JP7103591B2 - 粒子検出装置及び粒子検出方法 - Google Patents
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Description
粒子をその粒子径に応じて流体の流れに対して垂直方向へ分離し、
分離された粒子を2以上の流路に分断し、
前記流路に設置されたアパーチャを挟んで配置された電極を含む電気検出器で前記粒子を検出することを特徴とする方法も挙げられる。
本発明による粒子検出装置の実施形態を備えたマイクロチップ10は、一般的なフォトリソグラフィーとソフトリソグラフィー技術を用いて作製した。具体的な手順を以下の通り示す。
作製したマイクロチップ10は、基板上へ載置され、マイクロチップ10内の複数の粒子検出部103へ電極を接続した。電極は一対の白金線より構成され、一方の電極は導線を介してプログラマブル電流増幅器CA5350(エヌエフ回路社)へ接続され、ADコンバーターを介してPCへと接続され、送信されてきたデジタルの信号をLabViewにより解析した。また粒子検出部103へ接続される電極のもう一方は9Vの乾電池へ導線を介して接続した。
分離対象の粒子を含有する流体100P中の粒子として標準粒子を用いる場合、
0.1μm粒子としてポリスチレン標準粒子3100A(ThermoFisher製)0.2μm粒子としてポリスチレン標準粒子3200A(ThermoFisher製)
0.5μm粒子としてポリスチレン標準粒子3500A(ThermoFisher製)
1.0μm粒子としてポリスチレン標準粒子4009A(ThermoFisher製)
2.0μm粒子としてポリスチレン標準粒子4202A(ThermoFisher製)
を用いた。分離対象の粒子を含有する流体100Pとしては、0.05%(v/v)ツイーン20含有の1×PBS溶液(リン酸緩衝液)を用いた。0.05%(v/v)ツイーン20含有の1×PBS溶液は、実験前にポアサイズ0.1μmのシリンジフィルター(メルクミリポア社製)を用いて異物除去を行ってから用いた。
独自に作製したマウスモノクローナル抗体を、0.05%(v/v)ツイーン20含有の1×PBS溶液により0.66mg/mLへ調製し、乾燥機にて摂氏90度で15分加熱させることで人為的に抗体凝集体を作製した。
図15で示されるマイクロチップ10を、粒子検出流路として上述の製造実施例に基づき作製し、上述のサンプル調製実施例に基づき調製した。0.1、0.2、0.5、1.0、2.0μm標準粒子は、0.05%(v/v)ツイーン20含有の1×PBS溶液により、それぞれ5μg/mLの濃度となるよう調製した。従って、サンプル中に含まれるポリスチレン粒子全体の濃度は25μg/mLとなるよう調製した。
この時、マイクロチップ10の各流路について、流路13の高さは粒子検出部103a、粒子検出部103c以外すべて4.5μmとし、流路13の端部に、基板11の上面に貫通するインレット14a、14b、アウトレット104a、104a’、104b、104b’、104c、104c’、23(それぞれ穴の径2mm)を設けた。また流路13は、分岐流路18a(幅20μm、長さ1.5mm)、分岐流路18b(幅40μm、長さ500μm)、狭窄流路16(幅6μm、長さ20μm)、拡大流路17(拡大角度135度、最大拡大時流路幅600μm、長さ0.5mm)、ドレイン流路22(幅500μm、長さ1.7mm)、粒子回収流路102a(幅75μm、長さ4mm)、粒子回収流路102c(幅140μm、長さ7.5mm)、粒子回収流路102b(幅512μm、長さ3.75mm)とした。また、粒子検出部102aの2つのアパーチャは、どちらも幅1μm、高さ0.4μm、長さ10μmとし、粒子検出部102cの2つのアパーチャは、どちらも幅2μm、高さ0.8μm、長さ10μmとし、粒子検出部102bの2つのアパーチャは、どちらも幅3.5μm、高さ4.5μm、長さ20μmとした。各粒子検出部の形状は図14と同様であり、また式(1)において算出されるk値は、アパーチャ抵抗と、アパーチャから電極が挿入されているアウトレットまでの流路の抵抗比から、2.6とした。
以上から、本発明を用いて、複数の断面積の異なるアパーチャ、すなわち複数の検出可能粒子径範囲をもつ粒子検出部103を用いて、0.1~2μmという広範な分布を持つサンプルでも、正確な粒子径測定が可能であること確認した。
実施例1と同様にして混合粒子サンプルを調製し、AggregatesSizer(島津製作所社)により測定を行った。
