JP6932690B2 - ナタマイシンおよびｃ４−ｃ２２脂肪酸を含む抗真菌組成物、これらの脂肪酸のモノグリセリドおよび／またはこれらの脂肪酸の誘導体 - Google Patents

Description

本発明は、植物および植物部分の菌類病を防除し、植物の発生および収量を改善するための組成物に関する。

植物は、世界中の作物において、莫大な損失を引き起こす多く様々な植物病原性の菌類によって攻撃され得る。植物の病気は、作物の収量と品質を大幅に低下させる可能性がある。また、収穫された果実、ナッツおよび野菜には、腐敗や品質の低下を引き起こす多種多様なカビ種がいる。カビが原因である可能性のある作物喪失の推定量は、世界の作物生産の25-30％である。特に集中作付けシステムや、気象条件がカビの成長に好都合な条件であるときには、個々の農作物の損失はずっと高くなる可能性がある。収穫が全滅することもある。先進国においては、その損失は主に経済的観点から重要であるが、途上国における影響ははるかに大きいものであり、米、トウモロコシ、バナナなどの基本的な食料品が不足する可能性がある。増加し続ける世界の人口にとっても、収量を改善し損失を防止することにより世界の食糧生産を向上させることは、最大限に重要なことである。

カビはまた、マイコトキシンの産生により損失を引き起こす可能性がある。マイコトキシンは、特定の糸状菌によって産生される毒性／発癌性代謝物である。作物中のマイコトキシン濃度が高すぎると、作物が劣化し、または破壊されてしまう。しかしながら、特に開発途上国においては、マイコトキシンが常に検知されているのか、そして、十分な対策が講じられているのかについては、疑問な状況である。成長と貯蔵の間に、作物の約25％が、人間および動物の健康に関する重大な懸念を生じるマイコトキシンの影響を受けると推定される。食品または飼料中に存在する多量のマイコトキシンによる急性の影響は、通常は、途上国または家畜に限られている。マイコトキシンは、低濃度で存在する場合には、例えば、 人々の長期的な健康に懸念を生じる。

植物の病原性カビおよびそれらが発生する可能性のある農作物によって産生されるマイコトキシンの例は：（１）アスペルギルス フラバス（Aspergillus flavus）およびアスペルギルス パラシチカス（A. parasiticus）などにより産生される、アフラトキシン（例えば、トウモロコシおよび穀物などの穀類、ピーナッツ、ピスタチオなどのナッツ類、果物とハーブ）；（２）アスペルギルス オクラセウス（A. ochraceus）およびペニシリウム ベルコサム（Penicillium verrucosum）などにより排出される、オクラトキシンＡ（例えば、トウモロコシ、穀物および大麦のような穀類、コーヒー、ココア、ブドウ、ナッツ）；（３）ある種のペニシリウム、アスペルギルスおよびビソクラミスで産生される、パツリン（主にリンゴ、他の果物、野菜および穀類でも）；（４）フザリウム グラミネアラム（Fusarium graminearum）およびフザリウム カルモラム（Fusarium culmorum）などにより産生される、DONとしても知られるデオキシニバレノール（主に小麦、大麦、オート麦、ライ麦、トウモロコシ、モロコシ、米などの穀類および穀物）がある。作物に存在し得るマイコトキシンの他の例としては、フモニシン、トリコテセン、ゼアラレノン、シトリニンおよびシクロピアゾン酸がある。

カビの成長はまた、栄養素の損失、異臭の形成および加工後の品質低下をもたらす組織の破壊をもたらし得る。多くの場合、カビ感染は圃場で生じ、その後、条件が良ければ貯蔵中にカビが成長し、例えば穀物、種子、花球根、種子ジャガイモ、果物および野菜の収穫後の損失や、朝食シリアル、ジュースまたはカットフルーツのような加工食品におけるカビ発生をもたらす。

（種子、球根、植物などの農作物部分の）土壌中、圃場中および（例えば、穀物、野菜および果実についての）収穫後の植物病原菌は、一般には、合成殺菌剤によって制御される。しかし、多くの殺菌剤は長年にわたり繰り返し使用されたために、その活性を失っており、その結果、真菌耐性の発生がもたらされている。これは短期間だけ市場に出回った新しい農薬の場合にも生じた。さらに、単培養物（例えば、バナナ キャベンディッシュ（banana Cavendish）株）の増殖が、耐性植物病原性菌株のより迅速な選択をもたらした。耐性の発生は、常に増加する処理数およびより多量の殺菌剤および／またはより多くの殺菌剤の適用をもたらすであろう。農薬を高濃度で使用するか、または農薬のカクテルを使用すると、作物自体に植物毒性の影響が生じることが多い。

現在市販されている多くの殺菌剤は、例えば 水源を汚染し、または、非標的生物に望ましくない影響を及ぼすので、有害な影響を引き起こし、自然生態系を破壊する。環境汚染に加えて労働者の安全性に関する人間の健康問題もまた特に、重要な問題である。さらに、最大残留限界を超えるのと同様、農産物上の有害な殺菌剤の消費の瞬間における高い残留レベルは、重大な懸案事項である。例えば、EU、米国、日本および他の多くの国では、厳しい規制を受けることによる消費者および政府規制当局の懸念が高まっている。ますます多くの合成農薬が禁止され、また、今後数年間で禁止される予定である。もちろん、環境と健康の観点からは、これは前向きな展開であるが、他方、これらの措置は、カビに対抗することに関して、農業と例えば世界の食糧供給において、問題を生じる。

これまでに、比較的少数の天然殺菌剤、いわゆる天然抗菌剤または殺生物剤（バイオ農薬）が上市されている。天然起源の細菌培養物、植物抽出物または他の化合物のような殺生物剤の商業的入手性は、合成農薬の負の影響を減少させるのに有用となり得るものである。しかしながら一般に、いわゆる殺生物剤は十分には有効でなく、実際の解決策を提供するものではない。

多くの商業的な殺菌剤が利用可能であり、広範囲に使用されているにもかかわらず、カビは、ほとんどすべての作物および収穫された農産物上で依然として生育しているままであると結論付けることができる。さらに、農業においては、今日適用されている有害な合成殺菌剤を代替するためものとしての環境にやさしい代替物の必要性が高いと結論づけることができる。

何十年もの間、ポリエンマクロライド抗真菌性ナタマイシンは、主にチーズおよび乾燥発酵ソーセージといった食品における真菌の増殖を防ぐために使用されてきた。ナタマイシンは、1957年に最初に記載され、ストレプトマイセス ナタレンシス（Streptomyces natalensis）のようなストレプトマイセス（Streptomyces）種を用いた発酵によって産生される。今日、この天然の抗菌剤は、食品添加物として世界中で広く使用されている。

ナタマイシンは安全な使用について長い歴史を有しており、より重要なことに、今まで耐性カビが見つかったことはない。何年にもわたって、多くの処理においてナタマイシンの潜在的使用を記載した文献が相当数公表されている。しかしながら、そのカビに対する広範囲の活性にもかかわらず、農業において商業的に使用されることはほとんどなかった。このことは、実際の農業においてナタマイシンの有効性が十分ではないという結論を正当化している。

脂肪酸、モノグリセリドおよび脂肪酸の誘導体の抗真菌活性は、一般的に知られている。1899年にすでに、クラークは脂肪酸の抗真菌性を記述している（Clark, 1899. Botan Gaz 28: 289-327）。特定の脂肪酸の植物病原性真菌の増殖に対する効果を調べた最近の研究は、ラウリン酸、ミリスチン酸およびパルミチン酸ならびにそれらのモノグリセリドのフザリウム菌株に対する抗真菌活性を記載したAltieriらの研究を含む（Altieriら, 2009. Int J Food Science Techn 44: 242-245）。より最近の研究の第2の例は、4つの病原性真菌に対する9つの脂肪酸の抗真菌活性を評価したLiuらの研究である（Liuら, 2008. Mycopathologia 166: 93-102）。植物の病原体を制御する有望な結果が報告されることもある。しかしながら、必要とされる濃度はかなり高く、インビボでの結果は実際には説得力がなかった。したがって、作物保護における天然の抗菌剤としての脂肪酸の使用は、存在しないか、または非常に限られたものとなっている。

カビに対抗し、農業における経済的損失を減らすための自然な解決策に対する強い要求があると結論づけることができる。

本発明は、ナタマイシンと、脂肪酸のファミリーからの少なくとも1つの化合物、これらの脂肪酸のモノグリセリドおよび／またはこれらの脂肪酸の誘導体とを含む新規な相乗的抗真菌組成物に関する。本発明の範囲内の脂肪酸、そのモノグリセリドおよび／またはその誘導体の鎖長は4から22である。したがって、本発明は、ナタマイシンと、C4-C22脂肪酸、これらの脂肪酸のモノグリセリドおよび／またはこれらの脂肪酸の誘導体からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を含む抗真菌組成物を提供する。

驚くべきことに、（観賞植物、植物の植物または樹木などの）農作物、（種子、花、球根、種子-ジャガイモ、穀類、果実、豆、ナッツ、野菜または花などの）農業用植物部分または（土壌、生育基材、キノコ生育基材、人工生育基材、堆肥、土壌に添加された例えば温室または栄養顆粒中の水分補給用水などの）植付用媒体が本発明の組成物で処理された時には、作物または収穫物がカビ感染に罹患しにくいことが見出された。驚くべきことに、ナタマイシンと、脂肪酸、それらのモノグリセリドおよび／またはそれらの誘導体との間に、明らかな相乗効果が見出された。

ポリエン殺菌剤は、原形質膜、特に真菌膜ステロールと相互作用することが報告されている。ナタマイシンの作用機序は、他のポリエン系殺菌剤とは異なると報告されているが、いくつかの報告では、ナタマイシンと主要な真菌ステロール、エルゴステロールとが相互作用し（te Welscherら, 2008. J Biol Chem 283: 6393-6401）、それによって膜流動性および膜結合酵素の機能を調節することが記載されている。理論に縛られるものではないが、細胞膜中に存在する脂肪酸は、膜を流動化させるのを助け、ナタマイシンとエルゴステロールとの間の相互作用を増強する。

本明細書で使用される用語「脂肪酸」は、脂肪酸および脂肪酸のナトリウム、カリウムおよびアンモニウム塩のような脂肪酸塩を包含する。

脂肪酸は、飽和または不飽和（シス、トランス）であってもよく、直鎖であっても不飽和であってもよい。C4-C22脂肪酸、これらの脂肪酸のモノグリセリドおよび／またはこれらの脂肪酸の誘導体からなる群から選択される好ましい化合物としては、C8-C20脂肪酸、これらの脂肪酸のモノグリセリドおよび／またはこれらの脂肪酸の誘導体、より好ましくは、C12-C18脂肪酸、これらの脂肪酸のモノグリセリドおよび／またはこれらの脂肪酸の誘導体が挙げられる。前記脂肪酸には、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸および／またはリノール酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸および／またはリノール酸のモノグリセリドおよび／またはパルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸および／またはリノール酸の誘導体が含まれる。

好ましい脂肪酸は、酪酸（4:0）、カプロン酸（6:0）、カプリル酸（8:0）、カプリン酸（10:0）、ウンデシレン酸（11:1）、ラウリン酸（12:0）、ミリスチン酸（14:0）、パルミチン酸（C16:0）、パルミトレイン酸（16:1）、ステアリン酸（C18:0）オレイン酸（18:1 シス-9）、エライジン酸（18:1 トランス-9）、リノール酸（C18:2）、リノレン酸（18:3）、リノール酸（18:2）およびアラキドン酸（20:4）である。

好ましいモノグリセリドには、ラウリン酸のモノグリセリド（例えば1-モノ-ラウリン）、ミリスチン酸のモノグリセリド（例えば1-モノ-ミリスチン）、およびパルミチン酸のモノグリセリド（例えば1-モノ-パルミチン）が含まれる。

脂肪酸の好ましい誘導体には、酪酸（4:0）、カプロン酸（6:0）、カプリル酸（8:0）、カプリン酸（10:0）、ウンデシレン酸（11:1）、ラウリン酸（12:0）、ミリスチン酸（14:0）、パルミチン酸（C16:0）、パルミトレイン酸（16:1）、ステアリン酸（C18:0）オレイン酸（18:1 シス-9）、エライジン酸（18:1 トランス-9）、リノール酸（C18:2）、リノレン酸（18:3）、リノール酸（18:2）およびアラキドン酸（20:4）のアルデヒド、酢酸塩、エチルエステル、アミドまたは置換アミドが含まれる。

本発明の構成によっていくつかの問題が解決され：ナタマイシンと脂肪酸またはモノグリセリドおよび／またはその誘導体との相乗効果により、より良好な有効性が達成され、かつ、必要とされるナタマイシンはより少ないものとなる。このことは、経済的な観点からみて重要である。カクテル中で他の天然または合成殺菌剤と組み合わせた場合に、これらの他の殺菌剤の必要量も少なくて済むこととなり、コスト削減、より安全な製品、より低い残留物およびより少ない環境汚染が達成される。本発明の組成物を使用すると、より良い効力が得られるので、使用時の費用はより低いものとなる。経済的な観点からみると、ナタマイシンは、環境に優しい生物学的抗菌剤の使用を制限しているほとんどの農業用途には、必要コストが高すぎるものである。本発明によりこの問題は解決され、カビに対する安全で効果的かつ環境に優しい生物学的製品の農業における幅広い応用が現実のものとなる。

理論に束縛されるものではないが、ナタマイシンと、脂肪酸、モノグリセリドおよび／/またはその誘導体との間で観察される相乗効果の少なくとも一部は、脂肪酸またはモノグリセリドおよび／またはその誘導体を含む水性組成物中におけるナタマイシンの溶解度の向上によるものであり得る。脂肪酸、モノグリセリドおよび／またはその誘導体が存在しない場合には、ナタマイシンの溶解度は、温度に依存して25〜50ppmである。脂肪酸、モノグリセリドおよび／またはその誘導体の存在下では、ナタマイシンの溶解度は、pH5〜9で上昇する。溶解度の上昇は、特に精製されたナタマイシンについて観察され、また、Shandong Freda Biotechnology Co., Ltd. (済南、中国)、Chihon Biotechnology Co., Ltd. (洛陽、中国)、およびSigma-Aldrich (ミュンヘン、ドイツ)を含む異なる生産者の異なるバッチにおいても観察された。

本発明の抗真菌組成物は、1％〜98％(w/w)のナタマイシン、好ましくは5％〜90％のナタマイシン、より好ましくは10％〜85％のナタマイシン、より好ましくは20％〜80％のナタマイシン、最も好ましくは6％〜60％(w/w)のナタマイシンを含む。

本発明の抗真菌組成物は、これらの脂肪酸のモノグリセリドおよび／またはこれらの脂肪酸の誘導体から選択される少なくとも1つの化合物を、好ましくは0.01％〜25％(w/w)、好ましくは0.1％〜10％(w/w)含む。

本発明の好ましい抗真菌組成物は、6％〜60％(w/w)のナタマイシンと、0.1％〜10％(w/w)の前記の脂肪酸のモノグリセリドおよび／またはこれらの脂肪酸の誘導体から選択される少なくとも1つの化合物を含む。

本発明に係る抗真菌組成物は、好ましくは、脂肪酸、これらの脂肪酸のモノグリセリドおよび／またはこれらの脂肪酸の誘導体からなる群から選択される少なくとも2つの化合物を含み、好ましくは、該脂肪酸、これらの脂肪酸のモノグリセリドおよび／またはこれらの脂肪酸の誘導体は、0.1％から10％(w/w)の濃度で存在する。

本発明の組成物のpHは、好ましくはpH5-9、より好ましくはpH6-8、例えばpH約7または7.5である。必要であれば、本発明の組成物のpHは、当業者に知られているように塩基または酸で調整することができる。

本発明の組成物は、好ましくは、例えばDynomill（登録商標）のようなビーズミルを用いて粉砕される。ナタマイシンの平均粒径は、好ましくは0.2〜10マイクロメートル、好ましくは0.5から5マイクロメートル、より好ましくは0.5から2マイクロメートルである。本発明の組成物の平均粒径を測定する方法は当業者に公知である。例えば、Hukkanen and Braatz, 2003. Sensors and Actuators B 96: 451-459には、組成物の平均粒径を決定するために使用することができる順方向光散乱および超音波消光を含む改変方法が記載される。好ましい方法は、例えば、Analysette 22-MicroTec plus laser-particle-sizer（フリッチュ社、イダーオーバーシュタイン、ドイツ）を用いるレーザー回折分析に基づくものである。

本発明によるさらに好ましい抗真菌組成物は、脂肪酸、これらの脂肪酸のモノグリセリドおよび／またはこれらの脂肪酸の誘導体からなる群から選択される少なくとも4つの化合物を含み、好ましくは、これら脂肪酸のそれぞれのモノグリセリドおよび／またはこれらの脂肪酸の誘導体は、0.1％から10％(w/w)で存在する。本発明の組成物は、細胞性物質を含むことができる。本発明による組成物中の前記ナタマイシンは、好ましくは、発酵生物によってバイオマスを発酵させることによって製造され、前記組成物中に存在する細胞物質は、前記ナタマイシン生成発酵生物由来である。

前記細胞性物質は、好ましくは、ナタマイシン産生細菌の残留物である化合物、またはナタマイシン産生細菌によって排出される化合物を含む。そのような化合物の例は、原形質膜およびナタマイシン産生細菌の細胞壁を含む細菌細胞壁の化合物である。そのような化合物には、水酸化ナトリウムの添加などの加水分解の際にC16-C18脂肪酸などの脂肪酸が生じるリン脂質および糖脂質などのリン脂質が含まれる。

本発明の組成物中に存在し得るナタマイシン産生細菌からの細胞物質のさらなる成分は、例えば、ペプチドグリカン（ポリ-N-アセチルグルコサミンおよびN-アセチルムラミン酸）またはムレイン、テイコ酸（例えば、ホスホジエステル結合を介して結合しているグリセロールホスフェートまたはリビトールホスフェートの細菌多糖類）、グルタミン酸、L、ガラクトース、グルコース、マンノース、フルクトース、ガラクトサミン、N-アセチルグルコサミン、ムラミン酸、炭水化物、リビトール、ペプチド、L-ジアミノピメリン酸、グリシン、アラニン、ステロール、および／または細胞−細胞接触、表面認識、細胞骨格接触、シグナル伝達、酵素活性またはナタマイシン産生細菌の膜を横切る物質輸送に関与するタンパク質などのタンパク質を含み得る。

前記さらなる成分は、細胞質に存在する化合物、プラスミド、DNA、RNA、リボソーム、細胞内膜、酵素、グリコーゲン、脂質構造、タンパク質構造および糖構造などの栄養貯蔵構造を含み得る。

本明細書に記載されている細胞物質の成分のいずれかを各組み合わせが個別に列挙されているかのようにして組み合わせることができることを理解すべきである。例えば、組成物は、ナタマイシン、脂肪酸、タンパク質、グルコース、およびデンプンを含み得る。

発酵ブロスは、ナタマイシン産生細菌を用いる適切な発酵プロセスによって産生され得る。そのような細菌には、例えば、ストレプトマイセス ナタレンシス（Streptomyces natalensis）およびストレプトマイセス ギルボスポア（Streptomyces gilvosporeus）が含まれ得る。

特定の生産菌株の発酵のための任意の適切な培地を適用することができる。例えば、発酵培地は、代謝可能な炭素源および窒素源、成長因子、無機成分および微量元素などの十分な供給源および栄養素を含むものとすることができる。発酵のための培地は、水中で調製することができ、以下の化合物の1つ以上の組み合わせを含むことができる：
酵母抽出物および／または非酵母タンパク質などや、ペプトン、大豆タンパク質、牛肉抽出物などのタンパク質加水分解物などの窒素源；
グルコース、糖蜜、ラクトース、多糖類、コーンスティープリカー、コーンスターチ、ジャガイモデンプンなどの代謝可能な炭素源；
ビタミンなどの成長因子；
カルシウム、カリウム、ナトリウム、マグネシウム、硫酸アンモニウムなどの無機元素；および／または
亜鉛、銅、鉄、ホウ素、コバルトなどの微量元素。

発酵培地は、発酵中の発泡を制御するためのシリコーン消泡剤などの消泡剤をさらに含んでもよい。

発酵は、当技術分野で公知の任意の適切な技術または方法を用いて、任意の適切な発酵容器中で行うことができる。例えば、発酵培地は、適切な温度、例えば、28-35℃で、生産株を接種し、十分な時間インキュベートしてもよい。発酵時間は、発酵培地の組成、インキュベーション温度、酸素供給、攪拌装置、接種材料の品質および発酵の進行を含む様々な要因に依存し得る。例えば、発酵時間は60から170時間であり得る。

発酵中、酸素および／または空気は、発酵の主要部分の間に発酵培地中における適切なレベルの溶存酸素を維持するよう供給され、炭素源のような供給源は十分な速度で供給され、pHが制御され得る。

ナタマイシン組成物は、異なる方法を用いて発酵ブロスから回収することができる。例えば、発酵培地および産生生物の細胞を含む発酵ブロスを処理し、産生生物における少なくとも一部または全ての生きた細胞を排除する。産生生物の細胞の除去は、発酵ブロスを蒸発、ろ過および遠心分離のような任意の適切な方法によって濃縮するために必要とされる処理工程のような1つ以上の処理工程の後に実施することもできる。蒸発または濾過を進めるために、発酵ブロスを加熱してもよい。例えば、1つのバリエーションでは、発酵ブロスを50-70℃の温度に加熱する。

バイオマスの分解は、当技術分野で公知の任意の方法を用いて実現することができる。このような産生細胞の溶解のためのこのような方法の他の例として、例えば、十分な温度で十分な時間実施される熱処理工程の使用；pHを上昇または低下させる化合物を添加して発酵ブロスのアルカリまたは酸のインキュベーションをもたらす値にすることによるpH処理；抗菌剤の使用；細胞壁分解酵素または化学的界面活性剤などの界面活性剤を用いて産生生物の細胞膜を損傷する工程の使用；ホモジナイゼーション、超音波処理、静電処理、磁場、高剪断混合などの破壊技術の使用；メタノールおよび／またはエタノールのような有機溶媒、および上記の1つ以上の方法を適用し、ナタマイシンを生成させることができる。

ナタマイシン組成物を製造する好ましい方法は、ナタマイシンを含む発酵ブロスを提供する工程；ナタマイシンを含む濾過ケーキを得るために発酵ブロスを濾過する工程;濾過ケーキをメタノールまたはエタノールで処理してバイオマスを崩壊させ、ナタマイシンの少なくとも一部を処理された濾過ケーキに溶解し、好ましくは処理された濾過ケーキのpHを、例えば水酸化ナトリウム水溶液で増加させて、ナタマイシン溶液を生成する工程；ナタマイシン溶液を抽出する工程；エタノールまたはメタノール、好ましくはメタノールで抽出する工程；ナタマイシンを得るためにpHを中和することにより、ナタマイシン溶液からナタマイシンの少なくとも一部を沈殿させる工程を含む。さらに、回収プロセスを改善するために、CaCl₂およびNaClなどの塩を添加することができ、発酵ブロスを塩析するために硫酸アンモニウムなどのアセトンおよび塩を使用することができる。

当業者に知られているように、ナタマイシンとC4-C22脂肪酸、これらの脂肪酸のモノグリセリドおよび／またはこれらの脂肪酸の誘導体から選択される少なくとも1つの化合物を含む組成物は、バイオマスの崩壊のために、メタノールおよび／またはエタノール、好ましくはメタノール、および／または、有機溶媒を使用して得ることが出来る。エタノールの繰り返し使用、またはイソプロパノール、ブタノールおよび／またはプロパノールなどの有機溶媒の使用は、ナタマイシン組成物中に存在する脂肪酸の量を減少させる。

処理された濾過ケーキ中のナタマイシンの少なくとも一部を溶解させるには、処理された濾過ケーキのpHを上昇させる。一変形例では、pHを約pH10まで上昇させる。任意の適切な塩基を用いてpHを上昇させることができる。例えば、適切な塩基は水酸化ナトリウム（NaOH）である。塩基を使用する場合、ナタマイシン溶液からのナタマイシンの少なくとも一部の沈殿は引き続き、約6-7のpHを得るために酸が添加される。このような酸としては、例えば、塩酸（HCl）が挙げられる。

処理された濾過ケーキ中のナタマイシンの少なくとも一部の溶解は、加えて、または代替として、処理された濾過ケーキのpHを低下させることを含む。一変形例では、pHは約pH3に低下する。任意の適切な酸を用いてpHを低下させることができる。例えば、適切な酸は、塩酸（HCl）である。酸が使用される場合、ナタマイシン溶液からのナタマイシンの少なくとも一部の沈殿は引き続き、約6-7のpHを得るために塩基が添加される。そのような塩基としては、例えば、水酸化ナトリウム（NaOH）が挙げられる。

本発明の組成物は好ましくは、例えば、用事調製の水または油；または、水性または非水性のすぐに使用できる組成物のような適当な希釈剤で希釈しなければならない、水性または非水性の、好ましくは油性の、濃縮ストック組成物である。

本発明の組成物は、種子粉衣、種子被覆、（例えば、圃場の野菜や果物などの）コーティングエマルジョン、（例えば、パイナップル、オレンジまたはリンゴなどの）果物に塗布されるワックス、（例えばバナナなどの）圃場の植物に噴霧することによって適用される油を調製するための土壌処理に用いることができる。本発明の組成物はまた、例えば、 噴霧または浸漬用組成物の調製に使用することができる顆粒、粉末および／または錠剤などの濃縮乾燥組成物を含む。

本発明の組成物は、好ましくは懸濁濃縮物（SC）、水分散性顆粒（WG）、水和剤（WP）、サスポエマルジョン（油性）（SE）、油分散液（OD）、分散濃縮物（DC）、乾燥粉末種子処理組成物（DS）、水スラリー化可能な粉末（WS）、流動性種子処理組成物（FS）または水分散性顆粒種子処理組成物（WG）である。

本明細書で使用される「懸濁濃縮物」は、使用前に水で希釈することを意図した液体中の固体粒子の懸濁液を指す。

本明細書で使用される「分散濃縮物」は、使用前に水で希釈することを意図した液体中の固体粒子の分散体を指す。

本明細書で使用される「水分散性顆粒」は、懸濁液または溶液などの分散液を形成する水に分散可能な顆粒形態の製剤を指す。

本明細書で使用される「水和剤」は、使用前に水または別の液体と混合されることを意図した粉末製剤を指す。

本明細書で使用される「水スラリー化可能な粉末」は、使用前に水中でスラリー状にされる粉末製剤を指す。

本発明の組成物は、好ましくは、本発明の組成物がカプセル化される、公開された国際特許出願の国際公開第2013/133706号に記載され本明細書中に参考として援用されるポリアニオンとポリカチオンとの高分子電解質複合体、または当該技術分野で知られている任意の他のカプセル化技術、例えばリポソーム、脂質構造などや例えば酵母などの空の細胞を含む。

前記高分子電解質複合体は、強い静電結合を形成する、正負に荷電した高分子電解質（ポリアニオンおよびポリカチオン）の複合体である。前記高分子電解質複合体は不溶性複合体である。この複合体単独では抗菌効力はない。高分子電解質複合体は、粘着性を有し、極性部分（荷電）および非極性部分を含む。複合体中の芳香族部分は、例えばナタマイシンなどの抗菌化合物に対して親和性を有し得る。高分子電解質複合体の粘着特性と組み合わせて、抗微生物化合物は、農業、園芸およびキノコ栽培における使用のために、土壌に最適に堆積され付着される。

高分子電解質複合体は、リグニン化合物、キサンタンガム、フミン酸およびアルギン酸塩などのポリアニオンと、キトサンおよびポリアリルアミンなどのポリカチオンとが、1:2から60:1(w/w)の間、より好ましくは1:1から50:1の間、より好ましくは2:1から30:1の間の相対量比、例えば、約2:1、約5:1、約10:1、 約15:1、約20:1、約25:1および約30:1(w/w)からなる。高分子電解質複合体におけるポリアニオン、好ましくはリグニン化合物と、ポリカチオン、好ましくはキトサンとの相対量比は、約5:1(w/w)が最も好ましい。

好ましいポリアニオンには、キサンタンガム、アルギン酸塩、リグノスルホネートなどのリグニン化合物、ペクチン、カラギーナン、フミン酸、フルボ酸、アンギコガム、コンダゴグガム、アルキルナフタレンスルホン酸ナトリウム、ポリ-γ-グルタミン酸、マレイン酸デンプン半エステル、カルボキシメチルセルロース、コンドロイチン硫酸、デキストラン硫酸、ヒアルロン酸、およびポリ（アクリル酸）、ポリリン酸およびポリ（L-ラクチド）などの合成ポリアニオンが含まれる。

好ましいポリカチオンとしては、ポリ-L-リシン、イプシロン-ポリ-L-リジン、ポリ-L-アルギニン、ポリアリルアミン、キトサンオリゴ糖およびキトサンが含まれる。高分子電解質錯体の例は：（１）（カルシウムリグノスルホネートなどの）リグニン化合物およびキトサンまたはポリアリルアミン；（２）フミン酸カリウムとキトサンまたはポリアリルアミンとの複合体である。

高分子電解質複合体は、好ましくは、本発明の組成物中に、本発明の組成物の10-800g/l、より好ましくは50-500、最も好ましくは75-250g/lの濃度で存在する。

本発明による組成物は、好ましくは、リグニン化合物、キサンタンガム、フミン酸およびアルギン酸塩などのポリアニオンと、キトサンまたはポリアリルアミンなどのポリカチオンとを、1:2と60:1(w/w)の間の相対量比で含む高分子電解質複合体からなる。

本発明の組成物は、界面活性剤、粘着剤、殺生物剤、保存剤、安定剤、酸化防止剤、消泡剤、増粘剤、UV保護剤およびスプレーオイルからなるグループから選択される少なくとも1つのさらなる化合物をさらに含み得る。

本出願で使用される界面活性剤という用語は、液体の表面張力を低下させ、ナタマイシンを含む懸濁液のより容易な拡散および分布を可能にする薬剤を指す。

前記少なくとも1種の界面活性剤は、好ましくは、少なくとも1種のアニオン性および／または少なくとも1種の非イオン性界面活性剤を含む。
該アニオン性界面活性剤は、好ましくは、ラウリル硫酸ナトリウム、Atlox MetasperseTM 500 Lおよび／またはAtlox MetasperseTM 550S（Croda Crop Care、スネイスグール、英国）、およびその類似物などのような、スチレン（メタ）アクリル共重合体、および、スルホコハク酸型の界面活性剤が挙げられる。より好ましいアニオン性界面活性剤は、エトキシル化トリスチリルフェノール硫酸塩、例えば2,4,6-トリス[1-(フェニル)エチル]フェニル-ω-ヒドロキシポリ(オキシエチレン)スルフェート（Soprophor（登録商標）4D384）、およびエトキシル化トリスチリルフェノールホスフェート、例えばポリエチレングリコール2,4,6-トリスチリルフェニルエーテルリン酸トリエタノールアミン塩（Soprophor（登録商標）FL）；ナトリウムジオクチルスルホスクシネート、例えばGeropon（登録商標）DOS；および、ナフタレンスルホネート縮合物、例えばMorwet（登録商標）D425；ラウリル硫酸ナトリウム、例えばHeliwetTM NLS90（Mosselman s.a.、B-7011 Ghlin、ベルギー）のような、エトキシル化トリスチリルフェノール塩より選択される。

前記非イオン性界面活性剤は、好ましくは、Akzo Nobel社のWitconol（登録商標）系統、Emulpon（登録商標）系統およびBerol（登録商標） 系統；Brij（登録商標）系統；Croda社のSynperonic（登録商標） 系統およびMyrj（登録商標）系統；Rhodia社のAntarox（登録商標）系統；Elementis社のSerdox（登録商標）系統およびServidox（登録商標）系統；ポリ（オキシエチレン）x-ソルビタンモノラウレート、ポリメチルメタクリレート-ポリエチレングリコールグラフトコポリマー、およびエチレンオキシド／プロピレンオキシドブロックコポリマーが挙げられる。好ましい非イオン性界面活性剤は、ポリ（オキシエチレン）x-ソルビタンモノラウレート、例えばTWEEN（登録商標）60,61または65、ポリメチルメタクリレート-ポリエチレングリコールグラフト共重合体、例えばAtlox^TM4913、エチレンオキシド／プロピレンオキシドブロックコポリマー、例えばSynperonic（登録商標）PE/L61、ATLAS G-5000およびATLAS G-5002Lから選択される。

前記少なくとも1種の界面活性剤は、好ましくは、少なくとも2種の界面活性剤、少なくとも3種の界面活性剤、少なくとも4種の界面活性剤、少なくとも5種の界面活性剤、例えば、6種の界面活性剤、7種の界面活性剤、8種の界面活性剤、9種の界面活性剤、または10種の界面活性剤といったものを含む。

少なくとも2つの界面活性剤の最も好ましい組み合わせは、Atlas^TM G 5002-L（Croda Crop Care, Cowick Hall, DN14 9AA, 英国）およびMetaSperse^TM 550 S（Croda Crop Care, Cowick Hall, DN14 9AA, 英国）を含む。

前記少なくとも2つの界面活性剤は、好ましくは、少なくとも1つの湿潤剤および少なくとも1つの分散剤をさらに含む。好ましい分散剤は、ナフタレンスルホネート縮合物、例えば、アルキルナフタレンスルホン酸ナトリウム、ホルムアルデヒド縮合物（Morwet（登録商標）D425）である。好ましい湿潤剤は、リン酸塩形態および／またはリグニンスルホネートのリン酸化されたジ-またはトリスチレン-フェノールエトキシレートの群から選択される。より好ましい湿潤剤は、エトキシル化トリスチリルフェノールホスフェート、例えばSoprophor（登録商標）FLである。

前記少なくとも1種の界面活性剤、好ましくは少なくとも2種の界面活性剤は、好ましくは、本発明による組成物中に、各界面活性剤に対して10〜10⁵ppm、より好ましくは100〜10⁴ppm、より好ましくは500〜5000ppmの濃度で存在する。

粘着剤は、好ましくは、PROLONG（登録商標）（Holland Fyto B.V., オランダ王国）およびBOND（登録商標）（Loveland Industries Ltd）のようなラテックスベースの製品、NU-FILM（登録商標）（Hygrotech Saad）とSPRAY-FAST（登録商標）（Mandops）のようなピノレン／テルペン系製品、ジェランガム、グアーガム、サクシノグリカンガム（RHEOZAN（登録商標）；Rhodia）およびキサンタンガムのような長鎖多糖類、または、水和したマグネシウム-アルミニウムケイ酸塩、例えばattapulgite、（Attagel（登録商標）；BASF）から選択される。あるいは、粘着剤は、NEOCRYL（登録商標） (DSM, オランダ王国)のようなポリアクリレートおよびポリエチレンなどのポリマーのタイプからのポリマーまたはコポリマーであってもよい。本発明の組成物は、2つ以上の異なる粘着剤も含むことができる。

固着剤は、好ましくは0〜10⁵ppm、より好ましくは100〜10⁴ppm、より好ましくは500〜5000ppmの量で存在する。

本発明による組成物中のナタマイシンに加えて好ましい殺生物剤は、抗真菌剤、抗菌剤、殺虫剤および／または殺ダニ剤などの抗菌化合物を含む。本発明の組成物はまた、2種以上の抗菌性化合物、2種以上の除草剤、2種以上の殺虫剤、2種以上の殺ダニ剤、2種以上の殺菌剤、または、例えば、少なくとも1つの抗微生物化合物と少なくとも1つの殺虫剤、少なくとも1つの抗微生物化合物と少なくとも1つの除草剤、少なくとも1つの抗菌化合物と少なくとも1つの殺ダニ剤、少なくとも1つの抗菌化合物と少なくとも1つの殺菌剤、少なくとも1つの除草剤と少なくとも1つの殺虫剤、少なくとも1種の除草剤と少なくとも1種の殺ダニ剤、少なくとも1種の除草剤と少なくとも1種の殺菌剤、少なくとも1種の殺虫剤と少なくとも1種の殺ダニ剤、および、少なくとも1種の殺虫剤と少なくとも1種の殺菌剤、との組み合わせのような、2種以上の追加の殺生剤を含んでもよい。いくつかの殺生物剤は、当業者に知られているように、広い範囲の標的生物を有し、したがって、殺生物剤の複数の亜群に含まれる。

好ましい抗菌化合物は抗真菌化合物である。追加の抗真菌化合物の例は、ピリメタニル（pyrimethanil）, フルジオキソニル（fludioxonil）, イマザリル（imazalil）, チアベンダゾール（thiabendazole）, オルトフェニルフェノールナトリウム（sodium ortho-phenylphenate）, ピリメタニル（pyrimethanil）, ピラクロストロビン（pyraclostrobin）, ボスカリド（boscalid）, カルベンダジム（carbendazim）, 2-フェニルフェノール（2-phenylphenol）；8-ヒドロキシキノリンスルフェート（8-hydroxyquinoline sulphate）；アシベンゾル-5-メチル（acibenzolar-5-methyl）；アクチノベート（actinovate）；アルジモルフ（aldimorph）；アミドフルメット（amidoflumet）；アンプロピルホス（ampropylfos）；アンプロピルホス-カリウム（ampropylfos-potassium）；アンドプリム（andoprim）；アニラジン（anilazine）；アゾキシストロビン（azoxystrobin）；ベナラキシル（benalaxyl）；ベノダニル（benodanil）；ベノミル（benomyl）（メチル1-（ブチルカルバモイル）ベンズイミダゾール-2-イルカルバメート）；ベンチアバルカルブ-イソプロピル（benthiavalicarb-isopropyl）；ベンズアマクリル（benzamacril）；ベンズアマクリル-イソブチル（benzamacril-isobutyl）；ビラナフォス（bilanafos）；ビナパクリル（binapacryl）；ビフェニル（biphenyl）；ブラストサイジン-S（blasticidin-S）；ボスカリド（boscalid）；ブピリメート（bupirimate）；ブチオベート（buthiobate）；ブチルアミン（butylamine）；カルシウムポリスルフィド（calcium polysulphide）；カプシマイシン（capsimycin）；カプタホール（captafol）；カプタン（captan）（N-（トリクロロメチルチオ）シクロヘクス-4-エン-1,2-ジカルボキシミド）；カルベンダジム（carbendazim）；カルボキシン（carboxin）；カルプロパミド（carpropamid）；カルボン（carvone）；キノメチオナート（chinomethionat）；クロベンチアゾン（chlobenthiazone）；クロルフェナゾール（chlorfenazole）；クロロネブ（chloroneb）；クロロタロニル（chlorothalonil）；クロゾリナート（chlozolinate）；シス-1-(4-クロロフェニル)-2-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)-シクロヘプタノール；クロジラコン（clozylacon）；例えば、(RS)-1-(β-アリルオキシ-2,4-ジクロロフェネチル)イミダゾール（イマザリル（imazalil）; Janssen Pharmaceutica NV、ベルギー）およびN-プロピル-N-[2-(2,4,6-トリクロロフェノキシ)エチル]イミダゾール-1-カルボキサミド（プロクロラズ（prochloraz））などのコナゾール殺菌剤；シアゾファミド（cyazofamid）；シフルフェナミド（cyflufenamid）；シモキサニル（cymoxanil）；シプロジニル（cyprodinil）；シプロフラム（cyprofuram）；ダガーG（Dagger G）；デバカルブ（debacarb）；ジクロロフルアニド（dichlofluanid）；ジクロン（dichlone）；ジクロロフェン（dichlorophen）；ジクロシメット（diclocymet）；ジクロメジン（diclomezine）；ジクロラン（dicloran）；ジエトフェンカルブ（diethofencarb）；ジフルメトリン（diflumetorim）；ジメチリモル（dimethirimol）；ジメソモルフ（dimethomorph）；ジモキシストロビン（dimoxystrobin）；ジノカップ（dinocap）；ジフェニルアミン（diphenylamine）；ジピリチオン（dipyrithione）；ジタリムホス（ditalimfos）；ジチアノン（dithianon）；ドダイン（dodine）；ドラゾクソロン（drazoxolon）；エディフェンホス（edifenphos）；エタボキサム（ethaboxam）；エチリモル（ethirimol）；エトリジゾール（etridiazole）；ファモキサドン（famoxadone）；フェナミドン（fenamidone）；フェナパニル（fenapanil）；フェンフラム（fenfuram）；フェンヘキサミド（fenhexamid）；フェニトロパン（fenitropan）；フェノキサニル（fenoxanil）；フェンピクロニル（fenpiclonil）；フェンプロピジン（fenpropidin）；フェンプロピモルフ（fenpropimorph）；フェルバム（ferbam）；フルアジナム（3-クロロ-N-(3-クロロ-5-トリフルオロメチル-2-ピリジル)-α,α,α-トリフルオロ-2,6-ジニトロ-p-トルイジン）；フルベンジミン（flubenzimine）；フルジオキソニル（fludioxonil）；フルメトバー（flumetover）；フルモルフ（flumorph）；フルオロミド（fluoromide）；フルオキサストロビン（fluoxastrobin）；フルルプリミドール（flurprimidol）；フルスルファミド（flusulfamide）；フルトラニル（flutolanil）；フォルペット（folpet）（N‐（トリクロロメチルチオ）フタルイミド）；ホセチル-A1（fosetyl-A1）；ホセチル-ナトリウム（fosetyl-sodium）；フベリダゾール（fuberidazole）；フララキシル（furalaxyl）；フラメトピル（furametpyr）；フルカバニル（furcarbanil）；フルメシクロックス（furmecyclox）；グアザチン（guazatine）；ヘキサクロロベンゼン（hexachlorobenzene）；ヒメキサゾール（hymexazol）；イミノクタジン三酢酸塩（iminoctadine triacetate）；イミノクタジントリス（アルベシラート）（iminoctadine tris(albesilate)）；ヨードカルブ（iodocarb）；イプロベンホス（iprobenfos）；イプロジオン（iprodione）；イプロバリカルブ（iprovalicarb）；イルママイシン（irumamycin）；イソプロチオラン（isoprothiolane）；イソバレジオン（isovaledione）；クレソキシム-メチル（kresoxim-methyl）；マンコゼブ（mancozeb）；マネブ（maneb）；メフェリムゾン（meferimzone）；メパニピリム（mepanipyrim）；メプロニル（mepronil）；メタラキシル（metalaxyl）；メタラキシル-M（metalaxyl-M）；メタンスルホカルブ（methasulfocarb）；methfiroxam；メチル1-(2,3-ジヒドロ-2,2-ジメチル-1H-インデン-1-イル)-1H-イミダゾール-5-カルボキシラート；メチル2-[[[シクロプロピル[(4-メトキシフェニル)イミノ]メチル]チオ]-メチル]-アルファ-(メトキシメチレン)ベンゼンアセテート；メチル2-[2-[3-(4-クロロフェニル)-1-メチル-アリリデンアミノオキシメチル]フェニル]-3-メタ-オキシアクリレート；メチラム（metiram）；メトミノストロビン（metominostrobin）；メトラフェノン（metrafenone）；メトスルホバックス（metsulfovax）；ミルディオマイシン （mildiomycin）；炭酸モノカリウム（monopotassium carbonate）；ミクロゾリン（myclozolin）；N-(3-エチル-3,5,5-トリメチルシクロヘキシル)-3-ホルミルアミノ-2-ヒドロキシベンズアミド；N-(6-メトキシ-3-ピリジニル)シクロプロパンカルボキサミド；N-ブチル-8-(1,1-ジメチルエチル)-1-オキサスピロ[4.5]デカン-3-アミン, ニトロタールイソプロピル（nitrothal-isopropyl）；ノビフルムロン（noviflumuron）；オフレース（ofurace）；オリサストロビン（orysastrobin）；オキサジキシル（oxadixyl）；オキソリン酸（oxolinic acid）；オキシカルボキシン（oxycarboxin）；オキシフェンチイン（oxyfenthiin）；ペンシクロン（pencycuron）；ペンチオピラド（penthiopyrad）；ホスダイフェン（phosdiphen）；フサライド（phthalide）；ピコベンズアミド（picobenzamid）；ピコキシストロビン（picoxystrobin）；ピペラリン（piperalin）；ポリオキシン（polyoxins）；ポリオクソリム（polyoxorim）；プロシミドン（procymidone）；プロパモカルブ（propamocarb）；プロパノシン-ナトリウム（propanosine-sodium）；プロピネブ（propineb）；プロキナジド（proquinazid）；ピラクロストロビン（pyraclostrobin）；ピラゾホス（pyrazophos）；ピリメタニル（pyrimethanil）；ピロキロン（pyroquilon）；ピロキシフル（pyroxyfur）；ピロールニトリン（pyrrolnitrine），キヌコナゾール（quinconazole）；キノキシフェン（quinoxyfen）；キントゼン（quintozene）；シルチオファム（silthiofam）；テトラチオカルボン酸ナトリウム（sodium tetrathiocarbonate）；スピロキサミン（spiroxamine）；硫黄（sulphur）；テクロフタラム（tecloftalam）；テクナゼン（tecnazene）；テトシクラシス（tetcyclacis）；例えば2-（チアゾール-4-イル）ベンズイミダゾール（チアベンダゾール（thiabendazole）（；例えば、市販品TECTO（登録商標）Flowable SC of Syngenta、米国）のようなチアゾール系殺菌剤，チシオフェン（thicyofen）；チフルザミド（thifluzamide）；チオファネートメチル（thiophanate-methyl）；チウラム（thiram）；チアジニル（tiadinil）；チオキシミド（tioxymid）；トルクロホスメチル（tolclofos-methyl）；トリルフルアニド（tolylfluanid）；トリアズブチル（triazbutil）；トリアゾキシド（triazoxide）；トリシクラミド（tricyclamide）；トリシクラゾール（tricyclazole）；トリデモルフ（tridemorph）；トリフロキシストロビン（trifloxystrobin）；バリダマイシンA（validamycin A）；ビンクロゾリン（vinclozolin）；ジネブ（zineb）；ジラム（ziram）；ゾキサミド（zoxamide）；(2S)-N-[2-[4-[[3-(4-クロロフェニル)-2-プロピニル]オキシ]-3-メトキシフェニル]エチル]-3-メチル-2-[(メチルスルホニル)アミノ]ブタンアミド；1-(1-ナフタレニル)-1H-ピロール-2,5-ジオン；2,3,5,6-テトラクロロ-4-(メチルスルホニル)ピリジン；2,4-ジヒドロ-5-メトキシ-2-メチル-4-[[[[1-[3-(トリフルオロメチル)フェニル]-エチリデン]アミノ]オキシ]メチル]フェニル]-3H-1,2,3-トリアゾール-3-オン；2-アミノ-4-メチル-N-フェニル-5-チアゾールカルボキサミド；2-クロロ-N-(2,3-ジヒドロ-1,1,3-トリメチル-1H-インデン-4-イル)-3-ピリジンカルボキサミド；3,4,5-トリクロロ-2,6-ピリジンジカルボニトリル; 3-[(3-ブロモ-6-フルオロ-2-メチル-1H-インドール-1-イル)スルホニル]-N,N-ジメチル-1H-1,2,4-トリアゾール-1-スルホンアミド；ボルドー混合物（CuSO₄. 3Cu(OH)₂. 3CaSO₄）のような銅塩；水酸化銅；ナフテン酸銅；オキシ塩化銅（（CuCl2・3Cu(OH)₂）；三塩基性硫酸銅（CuSO4.3Cu(OH)₂）；クフラネブ（cufraneb）；亜酸化銅；マンカッパー（mancopper）；オキシン銅（oxine-copper）である。

本発明による追加の殺生物剤はまた、天然の殺生物剤であってもよい。天然の殺生物剤という用語は、微生物およびウイルス、フェロモン、植物および／または動物からの抽出物、および例えばミネラルなどの他の物質を含む。好ましい植物抽出物は、セージエキス（＝Salvia officinalisの抽出物）、Reynoutria sachalinensis（オオイタドリ（Giant Knotweed））の抽出物、Verticillium albo-atrumの抽出物、Bacillus thuringiensis subsp.Kurstakiの抽出物、Lecanicillium muscariumの抽出物、ラミナリン、ラクトペルオキシダーゼ、アザジラクチン、ハーピン、キトサン、ピチウム抽出物（および他の真菌抽出物）であり、または、それを含む。

ナタマイシンおよびC4-C22脂肪酸、モノグリセリドおよび／またはその誘導体の他に、本発明の組成物は、1種以上の他の殺菌剤、例えば、水酸化銅、アゾキシストロビン（azoxystrobin）およびホスファイト（phosphite）のようなストロビルリン（strobilurin）系殺菌剤、シプロコナゾール（cyproconazole）のようなトリアゾール（triazole）系殺菌剤、ボスカリド（boscalid）のようなコハク酸デヒドロゲナーゼ阻害剤型の殺菌剤、クロロタロニル（chlorothalonil）、フォルペット（folpet）およびキャプタン（captan）のようなフタルイミド（pthalimide）／フタロニトリル（pthalonitrile）系殺菌剤、チアベンダゾール（thiabendazole）のようなベンズイミダゾール系殺菌剤、プロパモカルブ（propamocarb）のようなカルバメート系殺菌剤、フェノキサニル（fenoxanil）のようなカルボキサミド系殺菌剤、イプロジオン（iprodione）のようなジカルボキサミド系殺菌剤、、マンコゼブ（Mancozeb）のようなジチオカルバメート系殺菌剤、水酸化銅のような無機系殺菌剤、ジメトモルフ（dimethamorph）のようなモルホリン系殺菌剤ホセチル（fosetyl）のような有機リン系殺菌剤、プロチオコナゾール（prothioconazole）のようなアゾール系殺菌剤、メタラキシル（metalaxyl）のようなフェニルアミド系殺菌剤、および、フルジオキシニル（fludioxynil）のような特定の群に属さない殺菌剤を含み得る。

好ましい亜リン酸塩は、KH₂PO₃、K₂HPO₃、NaH₂PO₃、Na₂HPO₃、(NH₄)₂HPO₃、(NH₄)H₂PO₃、リン酸エチル、亜リン酸およびこれらの化合物の混合物などの亜リン酸塩である。KH₂PO₃とK₂HPO₃との混合物は、KH₂PO₃組成物にKOHまたはK₂CO₃を最終pH5-9で添加することによって適切に得られる。

さらなる好ましいさらなる殺生物剤は、殺虫剤および／または殺ダニ剤である。好ましい市販の殺虫剤は、イミダクロプリド（imidacloprid）（市販品：ADMIRE（登録商標）、Bayer）、Bacillus thuringiensis（商品名：TUREX（登録商標）、Certis USA）、テフルベンズロン（teflubenzuron）（商品名：NOMOLT、BASF）、ピメトロジン（pymetrozine）（商品名：PLENUM（登録商標）、Syngenta）、およびアセタミプリド（acetamiprid）（市販品：GAZELLE（登録商標）、Certis Europe）、ACTELLIC（登録商標）（Syngenta、スイス）、ピレスロイド類（市販品 BAYGON（登録商標）（バイエル）、ビフェナゼート（bifenazate）（例えば、ユニロイヤル）、ジクロルボス（dichlorvos）（例えば、Amvac Chemical Corporation）、イミダクロプリド（imidacloprid）（例えば、Bayer）、フェナミホス（fenamiphos）（例えば、Mobay Chemical Corporation）、ローズマリー油、オキサミル（例えば、Dupont）および硫黄ベースの殺虫剤が含まれる。最も好ましい殺虫剤は、ピリミホス-メチル（pirimiphos-methyl）（市販品 ACTELLIC（登録商標）、Syngenta、スイス）である。本発明の組成物はまた、2種以上の殺虫剤を含むことができる。

好ましい殺ダニ剤には、クロフェンテジン（chlofentezine）（市販品：APOLLO（登録商標）、Makhteshim）、アセキノシル（acequinocyl）（市販品：KAMEMYTE（登録商標）、Arysta）、スピロジクロフェン（spirodiclofen）（市販品：ENVIDOR（登録商標）、Bayer CropScience）、ビフェナゼート（bifenazate）（市販品：FLORAMITE（登録商標）、Certis Europe）およびフェンブタチンオキシド（fenbutatinoxide）（市販品：TORQUE L（登録商標）、BASF）が含まれる。最も好ましい殺ダニ剤はスピロジクロフェン（spirodiclofen）である。本発明の組成物はまた、2種以上の殺ダニ剤を含むことができる。

さらに好ましい殺虫剤／殺ダニ剤はカルバメートであり、例えばアラニカルブ（alanycarb）、アルジカルブ（aldicarb）、アルドキシカルブ（aldoxycarb）、アリルカーブ（allyxycarb）、アミノカルブ（aminocarb）、ベンジオカルブ（bendiocarb）、ベンフラカルブ（benfuracarb）、ブフェンカルブ（bufencarb）、ブタカルブ（butacarb）、ブタカルボキシム（butocarboxim）、ブトキシカルボキシム（butoxycarboxim）、カルバリル（carbaryl）、カルボフラン（carbofuran）、カルボスルファン（carbosulfan）、クロトカルブ（cloethocarb）、ジメチラン（dimetilan）、エチオフェンカルブ（ethiofencarb）、フェノブカルブ（fenobucarb）、フェノチアカルブ（fenothiocarb）、フォルテネート（formetanate）、フラシオカルブ（furathiocarb）、イソプロカルブ（isoprocarb）、メタム-ナトリウム（metam-sodium）、メチオカルブ（methiocarb）、メトミル（methomyl）、メトカルブ（metolcarb）、オキサミル（oxamyl）、ピリミカルブ（pirimicarb）、プロメカルブ（promecarb）、プロポクスル（propoxur）、チオジカルブ（thiodicarb）、チオファノクス（thiofanox）、トリメタカルブ（trimethacarb）、XMC、キシリルカルブ（xylylcarb）、トリアザメート（triazamate）；有機リン酸塩であり、例えばアセフェート（acephate）、アザメチホス（azamethiphos）、アジンホス（-メチル、-エチル）（azinphos (-methyl, -ethyl)）、ブロモホス-エチル（bromophos-ethyl）、ブロムフェンビンフォス（-メチル）（bromfenvinfos (-methyl)）、ブタチオホス（butathiofos）、カドゥサフォス（cadusafos）、カルボフェノチオン（carbophenothion）、クロレトキシフォス（chlorethoxyfos）、クロルフェンビンホス（chlorfenvinphos）、クロームフォス（chlormephos）、クロルピリホス（-メチル／エチル）（chlorpyrifos (-methyl/-ethyl)）、クマホス（coumaphos）、シアノフェンフォス（cyanofenphos）、シアノホス（cyanophos）、クロルフェンビンホス（chlorfenvinphos）、デメトン-5-メチル（demeton-5-methyl）、デメトン-5-メチルスルホン（demeton-5-methylsulphon）、ダイアライフォス（dialifos）、ジアジノン（diazinon）、ジクロフェンシオン（dichlofenthion）、ジクロトホス（dicrotophos）、ジメトエート（dimethoate）、ジメチルビンフォス（dimethylvinphos）、ジオキサベンゾフォス（dioxabenzofos）、ジスルホトン（disulfoton）、EPN、エチオニン（ethion）、エトポフォス（ethoprophos）、エトリフォス（etrimfos）、ファンファー（famphur）、フェナミホス（fenamiphos）、フェニトロチオン（fenitrothion）、フェンスルホチオン（fensulfothion）、フェンチオン（fenthion）、フルピラゾフォス（flupyrazofos）、フォノフォス（fonofos）、ホルモチオン（formothion）、ホスメチラン（fosmethilan）、フォスチアゼート（fosthiazate）、ヘプテノフォス（heptenophos）、ヨードフェンホス（iodofenphos）、イプロベンホス（iprobenfos）、イサゾホス（isazofos）、イソフェンホス（isofenphos）、イソプロピル O-サリチレート（isopropyl O-salicylate）、イソキサチオン（isoxathion）、マラチオン（malathion）、メカルバム（mecarbam）、メタクリホス（methacrifos）、メタミドホス（methamidophos）、メチダチオン（methidathion）、メビンフォス（mevinphos）、モノクロトホス（monocrotophos）、ナレド （naled）、オメトエート（omethoate）、オキシデメトン-メチル（oxydemeton-methyl）、パラチオン（-メチル／エチル）（parathion (-methyl/-ethyl)）、フェントエート（phenthoate）、フォレート（phorate）、ホサロン（phosalone）、ホスメット（phosmet）、ホスファミドン（phosphamidon）、ホスホカルブ（phosphocarb）、ホキシム（phoxim）、ピリミホス（-メチル／エチル）（pirimiphos (-methyl/-ethyl)）、プロフェノフォス（profenofos）、プロパホス（propaphos）、プロペタムホス（propetamphos）、プロチオホス（prothiofos）、プロトエート（prothoate）、ピラクロホス（pyraclofos）、ピリダフェンチオオン（pyridaphenthion）、ピリダチオン（pyridathion）、キナルホス（quinalphos）、セブホス（sebufos）、スルホテップ（sulfotep）、スルプロフォス（sulprofos）、テブピリムフォス（tebupirimfos）、テメホス（temephos）、テルブフォス（terbufos）、テトラクロルビンホス（tetrachlorvinphos）、チオメトン（thiometon）、トリアゾホス（triazophos）、トリクロルホン（triclorfon）、バミドチオン（vamidothion）；ピレスロイドなどのナトリウムチャネルモジュレータ/電圧依存性ナトリウムチャネル遮断薬、例えばアクリナトリン（acrinathrin）、アレスリン（d-シス-トランス、d-トランス）（allethrin (d-cis-trans, d-trans)）、β-シフルトリン（beta-cyfluthrin）、ビフェントリン（bifenthrin）、ビオアレトリン（bioallethrin）、ビオアレトリン-S シクロペンチル異性体（bioallethrin-S cyclopentyl isomer）、ビオエタノメトリン（bioethanomethrin）、ビオペルメトリン（biopermethrin）、ビオレスメトリン（bioresmethrin）、クロバポルトリン（chlovaporthrin）、シス-シペルメトリン（cis-cypermethrin）、シス-レスメトリン（cis-resmethrin）、シス-ペルメトリン（cis-permethrin）、クロシトリン（clocythrin）、シクロプロトリン（cycloprothrin）、シフルトリン（cyfluthrin）、シハロトリン（cyhalothrin）、シペルメトリン（アルファ-、ベータ-、シータ-、ゼータ-）（cypermethrin (alpha-, beta-, theta-, zeta-)）、シフェノトリン（cyphenothrin）、デルタメトリン（deltamethrin）、エンペントリン（IR異性体）（empenthrin (IR isomer)）、エスフェンバレレート（esfenvalerate）、エトフェンプロックス（etofenprox）、フェンフルトリン（fenfluthrin）、フェンプロパスリン（fenpropathrin）、フェンピリスリン（fenpyrithrin）、フェンバレレート（fenvalerate）、フルブロシトリネート（flubrocythrinate）、フルシトリネート（flucythrinate）、フルフェンプロックス（flufenprox）、フルメトリン（flumethrin）、フルバリネート（fluvalinate）、フリブフェンプロックス（flibfenprox）、ガンマ-シハロトリン（gamma-cyhalothrin）、イミプロスリン（imiprothrin）、カデスリン（kadethrin）、ラムダ-シハロトリン（lambda-cyhalothrin）、メトフルトリン（metofluthrin）、ペルメトリン（シス-、トランス-）（permethrin (cis-, trans-)）、フェノトリン（IR trans-isomer）（phenothrin (IR trans-isomer)）、プラレトリン（prallethrin）、プロフルトリン（profluthrin）、プロトリフェンビュート（protrifenbute）、ピレスメトリン（pyresmethrin）、レスメトリン（resmethrin）、RU 15525、シラフルオフェン（silafluofen）、タウ-フルバリネート（tau-fluvalinate）、テフルトリン（tefluthrin）、テラレトリン（terallethrin）、テトラメトリン（IR異性体）（tetramethrin (IR isomer)）、トラロメスリン（tralomethrin）、トランスフルトリン（transfluthrin）、ZXI 8901；オキサジアジン（oxadiazine）、例えばインドキサカルブ（indoxacarb）；アセチルコリン受容体アゴニスト／アンタゴニスト；クロロニコチニル（chloronicotinyl）、例えばクロチアニジン（clothianidin）、ジノテフラン（dinotefuran）、イミダクロプリド（imidacloprid）、ニテンピラム（nitenpyram）、ニチアジン（nithiazine）、チアクロプリド（thiacloprid）、チアメトキサム（thiamethoxam）; ベンスルタップ（bensultap）、カルタップ（cartap）などのニコチン；有機塩素、例えば、カンフェクロル（camphechlor）、クロルデン（chlordane）、エンドスルファン（endosulfan）、γ-HCH、HCH、ヘプタクロル（heptachlor）、リンデン（lindane）、メトキシクロル（methoxychlor）、フィプロール類（fiproles）、例えばアセトプロロール（acetoprole）、エチプロール（ethiprole）、フィプロニル（fipronil）、ピラフルプロール（pyrafluprole）、ピリプロール（pyriprole）、バニリプロール（vaniliprole）；メクチン（mectin）、例えばアベルメクチン（avermectin）、エマメクチン（emamectin）、エマメクチン-ベンゾエート（emamectin-benzoate）、イベルメクチン（ivermectin）、ミルベマイシン（milbemycin）；若年性ホルモン模倣物、例えばジオフェノラン（diofenolan）、エポフェノナン（epofenonane）、フェノキシカルブ（fenoxycarb）、ヒドロプレン（hydroprene）、キノプレン（kinoprene）、メトプレン（methoprene）、ピリプロキシフェン（pyriproxifen）、トリプレン（triprene）；エクジソンアゴニスト／かく乱物質、例えば、ジアシルヒドラジン類（diacylhydrazines）、例えばクロマフェノジド（chromafenozide）、ハロフェノジド（halofenozide）、メトキシフェノジド（methoxyfenozide）、テブフェノジド（tebufenozide）；ベンゾイル尿素類（benzoylureas）、例えばビストリフルロン（bistrifluoron）、クロフルアズロン（chlofluazuron）、ジフルベンズロン（diflubenzuron）、フルアズロン（fluazuron）、フルシクロクスロン（flucycloxuron）、フルフェノクスロン（flufenoxuron）、ヘキサフルムロン（hexaflumuron）、ルフェヌロン（lufenuron）、ノバルロン（novaluron）、ノビフルムロン（noviflumuron）、ペルフルオロン（penfluoron）、テフルベンズロン（teflubenzuron）、トリフルムロン（triflumuron）、有機スズ、例えばアゾシクロチン（azocyclotin）、シヘキサチン（cyhexatin）、酸化フェンブタスズ（fenbutatin-oxide）；ピロール（pyrrole）、例えばクロルフェナピル（chlorfenapyr）；ジニトロフェノール（dinitrophenol）、例えばビナパクリル（binapacyrl）、ジノブトン（dinobuton）、ジノカップ（）、テトロン酸（tetronic acid）、例えばスピロジクロフェン（spirodiclofen）、スピロメシフェン（spiromesifen）；テトラミン酸（tetramic acid）、例えばスピロテトラマト（spirotetramat）および3-(2,5-ジメチルフェニル)-8-メトキシ-2-オキソ-1-アザスピロ[4.5]デク-3-エン-4-イル エチル カーボネート；カルボキサミド（carboxamide）、例えばフロニカミド（flonicamid）；安息香酸ジカルボキサミド、例えばフルベンジアミド（flubendiamide）；アザジラクチン（azadirachtin）、燻蒸剤、例えば、リン化アルミニウム、臭化メチル、フッ化スルフリル；睡眠剤、例えば氷晶石（cryolite）、フロニカミド（flonicamid）、ピメトロジン（pymetrozine）；ダニ成長阻害剤、例えばクロフェンテジン（clofentezine）、エトキサゾール（etoxazole）、ヘキシチアゾクス（hexythiazox）；アミドフルメト（amidoflumet）、ベンクロチアズ（benclothiaz）、ベンゾキシメート（benzoximate）、ビフェナゼート（bifenazate）、ブロモプロピレート（bromopropylate）、ブプロフェジン（buprofezin）、キノメチオネート（quinomethionate）、クロロジメホルム（chlordimeform）、クロロベンジレート（chlorobenzilate）、クロルピクリン（chloropicrin）、クロチアゾベン（clothiazoben）、シクロプレン（cycloprene）、シフルメトフェン（cyflumetofen）、ジシクラニル（dicyclanil）、フェノキサクリム（fenoxacrim）、フェントリファニル（fentrifanil）、フルベンジミン（flubenzimine）、フルフェネリム（flufenerim）、フルテンジン（flutenzin）、ゴシプルーレ（gossyplure）、ヒドラメチルノン（hydramethylnone）、ジャポニルア（japonilure）、メトキサジアゾン（metoxadiazone）、石油（petroleum）、ピペロニルブトキシド （piperonyl butoxide）、オレイン酸カリウム（potassium oleate）、ピリダリル（pyridalyl）、スルフルラミド（sulfluramid）、テトラジホン（tetradifon）、テトラスル（tetrasul）、トリアラテン（triarathene）、および/またはベルブチン（verbutin）である。

更なる好ましい殺生物剤は殺菌剤、例えばブロモポール、ジクロロフェン、ニトロピリン、ニッケルジメチルジチオカルバメート、カスガマイシン、オクチリノン、フランカルボン酸、オキシテトラサイクリン、プロベナゾール、ストレプトマイシン、テクロフタラムおよび銅塩である。好ましい殺菌剤には、銅塩（例えば、水酸化銅、オキシ塩化銅、硫酸銅およびボルドー混合物）などの化合物、Candida bombicola、Candida apicolaおよびWickerhamiella domercqiaeのような酵母によって産生される糖脂質であり、グリコシド結合でヒドロキシル脂肪酸と連結された二量体糖からなるソホロ脂質、ストレプトマイシン、市販品のCITRICIDAL（登録商標）（バイオ／ケミカルリサーチ）およびバリダマイシンが含まれる。最も好ましい殺菌剤は水酸化銅である。本発明の組成物はまた、2種以上の殺菌剤を含むことができる。

示された化合物のいくつかは複数の活性を有する。例えば、銅塩（例えば水酸化銅）は、殺菌剤活性および殺菌剤活性を有する。個々の化合物の活性は当業者に知られている。さらに、ハンドブックおよびウェブサイト（例えば、www.frac.info/frac）が、化合物の活性または活性を決定するために利用できる。

本発明による組成物は、好ましくは、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、消泡剤、増粘剤、UV-保護剤および噴霧油からなる群から選択される少なくとも1つの追加の化合物をさらに含む。

前記防腐剤は、好ましくは、ソルビン酸、乳酸、安息香酸、プロピオン酸、クエン酸、酢酸、またはそれらのアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属塩などの弱酸性防腐剤；塩酸などの無機酸；塩化ナトリウムのような脱水塩、イマザリルのようなイミダゾール、または食品、農作物保護剤、または果物、野菜もしくは穀類の収穫処理のための保存剤として当該技術分野において公知の任意の抗真菌化合物；エチルパラベンゾエート；ホウ砂；亜硫酸カルシウム；カルシウム二ナトリウムEDTA；デヒドロ酢酸；イソチアゾール（例えば、KATHON（登録商標）（Rohm and Haas））；例えば、1-(3-クロロアリル)-3,5,7-トリアザ-1-アゾニアザマンタンクロライド（CTAC）のような第4級アンモニウム塩、および組成物中の細菌の増殖を防止することができる抗菌剤から選択される。好ましい防腐剤は、第4級アンモニウム塩、好ましくは重炭酸ナトリウム（Dowicil（登録商標）75）で安定化されたCTACである。さらに好ましい防腐剤はKathon（登録商標）である。 好ましくは約0.04グラム/リットルの濃度で存在する。本発明の組成物はまた、2種以上の異なる殺生物剤を含んでもよい。本発明の組成物はまた、2つ以上の異なる保存料を含んでもよい。

防腐剤は、好ましくは、農作物、植物または植物部分、土壌および／または生育基材への施用のためにすぐ使用できる状態の製品中に、0〜60％(w/v)、より好ましくは0.01〜10％(w/v)、より好ましくは0.1〜5％(w/v)、より好ましくは約0.5％(w/v)の量で含有される。

抗酸化剤は、存在する場合、好ましくは、アミノ酸（例えば、グリシン、ヒスチジン、チロシン、トリプトファン）およびそれらの誘導体、イミダゾール（例えば、ウロカニン酸）およびその誘導体、ビタミンCおよび誘導体（アスコルビルパルミテートおよびアスコルビルテトライソパルミテート、Mg-アスコルビルホスフェート、Na-アスコルビルホスフェート、アスコルビル-アセテートなど）、トコフェロールおよび誘導体（ビタミンE酢酸塩など）、ビタミンEの混合物、ビタミンAおよび誘導体（ビタミンA-パルミテートおよびアセテート）が、コニフェリルベンゾエート、ルチン酸およびその誘導体、β-グリコシルルチン、フェルラ酸、フルフリリデングルシトール、カルノシン、ブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソールおよびトリヒドロキシブチロフェノンと同様に選択される。本発明の組成物はまた、2種類以上の異なる抗酸化剤を含んでもよい。抗酸化剤は、好ましくは0〜20％(w/v)、より好ましくは0.1〜10％(w/v)、より好ましくは1〜5％(w/v)、より好ましくは約3％(w/v)である。

消泡剤は、存在する場合、ポリメチルシロキサン、シメチコンオクタノール、およびシリコーンオイルから選択されることが好ましい。本発明の組成物はまた、2つ以上の異なる消泡剤を含むことができる。消泡剤は、農作物、植物または植物部分、土壌および／または生育基材への施用のためにすぐ使用できる状態の製品中に、好ましくは0〜10％(w/v)、より好ましくは0.05〜5％(w/v)、より好ましくは0.1〜1％(w/v)の量、より好ましくは、約0.05％(w/v)で含有させる。

増粘剤は、存在する場合、寒天、アルギン酸、アルギン酸塩、カラギーナン、ジェランガム、サクシノグリカンガム、グアーガム、アセチル化デンプンアジペート、アセチル化酸化デンプン、アラビノガラクタン、エチルセルロース、メチルセルロース、ローカストビーン ガム、オクテニルコハク酸デンプンナトリウム、およびクエン酸トリエチルが挙げられる。本発明の組成物はまた、2つ以上の異なる増粘剤を含んでもよい。増粘剤は、農作物、植物または植物部分、土壌および／または生育基材への施用のためにすぐ使用できる状態の製品中に、好ましくは0〜10％(w/v)、より好ましくは0.01〜5％(w/v)、より好ましくは0.02〜1％(w/v)、より好ましくは、約0.05％(w/v)の量で存在する。

UV保護剤またはUV吸収剤は、存在する場合、好ましくは、スルホン化タンニン、二酸化チタン、フミン酸カリウムなどのフミン酸塩、リグノスルホン酸塩および関連化合物から選択される。UV保護剤は、好ましくは、農作物、植物または植物部分、土壌および／または生育基材への施用のためにすぐに使用できる状態の製品中に0.1〜10％(w/v)の量で存在する。

本発明による組成物は、任意にスプレー油、例えばBANOLE（登録商標）またはSpraytexのような鉱油をさらに含む。

本発明はさらに、本発明の組成物を提供し、そして前記組成物を農業用植物または植物部分に適用して、農業用植物または農業用植物部分を十分な量の前記組成物と接触させる工程を含む農業植物または農業植物部分を保護するための方法を提供する。

前記の方法は、好ましくは植物または植物部分を真菌、好ましくはカビから保護するためのものである。

本明細書で使用する「植物」および「作物」という用語は、共に、衣類、家畜飼料、バイオ燃料、医薬品、またはその他の用途のために栽培されている、栽培された植物、樹木または真菌を指す。

前記植物部分は、好ましくは、葉、茎、種子、球根、花球、種子-ジャガイモ、根、塊茎、果実および／または野菜、最も好ましくは種子、球根、果物または野菜である。

本発明はさらに、本発明による組成物を提供すること、および前記植物を前記組成物と接触させることを含む、農業植物の発生および／または収量を改善する方法を提供する。

本発明の組成物は、多くの異なる方法で適用することができる。例えば、前記組成物は、（1）ワックスまたは油のような担体を必要に応じて使用して、現場または温室に植物を噴霧する；（2）種子、球根または種芋を浸す；（3）例えば土壌を介するなどにてシードまたは根系のような植物部分に添加する；（4）種子被覆または種子被覆材を介して種子、種子-ジャガイモまたは球根のような植物部分に添加する；（5）種子または発芽および／または植物またはキノコが発生している土壌または生育基材に添加する；（6）例えば温室や野原などの水中に適用される水または給水システムに添加する；（6）例えば、 浸漬または噴霧により、球根、種子、穀物、大豆、花、果実、野菜または植物などの収穫された植物部分を処理することで、適用することができる。

本発明の組成物は、希釈せずに、または希釈した後に用いるすることができる。通常、本発明の組成物は、水性または油性希釈剤を介して適用され、ドレッシング、コーティングまたはワックスにより塗布される。組成物は、好ましくは、本発明の方法に適用するために、水溶液中または油中で、好ましくは10²〜10⁶倍に希釈される。異なる用途では異なる処理を必要とする可能性があり、本発明の組成物の必要量が用途ごとに異なることは容易に理解できるであろう。
しかしながら、一般に、すぐに使用できる状態の組成物中の組成物の量、例えば、生産物（例えば、生育基材、土壌、種子、球根、圃場の植物または収穫された果実）を処理するのに必要な、組成物中のナタマイシンの量に換算して計算された浸漬または噴霧懸濁液は、ナタマイシンが10〜100,000ppm、より好ましくはナタマイシンが30〜50000ppm、最も好ましくはナタマイシンが50〜5000ppmである。

土壌または生育培地、植物または収穫された植物部分のナタマイシンの最終量は、異なる方法で表現することができる。第1の例として、ナタマイシンの量は、例えばシードドレッシングまたはシードコーティングされた種子においては、種子1kg当たりナタマイシン0.01-20.0g、より好ましくは種子1kgあたりナタマイシン0.05-5.0g、最も好ましくは種子1kg当たりナタマイシン0.1-2.0gである。第2の例として、花球根、種子、ジャガイモ、タマネギ、リンゴ、ナシ、バナナ、パイナップルなどの浸漬または噴霧のための本発明の組成物は、通常、ナタマイシンを0.01g/l-100g/l、好ましくは0.03g/l-50g/l、最も好ましくは0.05g/l-5g/l含む。花球、シードポテト、タマネギ、リンゴ、ナシ、バナナ、パイナップルなどの製品を処理した後、典型的には、生成物上のナタマイシンの量は0.01-20.0mg/dm²であり；好ましくは0.1-10.0mg/dm²である。マッシュルーム生育基材の処理の場合、各噴霧処理は、生育基材1m²あたり0.01-5.0gのナタマイシン、より好ましくは生育基材1m²あたり0.02〜1.0gのナタマイシンを添加する。例えば土壌の処理の場合、 野菜または観賞植物を成長させるナタマイシンを0.01-5.0g/m²、好ましくは土壌の上層に混合し、より好ましくはナタマイシンをm²当たり0.1-1.0g混合する。現場の作物に噴霧散布する場合、典型的な投薬量は、1ヘクタール当たり1-5000グラムのナタマイシン、より好ましくはヘクタールあたり50-2000グラムである。しかし、バナナのような作物では、ナタマイシンの好ましい投与量はヘクタール当たり5-500グラム、より好ましくはヘクタール当たり10-100グラムである。

本発明の組成物は、任意の適切な方法を用いて、増殖培地、土壌、植物または植物部分に任意の適切な時期、例えば 種子、球根、種子-ジャガイモ、切断または若い植物の植え付け前、植え付け中、または植え付け後や、圃場での生育中、収穫後または果実、野菜、ナッツまたは花球の貯蔵中に、添加することができる。

本発明の組成物は、例えば、浸漬、液浸、散水、土壌への注入、灌水、蒸発、噴霧、静電噴霧、霧化、燻蒸、刷毛塗り、塗装および混合などのための組成物を調製するために使用することができる。現場または温室内の作物を保護するために使用される場合、本発明の組成物は、噴霧またはかぶりによって水性または油性の懸濁液または溶液として主に適用される。本発明の組成物は、散水システムを介して、またはコーティング、ドレッシング、またはワックスのような担体を用いて適用することもできる。

本発明はまた、土壌および／または生育基材を保護する方法であって、前記土壌および／または生育基材に本発明による組成物を適用することを含む方法を提供する。 前記生育基材は、好ましくはキノコ生育基材である。土壌および／または生育基材は、好ましくは真菌、好ましくはモールドから保護される。

本発明の組成物は、散水システム、肥料または例えば栄養顆粒のような顆粒を介し、噴霧または混合によって、土壌、生育基材またはキノコ生育基材の処理に適用することができる。

組成物は、好ましくは、真菌の発生を防ぐために土壌または生育基材に適用される。土壌または生育基材の例は、腐植質、土壌、堆肥、砂、ケーシングまたは成長するキノコ（例えば、アガリクス ビスポラス（Agaricus bisporus）またはプルロトゥス オストリアス（Pleurotus ostreatus））に適用されるような最上層および、例えば人工生育基材、、栽培用の温室のトマト、キュウリ、花または植物に適用される人工生育基材、ロックウールおよび他の人工基材などがある。本発明の組成物は、生育基材を通して物理的に混合することができ、土壌に注入され、生育基材上に噴霧され、土壌浸漬として適用され、生育基材を浸漬することによって、または前記方法の組み合わせによって適用される。必要に応じて、本発明の組成物は、周知の方法によって担体上に適用することができる。本発明の組成物は、温室などに適用されるような循環散水システムに添加することもできる。前記組成物は、微生物、昆虫、線虫およびダニなどの有害生物の発生を防止するための肥料顆粒および／または薬剤などの余分な栄養素を添加するための薬剤；除草剤と混合することによって土壌または生育基材に添加することもできる。

本発明の組成物は、必要に応じてドレッシングまたはコーティングを介して浸漬または噴霧することによって、あるいは浸漬またはプライミングすることなどによって、種子、球根、種子ジャガイモ、根茎、収穫された作物および塊茎などに適用することができる。この処理は、収穫から播種まで、収穫後、貯蔵中または植え付け直前など、いつでも適用することができる。

本発明の組成物は、シードドレッシングのようなドレッシングを介して、または前記植物部分上の特に真菌の増殖を防ぐための種子コーティングのようなコーティングを介して、種子、球根、塊茎、根茎、根茎および切花を含む植物部分に適用される。種子には、新しい植物の栽培のための種子および飼料または食物として保存される種子が含まれる。その例は、穀類（例えば、トウモロコシ、コムギ、オオムギ、コメ、モロコシ、オート麦、ライ麦）の種子；ナッツ類（例えば、ピーナッツ、コーヒー、カカオ、アーモンド、ピスタチオ）；野菜（例えば、レタス種、キャベツ種、ブロッコリー、ホウレンソウ、トマト、パプリカ、キュウリ、タマネギ）；果物植物（例えばブドウ、柑橘類果実、りんご、ナシ、石果実）；観賞植物（例えば、バラ、菊、ゼラニウム、ペチュニア、ベゴニア）；繊維状植物（例えば、綿）；油性植物（例えば、菜種、ヒマワリ、ココア、グラウンドナッツ）；花（例えば、バラ、ユリ、ラン）がある。球根または結実植物の例は、花球（例えば、チューリップ、ユリ、ヒヤシンス、クロッカス、スイセン）、種子ジャガイモおよびタマネギである。根塊茎の例としてはダリアがある。

圃場の作物へは、例えば、カビ感染が発生する前に予防的に、カビ感染が発生した後；
開花の前／中／後；ナッツや穀物が実る前／中／後などの適切な時期に噴霧することができる。感染の危険性が高い場合、例えば、熱帯作物の雨季または悪天候の場合には、本発明の組成物をより規則的に適用することができる。感染リスクが低い場合、スプレー間隔が長くなることがある。果物、野菜、花およびナッツのような収穫された作物は、例えば、収穫後の任意の時間に浸漬または噴霧することによって行うことができる。

作物の例は。穀類（例えば、トウモロコシ、小麦、大麦、米、ソルガム、オート麦、ライ麦）；熱帯果実（例えば、バナナ、パイナップル、パパイヤ、キウイおよびマンゴー果実）；柑橘類果実（例えば、オレンジ、レモン、ライム、マンダリンおよびグレープフルーツ）；ナシ状果（例えば、リンゴやナシ）；石果実（例えば、桃、サクランボ、アーモンド、プラム、アプリコット）；ベリー類（イチゴ、ラズベリー、ブラックベリー、カトラントなど）；野菜（例えば、レタス、キャベツ、トマト、キュウリ、パプリカ、ピーマン、タマネギ、ニンジン、ジャガイモ）；マメ科植物（例えば、豆、エンドウマメ、大豆）；油性植物（例えば、菜種、ヒマワリ、ココア、グラウンドナッツ、ココナッツ）；キュウリ科（例えば、キュウリ、ザウバー、メロン、カボチャ）；繊維状植物（例えば、綿）；観葉植物、樹木、花（例えば、チューリップ、ユリ、バラ、蘭、菊、ペチュニア、ベゴニア、バイオレット、ダリア、フクシア、ガーベラ、スイセン、クロッカス、針葉樹など）；コーヒー、紅茶、ゴム、ブドウ、ナッツ、ピスタチオ、タバコ、針葉樹、サトウキビ、サトウダイコン、飼料ビートおよびホップなどの他の作物である。

通常、本発明の組成物を塗布するために装置が使用される。当該技術分野において既知の任意の装置を使用することができる。例としては、組成物を土壌または生育基材中に注入するための装置；土壌、生育基材または堆肥を介して混合するための装置；温室内の散水システムおよび加湿システム；生育基材上に撒布するための装置、圃場の作物または飛行機またはヘリコプターなどを用いて温室内で作出する装置；収穫された果実、球根、種子、種子ジャガイモ、穀類または野菜を浸漬するための装置；収穫された作物を洗浄する装置；霧、スプレーまたはブラシバナナに適用される装置；リンゴまたはパイナップルなどにコーティングまたはワックスを塗布する装置がある。

本発明の組成物は、収穫後に植物の部分に適用することができる。そのような植物部分の例は、穀類（例えば、トウモロコシ、小麦、大麦、米、モロコシ、オート麦、ライ麦）；熱帯果実（例えば、バナナ、パイナップル、パパイヤ、キウイおよびマンゴー果実）；柑橘類果実（例えば、オレンジ、レモン、ライム、マンダリンおよびグレープフルーツ）；ナシ状果物（例えば、リンゴやナシ）；石果実（例えば、桃、サクランボ、アーモンド、プラム、アプリコット）；ベリー類（イチゴ、ラズベリー、ブラックベリー、カトラントなど）；野菜（例えば、レタス、キャベツ、トマト、キュウリ、パプリカ、ピーマン、タマネギ、ニンジン、ジャガイモ）；マメ科植物（例えば、豆、エンドウマメ、大豆）由来の種子；油性植物由来の種子（例えば、菜種、ヒマワリ、ココア、グラウンドナッツ、ココナッツ）；キュウリ科（例えば、キュウリ、ザウバー、メロン、カボチャ）；花（例えば、チューリップ、ユリ、バラ、蘭、菊、ダリア、ガーベラ、スイセン、およびコーヒー豆、茶葉、ブドウ、ナッツ、ピスタチオおよびタバコなどの収穫植物部分）である。

本発明はさらに、植物、植物部分、土壌および／または生育基材、好ましくは植物病害および／または真菌、例えばカビからの保護のための本発明による組成物の使用を提供する。

