JP7177129B2 - Tyrまたはmmp1を標的とする核酸を用いて老化および皮膚障害を処置するための方法 - Google Patents
Tyrまたはmmp1を標的とする核酸を用いて老化および皮膚障害を処置するための方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7177129B2 JP7177129B2 JP2020168311A JP2020168311A JP7177129B2 JP 7177129 B2 JP7177129 B2 JP 7177129B2 JP 2020168311 A JP2020168311 A JP 2020168311A JP 2020168311 A JP2020168311 A JP 2020168311A JP 7177129 B2 JP7177129 B2 JP 7177129B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- acid molecule
- nucleotides
- stranded
- rxrna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
- A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/322—2'-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
- C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/31—Combination therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/18—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with another compound as one donor, and incorporation of one atom of oxygen (1.14.18)
- C12Y114/18001—Tyrosinase (1.14.18.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/99—Miscellaneous (1.14.99)
- C12Y114/99001—Prostaglandin-endoperoxide synthase (1.14.99.1), i.e. cyclooxygenase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)
- C12Y304/24007—Interstitial collagenase (3.4.24.7), i.e. matrix metalloprotease 1 or MMP1
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Virology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
Description
本願は、2014年9月5日に出願された米国仮出願シリアル番号US 62/046,523、表題「METHODS FOR TREATING AGING AND SKIN DISORDERS USING NUCLEIC ACIDS TARGETING TYR OR MMP1」、2014年9月9日に出願された米国仮出願シリアル番号US 62/047,972、表題「METHODS FOR TREATING AGING AND SKIN DISORDERS USING NUCLEIC ACIDS TARGETING TYR OR MMP1」、ならびに、2015年1月12日に出願された米国仮出願シリアル番号US 62/102,287、表題「METHODS FOR TREATING AGING AND SKIN DISORDERS USING NUCLEIC ACIDS TARGETING TYR OR MMP1」の35 U.S.C.§119(e)下における利益を主張し、これらの各々の全開示は、その全体において本明細書に参考として組み込まれる。
本発明は、in vivoでの送達特性が改善された核酸分子、およびMMP1またはTYRの発現を低下させるためのそれらの使用に関する。
相補的なオリゴヌクレオチド配列は有望な治療剤であり、遺伝子の機能を解明する上での有用な研究用ツール(research tool)である。しかしながら、先行技術のオリゴヌクレオチド分子は、それらの臨床的開発を妨げる可能性があるいくつかの問題に悩まされており、これは、かかる組成物をin vivoで使用する遺伝子発現(タンパク質合成を含む)の意図した効率的な阻害の達成をしばしば困難にする。
主要な問題は、これらの化合物の、細胞および組織への送達であった。従来の二本鎖RNAi化合物は、19~29塩基長であって、およそ1.5×(10~15)nmのサイズの高度に負に荷電した強固ならせんを形成する。このロッド型の分子は細胞膜を透過することができず、その結果として、in vitroおよびin vivoでの両方において極めて限定的な効力しか有さない。その結果として、従来の全てのRNAi化合物は、それらの組織分配および細胞取り込みを促進するために、何らかの種類の送達ビヒクルを必要とする。これは、RNAi技術の主要な限定要因であると考えられる。
90年代後期におけるsiRNAの発見に関して、それらの送達プロフィールを増強するために、同様の型の修飾がこれらの分子へ試みられた。僅かに修飾された(Soutschek, 2004)および重度に修飾された(Wolfrum, 2007)siRNAへ抱合させたコレステロール分子が、文献に登場した。Yamadaら(2008)はまた、コレステロールを媒介したsiRNAの取り込みをさらに改善する高度なリンカーの化学(linker chemistry)の使用について報告した。この努力にも拘わらず、これらの型の化合物の取り込みは、生体液の存在下において損なわれて阻害され、これがin vivoでの遺伝子サイレンシングにおける効力を極めて限定させることになり、臨床の場でこれらの化合物の適用性を限定していると考えられる。
本発明の側面は、皮膚障害を処置するための方法に関し、該方法は、それを必要とする対象に、マトリックスメタロプロテイナーゼ-1(MMP1)、チロシナーゼ(TYR)またはプロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ2(PTGS2)をコードする遺伝子に対して向けられた核酸分子の治療有効量を投与することを含む。
いくつかの態様において、核酸分子は、化学修飾されたオリゴヌクレオチドである。いくつかの態様において、核酸分子は、二本鎖核酸分子である。いくつかの態様において、核酸分子は、二本鎖領域および一本鎖領域を含む単離された二本鎖核酸分子であって、ここで、分子の二本鎖である領域は、8~15ヌクレオチド長であり、ここで、ガイド鎖は、4~12ヌクレオチド長の一本鎖領域を含み、ここで、ガイド鎖の一本鎖領域は、3、4、5、6、7、8、9、10、11または12個のホスホロチオアート修飾を含み、およびここで、単離された二本鎖核酸分子のヌクレオチドのうちの少なくとも40%が修飾されている。
いくつかの態様において、皮膚障害は、皮膚の光老化または挫瘡瘢痕である。いくつかの態様において、核酸分子は、MMP1をコードする遺伝子に対して向けられる。いくつかの態様において、皮膚障害は、皮膚の色素沈着過剰、肝斑または皮膚の黒子である。
いくつかの態様において、核酸分子は、TYRをコードする遺伝子に対して向けられる。いくつかの態様において、核酸分子は、RNAiの作用機序を通して遺伝子発現をサイレンシングする。
いくつかの態様において、異なるタンパク質をコードする遺伝子に対して向けられた2以上の核酸分子が、対象に投与される。いくつかの態様において、同じタンパク質をコードする遺伝子に対して向けられた2以上の核酸分子が、対象に投与される。
いくつかの態様において、核酸分子は、1回投与される。いくつかの態様において、核酸分子は、1回より多く投与される。
いくつかの態様において、核酸分子は、表1または表2による配列の少なくとも12個の連続したヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、核酸分子は、表1および2において示されるとおりの、MMP1-2、MMP1-7、MMP1-8、MMP1-23、MMP1-35およびMMP1-36から選択される配列を含む。
いくつかの態様において、皮膚障害は、慢性潰瘍(静脈性潰瘍)、壊疽(ビブリオおよびクロストリジウム属)、ならびに水疱形成性皮膚障害(例えば、スティーブンス・ジョンソン症候群など)からなる群より選択される。いくつかの態様において、皮膚障害は、ケロイドである。
本発明の側面は、表1~4中の配列から選択される配列に対して向けられた、化学修飾された二本鎖核酸分子に関する。
いくつかの態様において、化学修飾された二本鎖核酸分子は、sd-rxRNAである。
本発明の側面は、表1~4中の配列から選択される配列の少なくとも12個の連続したヌクレオチドを含む、化学修飾された二本鎖核酸分子に関する。いくつかの態様において、化学修飾された二本鎖核酸分子は、sd-rxRNAである。
いくつかの態様において、sd-rxRNAは、疎水性修飾される。いくつかの態様において、sd-rxRNAは、1または2以上の疎水性抱合体に連結される。
いくつかの態様において、化学修飾された二本鎖核酸分子は、MMP1-2、MMP1-7、MMP1-8、MMP1-23、MMP1-35、MMP1-36、TYR-5、TYR-8、TYR-13、TYR-14、TYR-15、TYR-20、TYR-32、TYR-33およびTYR-34から選択される配列を含む。
本発明の側面は、結核、関節炎(変形性関節症および関節リウマチ)、角膜びらん、歯周炎、子宮内膜癌または子宮内膜症を処置するための方法に関し、該方法は、それを必要とする対象に、マトリックスメタロプロテイナーゼ-1(MMP1)をコードする遺伝子に対して向けられた核酸分子の治療有効量を投与することを含む。
いくつかの態様において、核酸分子は、表7または表8中の配列から選択される配列の少なくとも12個の連続したヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、核酸分子は、表7または表8中の配列から選択される配列を含む。いくつかの態様において、核酸分子は、表7中の配列から選択されるセンス鎖配列および表8中の配列から選択されるアンチセンス鎖配列を含む。
本発明の側面は、表5~8中の配列から選択される配列の少なくとも12個の連続したヌクレオチドを含む化学修飾された二本鎖核酸分子に関する。いくつかの態様において、化学修飾された二本鎖核酸分子は、sd-rxRNAである。いくつかの態様において、sd-rxRNAは、疎水性修飾される。いくつかの態様において、sd-rxRNAは、1または2以上の疎水性抱合体に連結される。
i)センス鎖配列は、表5において示される修飾を含む、配列番号167、171および172からなる群より選択され、、アンチセンス鎖配列は、表6において示される修飾を含む、配列番号196、197、198、199および200からなる群より選択される;
ii)センス鎖配列は、表5において示される修飾を含む、配列番号173および179からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表6において示される修飾を含む、配列番号202、203、204、205、206、207および208からなる群より選択される;
iii)センス鎖配列は、表5において示される修飾を含む、配列番号180、184および185からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表6において示される修飾を含む、配列番号209、210、211、212および213からなる群より選択される;
iv)センス鎖配列は、表5において示される修飾を含む、配列番号186および190からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表6において示される修飾を含む、配列番号215、216、217、218および219からなる群より選択される;または
v)センス鎖配列は、表5において示される修飾を含む、配列番号191および195からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表6において示される修飾を含む、配列番号220、221、222、223および224からなる群より選択される。
i)センス鎖配列は、表7において示される修飾を含む、配列番号225、229および230からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表8において示される修飾を含む、配列番号264、265、266、267および268からなる群より選択される;
ii)センス鎖配列は、表7において示される修飾を含む、配列番号231および235からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表8において示される修飾を含む、配列番号270、271、272、273および274からなる群より選択される;
iii)センス鎖配列は、表7において示される修飾を含む、配列番号236、240および241からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表8において示される修飾を含む、配列番号275、276、277、278および279からなる群より選択される;
iv)センス鎖配列は、表7において示される修飾を含む、配列番号242、246および247からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表8において示される修飾を含む、配列番号281、282、283、284および285からなる群より選択される;
v)センス鎖配列は、表7において示される修飾を含む、配列番号248および252からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表8において示される修飾を含む、配列番号287、288、289、290および291からなる群より選択される;
vi)センス鎖配列は、表7において示される修飾を含む、配列番号253および257からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表8において示される修飾を含む、配列番号292、293、294、295および296からなる群より選択される;または
vii)センス鎖配列は、表7において示される修飾を含む、配列番号258、262および263からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表8において示される修飾を含む、配列番号297、298、299、300および301からなる群より選択される。
添付の図面は、原寸で描画することを意図していない。図面において、多様な図において例示される各々同一またはほぼ同一の構成要素は、類似する数字で表わされる。明確化を目的として、全ての構成要素が全ての図面においてラベルされているわけではない。図面においては以下のとおりである:
本明細書に使用される「核酸分子」は、これらに限定されないが:sd-rxRNA、rxRNAori、オリゴヌクレオチド、ASO、siRNA、shRNA、miRNA、ncRNA、cp-lasiRNA、aiRNA、BMT-101、RXI-109、EXC-001、一本鎖核酸分子、二本鎖核酸分子、RNAおよびDNAを含む。いくつかの態様において、核酸分子は、化学修飾されたオリゴヌクレオチドなどの、化学修飾されたオリゴヌクレオチドである。
本発明の側面は、sd-rxRNA分子に関する。本明細書において用いられる場合、「sd-rxRNA」または「sd-rxRNA分子」とは、2014年8月5日に付与された、米国特許第8,796,443号、表題「REDUCED SIZE SELF-DELIVERING RNAI COMPOUNDS」、および2009年9月22日に出願されたPCT公開番号WO2010/033247(出願番号PCT/US2009/005247)、表題「REDUCED SIZE SELF-DELIVERING RNAI COMPOUNDS」において記載され、これらから本明細書に参考として組み込まれるもののような、自己送達型RNA分子を指す。簡単に述べると、sd-rxRNA(sd-rxRNAナノとも呼ばれる)は、最小長が16ヌクレオチドのガイド鎖および8~18ヌクレオチド長のパッセンジャー鎖を含む、単離された非対称二本鎖核酸分子であって、ここで二本鎖核酸分子は二本鎖領域および一本鎖領域を有し、一本鎖領域は4~12ヌクレオチド長を有し、かつ、少なくとも3つのヌクレオチド主鎖修飾を有する。好ましい態様において、二本鎖核酸分子は、平滑である1末端を有するか、または、1つもしくは2つのヌクレオチド突出を含む。sd-rxRNA分子は、化学修飾を通じて、いくつかの例において疎水性抱合体の付着を通じて、最適化され得る。
本発明のポリヌクレオチドは、本明細書において、本発明の、単離された二本鎖またはデュプレックス核酸、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド、ナノ分子、ナノRNA、sd-rxRNAナノ、sd-rxRNAまたはRNA分子を指す。
本明細書に開示されるsd-rxRNA分子が、米国特許公開第US2014/0113950号(その全体が参考として組み込まれる)に開示されるsd-rxRNA分子と同じ様式で皮膚へ投与され得ることが理解されるべきである。
いくつかの側面において、本開示は、マトリックスメタロプロテイナーゼ(MMP)を標的とするsd-rxRNAなどの核酸の使用に関する。本明細書において用いられる場合、「マトリックスメタロプロテイナーゼ」とは、限定されないが、コラーゲン、ゼラチン、フィブロネクチン、ラミニン、コレステロール硫酸、アグリカン、フィブリノーゲンおよびフィブリンを含む細胞外マトリックスタンパク質を分解することができる、亜鉛依存的なエンドペプチダーゼを指す。MMPは、いくつかの細胞の挙動、例えば細胞増殖、細胞遊走、細胞分化、血管新生、アポトーシスおよび免疫機能に関連付けられている。限定されないが、MMP1、MMP2、MMP3、MMP7、MMP8、MMP9、MMP10、MMP11、MMP12、MMP13、MMP14、MMP15、MMP16、MMP17、MMP19、MMP20、MMP21、MMP23A/B、MMP24、MMP25、MMP26、MMP27およびMMP28を含むいくつかの遺伝子がMMPをコードする。いくつかの態様において、sd-rxRNAは、間質コラーゲンを分解または切断するMMPを標的とする。いくつかの態様において、間質コラーゲンは、コラーゲンI、コラーゲンIIおよび/またはコラーゲンIIIである。いくつかの態様において、sd-rxRNAは、MMP1を標的とする。
いくつかの側面において、本開示は、チロシナーゼを標的とするsd-rxRNAなどの核酸の使用に関する。本明細書において用いられる場合、「チロシナーゼ」とは、メラニン産生のための律速段階であるチロシンの水酸化およびドーパ(Dopa)のドーパキノンへの酸化を制御するオキシダーゼを指す。チロシナーゼは、TYR遺伝子によりコードされる。いくつかの態様において、sd-rxRNAは、TYRを標的とする。
ある態様において、2’修飾されているヌクレオチドは、ピリミジンヌクレオチド(例としてC/U)である。2’-O-アルキルヌクレオチドの例は、2’-O-メチルヌクレオチドまたは2’-O-アリルヌクレオチドを含む。
本明細書に使用される「オフ・ターゲット」遺伝子サイレンシングは、例えばアンチセンス(ガイド)配列と、意図しない標的mRNA配列との間の偽の配列相同性に起因する、意図しない遺伝子サイレンシングを指す。
本発明のこの側面に従うと、あるガイド鎖修飾は、RNAi活性を著しく低下させずに(またはRNAi活性を全く低下させずに)、さらに、ヌクレアーゼ安定性を増大させ、および/または、インターフェロン誘導を低下させる。
特定の5’ステム配列の修飾と3’ステム配列の修飾とのある組み合わせは、標的遺伝子の発現を阻害する能力の増強、血清安定性の増強、および/または、標的特異性の増大などにより部分的に表わされる、さらなる予想外の利点をもたらしてもよい。
ある態様において、ガイド鎖は、ガイド鎖の5’末端における2番目のヌクレオチドにて、2’-O-メチル修飾ヌクレオチドを含み、かつ、他の修飾ヌクレオチドを含まない。
miRNAは、およそ22ヌクレオチドの非コードRNAであって、植物および動物の発生の間中、転写後または翻訳後のレベルにて、遺伝子発現を調節し得る。miRNAの1つの共通の特徴は、それらがプレmiRNA(pre-miRNA)と称されるおよそ70ヌクレオチドの前駆体RNAステムループから、恐らくはRNaseIII型酵素であるダイサーまたはそのホモログによって、切り取られることである。天然に存在するmiRNAは、in vivoで内因性遺伝子により発現され、ヘアピンまたはステムループ前駆体(プレmiRNAまたはプリmiRNA(pri-miRNA))から、ダイサーまたは他のRNAseによりプロセッシングされる。miRNAは、in vivoで二本鎖デュプレックス(double-stranded duplex)として一過性に存在し得るが、一方の鎖のみが遺伝子サイレンシングを指揮するためにRISC複合体に取り込まれる。
ある態様において、修飾RNAiコンストラクトは、同じ配列を有する未修飾RNAiコンストラクトと比較して、改善された血清および/または脳脊髄液中の安定性を有してもよい。
ある態様において、RNAiコンストラクトの構造は、ヒト、マウスおよび他のげっ歯類ならびに他の非ヒト哺乳動物からの初代細胞を含む哺乳動物の初代細胞などの初代細胞において、インターフェロン応答を誘導しない。ある態様において、RNAiコンストラクトはまた、無脊椎生物において標的遺伝子の発現を阻害するためにも使用されてもよい。
本発明のRNAiコンストラクトは、標的遺伝子(単数または複数)によりコードされるいずれの標的タンパク質の合成をも阻害することができる。本発明は、細胞において、in vitroまたはin vivoのいずれかで、標的遺伝子の発現を阻害する方法を含む。したがって、本発明のRNAiコンストラクトは、標的遺伝子の過剰発現により特徴づけられる疾患を持つ患者を処置するのに有用である。
本発明はまた、本発明の核酸を発現するベクター、および、かかるベクターまたは核酸を含む細胞にも関する。細胞は、in vivoのまたは培養中の、ヒト細胞などの哺乳動物細胞であり得る。
本発明はさらに、対象となるRNAiコンストラクトと薬学的に許容し得るキャリアまたは希釈剤とを含む、組成物に関する。
標的細胞(例として哺乳動物細胞)は、脂質(例としてカチオン性脂質)またはリポソームなどの送達試薬の存在下において、接触させられてもよい。
本発明の別の側面は、哺乳動物細胞において標的遺伝子の発現を阻害するための方法を提供し、該方法は、哺乳動物細胞を、対象となるRNAiコンストラクトを発現するベクターと接触させることを含む。
別の態様において、化学修飾は、デュプレックスの多様な領域にわたって同一ではない。特定の態様において、第1のポリヌクレオチド(パッセンジャー鎖)は、多数の多様な化学修飾を、多様な部位において有する。このポリヌクレオチドについて、ヌクレオチドの90%までが化学修飾されていてもよく、および/または、導入されたミスマッチを有していてもよい。
分子の他方の部分は、一本鎖領域である。一本鎖領域は、7から40までのヌクレオチドの範囲であると予測される。
ガイド鎖(第1のポリヌクレオチド)のRISC複合体中へのローディングの効率は、重度に修飾されたポリヌクレオチドについて変わる場合があるので、一態様においては、効率的なガイド鎖のローディングを促進するために、デュプレックスポリヌクレオチドは、ガイド鎖(第1のポリヌクレオチド)上のヌクレオチド9、11、12、13または14と、センス鎖(第2のポリヌクレオチド)上の反対のヌクレオチドとの間のミスマッチを含む。
より詳細な本発明の側面は、以下のセクションにおいて記載される。
本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドは、2つの別々の相補的な核酸鎖により形成されてもよい。デュプレックス形成は、標的遺伝子を含有する細胞の内側または外側のいずれかで生じ得る。
本明細書に使用される用語「デュプレックス(duplex)」は、相補的な配列に水素結合している二本鎖(double-stranded)核酸分子(単数または複数)の領域を含む。本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドは、標的遺伝子に対してセンスであるヌクレオチド配列、および、標的遺伝子に対してアンチセンスである相補配列を含んでもよい。センスおよびアンチセンスヌクレオチド配列は、標的遺伝子配列に対応し、例として、標的遺伝子配列と同一であるかまたは標的遺伝子の阻害をもたらすために十分に同一(例として、ほぼ少なくとも約98%同一、96%同一、94%、90%同一、85%同一または80%同一)である。
本発明のヌクレオチドは、糖部分、ホスホジエステル連結部および/または塩基を含む、多様な位置において修飾されてもよい。
