JP6667870B2 - Rotifer feed - Google Patents

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    • Y02A40/81Aquaculture, e.g. of fish

Description

本発明は、プランクトンの異常増殖に対する水生生物の耐性を有効に改善する方法に関するものである。   The present invention relates to a method for effectively improving the resistance of aquatic organisms to plankton overgrowth.

養殖とは、主に有用な水生生物を人が管理して飼育することにより数や量の増収を図ることをいい、天然水生生物を捕獲するよりも安定供給が可能になるという利点がある。   Aquaculture refers to increasing the number and quantity of human aquatic organisms by managing and rearing them, and has the advantage of providing a more stable supply than capturing natural aquatic organisms.

マダイやヒラメなどの高級魚を養殖するに当たっては、稚魚の段階ではシオミズツボワムシ(Brachionus plicatilis)などの生体飼料が用いられている。また、海中で養殖する前の稚貝には、Nannochloropsis oculataなどの藻類の生体が飼料として用いられている。また、生体飼料であるシオミズツボワムシ自体の養殖においては、クロレラ(Chlorella)属藻類の生体細胞が飼料として主に用いられる。生体飼料生物は、一般的に、養殖場またはその近辺で養殖し、養殖生物に施餌される。   In breeding high-grade fish such as red sea bream and flounder, a livestock feed such as Brachionus plicatilis is used at the stage of fry. Algae such as Nannochloropsis oculata are used as feed for the larvae before being cultured in the sea. In cultivation of the rotifer, which is a living feed, the living cells of Chlorella genus algae are mainly used as feed. Living feed organisms are generally farmed at or near farms and fed to the farmed organisms.

水生生物の養殖においては、プランクトンの異常増殖がしばしば問題となる。プランクトンの異常増殖は、主に海水や淡水が富栄養化して窒素やリンといった栄養成分の濃度が高まり、特定のプランクトンが過剰に増加する現象であり、原因となるプランクトンの種類に応じて、赤潮、アオコ、水の華、淡水赤潮などと名付けられている。さらに、異常増殖したプランクトンが死滅し、バクテリアにより分解される際に酸素が消費され、酸素不足となる青潮という現象もある。何れにせよ、プランクトンの異常増殖により養殖場の海水や淡水が酸素不足となり、養殖水生生物やその生体飼料生物が壊滅的なダメージを受ける場合がある。また、赤潮などの原因となるプランクトンの中には、渦鞭毛藻であるヘテロカプサ・サーキュラリスカーマ(Heterocapsa circularisquama)など、水生生物に対する毒素を産生するものもある。そこで、プランクトンの異常増殖に対応するための様々な技術が開発されている。   In aquaculture, the overgrowth of plankton is often a problem. Plankton overgrowth is a phenomenon in which the concentration of nutrients such as nitrogen and phosphorus is increased due to eutrophication of seawater and freshwater, and specific plankton is excessively increased. , Aoko, mizuhana, freshwater red tide and so on. Furthermore, there is a phenomenon called blue tide, in which oxygen is consumed when plankton that abnormally proliferates is killed and decomposed by bacteria, resulting in a lack of oxygen. In any case, due to the abnormal growth of plankton, the seawater and freshwater of the farm become oxygen deficient, and the cultured aquatic organisms and their live feed organisms may suffer catastrophic damage. Some plankton that cause red tides and the like produce toxins to aquatic organisms, such as the dinoflagellate Heterocapsa circularisquama. Therefore, various techniques have been developed to cope with the abnormal growth of plankton.

例えば、赤潮に対応する技術としては、赤潮自体を回収するものや(特許文献1など)、赤潮が発生した海水を浄化するもの(特許文献2など)、また、赤潮の原因となるプランクトンを駆除するための薬剤を散布するもの(特許文献3など)などがある。その他、特許文献4には、特定微生物の培養液またはその処理物が、魚介類には害を及ぼさず飼料となるものである一方で、赤潮の原因となるシャトネラ(Chattonella)属藻類に対して高い致死活性と生育阻害活性を示すことが開示されている。   For example, technologies corresponding to the red tide include those that collect the red tide itself (Patent Document 1 and the like), those that purify the seawater in which the red tide has occurred (Patent Document 2 and the like), and those that eliminate plankton that causes the red tide. (For example, Patent Document 3). In addition, Patent Literature 4 discloses that a culture solution of a specific microorganism or a processed product thereof is used as a feed without causing harm to fish and shellfish, while it is against algae of the genus Chattonella that cause red tide. It is disclosed that it shows high lethal activity and growth inhibitory activity.

特開平5−017930号公報JP-A-5-017930 特開平6−296958号公報JP-A-6-296958 特開平6−16504号公報JP-A-6-16504 特開平5−112417号公報JP-A-5-112417

上述したように、赤潮などプランクトンの異常増殖への様々な対応技術が開発されているが、赤潮などを回収する技術や海水などの浄化技術は、必要な設備投資費用が莫大なものとなり、少なくとも小規模な養殖には適さないといえる。また、異常増殖プランクトンを駆除する薬剤などは、たとえ魚類などには悪影響を及ぼさない場合であっても、養殖対象である飼料プランクトンには悪影響を示すおそれがあり得る。一方、養殖対象である水生生物のプランクトン異常増殖に対する耐性を高めることができれば、プランクトン異常増殖は一過性のものである場合が多いことから、その被害を低減することが可能になる。   As described above, various techniques for responding to the abnormal growth of plankton such as the red tide have been developed.However, the technology for recovering the red tide and the like and the purification technology for seawater require enormous capital investment costs. It is not suitable for small-scale aquaculture. In addition, even if a drug or the like that eliminates abnormally growing plankton does not have an adverse effect on fish and the like, it may have an adverse effect on feed plankton to be cultured. On the other hand, if the aquatic organisms to be cultured can be made more resistant to the abnormal growth of plankton, the abnormal growth of plankton is often transient, so that the damage can be reduced.

そこで本発明は、養殖対象である水生生物自体のプランクトン異常増殖に対する耐性を有効に改善する方法を提供することを目的とする。   Therefore, an object of the present invention is to provide a method for effectively improving the resistance of aquatic organisms to be cultured to plankton abnormal growth.

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた。その結果、クロレラ属藻類に近縁なものではあるがクロレラ属藻類とは異なるパラクロレラ属藻類を飼料として水生生物に施餌した場合、プランクトンの異常増殖に対する水生生物の耐性を有効に改善できることを見出して本発明を完成した。   The present inventors have intensively studied to solve the above problems. As a result, it was found that when aquatic organisms were fed with parachlorella algae, which are closely related to chlorella algae, but different from chlorella algae, the aquatic organisms' resistance to plankton overgrowth can be effectively improved. We have completed the present invention.

以下、本発明を示す。   Hereinafter, the present invention will be described.

[1] プランクトンの異常増殖に対する水生生物の耐性を改善する方法であって、
水生生物にパラクロレラ(Parachlorella)属藻類を有効成分として含む飼料を施餌する工程を含むことを特徴とする方法。
[1] A method for improving the resistance of aquatic organisms to abnormal growth of plankton,
A method comprising feeding an aquatic organism with a feed containing an algae of the genus Parachlorella as an active ingredient.

[2] パラクロレラ属藻類がパラクロレラ・ケスレリ(Parachlorella kessleri)種藻類である上記[1]に記載の方法。   [2] The method of the above-mentioned [1], wherein the alga of the genus Parachlorella is a species of Parachlorella kessleri.

[3] パラクロレラ・ケスレリ種藻類がKNK−A001株(受託番号:FERM BP−22256)である上記[2]に記載の方法。   [3] The method according to the above [2], wherein the Parachlorella quesellii algae is a KNK-A001 strain (Accession number: FERM BP-22256).

[4] プランクトンの異常増殖が赤潮である上記[1]〜[3]のいずれかに記載の方法。   [4] The method according to any one of [1] to [3], wherein the abnormal growth of plankton is red tide.

[5] プランクトンがヘテロカプサ・サーキュラリスカーマ(Heterocapsa circularisquama)である上記[4]に記載の方法。   [5] The method according to the above [4], wherein the plankton is Heterocapsa circularisquama.

[6] 水生生物が、貝類、魚類、飼料用動物プランクトンから選択されるものである上記[1]〜[5]のいずれかに記載の方法。   [6] The method according to any of [1] to [5] above, wherein the aquatic organism is selected from shellfish, fish, and zooplankton for feed.

本発明方法で用いるパラクロレラ属藻類は、それ自体が水生生物の成長を有効に促す優れた飼料であるといえる。また、当該パラクロレラ属藻類の施餌期間が長くなる程、飼育系内におけるプランクトンの異常増殖に対する水生生物の耐性が改善されることが実験的に見出されている。よって本発明方法は、特別な操作を必要とせず、飼料としてパラクロレラ属藻類を施餌することによりプランクトン異常増殖対策になるものとして産業上非常に有用である。   It can be said that Parachlorella algae used in the method of the present invention is itself an excellent feed that effectively promotes the growth of aquatic organisms. In addition, it has been experimentally found that the longer the feeding period of the algae of the genus Parachlorella, the better the resistance of aquatic organisms to the abnormal growth of plankton in the breeding system. Therefore, the method of the present invention does not require any special operation, and is very industrially useful as a measure against plankton abnormal growth by feeding Parachlorella algae as feed.

図1は、一般的な飼料を用いて飼育したワムシと、本発明に係るパラクロレラ属藻類を飼料として用いて飼育したワムシとの間で、赤潮の原因となる有害なプランクトンに対する耐性を比較した結果を示すグラフである。FIG. 1 compares the resistance to harmful plankton causing red tide between a rotifer bred using a general feed and a rotifer bred using a parachlorella algae according to the present invention as a feed. It is a graph which shows a result.

本発明方法は、プランクトンの異常増殖に対する水生生物の耐性を改善する方法に関するものである。   The method of the present invention relates to a method for improving the resistance of aquatic organisms to plankton overgrowth.

本発明の対象であるプランクトンは、その異常増殖が問題となるものであれば特に制限されないが、例えば、赤潮の原因として、キートケロス属(Chaetoceros spp.)、スケルトネマ・コスタツム(Skeletonema costatum)、リゾソレニア・インブリカータ(Rhizosolenia imbricata)、リゾソレニア・セティゲラ(R.setigera)、タラシオシラ属(Thalassiosira spp.)などの珪藻類;シャットネラ・アンティカ(Chattonella antiqua)、シャットネラ・マリナ(C.marina)、ヘテロシグマ・アカシオ(Heterosigma akashiwo)などのラフィド藻類;アレキサンドリウム属(Alexandrium spp.)、ギムノディニウム属(Gymnodinium spp.)、ヘテロカプサ・サーキュラリスカーマ(Heterocapsa circularisquama)、カレニア・ブレビス(Karenia. brevis)、カレニア・ミキモトイ(K.mikimotoi)、ヤコウチュウ(Noctiluca scintillans)、プロロセントラム・ミカンス(Prorocentrum micans)などの渦鞭毛藻類;アカシオウズムシ(Mesodinium rubrum)などの繊毛虫類などを挙げることができる。アオコや水の華の原因として、例えば、ミクロキスティス属(Microcystis)、アナベノプシス属(Anabaenopsis)などの藍藻類;クロレラ属(Chlorella)、イカダモ属(Scenedesmus)、クラミドモナス属(Chlamydomonas)などの緑藻類を挙げることができる。   The plankton, which is the object of the present invention, is not particularly limited as long as its abnormal growth is a problem. For example, the cause of the red tide is Chaetoceros spp., Skeletonema costumum, Rhizosolenia. Diatoms such as Rhizosolenia imbricata, Rhizosolenia setigara (R. setigera), and Thalassiosira spp .; ), Etc .; Alexandrium (Alexandri) m. spp., Gymnodinium spp., Heterocapsa circularis quama, Karenia brevis (Karenia snoikou, Kalonia mikikou ikomikoto konimikoi kikomikoi.), Gymnodinium spp., Heterocapsa circularisquama, Karenia. Dinoflagellates such as Centrum micans (Procentrum micans); ciliates such as Mesodinium rubrum; Examples of causes of water bloom and water bloom include cyanobacteria such as genus Microcystis and Anabenenopsis; and green algae such as genus Chlorella, genus Scenedesmus and Chlamydomonas. be able to.

特に、ヘテロカプサ属、アレキサンドリウム属、ギムノディニウム属、カレニア属、プロロセントラム属などに属する渦鞭毛藻類の中には、異常増殖による酸素不足が問題になるだけでなく、水生生物に対する毒素を産生するものもある。   In particular, among the dinoflagellates belonging to the genus Heterocapsa, Alexandrium, Gymnodinium, Karenia, Prolocentrum, etc., not only is oxygen deficiency caused by abnormal growth a problem, but also toxins to aquatic organisms are produced. Some do.

本発明において、プランクトンの異常増殖としては、赤潮、アオコ、水の華、淡水赤潮と呼ばれるものの他、異常増殖したプランクトンが死滅し、バクテリアにより分解される際に酸素が消費され、酸素不足となる青潮も含まれるものとする。   In the present invention, the abnormal growth of plankton includes red tide, blue-green algae, water bloom, freshwater red tide, as well as abnormally proliferated plankton, which is consumed when oxygen is consumed and decomposed by bacteria, resulting in oxygen deficiency. Blue tide shall be included.

本発明方法によりプランクトンの異常増殖に対する耐性を改善すべき水生生物は、養殖対象とされているものであれば特に制限されない。例えば、カキ、アワビ、ホタテ、シンジュガイ、イタヤガイ、ヒオウギガイなどの貝類;タイ、ヒラメ、マグロ、ブリ、カンパチ、シマアジ、イサキなどの海水魚;ウナギ、イワナ、アマゴ、マスなどの淡水魚;シオミズツボワムシやチグリオプスなどの飼料用動物プランクトンを挙げることができる。   Aquatic organisms to be improved in plankton resistance to abnormal growth by the method of the present invention are not particularly limited as long as they are intended for aquaculture. For example, shellfishes such as oysters, abalones, scallops, sinjugai, mussels, scallops; seawater fish such as Thailand, flounder, tuna, yellowtail, amberjack, shimaji, isaki; freshwater fish such as eels, chars, amago, trout; Zooplankton for feeds such as and tigliops.

本発明方法により改善すべき耐性とは、プランクトンの異常増殖に対するものであり、例えば、プランクトンの異常増殖に伴う酸素不足や、異常増殖し得るプランクトンが産生する毒素などに対する耐性をいうものとする。   The resistance to be improved by the method of the present invention refers to the abnormal growth of plankton, and for example, refers to the resistance to oxygen deficiency due to the abnormal growth of plankton, toxin produced by plankton that can grow abnormally, and the like.

本発明方法は、水生生物にパラクロレラ(Parachlorella)属藻類を有効成分として含む飼料を施餌する工程を含むことを特徴とする。   The method of the present invention is characterized in that it comprises a step of feeding aquatic organisms with feed containing parachorella as an active ingredient.

パラクロレラ属は、トレボキシア藻綱(Trebouxiophyceae)と緑藻綱(Chlorophyceae)とにまたがるクロレラ属のうち、トレボキシア藻綱に属するものであるが、18S rDNAおよび16S rDNAを用いた分子系統学的解析によれば他のクロレラ属とは別のグループを形成するものである。   The genus Parachlorella belongs to the genus Chlorella belonging to the genus Chlorophyceae over the genus Treboxiophyceae and Chlorophyceae, and is based on molecular phylogenetic analysis using 18S rDNA and 16S rDNA. For example, they form a separate group from other Chlorella spp.

パラクロレラ属藻類にはクロレラ属藻類のような強固な細胞壁構造が認められず、代わりに多糖類を主体とした厚い膜で覆われている。このことが、クロレラ属藻類に比べてパラクロレラ属藻類が水生生物に消化吸収され易く、その成長効果や飼料効率が高く、飼料として優れている理由であると考えられる。   Parachlorella algae do not have a strong cell wall structure like Chlorella algae, and are instead covered with a thick film mainly composed of polysaccharides. This is considered to be the reason that Parachlorella algae are more easily digested and absorbed by aquatic organisms than Chlorella algae, and their growth effect and feed efficiency are high and they are excellent as feed.

一般的に、パラクロレラ属藻類は、野外で採取した淡水サンプルから、一般的な培地を使った継代培養によりコロニーを分離し、最終的に分子系統学的解析により属種を特定することにより得ることができる。また、市販のものなどがあれば、入手して使用すればよい。   In general, Parachlorella algae are isolated from freshwater samples collected in the field by subculturing colonies by subculture using a common medium, and finally identifying the genus by molecular phylogenetic analysis. Obtainable. Also, if there is a commercially available product, it may be obtained and used.

パラクロレラ属藻類は、淡水培地やLB培地などの一般的な培地中、好気条件、嫌気条件のいずれでも生育可能であるが、室温〜30℃、明条件、好気条件で特によく増殖する。   Parachlorella algae can grow under aerobic conditions or anaerobic conditions in a common medium such as a freshwater medium or an LB medium, but they proliferate particularly well at room temperature to 30 ° C., under bright and aerobic conditions. .

パラクロレラ属藻類としては、例えば、パラクロレラ・ケスレリ(P.kessleri)、パラクロレラ・バイエリンキ(P.beijerinc)、パラクロレラ・マリニクロレラ(P.marinichlorella)、パラクロレラ・ディクチオスフェリウム(P.dictyosphaerium)、パラクロレラ・ムキドスファエリウム(P.mucidosphaerium)、パラクロレラ・クロステリオプシス(P.closteriopsis)、パラクロレラ・ジクロスター(P.dicloster)が挙げられる。これらの中でも特にパラクロレラ・ケスレリが好適である。   Examples of the algae of the genus Parachlorella include, for example, P. kessleri, P. beijerinc, P. mariniclorella, and P. dictiospherium. , D. dictyosphaerium), P. mucidosphaerium, P. closteriopsis, and P. dicloster. Among these, Parachlorella cesreri is particularly preferred.

パラクロレラ・ケスレリ種藻類のうち、特に好適なKNK−A001株(受託番号:FERM BP−22256)は、下記の通り寄託機関に寄託されている。
(i) 寄託機関の名称およびあて名
名称: 独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許生物寄託センター
あて名: 日本国 千葉県木更津市かずさ鎌足2−5−8−1 120号室
(ii) 受託日: 2013年9月3日
(iii) 受託番号: FERM BP−22256
本発明に係るKNK−A001株の形態的特徴などは、以下の通りである。
Among the Parachlorella quesellii species algae, a particularly suitable strain of KNK-A001 (accession number: FERM BP-22256) has been deposited with a depositary institution as follows.
(I) Name and address of the depositary institution Name: National Institute of Technology and Evaluation Patent Organism Depositary Center Address: 2-5-8-1 Kazusa Kamatari, Kisarazu-shi, Chiba Japan Room 120 (ii) Contract date: 2013 September 3, (iii) Accession number: FERM BP-22256
The morphological characteristics of the KNK-A001 strain according to the present invention are as follows.

また、KNK−A001株の18S rRNAの部分塩基配列を、配列番号1(SEQ ID NO:1)に示す。   The partial nucleotide sequence of 18S rRNA of the KNK-A001 strain is shown in SEQ ID NO: 1 (SEQ ID NO: 1).

また、その18S rRNAが、配列番号1に相当する(1)の塩基配列に対して、下記(2)または(3)の塩基配列を有する場合には、KNK−A001株と同じくパラクロレラ属藻類に属し、且つKNK−A001株と同様に、プランクトンの異常増殖に対する水生生物の耐性を改善する効果を示すと考えられる。   When the 18S rRNA has the following nucleotide sequence (2) or (3) with respect to the nucleotide sequence (1) corresponding to SEQ ID NO: 1, as in the case of the KNK-A001 strain, the alga of the genus Parachlorella And the effect of improving the resistance of aquatic organisms to the abnormal growth of plankton, like the KNK-A001 strain.

(2) 上記(1)に規定される塩基配列において、1以上、31以下の塩基が欠失、置換および/または付加された塩基配列
(3) 上記(1)に規定される塩基配列に対して98.5%以上の配列同一性を有する塩基配列
なお、欠失などの変異の導入により18S rRNAの塩基配列の塩基数が変化する場合においても、変異数が上記のとおり1以上、31以下の範囲内にあるか、配列同一性のパーセンテージが上記のとおり98.5%以上の範囲内にあれば、変異導入後の配列において、変異導入前の特定位置に相当する位置を特定することは当業者にとり容易である。具体的には、塩基配列の多重アラインメント用プログラムで比較すべき配列をアライメントし、位置を決定することが可能である。また、塩基配列の同一性も、多重アラインメント用プログラムで容易に求めることができる。
(2) In the base sequence defined in the above (1), one or more and 31 or less bases are deleted, substituted and / or added. (3) For the base sequence defined in the above (1) Nucleotide sequence having 98.5% or more sequence identity Even when the number of nucleotides in the nucleotide sequence of 18S rRNA changes due to the introduction of a mutation such as deletion, the number of mutations is 1 or more and 31 or less as described above. Or the percentage of sequence identity is within the range of 98.5% or more as described above, it is not possible to specify a position corresponding to a specific position before mutagenesis in the sequence after mutagenesis. It is easy for those skilled in the art. Specifically, it is possible to align sequences to be compared by a program for multiplex alignment of base sequences and determine the position. Also, the identity of the nucleotide sequences can be easily determined by a multiplex alignment program.

上記塩基配列(2)において、欠失などの変異の数としては、30以下、20以下または10以下がより好ましく、9以下、8以下、6以下または5以下がさらに好ましく、4以下または3以下がさらに好ましく、2または1がさらに好ましい。   In the base sequence (2), the number of mutations such as deletions is more preferably 30 or less, 20 or less, or 10 or less, still more preferably 9 or less, 8 or less, 6 or less or 5 or less, and 4 or 3 or less. Is more preferable, and 2 or 1 is more preferable.

また、上記塩基配列(3)において、塩基配列の同一性のパーセンテージとしては、99.0%以上、99.2%以上または99.4%以上がより好ましく、99.5%以上、99.6%以上または99.7%以上がさらに好ましく、99.8%以上または99.9%以上がさらに好ましい。   In the base sequence (3), the percentage of base sequence identity is more preferably 99.0% or more, 99.2% or more, or 99.4% or more, and more preferably 99.5% or more, 99.6% or more. % Or 99.7% or more, more preferably 99.8% or more or 99.9% or more.

本発明で用いるパラクロレラ属藻類としては、少なくとも最終の培養段階で従属栄養培養したものが好ましい。パラクロレラ属藻類は、独立栄養培養した場合と従属栄養培養した場合とでは細胞の構成や細胞に含まれる成分に相違が生じる場合があり得る。   As the algae of the genus Parachlorella used in the present invention, those obtained by heterotrophic culturing at least in the final culturing stage are preferable. In the case of parachlorella algae, there may be a case where there is a difference in cell composition and components contained in the cells between the case of autotrophic culture and the case of heterotrophic culture.

本発明で用いるパラクロレラ属藻類には、その変異体であって、水生生物に対する飼料となり且つプランクトンの異常増殖に対する水生生物の耐性を改善するものも含むものとする。ここで「変異体」とは、人為的な選択、交雑、突然変異、遺伝子組み換えなどにより改良したパラクロレラ属藻類をいうものとする。   The algae of the genus Parachlorella used in the present invention include mutants thereof that feed on aquatic organisms and improve the resistance of aquatic organisms to abnormal growth of plankton. Here, the “mutant” refers to an alga of the genus Parachlorella that has been improved by artificial selection, crossing, mutation, genetic recombination, or the like.

