾９〜Ｒ＾１＾１は水素、３０個までの炭素原
   子を有する直鎖または分枝状の炭化水素基（ここで１個
   またはそれ以上の−ＣＨ＿２−単位はＯ、Ｓ、ＳＯ、Ｓ
   Ｏ＿２、ＮＨまたはＮ−アルキルで置換されていること
   ができるし、そしてこれら置換基の２個が環状に結合す
   ることもできる）である〕を有する基であることからな
   る請求項１記載のアクリジニウム誘導体および四級アン
   モニウム化合物。 ３）　Ｒ＾５が式Ｖ ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する基であることからなる請求項１または２記載の
   アクリジニウム誘導体および四級アンモニウム化合物。 ４）　式VI ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｘは式VII ▲数式、化学式、表等があります▼ （ｎ＝２または４）を有する基でありそしてＲ＾１＾２
   およびＲ＾１＾３は相互に独立して水素、１〜４個の炭
   素原子を有するアルキル基またはアルコキシ基、または
   （−Ｏ−ＣＨ＿２−ＣＨ＿２）＿ｎ−ＯＲ基（ここでｎ
   は０〜８でありそしてＲはモルホリノエチルまたは１〜
   ４個の炭素原子を有するアルキル基またはＮ，Ｎ−ジメ
   チルアミノエチル基である）、またはそれらが一緒にな
   つてエチレンジオキシ基でありそしてＡ＾−は請求項１
   記載の意味を有する〕を有することからなる請求項１〜
   ４のいずれかに記載のアクリジニウム誘導体および四級
   アンモニウム化合物。 ５）　Ｘがｐ−エチレンフエニル基であり、Ｒ＾１＾２
   ＝ＨでありそしてＲ＾１＾３＝ｐ−メトキシ基であるか
   、またはＲ＾１＾２＝オルトメトキシでありそしてＲ＾
   １＾３＝ｐ−メトキシ基であるか、またはＲ＾１＾２お
   よびＲ＾１＾３が一緒になつて３，４−エチレンジオキ
   シ基であることからなる請求項４記載のアクリジニウム
   誘導体および四級アンモニウム化合物。 ６）式ＶＩＩＩ ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｘは請求項１または２記載の意味を有しそしてＲ
   ＾６は１〜４個の炭素原子を有するアルキル基またはフ
   エニル基（これはそれぞれ１〜４個の炭素原子を有する
   アルキルまたはアルコキシ基の３個までによつて、１個
   の （−Ｏ−ＣＨ＿２−ＣＨ＿２）＿ｎ−ＯＲ−基（ｎ＝０
   〜８そしてＲはモルホリノエチルまたはＮ，Ｎ−ジメチ
   ルアミノエチル基または１〜４個の炭素原子を有するア
   ルキル基である）によつてまたはエチレンジオキシ基に
   よつて置換されていることができる）であるか、または Ｒ＾６はそれぞれ１〜４個の炭素原子を有する３個まで
   のアルキル基で置換されていることができるフエニル基
   でありそしてＸがｏ−、ｍ−またはｐ−フエニレン基で
   ある〕を有することからなる請求項１または２記載のア
   クリジニウム誘導体および四級アンモニウム化合物。 ７）式ＩＸ ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する化合物を式Ｘ ▲数式、化学式、表等があります▼ または式ＸＩ ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する保護されたスルホンアミドカルボン酸（ここで
   Ｙはハロゲン、ヒドロキシカルボニルアルキル、ヒドロ
   キシカルボニルアリールまたはイミダゾリド基であり、
   ＸおよびＲ＾６は請求項１記載の意味を有しそしてＺは
   あとで除去されるカルボキシル保護基である）と反応さ
   せ、そしてそれにより形成される酸を基Ｒ＾５を含有す
   る所望のアクリジニウム誘導体に変換し、これをさらに
   アクリジン核の窒素で四級化することからなる請求項１