いくつかの態様において、ヌクレオチドの塩基部分は修飾されてもよい。例えば、ピリミジン塩基はピリミジン環の2、3、4、5、および/または6位において修飾されてもよい。いくつかの態様において、シトシンの環外アミンが修飾されてもよい。プリン塩基もまた修飾されてもよい。例えば、プリン塩基は、1、2、3、6、7または8位において修飾されてもよい。いくつかの態様において、アデニンの環外アミンが修飾されてもよい。いくつかのケースにおいて、塩基部分の環の窒素原子は、例えば炭素などの別の原子で置換されてもよい。塩基部分への修飾は、いずれの好適な修飾でもあってもよい。修飾の例は当業者に知られている。いくつかの態様において、塩基の修飾は、アルキル化プリンまたはピリミジン、アシル化プリンまたはピリミジン、または、その他のヘテロ環を含む。
5位で修飾されたピリミジンの非限定的例は、米国特許第5591843号、米国特許第7,205,297号、米国特許第6,432,963号および米国特許第6,020,483号に開示されており;N4位で修飾されたピリミジンの非限定的例は、米国特許第5,580,731号に開示されており;8位で修飾されたプリンの非限定的例は、米国特許第6,355,787号および米国特許第5,580,972号に開示されており;N6位で修飾されたプリンの非限定的例は、米国特許第4,853,386号、米国特許第5,789,416号および米国特許第7,041,824号に開示されており;2位で修飾されたプリンの非限定的例は、米国特許第4,201,860号および米国特許第5,587,469号に開示されており;これらの全ては、参考として本明細書に組み込まれる。
アンチセンス(ガイド)鎖は、標的遺伝子(単数または複数)の少なくとも一部に対して実質的に同一であってもよいが、少なくとも塩基対形成特性に関連して、配列は、有用であるため、例として標的遺伝子の表現型の発現を阻害するために、完全に同一である必要はない。一般により高い相同性は、より短いアンチセンス遺伝子の使用を埋め合わせるために使用され得る。いくつかのケースにおいて、アンチセンス鎖は、一般に、標的遺伝子に対して(アンチセンス方向において)実質的に同一であろう。
例えば本発明の化合物の特定のエナンチオマーが所望される場合、これは不斉合成により、または、キラル補助基による誘導体化により調製されてもよく、ここで得られたジアステレオマー混合物は分離され、補助基が切断されて、純粋な所望のエナンチオマーが提供される。代わりに、分子がアミノなどの塩基性官能基を含有する場合またはカルボキシルなどの酸性官能基を含有する場合、ジアステレオマー塩が、適切な光学活性酸または塩基により形成され、次いでこうして形成されたジアステレオマーが、当該技術分野において周知の分別結晶化またはクロマトグラフィー手段により分割され、続いて純粋なエナンチオマーが回収される。
用語「アルキル」は、飽和脂肪族基を含み、これは、直鎖アルキル基(例としてメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルなど)、分枝鎖アルキル基(イソプロピル、tert-ブチル、イソブチルなど)、シクロアルキル(脂環式)基(シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル)、アルキル置換シクロアルキル基およびシクロアルキル置換アルキル基を含む。ある態様において、直鎖または分枝鎖アルキルは、6個以下(例として直鎖についてはC1~C6、分枝鎖についてはC3~C6)、より好ましくは4個以下の炭素原子をその骨格中に有する。同様に、好ましいシクロアルキルは、3~8個の炭素原子をその環構造中に有し、より好ましくは5または6個の炭素を環構造中に有する。用語C1~C6は、1~6個の炭素原子を含むアルキル基を含有する。
炭素の数が他に特定されない限りにおいて、「低級アルキル」は、本明細書に使用されるとおり、上で定義されるが、1~5個の炭素原子をその骨格構造中に有するアルキル基を意味する。「低級アルケニル」および「低級アルキニル」は、例えば2~5個の炭素原子の鎖長を有する。
用語「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」は、(適切なカウンターイオンとともに)-OHまたは-O-を持つ基を含む。
用語「ハロゲン」は、フッ素、臭素、塩素、ヨウ素などを含む。用語「過ハロゲン化」は一般に、全ての水素がハロゲン原子により置き換えられている部分を指す。
用語「エーテル」は、2個の異なる炭素原子またはヘテロ原子に結合した酸素を含有する化合物または部分を含む。例えば、この用語は、「アルコキシアルキル」を含み、これは、別のアルキル基に共有結合した酸素原子に共有結合しているアルキル、アルケニルまたはアルキニル基を指す。
用語「ヌクレオシド」は、糖部分、好ましくはリボースまたはデオキシリボースに共有結合した塩基を含む。好ましいヌクレオシドの例は、リボヌクレオシドおよびデオキシリボヌクレオシドを含む。ヌクレオシドはまた、遊離カルボキシル基、遊離アミノ基または保護基を含んでもよいアミノ酸またはアミノ酸アナログに連結した塩基をも含む。好適な保護基は当該技術分野において周知である(P. G. M. WutsおよびT. W. Greene、「Protective Groups in Organic Synthesis」、第2版、Wiley-Interscience、New York、1999年を参照)。
用語「ヌクレオチド」は、ホスファート基またはホスファートアナログをさらに含むヌクレオシドを含む。
Xは、NまたはCHであり;
Aは、結合;置換または非置換、環式または非環式、分枝または非分枝の脂肪族;または、置換または非置換、環式または非環式、分枝または非分枝のヘテロ脂肪族であり;
R1は、疎水性部分であり;
R2は、水素;酸素保護基;環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝の脂肪族;環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝のヘテロ脂肪族;置換または非置換、分枝または非分枝のアシル;置換または非置換、分枝または非分枝のアリール;置換または非置換、分枝または非分枝のヘテロアリールであり;および
R3は、核酸である、
で表される。
ある態様において、Aは結合である。ある態様において、Aは、置換または非置換、環式または非環式、分枝または非分枝の脂肪族である。ある態様において、Aは、非環式、置換または非置換、分枝または非分枝の脂肪族である。ある態様において、Aは、非環式、置換、分枝または非分枝の脂肪族である。ある態様において、Aは、非環式、置換、非分枝の脂肪族である。ある態様において、Aは、非環式、置換、非分枝のアルキルである。ある態様において、Aは、非環式、置換、非分枝のC1~20アルキルである。ある態様において、Aは、非環式、置換、非分枝のC1~12アルキルである。ある態様において、Aは、非環式、置換、非分枝のC1~10アルキルである。ある態様において、Aは、非環式、置換、非分枝のC1~8アルキルである。ある態様において、Aは、非環式、置換、非分枝のC1~6アルキルである。ある態様において、Aは、置換または非置換、環式または非環式、分枝または非分枝のヘテロ脂肪族である。ある態様において、Aは、非環式、置換または非置換、分枝または非分枝のヘテロ脂肪族である。ある態様において、Aは、非環式、置換、分枝または非分枝のヘテロ脂肪族である。ある態様において、Aは、非環式、置換、非分枝のヘテロ脂肪族である。
Rの出現の各々は、独立して、天然または非天然のアミノ酸の側鎖であり;および
nは、1から20までの整数である、
で表される。ある態様において、Aは、式:
A’は、置換または非置換、環式または非環式、分枝または非分枝の脂肪族であるか;または、置換または非置換、環式または非環式、分枝または非分枝のヘテロ脂肪族である、
で表される。
で表される。
Xは、NまたはCHであり;
Aは、結合;置換または非置換の、環式または非環式の、分枝または非分枝の脂肪族;または、置換または非置換の、環式または非環式の、分枝または非分枝のヘテロ脂肪族であり;
R1は、疎水性部分であり;
R2は、水素;酸素保護基;環式または非環式の、置換または非置換の、分枝または非分枝の脂肪族;環式または非環式の、置換または非置換の、分枝または非分枝のヘテロ脂肪族;置換または非置換の、分枝または非分枝のアシル;置換または非置換の、分枝もしくは非分枝のアリール;置換または非置換の、分枝または非分枝のヘテロアリールであり;および
R3は、核酸である、
で表される。
Xは、NまたはCHであり;
Aは、結合;置換または非置換、環式または非環式、分枝または非分枝の脂肪族;または、置換または非置換、環式または非環式、分枝または非分枝のヘテロ脂肪族であり;
R1は、疎水性部分であり;
R2は、水素;酸素保護基;環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝の脂肪族;環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝のヘテロ脂肪族;置換または非置換、分枝または非分枝のアシル;置換または非置換、分枝または非分枝のアリール;置換または非置換、分枝または非分枝のヘテロアリールであり;および
R3は、核酸である、
で表される。
Xは、NまたはCHであり;
Aは、結合;置換または非置換、環式または非環式、分枝または非分枝の脂肪族;または、置換または非置換、環式または非環式、分枝または非分枝のヘテロ脂肪族であり;
R1は、疎水性部分であり;
R2は、水素;酸素保護基;環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝の脂肪族;環式または非環式、置換または非置換、分枝または非分枝のヘテロ脂肪族;置換または非置換、分枝または非分枝のアシル;置換または非置換、分枝または非分枝のアリール;置換または非置換、分枝または非分枝のヘテロアリールであり;および
R3は、核酸である、
で表される。ある態様において、核酸分子は、式:
一態様において、本発明のヘアピンポリヌクレオチドは、DNAである1つの核酸部分と、RNAである1つの核酸部分とを含み得る。本発明のアンチセンス(ガイド)配列は、RNA様およびDNA様の領域を含む「キメラオリゴヌクレオチド」であり得る。
ある態様において、ガイド配列を超えるヌクレオチドの殆どまたは全ては(2’修飾されていようがいまいが)ホスホロチオアート連結部により連結されている。かかるコンストラクトは、その血清タンパク質に対するより高いアフィニティーに起因して、薬物動態が改善されている傾向がある。ポリヌクレオチドの非ガイド配列部分におけるホスホロチオアート連結部は一般に、一旦ガイド鎖がRISCにロードされた後は、ガイド鎖の活性に干渉しない。
本発明は、(a)一本鎖ポリヌクレオチドの安定性を著しく増大し、(b)ポリヌクレオチドのRISC複合体への効率的なローディングを促進し、および(c)一本鎖ヌクレオチドの細胞による取り込みを改善する、化学修飾パターンの説明を提供する。化学修飾パターンは、リボース修飾、骨格修飾、疎水性ヌクレオシド修飾と、抱合体型修飾との組み合わせを含んでもよい。加えて、態様のいくつかにおいて、単一のポリヌクレオチドの5’末端は、化学的にリン酸化されていてもよい。
本発明のオリゴヌクレオチドは、当該技術分野において知られているいずれの方法によっても、例として酵素による合成および/または化学合成を使用して、合成され得る。オリゴヌクレオチドは、in vitroで(例として酵素による合成および化学合成を使用して)、またはin vivoで(当該技術分野において周知の組み換えDNA技術を使用して)合成され得る。
好ましい態様において、化学合成は、修飾ポリヌクレオチドのために使用される。直鎖オリゴヌクレオチドの化学合成は、当該技術分野において周知であり、溶液または固相の技術により達成され得る。好ましくは、合成は、固相方法によるものである。オリゴヌクレオチドは、ホスホロアミダイト、亜リン酸トリエステル、H-ホスホナートおよびホスホトリエステル方法を含む、いくつかの異なる合成手順のいずれかにより、典型的には自動合成方法により、作られてもよい。
他の例示的な合成技術は、当該技術分野において周知である(例としてSambrook et al., Molecular Cloning: a Laboratory Manual, Second Edition (1989);DNA Cloning, Volumes I and II (DN Glover Ed. 1985);Oligonucleotide Synthesis(M J Gait Ed, 1984;Nucleic Acid Hybridisation(B D Hames and S J Higgins eds. 1984);A Practical Guide to Molecular Cloning (1984);またはシリーズであるMethods in Enzymology(Academic Press, Inc.)を参照)。
細胞によるオリゴヌクレオチドの取り込み
オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド組成物は、1以上の細胞または細胞ライセートと接触させられて(すなわち、接触させられるか、または、本明細書においては投与または送達されるとして言及される)、これに取り込まれる。用語「細胞」は、原核および真核細胞、好ましくは脊椎動物細胞、より好ましくは哺乳動物細胞を含む。好ましい態様において、本発明のオリゴヌクレオチド組成物は、ヒト細胞と接触させられる。
グルカン含有粒子は典型的には、および2~4ミクロンの直径を有するが、2ミクロン未満または4ミクロンを超える直径の粒子もまた、本発明の側面に適合する。
オリゴヌクレオチドの取り込みのための最適なプロトコルは、多数の因子に依存するであろうが、最も重要なのは、使用される細胞の型である。取り込みにおいて重要な他の因子は、これらに限定されないが、オリゴヌクレオチドの性質および濃度、細胞のコンフルエンス、細胞を入れる培養の種類(例として懸濁培養であるかまたはプレート培養であるか)および細胞を培養する培地の種類を含む。
カプセル化剤は、ビヒクル内にオリゴヌクレオチドを捕捉する。本発明の他の態様において、オリゴヌクレオチドは、キャリアまたはビヒクル、例としてリポソームまたはミセルと結びついてもよいが、他のキャリアを使用され得ることは、当業者により理解される通りである。リポソームは、生体膜と類似する構造を有する脂質二重層からなるビヒクルである。かかるキャリアは、細胞による取り込みを促進するため、または、オリゴヌクレオチドを標的化するため、または、オリゴヌクレオチドの薬物動態または毒性学的特性を改善するために、使用される。
本発明の中性ナノトランスポーター組成物は、疎水性修飾ポリヌクレオチド、中性脂質混合物および任意にカーゴ分子を含む。本明細書に使用される「疎水性修飾ポリヌクレオチド」は、ポリヌクレオチドを、ポリヌクレオチドの修飾の前よりも疎水性にする少なくとも1つの修飾を有する、本発明のポリヌクレオチド(すなわちsd-rxRNA)である。修飾は、疎水性分子をポリヌクレオチドに付着(共有結合的または非共有結合的に)することにより達成されてもよい。いくつかの例において、疎水性分子は、親油性基であるかまたは親油性基を含む。
本発明の目的のために、用語「フィトステロール」(また植物ステロールとも称される)は、植物において天然に存在する植物化学物質である、一群のステロイドアルコール類である。200種を超えるフィトステロールが知られている。
本発明の目的のために、用語「ステロールの側鎖」は、ステロール型分子の17位にて付着する側鎖の化学組成を指す。標準的な定義において、ステロールは、8炭素鎖を17位に保有する4環構造に限定される。本発明において、従来のものよりも長いおよび短い側鎖を持つステロール型分子が記載される。側鎖は、分枝であってもよいし、二重の骨格を含有していてもよい。
代わりに、ポリヌクレオチドは、タンパク質、ペプチド、または、疎水性分子として機能する正に荷電した化学物質に結合していてもよい。タンパク質は、プロタミン、dsRNA結合ドメインおよびアルギニンリッチペプチドからなる群から選択されてもよい。例示的な正に荷電した化学物質は、スペルミン、スペルミジン、カダベリンおよびプトレシンを含む。
他の態様において、ステロール型分子は、天然に存在するフィトステロールであってもよい。ポリ炭素鎖は、9個より長くても、直鎖であっても、分枝鎖であっても、および/または、二重結合を含有していてもよい。ポリヌクレオチド抱合体を含有するいくつかのフィトステロールは、多様な組織へのポリヌクレオチドの送達において、顕著により強力かつ活性であり得る。いくつかのフィトステロールは組織選択性を実証し得ることから、RNAiを特異的に特定の組織へ送達するための手段として使用され得る。
中性脂質混合物は、天然に存在するかまたは化学合成された、または、修飾された、飽和および不飽和脂肪酸残基のクラスから選択される製剤を含んでもよい。脂肪酸は、トリグリセリド、ジグリセリドまたは個別の脂肪酸の形態で存在し得る。他の態様において、薬理学において非経口栄養のために現在使用されている脂肪酸のよく確認された混合物および/または脂質乳液が利用されてもよい。
中性脂肪酸混合物中のステロールは、例えばコレステロールであってもよい。中性脂肪酸混合物は、完全にコリンベースの脂肪酸およびステロールからなっても、または、これは任意にカーゴ分子を含んでもよい。例えば、中性脂肪酸混合物は、少なくとも20%または25%の脂肪酸および20%または25%のステロールを有してもよい。
イントラリピッド(Intralipid)は、以下の組成から構成され得る:1000mLが以下を含有する:精製大豆油90g、精製卵リン脂質12g、無水グリセロール22g、注射用水(1000mLへの十分量)。pHは、水酸化ナトリウムで、約pH8に調整される。エネルギー含量/L:4.6MJ(190kcal)。浸透圧(およそ):300mOsm/水1kg。他の態様において、脂質乳液は、5%のベニバナ油、5%の大豆油、乳化剤として添加される最大1.2%までの卵リン脂質および注射用水中の2.5%のグリセリンを含有する、リポシン(Liposyn)である。これはまた、pH調整のために水酸化ナトリウムを含有してもよい。pH8.0(6.0~9.0)。リポシンは、276mOsmol/リットル(実測値)の浸透圧を有する。
本発明のさらに他の態様において、疎水性修飾ポリヌクレオチドの組織分布を変えるための手段として、脂質乳液の組成の変更が使用される。この方法論は、特定の組織へのポリヌクレオチドの特異的送達をもたらす。
他の態様において、カーゴ分子の脂質乳液は、70%を超えるリノール酸(C18H32O2)および/またはカルジオリピンを含む。
複合体化剤は、強力であるが共有結合ではない引力(例として静電気、ファンデルワールス、パイ・スタッキングなどの相互作用)により、本発明のオリゴヌクレオチドに結合する。一態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの細胞による取り込みを増大するために、複合体化剤と複合体化され得る。複合体化剤の例は、カチオン性脂質を含む。カチオン性脂質は、オリゴヌクレオチドを細胞へ送達するために使用され得る。しかしながら、上記のとおり、カチオン性脂質を含まない製剤が、いくつかの態様において好ましい。
例えば、一態様において、オリゴヌクレオチド組成物は、サイトフェクチンCSまたはGSV(Glen Research; Sterling, Va.から入手可能)、GS3815、GS2888などの脂質の存在下において、本明細書に記載されるとおり、長期のインキュベーション期間にわたって細胞と接触させられてもよい。
一態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは、受容体により媒介されるエンドサイトーシス機構を遺伝子の細胞中への送達のために利用する、分子抱合体として合成される(例としてBunnell et al. 1992. Somatic Cell and Molecular Genetics. 18:559およびこれにおいて引用される参考文献を参照)。
オリゴヌクレオチドの送達はまた、オリゴヌクレオチドを細胞受容体へ標的化することによっても改善され得る。標的化部分は、オリゴヌクレオチドに抱合させても、オリゴヌクレオチドに結合したキャリア基(すなわち、ポリ(L-リジン)またはリポソーム)に付着させてもよい。この方法は、特異的受容体により媒介されるエンドサイトーシスを呈す細胞にとって良好に適する。
いくつかの側面において、本開示は、疾患に関連する遺伝子をターゲティングするためのsd-rxRNAの使用に関する。いくつかの態様において、疾患に関連する遺伝子は、マトリックスメタロプロテイナーゼをコードする。いくつかの態様において、マトリックスメタロプロテイナーゼは、マトリックスメタロプロテイナーゼ1(MMP1)である。MMP1を標的とするsd-rxRNAにより処置することができる疾患の非限定的な例として、皮膚障害、関節炎(変形性関節症および関節リウマチ)、挫瘡瘢痕、慢性潰瘍(静脈性潰瘍)、壊疽(ビブリオおよびクロストリジウム属)、角膜びらん、歯周炎、水疱形成性皮膚障害(例えば、スティーブンス・ジョンソン症候群など)、皮膚の光老化(光による損傷を含む)、子宮内膜癌および子宮内膜症が挙げられる。
いくつかの態様において、MMPを標的とするsd-rxRNAは、壊疽を処置するために用いることができる。いくつかの態様において、sd-rxRNAは、MMP1を標的とする。壊疽とは、相当量の組織の壊死であり、外傷、血管疾患または感染症(VibrioまたはClostridium)に起因する罹患組織への血流の減少により引き起こされる。コラゲナーゼは、ガス壊疽の拡散における公知の病原性因子である。
いくつかの態様において、MMPを標的とするsd-rxRNAは、水疱形成性皮膚障害を処置するために用いることができる。いくつかの態様において、sd-rxRNAは、MMP1を標的とする。水疱形成性皮膚障害の非限定的な例として、スティーブンス・ジョンソン症候群および中毒性表皮壊死症が挙げられる。スティーブンス・ジョンソン症候群および中毒性表皮壊死症においては、薬物または細菌感染に対する反応に起因して、上皮(皮膚の外層)が真皮から脱離する。
いくつかの態様において、MMPを標的とするsd-rxRNAは、光老化を処置するために用いることができる。いくつかの態様において、sd-rxRNAは、MMP1を標的とする。皮膚の光老化は、真皮のコラーゲン原線維に損傷を与える紫外線A(UVA)光線に対する繰り返しの暴露から生じる。この損傷は、罹患した皮膚の不正確な修復をもたらし、これが、しわおよび/または革のような皮膚をもたらす。
いくつかの態様において、疾患に関連する遺伝子は、チロシナーゼ(TYR)をコードする。TYRを標的とするsd-rxRNAを用いて処置することができる疾患の非限定的な例として、皮膚の色素沈着障害(例えば、メラニン増加症、炎症後色素沈着過剰、肝斑、日光性黒子)、そばかす(freckle)および黒子(lentigine)(多発性黒子症候群)、網膜色素変性症、アジソン病、神経芽細胞腫、神経膠芽腫、パーキンソン病およびケロイドが挙げられる。
いくつかの態様において、TYRを標的とするsd-rxRNAは、炎症性色素沈着過剰を処置するために用いることができる。皮膚の炎症性色素沈着過剰は、炎症または皮膚の損傷の発生に続いて生じ得る。皮膚の炎症または損傷は、メラノサイトによるメラニンの産生の増大をもたらし得る。
いくつかの態様において、TYRを標的とするsd-rxRNAは、日光性黒子を処置するために用いることができる。日光性黒子は、日光により誘導されるそばかすとしても知られ、日光および/または紫外光への繰り返しの暴露により引き起こされる色素沈着過剰病変である。繰り返しの暴露は、変異を誘発し、これが、患部領域におけるメラニン産生の増大をもたらす。
いくつかの態様において、TYRを標的とするsd-rxRNAは、アジソン病を処置するために用いることができる。アジソン病(慢性副腎不全、コルチゾル低下症(hypocortisolism)および副腎機能低下症としても知られる)は、慢性の内分泌障害であり、糖質コルチコイド、アンドロゲンおよびアルドステロンのレベルの低下をもたらす。ステロイドのレベルの低下は、副腎皮質刺激ホルモン(ACTH)およびメラノサイト刺激ホルモン(MSH)のレベルの増大をもたらし、メラノサイトの活性化およびメラニンの産生をもたらす。
いくつかの態様において、TYRを標的とするsd-rxRNAは、ケロイドを処置するために用いることができる。ケロイドは、元々の皮膚の損傷を超えて広がる瘢痕である。ケロイドは、退縮しない皮膚の瘢痕の特に攻撃的な形態である。ケロイド性瘢痕は、盛り上がり、不整形状で、ピンク色から暗赤色であり、特徴的には元々の創傷の境界を超えて広がる。ケロイドは、一般的に圧痛性または有痛性であり、強い痒みを伴い得る。ケロイドは、皮膚の色が濃い個体においてより多く、しばしば家族性であり、ケロイドは、全ての皮膚型を有する人において生じ得る。
いくつかの態様において、TYRに関連する疾患は、新生物(neoplasm)である。いくつかの例において、sd-rxRNAは、新生物または新生物組織を標的とし、新生物に関連する状態または障害の少なくとも1つの症状を寛解させるために用いられる。新生物(neoplasia)とは、しばしば異常な質量の組織(すなわち、新生物)をもたらす、細胞の異常な増殖を指す。新生物は、良性、前悪性(例えば上皮内癌)、または悪性(癌性)であり得る。良性新生物は、がんに変化しない子宮筋腫および色素性母斑(すなわち、皮膚の黒子)を含む。潜在的に悪性、または前癌性の新生物として、上皮内癌が挙げられ、これは、周囲の組織に浸潤せず、むしろその正常な環境において増殖する、細胞腫の初期の形態である。悪性新生物は、一般にがんと称され、それらは周囲の組織に浸潤してこれを破壊し、転移を形成する場合もあり、最終的に宿主にとって致死性となり得る。