上述したように、本発明で用いるパラクロレラ属藻類にはクロレラ属藻類のような強固な細胞壁構造が認められないが、薄いながらも細胞壁が認められる。よって、水生生物での吸収効率をより一層高めるために、細胞壁を破壊するための処理を行うことが好ましい。パラクロレラ属藻類の細胞壁は、例えば、藻体の乾燥により容易に破壊することができる。   As described above, Parachlorella algae used in the present invention do not have a strong cell wall structure unlike Chlorella algae, but have a thin but still cell wall. Therefore, in order to further enhance the absorption efficiency in aquatic organisms, it is preferable to perform a treatment for breaking cell walls. The cell wall of the parachlorella algae can be easily destroyed, for example, by drying the alga bodies.

本発明方法で水生生物に施餌する飼料の有効成分としてのパラクロレラ属藻類の乾燥体は、パラクロレラ属藻類の生細胞や、当該生細胞を含む培養液を乾燥することにより得ることができる。即ち、パラクロレラ属藻類の培養液から濾過や遠心分離などにより生細胞を分離して乾燥したり、或いは培養液をそのまま乾燥すればよい。パラクロレラ属藻類の生細胞としては、その破砕物を用いてもよい。生細胞の破砕物であれば、飼料としてより有効であり得る。なお、パラクロレラ属藻類は、培養液中に分泌物を放出し、この分泌物が水生生物の成長に有効な成分の一つである可能性がある。培養液をそのまま乾燥した場合には、乾燥体にはかかる分泌物が含まれることになる。   A dried parachlorella algae as an active ingredient of a feed fed to aquatic organisms by the method of the present invention can be obtained by drying the live cells of the parachlorella algae or a culture solution containing the live cells. . That is, live cells may be separated from the culture of Parachlorella algae by filtration or centrifugation and dried, or the culture may be dried as it is. As the living cells of the genus Parachlorella, a crushed product thereof may be used. A broken live cell may be more effective as a feed. The algae of the genus Parachlorella release secretions into the culture solution, and the secretions may be one of the effective components for the growth of aquatic organisms. When the culture solution is dried as it is, the dried body contains such secretions.

パラクロレラ属藻類の生細胞や当該生細胞を含む培養液の乾燥は、常法に従って行うことができる。例えば、当該生細胞などを50℃以上、200℃以下で10秒間以上、10時間以下程度乾燥すればよい。乾燥時には減圧してもよい。なお、培養液を薄膜状に流下させつつ乾燥すれば、乾燥時間を短縮することができる。また、凍結乾燥してもよい。具体的な乾燥条件は、乾燥すべきパラクロレラ属藻類や培養液の量、使用する機器などに応じて適宜調整することができる。また、得られた乾燥体は、一般的には凝集しているので、さらに粉砕してもよい。粉砕程度は、給餌すべき水生生物が摂取し易い程度に調整すればよい。   Drying of living cells of the genus Parachlorella or a culture solution containing the living cells can be performed according to a conventional method. For example, the living cells and the like may be dried at 50 ° C. or more and 200 ° C. or less for about 10 seconds or more and about 10 hours or less. During drying, the pressure may be reduced. In addition, if the culture solution is dried while flowing down into a thin film, the drying time can be reduced. Moreover, you may freeze-dry. Specific drying conditions can be appropriately adjusted according to the amount of Parachlorella algae to be dried, the amount of culture solution, the equipment used, and the like. Moreover, since the obtained dried body is generally agglomerated, it may be further pulverized. The degree of crushing may be adjusted to such an extent that aquatic organisms to be fed can easily ingest.

なお、本発明における「パラクロレラ属藻類の乾燥体」は特に制限されず、パラクロレラ属藻類が生細胞ではなく、また、明らかな湿潤状態になければその水分含量は問わないものとする。例えば、乾燥体の水分含量としては30質量%以下とすることができる。当該水分含量としては、その値が低いほど飼料の保存安定性が高く、また、運搬が容易であるので、20質量%以下が好ましく、15質量%以下がより好ましく、10質量%以下がさらに好ましく、8質量%以下がよりさらに好ましい。一方、過剰に乾燥させる必要はないので、当該水分含量としては1質量%以上が好ましく、2質量%以上がより好ましく、5質量%以上がさらに好ましい。なお、上記の乾燥は、吸収効率の向上の他、細胞を殺すためや保存安定性を向上させるために行うものであるので、実際の飼料製品や給餌時の飼料における水分含量は問題にならない。例えば、パラクロレラ属藻類の乾燥体を養殖水などに分散した上で給餌してもよい。また、乾燥体中の水分含量は、カールフィッシャー法により容易に測定することができる。   In the present invention, the "dried parachlorella algae" is not particularly limited, and the water content of the parachlorella algae is not limited as long as the algae is not a living cell and is not clearly in a wet state. For example, the moisture content of the dried body can be 30% by mass or less. The water content is preferably 20% by mass or less, more preferably 15% by mass or less, and still more preferably 10% by mass or less because the lower the value, the higher the storage stability of the feed and the easier the transportation. , 8% by mass or less is even more preferred. On the other hand, since it is not necessary to dry excessively, the water content is preferably 1% by mass or more, more preferably 2% by mass or more, and even more preferably 5% by mass or more. The drying is performed not only to improve the absorption efficiency but also to kill the cells and to improve the storage stability. Therefore, the water content in the actual feed product or the feed at the time of feeding does not matter. For example, the dried parachlorella algae may be dispersed in culture water or the like before feeding. The moisture content in the dried product can be easily measured by the Karl Fischer method.

また、本発明において「有効成分」とは、養殖対象である水生生物に対して少なくとも毒性を示すことはなく、飼料として用い得るものであり、且つプランクトンの異常増殖に対する水生生物の耐性を改善できるものをいう。   Further, in the present invention, the "active ingredient" does not exhibit at least toxicity to aquatic organisms to be cultured, can be used as feed, and can improve the resistance of aquatic organisms to abnormal growth of plankton. A thing.

パラクロレラ属藻類の施餌量は、給餌すべき水生生物の種類や成長度合いなどに応じて適宜調整すればよいが、例えば、陸上養殖される稚貝や稚魚、輪形動物のような飼料用動物プランクトンの場合、養殖水に対するパラクロレラ属藻類細胞の数で、一回の給餌当たり1×105cells/mL以上、5×107cells/mL以下程度とすることができる。当該給餌量は、養殖対象である水生生物の成長度合いに応じて適宜調整すればよい。 The amount of parachlorella algae to be fed may be appropriately adjusted depending on the type of aquatic organism to be fed and the degree of growth, for example, forage animals such as juveniles, fry, and ring animals that are cultivated on land. In the case of plankton, the number of Parachlorella algae cells in the culture water can be about 1 × 10 5 cells / mL or more and about 5 × 10 7 cells / mL or less per feeding. The feed amount may be appropriately adjusted according to the growth degree of the aquatic organism to be cultured.

また、一般的な魚類に対する施餌量も、その種類や成長度合い、他の飼料との配合割合などを考慮して適宜調整すればよいが、例えば、一日の施餌当たりのパラクロレラ属藻類乾燥体の摂取量を0.2g/kg体重以上程度とすることができる。   In addition, the feed amount for general fish may be appropriately adjusted in consideration of the type and growth degree, the mixing ratio with other feeds, and the like, for example, for example, parachlorella algae per day of feeding. The intake of the dried body can be about 0.2 g / kg body weight or more.

パラクロレラ属藻類の一日当たりの施餌回数も適宜調整すればよいが、例えば、一日当たり1回以上、3回以下とすることができる。その他、飼料用動物プランクトンの場合には、適量のパラクロレラ属藻類を含む海水または淡水を新たに調製し、そこへ適数の飼料用動物プランクトンを添加してもよい。   The number of times of feeding per day of Parachlorella algae may be appropriately adjusted, and may be, for example, once or more and three times or less per day. In addition, in the case of zooplankton for feed, seawater or freshwater containing an appropriate amount of algae of the genus Parachlorella may be newly prepared, and an appropriate number of zooplankton for feed may be added thereto.

パラクロレラ属藻類を魚類用に他の飼料などと混合する場合には、例えば、パラクロレラ属藻類乾燥体の含有割合を1.0質量%以上とすることが好ましい。上限は特に制限されないが、栄養の偏りを低減するために、10質量%以下とすることが好ましい。配合すべき他の飼料としては、例えば、魚粉、大豆粕、米糠、小麦粉、でんぷん、酵母、油脂、ビタミン類、ミネラル類などが挙げられ、対象魚類の種類や成長度合いに応じて適宜選択すればよい。   When the parachlorella algae is mixed with other feeds for fish, for example, the content of the dried parachlorella algae is preferably 1.0% by mass or more. The upper limit is not particularly limited, but is preferably 10% by mass or less in order to reduce the bias of nutrition. Other feeds to be blended include, for example, fish meal, soybean meal, rice bran, wheat flour, starch, yeast, oils, vitamins, minerals, and the like, and may be appropriately selected according to the type and growth degree of the target fish. Good.

パラクロレラ属藻類を含む飼料の形態は特に制限されず、給餌すべき水生生物の種類や成長度合いなどに応じて適宜決定すればよい。例えば、稚貝や飼料用動物プランクトンには、摂食し易いようパラクロレラ属藻類を粉砕したものとすることができる。一方、稚魚の場合、上記のような粉砕物では、養殖水中に拡散してしまい稚魚が摂食できないおそれがあるので、パラクロレラ属藻類の粉砕物を、必要に応じて他の飼料と共に適度な大きさに成形して固形状とすることが好ましい。   The form of the feed containing the parachlorella algae is not particularly limited, and may be appropriately determined according to the type of aquatic organism to be fed, the degree of growth, and the like. For example, larvae of the genus Parachlorella can be pulverized into larvae or zooplankton for feed so that they can be easily consumed. On the other hand, in the case of fry, the pulverized material as described above may diffuse into the culture water and may not be ingested by the fry.Therefore, the pulverized material of the genus Parachlorella algae may be appropriately mixed with other feeds as necessary. It is preferable that the resin is molded into a size to be solid.

以下、本発明方法につき、工程毎に説明する。   Hereinafter, the method of the present invention will be described step by step.

1. パラクロレラ属藻類の培養工程
本工程では、パラクロレラ属藻類を培養する。本工程の実施は任意であるが、本発明方法で用いるパラクロレラ属藻類の生産の観点からは、本工程を実施してパラクロレラ属藻類の総量を増やすことが好ましい。
1. Culture process of Parachlorella algae In this step, Parachlorella algae are cultured. This step is optional, but from the viewpoint of the production of Parachlorella algae used in the method of the present invention, it is preferable to increase the total amount of Parachlorella algae by performing this step.

パラクロレラ属藻類の培養条件は、培養すべきパラクロレラ属藻類の至適条件に応じて適宜決定すればよい。例えば、上記のとおり、淡水培地やLB培地などの一般的な培地中、好気条件または嫌気条件下、室温〜30℃で培養すればよい。   The culture conditions of the parachlorella algae may be appropriately determined according to the optimal conditions of the parachlorella algae to be cultured. For example, as described above, culture may be performed in a general medium such as a freshwater medium or an LB medium under aerobic or anaerobic conditions at room temperature to 30 ° C.