   記載の化合物の製法。 ８）請求項１記載のアクリジニウム誘導体をタンパク質
   、ポリペプチドまたは生物学的に重要な他の物質に直接
   にかまたは架橋分子を介して結合させて安定した免疫学
   的に活性な接合体を形成させることからなるルミネセン
   ス性化合物。 ９）競合法またはサンドイツチ法において免疫学的に活
   性な成分の少くとも１種を固相に固定させ、そして少く
   とも１種の他の成分、すなわちトレーサーが請求項８記
   載のルミネセント化合物であることからなる、液体検体
   中の抗原物を測定するためのルミネセンスイムノアツセ
   イ。 １０）ａ）抗原と特異的に反応するものであつて固定さ
   れた抗体を、検査すべき液体検体、お よび抗原と請求項１記載の化学ルミネセン ス性アクリジニウム誘導体とからなる接合 体とインキユベートし、 ｂ）検体および結合されなかつた標識された接合体を分
   離し、 ｃ）結合された標識された接合体を１種またはそれ以上
   の試薬と逐次的にまたは同時に 接触させて発光を起させ、そして ｄ）測定された発光強度から存在する抗原量を測定する
   、 ことからなる請求項９記載のルミネセンスイムノアツセ
   イ。 １１）標識された接合体の添加に先立ち、検査すべき液
   体を固定された抗体から分離することからなる請求項１
   ０記載のルミネセンスイムノアツセイ。 １２）ａ）抗源と特異的に反応するものであつて固定さ
   れた抗体を、検査すべき液体検体、お よび第２の特異的に反応する抗体と請求項 １記載の化学ルミネセンス性アクリジニウ ム誘導体とからなる接合体とインキユベー トし、 ｂ）検体および結合されなかつた標識された接合体を分
   離し、 ｃ）結合された標識された接合体を１種またはそれ以上
   の試薬と逐次的にまたは同時に 接触させて発光を起させ、そして ｄ）測定された発光強度から存在する抗原量を測定する
   、 ことからなる請求項９記載のルミネセンスイ　ムノアツ
   セイ。 １３）標識された接合体の添加に先立ち、検査すべき液
   体を固定された抗体から分離することからなる請求項１
   ２記載のルミネセンスイムノアツセイ。 １４）ａ）抗体と特異的に反応するものであつて固定さ
   れた抗原を、検査すべき液体検体、お よび抗体と請求項１記載の化学ルミネセン ス性アクリジニウム誘導体とからなる接合 体の溶液とインキユベートし、 ｂ）検体および結合されなかつた標識された接合体を分
   離し、 ｃ）結合された標識された接合体を１種またはそれ以上
   の試薬と逐次的にまたは同時に 接触させて発光を起させ、そして ｄ）測定された発光強度から存在する抗原量を測定する
   、 ことからなる請求項９記載のルミネセンスイムノアツセ
   イ。 ５）ａ）抗体と特異的に反応するものであつて固定され
   た抗原を、抗体と請求項１記載の化 学ルミネセンス性アクリジニウム誘導体と からなる接合体の溶液とインキユベートし、ｂ）未反応
   の標識された接合体を分離し、 ｃ）検査すべき液体の検体を添加し、 ｄ）次に検体を再び分離し、 ｅ）結合された標識された接合体を１種またはそれ以上
   の試薬と逐次的にまたは同時に 接触させて発光を起させ、そして ｆ）測定された発光強度から存在する抗原量を測定する
   、 ことからなる請求項９記載のルミネセンスイムノアツセ
   イ。 １６）ａ）抗体と特異的に反応するものであつて固定さ
   れた抗原を、抗体と請求項１記載の化 学ルミネセンス性アクリジニウム誘導体と からなる接合体の溶液とインキユベートし、ｂ）検査す
   べき液体の検体を添加し、 ｃ）検体および結合されなかつた接合体を分離し、 ｄ）結合された標識された接合体を１種またはそれ以上
   の試薬と逐次的にまたは同時に 接触させて発光を起させ、そして ｅ）測定された発光強度から存在する抗原量を測定する
   、 ことからなる請求項９記載のルミネセンスイムノアツセ
   イ。