なお別の例において、sd-rxRNAは、限定されないが、以下において見出されるものを含む新生物または新生物細胞を標的とする:胆道癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、ボーエン病およびパジェット病を含む上皮内癌、肝臓癌、有棘細胞癌を含む口腔がん、線維肉腫および骨肉腫を含む肉腫、メラノーマを含む皮膚癌、カポジ肉腫、胚の腫瘍(精上皮腫、非精上皮腫(奇形腫、絨毛癌))を含む精巣癌、間質腫瘍および生殖細胞腫瘍、甲状腺の腺癌および髄様癌を含む甲状腺癌、ならびに腺癌およびウィルムス腫瘍を含む腎臓癌。
いくつかの例において、新生物中へのsd-rxRNAの注射は、超音波ガイダンスを伴っていてもよい。
他の例において、sd-rxRNAは、全身に、例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、または皮下で投与される。
オリゴヌクレオチドの投与または送達の最適な経路は、所望の結果および/または処置される対象に依存して変動し得る。本明細書に使用される「投与」は、細胞をオリゴヌクレオチドに接触させることを指し、in vitroで、またはin vivoで実施され得る。標的核酸分子から翻訳されるタンパク質の発現を最適に減少させるために、オリゴヌクレオチドの投薬量は、例としてRNA安定性の読み出しによりまたは治療応答により測定されるものとして、過度の実験なしに調整されてもよい。
経口投与用の医薬製剤は、散剤または顆粒、水または非水性媒体中の懸濁液または、溶液、カプセル、サケット(sachet)または錠剤を含む。加えて、増粘剤、香味剤、希釈剤、乳化剤、分散化補助剤または結合剤も、経口投与用の医薬製剤に使用されてもよい。
本発明の医薬製剤は、乳液として調製され製剤化されてもよい。乳液は通常、1つの液体が別の液体中に通常は直径0.1μmを超える液滴の形態で分散した、均質な系である。本発明の乳液は、乳化剤、安定化剤、色素、脂質、油、ワックス、脂肪酸、脂肪アルコール、脂肪エステル、湿潤剤、親水性コロイド、保存剤などの賦形剤を含んでもよく、抗酸化剤もまた、必要に応じて乳液中に存在してもよい。賦形剤は、水相、油相またはそれ自体が別の相として、溶液として存在してもよい。
一態様において、オリゴヌクレオチドの組成物は、マイクロエマルジョン(microemulsion)として製剤化される。マイクロエマルジョンは、水、油および両親媒性物質の系であって、単一の光学的等方性および熱力学的安定性の溶液である。典型的には、マイクロエマルジョンは、第1に油を水性界面活性剤溶液中に分散させ、次いで、透明な系を形成するために、充分な量の第4の成分、一般的には中程度の鎖長のアルコールを加えることにより調製される。
マイクロエマルジョンは、薬物の可溶化および増強された薬物の吸収の観点から特に関心がある。脂質ベースのマイクロエマルジョン(油/水および水/油の両方)が、薬物の経口でのバイオアベイラビリティーを増強するために提案されている。
本発明において使用されてもよい5種のカテゴリーの浸透増強剤は、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート剤および非キレート性非界面活性剤を含む。投与されるオリゴヌクレオチドの浸透を増強するために利用されてもよい他の剤は、エチレングリコールおよびプロピレングリコールなどのグリコール類、2-15ピロールなどのピロール類、アゾン類、リモネンなどのテルペン類ならびにメントンを含む。
投薬レジメンは、最適な治療応答を提供するために調整されてもよい。例えば、オリゴヌクレオチドは、繰り返して投与されてもよく、例として数回の用量が毎日投与してもよく、または、その用量が、治療状況の要件に従って比例的に低減させてもよい。オリゴヌクレオチドが細胞へ投与されるかまたは対象へ投与されるかに関わらず、当業者は、対象とするオリゴヌクレオチドの適切な用量および投与のスケジュールを容易に決定することができるであろう。
いくつかの態様において、1種より多くのsd-rxRNA分子が同時に投与される。例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10種または10種より多くの異なるsd-rxRNA分子を含む組成物が投与されてもよい。ある態様において、組成物は2または3種の異なるsd-rxRNA分子を含む。組成物が1種より多くのsd-rxRNA分子を含むとき、組成物中のsd-rxRNA分子は、同一の遺伝子または異なる遺伝子に指向し得る。
いくつかの例において、皮内注射により送達されるsd-rxRNAの有効量は、少なくとも約1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950μgまたは950μgより多く、全ての中間の値を含む。
本明細書に記載の方法により投与されるsd-rxRNA分子は、皮膚の全ての細胞型に対して効率的に標的化される。
標的遺伝子を持つ細胞は、いずれの生物から由来しても、または、それらに含有されてもよい。生物は、植物、動物、原虫、細菌、ウイルスまたは真菌であってよい。植物は、単子葉、双子葉または裸子植物であってよい;動物は脊椎動物であっても無脊椎動物であってもよい。好ましい微生物は、農業においてまたは工業により使用されるものであり、植物または動物に対して病原性であるものである。
代わりに、ベクター、例として本発明のsiRNAをコードする導入遺伝子は、当該技術分野において認識される技術を使用して、宿主細胞またはトランスジェニック動物中へ操作され得る。
細胞または非ヒト生物、特にヒト細胞または非ヒト哺乳動物の遺伝子特異的ノックアウトまたはノックダウン表現型は、処理の分析(analytic to procedures)において、例として遺伝子発現プロフィールおよび/またはプロテオームの分析などの複雑な生理学的プロセスの機能的および/または表現型的分析において、使用されてもよい。好ましくは、分析は、オリゴヌクレオチドベースのチップを使用するハイスループット法により行われる。
遺伝子の発現を阻害することにより、本発明のオリゴヌクレオチド組成物は、タンパク質の発現が関与する任意の疾患を処置するために使用することができる。オリゴヌクレオチド組成物により処置することができる疾患の例として、単に説明するために、がん、網膜症、自己免疫疾患、炎症性疾患(すなわち、ICAM-1関連障害、乾癬、潰瘍性大腸炎、クローン病)、ウイルス疾患(すなわち、HIV、C型肝炎)、miRNA障害および心血管性疾患が挙げられる。
本発明は、対象へ治療剤(例としてRNAi剤またはこれをコードするベクターもしくは導入遺伝子)を投与することにより、対象において、異常なまたは望ましくない標的遺伝子の発現または活性に関連する疾患または状態を予防するための方法を提供する。適切である場合、対象を始めに、続くRNAi治療に対してより応答性となるように、プライミング剤により処置する。異常な、または望ましくない標的遺伝子の発現または活性により引き起こされるかこれが寄与する疾患についてのリスクを有する対象は、例えば本明細書に記載の診断または予後診断アッセイのいずれかまたは任意の組み合わせにより同定することができる。予防剤の投与は、疾患または障害が予防されるように、標的遺伝子の異常の特徴である症状の顕在化に先だって行われても、あるいは、その進行において遅れて行われてもよい。標的遺伝子の異常の型に依存して、例えば標的遺伝子、標的遺伝子アゴニストまたは標的遺伝子アンタゴニスト剤を、対象を処置するために使用することができる。
本明細書において記載される核酸分子または核酸分子を含む組成物は、いくつかの態様において、機能低下した皮膚を、予め処置するか、処置するか、または、予防するために投与される。本明細書に使用される「機能低下した皮膚」は、正常な皮膚から区別される特徴を示す皮膚を指す。機能低下した皮膚は、皮膚科学的状態と関連して生じ得る。皮膚科学的状態の数個の非限定的な例として、酒さ(rosacea)、一般的な挫瘡、脂漏性皮膚炎、口囲皮膚炎、挫瘡様発疹、一過性棘融解性皮膚症(transient acantholytic dermatosis)および粟粒状壊死性挫瘡(acne necrotica miliaris)が挙げられる。いくつかの例において、機能低下した皮膚は、創傷および/または瘢痕組織を含み得る。いくつかの例において、本発明に関連する方法および組成物は、創傷の治癒、瘢痕形成の予防、低減もしくは阻害、および/または、創傷の再上皮形成の促進のために使用することができる。
いくつかの側面において、本発明に関連する核酸分子はまた、肺線維症(pulmonary fibrosis)、肝硬変、強皮症および糸球体腎炎、肺線維症(lung fibrosis)、肝線維症、皮膚線維症、筋線維症、放射線線維症、腎線維症、増殖性硝子体網膜症および子宮線維症を含む、線維性障害の処置および/または予防において使用されてもよい。
本発明に関連する核酸分子が機能低下した皮膚の形成を予防するおよび/または機能低下した皮膚の状態を改善する能力は、いくつかの例において、皮膚により示される特性を参照して測定することができる。いくつかの例において、これらの特性として、対照の皮膚と比較した、比較可能な時点における、上皮化の速度および/または機能低下した皮膚の領域のサイズの減少が挙げられる。
いくつかの態様において、本発明に関連する方法は、正常な瘢痕形成よりも顕著な有害効果を有し得る肥厚性瘢痕およびケロイドなどの異常な瘢痕形成のリスクが高い例において、機能低下した皮膚の治癒を促進するために適用することができる。いくつかの態様において、機能低下皮膚の治癒の加速を促進するおよび/または瘢痕形成を予防、低減または阻害するための本明細書に記載の方法は、異常な瘢痕の修正手術によりもたらされる機能低下した皮膚に適用される。
いくつかの態様において、本発明に関連する方法は、肝線維症を処置するために用いる。肝線維症は、慢性肝疾患のほとんどのタイプにおいて生じる、コラーゲンを含む細胞外基質タンパク質の過剰な蓄積である。これは、傷害に対する肝臓の応答を表す、瘢痕形成プロセスである。進行した肝線維症は、肝硬変、肝不全、および門脈圧亢進症となり、多くは肝移植を必要とする。皮膚および他の器官がコラーゲンおよび他の基質成分の沈着を通して創傷を治癒するように、肝臓も新しいコラーゲンの沈着を通して傷害を修復する。活性化された肝星細胞、門脈線維芽細胞および骨髄由来の筋線維芽細胞が、傷害された肝臓における主要なコラーゲン産生細胞として同定されている。これらの細胞は、TGF-β1、アンギオテンシンIIおよびレプチンなどの線維形成サイトカインにより活性化される。いくつかの態様において、本明細書に提供される方法は、線維形成細胞の蓄積を阻害し、および/または、細胞外基質タンパク質の沈着を予防することを目的とする。
例1:MMP1を標的とするsd-rxRNAの同定
MMP1を標的とするsd-rxRNAを設計し、合成し、in vitroでスクリーニングして、sd-rxRNAが標的遺伝子のmRNAレベルを低下させる能力を決定した。sd-rxRNAを、HT-1080細胞(ヒト線維肉腫細胞株、10,000細胞/ウェル、96ウェルプレート)における活性について試験した。HT-1080細胞を、無血清培地中の多様な濃度のMMP1を標的とするsd-rxRNAまたは非ターゲティング対照(NTC)のパネルで処置した。試験した濃度は、1および0.1μMであった。非ターゲティング対照sd-rxRNA(NTC)は、MMP1を標的とするsd-rxRNAと類似の構造のものであり、両方の鎖全体にわたり類似の安定化修飾を含む。投与の48時間後に、細胞を溶解し、Quantigene branched DNAアッセイにより、製造者のプロトコルに従って、遺伝子特異的プローブ(Affymetrix)を用いて、mRNAレベルを決定した。図1A~1Cは、表1および2において見出されるMMP1を標的とするsd-rxRNAが、in vitroでのHT-1080細胞における標的遺伝子のmRNAレベルを著しく低下させることを示す。
データを、ハウスキーピング遺伝子(PPIB)に対して正規化し、非ターゲティング対照に関してグラフ化した。エラーバーは、生物学的三つ組みの平均からの標準偏差を表す。
AGCATGAGTCAGACAGCCTCTGGCTTTCTGGAAGGGCAAGGACTCTATATATACAGAGGGAGCTTCCTAGCTGGGATATTGGAGCAGCAAGAGGCTGGGAAGCCATCACTTACCTTGCACTGAGAAAGAAGACAAAGGCCAGTATGCACAGCTTTCCTCCACTGCTGCTGCTGCTGTTCTGGGGTGTGGTGTCTCACAGCTTCCCAGCGACTCTAGAAACACAAGAGCAAGATGTGGACTTAGTCCAGAAATACCTGGAAAAATACTACAACCTGAAGAATGATGGGAGGCAAGTTGAAAAGCGGAGAAATAGTGGCCCAGTGGTTGAAAAATTGAAGCAAATGCAGGAATTCTTTGGGCTGAAAGTGACTGGGAAACCAGATGCTGAAACCCTGAAGGTGATGAAGCAGCCCAGATGTGGAGTGCCTGATGTGGCTCAGTTTGTCCTCACTGAGGGGAACCCTCGCTGGGAGCAAACACATCTGACCTACAGGATTGAAAATTACACGCCAGATTTGCCAAGAGCAGATGTGGACCATGCCATTGAGAAAGCCTTCCAACTCTGGAGTAATGTCACACCTCTGACATTCACCAAGGTCTCTGAGGGTCAAGCAGACATCATGATATCTTTTGTCAGGGGAGATCATCGGGACAACTCTCCTTTTGATGGACCTGGAGGAAATCTTGCTCATGCTTTTCAACCAGGCCCAGGTATTGGAGGGGATGCTCATTTTGATGAAGATGAAAGGTGGACCAACAATTTCAGAGAGTACAACTTACATCGTGTTGCAGCTCATGAACTCGGCCATTCTCTTGGACTCTCCCATTCTACTGATATCGGGGCTTTGATGTACCCTAGCTACACCTTCAGTGGTGATGTTCAGCTAGCTCAGGATGACATTGATGGCATCCAAGCCATATATGGACGTTCCCAAAATCCTGTCCAGCCCATCGGCCCACAAACCCCAAAAGCGTGTGACAGTAAGCTAACCTTTGATGCTATAACTACGATTCGGGGAGAAGTGATGTTCTTTAAAGACAGATTCTACATGCGCACAAATCCCTTCTACCCGGAAGTTGAGCTCAATTTCATTTCTGTTTTCTGGCCACAACTGCCAAATGGGCTTGAAGCTGCTTACGAATTTGCCGACAGAGATGAAGTCCGGTTTTTCAAAGGGAATAAGTACTGG
GCTGTTCAGGGACAGAATGTGCTACACGGATACCCCAAGGACATCTACAGCTCCTTTGGCTTCCCTAGAACTGTGAAGCATATCGATGCTGCTCTTTCTGAGGAAAACACTGGAAAAACCTACTTCTTTGTTGCTAACAAATACTGGAGGTATGATGAATATAAACGATCTATGGATCCAGGTTATCCCAAAATGATAGCACATGACTTTCCTGGAATTGGCCACAAAGTTGATGCAGTTTTCATGAAAGATGGATTTTTCTATTTCTTTCATGGAACAAGACAATACAAATTTGATCCTAAAACGAAGAGAATTTTGACTCTCCAGAAAGCTAATAGCTGGTTCAACTGCAGGAAAAATTGAACATTACTAATTTGAATGGAAAACACATGGTGTGAGTCCAAAGAAGGTGTTTTCCTGAAGAACTGTCTATTTTCTCAGTCATTTTTAACCTCTAGAGTCACTGATACACAGAATATAATCTTATTTATACCTCAGTTTGCATATTTTTTTACTATTTAGAATGTAGCCCTTTTTGTACTGATATAATTTAGTTCCACAAATGGTGGGTACAAAAAGTCAAGTTTGTGGCTTATGGATTCATATAGGCCAGAGTTGCAAAGATCTTTT
CCAGAGTATGCAACTCTGACGTTGATCCCAGAGAGCAGCTTCAGTGACAAACATATCCTTTCAAGACAGAAAGAGACAGGAGACATGAGTCTTTGCCGGAGGAAAAGCAGCTCAAGAACACATGTGCAGTCACTGGTGTCACCCTGGATAGGCAAGGGATAACTCTTCTAACACAAAATAAGTGTTTTATGTTTGGAATAAAGTCAACCTTGTTTCTACTGTTTTATACACTTTCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(配列番号1)
MMP1を標的とするsd-rxRNAを、in vitroでの用量応答研究において試験した。sd-rxRNAを、HT-1080細胞(ヒト線維肉腫細胞株、10,000細胞/ウェル、96ウェルプレート)における活性について試験した。HT-1080細胞を、無血清培地中の多様な濃度のMMP1を標的とするsd-rxRNAまたは非ターゲティング対照(NTC)で処置した。試験した濃度は、1、0.5、0.1、0.05、0.025および0.01μMであった。非ターゲティング対照sd-rxRNA(NTC)は、MMP1を標的とするsd-rxRNAと類似の構造のものであり、両方の鎖全体にわたり類似の安定化修飾を含む。投与の48時間後に、細胞を溶解し、Quantigene branched DNAアッセイにより、製造者のプロトコルに従って、遺伝子特異的プローブ(Affymetrix)を用いて、mRNAレベルを決定した。図2A~2Bは、in vitroでのHT-1080細胞におけるMMP1を標的とするリードsd-rxRNAの用量応答分析を示す。データを、ハウスキーピング遺伝子(PPIB)に対して正規化し、非ターゲティング対照に関してグラフ化した。エラーバーは、生物学的三つ組みの平均からの標準偏差を表す。
TYRを標的とするsd-rxRNAを設計し、合成し、in vitroでスクリーニングして、sd-rxRNAが標的遺伝子のmRNAレベルを低下させる能力を決定した。sd-rxRNAを、SK-MEL-5細胞(ヒトメラノーマ細胞株、10,000細胞/ウェル、96ウェルプレート)における活性について試験した。SK-MEL-5細胞を、無血清培地中の多様な濃度のTYRを標的とするsd-rxRNAまたは非ターゲティング対照(NTC)のパネルで処置した。試験した濃度は、1および0.1μMであった。非ターゲティング対照sd-rxRNA(NTC)は、TYRを標的とするsd-rxRNAと類似の構造のものであり、両方の鎖全体にわたって類似の安定化修飾を含む。投与の48時間後、細胞を溶解し、qPCRにより、製造者のプロトコルに従って、遺伝子特異的TaqManプローブ(Applied Biosystems)を用いて、mRNAレベルを決定した。図3は、表3および4において見出されるTYRを標的とするsd-rxRNAが、in vitroでSK-MEL-5細胞において標的遺伝子のmRNAレベルを著しく低下させることを示す。データを、ハウスキーピング遺伝子(PPIB)に対して正規化し、非ターゲティング対照に関してグラフ化した。エラーバーは、生物学的二つ組の平均からの標準偏差を表す。
ATCACTGTAGTAGTAGCTGGAAAGAGAAATCTGTGACTCCAATTAGCCAGTTCCTGCAGACCTTGTGAGGACTAGAGGAAGAATGCTCCTGGCTGTTTTGTACTGCCTGCTGTGGAGTTTCCAGACCTCCGCTGGCCATTTCCCTAGAGCCTGTGTCTCCTCTAAGAACCTGATGGAGAAGGAATGCTGTCCACCGTGGAGCGGGGACAGGAGTCCCTGTGGCCAGCTTTCAGGCAGAGGTTCCTGTCAGAATATCCTTCTGTCCAATGCACCACTTGGGCCTCAATTTCCCTTCACAGGGGTGGATGACCGGGAGTCGTGGCCTTCCGTCTTTTATAATAGGACCTGCCAGTGCTCTGGCAACTTCATGGGATTCAACTGTGGAAACTGCAAGTTTGGCTTTTGGGGACCAAACTGCACAGAGAGACGACTCTTGGTGAGAAGAAACATCTTCGATTTGAGTGCCCCAGAGAAGGACAAATTTTTTGCCTACCTCACTTTAGCAAAGCATACCATCAGCTCAGACTATGTCATCCCCATAGGGACCTATGGCCAAATGAAAAATGGATCAACACCCATGTTTAACGACATCAATATTTATGACCTCTTTGTCTGGATGCATTATTATGTGTCAATGGATGCACTGCTTGGGGGATCTGAAATCTGGAGAGACATTGATTTTGCCCATGAAGCACCAGCTTTTCTGCCTTGGCATAGACTCTTCTTGTTGCGGTGGGAACAAGAAATCCAGAAGCTGACAGGAGATGAAAACTTCACTATTCCATATTGGGACTGGCGGGATGCAGAAAAGTGTGACATTTGCACAGATGAGTACATGGGAGGTCAGCACCCCACAAATCCTAACTTACTCAGCCCAGCATCATTCTTCTCCTCTTGGCAGATTGTCTGTAGCCGATTGGAGGAGTACAACAGCCATCAGTCTTTATGCAATGGAACGCCCGAGGGACCTTTACGGCGTAATCCTGGAAACCATGACAAATCCAGAACCCCAAGGCTCCCCTCTTCAGCTGATGTAGAATTTTGCCTGAGTTTGACCCAATATGAATCTGGTTCCATGGATAAAGCTGCCAATTTCAGCTTTAGAAATACACTGGAAGGATTTGCTAGTCCACTTACTGGGATAGCGGATGCCTCTCAAAGCAGCATGCACAATGCCTTGCACATCTATATGAATGGAACAATGTCCCAGGTACAGGGATCTGCCAACGATCCTATCTTCCTTCTTCACCATGCATTTGTTGACAGTATTTTTGAGCAGTGGCTCCGAAGGCACCGTCCTCTTCAAGAAGTTTATCCAGAAGCCAATGCACCCATTGGACATAACCGGGAATCCTACATGGTTCCTTTTATACCACTGTACAGAAATGGTGATTTCTTTATTTCATCCAAAGATCTGGGCTATGACTATAGCTATCTACAAGATTCAGACCCAGACTCTTTTCAAGACTACATTAAGTCCTATTTGGAACAAGCGAGTCGGATCTGGTCATGGCTCCTTGGGGCGGCGATGGTAGGGGCCGTCCTCACTGCCCTGCTGGCAGGGCTTGTGAGCTTGCTGTGTCGTCACAAGAGAAAGCAGCTTCCTGAAGAAAAGCAGCCACTCCTCATGGAGAAAGAGGATTACCACAGCTTGTATCAGAGCCATTTATAAAAGGCTTAGGCAATAGAGTAGGGCCAAAAAGCCTGACCTCACTCTAACTCAAAGTAATGTCCAGGTTCCCAGAGAATATCTGCTGGTATTTTTCTGTAAAGACCATTTGCAAAATTGTAACCTAATACAAAGTGTAGCCTTCTTCCAACTCAGGTAGAACACACCTGTCTTTGTCTTGCTGTTTTCACTCAGCCCTTTTAACATTTTCCCCTAAGCCCATATGTCTAAGGAAAGGATGCTATTTGGTAATGAGGAACTGTTATTTGTATGTGAATTAAAGTGCTCTTATTTTAAAAAATTGAAATAATTTTGATTTTTGCCTTCTGATTATTTAAAGATCTATATATGTTTTATTGGCCCCTTCTTTATTTTAATAAAACAGTGAGAAATCTAAAAAAAAAAAAAAAAAA(配列番号84)
TYRを標的とするsd-rxRNAを、in vitroでの用量応答研究において試験した。sd-rxRNAを、SK-MEL-5細胞(ヒトメラノーマ細胞株、10,000細胞/ウェル、96ウェルプレート)において活性について試験した。SK-MEL-5細胞を、無血清培地中の多様な濃度のTYRを標的とするsd-rxRNAまたは非ターゲティング対照(NTC)のパネルで処置した。試験した濃度は、1、0.5、0.1、0.05、0.05および0.01μMであった。非ターゲティング対照sd-rxRNA(NTC)は、TYRを標的とするsd-rxRNAと類似の構造のものであり、両方の鎖全体にわたって類似の安定化修飾を含む。投与の48時間後、細胞を溶解し、qPCRにより、製造者のプロトコルに従って、遺伝子特異的TaqManプローブ(Applied Biosystems)を用いて、mRNAレベルを決定した。図4は、in vitroでのSK-MEL-5細胞におけるTYRを標的とするリードsd-rxRNAの用量応答分析を示す。データを、ハウスキーピング遺伝子(PPIB)に対して正規化し、非ターゲティング対照に関してグラフ化した。エラーバーは、生物学的三つ組みの平均からの標準偏差を表す。