パラクロレラ属藻類は、一般的には明条件で特によく増殖する。よって、パラクロレラ属藻類の総量を増やすという観点では、明条件で、特に独立栄養条件で培養することが好ましい。しかし、少なくとも従属栄養培養したパラクロレラ属藻類の水生生物用飼料としての優れた成長効果は確認されていることから、遮光し、従属栄養条件下で培養することも好ましい。その他、独立栄養条件でパラクロレラ属藻類を十分に増殖せしめた後に、従属栄養条件下で培養してもよい。   Parachlorella algae generally grow particularly well under light conditions. Therefore, from the viewpoint of increasing the total amount of algae of the genus Parachlorella, it is preferable to culture under light conditions, particularly under autotrophic conditions. However, since an excellent growth effect of at least heterotrophically cultured parachlorella algae as a feed for aquatic organisms has been confirmed, it is also preferable to culture under heterotrophic conditions with shading. In addition, after algae of the genus Parachlorella are grown sufficiently under autotrophic conditions, they may be cultured under heterotrophic conditions.

2. 処理工程
本工程では、パラクロレラ属藻類を処理する。本工程の実施は任意であるが、摂取効率や吸収効率の向上などのために実施することが好ましい。
2. Treatment Step In this step, algae of the genus Parachlorella are treated. This step is optional, but is preferably performed to improve the intake efficiency and the absorption efficiency.

具体的な処理としては、乾燥処理と破砕処理、および乾燥処理と破砕処理の組み合わせを挙げることができる。乾燥方法や乾燥の程度などは、上記に従えばよい。また、破砕処理としては、超音波やホモジェナイザーなどによる処理を挙げることができる。   Specific examples of the treatment include a drying treatment and a crushing treatment, and a combination of the drying treatment and the crushing treatment. The drying method and the degree of drying may be in accordance with the above. Examples of the crushing process include a process using an ultrasonic wave or a homogenizer.

3. 給餌工程
本工程では、パラクロレラ属藻類を有効成分として含む飼料を水生生物に施餌する。具体的な施餌条件は、上記のとおり、養殖対象である水生生物の種類や成長度合いなどに応じて適宜決定すればよい。
3. Feeding Step In this step, a feed containing parachlorella algae as an active ingredient is fed to aquatic organisms. As described above, specific feeding conditions may be determined as appropriate according to the type and growth degree of the aquatic organism to be cultured.

パラクロレラ属藻類を施餌する場合には、一般的な飼料を施餌する場合に比べ、より少ない量で水生生物を正常な、またはそれ以上の成長を促すことができ、給餌量を抑制することが可能である。また、一般的な飼料を同量給餌した場合に比べ、水生生物の個体数や総重量を顕著に増加させることができる。さらに、プランクトンの異常増殖に対する耐性が改善され、飼育系内でプランクトンが異常増殖しても、水生生物の致死率を顕著に低減することができる。   Feeding parachlorella algae can promote normal or higher growth of aquatic organisms in smaller amounts compared to feeding normal feed, thus reducing feed intake It is possible. Further, the number and total weight of aquatic organisms can be significantly increased as compared with the case where the same amount of general feed is fed. Furthermore, the plankton resistance to abnormal growth is improved, and even if plankton abnormally grows in the breeding system, the mortality of aquatic organisms can be significantly reduced.

上記の効果は、パラクロレラ属藻類の施餌期間が長い程より確実に得られる。よって、パラクロレラ属藻類の施餌期間としては、5日間以上が好ましく、1週間以上または2週間以上がより好ましく、3週間以上がさらに好ましい。施餌期間の上限は特に制限されず、養殖すべき水生生物によって異なり、例えば、養殖期間にわたってパラクロレラ属藻類を施餌してもよい。   The above effects can be obtained more reliably as the feeding period of the algae of the genus Parachlorella is longer. Therefore, the feeding period of the parachlorella algae is preferably 5 days or more, more preferably 1 week or 2 weeks or more, and even more preferably 3 weeks or more. The upper limit of the feeding period is not particularly limited, and varies depending on the aquatic organism to be cultivated. For example, parachlorella algae may be fed over the culturing period.

以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例によって制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも勿論可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。   Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to Examples. However, the present invention is not limited to the following Examples, and may be appropriately modified within a range that can conform to the purpose of the preceding and the following. It is, of course, possible to implement them, and all of them are included in the technical scope of the present invention.

実施例1: 赤潮耐性試験
渦鞭毛藻ヘテロカプサ・サーキュラリスカーマ(Heterocapsa circularisquama,以下、「ヘテロカプサ」と略記する)は、赤潮の原因となるプランクトンの中でも最も有害なものの一つであり、特に貝類のエラや外套膜に障害を与える毒素を産生し、養殖されているカキ、アコヤガイ、アサリ、サザエ、アワビなどにも深刻な悪影響を与えるものであり、ワムシに対しても致死作用を示すことが示されている。そこで本実験では、ヘテロカプサの異常増殖に対する耐性を試験した。
Example 1: Red tide resistance test Heterocapsa circularisquama (hereinafter abbreviated as "heterocapsa") is one of the most harmful planktons that cause the red tide, and particularly the shellfishes. It produces toxins that damage gills and mantles, has a serious adverse effect on cultured oysters, pearl oysters, clams, turtles and abalone, and has a lethal effect on rotifers. Have been. Therefore, in this experiment, the resistance of heterocapsa to abnormal growth was tested.

(1) ワムシの前培養
パラクロレラ・ケスレリKNK−A001株の細胞を超音波処理して分散させた後、オートクレーブ処理し、SWM−3培地(40mL)に、200万細胞/mLの割合で添加した。次いで、ワムシを100匹程度添加し、明暗12時間サイクルの白色蛍光下(200±5μmolm-2-1)、28℃の条件で1週間培養した。次いで、100〜200個体のワムシを新しいSWM−3培地(40mL)が入ったフラスコに移した。この作業を繰り返すことでワムシを3週間培養した。
(1) Pre-cultivation of rotifers After dispersing the cells of Parachlorella quesellii KNK-A001 strain by sonication, autoclaving, and adding to SWM-3 medium (40 mL) at a rate of 2 million cells / mL. did. Next, about 100 rotifers were added, and cultured for one week under the condition of 28 ° C. under white fluorescent light (200 ± 5 μmolm −2 S −1 ) in a 12-hour light / dark cycle. Next, 100-200 rotifers were transferred to flasks containing fresh SWM-3 medium (40 mL). By repeating this operation, rotifers were cultured for 3 weeks.

対照例として、KNK−A001株の代わりに、ワムシの一般的な飼育飼料であるナンノクロロプシス・オキュラータ(Nannochloropsis oculata)を用いた以外は上記と同様の条件でワムシを3週間培養した。   As a control example, rotifers were cultured for 3 weeks under the same conditions as above except that Nannochloropsis oculata, which is a common feed for rotifers, was used instead of the KNK-A001 strain.

(2) 赤潮耐性試験
SWM−3培地へ1×105cells/mLの割合でヘテロカプサを添加し、当該細胞懸濁液(500μL)を24穴細胞培養用プレートの各ウェルに添加した。上記(1)でKNK−A001株を1週間または3週間給餌培養したワムシ、或いは通常飼料で3週間給餌培養したワムシを10匹ずつ、それぞれ3ウェルに添加した。
(2) Red tide tolerance test Heterocapsa was added to SWM-3 medium at a rate of 1 × 10 5 cells / mL, and the cell suspension (500 μL) was added to each well of a 24-well cell culture plate. In the above (1), 10 rotifers fed and cultured with the KNK-A001 strain for 1 week or 3 weeks, or 10 days rotifer fed with normal feed for 3 weeks were added to 3 wells, respectively.

1時間毎に6時間まで各ウェルを顕微鏡にて観察し、ワムシの生存個体数を確認し、各群における生存個体割合を算出した。顕微鏡観察では、ワムシ個体の内部の胃、卵黄線、繊毛葉、足のいずれかの動きが観察されたものを生存個体とした。結果を図1に示す。   Each well was observed with a microscope every hour for up to 6 hours, the number of surviving rotifers was confirmed, and the proportion of surviving individuals in each group was calculated. In the microscopic observation, a surviving individual was observed in which any movement of the stomach, the yolk line, the ciliated leaves, and the foot inside the individual rotifer was observed. The results are shown in FIG.

図1に示す結果のとおり、通常飼料で飼育した場合、ヘテロカプサによりワムシは6時間で全滅してしまった。   As shown in the results shown in FIG. 1, when bred with normal feed, rotifers were completely exterminated by heterocapsa in 6 hours.

一方、飼料としてパラクロレラ・ケスレリKNK−A001株を使って1週間飼育した場合には、5〜6時間後における個体数はかなり減ってしまったものの、それまでの生存率は高く維持されていた。さらに、パラクロレラ・ケスレリKNK−A001株で3週間飼育した場合には、生存率は明らかに改善され、ヘテロカプサに対する耐性が顕著に高まっていることが分かった。   On the other hand, when bred for one week using Parachlorella quesellii KNK-A001 strain as feed, the number of individuals after 5 to 6 hours was considerably reduced, but the survival rate up to that time was maintained high. . Furthermore, it was found that when reared with Parachlorella quesellii KNK-A001 strain for 3 weeks, the survival rate was clearly improved, and the resistance to heterocapsa was significantly increased.

以上の結果から、飼料としてパラクロレラ属藻類を用いることにより、プランクトンの異常増殖に対する水生生物の耐性が改善し、その改善作用は、パラクロレラ属藻類を飼料として用いた飼育期間が長いほど高まることが実証された。   Based on the above results, the use of Parachlorella algae as feed improves the resistance of aquatic organisms to abnormal growth of plankton, and the improvement effect increases as the breeding period using Parachlorella algae as feed increases. Has been demonstrated.

Claims (3)

赤潮に対するワムシの耐性を改善するための飼料であって、
パラクロレラ・ケスレリ(Parachlorella kessleri)種藻類KNK−A001株(受託番号:FERM BP−22256)またはその変異体を有効成分として含み、
赤潮の原因が渦鞭毛藻ヘテロカプサ・サーキュラリスカーマ(Heterocapsa circularisquama)であることを特徴とするワムシの飼料
A feed for improving rotifer resistance to red tide,
Parachlorella kessleri seed alga KNK-A001 strain (Accession number: FERM BP-22256) or a mutant thereof as an active ingredient,
Feed rotifers the cause of red tide characterized in that it is a dinoflagellate Heterocapsa circular squirrel Kama (Heterocapsa circularisquama).
パラクロレラ・ケスレリ(Parachlorella kessleri)種藻類KNK−A001株(受託番号:FERM BP−22256)またはその変異体の18S rRNAの部分塩基配列が、下記(1)〜(3)から選択されるものである請求項1に記載のワムシの飼料
(1)配列番号1に相当する(1)の塩基配列;
(2)上記(1)に規定される塩基配列において、1以上、31以下の塩基が欠失、置換および/または付加された塩基配列;
(3)上記(1)に規定される塩基配列に対して98.5%以上の配列同一性を有する塩基配列。
The partial base sequence of 18S rRNA of Parachlorella kessleri species alga KNK-A001 strain (Accession number: FERM BP-22256) or a mutant thereof is selected from the following (1) to (3): A rotifer feed according to claim 1 wherein :
(1) the base sequence of (1) corresponding to SEQ ID NO: 1;
(2) a base sequence in which 1 to 31 bases have been deleted, substituted and / or added in the base sequence defined in the above (1);
(3) A base sequence having 98.5% or more sequence identity to the base sequence defined in (1).
パラクロレラ・ケスレリ(Parachlorella kessleri)種藻類KNK−A001株(受託番号:FERM BP−22256)またはその変異体の乾燥体を1.0質量%以上含む請求項1または2に記載のワムシの飼料Para Chlorella Kesureri (Parachlorella kessleri) species algal KNK-A001 strain (Accession Number: FERM BP-22256) or feed rotifers according to claim 1 or 2 including the drying of its variants 1.0 mass% or more.
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CN107593530A (en) * 2017-09-26 2018-01-19 西南大学 Neat mouth schizothoracin is cultivated and propagation method
JP7054088B2 (en) * 2017-11-29 2022-04-13 国立研究開発法人水産研究・教育機構 A method for producing seedlings of marine fish, which comprises feeding particles containing marine heterotrophic algae.
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