測定結果を示す図20の通り、0.2と2μmのピークが消失し、0.1μmのピークが増大していることから、混合粒子サンプルでの正確な測定は難しいことが確認された。
実施例1と同じマイクロチップ10を用い、サンプル調製実施例に基づいて作製した抗体凝集体を同様に測定した。
測定結果を示す図21の通り、抗体凝集体においても測定が可能であることを確認した。
図22で示されるマイクロチップ10を、粒子検出流路として上述の製造実施例に基づき作製し、上述のサンプル調製実施例に基づき調製した。0.1、0.5、2.0μm標準粒子は、0.05%(v/v)ツイーン20含有の1×PBS溶液により、それぞれ5μg/mLの濃度となるよう調製した。従って、サンプル中に含まれるポリスチレン粒子全体の濃度は15μg/mLとなるよう調製した。
以上から、本発明を用いて、複数の断面積の異なるアパーチャ、すなわち複数の検出可能粒子径範囲をもつ粒子検出部103を用いて、0.1~2μmという広範な分布を持つサンプルでも、正確な粒子径測定が可能であることを確認した。
11 基板
11a 基板
11b 下面
13 流路
14、14a、14b インレット
16 狭窄流路
16a サンプル液側狭窄流路壁面
16b シース液側狭窄流路壁面
17 拡大流路
17a サンプル液側拡大流路壁面
17b シース液側狭拡大路壁面
18a、18b 入口側分岐流路
19 拡大開始点
21 領域
22 ドレイン流路
23 アウトレット
24a、24b 角度
25a、25b 角度
40 スロープ部分
50 粒子
51 粒子の流れる方向
52 アパーチャ形成構造
53 アパーチャ
54、54a、54b 電極
55 導線
56 電気測定器
57 電源
58 導電性溶液
59 電極挿入口
60 中継流路
61 解析部
62 粒子検出流路
100 流体
100P 流体
100N 流体
101 粒子導入流路
102a~c 粒子回収流路
103a~c 粒子検出部
104a~c アウトレット
110 粒子分離流路
110A 分岐部
110B 粒子拡散流路
Claims (9)
- 粒子がその粒子径に応じて流体の流れに対して垂直方向へ分離される粒子分離流路と、前記粒子分離流路に分岐して接続された2以上の粒子回収流路とを含む粒子検出装置であって、前記粒子回収流路がアパーチャと電気検出器とを含む粒子検出部を備え、
各粒子回収流路にある粒子検出部のアパーチャの断面積が互いに異なることで検出できる粒子径範囲が互いに異なることを特徴とする、前記粒子検出装置。 - 各粒子回収流路にある粒子検出部のアパーチャで検出できる粒子径範囲の一部が、互いに重複していることを特徴とする、請求項1に記載の粒子検出装置。
- 前記粒子回収流路の、本数、分岐部の形状、幅、高さ、長さのうち少なくとも1つのパラメーターが調整され、ある一定以上の大きさの粒子が混入しない流路構造であることを特徴とする、請求項1又は2に記載の粒子検出装置。
- 前記粒子分離流路が、流体的な上流側から下流側へ向けて、流路の幅または高さ、もしくは両方が拡大する構造を有する粒子拡散流路又は拡大流路を備える、請求項1~3のいずれか一項に記載の前記粒子検出装置。
- 前記粒子分離流路に粒子拡散流路又はピンチドフローフラクショネーションの原理を利用した流路を形成することを特徴とする、請求項1~4のいずれか一項に記載の粒子検出装置。
- 請求項1~5のいずれか1項に記載の前記粒子検出装置を用いた、流体中に含まれる粒子を検出する方法であって、
粒子をその粒子径に応じて流体の流れに対して垂直方向へ分離し、
分離された粒子を2以上の粒子回収流路に分断し、
前記粒子回収流路に設置されたアパーチャを挟んで配置された電極を含む電気検出器で前記粒子を検出することを
特徴とするものであり、
前記電気検出器の検出できる粒子径範囲が設置している流路によって異なることを特徴とする、前記方法。 - 前記電気検出器の検出できる粒子径範囲の一部が設置している流路によって互いに重複していることを特徴とする、請求項6に記載の方法。
- 前記粒子回収流路の本数、分岐部の形状、幅、高さ、長さのうち少なくとも1つのパラメーターが調整され、ある一定以上の大きさの粒子が混入しない流路構造とすることで、粒子を2以上の流路に分断することを特徴とする、請求項6又は7に記載の方法。
- 前記分離工程が、ピンチドフローフラクショネーションの原理を利用して、粒子を分離することを特徴とする、請求項6~8のいずれか一項に記載の方法。
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