元の、および最適化された、MMP1を標的とするsd-rxRNA(最適化された配列を、表5および6において示す)を、in vitroでの用量応答研究において試験した。sd-rxRNAを、HT-1080細胞(ヒト線維肉腫細胞株、10,000細胞/ウェル、96ウェルプレート)において、活性について試験した。HT-1080細胞を、無血清培地中の多様な濃度のMMP1を標的とするsd-rxRNAまたは非ターゲティング対照(#21803)で処置した。試験した濃度は、1、0.5、0.1、0.05、0.025および0.01μMであった。非ターゲティング対照sd-rxRNA(#21803)は、MMP1を標的とするsd-rxRNAと類似の構造のものであり、両方の鎖全体にわたって類似の安定化修飾を含む。投与の48時間後、細胞を溶解し、Quantigene branched DNAアッセイにより、製造者のプロトコルに従って、遺伝子特異的プローブ(Affymetrix, Santa Clara, CA)を用いて、mRNAレベルを決定した。図5Aは、in vitroでのHT-1080細胞におけるMMP1を標的とするリードsd-rxRNAの用量応答分析を示す。データを、ハウスキーピング遺伝子(TBP)に対して正規化し、非ターゲティング対照に関してグラフ化した。エラーバーは、生物学的三つ組みの平均からの標準偏差を表す。
チロシナーゼタンパク質発現に対するMMP1を標的とするsd-rxRNAの効果を、in vitroでの用量応答研究において試験した。sd-rxRNAを、HT-1080細胞(ヒト線維肉腫細胞株、100,000細胞/ウェル、96ウェルプレート)において、活性について試験した。HT-1080細胞を、無血清培地中の多様な濃度のMMP1を標的とするsd-rxRNAまたは非ターゲティング対照(#21803)で処置した。試験した濃度は、1、0.5および0.1μMであった。非ターゲティング対照sd-rxRNA(#21803)は、MMP1を標的とするsd-rxRNAと類似の構造のものであり、両方の鎖全体にわたって類似の安定化修飾を含む。投与の72時間後、条件培地を細胞から収集し、プールし、濃縮して、蛍光定量的酵素アッセイであるSensoLyte(登録商標)Plus 520 MMP-1アッセイキットを用いて、これを製造者のプロトコル(AnaSpec, Fremont, CA)に従って行って、タンパク質レベルを決定した。図6は、in vitroでのHT-1080細胞における、MMP1を標的とするsd-rxRNAによる処置の後の、MMP-1濃度の用量応答低下を示す。濃度は、標準曲線に基づいて計算し、正規化し、非ターゲティング対照に対してグラフ化した。エラーバーは、技術的二つ組の平均からの標準偏差を表す。
スクラッチ創傷治癒アッセイにおいてA549(非小細胞肺癌)細胞が遊走した距離を測定した(図7Aおよび7B)。A549をMMP1を標的とするsd-rxRNA(100,000細胞/ウェル、24ウェルPLLコートプレート)でトランスフェクトした48時間後に、スクラッチ創傷を作製した。MMP1を標的とするsd-rxRNAまたは非ターゲティング対照sd-rxRNAにいずれかによるA549細胞(100,000細胞/ウェル、24ウェルPLLコートプレート)のトランスフェクションの48時間後に、200uLのピペットチップを用いて、ウェルの中心を横切るスクラッチ創傷を、単層を通して作製した。最初のスクラッチを作製した後、ならびにスクラッチ作製の24時間後および48時間後に、細胞を観察し、イメージングした。スクラッチの幅は、Spot Advancedイメージングソフトウェア(Spot Imaging Solutions, Sterling Heights, MI)を用いて計算した。細胞遊走の距離は、時間ゼロにおけるスクラッチの平均幅から所与の時点におけるスクラッチの平均幅を減算することにより計算した。図7Bにおけるエラーバーは、生物学的三つ組みの平均からの標準偏差を表す(1イメージあたり3回の測定、1スクラッチあたり3イメージ、1処置あたり3ウェル)。
MelanoDerm(商標)(MatTek)組織を、製造者のプロトコルどおり培地交換を1日おきに行いながら、培養培地中で5uMの最適化されたsd-rxRNA化合物で14日間にわたり処置した。14日後、光学顕微鏡法を用いて組織を可視化し、次いで、ホルマリン固定し、パラフィン包埋した(図8)。横断切片を切り出し、フォンタナ・マッソン染色を行って、メラニンを同定した(図8)。TYRを標的とするsd-rxRNAで処置した組織は、表皮の構造を維持しつつ、組織中により少ないメラノサイト、およびより少ないメラニンを有する。
当業者は、慣用的な実験のみを使用して、本明細書に記載される本発明の具体的な態様についての多数の均等物を理解するかまたはそれに気付くことができるであろう。かかる均等物は、以下のクレームによって包含されることが意図される。
特許文書を含め、本明細書に開示される全ての参考文献は、それらの全体が参照されることによって組み込まれる。本出願は、2009年9月22日に出願されたPCT公開番号WO2010/033247(出願番号PCT/US2009/005247)、表題「REDUCED SIZE SELF-DELIVERING RNAI COMPOUNDS」、2014年8月5日に発行され、2012年2月16日にUS 2012/0040459として公開された、米国特許第8,796,443号、表題「REDUCED SIZE SELF-DELIVERING RNAI COMPOUNDS」、2009年2月11日に出願されたPCT公開番号WO2009/102427(出願番号PCT/US2009/000852)、表題「MODIFIED RNAI POLYNUCLEOTIDES AND USES THEREOF」、および2011年2月17日に公開された米国特許公開番号2011/0039914、表題「MODIFIED RNAI POLYNUCLEOTIDES AND USES THEREOF」、2011年3月24日に出願されたPCT公開番号WO 2011/119887(出願番号PCT/US2011/029867)、表題「RNA INTERFERENCE IN DERMAL AND FIBROTIC INDICATIONS」、および2011年9月29日にUS 2011/0237648として公開された米国特許第8,664,189号、表題「RNA INTERFERENCE IN DERMAL AND FIBROTIC INDICATIONS」の、全ての図面および明細書の全ての部分を含む全内容(配列表またはアミノ酸/ポリヌクレオチド配列を含む)を、参照によって組み込む。
Claims (11)
- 化学修飾された二本鎖核酸分子であって、
前記化学修飾された二本鎖核酸分子は、sd-rxRNA(登録商標)であり、
前記sd-rxRNA(登録商標)は、ガイド鎖およびパッセンジャー鎖を含む単離された二本鎖核酸分子であり、ここで二本鎖である分子の領域は8~15ヌクレオチド長であり、ここでガイド鎖は4~12ヌクレオチド長の一本鎖領域を含有し、ここでガイド鎖の一本鎖領域は3、4、5、6、7、8、9、10、11または12個のホスホロチオアート修飾を含有し、およびここで、単離された二本鎖核酸分子のヌクレオチドの少なくとも40%は修飾され、
前記ガイド鎖またはパッセンジャー鎖は、
(i)表5~6において示される修飾を含む、表5~6中の配列から選択される配列を含むか、または
(ii)表5~6において示される修飾を含む、表5~6中の配列から選択される配列の少なくとも12個の連続したヌクレオチドを含む、
前記化学修飾された二本鎖核酸分子。 - 該sd-rxRNA(登録商標)が、疎水性修飾され、および/または1以上の疎水性抱合体に連結されている、請求項1に記載の化学修飾された二本鎖核酸分子。
- 化学修飾された二本鎖核酸分子が、MMP-1に対して向けられ、およびここで:
i)センス鎖配列は、表5において示される修飾を含む、配列番号167、171および172からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表6において示される修飾を含む、配列番号196、197、198、199および200からなる群より選択される;
ii)センス鎖配列は、表5において示される修飾を含む、配列番号173および179からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表6において示される修飾を含む、配列番号202、203、204、205、206、207および208からなる群より選択される;
iii)センス鎖配列は、表5において示される修飾を含む、配列番号180、184および185からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表6において示される修飾を含む、配列番号209、210、211、212および213からなる群より選択される;
iv)センス鎖配列は、表5において示される修飾を含む、配列番号186および190からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表6において示される修飾を含む、配列番号215、216、217、218および219からなる群より選択される;または
v)センス鎖配列は、表5において示される修飾を含む、配列番号191および195からなる群より選択され、アンチセンス鎖配列は、表6において示される修飾を含む、配列番号220、221、222、223および224からなる群より選択される、
請求項1または2に記載の化学修飾された二本鎖核酸分子。 - 皮膚障害を処置するための組成物であって、
マトリックスメタロプロテイナーゼ-1(MMP1)、チロシナーゼ(TYR)またはプロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ2(PTGS2)をコードする遺伝子に対して向けられた核酸分子の治療有効量を含み、
核酸分子は、sd-rxRNA(登録商標)であり、
前記sd-rxRNA(登録商標)は、ガイド鎖およびパッセンジャー鎖を含む単離された二本鎖核酸分子であり、ここで二本鎖である分子の領域は8~15ヌクレオチド長であり、ここでガイド鎖は4~12ヌクレオチド長の一本鎖領域を含有し、ここでガイド鎖の一本鎖領域は3、4、5、6、7、8、9、10、11または12個のホスホロチオアート修飾を含有し、およびここで、単離された二本鎖核酸分子のヌクレオチドの少なくとも40%は修飾され、
前記ガイド鎖またはパッセンジャー鎖は、
(i)表5~6において示される修飾を含む、表5~6中の配列から選択される配列を含むか、または
(ii)表5~6において示される修飾を含む、表5~6中の配列から選択される配列の少なくとも12個の連続したヌクレオチドを含む、
前記組成物。 - 該核酸分子が、表5および6において示されるとおりの、MMP1-42、MMP1-43、MMP1-44、MMP1-45、およびMMP1-46から選択される配列を含む、請求項4に記載の組成物。
- 皮膚障害が、皮膚の光老化、挫瘡瘢痕、皮膚の色素沈着過剰、肝斑、皮膚の黒子、慢性潰瘍(静脈性潰瘍)、壊疽(ビブリオおよびクロストリジウム)、水疱形成性皮膚障害(例えば、スティーブンス・ジョンソン症候群など)、またはケロイドである、請求項4または5に記載の組成物。
- (i)局所送達のために処方される;
(ii)皮膚への送達のために処方される;
(iii)皮内注射のために処方される、または;
(iv)皮内注射の後の分子の延長放出のために処方される、
請求項4~6のいずれか一項に記載の組成物。 - 核酸分子がヌクレオチドからなり、該ヌクレオチドのうちの少なくとも1つが、2’OMeまたは2’フルオロから選択される2’化学修飾を含む、請求項4~7のいずれか一項に記載の組成物
- 結核、関節炎(変形性関節症および関節リウマチ)、角膜びらん、歯周炎、子宮内膜癌または子宮内膜症を処置するための組成物であって、
マトリックスメタロプロテイナーゼ-1(MMP1)をコードする遺伝子に対して向けられた核酸分子の治療有効量を含み、
核酸分子は、sd-rxRNA(登録商標)であり、
前記sd-rxRNA(登録商標)は、ガイド鎖およびパッセンジャー鎖を含む単離された二本鎖核酸分子であり、ここで二本鎖である分子の領域は8~15ヌクレオチド長であり、ここでガイド鎖は4~12ヌクレオチド長の一本鎖領域を含有し、ここでガイド鎖の一本鎖領域は3、4、5、6、7、8、9、10、11または12個のホスホロチオアート修飾を含有し、およびここで、単離された二本鎖核酸分子のヌクレオチドの少なくとも40%は修飾され、
前記ガイド鎖またはパッセンジャー鎖は、
(i)表5または6において示される修飾を含む、表5または表6中の配列から選択される配列の少なくとも12個の連続したヌクレオチドを含む;
(ii)表5または6において示される修飾を含む、表5または表6中の配列から選択される配列を含む;または
(iii)表5において示される修飾を含む、表5中の配列から選択されるパッセンジャー鎖配列、および表6において示される修飾を含む、表6中の配列から選択されガイド鎖配列を含む、
前記組成物。 - 単離された二本鎖核酸分子が、該単離された二本鎖核酸分子に付着した疎水性抱合体をさらに含む、請求項9に記載の組成物。
- 請求項1~3のいずれか一項に記載の化学修飾された二本鎖核酸分子を含む、組成物。
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201462046523P | 2014-09-05 | 2014-09-05 | |
US62/046,523 | 2014-09-05 | ||
US201462047972P | 2014-09-09 | 2014-09-09 | |
US62/047,972 | 2014-09-09 | ||
US201562102287P | 2015-01-12 | 2015-01-12 | |
US62/102,287 | 2015-01-12 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017513045A Division JP6836987B2 (ja) | 2014-09-05 | 2015-09-04 | Tyrまたはmmp1を標的とする核酸を用いて老化および皮膚障害を処置するための方法 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021028327A JP2021028327A (ja) | 2021-02-25 |
JP2021028327A5 JP2021028327A5 (ja) | 2021-04-08 |
JP7177129B2 true JP7177129B2 (ja) | 2022-11-22 |
Family
ID=55440489
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017513045A Active JP6836987B2 (ja) | 2014-09-05 | 2015-09-04 | Tyrまたはmmp1を標的とする核酸を用いて老化および皮膚障害を処置するための方法 |
JP2020168311A Active JP7177129B2 (ja) | 2014-09-05 | 2020-10-05 | Tyrまたはmmp1を標的とする核酸を用いて老化および皮膚障害を処置するための方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017513045A Active JP6836987B2 (ja) | 2014-09-05 | 2015-09-04 | Tyrまたはmmp1を標的とする核酸を用いて老化および皮膚障害を処置するための方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10900039B2 (ja) |
EP (1) | EP3188799B1 (ja) |
JP (2) | JP6836987B2 (ja) |
KR (2) | KR102689262B1 (ja) |
CN (1) | CN107073294A (ja) |
WO (1) | WO2016037071A2 (ja) |
Families Citing this family (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009102427A2 (en) | 2008-02-11 | 2009-08-20 | Rxi Pharmaceuticals Corp. | Modified rnai polynucleotides and uses thereof |
CA2746527A1 (en) | 2008-09-22 | 2010-03-25 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Rna interference in skin indications |
WO2010059226A2 (en) | 2008-11-19 | 2010-05-27 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of map4k4 through rnai |
US9493774B2 (en) | 2009-01-05 | 2016-11-15 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of PCSK9 through RNAi |
WO2010090762A1 (en) | 2009-02-04 | 2010-08-12 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Rna duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality |
EP3494790A1 (en) | 2010-03-02 | 2019-06-12 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Effective sensitizing dose of a gelled immunomodulating topical composition |
EP2550001B1 (en) | 2010-03-24 | 2019-05-22 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Rna interference in ocular indications |
US9080171B2 (en) | 2010-03-24 | 2015-07-14 | RXi Parmaceuticals Corporation | Reduced size self-delivering RNAi compounds |
JP6060071B2 (ja) | 2010-03-24 | 2017-01-11 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 皮膚および線維症適用におけるrna干渉 |
WO2015084897A2 (en) | 2013-12-02 | 2015-06-11 | Mirimmune, Llc | Immunotherapy of cancer |
WO2015168108A2 (en) | 2014-04-28 | 2015-11-05 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Methods for treating cancer using nucleic targeting mdm2 or mycn |
EP3188799B1 (en) | 2014-09-05 | 2022-07-06 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Methods for treating aging and skin disorders using nucleic acids targeting tyr or mmp1 |
JP6983752B2 (ja) | 2015-07-06 | 2021-12-17 | フィオ ファーマシューティカルズ コーポレーションPhio Pharmaceuticals Corp. | スーパーオキシドディスムターゼ1(sod1)を標的とする核酸分子 |
US10808247B2 (en) | 2015-07-06 | 2020-10-20 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Methods for treating neurological disorders using a synergistic small molecule and nucleic acids therapeutic approach |
JP2018531037A (ja) | 2015-10-19 | 2018-10-25 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 長い非コードrnaを標的とする減少したサイズの自己送達型核酸化合物 |
US10966912B2 (en) | 2016-03-21 | 2021-04-06 | Symrise Ag | Medicament |
WO2017218623A1 (en) * | 2016-06-14 | 2017-12-21 | Tarix Orphan Llc | Methods and compositions for the treatment of epidermolysis bullosa |
JP7167059B2 (ja) * | 2017-04-19 | 2022-11-08 | フィオ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 核酸化合物の局所送達 |
JP2021505175A (ja) * | 2017-12-11 | 2021-02-18 | ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス | Fndc3bの発現を調節するためのオリゴヌクレオチド |
TWI832851B (zh) * | 2018-05-18 | 2024-02-21 | 韓商奧利通公司 | 基質金屬蛋白酶-1之反義寡核苷酸 |
CN117603973B (zh) * | 2023-11-22 | 2024-05-14 | 青岛大学附属医院 | 一种靶向抑制Agrin基因的shRNA及其应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080182808A1 (en) | 2002-11-20 | 2008-07-31 | Beiersdorf, Inc. | Oligoribonucleotides for the treatment of degenerative skin conditions by rna interference |
JP2012502991A (ja) | 2008-09-22 | 2012-02-02 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 皮膚適用におけるrna干渉 |
JP2013523650A (ja) | 2010-03-24 | 2013-06-17 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 眼への適用におけるrna干渉 |
JP2013532952A (ja) | 2010-03-24 | 2013-08-22 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 皮膚および線維症適用におけるrna干渉 |
Family Cites Families (315)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3687808A (en) | 1969-08-14 | 1972-08-29 | Univ Leland Stanford Junior | Synthetic polynucleotides |
US4235871A (en) | 1978-02-24 | 1980-11-25 | Papahadjopoulos Demetrios P | Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles |
US4201860A (en) | 1978-05-09 | 1980-05-06 | Bristol-Myers Company | Purine derivatives |
US4415732A (en) | 1981-03-27 | 1983-11-15 | University Patents, Inc. | Phosphoramidite compounds and processes |
US4426330A (en) | 1981-07-20 | 1984-01-17 | Lipid Specialties, Inc. | Synthetic phospholipid compounds |
US5023243A (en) | 1981-10-23 | 1991-06-11 | Molecular Biosystems, Inc. | Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same |
US4501728A (en) | 1983-01-06 | 1985-02-26 | Technology Unlimited, Inc. | Masking of liposomes from RES recognition |
US5643889A (en) | 1984-07-11 | 1997-07-01 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Pennsylvania | Cholesterol conjugates of 2'5'-oligoadenylate derivatives and antiviral uses thereof |
US5082936A (en) | 1984-11-28 | 1992-01-21 | Massachusetts Institute Of Technology | Glucan composition and process for preparation thereof |
US5028703A (en) | 1988-03-11 | 1991-07-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Glucan composition and process for preparation thereof |
US4810646A (en) | 1984-11-28 | 1989-03-07 | Massachusetts Institute Of Technology | Glucan compositions and process for preparation thereof |
US4992540A (en) | 1984-11-28 | 1991-02-12 | Massachusetts Institute Of Technology | Glucan composition and process for preparation thereof |
US4897355A (en) | 1985-01-07 | 1990-01-30 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
DE3529497A1 (de) | 1985-08-17 | 1987-02-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | N(pfeil hoch)6(pfeil hoch)-disubstituierte purinderivate, verfahren zu deren herstellung sowie diese verbindungen enthaltende arzneimittel |
US4737323A (en) | 1986-02-13 | 1988-04-12 | Liposome Technology, Inc. | Liposome extrusion method |
EP0260032B1 (en) | 1986-09-08 | 1994-01-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Compounds for the cleavage at a specific position of RNA, oligomers employed for the formation of said compounds, and starting materials for the synthesis of said oligomers |
US4837028A (en) | 1986-12-24 | 1989-06-06 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
US5276019A (en) | 1987-03-25 | 1994-01-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products |
US5264423A (en) | 1987-03-25 | 1993-11-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products |
US4904582A (en) | 1987-06-11 | 1990-02-27 | Synthetic Genetics | Novel amphiphilic nucleic acid conjugates |
US4924624A (en) | 1987-10-22 | 1990-05-15 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof |
US5188897A (en) | 1987-10-22 | 1993-02-23 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates |
DE3738460A1 (de) | 1987-11-12 | 1989-05-24 | Max Planck Gesellschaft | Modifizierte oligonukleotide |
US5278302A (en) | 1988-05-26 | 1994-01-11 | University Patents, Inc. | Polynucleotide phosphorodithioates |
US5750666A (en) | 1988-05-26 | 1998-05-12 | Competitve Technologies, Inc. | Polynucleotide phosphorodithioate compounds |
US5162115A (en) | 1989-05-09 | 1992-11-10 | Pietronigro Dennis D | Antineoplastic solution and method for treating neoplasms |
US5051257A (en) | 1989-05-09 | 1991-09-24 | Pietronigro Dennis D | Antineoplastic solution and method for treating neoplasms |
ZA902710B (en) | 1989-05-22 | 1991-12-24 | Univ Georgia Res Found | Enzyme luminescence assay |
US4958013A (en) | 1989-06-06 | 1990-09-18 | Northwestern University | Cholesteryl modified oligonucleotides |
US5032401A (en) | 1989-06-15 | 1991-07-16 | Alpha Beta Technology | Glucan drug delivery system and adjuvant |
EP0491829B1 (en) | 1989-09-08 | 1997-06-04 | Alpha Beta Technology, Inc. | Composition for immune system activation |
WO1991003495A1 (en) | 1989-09-08 | 1991-03-21 | Alpha Beta Technology, Inc. | Method for producing soluble glucans |
US5591722A (en) | 1989-09-15 | 1997-01-07 | Southern Research Institute | 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity |
CA2071510C (en) | 1989-10-24 | 2004-07-06 | Chris A. Buhr | 2' modified oligonucleotides |
US5264562A (en) | 1989-10-24 | 1993-11-23 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs with novel linkages |
US5495009A (en) | 1989-10-24 | 1996-02-27 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs containing thioformacetal linkages |
US5486603A (en) | 1990-01-08 | 1996-01-23 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide having enhanced binding affinity |
US5459255A (en) | 1990-01-11 | 1995-10-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | N-2 substituted purines |
US5514786A (en) | 1990-01-11 | 1996-05-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for inhibiting RNA activity |
US5646265A (en) | 1990-01-11 | 1997-07-08 | Isis Pharmceuticals, Inc. | Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites |
US5578718A (en) | 1990-01-11 | 1996-11-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Thiol-derivatized nucleosides |
US6153737A (en) | 1990-01-11 | 2000-11-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Derivatized oligonucleotides having improved uptake and other properties |
US6399754B1 (en) | 1991-12-24 | 2002-06-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Sugar modified oligonucleotides |
US5681941A (en) | 1990-01-11 | 1997-10-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Substituted purines and oligonucleotide cross-linking |
US6358931B1 (en) | 1990-01-11 | 2002-03-19 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating RNA |
US5670633A (en) | 1990-01-11 | 1997-09-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression |
US6005087A (en) | 1995-06-06 | 1999-12-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-modified oligonucleotides |
US6395492B1 (en) | 1990-01-11 | 2002-05-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Derivatized oligonucleotides having improved uptake and other properties |
US5914396A (en) | 1990-01-11 | 1999-06-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-O-modified nucleosides and phosphoramidites |
AU7579991A (en) | 1990-02-20 | 1991-09-18 | Gilead Sciences, Inc. | Pseudonucleosides and pseudonucleotides and their polymers |
US5658731A (en) | 1990-04-09 | 1997-08-19 | Europaisches Laboratorium Fur Molekularbiologie | 2'-O-alkylnucleotides as well as polymers which contain such nucleotides |
US5470967A (en) | 1990-04-10 | 1995-11-28 | The Dupont Merck Pharmaceutical Company | Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages |
US5264618A (en) | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
US5151510A (en) | 1990-04-20 | 1992-09-29 | Applied Biosystems, Inc. | Method of synethesizing sulfurized oligonucleotide analogs |
WO1991017424A1 (en) | 1990-05-03 | 1991-11-14 | Vical, Inc. | Intracellular delivery of biologically active substances by means of self-assembling lipid complexes |
CA2040374C (en) | 1990-07-06 | 1998-06-16 | Gunnar Rorstad | Process for enhancing the resistance of aquatic animals to disease |
US5489677A (en) | 1990-07-27 | 1996-02-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms |
WO1992002258A1 (en) | 1990-07-27 | 1992-02-20 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression |
US5623070A (en) | 1990-07-27 | 1997-04-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Heteroatomic oligonucleoside linkages |
US5602240A (en) | 1990-07-27 | 1997-02-11 | Ciba Geigy Ag. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
US5386023A (en) | 1990-07-27 | 1995-01-31 | Isis Pharmaceuticals | Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling |
CA2089376C (en) | 1990-08-13 | 2010-05-04 | Phillip Dan Cook | Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression |
US5512667A (en) | 1990-08-28 | 1996-04-30 | Reed; Michael W. | Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides |
WO1992003464A1 (en) | 1990-08-28 | 1992-03-05 | Microprobe Corporation | Solid support synthesis of 3'-tailed oligonucleotides via a linking molecule |
US5561225A (en) | 1990-09-19 | 1996-10-01 | Southern Research Institute | Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages |
CA2092002A1 (en) | 1990-09-20 | 1992-03-21 | Mark Matteucci | Modified internucleoside linkages |
US5432272A (en) | 1990-10-09 | 1995-07-11 | Benner; Steven A. | Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases |
GB9022560D0 (en) | 1990-10-17 | 1990-11-28 | G B Biotechnology Limited | Processing of waste |
WO1994008003A1 (en) | 1991-06-14 | 1994-04-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE INHIBITION OF THE ras GENE |
US5419966A (en) | 1991-06-10 | 1995-05-30 | Microprobe Corporation | Solid support for synthesis of 3'-tailed oligonucleotides |
US5525719A (en) | 1991-08-30 | 1996-06-11 | Chemgenes Corporation | N-protected-2'-O-methyl-and N-protected-3'-O-methyl-ribonucleosides and their phosphoramidite derivatives |
US5214135A (en) | 1991-08-30 | 1993-05-25 | Chemgenes Corporation | N-protected-2'-O-methyl-ribonucleosides and N-protected 2'-O-methyl-3'-cyanoethyl-N-,N-diisopropyl phosphoramidite ribonucleosides |
US5607923A (en) | 1991-10-15 | 1997-03-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides for modulating cytomegalovirus having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
US5599797A (en) | 1991-10-15 | 1997-02-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
US5661134A (en) | 1991-10-15 | 1997-08-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides for modulating Ha-ras or Ki-ras having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
US6335434B1 (en) | 1998-06-16 | 2002-01-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc., | Nucleosidic and non-nucleosidic folate conjugates |
US5594121A (en) | 1991-11-07 | 1997-01-14 | Gilead Sciences, Inc. | Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines |
TW393513B (en) | 1991-11-26 | 2000-06-11 | Isis Pharmaceuticals Inc | Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines |
US5359044A (en) | 1991-12-13 | 1994-10-25 | Isis Pharmaceuticals | Cyclobutyl oligonucleotide surrogates |
US5856455A (en) | 1991-12-24 | 1999-01-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Gapped 2'-modified oligonucleotides |
KR930016437A (ko) | 1992-01-22 | 1993-08-26 | 귀틀라인, 슈미트 | 올리고뉴클레오티드 유사체, 이의 제조방법 및 용도 |
US5633360A (en) | 1992-04-14 | 1997-05-27 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation |
US5817781A (en) | 1992-06-01 | 1998-10-06 | Gilead Sciences, Inc. | Modified internucleoside linkages (II) |
EP0577558A2 (de) | 1992-07-01 | 1994-01-05 | Ciba-Geigy Ag | Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte |
US6346614B1 (en) | 1992-07-23 | 2002-02-12 | Hybridon, Inc. | Hybrid oligonucleotide phosphorothioates |
JP3351476B2 (ja) | 1993-01-22 | 2002-11-25 | 三菱化学株式会社 | リン脂質誘導体及びそれを含有するリポソーム |
EP0693123A1 (en) | 1993-03-31 | 1996-01-24 | HYBRIDON, Inc. | Modified oligonucleotides having improved anti-influenza activity |
WO1994022891A1 (en) | 1993-03-31 | 1994-10-13 | Sterling Winthrop Inc. | Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages |
ATE177430T1 (de) | 1993-05-12 | 1999-03-15 | Novartis Erfind Verwalt Gmbh | Nukleoside und oligonukleotide mit 2'- ethergruppen |
FR2705099B1 (fr) | 1993-05-12 | 1995-08-04 | Centre Nat Rech Scient | Oligonucléotides phosphorothioates triesters et procédé de préparation. |
US6015886A (en) | 1993-05-24 | 2000-01-18 | Chemgenes Corporation | Oligonucleotide phosphate esters |
US5580972A (en) | 1993-06-14 | 1996-12-03 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Purine nucleoside modifications by palladium catalyzed methods |
US5428149A (en) | 1993-06-14 | 1995-06-27 | Washington State University Research Foundation | Method for palladium catalyzed carbon-carbon coulping and products |
US5534259A (en) | 1993-07-08 | 1996-07-09 | Liposome Technology, Inc. | Polymer compound and coated particle composition |
US5532130A (en) | 1993-07-20 | 1996-07-02 | Dyad Pharmaceutical Corporation | Methods and compositions for sequence-specific hybridization of RNA by 2'-5' oligonucleotides |
US5417978A (en) | 1993-07-29 | 1995-05-23 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Liposomal antisense methyl phosphonate oligonucleotides and methods for their preparation and use |
US5614621A (en) | 1993-07-29 | 1997-03-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Process for preparing oligonucleotides using silyl-containing diamino phosphorous reagents |
ATE227342T1 (de) | 1993-09-02 | 2002-11-15 | Ribozyme Pharm Inc | Enzymatische nukleiksaüre die nicht-nukleotide enthaltet |
JP3484197B2 (ja) | 1993-09-03 | 2004-01-06 | アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド | アミン誘導化ヌクレオシドおよびオリゴヌクレオシド |
US5502177A (en) | 1993-09-17 | 1996-03-26 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
WO1995011910A1 (en) | 1993-10-27 | 1995-05-04 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | 2'-amido and 2'-peptido modified oligonucleotides |
AU687492B2 (en) | 1993-11-16 | 1998-02-26 | Genta Incorporated | Synthetic oligomers having phosphonate internucleosidyl linkages of undefined chirality mixed with non-phosphonate internucleosidyl linkages |
US5652359A (en) | 1993-12-02 | 1997-07-29 | Epoch Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides containing n-methyl thiolated bases having antiviral activity |
WO1995022553A1 (en) | 1994-02-18 | 1995-08-24 | Hybridon, Inc. | Oligonucleotides with anti-respiratory syncytial virus activity |
US5646126A (en) | 1994-02-28 | 1997-07-08 | Epoch Pharmaceuticals | Sterol modified oligonucleotide duplexes having anticancer activity |
US5596091A (en) | 1994-03-18 | 1997-01-21 | The Regents Of The University Of California | Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides |
US5651981A (en) | 1994-03-29 | 1997-07-29 | Northwestern University | Cationic phospholipids for transfection |
US5625050A (en) | 1994-03-31 | 1997-04-29 | Amgen Inc. | Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics |
US5777153A (en) | 1994-07-08 | 1998-07-07 | Gilead Sciences, Inc. | Cationic lipids |
US5580731A (en) | 1994-08-25 | 1996-12-03 | Chiron Corporation | N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith |
US5591721A (en) | 1994-10-25 | 1997-01-07 | Hybridon, Inc. | Method of down-regulating gene expression |
US5681940A (en) | 1994-11-02 | 1997-10-28 | Icn Pharmaceuticals | Sugar modified nucleosides and oligonucleotides |
US5767099A (en) | 1994-12-09 | 1998-06-16 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles containing amino acid or dervatized amino acid groups for intracellular delivery of therapeutic molecules |
US5948767A (en) | 1994-12-09 | 1999-09-07 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphile/DNA complexes |
US5830430A (en) | 1995-02-21 | 1998-11-03 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Cationic lipids and the use thereof |
AUPN166195A0 (en) | 1995-03-13 | 1995-04-06 | Norvet Research Pty Limited | Process for glucan extraction |
US6420549B1 (en) | 1995-06-06 | 2002-07-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide analogs having modified dimers |
US6221911B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-04-24 | Karo Bio Ab | Uses for thyroid hormone compounds or thyroid hormone-like compounds |
EP0874910A4 (en) | 1995-06-07 | 1999-04-21 | Life Technologies Inc | ENHANCED CATIONIC LIPID TRANSFECTION BY PEPTIDES |
US5851548A (en) | 1995-06-07 | 1998-12-22 | Gen-Probe Incorporated | Liposomes containing cationic lipids and vitamin D |
US5981501A (en) | 1995-06-07 | 1999-11-09 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers |
JP4335310B2 (ja) | 1995-06-07 | 2009-09-30 | ザ ユニバーシティ オブ ブリティッシュ コロンビア | 疎水性脂質−核酸複合中間体を通して調製される脂質−核酸粒子、及び遺伝子移送のための使用 |
AUPN398295A0 (en) | 1995-07-05 | 1995-07-27 | Carlton And United Breweries Limited | Chemical compounds and processes for their production |
US5734041A (en) | 1995-10-20 | 1998-03-31 | Mcgill University | Preparation of chiral phosphorothioate oligomers |
US5705621A (en) | 1995-11-17 | 1998-01-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric phosphite, phosphodiester, Phosphorothioate and phosphorodithioate compounds and intermediates for preparing same |
US5684143A (en) | 1996-02-21 | 1997-11-04 | Lynx Therapeutics, Inc. | Oligo-2'-fluoronucleotide N3'->P5' phosphoramidates |
US6331617B1 (en) | 1996-03-21 | 2001-12-18 | University Of Iowa Research Foundation | Positively charged oligonucleotides as regulators of gene expression |
US6444806B1 (en) | 1996-04-30 | 2002-09-03 | Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc. | Conjugates and methods of forming conjugates of oligonucleotides and carbohydrates |
US5898031A (en) | 1996-06-06 | 1999-04-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides for cleaving RNA |
US5789416B1 (en) | 1996-08-27 | 1999-10-05 | Cv Therapeutics Inc | N6 mono heterocyclic substituted adenosine derivatives |
US6111085A (en) | 1996-09-13 | 2000-08-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Carbamate-derivatized nucleosides and oligonucleosides |
US5849902A (en) | 1996-09-26 | 1998-12-15 | Oligos Etc. Inc. | Three component chimeric antisense oligonucleotides |
US6248878B1 (en) | 1996-12-24 | 2001-06-19 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Nucleoside analogs |
US6350322B1 (en) | 1997-03-21 | 2002-02-26 | Micron Technology, Inc. | Method of reducing water spotting and oxide growth on a semiconductor structure |
WO1998051278A2 (en) | 1997-05-14 | 1998-11-19 | Inex Pharmaceuticals Corporation | High efficiency encapsulation of charged therapeutic agents in lipid vesicles |
AP1427A (en) | 1997-09-15 | 2005-06-07 | Genetic Immunity Llc | Method of delivering genes to antigen presenting cells of the skin. |
US6028183A (en) | 1997-11-07 | 2000-02-22 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives and oligonucleotides containing same |
ES2308821T3 (es) | 1997-12-15 | 2008-12-01 | Astellas Pharma Inc. | Nuevos derivados de pirimidin-5-carboxamida. |
US6506559B1 (en) | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
US6020475A (en) | 1998-02-10 | 2000-02-01 | Isis Pharmeuticals, Inc. | Process for the synthesis of oligomeric compounds |
CA2326823A1 (en) | 1998-04-20 | 1999-10-28 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid molecules with novel chemical compositions capable of modulating gene expression |
US20040241845A1 (en) | 1998-05-22 | 2004-12-02 | Luc Desgroseillers | Mammalian staufen and use thereof |
US6242589B1 (en) | 1998-07-14 | 2001-06-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Phosphorothioate oligonucleotides having modified internucleoside linkages |
US6277967B1 (en) | 1998-07-14 | 2001-08-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate or 2′-modified oligonucleotides having alternating internucleoside linkages |
US6271358B1 (en) | 1998-07-27 | 2001-08-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | RNA targeted 2′-modified oligonucleotides that are conformationally preorganized |
US20040009938A1 (en) | 1998-08-07 | 2004-01-15 | Muthiah Manoharan | Methods of enhancing renal uptake of oligonucleotides |
US6043352A (en) | 1998-08-07 | 2000-03-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-O-Dimethylaminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides |
US6020483A (en) | 1998-09-25 | 2000-02-01 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Nucleoside modifications by palladium catalyzed methods |
US6455586B1 (en) | 1998-12-15 | 2002-09-24 | Leonard L. Kaplan | Topical immunomodulating compositions for treatment of aids, Hepatitis B & C, other infectious diseases, and cancer |
DE60021700T2 (de) | 1999-01-27 | 2006-06-01 | Becker, David, Dr., Abbots Langley | Formulierungen enthaltend antisense nukleotide spezifisch für connexine |
DE19956568A1 (de) | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
US6465628B1 (en) | 1999-02-04 | 2002-10-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Process for the synthesis of oligomeric compounds |
US6207819B1 (en) | 1999-02-12 | 2001-03-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds, processes and intermediates for synthesis of mixed backbone oligomeric compounds |
RU2233844C2 (ru) | 1999-02-12 | 2004-08-10 | Санкио Компани Лимитед | Новые нуклеозидные и олигонуклеотидные аналоги |
US6121437A (en) | 1999-03-16 | 2000-09-19 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Phosphate and thiophosphate protecting groups |
GB9925459D0 (en) | 1999-10-27 | 1999-12-29 | Plant Bioscience Ltd | Gene silencing |
US8017742B2 (en) | 1999-11-10 | 2011-09-13 | Japan Science And Technology Agency | Gene carrier |
JP2001206899A (ja) | 1999-11-18 | 2001-07-31 | Japan Tobacco Inc | TGF−βII型受容体に対するヒトモノクローナル抗体及びその医薬用途 |
US20040072785A1 (en) | 1999-11-23 | 2004-04-15 | Wolff Jon A. | Intravascular delivery of non-viral nucleic acid |
DE10160151A1 (de) | 2001-01-09 | 2003-06-26 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens |
US7829693B2 (en) | 1999-11-24 | 2010-11-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
US7098030B2 (en) | 1999-12-31 | 2006-08-29 | Mirus Bio Corporation | Polyampholytes for delivering polyions to a cell |
FR2804960B1 (fr) * | 2000-02-11 | 2005-06-24 | Lvmh Rech | Nouveaux oligonucleotides et utilisation d'oligonucleotides modulant l'expression de la tyrosinase et de la tyrosinase- related-protein 1 comme agents depigmentants |
US20050032733A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-02-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SiNA) |
IL151781A0 (en) | 2000-03-16 | 2003-04-10 | Genetica Inc | Methods and compositions for rna interference |
DE60140676D1 (de) | 2000-03-30 | 2010-01-14 | Massachusetts Inst Technology | Mediatoren von rns-interferenz, die rns-sequenzspezifisch sind |
US7108721B2 (en) | 2000-05-11 | 2006-09-19 | Massachusetts Institute Of Technology | Tissue regrafting |
DK1303495T3 (da) | 2000-07-24 | 2010-09-20 | Krenitsky Pharmaceuticals Inc | Substituerede 5-alkylnylpyrimidiner med neurotrofisk aktivitet |
WO2002012348A2 (en) | 2000-08-03 | 2002-02-14 | Abac R & D Gmbh | Isolation of glucan particles and uses thereof |
US6794137B2 (en) | 2000-09-08 | 2004-09-21 | New York University | Gene markers useful for detecting skin damage in response to ultraviolet radiation |
US6476003B1 (en) | 2000-11-06 | 2002-11-05 | Immusonic, Inc. | Method for preparing small particle size glucan in a dry material |
US20020132788A1 (en) | 2000-11-06 | 2002-09-19 | David Lewis | Inhibition of gene expression by delivery of small interfering RNA to post-embryonic animal cells in vivo |
CZ308053B6 (cs) | 2000-12-01 | 2019-11-27 | Max Planck Gesellschaft | Izolovaná molekula dvouřetězcové RNA, způsob její výroby a její použití |
FR2818642B1 (fr) | 2000-12-26 | 2005-07-15 | Hoechst Marion Roussel Inc | Nouveaux derives de la purine, leur procede de preparation, leur application a titre de medicaments, compositions pharmaceutiques et nouvelle utilistion |
WO2002059300A2 (en) | 2000-12-28 | 2002-08-01 | J & J Research Pty Ltd | Double-stranded rna-mediated gene suppression |
DE10100127A1 (de) | 2001-01-03 | 2002-10-02 | Henkel Kgaa | Verfahren zur Bestimmung der Homeostase der Haut |
US7044945B2 (en) | 2001-03-30 | 2006-05-16 | Sand Bruce J | Prevention of regression in thermal ciliary muscle tendinoplasty |
WO2002087541A1 (en) | 2001-04-30 | 2002-11-07 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Lipid-based formulations for gene transfer |
GB0111279D0 (en) | 2001-05-10 | 2001-06-27 | Nycomed Imaging As | Radiolabelled liposomes |
US20070032441A1 (en) | 2001-05-18 | 2007-02-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (sina) |
US20050233997A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-10-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20030158403A1 (en) | 2001-07-03 | 2003-08-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Nuclease resistant chimeric oligonucleotides |
DE10133858A1 (de) | 2001-07-12 | 2003-02-06 | Aventis Pharma Gmbh | Synthetische doppelsträngige Oligonucleotide zur gezielten Hemmung der Genexpression |
WO2003012052A2 (en) | 2001-07-30 | 2003-02-13 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Specific inhibition of gene expression by small double stranded rnas |
US7786094B2 (en) | 2001-10-09 | 2010-08-31 | Biopolymer Engineering, Inc. | Use of beta-glucans against biological warfare weapons and pathogens including anthrax |
US20040063654A1 (en) | 2001-11-02 | 2004-04-01 | Davis Mark E. | Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference |
JP2005527639A (ja) | 2001-11-02 | 2005-09-15 | インサート セラピューティクス インコーポレイテッド | Rna干渉の治療的利用のための方法及び組成物 |
US20040087526A1 (en) * | 2001-11-12 | 2004-05-06 | Shi-Lung Lin | Therapeutically useful compositions of DNA-RNA hybrid duplex constructs |
NZ534396A (en) | 2002-02-01 | 2006-11-30 | Univ Mcgill | Oligonucleotides comprising alternating segments of sugar-modified nucleosides and 2'-deoxynucleosides and uses thereof |
US20030166282A1 (en) | 2002-02-01 | 2003-09-04 | David Brown | High potency siRNAS for reducing the expression of target genes |
EP2221377B2 (en) | 2002-02-01 | 2017-05-17 | Life Technologies Corporation | Oligonucleotide compositions with enhanced efficiency |
US20060009409A1 (en) | 2002-02-01 | 2006-01-12 | Woolf Tod M | Double-stranded oligonucleotides |
MXPA04010282A (es) | 2002-04-18 | 2005-08-18 | Acuity Pharmaceuticals Inc | Medios y metodos para la inhibicion especifica de genes en celulas y tejido de cns y/u ojo. |
AU2003237249A1 (en) | 2002-05-24 | 2003-12-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides having modified nucleoside units |
FR2840217B1 (fr) * | 2002-06-03 | 2005-06-24 | Oreal | Compositions cosmetiques comprenant au moins un oligonucleotide d'arn double brin (dsrna)et leurs utilisations |
US7148342B2 (en) | 2002-07-24 | 2006-12-12 | The Trustees Of The University Of Pennyslvania | Compositions and methods for sirna inhibition of angiogenesis |
DK1527176T4 (en) | 2002-08-05 | 2017-07-03 | Silence Therapeutics Gmbh | ADDITIONAL NEW FORMS OF INTERFERRING RNA MOLECULES |
DE10238298A1 (de) | 2002-08-21 | 2004-03-04 | Beiersdorf Ag | Verwendung von Antisense-Oligonucleotiden zur Behandlung von degenerativen Hauterscheinungen |
EP1546344A4 (en) | 2002-09-18 | 2007-10-03 | Isis Pharmaceuticals Inc | EFFICIENT REDUCTION OF TARGET RNA USING OLIGOMERIC COMPOUNDS WITH SINGLE AND DOUBLE STRAPS |
AU2003291678B2 (en) | 2002-11-01 | 2009-01-15 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for siRNA inhibition of HIF-1 alpha |
ATE443764T1 (de) | 2002-11-04 | 2009-10-15 | Univ Massachusetts | Allelspezifische rna-interferenz |
US9150605B2 (en) | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation |
AU2003295600A1 (en) * | 2002-11-14 | 2004-06-15 | Dharmacon, Inc. | Functional and hyperfunctional sirna |
ATE465255T1 (de) | 2002-11-26 | 2010-05-15 | Univ Massachusetts | Verabreichung von sirnas |
ATE477337T1 (de) | 2003-01-16 | 2010-08-15 | Univ Pennsylvania | Zusammensetzungen und verfahren zur sirna-hemmung von icam-1 |
WO2004065600A2 (en) | 2003-01-17 | 2004-08-05 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Rna interference by palindromic or modified rna molecules |
DE10302421A1 (de) | 2003-01-21 | 2004-07-29 | Ribopharma Ag | Doppelsträngige Ribonukleinsäure mit verbesserter Wirksamkeit |
EP1589931A2 (en) | 2003-02-05 | 2005-11-02 | University of Massachusetts | RNAi TARGETING OF VIRUSES |
US20040162235A1 (en) | 2003-02-18 | 2004-08-19 | Trubetskoy Vladimir S. | Delivery of siRNA to cells using polyampholytes |
US20040167090A1 (en) | 2003-02-21 | 2004-08-26 | Monahan Sean D. | Covalent modification of RNA for in vitro and in vivo delivery |
WO2004078950A2 (en) | 2003-03-05 | 2004-09-16 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | METHODS AND COMPOSITIONS FOR SELECTIVE RNAi MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION IN MAMMAL CELLS |
ATE479752T1 (de) | 2003-03-07 | 2010-09-15 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Therapeutische zusammensetzungen |
JP4605799B2 (ja) | 2003-04-02 | 2011-01-05 | ダーマコン, インコーポレイテッド | Rna干渉において使用するための修飾ポリヌクレオチド |
EP2660322A3 (en) | 2003-04-17 | 2013-11-13 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Modified iRNA agents |
JP2006523464A (ja) | 2003-04-18 | 2006-10-19 | ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルバニア | アンジオポエチン1、2、及びそれらの受容体TIE2のsiRNA阻害のための組成物及びその方法 |
WO2004099372A2 (en) | 2003-05-01 | 2004-11-18 | University Of Florida | Anti-scarring ribozymes and methods |
US20060178327A1 (en) | 2003-05-30 | 2006-08-10 | Yeung Wah Hin A | Inhibition of gene expression by delivery of specially selected double stranded or other forms of small interfering RNA precursors enabling the formation and function of small interfering RNA in vivo and in vitro |
US7750144B2 (en) | 2003-06-02 | 2010-07-06 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of RNA silencing |
ATE485394T1 (de) | 2003-06-02 | 2010-11-15 | Univ Massachusetts | Verfahren und zusammensetzungen zur verbesserung der wirksamkeit und spezifität von fnai |
US7405274B2 (en) | 2003-06-04 | 2008-07-29 | Fibrogen, Inc. | Connective tissue growth factor antibodies |
EP1633770B1 (en) | 2003-06-13 | 2015-04-29 | Alnylam Europe AG | Double-stranded ribonucleic acid with increased effectiveness in an organism |
NZ544637A (en) | 2003-07-16 | 2010-04-30 | Protiva Biotherapeutics Inc | Lipid encapsulated interfering RNA |
WO2005019430A2 (en) | 2003-08-22 | 2005-03-03 | Research Development Foundation | In vitro selection of aptamer beacons |
AU2004293474B2 (en) | 2003-11-24 | 2010-12-23 | Canji, Inc. | Reduction of dermal scarring |
US8119791B2 (en) * | 2003-12-17 | 2012-02-21 | Avon Products, Inc. | si-RNA-mediated gene silencing technology to inhibit tyrosinase and reduce pigmentation |
WO2005062957A2 (en) | 2003-12-23 | 2005-07-14 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for combined therapy of disease |
EP2123759B1 (en) | 2004-02-06 | 2014-01-15 | Thermo Fisher Scientific Biosciences Inc. | Stabilized RNAS as transfection controls and silencing reagents |
US20060069050A1 (en) | 2004-02-17 | 2006-03-30 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for mediating gene silencing |
US20080071068A1 (en) | 2004-02-20 | 2008-03-20 | Hideki Oba | Cytoplasmic Localization Dna and Rna |
US8569474B2 (en) | 2004-03-09 | 2013-10-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand |
KR101147147B1 (ko) | 2004-04-01 | 2012-05-25 | 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 | Rna 간섭의 오프 타겟 효과 감소를 위한 변형된폴리뉴클레오타이드 |
US20050265957A1 (en) | 2004-04-08 | 2005-12-01 | Monahan Sean D | Polymerized formamides for use in delivery of compounds to cells |
EP1773998A2 (en) | 2004-04-20 | 2007-04-18 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Methods and compositions for enhancing delivery of double-stranded rna or a double-stranded hybrid nucleic acid to regulate gene expression in mammalian cells |
US8168600B2 (en) | 2004-04-23 | 2012-05-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for topical delivery of oligonucleotides |
PT2338332E (pt) | 2004-05-20 | 2014-05-15 | Eden Research Plc | Partícula oca de glucano ou partícula de parede celular que encapsula um componente de terpeno |
AU2005252662B2 (en) | 2004-06-03 | 2011-08-18 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Double strand compositions comprising differentially modified strands for use in gene modulation |
AU2005252273B2 (en) | 2004-06-07 | 2011-04-28 | Arbutus Biopharma Corporation | Lipid encapsulated interfering RNA |
US7740861B2 (en) | 2004-06-16 | 2010-06-22 | University Of Massachusetts | Drug delivery product and methods |
JP4971609B2 (ja) | 2004-08-27 | 2012-07-11 | アンジェスMg株式会社 | 核酸皮膚外用製剤 |
US20060211766A1 (en) | 2004-09-30 | 2006-09-21 | Kaplan Leonard L | Gelled immunomodulating topical compositions and a method of treating warts and other human papilloma virus skin infections |
US8138161B2 (en) | 2004-10-01 | 2012-03-20 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Modified small interfering RNA molecules and methods of use |
US20100069620A1 (en) | 2004-12-02 | 2010-03-18 | Rxi Pharmaceuticals Corp. | Novel compositions of chemically modified small interfering rna |
EP1827436A4 (en) | 2004-12-15 | 2011-08-10 | Merck Sharp & Dohme | ACTIVITY INHIBITORS AKT |
US20060142228A1 (en) | 2004-12-23 | 2006-06-29 | Ambion, Inc. | Methods and compositions concerning siRNA's as mediators of RNA interference |
WO2006092795A2 (en) * | 2005-03-01 | 2006-09-08 | Qbi Enterprises Ltd. | Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of ocular scarring and other fibrotic conditions |
WO2006128141A2 (en) | 2005-05-27 | 2006-11-30 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of stromal cell-derived factor-1 (sdf-1) gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
US20090018097A1 (en) | 2005-09-02 | 2009-01-15 | Mdrna, Inc | Modification of double-stranded ribonucleic acid molecules |
FR2890859B1 (fr) * | 2005-09-21 | 2012-12-21 | Oreal | Oligonucleotide d'arn double brin inhibant l'expression de la tyrosinase |
EP1948245B1 (en) | 2005-10-24 | 2011-10-05 | University of Massachusetts | Compositions and their uses for gene therapy of bone conditions |
FR2894582B1 (fr) * | 2005-12-12 | 2008-02-22 | Fabre Pierre Dermo Cosmetique | Sirna anti myosine va et depigmentation de la peau |
AU2006325030B2 (en) | 2005-12-16 | 2012-07-26 | Cellectis | Cell penetrating peptide conjugates for delivering nucleic acids into cells |
CN101426914A (zh) | 2005-12-30 | 2009-05-06 | 因特拉迪格姆公司 | 促进皮肤的无疤痕伤口痊愈的siRNA组合物以及用于伤口治疗的方法 |
EP1981543A1 (en) | 2006-01-23 | 2008-10-22 | Abbott Laboratories | Chemically modified polycation polymer for sirna delivery |
WO2007092182A2 (en) | 2006-01-26 | 2007-08-16 | University Of Massachusetts | Rna interference agents for therapeutic use |
EP2712618B1 (en) | 2006-06-23 | 2016-10-19 | EnGeneIC Molecular Delivery Pty Ltd. | Targeted delivery of drugs, therapeutic nucleic acids and functional nucleic acids to mammalian cells via intact killed bacterial cells |
US20080039415A1 (en) | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Gregory Robert Stewart | Retrograde transport of sirna and therapeutic uses to treat neurologic disorders |
CN101500548A (zh) | 2006-08-18 | 2009-08-05 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 用于体内递送多核苷酸的多缀合物 |
US7872118B2 (en) | 2006-09-08 | 2011-01-18 | Opko Ophthalmics, Llc | siRNA and methods of manufacture |
AU2007299705B2 (en) | 2006-09-22 | 2012-09-06 | Dharmacon, Inc. | Duplex oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by RNA interference |
US8039010B2 (en) | 2006-11-03 | 2011-10-18 | Allergan, Inc. | Sustained release intraocular drug delivery systems comprising a water soluble therapeutic agent and a release modifier |
US8530436B2 (en) | 2007-01-29 | 2013-09-10 | Transderm, Inc. | Methods and compositions for transdermal delivery of nucleotides |
WO2008109353A1 (en) | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting map2k gene expression and uses thereof |
WO2008109105A2 (en) | 2007-03-06 | 2008-09-12 | Flagship Ventures | Methods and compositions for improved therapeutic effects with sirna |
US9884899B2 (en) | 2007-07-06 | 2018-02-06 | Promedior, Inc. | Methods for treating fibrosis using CRP antagonists |
WO2009020344A2 (en) | 2007-08-06 | 2009-02-12 | Postech Acad Ind Found | Small interfering rnas (sirnas) controlling multiple target genes and method for preparing the same |
US20090043367A1 (en) | 2007-08-09 | 2009-02-12 | Yitzhak Zilberman | Apparatus and methods for removing an electronic implant from a body |
JP2010537639A (ja) | 2007-08-27 | 2010-12-09 | ボストン バイオメディカル, インコーポレイテッド | 非対称性干渉rnaの組成物およびその使用 |
KR20100085951A (ko) | 2007-10-03 | 2010-07-29 | 쿠아크 파마수티칼스 인코퍼레이티드 | 신규 sirna 구조 |
WO2009082607A2 (en) | 2007-12-04 | 2009-07-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Targeting lipids |
KR100949791B1 (ko) | 2007-12-18 | 2010-03-30 | 이동기 | 오프-타겟 효과를 최소화하고 RNAi 기구를 포화시키지않는 신규한 siRNA 구조 및 그 용도 |
BRPI0907008A2 (pt) | 2008-01-31 | 2015-07-07 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Métodos otimizados para liberação de dsrna alvejando o gene pcsk9 |
WO2009102427A2 (en) | 2008-02-11 | 2009-08-20 | Rxi Pharmaceuticals Corp. | Modified rnai polynucleotides and uses thereof |
CA2721183C (en) | 2008-04-11 | 2019-07-16 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components |
WO2010006237A2 (en) | 2008-07-11 | 2010-01-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Phosphorothioate oligonucleotides non-nucleosidic phosphorothiotes as delivery agents for irna agents |
WO2010008582A2 (en) | 2008-07-18 | 2010-01-21 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Phagocytic cell drug delivery system |
CA2731779A1 (en) | 2008-07-24 | 2010-01-28 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Rnai constructs and uses therof |
EP3081648A1 (en) | 2008-08-25 | 2016-10-19 | Excaliard Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotides directed against connective tissue growth factor and uses thereof |
US8946172B2 (en) | 2008-08-25 | 2015-02-03 | Excaliard Pharmaceuticals, Inc. | Method for reducing scarring during wound healing using antisense compounds directed to CTGF |
EP3375451A1 (en) | 2008-08-25 | 2018-09-19 | Excaliard Pharmaceuticals, Inc. | Method for reducing scarring during wound healing using antisense compounds directed to ctgf |
WO2010027830A2 (en) | 2008-08-25 | 2010-03-11 | Excaliard Pharmaceuticals, Inc. | Methods for modulation of connective tissue growth factor expression by administering antisense oligonucleotides through a delivery system so as to reduce scarring from wound healing and threat fibrotic diseases |
US8691971B2 (en) | 2008-09-23 | 2014-04-08 | Scott G. Petersen | Self delivering bio-labile phosphate protected pro-oligos for oligonucleotide based therapeutics and mediating RNA interference |
WO2010059226A2 (en) | 2008-11-19 | 2010-05-27 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of map4k4 through rnai |
EP2361306A1 (en) | 2008-12-04 | 2011-08-31 | OPKO Ophthalmics, LLC | Compositions and methods for selective inhibition of pro-angiogenic vegf isoforms |
US9493774B2 (en) | 2009-01-05 | 2016-11-15 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of PCSK9 through RNAi |
WO2010090762A1 (en) | 2009-02-04 | 2010-08-12 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Rna duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality |
WO2010151640A2 (en) | 2009-06-24 | 2010-12-29 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of inflammatory disorders and fibrotic disease |
US8227444B2 (en) | 2009-12-04 | 2012-07-24 | Opko Ophthalmics, Llc | Compositions and methods for inhibition of VEGF |
EP3494790A1 (en) | 2010-03-02 | 2019-06-12 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Effective sensitizing dose of a gelled immunomodulating topical composition |
US9080171B2 (en) | 2010-03-24 | 2015-07-14 | RXi Parmaceuticals Corporation | Reduced size self-delivering RNAi compounds |
AU2011340200B2 (en) | 2010-12-06 | 2017-04-06 | The University Of British Columbia | Granzyme B inhibitor compositions, methods and uses for promoting wound healing |
RU2608655C2 (ru) | 2011-02-02 | 2017-01-23 | Экскалиард Фармасьютикалс, Инк. | Способ лечения келоидов или гипертрофических рубцов с использованием антисмысловых соединений, направленно действующих на фактор роста соединительной ткани(CTGF) |
US20140072613A1 (en) | 2012-09-10 | 2014-03-13 | Cynthia Lander | Compositions and Methods for Treating Cutaneous Scarring |
EP2719762A1 (de) * | 2012-10-11 | 2014-04-16 | Secutech International Pte. Ltd. | Tyrosinaseinhibitoren zur Depigmentierung oder Haarentfernung |
WO2015084897A2 (en) | 2013-12-02 | 2015-06-11 | Mirimmune, Llc | Immunotherapy of cancer |
CA2932753A1 (en) * | 2013-12-04 | 2015-06-11 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Methods for treatment of wound healing utilizing chemically modified oligonucleotides |
WO2015168108A2 (en) | 2014-04-28 | 2015-11-05 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Methods for treating cancer using nucleic targeting mdm2 or mycn |
WO2015168605A1 (en) | 2014-05-01 | 2015-11-05 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Methods for treatment of disorders in the front of the eye utilizing nucleic acid molecules |
EP3188799B1 (en) | 2014-09-05 | 2022-07-06 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Methods for treating aging and skin disorders using nucleic acids targeting tyr or mmp1 |
US20180263925A1 (en) | 2014-12-03 | 2018-09-20 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Methods for the treatment of alopecia areata utilizing gene modulation approaches |
RS60762B1 (sr) | 2015-04-03 | 2020-10-30 | Univ Massachusetts | Oligonukleotidna jedinjenja za ciljane irnk hantingtina |
WO2016161378A1 (en) | 2015-04-03 | 2016-10-06 | University Of Massachusetts | Oligonucleotide compounds for treatment of preeclampsia and other angiogenic disorders |
EP3929293A3 (en) | 2015-04-03 | 2022-03-16 | University Of Massachusetts | Fully stabilized asymmetric sirna |
JP6983752B2 (ja) | 2015-07-06 | 2021-12-17 | フィオ ファーマシューティカルズ コーポレーションPhio Pharmaceuticals Corp. | スーパーオキシドディスムターゼ1(sod1)を標的とする核酸分子 |
US10808247B2 (en) | 2015-07-06 | 2020-10-20 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Methods for treating neurological disorders using a synergistic small molecule and nucleic acids therapeutic approach |
CA3022872C (en) * | 2015-07-27 | 2024-01-09 | Olix Pharmaceuticals, Inc. | Rna complexes that inhibit melanin production |
EP3347000A4 (en) | 2015-09-11 | 2019-03-27 | Phio Pharmaceuticals Corp. | METHODS OF TREATING DISORDERS AND SKIN DISORDERS USING HAPTENES |
JP2018531037A (ja) | 2015-10-19 | 2018-10-25 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 長い非コードrnaを標的とする減少したサイズの自己送達型核酸化合物 |
US20190117799A1 (en) | 2016-04-01 | 2019-04-25 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Stimuli-responsive nanoparticles for biomedical applications |
JP7167059B2 (ja) | 2017-04-19 | 2022-11-08 | フィオ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 核酸化合物の局所送達 |
JP2020532955A (ja) | 2017-08-07 | 2020-11-19 | フィオ ファーマシューティカルズ コーポレーションPhio Pharmaceuticals Corp. | 化学修飾されたオリゴヌクレオチド |
US20230002766A1 (en) | 2019-11-08 | 2023-01-05 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Chemically modified oligonucleotides targeting bromodomain containing protein 4 (brd4) for immunotherapy |
EP4085136A1 (en) | 2019-12-31 | 2022-11-09 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Chemically modified oligonucleotides with improved systemic delivery |
CN118043459A (zh) | 2021-08-04 | 2024-05-14 | 菲奥医药公司 | 经化学修饰的寡核苷酸 |
WO2023015264A1 (en) | 2021-08-04 | 2023-02-09 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Immunotherapy of cancer utilizing natural killer cells treated with chemically modified oligonucleotides |
WO2023130021A1 (en) | 2021-12-30 | 2023-07-06 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Chemically modified oligonucleotides with improved delivery properties |
-
2015
- 2015-09-04 EP EP15837293.8A patent/EP3188799B1/en active Active
- 2015-09-04 US US15/508,768 patent/US10900039B2/en active Active
- 2015-09-04 JP JP2017513045A patent/JP6836987B2/ja active Active
- 2015-09-04 KR KR1020237007124A patent/KR102689262B1/ko active IP Right Grant
- 2015-09-04 KR KR1020177008849A patent/KR102506169B1/ko active IP Right Grant
- 2015-09-04 CN CN201580057227.2A patent/CN107073294A/zh active Pending
- 2015-09-04 WO PCT/US2015/048565 patent/WO2016037071A2/en active Application Filing
-
2020
- 2020-10-05 JP JP2020168311A patent/JP7177129B2/ja active Active
-
2021
- 2021-01-15 US US17/150,614 patent/US11926828B2/en active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080182808A1 (en) | 2002-11-20 | 2008-07-31 | Beiersdorf, Inc. | Oligoribonucleotides for the treatment of degenerative skin conditions by rna interference |
JP2012502991A (ja) | 2008-09-22 | 2012-02-02 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 皮膚適用におけるrna干渉 |
JP2013523650A (ja) | 2010-03-24 | 2013-06-17 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 眼への適用におけるrna干渉 |
JP2013532952A (ja) | 2010-03-24 | 2013-08-22 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 皮膚および線維症適用におけるrna干渉 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6836987B2 (ja) | 2021-03-03 |
US20180030451A1 (en) | 2018-02-01 |
WO2016037071A3 (en) | 2016-04-28 |
US11926828B2 (en) | 2024-03-12 |
US10900039B2 (en) | 2021-01-26 |
KR20170044749A (ko) | 2017-04-25 |
KR20230037676A (ko) | 2023-03-16 |
JP2017527570A (ja) | 2017-09-21 |
EP3188799A4 (en) | 2018-08-22 |
EP3188799B1 (en) | 2022-07-06 |
KR102689262B1 (ko) | 2024-07-30 |
CN107073294A (zh) | 2017-08-18 |
KR102506169B1 (ko) | 2023-03-08 |
US20210348169A1 (en) | 2021-11-11 |
JP2021028327A (ja) | 2021-02-25 |
WO2016037071A2 (en) | 2016-03-10 |
EP3188799A2 (en) | 2017-07-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7177129B2 (ja) | Tyrまたはmmp1を標的とする核酸を用いて老化および皮膚障害を処置するための方法 | |
JP7167059B2 (ja) | 核酸化合物の局所送達 | |
US11021707B2 (en) | Reduced size self-delivering nucleic acid compounds targeting long non-coding RNA | |
JP6553001B2 (ja) | 皮膚および線維症適用におけるrna干渉 | |
EP3137119B1 (en) | Methods for treating cancer using a nucleic acid targeting mdm2 | |
JP6883987B2 (ja) | 化学修飾されたオリゴヌクレオチドを利用する創傷治癒の処置のための方法 | |
RU2615143C2 (ru) | Самодоставляющие PHKi соединения уменьшенного размера | |
JP2020114866A (ja) | 遺伝子調節アプローチを用いた円形脱毛症の処置方法 | |
JP2018531037A6 (ja) | 長い非コードrnaを標的とする減少したサイズの自己送達型核酸化合物 | |
JP2018519835A (ja) | スーパーオキシドディスムターゼ1(sod1)を標的とする核酸分子 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201104 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201104 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210112 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210225 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220105 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220330 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220705 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221024 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221110 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7177129 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |