JP6812564B2

JP6812564B2 - 肝疾患治療剤

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Description

本発明は、ピラゾール系化合物又はそれらの薬学的に許容可能な塩を有効成分として含有する肝疾患治療剤に関する。

非アルコール性脂肪肝疾患（ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ；ＮＡＦＬＤ）は慢性肝疾患の中で最もありふれた疾患で、２型糖尿病、肥満及び代謝症候群と密接な関係があることが知られている［ＣｏｈｅｎＪＣ，ＨｏｒｔｏｎＪＤ，ＨｏｂｂｓＨＨ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２０１１；３３２：１５１９−２３．］。

非アルコール性脂肪肝疾患は、肝臓内に中性脂肪が蓄積しすぎている状態であり、単純脂肪症（ｓｉｍｐｌｅｓｔｅａｔｏｓｉｓ）から非アルコール性脂肪肝炎（ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ；ＮＡＳＨ）、さらには肝硬変症までを含む広義の概念である［ＣｏｈｅｎＪＣ，ＨｏｒｔｏｎＪＤ，ＨｏｂｂｓＨＨ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２０１１；３３２：１５１９−２３．］。

非アルコール性脂肪肝疾患は、肥満、糖尿病、異常脂質血症などと共に代謝症候群の重要な要素として認識されており、代謝症候群患者の殆どが非アルコール性脂肪肝疾患を伴っている［ＳｚｃｚｅｐａｎｉａｋＬＳ，ＮｕｒｅｎｂｅｒｇＰ，ＬｅｏｎａｒｄＤ，ＢｒｏｗｎｉｎｇＪＤ，ＲｅｉｎｇｏｌｄＪＳ，ＧｒｕｎｄｙＳ，ＨｏｂｂｓＨＨ，ＤｏｂｂｉｎｓＲＬ．ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌＭｅｔａｂ２００５；２８８：Ｅ４６２−８．］。非アルコール性脂肪肝疾患は一般に、肝臓における中性脂肪合成量が中性脂肪異化量を超える時に発生するが、肝臓における遊離脂肪酸の吸収が増加するか、炭水化物代謝から中性脂肪の生合成が増加する場合がそれに当たる［ＢｉｒｋｅｎｆｅｌｄＡＬ，ＳｈｕｌｍａｎＧＩ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ２０１４；５９：７１３−２３．］。肝臓で起きる中性脂肪合成の原料となる遊離脂肪酸は、食餌、体内での生合成によって、また脂肪組織から遊離して肝臓に流入したものである［ＭｕｓｓｏＧ，ＧａｍｂｉｎｏＲ，ＣａｓｓａｄｅｒＭ．ＰｒｏｇＬｉｐｉｄＲｅｓ２００９；４８：１−２６．］。

長期間の栄養過剰によって脂肪細胞で慢性炎症が発生すると、脂肪分解が増加して血中脂肪酸及び中性脂肪が増加する一方、大食細胞が脂肪細胞に浸潤して典型的な炎症性サイトカインであるＴＮＦ−αの分泌が起きる。これによって骨格筋内に脂肪酸の流入が増加して、骨格筋に蓄積された脂肪量が増加し、筋肉中においてインスリン抵抗性をもたらす［ＧｕｉｌｈｅｒｍｅＡ，ＶｉｒｂａｓｉｕｓＪＶ，ＰｕｒｉＶ，ＣｚｅｃｈＭＰ．ＮａｔＲｅｖＭｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ２００８；９：３６７−７７．］。

一般に、非アルコール性脂肪肝疾患の病因は、ツーヒット仮説で説明されているが、一番目のヒットは、インスリン抵抗性及び遊離脂肪酸の増加による肝臓における中性脂肪沈着である。二番目のヒットとしては、酸化ストレスが脂肪の過酸化を招いて壊死炎症変化を起こし、“非アルコール性脂肪肝炎”として知られた組織学的変化を誘発することが見出されている［ＤａｙＣＰ，ＪａｍｅｓＯＦ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ１９９８；１１４：８４２−５．］。

脂質中間代謝体が肝細胞損傷及び毒性を表す代表的な機構としては、小胞体ストレス及び酸化ストレスが含まれる。変性タンパク質（ｕｎｆｏｌｄｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ）が小胞体に蓄積されると小胞体ストレス応答（ＵＰＲ）を誘発し、ＩＲＥ１、ＡＴＦ６、ＰＥＲＫを活性化させる。これらの反応によってＮＦ-κＢ、ｃ-ＪｕｎＮ末端キナーゼ、及び酸化ストレス経路が活性化し、これらの経路が単純脂肪症から脂肪性肝炎への進行に寄与することが示されている［ＢｉｒｋｅｎｆｅｌｄＡＬ，ＳｈｕｌｍａｎＧＩ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ２０１４；５９：７１３−２３．］。

一方、本発明のピラゾール系化合物が脂肪肝疾患の予防及び治療に効果があることを開示した研究はない。

韓国登録特許第１０−１２８０１６０号公報韓国登録特許第１０−１６３３９５７号公報

ＣｏｈｅｎＪＣ，ＨｏｒｔｏｎＪＤ，ＨｏｂｂｓＨＨ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２０１１；３３２：１５１９−２３ＳｚｃｚｅｐａｎｉａｋＬＳ，ＮｕｒｅｎｂｅｒｇＰ，ＬｅｏｎａｒｄＤ，ＢｒｏｗｎｉｎｇＪＤ，ＲｅｉｎｇｏｌｄＪＳ，ＧｒｕｎｄｙＳ，ＨｏｂｂｓＨＨ，ＤｏｂｂｉｎｓＲＬ．ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌＭｅｔａｂ２００５；２８８：Ｅ４６２−８ＢｉｒｋｅｎｆｅｌｄＡＬ，ＳｈｕｌｍａｎＧＩ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ２０１４；５９：７１３−２３ＭｕｓｓｏＧ，ＧａｍｂｉｎｏＲ，ＣａｓｓａｄｅｒＭ．ＰｒｏｇＬｉｐｉｄＲｅｓ２００９；４８：１−２６ＧｕｉｌｈｅｒｍｅＡ，ＶｉｒｂａｓｉｕｓＪＶ，ＰｕｒｉＶ，ＣｚｅｃｈＭＰ．ＮａｔＲｅｖＭｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ２００８；９：３６７−７７ＤａｙＣＰ，ＪａｍｅｓＯＦ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ１９９８；１１４：８４２−５

上記のような問題点に基づき、本発明の発明者らは、様々な脂肪肝疾患動物モデルにおいて、本発明のピラゾール系化合物によって治療をすることにより、脂肪肝疾患の主な病理形態である脂肪肝、肝炎症そして肝線維化が効果的に改善することを見出し、本発明を完成するに至った。

本発明者らは効果的な肝疾患治療剤を研究し続ける中で、３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オールの核構造を有する化合物が脂肪肝に由来する炎症性サイトカインを抑制し、肝炎症及び肝線維化が抑えられる効果を有することを見出し、本発明を完成した。

したがって、本発明は、３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オールを核構造とするピラゾール系化合物又はその薬学的に許容可能な塩が有効成分として含まれた肝疾患の予防、改善又は治療用の薬学組成物を提供することを目的とする。

上記の目的を達成するために、本発明では、下記化学式１で表示されるピラゾール系化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選ばれる１種以上の化合物を有効成分として含有する肝疾患の予防、改善又は治療用の薬学組成物を提供する。

（式中、Ｒは炭素数１〜１０の直鎖型又は分岐型アルキル基である。）
本発明の他の態様として、肝疾患患者の肝疾患を予防、改善又は治療するための方法であって、前記化学式１で表示されるピラゾール系化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選ばれる少なくとも１種の化合物の有効量を、これを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。

本発明の他の態様として、肝疾患患者の肝疾患を予防、改善又は治療するための、前記化学式１で表示されるピラゾール系化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選ばれる少なくとも１種の化合物を提供する。

本発明の他の態様として、肝疾患患者の肝疾患を予防、改善又は治療するための薬剤の製造における前記化学式１で表示されるピラゾール系化合物及びその薬学的に許容可能な塩から選ばれる少なくとも１種の化合物の用途を提供する。

本発明に係るピラゾール系化合物又はその薬学的に許容される塩は、脂肪肝、肝炎症及び肝線維化を効果的に抑制することができ、ＮＡＦＬＤ、特にＮＡＳＨの予防又は治療に有用である。

ここで用いられる“脂肪肝疾患”という用語は、肝細胞に脂肪が沈着して肝障害を起こす疾患を総称し、アルコール性肝障害、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬＤ又はＮＡＳＨ）を含む。

ＭＣＤ（Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ／Ｃｈｏｌｉｎｅｄｅｆｉｃｉｅｎｔｄｉｅｔ）飼料により誘発される脂肪肝モデル動物を用いた評価において、血中ＡＬＴ減少効果を示すグラフである。ＭＣＤ飼料により誘発される脂肪肝モデル動物を用いた評価において、肝組織における炎症抑制効果を示す写真である。ＭＣＤ飼料により誘発される脂肪肝モデル動物を用いた評価において、肝組織の線維化が阻害される効果を示す写真である。高脂肪飼料により誘発される（Ｈｉｇｈｆａｔｄｉｅｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ）脂肪肝モデル動物を用いた評価において、相対的な肝臓の重さの変化及び血中ＡＬＴ、ＡＬＰ、ＡＳＴ減少効果を示す図である。糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにより誘発される脂肪肝モデル動物を用いた評価において、肝組織の肝線維化が抑制される効果を示す写真である。糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにより誘発される脂肪肝モデル動物を用いた評価において、肝組織のＴＧ及びコレステロール含有量の減少、肝炎症及び肝線維化抑制効果、血中ＴＧ、ＬＤＬ減少効果を示す図である。

ここで、本発明の好ましい実施の形態が詳細に参照され、その実施例は、添付の図面に例示されている。可能な限り、同一又は類似の部分を示すために図面全体を通して同じ参照符号が使用される。

本発明の一側面実施の形態において、肝疾患は脂肪肝疾患であり、脂肪肝疾患は非アルコール性脂肪肝又は単純性脂肪肝であり、本発明の実施の形態に係る組成物は、脂肪の肝蓄積を抑制し、脂肪肝に由来する炎症性サイトカインを抑制して肝炎症及び肝線維化を抑制する効果がある。

本明細書において、範囲が変数に対して記載される場合、当該変数は前記範囲の記載された終了点を含む、記載された範囲内における全ての値を含むと理解されるべきである。

例えば、“５〜１０”の範囲は、５、６、７、８、９、及び１０の値だけでなく、６〜１０、７〜１０、６〜９、７〜９などの任意の下位範囲を含み、５．５、６．５、７．５、５．５〜８．５及び６．５〜９などのような、記載された範囲内に入る適切な整数の間の任意の値も含むと理解できよう。また、例えば、“１０％〜３０％”の範囲は、１０％、１１％、１２％、１３％などの値から３０％までを含む全ての整数だけでなく、１０％から１５％、１２％から１８％、２０％から３０％などの任意の下位範囲を含み、１０．５％、１５．５％、２５．５％などのような、記載された範囲に入る適切な整数の間の任意の値も含むと理解できよう。

以下、本発明について詳しく説明する。

本発明は、下記化学式１で表示されるピラゾール系化合物又はその薬学的に許容される塩から選ばれる、少なくとも１種以上の化合物が有効成分として含まれている脂肪肝疾患の予防、改善又は治療用の薬学組成物に関する。

（式中、Ｒは炭素数１〜１０の直鎖型又は分岐型アルキル基である。）
本発明において、“脂肪肝疾患”とは、肝細胞に脂肪が蓄積して肝障害を起こす疾患を総称し、アルコール性肝障害、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬＤ又はＮＡＳＨ）を含む。

非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＦＬＤ又はＮＡＳＨ）は進行程度によって四つの型に分類され、１型は単純性脂肪肝、２型は脂肪性肝炎、３型は脂肪肝壊死であり、また４型は線維化を伴う肝細胞壊死を含む。

長期予後の検討に基づいて、肝硬変への進行や肝臓関連死の頻度が有意に高い３型及び４型がＮＡＳＨ段階と定義されている［Ｍａｔｔｅｏｎｉ，Ｃ．Ａ．，ｅｔａｌ１９９９，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１１６：１４１３−１４１９］。

米国肝臓学会のシングルトピックスカンファレンス２００２では、ＮＡＳＨの条件として、脂肪化、小葉内炎症及び肝細胞の風船様変性を考慮してＮＡＦＬＤの３段階及び４段階がＮＡＳＨであると判断されている［ＳｉｎｇｌｅＴｏｐｉｃＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅ２００２，Ｎｅｕｓｃｈｗａｎｄｅｒ−Ｔｅｔｒｉ，Ｂ．Ａ．，ｅｔａｌ，２００３，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，３７：１２０２−１２１９］。

本発明に係る予防又は治療剤を適用する脂肪肝疾患としては非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬＤ）が好適であり、単純性脂肪肝、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）が特に好適である。

本発明の薬学組成物に含まれるピラゾール系化合物の薬学的に許容可能な塩は、医薬業界で通常使用される塩を意味し、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、臭素酸、ヨウ素酸、過塩素酸及び硫酸などで製造された無機酸塩、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、コハク酸、シュウ酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸、マンデル酸、プロピオン酸、クエン酸、乳酸、グリコール酸、グルコン酸、ガラクツロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、グルクロン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、炭酸、バニリン酸、ヨウ化水素酸などで製造された有機酸塩、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸及びナフタレンスルホン酸などで製造されたスルホン酸塩などを挙げることができるが、挙げられたこれらの塩によって本発明で意味する塩の種類が限定されるものではない。好ましくは、前記薬学的に許容可能な塩は、塩酸塩である。

本発明の薬学組成物に含有される前記化学式１で表示されるピラゾール系化合物を具体的に例示すれば、下記の通りである：
３−フェニル−４−メチル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール又はその塩酸塩；
３−フェニル−４−エチル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール又はその塩酸塩；
３−フェニル−４−ノルマルプロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール又はその塩酸塩；
３−フェニル−４−イソプロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール又はその塩酸塩；
３−フェニル−４−ノルマルブチル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール又はその塩酸塩；
３−フェニル−４−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール又はその塩酸塩；
３−フェニル−４−ノルマルペンチル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール又はその塩酸塩；
又は
３−フェニル−４−ノルマルヘキシル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール又はその塩酸塩。

具体的には、本発明の薬学組成物に含まれる、化学式１のピラゾール系化合物は、３−フェニル−４−ノルマルプロピル−１−（ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール又はその塩酸塩である。

本発明の組成物は、本発明の効果を損なわない限り、薬学的に許容可能な希釈剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、溶解補助剤などの薬学的に許容可能な添加剤を含むことができる。

希釈剤は、砂糖、デンプン、微結晶セルロース、乳糖（乳糖水和物）、葡萄糖、di−マンニトール、アルギン酸塩、アルカリ土類金属塩、クレー、ポリエチレングリコール、無水リン酸水素カルシウム、又はそれらの混合物などを使用することができ、結合剤は、デンプン、微結晶セルロース、高分散性シリカ、マンニトール、di−マンニトール、蔗糖、乳糖水和物、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、ポリビニルピロリドン共重合体（コポビドン）、ヒプロメロース、ヒドロキシプロピルセルロース、天然ガゴム、合成ガゴム、ゼラチン、又はそれらの混合物などを使用することができる。

崩壊剤は、デンプングリコール酸ナトリウム、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン又はアルファ化デンプンなどのデンプン又は変性デンプン；ベントナイト、モンモリロナイト、又はビーガム（ｖｅｅｇｕｍ）などのクレー；微結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース又はカルボキシメチルセルロースなどのセルロース類；アルギン酸ナトリウム又はアルギン酸などのアルギン類酸塩；クロスカルメルロース（ｃｒｏｓｃａｒｍｅｌｌｏｓｅ）ナトリウムなどの架橋セルロース類；グアーガム、キサンタンガムなどのガム類；架橋ポリビニルピロリドン（クロスポビドン）などの架橋重合体；重炭酸ナトリウム、クエン酸などの発泡剤、又はそれらの混合物を使用することができる。

潤滑剤は、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、水添植物油、安息香酸ナトリウム、フマル酸ステアリルナトリウム、ベヘン酸グリセリル、モノオレイン酸グリセリル、モノステアリン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセリル、コロイド状二酸化ケイ素、又はそれらの混合物などを使用することができる。

ｐＨ調整剤は、酢酸、アジピン酸、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、エーテラートナトリウム、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、クエン酸のような酸性ｐＨ調整剤と、沈降炭酸カルシウム、アンモニア水、メグルミン、炭酸ナトリウム、酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、クエン酸ナトリウム、３塩基リン酸カルシウムのような塩基性ｐＨ調整剤などを使用することができる。

酸化防止剤は、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、酢酸トコフェロール、トコフェロール、没食子酸プロピル、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウムなどを使用することができる。本発明の先放出性区画において、可溶化剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリソルベートなどのポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ドクキュセートナトリウム、ポロキサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）などを使用することができる。

また、徐放性製剤を作るために腸溶性ポリマー、水不溶性ポリマー、疎水性化合物、及び親水性ポリマーを含むことができる。

前記腸溶性ポリマーは、ｐＨ５未満の酸性条件下で不溶性であるか或いは安定したものであり、ｐＨ５以上である特定ｐＨ条件下で溶解するか又は分解されるポリマーを指し、例えば、ヒプロメロース酢酸エステルコハク酸エステル、ヒプロメロースフタル酸エステル（ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート）、ヒドロキシメチルエチルセルロースフタレート、酢酸フタル酸セルロース、セルロースアセテートサクシネート、セルロースアセテートマレート、セルロースベンゾエートフタレート、セルロースプロピオネートフタレート、メチルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロース及び、エチルヒドロキシエチルセルロースフタレート、及びメチルヒドロキシエチルセルロースのような腸溶性セルロース誘導体；スチレン−アクリル酸共重合体、アクリル酸メチル−アクリル酸共重合体、アクリル酸メチルメタクリル酸共重合体（例えば、Acryl-EZE(登録商標)）、アクリル酸ブチル−スチレン−アクリル酸共重合体、及びアクリル酸メチル−メタクリル酸−アクリル酸オクチル共重合体のような前記腸溶性アクリル酸系共重合体；ポリ（メタクリル酸メチルメタクリレート）共重合体（例えば、オイドラギットＬ、オイドラギットＳ、エボニック社製、ドイツ）、ポリ（メタクリル酸エチルアクリレート）共重合体（例えば、オイドラギットＬ１００−５５）のような腸溶性ポリメタクリレート共重合体；酢酸ビニル−マレイン酸共重合体、スチレン−無水マレイン酸共重合体、スチレン−マレイン酸モノエステル共重合体、ビニルメチルエーテル−無水マレイン酸共重合体、エチレン−無水マレイン酸共重合体、ビニルブチルエーテル−無水マレイン酸共重合体、アクリロニトリル−アクリル酸メチル・マレイン酸共重合体、及びアクリル酸ブチル−スチレン−無水マレイン酸共重合体のような腸溶性マレイン酸系共重合体；及びポリビニルアルコールフタレート、ポリビニルアセタールフタレート、ポリビニルブチレートフタレート及びポリビニルアセトアセタールフタレートのような腸溶性ポリビニル誘導体がある。

前記水不溶性ポリマーは、薬物の放出を制御する薬学的に許容可能な水に溶解しないポリマーを指す。例えば、水不溶性ポリマーは、ポリ酢酸ビニル（例えば、コリコートＳＲ３０Ｄ）、水不溶性ポリメタクリレート共重合体［例えば、ポリ（エチルアクリレート−メチルメタクリレート）共重合体（例えば、オイドラギットＮＥ３０Ｄ、ポリ（エチルアクリレート−メチルメタクリレート−トリメチルアミノエチルメタクリレート）共重合体（例えば、オイドラギットＲＳＰＯ）など］、エチルセルロース、セルロースエステル、セルロースエーテル、セルロースアシレート、セルロースジアシレート、セルローストリアシレート、セルロースアセテート、セルロースジアセテート及びセルローストリアセテートなどを含む。

前記疎水性化合物は、薬物の放出を制御する薬学的に許容可能な水に溶解しない物質を指す。疎水性化合物の例としては、パルミトステアリン酸グリセリル、ステアリン酸グリセリル、ベヘン酸グリセリル、パルミチン酸セチル、モノオレイン酸グリセリル及びステアリン酸のような脂肪酸及び脂肪酸エステル類；セトステアリルアルコール、セチルアルコール及びステアリルアルコールのような脂肪酸アルコール類；カルナバ蝋、蜜蝋、及び微結晶性ワックスのようなワックス類；タルク、沈降炭酸カルシウム、リン酸一水素カルシウム、酸化亜鉛、酸化チタン、カオリン、ベントナイト、モンモリロナイト及びビーガムのような無機質物質などを含む。

前記親水性ポリマーは、薬物の放出を制御する薬学的に許容可能な水に溶解する高分子ポリマーを指す。親水水性ポリマーの例としては、デキストリン、ポリデキストリン、デキストラン、ペクチン及びペクチン誘導体、アルギン酸塩、ポリガラクツロン酸、キシラン、アラビノキシラン、アラビノガラクタン、デンプン、ヒドロキシプロピルデンプン、アミロース、及びアミロペクチンのような糖類；ヒプロメロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース及びカルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロース誘導体；グアーガム、ローカストビーンガム、トラガカント、カラギーナン、アカシアガム、アラビアガム、ゲランガム、及びキサンタンガムのようなガム類；ゼラチン、カゼイン、及びゼインのようなタンパク質；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、及びポリビニルアセタールジエチルアミノアセテートのようなポリビニル誘導体；ポリ（ブチルメタクリレート−（２−ジメチルアミノエチル）メタクリレート−メチルメタクリレート）共重合体（例えば、オイドラギットＥ１００、エボニック社製、ドイツ）、ポリ（エチルアクリレート−メチルメタクリレート−トリエチルアミノエチル−メタクリレートクロリド）共重合体（例えば、オイドラギットＲＬ、ＲＳ、エボニック社製、ドイツ）のような親水性ポリメタクリレート共重合体；ポリエチレングリコール、及びポリエチレンオキシドのようなポリエチレン誘導体；カルボマーなどを含む。

さらに、着色剤、香料の中から選ばれる様々な添加剤として薬学的に許容可能な添加剤を選択使用して本発明の製剤を調製することができる。

本発明において添加剤の範囲は前記添加剤を使用することに限定されるものではなく、上記の添加剤を選択することによって通常範囲の容量を含有して調製することができる。

本発明に係る薬学組成物は、通常の方法によって散剤、顆粒剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、懸濁液、乳剤、シロップ及びエアロゾルなどの経口製剤、外用剤、坐剤又は滅菌注射溶液の形態で剤形化して調製することができる。

本発明の一実施の形態は、前記有効成分を薬学組成物の総重量を基準にして０．０１〜９０重量％の範囲で含有する肝疾患の予防、改善又は治療用の薬学組成物を提供する。

本発明に係る脂肪肝疾患の予防又は治療剤において、前記化学式１で表示されるピラゾール系化合物又はその薬学的に許容される塩の投与量は、患者の年齢や、体重、症状、投与経路などに応じて適切に変更することが可能である。例えば、成人（６０Ｋｇ）を基準とする１日当たりの量は、経口投与では約１ｍｇから１，０００ｍｇ、好ましくは約１０ｍｇから７５０ｍｇであり、注射形態では約０．３ｍｇから２００ｍｇであり、一日１回から数回分けて投与することができる。

本発明の他の実施の形態は、３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール及びその薬学的に許容可能な塩から選ばれる少なくとも１種以上が有効成分として含まれている単純脂肪症の予防又は治療剤を提供する。

本発明の他の実施の形態は、３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール及びその薬学的に許容可能な塩から選ばれる１種以上が有効成分として含まれている非アルコール性脂肪肝炎の予防又は治療剤を提供する。

本発明の他の実施の形態は、３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール及びその薬学的に許容可能な塩から選ばれる１種以上が有効成分として含まれている肝硬変の予防又は治療剤を提供する。

ここで使用される用語“投与”とは、いずれかの適切な方法で患者に本発明の脂肪肝疾患予防又は治療用組成物を導入することを意味し、本発明の脂肪肝疾患予防又は治療用組成物の投与経路は、標的組織に到達できればいかなる一般経路でもよい。投与経路の例としては、経口、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、鼻腔内、肺内、直腸内、腔内、腹腔内、髄腔内投与を含むが、これらに制限されない。

本発明の理解を助けるために好ましい実施例を提示する。しかし、下記の実施例は本発明をより容易に理解させるために提供されるものに過ぎず、これらの実施例によって本発明の範囲が限定されるわけではない。

［合成例］
本合成例では、肝疾患治療用の薬学組成物に有効成分として含まれるピラゾール系化合物を合成する代表的な製造方法を例示する。

合成例１．３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オールの合成

丸底フラスコに３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール（２．５２ｇ、１０．７ｍｍｏｌ）とエタノール１０ｍＬが投入された後、２−ヒドラジノピリジン（１．２９ｇ、１．１８ｍｍｏｌ）がエタノール３ｍＬに希釈された溶液が０℃で徐々に滴加された。３日間１００℃で加熱還流がなされた。減圧下の蒸留によって溶媒が除去され、結果固形物がヘキサンとエチルアセテートで洗浄され、その後真空乾燥によって目的化合物を８２％の収率で得た。

１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１２．５０（１Ｈ，ｓ），８．２７−８．２５（１Ｈ，ｍ），８．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．８１（１Ｈ，ｍ），７．６９（２Ｈ，ｍ），７．４８−７．３４（３Ｈ，ｍ），７．１２−７．１０（１Ｈ，ｍ），２．５４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．６４（２Ｈ，ｍ），０．９３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）；ＥＩＭＳ（７０ｅＶ）ｍ／ｚ（ｒｅｌｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）２７９（Ｍ＋，３７），２５０（１００）。

合成例２．３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール塩酸塩の合成（化合物１）

丸底フラスコに前記合成例１で製造された３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール（２８０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）がエチルエーテル４ｍＬに溶解され、ここに、２ＭのＨＣｌが溶解されたエチルエーテル０．５５ｍＬが０℃で徐々に滴加された。結果固形物は減圧下で反応溶液がろ過されて溶媒が除去され、ヘキサンとエチルアセテートで洗浄され、真空乾燥によって前記目的化合物（２７０ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を得た。

１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ）、８．０−８．０３（２Ｈ，ｍ）、７．６６−７．６４（２Ｈ，ｍ）、７．４８−７．４２（３Ｈ，ｍ）、７．３４−７．３０（１Ｈ，ｍ）、２．４９（２Ｈ，ｂｒｓ）、２．４３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）、１．４８（２Ｈ，ｍ）、０．４８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）。

［実施例］
本実施例では、肝疾患治療用の医薬組成物に有効成分として含まれるピラゾール誘体の薬理作用が詳細に特定される。

実施例１：３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール塩酸塩の脂肪肝抑制作用［ＭＣＤ（メチオニン／コリン欠乏）飼料により誘発される脂肪肝モデル動物を用いた評価］
被検動物は、６週齢の雄のスプラーグドーリー（ＳＤ）ラットを購入した。ラットはいずれも標準条件で保存された。約６週間飼育して１２週齢で試験物質がラットに投与された。試験群は、５週目に採取した血液のＡＬＴ値を基準にして構成された。

１２週齢から５週間、試験物質は、ビヒクル投与群と、３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール塩酸塩投与群とに対して別々に投与された。
正常対照群は陰性対照として用いられた。

血液は、実験開始の一日前に採血（頚静脈から）し、３週、５週、７週、９週及び剖検日に血液が採取された（絶食後２４時間、総６回）。さらに、５週、７週、９週及び剖検日に採取した各血液の血漿（ｐｌａｓｍａ）が分析された。

試験終了後、動物に麻酔がかけられ、それぞれの動物から肝組織が摘出され、検査のための血液が取られた。肝組織の重量が測定され、画像化された。この組織は１０％中性緩衝ホルマリン溶液に固定化された。固定化された組織が一定の厚さで切り出され、一般の組織処理過程を経てパラフィン包埋して４〜５μｍの大きさの組織切片が作製され、一般的な染色方法としてのヘマトキシリン・エオジン染色（Ｈ＆Ｅｓｔａｉｎ）が行われて組織病理学的所見が観察された。

Ｈ＆Ｅ染色に加えて、脂肪肝生成時に誘発される脂質を観察するためにオイルレッドＯ染色を行って脂質生成レベルが確認され、薬物投与による脂質の減少効果が予想された。肝組織は、オイルレッドＯ作業溶液で染色することによって脂質の生成レベルが確認された。血液を取って３０００ｒｐｍ、４℃、１０分間遠心分離が行われた。上層の血清を取り、自動血液生化学分析機器（ＡＵ４８０，Ｂｅｃｋｍａｎ３０−１８Ｃｏｕｌｔｅｒ，ＵＳＡ）を用いてアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）のレベルが測定され、結果が分析された。

相対的な肝重量とトリグリセリドの減少に対する薬物投与の効果を予想するために、体重に対する肝の相対重量が測定されるとともに、肝組織中のトリグリセリドの量が測定された。肝組織がホモジナイザーによって粉砕され、クロロホルムとメタノール（２：１）がこれに添加され、結果混合物が３０００ｒｐｍ、４℃、１０分間遠心分離され、脂質を含む有機溶媒層が分離された。分離された脂質中の有機溶媒は、５０℃の乾燥器で１２時間除去された。脂質のみの試験管が１００％ＥｔＯＨに浸された後、無脂質の試験管内において懸濁されてトリグリセリド測定用キット試薬（ＡＭ１５７Ｓ−Ｋ，Ａｓａｎ，Ｋｏｒｅａ）を用いて測定が行われた。

肝組織の免疫組織化学的変化を観察するために、１０％中性緩衝ホルマリン溶液に固定された組織から作製された薄切片が、コーティングスライドに付着され、脱パラフィンと染色が行われた後、それぞれのスライドが抗体ＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子-α，ａｂ１７９３，アブカム社製）、ＴＧＦ−β（トランスフォーミング増殖因子-β，ａｂ６６０４３，アブカム社製）、α−ＳＭＡ（α-平滑筋アクチン，ａｂ７８１７，アブカム社製）、ＩＬ−１β（インターロイキン-１β，ａｂ９７２２，アブカム社製）との反応が行われ、結果が分析された。

図１、図２及び図３は、ＭＣＤ（メチオニン／コリン欠乏）飼料により誘発される脂肪肝モデル動物を用いた評価において、１日１回６０ｍｇ／ｋｇで薬物として３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール塩酸塩を投与した群で血中ＡＬＴ減少効果、肝組織における炎症抑制効果、肝組織の線維化が阻害される効果を表した写真である。図１、図２及び図３に示すように、図１では、血中ＡＬＴ変化が、薬物投与後、ビヒクル群に比べて薬物投与群で顕著に減少している。

図２は、肝組織における炎症因子であるα−ＳＭＡ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−αの染色結果を示すもので、ビヒクル群に比べて薬物投与群で炎症が相当減少していることを示している。

図３は、肝組織損傷及び肝線維化を確認するために、肝組織におけるＴＧＦ−β、Ｈ＆Ｅ染色、及びオイルレッドＯ染色の結果を示すもので、ビヒクル群に比べて薬物を投与した群において減少していることを示している。

実施例２：３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール塩酸塩の脂肪肝抑制作用［高脂肪飼料により誘発される脂肪肝モデル動物を用いた評価］
被検動物は、６週齢のラットを購入した。ラットはいずれも標準条件で保存された。約６週間飼育して１２週齢で試験物質がラットに投与された。試験群は、５週目に採取した血液のＡＬＴ値を基準にして構成された。１２週齢から５週間、試験物質はビヒクル投与群、陽性対照群であるオベチコール酸投与群、及び３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール塩酸塩投与群対して別々に投与された。

血液は、実験開始の一日前に採血（頚静脈から）し、５週、８週及び剖検日に血液が採取された（絶食後２４時間、総４回）。さらに、５週、８週及び剖検日に採取した各血液の血漿が分析された。

Ｈ＆Ｅ染色に加えて、脂肪肝生成時に誘発される脂質を観察するためにオイルレッドＯ染色を行って脂質生成レベルが確認され、薬物投与による脂質の減少効果が予想された。肝組織は、オイルレッドＯ作業溶液で染色することによって脂質の生成レベルが確認された。

血液を取って３０００ｒｐｍ、４℃、１０分間遠心分離が行われた。上層の血清を取り、自動血液生化学分析機器（ＡＵ４８０，Ｂｅｃｋｍａｎ３０−１８Ｃｏｕｌｔｅｒ，ＵＳＡ）を用いてアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ＡＳＴアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）及びアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）のレベルが測定され、結果が分析された。

相対的な肝重量とトリグリセリドの減少に対する薬物投与の効果を予想するために、体重に対する肝臓の相対重量が測定されるとともに、肝組織中のトリグリセリドの量が測定された。肝組織がホモジナイザーによって粉砕され、クロロホルムとメタノール（２：１）がこれに添加され、結果混合物が３０００ｒｐｍ、４℃、１０分間遠心分離され、脂質を含む有機溶媒層が分離された。分離された脂質中の有機溶媒は、５０℃の乾燥器で１２時間除去された。脂質のみの試験管が１００％ＥｔＯＨに浸された後、無脂質の試験管内において懸濁されてトリグリセリド測定用キット試薬（ＡＭ１５７Ｓ−Ｋ，Ａｓａｎ，Ｋｏｒｅａ）を用いて測定が行われた。

図４は、高脂肪飼料により誘発される脂肪肝モデル動物を用いた評価において、１日１回６０ｍｇ／ｋｇで薬物として３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール塩酸塩を投与した群で相対的な肝臓の重さ及び血中ＡＬＴ、ＡＬＰ及びＡＳＴのレベルを減少させる効果があることを示している。図４ａに示すように、相対的な肝重量は、薬物投与後、ビヒクル群及び陽性対照群であるオベチコール酸投与群に比べて当該薬物投与群で顕著に減少している。図４ｂ、図４ｃ及び図４ｄは、薬物投与後、血液おけるＡＬＴ、ＡＬＰ、ＡＳＴは、ビヒクル及び陽性対照群であるオベチコール酸投与群に比べて当該薬物投与群で相当減少していることを示している。

実施例３：３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール塩酸塩の脂肪肝抑制作用［糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにより誘発される脂肪肝モデル動物を用いた評価］
被検動物は６週齢の雄糖尿病ｄｂ／ｄｂマウス（Ｃ５７ＢＬＫＳ／Ｊ−ｌｅｐｒｄｂ／ｌｅｐｒｄｂ）をＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ，ＵＳＡ）から購入した。マウスはいずれも標準条件で保存された。約２週間飼育して８週齢で試験物質がマウスに投与された。８週齢から１２週間、試験物質は、ビヒクル投与群と、３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール塩酸塩投与群とに対して別々にされた。
正常対照群は陰性対照として使用された。

試験終了後、動物を麻酔して個体別に肝組織を摘出し、検査のための血液を取った。肝組織の重量を測定し、写真を撮った。組織を１０％中性緩衝ホルマリン溶液に固定した。固定された組織を一定の厚さで切り出した後、一般の組織処理過程を経てパラフィン包埋して４〜５μｍの組織切片を作製し、一般の染色方法であるＨｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ＆Ｅｏｓｉｎ染色（Ｈ＆Ｅ染色）を行って組織病理学的所見を観察した。

Ｈ＆Ｅ染色に加えて、脂肪肝生成時に誘発される脂質を観察するためにオイルレッドＯ染色を行って脂質生成レベルが確認され、薬物投与による脂質の減少効果が予想された。肝組織はオイルレッドＯ作業溶液で染色することによって脂質の生成レベルが確認された。

血液を取って３０００ｒｐｍ、４℃、１０分間遠心分離が行われた。上層の血清を取り、自動血液生化学分析機器（ＡＵ４８０，Ｂｅｃｋｍａｎ３０−１８Ｃｏｕｌｔｅｒ，ＵＳＡ）を用いてＴＧトリグリセリド（ＴＧ）及びＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）のレベルが測定され、結果が分析された。

図５及び図６は、糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにより誘発される脂肪肝モデル動物を用いた評価において、１日１回６０ｍｇ／ｋｇで薬物として３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール塩酸塩を投与した群で肝組織における炎症抑制効果、肝組織の線維化、並びに血液及び肝組織におけるＴＧ及びＬＤＬの減少レベルを表した写真及びグラフである。

図５及び図６に示すように、図５は、肝組織損傷及び肝線維化を確認するために、肝組織におけるＴＧＦ−β及びＴｙｐｅＩＶコラーゲン染色の結果を示すもので、ここでは、ビヒクル群に比べて薬物を投与した群において減少していることを示している。図６ａ及び図６ｂでは、肝組織におけるＴＧ及びコレステロール変化、並びに血中のＴＧ及びコレステロール変化を示すもので、薬物投与後、ビヒクル群に比べて薬物投与群で肝組織損傷及び肝線維化が顕著に減少していることを示している。図６ｃは、肝組織における炎症及び線維化因子であるＣｏｌｌａｇｅｎＩ、ＣｏｌｌａｇｅｎＩＶ、ＭＣＰ−１、ＰＡＩ−１及びＴＧＦ−βのｍＲＮＡ発現（ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）が、ビヒクル群に比べて薬物投与群で顕著に減少していることを示している。

本発明の好ましい実施の形態は例示目的で開示されているが、添付の特許請求の範囲に開示される本発明の範囲および精神から逸脱することなく、様々な修正、追加及び置換が可能であることを当業者は理解するであろう。

Claims

下記化学式１で表示されるピラゾール系化合物及びそれらの薬学的に許容可能な塩から選ばれる少なくとも１種以上の化合物が有効成分として含まれている、非アルコール性脂肪肝炎（ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ；ＮＡＳＨ）及び肝硬変から選択される肝疾患の予防、改善又は治療用の薬学組成物。

（式中、Ｒは炭素数１〜１０の直鎖型又は分岐型アルキル基である。）
３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール及びその薬学的に許容可能な塩から選ばれる少なくとも１種以上の化合物が有効成分として含まれている、請求項１に記載の肝疾患の予防、改善又は治療用の薬学組成物。
前記薬学的に許容可能な塩は、アルカリ金属塩、アルカリ土金属塩、無機酸との塩、有機酸との塩及び酸性アミノ酸との塩からなる群から選ばれることを特徴とする、請求項１に記載の肝疾患の予防、改善又は治療用の薬学組成物。
前記薬学的に許容可能な塩は、塩酸塩であることを特徴とする、請求項１に記載の肝疾患の予防、改善又は治療用の薬学組成物。
前記薬学組成物は、注射剤、顆粒剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、ゲル剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、点滴剤及び液剤からなる群から選ばれる剤形に製剤化されたことを特徴とする、請求項１に記載の肝疾患の予防、改善又は治療用の薬学組成物。
３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール及びその薬学的に許容可能な塩から選ばれる少なくとも１種が有効成分として含まれている、非アルコール性脂肪肝炎の予防又は治療剤。
３-フェニル-４-ノルマルプロピル-１-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-５-オール及びその薬学的に許容可能な塩から選ばれる少なくとも１種が有効成分として含まれている、肝硬変の予防又は治療剤。