JP6932354B2 - セレノネインの製造方法 - Google Patents
セレノネインの製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6932354B2 JP6932354B2 JP2017534126A JP2017534126A JP6932354B2 JP 6932354 B2 JP6932354 B2 JP 6932354B2 JP 2017534126 A JP2017534126 A JP 2017534126A JP 2017534126 A JP2017534126 A JP 2017534126A JP 6932354 B2 JP6932354 B2 JP 6932354B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- aspergillus
- enzyme
- selenoneine
- gene
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- MTIQLELFQVCRSW-ZETCQYMHSA-N selenoneine Chemical compound C[N+](C)(C)[C@H](C([O-])=O)CC1=CNC(=[Se])N1 MTIQLELFQVCRSW-ZETCQYMHSA-N 0.000 title claims description 179
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 331
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 245
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 245
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 119
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 86
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 74
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 68
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 67
- 229940065287 selenium compound Drugs 0.000 claims description 52
- 150000003343 selenium compounds Chemical class 0.000 claims description 52
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 claims description 30
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 claims description 30
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 26
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 26
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 claims description 26
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 claims description 26
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 19
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 17
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 16
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 14
- 241000131386 Aspergillus sojae Species 0.000 claims description 11
- MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N S-adenosyl-L-methioninate Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C[S+](CC[C@H](N)C([O-])=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N 0.000 claims description 11
- 229960001570 ademetionine Drugs 0.000 claims description 11
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 claims description 10
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 9
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 8
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 claims description 5
- WUKYFFAYSLDGLI-IUCAKERBSA-N hercynylselenocysteine Chemical compound C[N+](C)(C)[C@H](C([O-])=O)CC1=CNC([Se]C[C@H]([NH3+])C([O-])=O)=N1 WUKYFFAYSLDGLI-IUCAKERBSA-N 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 237
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 97
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 79
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 64
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 62
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 58
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 55
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 55
- 239000002585 base Substances 0.000 description 54
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 45
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 37
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 35
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 28
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 26
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 26
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 26
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 25
- JULROCUWKLNBSN-UHFFFAOYSA-N selenocystine Chemical compound OC(=O)C(N)C[Se][Se]CC(N)C(O)=O JULROCUWKLNBSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 21
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 19
- SSISHJJTAXXQAX-ZETCQYMHSA-N L-ergothioneine Chemical compound C[N+](C)(C)[C@H](C([O-])=O)CC1=CNC(=S)N1 SSISHJJTAXXQAX-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 19
- 229940093497 ergothioneine Drugs 0.000 description 19
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 19
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 17
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 15
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 15
- MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-N selenous acid Chemical compound O[Se](O)=O MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 14
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 13
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 13
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 101150054232 pyrG gene Proteins 0.000 description 12
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 11
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 11
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 10
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 10
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 9
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 9
- 241000269851 Sarda sarda Species 0.000 description 9
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 9
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 9
- 240000001009 Aspergillus oryzae RIB40 Species 0.000 description 8
- 235000013023 Aspergillus oryzae RIB40 Nutrition 0.000 description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 101150074253 TEF1 gene Proteins 0.000 description 8
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 8
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 7
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 7
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 7
- 101100065105 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) egt-1 gene Proteins 0.000 description 7
- 101100172079 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) egt-2 gene Proteins 0.000 description 7
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 7
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001513093 Aspergillus awamori Species 0.000 description 6
- 241000134719 Aspergillus tamarii Species 0.000 description 6
- 241001112078 Aspergillus usamii Species 0.000 description 6
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 6
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 6
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 6
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 6
- 101100010928 Saccharolobus solfataricus (strain ATCC 35092 / DSM 1617 / JCM 11322 / P2) tuf gene Proteins 0.000 description 5
- RJFAYQIBOAGBLC-BYPYZUCNSA-N Selenium-L-methionine Chemical compound C[Se]CC[C@H](N)C(O)=O RJFAYQIBOAGBLC-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N Selenomethionine Natural products C[Se]CCC(N)C(O)=O RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101000983177 Streptomyces rimosus N,N-dimethyltransferase OxyT Proteins 0.000 description 5
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 5
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 5
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 229960002718 selenomethionine Drugs 0.000 description 5
- -1 selenous acid Chemical class 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 5
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 5
- 239000007160 ty medium Substances 0.000 description 5
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000122821 Aspergillus kawachii Species 0.000 description 4
- 241000228251 Aspergillus phoenicis Species 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 4
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000221961 Neurospora crassa Species 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 4
- 102100022513 Selenocysteine lyase Human genes 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 4
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- RVIXKDRPFPUUOO-UHFFFAOYSA-N dimethylselenide Chemical compound C[Se]C RVIXKDRPFPUUOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 4
- 238000001176 liquid chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- JPJALAQPGMAKDF-UHFFFAOYSA-N selenium dioxide Chemical compound O=[Se]=O JPJALAQPGMAKDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 3
- 244000056139 Brassica cretica Species 0.000 description 3
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 3
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 102000016397 Methyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 241000221960 Neurospora Species 0.000 description 3
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 3
- 238000012181 QIAquick gel extraction kit Methods 0.000 description 3
- 241000235347 Schizosaccharomyces pombe Species 0.000 description 3
- 102000008114 Selenoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108010074686 Selenoproteins Proteins 0.000 description 3
- 102000005262 Sulfatase Human genes 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 3
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 108091000099 cysteine desulfurase Proteins 0.000 description 3
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 238000002795 fluorescence method Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 108010055221 selenate reductase Proteins 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 108060007951 sulfatase Proteins 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 2
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000588986 Alcaligenes Species 0.000 description 2
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 description 2
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 2
- 241000209553 Baudoinia Species 0.000 description 2
- 241001465178 Bipolaris Species 0.000 description 2
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 2
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 2
- 241001619326 Cephalosporium Species 0.000 description 2
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 2
- 241000588919 Citrobacter freundii Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 241000222199 Colletotrichum Species 0.000 description 2
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 2
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 2
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- 241000588697 Enterobacter cloacae Species 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000285963 Kluyveromyces fragilis Species 0.000 description 2
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 description 2
- 102100023162 L-serine dehydratase/L-threonine deaminase Human genes 0.000 description 2
- 241000228456 Leptosphaeria Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 2
- 241001507755 Neosartorya Species 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 2
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 2
- 102000055027 Protein Methyltransferases Human genes 0.000 description 2
- 241000228453 Pyrenophora Species 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- 241001123650 Schwanniomyces occidentalis Species 0.000 description 2
- 241000221662 Sclerotinia Species 0.000 description 2
- 241000122799 Scopulariopsis Species 0.000 description 2
- XDSSPSLGNGIIHP-VKHMYHEASA-N Se-methyl-L-selenocysteine Chemical compound C[Se]C[C@H]([NH3+])C([O-])=O XDSSPSLGNGIIHP-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 206010039921 Selenium deficiency Diseases 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 2
- 241000228341 Talaromyces Species 0.000 description 2
- 241000269841 Thunnus albacares Species 0.000 description 2
- 241000223238 Trichophyton Species 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 2
- VIEXQFHKRAHTQS-UHFFFAOYSA-N chloroselanyl selenohypochlorite Chemical compound Cl[Se][Se]Cl VIEXQFHKRAHTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 235000018823 dietary intake Nutrition 0.000 description 2
- 101150058924 egtA gene Proteins 0.000 description 2
- 101150003448 egtB gene Proteins 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000007852 inverse PCR Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 2
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 2
- 150000003957 organoselenium compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- QYHFIVBSNOWOCQ-UHFFFAOYSA-N selenic acid Chemical compound O[Se](O)(=O)=O QYHFIVBSNOWOCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VIDTVPHHDGRGAF-UHFFFAOYSA-N selenium sulfide Chemical compound [Se]=S VIDTVPHHDGRGAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005265 selenium sulfide Drugs 0.000 description 2
- JRPHGDYSKGJTKZ-UHFFFAOYSA-K selenophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=[Se] JRPHGDYSKGJTKZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trio Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](C[C@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-DJRUDOHVSA-N (1s,4r,5z,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,18r,19r,20s,21e,26r,27s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers O([C@H]1CC[C@H](\C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)C(C)C(=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)/C=C/C(=O)OC([C@H]2C)C1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](CC(C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-DJRUDOHVSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-YNZHUHFTSA-N (4Z,18Z,20Z)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC1C(C2C)OC(=O)\C=C/C(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)(O)C(O)C(C)C\C=C/C=C\C(CC)CCC2OC21CCC(C)C(CC(C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-YNZHUHFTSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N (5e,5'r,7e,10s,11r,12s,14s,15r,16r,18r,19s,20r,21e,26r,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers C([C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)OC([C@H]1C)[C@H]2C)\C=C\C=C\C(CC)CCC2OC21CC[C@@H](C)C(C[C@H](C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N 0.000 description 1
- GUWSQVZFXHIGLN-UHFFFAOYSA-M 1-(4-amino-2-methylpyrimidin-5-ylmethyl)-3-(2-hydroxyethyl)-2-methylpyridinium bromide Chemical compound [Br-].NC1=NC(C)=NC=C1C[N+]1=CC=CC(CCO)=C1C GUWSQVZFXHIGLN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N 4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers CC1C(C2C)OC(=O)C=CC(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)(O)C(O)C(C)CC=CC=CC(CC)CCC2OC21CCC(C)C(CC(C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235389 Absidia Species 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 description 1
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 241000180579 Arca Species 0.000 description 1
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000893451 Arthroderma Species 0.000 description 1
- 208000036487 Arthropathies Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228195 Aspergillus ficuum Species 0.000 description 1
- 241001370055 Aspergillus niger CBS 513.88 Species 0.000 description 1
- 101000765308 Aspergillus niger N-(5'-phosphoribosyl)anthranilate isomerase Proteins 0.000 description 1
- 241001622100 Aspergillus sojae NBRC 4239 Species 0.000 description 1
- 241000560147 Bacillus selenatarsenatis Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 1
- 241000228337 Byssochlamys Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000168317 Capronia Species 0.000 description 1
- 208000031229 Cardiomyopathies Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 241001633123 Cladophialophora Species 0.000 description 1
- 241000223203 Coccidioides Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 241001522132 Corynebacterium pseudodiphtheriticum Species 0.000 description 1
- 241000186225 Corynebacterium pseudotuberculosis Species 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 241000986492 Dothistroma Species 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010013786 Dry skin Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 1
- 241000223682 Exophiala Species 0.000 description 1
- 241000306559 Exserohilum Species 0.000 description 1
- 241000589565 Flavobacterium Species 0.000 description 1
- 241001313700 Gadus chalcogrammus Species 0.000 description 1
- 241001149504 Gaeumannomyces Species 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Hygromycin-B Natural products OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008133 Iron-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010035210 Iron-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 102100037644 Kelch-like protein 41 Human genes 0.000 description 1
- 108050003242 Kelch-like protein 41 Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000144128 Lichtheimia corymbifera Species 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241001495424 Macrophomina Species 0.000 description 1
- 241001344133 Magnaporthe Species 0.000 description 1
- 241001661269 Marssonina Species 0.000 description 1
- 241000223201 Metarhizium Species 0.000 description 1
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 1
- 244000294411 Mirabilis expansa Species 0.000 description 1
- 235000015429 Mirabilis expansa Nutrition 0.000 description 1
- JJWSNOOGIUMOEE-UHFFFAOYSA-N Monomethylmercury Chemical compound [Hg]C JJWSNOOGIUMOEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N N-methylaminoacetic acid Natural products C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000665200 Neofusicoccum Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000221871 Ophiostoma Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241001537205 Paracoccidioides Species 0.000 description 1
- 241000588701 Pectobacterium carotovorum Species 0.000 description 1
- 241001123663 Penicillium expansum Species 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000899394 Pseudocercospora Species 0.000 description 1
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000033626 Renal failure acute Diseases 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 101100065106 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) egt1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100172080 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) egt2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000605036 Selenomonas Species 0.000 description 1
- 241000221948 Sordaria Species 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 241000677288 Sphaerulina Species 0.000 description 1
- 241001149962 Sporothrix Species 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 241001464944 Thauera selenatis Species 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465200 Uncinocarpus Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000082085 Verticillium <Phyllachorales> Species 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 208000012871 acute dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 201000011040 acute kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 208000012998 acute renal failure Diseases 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000729 antidote Substances 0.000 description 1
- 229940075522 antidotes Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000006701 autoxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013602 bacteriophage vector Substances 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229910052798 chalcogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001787 chalcogens Chemical class 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- KWGRBVOPPLSCSI-UHFFFAOYSA-N d-ephedrine Natural products CNC(C)C(O)C1=CC=CC=C1 KWGRBVOPPLSCSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000037336 dry skin Effects 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 239000006598 eggc Substances 0.000 description 1
- 101150065774 egtC gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 1
- 230000022244 formylation Effects 0.000 description 1
- 238000006170 formylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 238000003208 gene overexpression Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 1
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 1
- 206010019692 hepatic necrosis Diseases 0.000 description 1
- 238000007602 hot air drying Methods 0.000 description 1
- 238000002013 hydrophilic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N hygromycin B Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H]2O[C@@]3([C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(N)CO)O3)O)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N 0.000 description 1
- 229940097277 hygromycin b Drugs 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000010365 information processing Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 231100000149 liver necrosis Toxicity 0.000 description 1
- PWPJGUXAGUPAHP-UHFFFAOYSA-N lufenuron Chemical compound C1=C(Cl)C(OC(F)(F)C(C(F)(F)F)F)=CC(Cl)=C1NC(=O)NC(=O)C1=C(F)C=CC=C1F PWPJGUXAGUPAHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013536 miso Nutrition 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000013465 muscle pain Diseases 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 208000026721 nail disease Diseases 0.000 description 1
- XTBLDMQMUSHDEN-UHFFFAOYSA-N naphthalene-2,3-diamine Chemical compound C1=CC=C2C=C(N)C(N)=CC2=C1 XTBLDMQMUSHDEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 101150095344 niaD gene Proteins 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229930191479 oligomycin Natural products 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N oligomycin A Polymers O([C@H]1CC[C@H](/C=C/C=C/C[C@@H](C)[C@H](O)[C@@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)/C=C/C(=O)O[C@@H]([C@@H]2C)[C@@H]1C)CC)[C@@]12CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- NPKKRSHVJIQBKU-UHFFFAOYSA-N ornogenin Natural products CC(OC(=O)C=Cc1ccccc1)C2(O)CCC3(O)C4(O)CC=C5CC(O)CCC5(C)C4CC(OC(=O)C=Cc6ccccc6)C23C NPKKRSHVJIQBKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229940013712 pineapple extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- KWGRBVOPPLSCSI-WCBMZHEXSA-N pseudoephedrine Chemical compound CN[C@@H](C)[C@@H](O)C1=CC=CC=C1 KWGRBVOPPLSCSI-WCBMZHEXSA-N 0.000 description 1
- 229960003908 pseudoephedrine Drugs 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000020989 red meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 108020000318 saccharopine dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 235000019992 sake Nutrition 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 150000003342 selenium Chemical class 0.000 description 1
- GYSDUVRPSWKYDJ-UHFFFAOYSA-N selinone Chemical compound C1=CC(OCC=C(C)C)=CC=C1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C1 GYSDUVRPSWKYDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 1
- 235000020083 shōchū Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 235000013555 soy sauce Nutrition 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000020238 sunflower seed Nutrition 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000005979 thermal decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y197/00—Other oxidoreductases (1.97)
- C12Y197/01—Other oxidoreductases (1.97) other oxidoreductases (1.97.1)
- C12Y197/01009—Selenate reductase (1.97.1.9)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y403/00—Carbon-nitrogen lyases (4.3)
- C12Y403/01—Ammonia-lyases (4.3.1)
- C12Y403/01017—L-Serine ammonia-lyase (4.3.1.17)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y404/00—Carbon-sulfur lyases (4.4)
- C12Y404/01—Carbon-sulfur lyases (4.4.1)
- C12Y404/01016—Selenocysteine lyase (4.4.1.16)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/66—Aspergillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/66—Aspergillus
- C12R2001/69—Aspergillus oryzae
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
(1)S−アデノシルメチオニン及び鉄(II)の存在下で、ヒスチジン及びセレノシステインから下記式〔I〕
に示されるヘルシニルセレノシステインを生成する反応を触媒する酵素
(2)ピリドキサール 5’−リン酸を補酵素として、下記式〔I〕
に示されるヘルシニルセレノシステインからセレノネインを生成する反応を触媒する酵素
製造方法の一実施態様は、ヒスチジン及びセレン化合物を、下記(1)の酵素(以下、酵素(1)とよぶ。)をコードする遺伝子が挿入されており、かつ、該挿入された遺伝子を過剰発現する形質転換体に作用させて、セレノネインを得る工程を少なくとも含む。本明細書において、セレン化合物は、セレン化合物そのものに加えて、セレン化合物の塩、錯体、架橋物及び誘導体を包含する。
(1)S−アデノシルメチオニン及び鉄(II)の存在下で、ヒスチジン及びセレノシステインから下記式〔I〕
に示されるヘルシニルセレノシステインを生成する反応を触媒する酵素
(式中、SAMはS−アデノシルメチオニンを表わす。)
のようになる。酵素(1)は式〔II〕中のegtAに相当するものである。
(2)ピリドキサール 5’−リン酸を補酵素として、前記式〔I〕に示されるヘルシニルセレノシステインからセレノネインを生成する反応を触媒する酵素
酵素(1)は、上記式〔II〕に示されているとおり、S−アデノシルメチオニン(SAM)に依存して、ヒスチジンを、−NH2基がトリメチル化されたヘルシニンへ転換する反応を触媒し得る活性(以下、第1の活性とよぶ。)を有する。さらに、酵素(1)は、鉄(II)の存在下で、ヘルシニン及びセレノシステインからヘルシニルセレノシステインを生成する反応を触媒し得る活性(以下、第2の活性とよぶ。)を有する。したがって、酵素(1)は、第1及び第2の活性を有することにより、結果として、S−アデノシルメチオニン及び鉄(II)の存在下で、ヒスチジン及びセレノシステインからセレノネインを生成することができる。
(式中、SAMはS−アデノシルメチオニンを表わし、PLPはピリドキサール 5’−リン酸を表わす。)
のようになる。酵素(1)は式〔III〕中のegtAに相当するものであり、酵素(2)は式〔III〕中のegtB及び/又はegtCに相当するものである。
酵素(1)は、上記した酵素学的性質を有するもの、すなわち、S−アデノシルメチオニン及び鉄(II)の存在下で、ヒスチジン及びセレノシステインからヘルシニルセレノシステインを生成する反応を触媒する活性を有するものであれば、アミノ酸配列、全体的及び部分的な立体構造、分子量などの構造的性質;最適pH、最適温度、失活条件などの生化学的性質;由来生物などによって特に限定されない。ただし、酵素(1)は、第1及び第2の活性を有するものであるために、第1の活性及び/又は第2の活性を有する酵素によく保存されている保存領域(ドメイン)を含むものであることが好ましい。
酵素(1)及び(2)は、上記した酵素学的性質、好ましくは上記した酵素学的性質及び構造的性質を有するものであれば、アミノ酸配列については特に限定されない。例えば、上記した酵素学的性質及び構造的性質を有する酵素(1)の一態様として配列番号4に示すアミノ酸配列があり、上記した酵素学的性質及び構造的性質を有する酵素(2)の一態様として配列番号5及び6に示すアミノ酸配列がある。これら配列番号4〜6に示すアミノ酸配列を有する酵素は、すべてアスペルギルス・ソーヤ(Aspergillus sojae)に由来するものであり、本発明者らによりそれぞれAsEgtA、AsEgtB及びAsEgtCタンパク質と名付けられる。また、これらの酵素をコードする遺伝子の塩基配列は配列番号1〜3に示す塩基配列である。
酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子は、上記した酵素学的性質、好ましくは上記した酵素学的性質及び構造的性質を有する酵素(1)及び(2)が有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を有するものであれば特に限定されない。酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子が形質転換体内で過剰発現することにより酵素(1)及び(2)が生産される。本明細書における「遺伝子の発現」とは、転写や翻訳などを介して、遺伝子によってコードされる酵素が本来の触媒活性を有する態様で生産されることを意味する。また、本明細書における「遺伝子の過剰発現」とは、遺伝子が挿入されたことにより、宿主生物が本来発現する量を超えて、該遺伝子によってコードされるタンパク質(酵素)が生産されることを意味する。
塩基配列やアミノ酸配列の配列同一性を求める方法は特に限定されないが、例えば、通常知られる方法を利用して、野生型遺伝子や野生型遺伝子によってコードされる酵素のアミノ酸配列と対象となる塩基配列やアミノ酸配列とをアラインメントし、両者の配列の一致率を算出するためのプログラムを用いることにより求められる。
酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子は、例えば、セレノネイン生産能又はエルゴチオネイン生産能がある生物種や酵素(1)及び(2)の発現が見られる生物種などに由来する。酵素(1)及び(2)の酵素をコードする遺伝子の由来生物としては、例えば、微生物が挙げられる。微生物の中でも糸状菌はエルゴチオネイン生産能があることが知られている菌種が多いことから好ましい。糸状菌の具体例としては、アスペルギルス(Aspergillus)属糸状菌が挙げられ、より具体的にはアスペルギルス・ソーヤ(Aspergillus sojae)、アスペルギルス・オリゼ(Aspergillus oryzae)、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)、アスペルギルス・タマリ(Aspergillus tamarii)、アスペルギルス・アワモリ(Aspergillus awamori)、アスペルギルス・ウサミ(Aspergillus usamii)、アスペルギルス・カワチ(Aspergillus kawachii)、アスペルギルス・サイトイ(Aspergillus saitoi)などが挙げられる。
酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子は、適当な公知の各種ベクター中に挿入することができる。さらに、このベクターを適当な公知の宿主生物に導入して、酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子を含む組換えベクター(組換え体DNA)が導入された形質転換体を作製できる。酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子の取得方法や、酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子配列、酵素(1)及び(2)のアミノ酸配列情報の取得方法、各種ベクターの作製方法や形質転換体の作製方法などは、当業者にとって適宜選択することができる。また、本明細書では、形質転換や形質転換体にはそれぞれ形質導入や形質導入体を包含する。酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子のクローニングの一例を非限定的に後述する。
酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子を含む組換えベクター(組換え体DNA)は、酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子のいずれかを含むPCR増幅産物と各種ベクターとを、酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子の発現が可能な形で結合することにより構築することができる。例えば、適当な制限酵素で酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子のいずれかを含むDNA断片を切り出し、該DNA断片を適当な制限酵素で切断したプラスミドと連結することにより構築することができる。または、プラスミドと相同的な配列を両末端に付加した該遺伝子を含むDNA断片と、インバースPCRにより増幅したプラスミド由来のDNA断片とを、In−Fusion HD Cloning Kit(クロンテック社)などの市販の組換えベクター作製キットを用いて連結させることにより得ることがができる。
製造方法の一実施態様に用いられる形質転換体の作製方法は特に限定されず、例えば、常法に従って、酵素(1)又は酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子が発現する態様で宿主生物に挿入する方法が挙げられる。具体的には、酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子のいずれかを発現誘導プロモーター及びターミネーターの間に挿入したDNAコンストラクトを作製し、次いで酵素(1)をコードする遺伝子を含むDNAコンストラクトのみ又は酵素(1)をコードする遺伝子を含むDNAコンストラクト及び酵素(2)をコードする遺伝子を含むDNAコンストラクトの両方で宿主生物を形質転換することにより、酵素(1)をコードする遺伝子のみ又は酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子の両方を過剰発現する形質転換体が得られる。本明細書では、宿主生物を形質転換するために作製された、発現誘導プロモーター−酵素(1)又は(2)をコードする遺伝子−ターミネーターからなるDNA断片及び該DNA断片を含む組換えベクターをDNAコンストラクトと総称してよぶ。
宿主生物としては、酵素(1)をコードする遺伝子を含むDNAコンストラクト又は酵素(1)をコードする遺伝子を含むDNAコンストラクト及び酵素(2)をコードする遺伝子を含むDNAコンストラクトによる形質転換により、酵素(1)又は酵素(1)及び(2)を生産することができる微生物であれば特に限定されないが、例えば、セレン化合物の有毒性の観点からセレンを代謝できる微生物が挙げられ、セレン酸レダクターゼ(EC1.97.1.9)、セレノシステインリアーゼ(EC4.4.1.16)若しくはセリンデヒドラターゼ(EC4.3.1.17)又はこれらの2種以上の酵素を発現する微生物であることが好ましく、アスペルギルス(Aspergillus)属微生物、エシェリキア(Escherichia)属微生物、トリコデルマ(Trichoderuma)属微生物、フザリウム(Fusarium)属微生物、ペニシリウム(Penicillium)属微生物、クモノスカビ(Rhizopus)属微生物、アカパンカビ(Neuspora)属微生物などの糸状菌、光合成微生物及びプロバイオティック微生物などがより好ましい。
アスペルギルス・ソーヤNBRC4239株由来の酵素(1)をコードする遺伝子としては、例えば、後述する実施例に記載がある遺伝子AsEgtAが挙げられる。また、アスペルギルス・ソーヤNBRC4239株由来の酵素(2)をコードする遺伝子としては、例えば、後述する実施例に記載がある遺伝子AsEgtB及びAsEgtCが挙げられる。遺伝子AsEgtA、AsEgtB及びAsEgtCの塩基配列をそれぞれ配列表の配列番号1〜3として示す。また、AsEgtA、AsEgtB及びAsEgtCタンパク質のアミノ酸配列をそれぞれ配列表の配列番号4〜6として示す。
製造方法の一実施態様で使用する形質転換体の一実施態様は、遺伝子AsEgtAをアスペルギルス・ソーヤに挿入して、AsEgtAタンパク質を過剰発現するように形質転換した形質転換アスペルギルス・ソーヤである。上記形質転換体の別の一実施態様は、遺伝子AoEgtAをアスペルギルス・オリゼに挿入して、AoEgtAタンパク質を過剰発現するように形質転換した形質転換アスペルギルス・オリゼである。このような形質転換アスペルギルス・ソーヤ及び形質転換アスペルギルス・オリゼは、AsEgtAやAoEgtAタンパク質を過剰発現することにより、宿主生物では生産しない、又は生産したとしても微量であるセレノネインを検出可能以上に生産することができる。さらに、後述する実施例に記載があるとおり、形質転換アスペルギルス・ソーヤ及び形質転換アスペルギルス・オリゼは、セレノシステインやセレノシスチンといった有機セレン化合物に限らず、亜セレン酸などの無機セレン化合物からもセレノネインを生産することができる。そこで、形質転換体の一実施態様は、酵素(1)又は酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子の発現が、宿主生物に比してセレノネインの量が増えるように増強された形質転換体であることが好ましい。また、形質転換体の一実施態様は、酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子の発現が、酵素(1)をコードする遺伝子の発現が増強された形質転換体に比してセレノネインの量が増えるように増強された形質転換体であることがより好ましい。
製造方法の一実施態様は、ヒスチジン及びセレン化合物を、酵素(1)又は酵素(1)及び(2)をコードする遺伝子が挿入されており、かつ、該挿入された遺伝子を過剰発現する形質転換体に作用させて、セレノネインを得る工程を少なくとも含む、セレノネインの製造方法である。
本発明の一実施態様である製造方法や形質転換体を利用して得られたセレノネインは、種々の生理活性を有する機能性生体物質であることや熱に強く水溶性の物質であるという特徴を活かして、一般飲食品、機能性飲食品、機能性表示飲食品、特定保健用飲食品、栄養機能飲食品、保健機能飲食品、特別用途飲食品、栄養補助飲食品、健康補助飲食品、サプリメント、美容飲食品、化粧品、医薬品、医薬部外品、動物飼料などやこれらの製品を製造するための原料として利用可能である。
(1)対象遺伝子の探索
ニューロスポラ・クラッサ(Neurospora crassa)においてエルゴチオネインの生合成に関与する酵素としてNCU04343及びNCU11365が知られている(非特許文献3及び4を参照)。また、非特許文献3では、NCU04636がエルゴチオネインの生合成に関与する可能性が示唆されている。そこで、ニューロスポラ・クラッサの上記3つの酵素をコードする遺伝子をクエリーとして、アスペルギルス・ソーヤ(Aspergillus sojae)NBRC4239株のゲノム配列を基に、NCU04343、NCU04636及びNCU11365のそれぞれをコードする遺伝子と比較的配列同一性の高い領域を検索した。検索にはBLASTプログラム(tblastn)及びアスペルギルス・ソーヤNBRC4239株のゲノム配列(DDBJ/EMBL/GenBank DNA databases、 Accession numbers for the 65 scaffold sequences; DF093557−DF093585、DNA RESEARCH 18,165-176,2011)を用いた。
150ml容量の三角フラスコにポリペプトンデキストリン培地(1%(w/v)ポリペプトン、2%(w/v)デキストリン、0.5%(w/v)KH2PO4、0.1%(w/v)NaNO3、0.05%(w/v)MgSO4・7H2O、0.1%(w/v)カザミノ酸;pH6.0)を蒸留水で30ml調製し、アスペルギルス・ソーヤNBRC4239株の分生子を接種して30℃で一晩振とう培養した。得られた培養液からろ過により菌体を回収し、ペーパータオルに挟んで水分を除き、予め液体窒素で冷却した乳鉢と乳棒を用いて液体窒素で冷却しながら菌体を粉砕した。得られた粉砕菌体からDNeasy Plant Mini Kit(キアゲン社)を用いて染色体DNAを抽出した。
プラスミドpUC19に、翻訳伸長因子遺伝子tef1のプロモーター配列であるPtef(tef1遺伝子の上流748bp、配列番号7)、アルカリプロテアーゼ遺伝子alpのターミネーター配列であるTalp(alp遺伝子の下流800bp、配列番号8)、及びウリジン要求性を相補する形質転換マーカー遺伝子pyrG(上流407bp、コード領域896bp及び下流535bpを含む1838bp、配列番号9)を連結させたコンストラクト用プラスミドを次のとおりに作製した。
コンストラクト用プラスミドのPtef及びTalpの間に、対象遺伝子であるAsEgtA、AsEgtB又はAsEgtCを連結させたDNAコンストラクトを次のとおりに作製した。
(1)アスペルギルス・ソーヤNBRC4239株由来pyrG破壊株
各DNAコンストラクトをエタノール沈殿した後に、TEに溶解して、所望の濃度に調製したDNA溶液を、下記の手順でアスペルギルス・ソーヤNBRC4239株由来pyrG破壊株(pyrG遺伝子の上流48bp、コード領域896bp、下流240bp欠損株)の形質転換に用いた。
500ml容三角フラスコ中の20mMウリジンを含むポリペプトンデキストリン液体培地100mlに、アスペルギルス・ソーヤNBRC4239株由来pyrG破壊株の分生子を接種し、30℃で約20時間振とう培養を行った後、菌体を回収した。回収した菌体からプロトプラストを調製した。得られたプロトプラスト及び20μgの対象遺伝子挿入DNAコンストラクトを用いて、プロトプラストPEG法により形質転換を行い、次いで0.5%(w/v)寒天及び1.2Mソルビトールを含むCzapek−Dox最少培地(ディフコ社;pH6)を用いて、30℃、5日間以上インキュベートし、コロニー形成能があるものとして形質転換アスペルギルス・ソーヤを得た。
(1)対象タンパク質の探索
アスペルギルス・オリゼ(Aspergillus oryzae)RIB40株の総タンパク質を基に、アスペルギルス・ソーヤのAsEgtAアミノ酸配列をクエリーとして配列同一性の高いタンパク質を検索した。検索にはDOGAN(http://www.bio.nite.go.jp/dogan/project/view/AO)を用いた。
アスペルギルス・オリゼRIB40株の分生子を用いた以外は、上記例1−(2)と同様の方法で実施した。
上記例1−(3)で作製したベクター断片を用いた。
対象遺伝子がAoEgtAであること及び鋳型DNAとして上記で得られたアスペルギルス・オリゼRIB40株の染色体DNAを用いた以外は、上記例1−(4)と同様の方法で実施した。なお、AoEgtAを増幅するために使用したプライマー及びPCR条件を下記表8に示す。
特開2013−034416号公報に記載のアスペルギルス・オリゼRIB40株由来pyrG破壊株について形質転換した以外は、上記例2−(1)及び(2)と同様の方法で実施した。
コントロールであるアスペルギルス・ソーヤNBRC4239株並びに遺伝子AsEgtA及びAsEgtCにより形質転換した形質転換アスペルギルス・ソーヤのそれぞれのセレノネイン生産能を以下のとおりに比較した。
[LC−MS条件]
LC装置;Agilent1100シリーズ(アジレント社)
質量分析装置;QSTAR Elite (AB sciex社)
カラム;COSMOSIL HILIC(4.6×250mm)
溶離液;アセトニトリル+0.1%ギ酸:水+0.1%ギ酸 = 75:25(v/v)
流速;250 μl/ml
検出;ESI positive
Injection;10 μl
温度;室温
図1で検出された、m/z278に検出された、リテンションタイム31分付近のピークのMSスペクトルの拡大図を図3に示す。さらに、天然存在比から推定されるセレノネインのイオン分布の計算値を図4に示す。イオン分布の実測値が概ね一致することから、上記ピークがセレノネインであることを示すピークであり、遺伝子AsEgtA及びAsEgtCにより形質転換した形質転換アスペルギルス・ソーヤはセレノネインを生産することが示された。
200ml容三角フラスコ中にて、DPY液体培地 40ml;亜セレン酸添加DPY液体培地(1mM 亜セレン酸、0.1%(w/v)ヒスチジン、1%(w/v)ポリペプトン、2%(w/v)デキストリン、0.5%(w/v)酵母エキス、0.5%(w/v)KH2PO4、0.05%(w/v)MgSO4・7H2O、0.00017%FeSO4;pH未調整)40ml;又はセレノシスチン添加DPY液体培地 40mlを用いて、遺伝子AsEgtA及びAsEgtCにより形質転換した形質転換アスペルギルス・ソーヤの分生子を接種し、30℃で5日間、160rpmで振とう培養を行った。次いで、培養後の培養物から菌体をミラクロス(カルバイオケム社)上で回収した。回収した菌体を40mlの蒸留水で洗浄した後、菌体をペーパータオルに挟むことによって水分を押し出して湿菌体質量 2.28g(セレノシスチン添加DPY液体培地)及び1.89g(亜セレン酸添加DPY液体培地)を得た。8mlの水を添加して攪拌することにより、菌懸濁液を得た。得られた菌懸濁液を、100℃、15分の条件で加熱処理に供した。該処理後、遠心分離により上清として回収した菌体外液を、0.45μmフィルターでろ過することにより、セレノネイン抽出液を得た。
アスペルギルス・ソーヤNBRC4239株;遺伝子AsEgtAにより形質転換した形質転換アスペルギルス・ソーヤ;遺伝子AsEgtA及びAsEgtBにより形質転換した形質転換アスペルギルス・ソーヤ;並びに遺伝子AsEgtA及びAsEgtCにより形質転換した形質転換アスペルギルス・ソーヤの分生子を接種したこと、及び30℃で4日間、160rpmで振とう培養したこと以外は、上記例7と同様の操作を実施した。結果をまとめたものを表9及び表10に示す。
コントロールであるアスペルギルス・オリゼRIB40株及び遺伝子AoEgtAにより形質転換した形質転換アスペルギルス・オリゼのそれぞれのセレノネイン生産能を以下のとおりに比較した。
DPY液体培地に0mM、0.1mM、0.3mM若しくは1.0mMのセレノシスチン又は亜セレン酸を添加した。これらのそれぞれに、コントロールであるアスペルギルス・ソーヤNBRC4239株又は遺伝子AsEgtA及びAsEgtCにより形質転換した形質転換アスペルギルス・ソーヤの分生子を接種し、30℃で4日間、160rpmで振とう培養を行った。次いで、培養後の培養物から菌体をミラクロス(カルバイオケム社)上で回収した。回収した菌体を40mlの蒸留水で洗浄した後、菌体をペーパータオルに挟むことによって水分を押し出して湿菌体重量を測定した。
試験管中のDPY液体培地10mlに、コントロールであるアスペルギルス・ソーヤNBRC4239株;遺伝子AsEgtA、AsEgtB及びAsEgtCのいずれか1種の遺伝子により形質転換した形質転換アスペルギルス・ソーヤ;並びに遺伝子AsEgtAとAsEgtB又はAsEgtCとにより形質転換した形質転換アスペルギルス・ソーヤの各分生子を接種し、30℃で3日間振とう培養を行った後、菌体を回収した。回収した菌体を、ビーズ式細胞破砕装置(MS−100R;トミー精工社)を用いて冷却条件で破砕した破砕菌体末を、0.1%(w/v)SDS水溶液に懸濁することによりSDS懸濁液を得た。得られたSDS懸濁液にサンプルバッファー(Lane Marker Reducing Sample Buffer,ImmunoPure(5×);サーモフィッシャーサイエンティフィック社)を1/4容量添加して攪拌し、次いで98℃、3分の条件で加熱処理に供した。該処理後、遠心分離により回収した上清について、菌体0.2mg相当をアプライすることにより、アクリルアミドゲル電気泳動に供して、SDS−PAGEを実施した。結果を図9に示す。
AsEgtA及びAsEgtCのそれぞれのアミノ酸配列をもとに、コドン、二次構造、GC含量などの観点から大腸菌発現用に遺伝子配列を最適化したものに、遺伝子の上流にEcoRV配列(GATATC)を付加し、かつ、下流にSpeI配列(ACTAGT)を付加することにより、EcEgtA(配列番号27)及びEcEgtC(配列番号28)を得た。
(1)対象タンパク質の探索
データベースNon−redundant protein sequences(nr)を基に、アスペルギルス・ソーヤのAsEgtAタンパク質のアミノ酸配列をクエリーとして配列同一性の高いタンパク質を検索した。検索にはBlastp(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=blastp&PAGE_TYPE=BlastSearch&LINK_LOC=blasthome)を用いた。
アスペルギルス・ニガーIAM2533株の分生子を用いた以外は、上記例1−(2)と同様の方法で実施した。
上記例1−(3)で作製したベクター断片を用いた。
対象遺伝子がAnEgtA遺伝子であること及び鋳型DNAとして上記で得られたアスペルギルス・ニガーIAM2533株の染色体DNAを用いた以外は、上記例1−(4)と同様の方法で実施した。なお、AnEgtA遺伝子を増幅するために使用したプライマー及びPCR条件を下記表11に示す。
遺伝子AnEgtAを挿入したDNAコンストラクトを用いた以外は、上記例2−(1)及び(2)と同様の方法で実施した。
コントロールであるアスペルギルス・ソーヤNBRC4239株及び遺伝子AnEgtAにより形質転換した形質転換アスペルギルス・ソーヤの分生子を接種した以外は上記例7と同様の方法により実施した。得られたエルゴチオネイン抽出液及び本培養後の培養物から得た培養上清(0.45μmフィルターを用いたろ過処理済み)について、ヤマシタらの文献に記載の条件にて、LC−ICP−MSによりセレノネインを定量した。コントロール株及び形質転換アスペルギルス・ソーヤによるセレノネイン生産量を比較した結果を表12に示す。
下記表13に示すとおり、コントロールである発現用ベクターpUTE120K’を導入した大腸菌;遺伝子EcEgtA又はEcEgtCにより形質転換した形質転換大腸菌;及び遺伝子EcEgtAと遺伝子EcEgtCとにより形質転換した形質転換大腸菌のそれぞれのセレノネイン生産能を以下のとおりに比較した。
LC装置;ACQUITY UPLC(Waters社)
質量分析装置;Micromass Quattro micro API (Waters社)
カラム;COSMOSIL 2.5HILIC(3.0×100mm)
溶離液;アセトニトリル+0.1%ギ酸:水+0.1%ギ酸 = 80:20(v/v)
流速;500 μl/ml
検出;ESI positive
Injection;2 μl
温度;40℃
定量法;セレノネイン標品(アスペルギルス・オリゼ生産)を用いた検量線法
200ml容三角フラスコ中にて、セレン酵母液体培地 40ml(1.5%(w/v)セレン酵母、2%(w/v)デキストリン、0.5%(w/v)KH2PO4、0.05%(w/v)MgSO4・7H2O;pH未調整)に、遺伝子AsEgtAにより形質転換した形質転換アスペルギルス・ソーヤの分生子を接種し、30℃で5日間、160rpmで振とう培養を行った。
200ml容三角フラスコ中にて、カツオマグロエキス液体培地 40ml(2.0%(w/v)Bacterio−N−KN(マルハニチロ社)、2%(w/v)デキストリン、0.5%(w/v)KH2PO4、0.05%(w/v)MgSO4・7H2O;pH未調整)に、遺伝子AsEgtAにより形質転換した形質転換アスペルギルス・ソーヤの分生子を接種し、30℃で5日間、160rpmで振とう培養を行った。
Claims (6)
- ヒスチジン及びセレン化合物としてセレノシスチン又は亜セレン酸を、下記(1)の酵素をコードするアスペルギルス(Aspergillus)属微生物由来の遺伝子が外来遺伝子として挿入されており、該挿入された遺伝子を過剰発現し、かつ、アスペルギルス(Aspergillus)属微生物を宿主生物とする形質転換体に作用させて、セレノネインを得る工程を含む、セレノネインの製造方法。
(1)S−アデノシルメチオニン及び鉄(II)の存在下で、ヒスチジン及びセレノシステインから下記式〔I〕
に示されるヘルシニルセレノシステインを生成する反応を触媒する酵素であって、該酵素をコードする遺伝子が配列表の配列番号1に記載の塩基配列、及び配列表の配列番号23に記載の塩基配列及び該塩基配列と90%以上の配列同一性を有する塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列を有する遺伝子であり、又は配列表の配列番号4に記載のアミノ酸配列、配列表の配列番号24に記載のアミノ酸配列及び該アミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列を有する、前記酵素 - 前記形質転換体が、さらに下記(2)の酵素をコードする遺伝子が挿入されており、かつ、該挿入された遺伝子を過剰発現する形質転換体である、請求項1に記載の製造方法。
(2)ピリドキサール 5’−リン酸を補酵素として、下記式〔I〕
に示されるヘルシニルセレノシステインからセレノネインを生成する反応を触媒する酵素であって、該酵素をコードする遺伝子が配列表の配列番号2に記載の塩基配列、及び配列表の配列番号3に記載の塩基配列及び該塩基配列と90%以上の配列同一性を有する塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列を有する遺伝子であり、又は配列表の配列番号5に記載のアミノ酸配列、及び配列表の配列番号6に記載のアミノ酸配列及び該アミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列を有する、前記酵素 - 前記宿主生物としての前記アスペルギルス属微生物が、アスペルギルス・ソーヤ(Aspergillus sojae)、アスペルギルス・オリゼ(Aspergillus oryzae)、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)、アスペルギルス・タマリ(Aspergillus tamarii)、アスペルギルス・アワモリ(Aspergillus awamori)、アスペルギルス・ウサミ(Aspergillus usamii)、アスペルギルス・カワチ(Aspergillus kawachii)及びアスペルギルス・サイトイ(Aspergillus saitoi)からなる群から選ばれるアスペルギルス属微生物である、請求項1〜2のいずれか1項に記載の製造方法。
- 前記外来遺伝子としての前記アスペルギルス属微生物が、アスペルギルス・ソーヤ(Aspergillus sojae)、アスペルギルス・オリゼ(Aspergillus oryzae)、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)、アスペルギルス・タマリ(Aspergillus tamarii)、アスペルギルス・アワモリ(Aspergillus awamori)、アスペルギルス・ウサミ(Aspergillus usamii)、アスペルギルス・カワチ(Aspergillus kawachii)及びアスペルギルス・サイトイ(Aspergillus saitoi)からなる群から選ばれるアスペルギルス属微生物である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の製造方法。
- 前記形質転換体は、前記(1)の酵素をコードする遺伝子の発現が、宿主生物に比してセレノネインの量が増えるように増強された形質転換体である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の製造方法。
- 前記形質転換体は、前記(1)の酵素をコードする遺伝子の発現が、該形質転換体を、宿主生物の生育に適したセレノシスチン含有培地を用いて30℃、5日間で培養した場合のセレノネインの量が湿菌体質量1gあたり10μg以上になるように増強された形質転換体である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の製造方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015157443 | 2015-08-07 | ||
JP2015157443 | 2015-08-07 | ||
PCT/JP2016/068128 WO2017026173A1 (ja) | 2015-08-07 | 2016-06-17 | セレノネインの製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2017026173A1 JPWO2017026173A1 (ja) | 2018-05-24 |
JP6932354B2 true JP6932354B2 (ja) | 2021-09-08 |
Family
ID=57983047
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017534126A Active JP6932354B2 (ja) | 2015-08-07 | 2016-06-17 | セレノネインの製造方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11028400B2 (ja) |
EP (1) | EP3333266B1 (ja) |
JP (1) | JP6932354B2 (ja) |
CN (2) | CN114606144A (ja) |
WO (1) | WO2017026173A1 (ja) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3985100A1 (en) * | 2015-01-30 | 2022-04-20 | Kikkoman Corporation | Transformed fungus having enhanced ergothioneine productivity and method for producing ergothioneine |
WO2017150679A1 (ja) * | 2016-03-02 | 2017-09-08 | 国立研究開発法人水産研究・教育機構 | セレノネインの分離方法 |
JP7101363B2 (ja) * | 2017-10-25 | 2022-07-15 | キッコーマン株式会社 | セレノネイン含有組成物 |
JP7059789B2 (ja) * | 2018-05-14 | 2022-04-26 | 富士通株式会社 | 逐次制御プログラム、逐次制御方法および逐次制御装置 |
JP7210577B2 (ja) * | 2018-06-15 | 2023-01-23 | キッコーマン株式会社 | セレノネインの製造方法 |
JP7233085B2 (ja) * | 2019-02-01 | 2023-03-06 | 国立研究開発法人水産研究・教育機構 | セレノネインモノマーの分離方法 |
CN115297928A (zh) * | 2019-12-27 | 2022-11-04 | 国立研究开发法人国立成育医疗研究中心 | 受精卵的碎片化抑制剂 |
CN111909251B (zh) * | 2020-08-14 | 2021-10-22 | 江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所 | 一种水稻富硒基因OsHSE2-1及其应用 |
CN114107326A (zh) * | 2020-09-01 | 2022-03-01 | 中国科学院微生物研究所 | 两个麦角硫因合成蛋白质及其在麦角硫因合成中的应用 |
CN112457999B (zh) * | 2020-11-10 | 2024-06-21 | 重庆蓝肽生物科技有限公司 | 一种富硒酿酒酵母菌株及其应用 |
CN112481341B (zh) * | 2020-12-07 | 2022-09-23 | 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 | 一种强化硒吸收活性肽的制备方法及其应用 |
WO2023183543A1 (en) * | 2022-03-25 | 2023-09-28 | The Trustees Of Princeton University | Chemoenzymatic synthesis of selenoneine and its analogs |
CN114517160B (zh) * | 2022-04-14 | 2023-07-25 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种米曲霉菌株在富集硒中的应用 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005176602A (ja) * | 2001-12-27 | 2005-07-07 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 麹菌遺伝子 |
JP5669056B2 (ja) | 2009-12-11 | 2015-02-12 | 独立行政法人水産総合研究センター | 新規セレン含有化合物 |
WO2014100752A1 (en) * | 2012-12-21 | 2014-06-26 | Liu Pinghua | Ergothioneine production through metabolic engineering |
CN104072423A (zh) * | 2013-03-28 | 2014-10-01 | 南京工业大学 | 一种新型天然抗氧化剂麦角硒因的化学合成方法 |
EP3985100A1 (en) | 2015-01-30 | 2022-04-20 | Kikkoman Corporation | Transformed fungus having enhanced ergothioneine productivity and method for producing ergothioneine |
-
2016
- 2016-06-17 JP JP2017534126A patent/JP6932354B2/ja active Active
- 2016-06-17 CN CN202210301979.0A patent/CN114606144A/zh active Pending
- 2016-06-17 EP EP16834870.4A patent/EP3333266B1/en active Active
- 2016-06-17 US US15/750,792 patent/US11028400B2/en active Active
- 2016-06-17 CN CN201680044520.XA patent/CN108138206B/zh active Active
- 2016-06-17 WO PCT/JP2016/068128 patent/WO2017026173A1/ja active Application Filing
-
2021
- 2021-05-13 US US17/319,362 patent/US11629341B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US11028400B2 (en) | 2021-06-08 |
CN114606144A (zh) | 2022-06-10 |
JPWO2017026173A1 (ja) | 2018-05-24 |
US20180237815A1 (en) | 2018-08-23 |
WO2017026173A1 (ja) | 2017-02-16 |
US11629341B2 (en) | 2023-04-18 |
EP3333266A4 (en) | 2019-01-16 |
EP3333266C0 (en) | 2024-04-24 |
CN108138206B (zh) | 2022-03-29 |
US20210317463A1 (en) | 2021-10-14 |
EP3333266B1 (en) | 2024-04-24 |
EP3333266A1 (en) | 2018-06-13 |
CN108138206A (zh) | 2018-06-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6932354B2 (ja) | セレノネインの製造方法 | |
JP6246953B2 (ja) | エルゴチオネイン生産能が増強された形質転換糸状菌及びエルゴチオネインの製造方法 | |
RU2560597C2 (ru) | Аспарагиназа, полученная из базидомицетов | |
JP2018511335A (ja) | 改変された全細胞触媒を用いたノンカロリー甘味料の生成 | |
EA019971B1 (ru) | Альдолазы, кодирующие их нуклеиновые кислоты и способы их получения и применения | |
CN110499304A (zh) | 多肽,分离的其多核苷酸,以及包含多肽的添加剂、其用途及方法 | |
JP2023030077A (ja) | イソプレノイドの製造方法並びにそのためのタンパク質、遺伝子及び形質転換体 | |
WO2019240243A1 (ja) | セレノネインの製造方法 | |
JP2005073638A (ja) | キャンディダ・ユティリスのグルタチオン合成酵素をコードする遺伝子 | |
JP6830603B2 (ja) | アスコクロリン及びイリシコリンaの製造方法 | |
WO2024071388A1 (ja) | 酵素剤及びその応用 | |
JP6656919B2 (ja) | 5−オキソプロリナーゼ、5−オキソプロリナーゼ遺伝子、および5−オキソプロリナーゼの製造方法 | |
JP7120007B2 (ja) | 香気成分の製造方法 | |
Zhu et al. | The Synthesis and Role of Hydroxyectoine in Halophilic Bacterium Halomonas ventosa DL7 | |
Galanopoulou et al. | Purine utilization proteins in the Eurotiales: Cellular | |
WO2000011142A9 (en) | Methyltransferases, nucleic acid molecules encoding methyltransferases, their recombinant expression and uses thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190415 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190415 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190422 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200421 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200611 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20201208 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210203 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210803 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210805 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6932354 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |