JP7358395B2 - 遠赤染料プローブ製剤 - Google Patents
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Description
この出願は、2018年2月6日に出願された仮出願番号62/627,040号に対する米国特許法第119条(e)に基づく優先権の利益を主張し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、EFS-Webを介してASCII形式で提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、配列表を含有する。2019年2月5日に作成された該ASCIIコピーは、「DIA.0041-03-PCT__ST25.txt」と名付けられ、サイズは、5KBである。
これらの態様および本発明の他の態様は、本発明の以下の詳細な説明を参照すると明らかになるであろう。
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、記載される方法および組成物に関連する当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、以下の用語および語句は、特に明記しない限り、それらに帰する意味を有する。
いくつかの実験を行い、Cy5.5染料含有溶液の30日間のインキュベーション後に見られたCy5.5RFU信号の25~70%の低下が示された。インキュベートされたCy5.5染料含有溶液を、概して上述されたように、リアルタイム(RT)TMAアッセイで使用した。この実施例のCy5.5染料は、内在性コントロール標的核酸を検出するためにトーチオリゴヌクレオチドに取り付けた。FAM、HEX、およびROXトーチは、30日間のインキュベーション後に約10%のみ低下したが、内在性コントロールCy5.5トーチでの35%の低下を示す、いくつかの代表的なデータを以下の表1に示す。様々な遠赤染料ならびに代替の緩衝製剤で追加の研究が試され、時間の経過とともに同様の信号の低下が見られた。信頼性の低い信号が無効なアッセイ結果を提供するため、RFU信号の大幅な減少を示す保存された遠赤染料含有試薬は、使用できなくなる。そのため、これらの染料からのRFU信号を利用するアッセイにおいて後で使用するために、遠赤染料含有溶液を保存することは推奨されず、代わりに、未使用部分を破棄することが推奨される。
ジギトニン:
実施形態1安定化された遠赤染料プローブ製剤であって、
担体分子に結合した遠赤染料を含む遠赤染料プローブと、
約0.05%(v/v)を超える濃度の非線形界面活性剤と、
少なくとも1つの緩衝剤と、を含み、
製剤が、水溶液である、製剤。
担体分子に結合した遠赤染料を含む遠赤染料プローブと、
約0.05%(v/v)を超える濃度のフォームバンと、
少なくとも1つの緩衝剤と、を含み、
製剤が、水溶液である、製剤。
実施形態1~20のいずれかに記載の製剤を提供することと、
水溶液を凍結乾燥して、凍結乾燥された遠赤染料プローブ製剤を形成することと、を含む、方法。
(a)実施形態22または23に記載の凍結乾燥された遠赤染料プローブ製剤を提供することと、
(b)凍結乾燥された遠赤染料プローブ製剤を希釈剤に溶解して、再構成された製剤を提供することと、を含む、方法。
実施形態22または23に記載の凍結乾燥された遠赤染料プローブ製剤を含有する第1の密封容器と、
希釈剤を含有する第2の密封容器と、を含む、キット。
(a)少なくとも1つの緩衝剤と、担体分子に結合した遠赤染料を含む遠赤染料プローブと、を含む水溶液への再構成を可能にする凍結乾燥された遠赤染料プローブ製剤を提供することと、
(b)凍結乾燥された遠赤染料プローブ製剤を希釈剤に溶解して、再構成された製剤を提供することと、を含み、
凍結乾燥された遠赤染料プローブ製剤および希釈剤のうちの少なくとも1つが、非線形界面活性剤を含み、再構成された製剤が、約0.05%(v/v)を超える濃度の非線形界面活性剤を含む、方法。
少なくとも1つの緩衝剤と、担体分子に結合した遠赤染料を含む遠赤染料プローブと、を含む水溶液への再構成を可能にする凍結乾燥された遠赤染料プローブ製剤を含有する第1の密封容器と、
希釈剤を含有する第2の密封容器と、を含む、キットであって、
凍結乾燥された遠赤染料プローブ製剤および希釈剤のうちの少なくとも1つが、非線形界面活性剤を含み、希釈剤中での凍結乾燥された遠赤染料プローブ製剤の再構成が、約0.05%(v/v)を超える最終的な非線形界面活性剤濃度を提供する、キット。
Claims (16)
- 安定化された遠赤染料プローブ製剤であって、
核酸担体分子に結合した遠赤シアニン染料を含む遠赤染料プローブと、
約1%(v/v)~約20%(v/v)の濃度の非線形界面活性剤と、
トリス、PIPES、HEPES、リン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、およびヒスチジンからなる群から選択される少なくとも1つの緩衝剤と、を含み、
前記製剤が、水溶液であり、さらに、
前記非線形界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルおよびジギトニンからなる群から選択される、製剤。 - 前記製剤中の前記遠赤染料プローブが、相対蛍光単位(RFU)での相対蛍光を有し、前記遠赤染料プローブの相対蛍光が、2~8℃での30日間の保存後に20%未満の低下を示す、請求項1に記載の製剤。
- 前記遠赤シアニン染料が、シアニン5およびシアニン5.5からなる群から選択される、請求項1または2に記載の製剤。
- 前記非線形界面活性剤が、ポリソルベート20、ポリソルベート40、およびポリソルベート60からなる群から選択されるポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルである、請求項1に記載の製剤。
- 前記少なくとも1つの緩衝剤が、トリスである、請求項1に記載の製剤。
- 前記トリス緩衝剤が、約5mM~約50mMの濃度で存在する、請求項5に記載の製剤。
- 前記核酸担体分子が、RNAである、請求項1に記載の製剤。
- 前記遠赤染料プローブが、消光剤をさらに含む、請求項1に記載の製剤。
- 前記遠赤染料プローブが、分子トーチ、分子ビーコン、およびTaqManプローブからなる群から選択される、請求項8に記載の製剤。
- 第1の増幅オリゴマーをさらに含み、
前記遠赤染料プローブが、標的核酸の標的領域内に含有される第1の配列に特異的に結合する標的ハイブリダイズ配列を含み、
前記第1の増幅オリゴマーが、前記標的領域内に含有される第2の配列に特異的に結合する標的ハイブリダイズ配列を含み、
前記第1の増幅オリゴマーが、鋳型として標的核酸を含む増幅アッセイにおいて、前記標的領域を含有する増幅産物を産出するように構成される、請求項1に記載の製剤。 - 第2の増幅オリゴマーをさらに含む、請求項10に記載の製剤であって、
前記第2の増幅オリゴマーが、前記標的領域内に含有される第3の配列に特異的に結合する標的ハイブリダイズ配列を含み、
前記第1および第2の増幅オリゴマーが、増幅アッセイの複数のサイクルで前記標的領域を増幅するように構成される、製剤。 - 前記第1の増幅オリゴマーが、前記第1の標的ハイブリダイズ配列の5’に位置するプロモーター配列をさらに含むプロモーターベースの増幅オリゴマーである、請求項10に記載の製剤。
- 前記増幅アッセイを行うのに好適な1つ以上のヌクレオチド三リン酸をさらに含む、請求項10に記載の製剤。
- 前記増幅アッセイを行うのに好適な1つ以上の塩または補因子をさらに含む、請求項10に記載の製剤。
- 安定化された凍結乾燥遠赤染料プローブ製剤を調製する方法であって、
請求項1に記載の製剤を提供することと、
前記水溶液を凍結乾燥して、前記凍結乾燥された遠赤染料プローブ製剤を形成することと、を含む、方法。 - 請求項15に記載の方法によって調製された、安定化された凍結乾燥遠赤染料プローブ製剤。
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