本発明の組成物と戦う植物の病気およびカビの例：
（1）土壌病。土壌に関連するカビ病の第１の例は、Fusarium oxysporum f. sp. cubenseによって引き起こされるつる割病またはパナマ病である。他の土壌媒介植物病原性真菌としては、例えば、Fusarium oxysporum f.sp. lycopersiciおよびFusarium oxysporum f. sp. fragariaeなどのフザリウム属（Fusarium）種、リゾクトニア ソラニ−（Rhizoctonia solani）、スクレロティニア属（Sclerotinia）種、フィチウム属（Pythium）種 speciesおよびPestalotiopsis clavisporaがある。加えて、さまざまな作物のより特定の主要土壌病原体があり、穀類に対しては、例えば ガエウマンノミセス グラミニス（Gaeumanomyces graminis）、Pseudocercosporella herptrichoides、Bipolaris sorokinianaおよびPolymyxa graminis；トウモロコシに対しては、例えばFusarium moniloforme、Colletotrichum graminicola、Gibberella zeaeおよびMacrophomina phaseolina；米に対しては、例えばSclerotium oryzae、Helminthosporium oryzae、Curvularia lunata、Bipolaris oryzaeおよびAchlya species；綿に対しては、例えばFusarium oxysporum、Thielaviopsis basicola、Macrophomina phaeseolinaおよびGlomerrella gossypii；大豆に対しては、例えばFusarium virguliforme、Phytophthora sojae、Sclerotium rolfsii、Macrophomina phaeseolinaおよびPhialophora gregata；ジャガイモに対しては、例えばRhizoctonia solani、Phoma species、Helminthosporium solani、Colletotichum coccodes、Fusarium sambucinum、Spongospora subterraneanおよびPhytophthora erythroseptocaが挙げられる。キノコ生育基材中に存在し得る望ましくないカビの例としては、例えばトリコデルマ（Trichoderma）種（例えば、T. harzianum、T. aggresivumおよびT. viride）、ベルチシリウム（Verticillium）種（例えば、V. fungicola var. fungicolaおよびV. fungicola var. aleaophilum）、アスペルギルス属（Aspergillus）種、ペニシリウム属（Penicillium）種、ダクタイル（Dactylum）種（例えば、D. dendroides）およびミコガン属（Mycogone）種（例えば、M.pernicosa）が挙げられる。
（2）球根および塊茎の種子媒介疾患および病気。チューリップおよびユリのような花球上のカビ病の例は、Fusarium oxysporumのようなフザリウム属（Fusarium）種、Botrytis種、Pythium種、Rhizoctonia種およびStagnospora種などである。種ジャガイモのカビ病の例は、フザリウム属（Fusarium）種（例えば、フザリウム ソラニ（Fusarium solani））、リゾクトニア ソラニ（Rhizoctonia solani）、フォーマ属（Phoma）種、ヘルミントスポリウム ソラニ（Helminthosporium solani）、Colletotichum coccodesおよびペニシリウム属（Penicillium）種である。種子腐敗のような種子上で起こる主要な病気は、例えば、アスペルギルス属（Aspergillus）種（例えばA. terreus）、ペニシリウム属（Penicillium）種およびPhomopsis種により生じ；種子の苗立枯病は、例えば、Pythium種、フザリウム属（Fusarium）種およびRhizoctonia種により生じ；出現後の疾患は、例えば、Helminthosporium種、Ustilago種およびTilletia種により生じる。穀類の主な種子保有真菌は、フザリウム属（Fusarium）種、アルテルナリア属（Alternaria）種、Cochliobilus sativus、Stagnospora nodorum、Ustilago nudaおよびClaviceps purpureaである。ダイズの重要な種子媒介真菌は、Phomosis種、Diaporthe種、Peronospora manshurica、Cercospora kikuchii、アルテルナリア属（Alternaria）種およびフザリウム属（Fusarium）種である。イネ上の主要な種子真菌病原菌は、フザリウム属（Fusarium）種、Alternaria padwickii、Curvularia lunata、Bipolaris oryzae、Helminthosporium種およびPyricularia oryzaeである。トウモロコシ上の重要な種子媒介病原菌は、フザリウム属（Fusarium）種、ペニシリウム属（Penicillium）種、アスペルギルス属（Aspergillus）種、Bipolaris種、アルテルナリア属（Alternaria）種およびRhizopus種である。例えば、綿の種子については、アスペルギルス属（Aspergillus）種、Thielaviopsis種およびフザリウム属（Fusarium）種が発生する可能性がある。
（3）現場の作物のカビ（収穫前）。バナナ植物の葉型病害の例は、シガトカ病葉の斑またはMycosphaerella musicolaに起因する黄色シガトカ病およびMycosphaerella fijensisに起因する黒色シガトカ病である。ジャガイモ植物の疾患の一例は、アルテルナリア ソラニ（Alternaria solani）およびAlternaria alternateのようなアルテルナリア属（Alternaria）種によって引き起こされる早期疫病である。ジャガイモ植物の病気のもう一つの例であるが、トマト植物にとっても重要なのは、Phytophthora infestansによって引き起こされる疫病である。アルテルナリア属（Alternaria）種は、野菜、綿、たばこ、穀物などの野外作物を傷つけ、トマト、タマネギ、ニンジンに黒点病を引き起こすこともある。フザリウム オキシスポラム（Fusarium oxysporum）は、トウモロコシやダイズなどの多くの作物において最も重要な病原性のカビの1つであり、うどんこ病は、様々な真菌種によって引き起こされ得る多くの作物にとって重要な病気である。例としては、Erysiphe種（例えば、ブドウにおけるE. necator、サトウキビにおけるE. betae、キャベツにおけるE. cruciferarum、穀類におけるE. cereinis種）、例えばトマトにおけるOidium lycopersicum、例えばバラ、リンゴおよびイチゴにおけるPodosphaera種、コムギおよびオオムギにおけるBlumeria graminis、キュウリとメロンにおけるSphaerotheca fuscaおよびパプリカ、コショウおよびナスにおけるLeveillula tauricaがある。ダウニー病は、多くの異なる真菌種によって引き起こされ得る主要な植物病気である。例としては、例えばブドウにおけるPlasmopara viticola、例えばホップにおけるシュードペロノスポラ フルムリ（Pseudoperonospora humuli）、例えばキャベツにおけるペロノスポラ パラシチカ（Peronospora parasitica）、例えば玉ねぎにおけるPeronospora destructor、例えばバジルにおけるペロノスポラ ベルバリ（Peronospora belbahrii） 、例えばキュウリ、メロンまたはカンタループにおけるPseudoperonospora cubensis、例えばテンサイにおけるfarinosa f.sp. betae、例えばレタスにおけるBremia lactucaeがある。
（4）収穫された農産物で栽培されるカビ（収穫後）。りんご、梨、柑橘類の果実、石果、果実などの収穫された果実で発育することができるカビには、例えば、ブドウや柔らかい果実におけるBotrytis cinerea、タマネギ、マメ科植物及び果実におけるボトリチス アクラダ（Botrytis aclada）、Gloeosporium fructigenum、Gloeosporium perennans、Phytophthora cactorum、Phytophthora syringae、ペニシリウム属（Penicillium）種(例えば、仁果類およびナッツなどにおけるマイコトキシンのパツリンを産生するP. expansum、柑橘類におけるP. digitatumおよびP. italicum、穀物類におけるP. verrucosumおよびP. viridicatum), トウモロコシにおけるFusarium moniloforme、イチゴにおけるRhizopus stoliniferがある。アスペルギルス フラバス（Aspergillus flavus）は、特にピーナッツ、ピスタチオナッツ、ブラジルナッツおよびトウモロコシにおいて、マイコトキシンのアフラトキシンを産生する能力を有する。アスペルギルス フミガタス（Aspergillus fumigatus）は、広範囲の貯蔵された果物、作物、穀類、カカオ豆およびナッツに発生する可能性がある。アスペルギルス プルランス（Aspergillus pullulans）は、貯蔵された穀物、イチゴ、柑橘類の果実およびチェリーに発生することがある。パイナップルによく見られる真菌病原体の例は、Thielaviopsis paradoxa、Penicillium funicolosum、Fusarium oxysporum、Rhizophus stoloniferおよびAspergillus nigerである。バナナでは、収穫後の最も重要な病気は、数種類の真菌種によって引き起こされることがあるクラウン腐敗であり：バナナに一般的に見られる真菌病原体の例は、Colletotrichum musae、Thieliaviopsis paradoxa、Fusarium roseum、Verticillium theobromae、Lasiodiplodia theobomaeおよびDeightoniella torulosaである。

本発明にはまた、生育基材、土壌、農作物などの植物を含む農産物、および本発明の組成物を含有する収穫物のような植物部分が含まれる。

明瞭化および簡潔な説明のために、技術的特徴は、同じまたは別個の態様およびその好ましい実施形態の一部として本明細書に記載されているが、しかしながら、本発明の範囲は、記載された特徴の全てまたは一部の組み合わせを有する実施形態を含むことができることが理解されよう。

本発明を以下の実施例によって説明するが、これらは限定するものではなく例示するものとして提供され、本発明の趣旨から逸脱することなく記載された方法および示された量について多くの変形が可能であり、それらは添付の特許請求の範囲の範囲内である。

破壊部を有するペトリ皿の例。培養36：パルミチン酸0.03mM；13：ブタン酸0.3mMおよび3mMナタマイシン；19：パルミチン酸0.03mMおよび3mMナタマイシン；26：ステアリン酸0.9mMおよび3mMナタマイシン。

実施例１：フザリウム オキシスポルム（Fusarium oxysporum）に対するナタマイシンおよび脂肪酸の相乗的抗真菌活性

ナタマイシンとフザリウム オキシスポルムに対する4つの脂肪酸（パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸およびリノール酸）のカクテルの組み合わせの相乗的抗真菌活性が、96ウェルマイクロタイタープレートを用いたインビトロアッセイで実証された。

ナタマイシン（95％純度）は、Freda社、中国から入手した；パルミチン酸ナトリウムおよびリノール酸ナトリウムは、Sigma社、米国から入手した；オレイン酸ナトリウム塩およびステアリン酸ナトリウム塩は、Carl Roth社、ドイツから入手した。

パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸およびリノール酸の4つのナトリウム塩の5.0mM（各4×1.25mM）ストック溶液を、周知の方法を用いて調製した。

バナナ植物のパナマ病病原菌である土壌中のカビのFusarium oxysporum f. sp. cubenseの野生株の胞子懸濁液は、周知の方法を用いて調製した。

実験のために、新たに調製した胞子懸濁液および脂肪酸のナトリウム塩の新たに調製した溶液を調製した。ナタマイシンを周知の方法を用いて80％DMSOに溶解した。真菌増殖培地（麦芽エキス寒天）、フザリウム‐オキシスポルム胞子懸濁液（10,000個の胞子／ウェル）および脂肪酸および／または異なる濃度のナタマイシン溶液を、周知の方法を用いてマイクロタイタープレートのウェルに加えた。実験は二重で行った。マイクロタイタープレートを24℃の暗所で5日間インキュベートした後、マイクロタイタープレートを目視可能なカビ発生の有無について検査した。結果を表１に示す。

表１．フザリウム オキシスポルムに対するナタマイシンと脂肪酸の相乗効果

これらの結果は、ナタマイシンに対するフザリウム オキシスポルムの感受性は＞7μMであること；

表１に報告された結果は、ナタマイシンと脂肪酸との相乗効果を明確に示している。非常に低濃度の脂肪酸（2.3μMおよび4.5μM）であっても、5-6μMの濃度のナタマイシンでは、カビの成長の発達がほぼ完全に阻止され；7μMのナタマイシンでは、脂肪酸の存在下で全く増殖が観察されなかった。5-7μMのナタマイシンおよび250μMの脂肪酸では、フザリウムのカビは完全に阻害された。

実施例２：様々な濃度の脂肪酸ナトリウム塩と組み合わせたナタマイシンの効果。

この実施例では、異なる濃度の脂肪酸ナトリウム塩と組み合わせたナタマイシンの増強された殺真菌効果を実証する。

サッカロマイセス セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）（少なくとも10⁵cfu/ml）を、滅菌したスワブを用いて30mlのジャガイモデキストロース寒天（PDA; Carl Roth; pH約6）を含む直径145mmのペトリ皿上に分配した。直径6mmの濾紙ディスク（Whatman、Antibiotic Assay Paper、グレードAA）に、ブタノール酸（Carl Roth＞99％）、カプリル酸（Carl Roth、＞99.5％）、パルミチン酸（Sigma、パルミチン酸ナトリウム98.5）又はステアリン酸（Carl Roth、ステアリン酸ナトリウム88-92％）のナトリウム塩0、0.03、0.09、0.3または0.9mMを含む3mMナタマイシン（Chinonbio、中国、95％）を添加した。対照として、脂肪酸塩のみの効果（ナタマイシンなし）を試験した。酵母の増殖は、ナタマイシンおよび脂肪酸塩を含まない培地でのインキュベーション後にも測定された。

フィルターの適用後、ペトリ皿を4℃の冷蔵庫で24時間上下逆さにインキュベートし、ナタマイシンを寒天に拡散させた。24時間後、フィルターディスクを寒天から除去し、ペトリ皿を30℃のストーブで逆さまにインキュベートした。阻害ゾーンの大きさは、フィルターディスクから放出されたナタマイシンおよび／または脂肪酸塩の酵母に対する有効性を示す（例えば、図１参照）。ストーブ内で16時間インキュベートした後、阻害ゾーンの大きさをデジタルキャリパーゲージを用いて測定した。値は平方mmで表され、4つのレプリカの平均値である。

表２．S. cerevisiaeに対するナタマイシンと脂肪酸の有効性

ペトリ皿中での酵母増殖に対する4つの脂肪酸塩の異なる濃度での3mMナタマイシンの存在（＋）または非存在（−）時の効果は、上記の通りである。数字は、16時間後の平方mmで表された阻害ゾーンの表面を表す。

0.09mMおよび0.3mMの濃度のすべての脂肪酸塩は、0mMの脂肪酸または脂肪酸のみと比較して、阻害ゾーンの表面積が増加したことが明らかなように、ナタマイシンによる酵母増殖の阻害を増強した。ナタマイシンと脂肪酸塩とのモル比は、3：0.09（33：1）および3：0.3（10：1）であった。これは、ナタマイシン濃度の1-30％、好ましくは3-10％の脂肪酸濃度がナタマイシンの効果を増強することを意味する。

これらの結果は、脂肪酸ナトリウム塩自体が、ナタマイシン誘発酵母の阻害の効果を高める濃度でペトリ皿上の酵母の成長を阻害しないことを示す。

実施例３．異なる濃度のカプリル酸のカリウム塩およびアンモニウム塩と組み合わせたナタマイシンの効果。

この実施例は、カリウムおよびアンモニウム塩がまた、ナタマイシンの酵母細胞に対する殺生物効果を増強することを実証する。

実験は、ペトリ皿の直径が90mmであったことを除いて、実施例２に記載したとおりに行った。阻害ゾーンの測定は16時間後に行われた。

結果を表３に示す。

表３．ペトリ皿上の酵母細胞に対するナタマイシン効力に対するカリウムおよびアンモニウム塩の効果。数字は、16時間後の平方mmで表された阻害ゾーンの表面を表す。

カプリル酸のアンモニウム塩およびカリウム塩はいずれも、0.09、0.3および0.9mMのナタマイシン阻害酵母の増殖を促進したが、これは0mMの脂肪酸プラスナタマイシンまたは脂肪酸のみと比較して阻害ゾーンの表面積の増加として明らかである。カリウムおよびアンモニウム塩自体は、ナタマイシンで誘発される酵母の阻害効果を高める濃度では、ペトリ皿上の酵母の増殖を阻害しなかった。

実施例４．脂肪酸ナトリウム塩の混合物と組み合わせたナタマイシンの抗真菌効果

この実施例は、脂肪酸ナトリウム塩の混合物と組み合わせたナタマイシンの抗真菌効果を実証する。

サッカロマイセス セレビシエ（少なくとも10⁵cfu/ml）を、滅菌したスワブを用いて10mlのPDA寒天（Carl Roth、pH約6）を含む直径90mmのペトリ皿上に分配した。直径6mmの濾紙ディスク（Whatman）に、濃度3mMナタマイシン＋0.3mMのオレイン酸ナトリウム塩とステアリン酸ナトリウム塩との混合物（この混合物を脂肪酸混合物と呼ぶ）を50/50の比で含む50μlの溶液を添加した。

対照として、脂肪酸混合物単独（ナタマイシンなし）の効果を酵母の増殖について試験した。ナタマイシンおよび脂肪酸塩の両方を含まない培地でのインキュベーション後に、酵母の増殖も測定した。

阻害ゾーンのサイズは、サンプルディスクから放出されたナタマイシンおよび／または脂肪酸塩の結果を示す。ストーブ内での16時間のインキュベーション後、阻害ゾーンのサイズをデジタルキャリパーゲージを用いて測定した。値は平方mmで表され、4つのレプリカの平均である。

表４．ペトリ皿中の酵母増殖に対する3mMのナタマイシン＋0.3mMのオレイン酸ナトリウム塩およびステアリン酸ナトリウム塩の混合物の効果。数字は、16時間後の平方mmで表される阻害ゾーンを表す。

実施例５．リンゴのボトリチス属に対するナタマイシンと組み合わせた脂肪酸ナトリウム塩の抗真菌効果

この実施例は、リンゴのボトリチス属に対するナタマイシンと組み合わせた脂肪酸ナトリウム塩の抗真菌効果を実証する。

試験された果物：有機生産／SKAL認定のリンゴ、栽培品種Maribelle。SKALはオランダの有機生産を統制する準政府系のオランダ組織である。 5日目と7日目にリンゴの創傷を確認した。この実験では、オレイン酸ナトリウム塩とステアリン酸ナトリウム塩とを50/50の比で含む脂肪酸ナトリウム塩の混合物を使用し、脂肪酸混合物と呼ぶことにする。

試験された処方：
1）0.3mMの脂肪酸混合物
2）0.6mM脂肪酸混合物
3）3mMナタマイシン（Chinonbio 95％）
4）3mMナタマイシン+ 0.3mM脂肪酸混合物（FA）
5）3mMナタマイシン+ 0.6mM脂肪酸混合物
6）未処理対照
7）真菌感染のない対照

使用された病原体：10⁶胞子/mlを含むボトリチス シネレア（Botrytis cinerea）胞子懸濁液。

試験方法：リンゴの果皮は、コルクボーラーで直径4mm、深さ〜0.5cmで、リンゴあたり2傷破損する。40μlのB. cinereaの新たに調製した胞子懸濁液をピペットで各創傷に塗布した。続いて、胞子懸濁液を4時間空気乾燥させた。次いで、上のリストに提示されるような40マイクロリットルの処理を、ピペットによって各創傷に適用した。

全ての果実は室温（20℃）で保存した。リンゴの創傷を、インキュベーションの4および7日後に調査した。記録された抗真菌活性は、未処理対照と比較したリンゴの腐敗の表面積（平方mm）である（表５、６および７を参照）。

複製物：りんご実験のためのすべての処理は、2つの創傷を有する6つの個々のリンゴについて実行され、それぞれ1つの処置当たり12の創傷を生じた。

結果

これらの実験の結果を表５−７に示す。

表５：リンゴの腐敗に対するナタマイシンと脂肪酸カクテルの有効性。接種後に40mMの3mMのナタマイシンと0,0.3および0.6mMの脂肪酸混合物で処理したリンゴの腐敗。対象は、ナタマイシンおよび脂肪酸塩を含まないインキュベーションである。

表６．接種5日後の処理あたりのリンゴ果実の病変面積（mm²）

表７．接種7日後の処理あたりのリンゴ果実の病変面積（mm²）

実施例６．トウモロコシ苗の発育に脂肪酸を含む発酵ブロスからの部分精製ナタマイシンの影響

脂肪酸を含有するナタマイシン組成物の調製および製剤。この実施例は、約60％のナタマイシンと、ストレプトマイセス ナタレンシス（Streptomyces natalensis）の発酵ブロスからの他の化合物40％とからなるナタマイシン組成物の調製および処方物を記載する。

ストレプトマイセス ナタレンシスを用いた発酵を行った。発酵終了後、ナタマイシン組成物を回収した。特に、発酵ブロスを濾過した。ろ過ケーキを約9-10のpHでメタノールおよび20％NaOHで処理した。2回の追加の濾過および溶出ステップの後、15％HCLを添加することによってpHを約pH6.5に調整した。最終ナタマイシン含量は、20％グルコースの添加により60％に設定した。得られた生成物を乾燥し、次いで粉砕した。特に、水1リットル当たり250gの乾燥生成物をビーズミルを用いて粉砕して、約2μmの平均サイズを有するより均質な粒子を得た。

本明細書の実施例で使用する「ナタマイシン組成物A」は、2μmのD50（質量中央径）に粉砕した下記の表８に示す成分を含むナタマイシン組成物を指す。

表８．

本明細書の実施例で使用する「コントロールナタマイシン」とは、2μmのD50（質量中央径）に粉砕された純度95％以上の市販のナタマイシンをいう。

ナタマイシン組成物Aおよび対照ナタマイシンを、以下の表９に提供される成分を用いて処方した。以下の製剤によるナタマイシン組成物Aを「製剤1」と呼ぶ。 以下の処方による対照のナタマイシンは、「対照ナタマイシン製剤」と呼ぶ。

表９．

ナタマイシン組成物Aを処方して、以下のプロトコルに従って製剤1を調製した。グリセロールを最初に水に加え、攪拌しながら界面活性剤AtlasTM G 5002-L（Croda Crop Care, Cowick Hall, DN14 9AA, 英国）およびMetaSperse TM 550 S（Croda Crop Care, Cowick Hall, DN14 9AA, 英国）を添加した。30分間攪拌した後、4.8gの消泡剤Rhodorsil（登録商標）426R（Rhodia Inc., Cranbury, NJ）を添加した。ナタマイシン組成物Aおよびコントロールナタマイシン処方物を少しずつ加え、懸濁液をさらに30分間撹拌した。この懸濁液を約1.7μmの平均粒子サイズに粉砕した。懸濁液を回収し、Rhodorsilの残り1/5部分を回収した。 426Rを加えた。30分間撹拌した後、粘度調整剤Rhodopol（登録商標）23（Rhodia Inc., Cranbury, NJ）を加えた。さらに3時間撹拌した後、製剤を得た。対照ナタマイシンも、上記のプロトコールを用いて対照ナタマイシン製剤を製造するために、処方された。

実施例７．トウモロコシ苗の成長への影響

この実施例は、ナタマイシン組成物Aがトウモロコシ実生の発達に及ぼす影響を実証する。

製剤1および対照ナタマイシン製剤をトウモロコシ種子（処理当たり150種子）に適用した。 投与量を以下の表15に示す。未処理対照種子のセットもこの研究に含めた。処理後、種子を植え付けシーズン中に起こりうる好ましくない寒さと雨の気象条件をシミュレートする低温試験プロトコールを用いてインキュベートした。
この試験の結果は、種子ロットの性能を予測するために使用され、現場でも同様の条件の下で行われる。試験を行うために、種子を最初に飽和土壌土壌およびペーパータオルでロールに詰め、次にロールをプラスチックバッグに入れた。種子は、胚に最も近い穀粒の側面が土壌に押し付けられるように回転させた。試験地は、以前にトウモロコシが栽培されていた土地であり、土壌には多数の未同定のカビ種が含まれていることが知られていた。低温条件下（暗所で8℃で7日間、続いて光で25℃で7日間）のインキュベーション期間の後、正常な苗、異常な実生および死んだ種子の数を記録した。

結果を以下の表１０に要約する。実験の経過中、ナタマイシン処理に起因する植物毒性は観察されなかった。

表１０．

観察された健康な実生の数は、対照ナタマイシン製剤と比較して製剤1を適用した場合に予想外に大きかった。特に、0.25g/kgの種子および0.5g/kgの種子でのナタマイシン組成物Aの投与量は、対照ナタマイシンの同一投与量よりも健康な植物の数がそれぞれ1.3倍および1.7倍多くなった。

実施例８．バナナにおけるマイコスファエレラ フィジエンシス（Mycosphaerella fijiensis）に対する効果

この実施例は、マイコスファエレラ フィジエンシスの防除のためのナタマイシン組成物Aの有効性を実証する。実験装置には9つのバナナ植物があり、植物間に3mの植木鉢で植えられた。試験は完全無作為化設計に続き、各処方は3回反復された。処理された植物間の境界線には、黒色シガトカ病に耐性のある様々なバナナ植物であるMusa textilisが植え付けられた。すべての処理をモーターブロワーを用いて適用することで、23L/haの全処理量を得た。試験した処理物は、Spraytex（登録商標）オイル（5L/ha）および1％Imbirex乳化剤を用いた油-水エマルジョンとして適用された。試験した殺菌剤処理を、それぞれの活性成分および希釈物（または濃度）とともに、下記の表１１に列挙する。実験的試験治療の最後の適用は、最初の適用後13週間に実施された。この研究の過程で合計16回の連続試験が行われた。

表１１．

植物ごとの総葉、縞の最も若い葉（すなわち、最も若い葉の感染（YLI））、斑を有する最も若い葉（YLS）および病気の重症度を、毎週評価した。バナナの葉の症状の最初の出現は、感染の重症度と相関していた。症状が現れる葉数が少ないほど、感染のレベルが高くなる。最初の適用された葉がポジション＃4に到達し、その後7日間毎日、最終治療適用後1週間まで、疾患評価を行った。ポジション4は葉4であることに留意されたい。黒色シガトカ病に対する治療応答は、Gauhlによって改変されたStoverスケール（下記の表１２）を用いて評価され、評価の結果は以下の表１３に示される。

表１２．疾患の程度を決定するために使用されるGauhlによって改変されたStoverスケール

表１３．

油処理（表１３、項目５および９）を除き、全ての処理は1以下の重大度を有し、未処理の植物は2以上の重症度を有していた。すべての処理植物は4〜5の平均YLIを有し、未処理植物は3.3の平均YLIを有していた。いずれの結果も、すべての処理に殺菌剤効果があることを示している。製剤1は対照ナタマイシン製剤よりも有効成分のパーセンテージが低いので、これらの結果は予想外であったが、その有効性は同等であった。製剤1は、有効成分のマンコゼブ（mancozeb）を有する市販品と同じ有効性を真菌に対して有していた。

実施例９．水中のナタマイシンの飽和レベルに及ぼす脂肪酸の影響。

95％純度のナタマイシン（ChihonBio、中国）を、以下のように種々の量のオレイン酸とステアリン酸の塩（50:50比）とで組み合わせ、ナタマイシン粉末と乾燥脂肪酸塩を手で激しく粉砕した。乳棒を用いセラミック乳鉢に60秒間浸漬する。粉砕されたナタマイシン-脂肪酸塩250mgを小さなビーカーガラスに移し、5mlの脱イオン水を添加した。得られたスラリーを室温で一晩攪拌した。その後、均質なナタマイシン／脂肪酸スラリー1mlを2mlのエッペンドルフチューブに移し、14500rpmで45分間遠心分離した。上清をアセトニトリル：H₂O混合物（38:62）中で5倍に希釈した。試料をHPLCに注入した。

HPLC分析は以下の通りに行われた：
HPLCシステムは、Agilent 1100システムを用いた。用いたカラムは、Zorbax Bonus-RP、4.6×250mm、5μmであった。移動相は、アセトニトリル：リン酸緩衝液（0.7g/l Na₂HPO₄.2H₂O+6.39g/l NaH₂PO₄.H₂O）、pH5.8（28:72）からなっていた。流速は1.0ml/分であり、カラム温度は25℃であった。注入量は5μlであった。ナタマイシンは、304nmの波長で分光光度計で検出された。

結果

表１４に、ナタマイシンの水への溶解度に対する、オレイン酸とステアリン酸のナトリウム塩の50-50の組み合わせの効果を示す。実験は二重に行い、水中の溶解したナタマイシンの量の値は二重項の平均値である。

表１４．ナタマイシンの溶解

脂肪酸を添加しないナタマイシンは、水に溶解すると約46ppmの標準レベルにした。この実験から、脂肪酸塩の添加は、溶解度レベルの強力な上昇をもたらし、ナタマイシンと比較すると、わずか10％(w/w)の脂肪酸塩の添加は、ナタマイシンの水への溶解度について約20倍の増加をもたらすと、結論付けることができる。

Claims (20)

1. ナタマイシンと、脂肪酸のパルミチン酸、オレイン酸およびリノール酸から選択される少なくとも１つの化合物またはその塩とからなり、ナタマイシンが0.2〜10マイクロメートルの平均粒径に粉砕されている、抗真菌組成物。
2. 1%〜98％(w/w)のナタマイシンを含む、請求項１に記載の抗真菌組成物。
3. 0.1％〜10％(w/w)の少なくとも1つの化合物を含む、請求項１または２に記載の抗真菌組成物。
4. 脂肪酸のパルミチン酸、オレイン酸およびリノール酸から選ばれる少なくとも２つの化合物またはその塩を含む、請求項１−３のいずれか１項に記載の抗真菌組成物。
5. 脂肪酸のパルミチン酸、オレイン酸およびリノール酸から選ばれる少なくとも３種の化合物またはその塩を含む、請求項１−４のいずれか１項に記載の抗真菌組成物。
6. 脂肪酸またはその塩のそれぞれが0.1〜10％(w/w)存在する、請求項４または５に記載の抗真菌組成物。
7. 水性または油性組成物である、請求項１−６のいずれか１項に記載の組成物。
8. 前記組成物がナタマイシン産生細菌由来の細胞質の成分としてのタンパク質をさらに含む、請求項１−７のいずれか１項に記載の組成物。
9. ナタマイシンが、発酵生物によるバイオマスの発酵により産生されたものである、請求項１−８のいずれか１項に記載の組成物。
10. ナタマイシンが、0.5〜2マイクロメートルの平均粒径に粉砕される、請求項１−９のいずれか１項に記載の組成物。
11. 高分子電解質複合体をさらに含み、ポリ電解質複合体は、リグニン化合物、キサンタンガム、フミン酸塩およびアルギン酸塩のようなポリアニオンと、キトサンまたはポリアリルアミンのようなポリカチオンとを、1:2〜60:1(w/w)の相対的量で含む、請求項１−１０のいずれか１項に記載の組成物。
12. 請求項１−１１のいずれか１項に記載の組成物を提供し、該組成物を農業植物または植物部分に適用することを含む、農業植物または植物部分を保護するための方法。
13. 植物部分が種子、球根、果物または野菜である、請求項１２に記載の方法。
14. 請求項１−１１のいずれか１項に記載の組成物を提供し、農業植物を該組成物と接触させることを含む、農業植物の発達および／または収量を改善する方法。
15. 請求項１−１１のいずれか１項に記載の組成物を土壌および／または生育基材に適用することを含む、土壌および／または生育基材を保護する方法。
16. 前記生育基材がキノコ生育基材である、請求項１５に記載の方法。
17. 前記組成物を、水溶液または油中で希釈する、請求項１２−１６のいずれか１項に記載の方法。
18. 植物、植物部分、土壌および／または生育基材を保護するための、請求項１−１１のいずれか１項に記載の組成物の使用。
19. 抗真菌組成物が請求項１−１１のいずれか１項に記載の抗真菌組成物である、請求項１２−１７のいずれか１項に記載の方法。
20. 植物、植物部分、土壌および／または成長基質を保護するための請求項１−１１のいずれか１項に記載の抗真菌組成物の使用。

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