JP6590224B2

JP6590224B2 - 加齢黄斑変性症予防又は治療剤

Info

Publication number: JP6590224B2
Application number: JP2016558916A
Authority: JP
Inventors: 文之佐々木; 岳彦横溝
Original assignee: Juntendo University
Current assignee: Juntendo University
Priority date: 2014-11-11
Filing date: 2015-09-09
Publication date: 2019-10-16
Anticipated expiration: 2035-09-09
Also published as: JPWO2016076006A1; US20170333516A1; WO2016076006A1; US10849954B2

Description

本発明は、加齢黄斑変性症の予防又は治療剤に関する。

加齢黄斑変性症（age-related macular degeneration：ＡＭＤ）は、加齢に伴う進行性の慢性眼疾患である。網膜の中心部である黄斑に障害が生じ、視野の欠損やゆがみによって視覚低下を来す結果、患者のQOLを著しく低下させる。網膜は網膜神経節細胞や光を受容する視細胞、これらの下層の網膜色素上皮細胞（Retinal pigment epithelium: RPE）で構成されている。さらに網膜の外側は、ブルッフ膜（Bruch membrane）、脈絡膜（Choroid）および強膜（Sclera）で覆われている。ＡＭＤは脈絡膜からの異常な血管新生が網膜直下まで到達し血管内容物が漏出することで生じる滲出型（ＷｅｔＡＭＤ）と、血管新生は伴わずに神経細胞やＲＰＥの層構造が直接障害されることで生じる萎縮型（ＤｒｙＡＭＤ）の二つに分類され、日本人のＡＭＤの多くは滲出型である。

これまでの研究により、ＡＭＤは以下の機序によって発症すると考えられている。まず、加齢に伴って補体成分（Ｃ１ｑ）やアミロイドβなどの内因性リガンドが蓄積し、これらの過剰な刺激をＲＰＥが受けることでインフラマソームやＴＬＲ（Toll-like receptor）を介した炎症シグナルが活性化される。また、ＲＰＥは加齢に伴い酸化ストレスを受けることで細胞死（アポトーシス）するため、網膜−血管間のバリアが脆弱化する。次に、末梢血由来のマクロファージや樹状細胞、ＮＫＴ細胞といった免疫細胞が網膜下層まで浸潤する。さらに、これらの細胞集団が炎症環境下にて、炎症性サイトカイン（ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＩＬ−６）や血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）を放出することで血管新生を促す（非特許文献１）。

ＡＭＤの治療法には、ＶＥＧＦを標的とした抗ＶＥＧＦ薬、例えば、ラニビスマブ、ベバシズマブ、ペガタニブ、アフリベルセプト等が用いられている（非特許文献２）。

Ambati, J. et al., Nature Rev. Immunol. 2013, 13, 438-451 Syed, B.A. et al., Nature Rev. Drug Discov. 2012, 11, 827

しかしながら、従来のＡＭＤ治療剤には、（１）薬剤の眼内への繰り返し投与の必要性、及びそれに伴うリスク（感染症など）、（２）高額な医療費の負担、（３）副作用（眼圧上昇、視力低下、眼痛、網膜出血）などの問題点がある。
従って、本発明の課題は、ＶＥＧＦ標的薬でない新たなＡＭＤ予防又は治療剤を提供することにある。

そこで、本発明者は、ロイコトリエンＢ₄（ＬＴＢ₄）とその受容体であるＬＴＢ₄第一受容体（ＢＬＴ１、遺伝子名：ＬＴＢ４Ｒ（ヒト）、Ｌｔｂ４ｒｌ（マウス））のシグナルとＡＭＤとの関係を、ＢＬＴ１欠損マウスを用いて検討した。その結果、ＢＬＴ１欠損マウスは、野生型マウスと比較して、加齢に伴って亢進する血管新生を抑制すること、さらにＢＬＴ１拮抗剤又はＬＴＢ₄生合成阻害剤の眼内投与により血管新生が抑制できることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、ＢＬＴ１拮抗剤又はＬＴＢ₄生合成阻害剤を有効成分とする加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）予防又は治療剤を提供するものである。
また、本発明は、ＡＭＤの予防又は治療用のＢＬＴ１拮抗剤又はＬＴＢ₄生合成阻害剤を提供するものである。
また、本発明は、ＡＭＤ予防又は治療剤製造のためのＢＬＴ１拮抗剤又はＬＴＢ₄生合成阻害剤の使用を提供するものである。
さらに、本発明は、ＢＬＴ１拮抗剤又はＬＴＢ₄生合成阻害剤の有効量を投与することを特徴とするＡＭＤの予防又は治療方法を提供するものである。

本発明のＡＭＤ予防治療剤は、従来のＡＭＤ治療剤とはその作用機序を全く異にし、抗体医薬でないことから高額でない。

若年齢群（Ｙｏｕｎｇ）及び老齢郡（Ｏｌｄ）のＢＬＴ１野生型（ＢＬＴ１^+/+）およびＢＬＴ１欠損型（ＢＬＴ１^-/-）マウスの眼にレーザー照射後、脈絡層から網膜下層に向かって発生する血管新生(Ｃｈｏｒｏｉｄａl ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ：ＣＮＶ)の体積を測定した。加齢に伴って増加するＣＮＶが、ＢＬＴ１の欠損により抑制されることを示す図である。ＢＬＴ１拮抗剤（ＣＰ１０５６９６）及びＬＴＢ₄生合成阻害剤（Zileuton、Bestatin及びＭＫ８８６）によるＡＭＤ発症の抑制効果を示す図である。

本発明のＡＭＤ予防治療剤の有効成分は、ＢＬＴ１拮抗剤又はＬＴＢ₄生合成阻害剤である。

ＢＬＴ１は、ＬＴＢ₄が第一受容体であり、本発明者らが同定した受容体である（Yokomizo, Nature, 1997, 387, 620-624）。本発明者らは、ＢＬＴ１の病態生理学的な役割についても研究しており、接触性皮膚炎、気管支喘息、多発性硬化症などのモデルにおいて、ＢＬＴ１欠損マウスの病態が野生型マウスよりも軽くなることを明らかにした（Toda, Biochemie, 2010, 92, 682-691, Terawaki, J. Immunol. 2005, 175, 4217-4225, Kihara, BBRC, 2010, 394, 673-678）。
しかしながら、ＢＬＴ１と眼疾患との関係については全く報告されていない。

ＢＬＴ１拮抗剤としては、ＢＬＴ１に対するＬＴＢ₄の結合を阻害するものであれば特に制限されず、例えば、次の（１）〜（６）の群の化合物が挙げられる。

（式中、Ｒ¹は水素原子又はフェニル基を示し、Ｒ²は２−カルボキシ−４−トリフルオロメチル−フェニル基又は１−カルボキシ−シクロペンチル基を示す）

（式中、ｌ、ｍ及びｎはそれぞれ２〜６の整数を示し、Ｒ³はＣ₁−Ｃ₄アルキル基を示す）

（式中、ｐは２〜６の整数を示し、ｑは０〜３の整数を示し、Ｒ⁴及びＲ⁵はそれぞれＣ₁−Ｃ₄アルキル基又はシクロプロピルメチル基を示し、Ｒ⁶はアセチル基、Ｎ−メチルカルバモイル基又はチアゾリル基を示す）

（式中、Ｒ⁷は２Ｈ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル基を、Ｒ⁸は２−チエニル基を示し、ｌ、ｍ及びｎはそれぞれ２〜６の整数を示す）

（式中、ｒは２〜８の整数を示し、Ｒ⁹は３−カルボキシ−ベンジルチオ基、３−アミノ−フェニルスルフィニル基又は２，６−ジクロロフェニルチオ基を示し、Ｒ¹⁰は水素原子又はメトキシ基を示す）

（６）４−〔（３−[４−［２−（４−ヒドロキシフェニル）プロパン−２−イル］フェノキシメチル]フェニル）メトキシ〕ベンゼン−２−カルボキシイミダミド（ＢＩＬＬ２６０）、４−〔（３−[４−［２−（４−ヒドロキシフェニル）プロパン−２−イル］フェノキシメチル]フェニル）メトキシ〕ベンゼン−２−Ｎ−エトキシカルボニル−カルボキシイミダミド（amelubant）、モキシルバントマレート（moxilubant maleate）、７−（４−（１−ヒドロキシ−３Ｚ−ノネニル）フェニル）−５Ｓ−ヒドロキシ−６Ｚ−ヘプテン酸リチウム塩（ＳＬ４５６９４）、（５Ｓ）−６−〔６−［（１Ｅ，３Ｒ，５Ｚ）−３−ヒドロキシウンデカ−１，５−ジエニル］ピリジン−２−イル〕ヘキサン−１，５−ジオール（Ｕ７５３０２）、５−〔２−（２−カルボキシエチル）−３−［（Ｅ）−６−（４−メトキシフェニル）ヘキサ−５−エノキシ］フェノキシ〕ペンタン酸（ＯＮＯ−４０５７）、（Ｅ）−７−カルボキシ−３−（（６−（４−メトキシフェニル）−５−ヘキセニル）オキシ）−９−オキソ−９Ｈ−キサンチン−４−ペンタン酸（ＬＹ２１００７３）、２−〔３−〔３−［２−エチル−４−（フルオロフェニル）−５−ヒドロキシフェノキシ］プロポキシ〕−２−プロピルフェノキシ〕安息香酸（ｅｔａｌｏｃｉｂ）、１−（２−エチル−５−ヒドロキシ−４−〔[６−メチル−６−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−ヘプチル]オキシ〕−フェニル〕−エタノン（ＬＹ２５５２８３）、３−[〔３−（２−カルボキシエチル）−４−[〔（５Ｅ）−６−（４−メトキシフェニル）ヘキサ−５−エン−１−イル〕オキシ]フェニル〕カルボニル]安息香酸（ＬＹ２２３９８２）、４，６−ジフェニル−２−（３−（１Ｈ）テトラゾリル）ペンチルオキシ−ピリジン（ＣＨＥＭＢＬ９５７９９）、２，２−ジメチル−７−〔３−（３−フェニルプロピル）チオフェン−２−イル〕ヘプタン酸（ＲＰ６６１５３）。

ＢＬＴ１拮抗剤の具体例としては、次の化合物が挙げられる。
１−〔（３Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−３−〔（４−フェニルフェニル）メチル〕クロマン−７−イル〕シクロペンタン−１−カルボン酸（ＣＰ１０５６９６）、２−〔（３Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−３−（フェニルメチル）クロマン−７−イル〕−４−（トリフルオロメチル）安息香酸（ＣＰ１９５５４３）、６−〔２−（２−カルボキシエチル）−３−〔６−〔（４−オキソ−８−プロピル−２，３−ジヒドロクロメン−７−イル）オキシ〕ヘキシル〕フェノキシ〕ヘキサン酸（ＣＨＥＭＢＬ８６９００）、５−〔２−（２−カルボキシエチル）−３−〔６−〔（４−オキソ−８−プロピル−２，３−ジヒドロクロメン−７−イル）オキシ〕ヘキシル〕フェノキシ〕ペンタン酸（ＣＨＥＭＢＬ９５４５３）、３−〔（２Ｓ）−７−〔３−（２−シクロプロピルメチル）−３−メトキシ−４−（メチルカルバモイル）フェノキシ〕プロポキシ〕−８−プロピル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメン−２−イル〕プロパン酸（ＣＨＥＭＢＬ４１９９４８）、３−（７−[３−〔２−シクロプロピルメチル〕−３−メトキシ−４−（メチルカルバモイル）フェノキシ〕プロポキシ]−８−プロピル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメン−２−イル）プロパン酸（ＣＨＥＭＢＬ３２８４９２）、７−〔３−〔２−（シクロプロピルメチル）−３−メトキシ−４−（１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ〕プロポキシ〕−８−プロピル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメン−２−カルボン酸（ＳＣ５０６０５）、７−〔３−（４−アセチル−３−メトキシ−２−プロピルフェノキシ）プロポキシ〕−８−プロピルクロマン−２−カルボン酸（ＳＣ−４１９３０）、４−（３−[６−〔３−（２Ｈ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−５−（チオフェン−３−イル）フェノキシ〕ヘキシル]−２−（２−カルボキシエチル）フェノキシ）ブタン酸（ＲＯ５１０１５７６）、チコルバント（Ticolubant）、（Ｅ）−３−（（（（６−（２−カルボキシエテニル）−５−（（８−（４−メトキシフェニル）オクチル）オキシ）−２−ピリジニル）メチル）チオ）メチル）安息香酸（ＣＨＥＭＢＬ４２２５９８）、（Ｅ）−３−〔６−〔（３−アミノフェニル）スルフィニルメチル〕−３−〔８−（４−メトキシフェニル）オクトキシ〕ピリジン−２−イル〕プロプ−２−エン酸（ＳＢ２０１１４６）、４−〔（３−[４−［２−（４−ヒドロキシフェニル）プロパン−２−イル］フェノキシメチル]フェニル）メトキシ〕ベンゼン−２−カルボキシイミダミド（ＢＩＬＬ２６０）、４−〔（３−[４−［２−（４−ヒドロキシフェニル）プロパン−２−イル］フェノキシメチル]フェニル）メトキシ〕ベンゼン−２−Ｎ−エトキシカルボニル−カルボキシイミダミド（amelubant）、モキシルバントマレート（moxilubant maleate）、７−（４−（１−ヒドロキシ−３Ｚ−ノネニル）フェニル）−５Ｓ−ヒドロキシ−６Ｚ−ヘプテン酸リチウム塩（ＳＬ４５６９４）、（５Ｓ）−６−〔６−［（１Ｅ，３Ｒ，５Ｚ）−３−ヒドロキシウンデカ−１，５−ジエニル］ピリジン−２−イル〕ヘキサン−１，５−ジオール（Ｕ７５３０２）、５−〔２−（２−カルボキシエチル）−３−［（Ｅ）−６−（４−メトキシフェニル）ヘキサ−５−エノキシ］フェノキシ〕ペンタン酸（ＯＮＯ−４０５７）、（Ｅ）−７−カルボキシ−３−（（６−（４−メトキシフェニル）−５−ヘキセニル）オキシ）−９−オキソ−９Ｈ−キサンチン−４−ペンタン酸（ＬＹ２１００７３）、２−〔３−〔３−［２−エチル−４−（フルオロフェニル）−５−ヒドロキシフェノキシ］プロポキシ〕−２−プロピルフェノキシ〕安息香酸（ｅｔａｌｏｃｉｂ）、１−（２−エチル−５−ヒドロキシ−４−〔[６−メチル−６−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−ヘプチル]オキシ〕−フェニル〕−エタノン（ＬＹ２５５２８３）、３−[〔３−（２−カルボキシエチル）−４−[〔（５Ｅ）−６−（４−メトキシフェニル）ヘキサ−５−エン−１−イル〕オキシ]フェニル〕カルボニル]安息香酸（ＬＹ２２３９８２）、４，６−ジフェニル−２−（３−（１Ｈ）テトラゾリル）ペンチルオキシ−ピリジン（ＣＨＥＭＢＬ９５７９９）、２，２−ジメチル−７−〔３−（３−フェニルプロピル）チオフェン−２−イル〕ヘプタン酸（ＲＰ６６１５３）。

これらのＢＬＴ１拮抗剤として例示した化合物は、全て既知化合物であり、例えば特表平７−５０２５３６号公報、ＥＰ０７４３０６４Ａ１、国際公開第９５／３３７４２号、特表平１１−５０３７３７号公報、特開平５−２５１５９号公報等に記載の方法により製造できる。より具体的には、式（１）の化合物は特表平７−５０２５３６号、ＵＳＰ５５５２４３５等に記載されており、式（２）及び式（３）の化合物はＥＰ０７４３０６４Ａ１等に記載されており、式（６）の化合物は、特表平１１−５０３７３７号等に記載されており、その他の化合物は、特開平５−２５１５９号、国際公開第９５／３３７４２号等に記載されている。また、これらの化合物は、ＩＵＰＨＡＲＤＡＴＡＢＡＳＥ及びＰｕｂｃｈｅｍＯＰＥＮＣＨＥＭＩＳＲＹＤＡＴＡＢＡＳＥに記載されている。

これらのＢＬＴ１拮抗剤及びＬＴＢ₄生合成阻害剤は、ＡＭＤモデルの脈絡膜の血管新生を顕著に抑制し、ＡＭＤ予防又は治療薬として有用である。

ＬＴＢ₄生合成阻害剤としては、ＬＴＢ₄の生合成を阻害するものであればよいが、例えばＬＴＢ₄産生酵素阻害剤等が挙げられる。ＬＴＢ₄生合成阻害剤の例としては、Zileuton（Ｎ−〔１−（１−ベンゾチエン−２−イル）エチル〕−Ｎ−ヒドロキシウレア）、ベスタチン（Ｎ−〔（２Ｓ，３Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチリル〕−Ｌ−ロイシン）、ＭＫ−８８６（１−〔（４−クロロベンジル）メチル〕−３−〔（１，１−ジメチルエチル）チオ〕−α，α−ジメチル−５−（１−メチルエチル）−１Ｈ−インドール−２−プロパン酸）、カフェ酸、リコフェロン、３，４−ジヒドロキシフェニルエタノール、ＣＡＹ１０６４９（（Ｚ）−２−（４−クロロフェニル）−５−（４−メトキシベンジリデン）チアゾール−４（５Ｈ）−オン）、カプトプリル等が挙げられる。

本発明のＡＭＤ予防又は治療剤の投与形態としては、点眼剤、注射剤、経口剤（錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤）、軟膏剤、クリーム剤等が挙げられる。このうち、点眼剤が特に好ましい。これらの医薬組成物の形態とするには、薬学的に許容される担体とともに製剤化することができる。そのような担体としては、例えば、乳糖、ブドウ糖、Ｄ−マンニトール、澱粉、結晶セルロース、炭酸カルシウム、カオリン、デンプン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、エタノール、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム塩、ステアリン酸マグネシウム、タルク、アセチルセルロース、白糖、酸化チタン、安息香酸、パラオキシ安息香酸エステル、デヒドロ酢酸ナトリウム、アラビアゴム、トラガント、メチルセルロース、卵黄、界面活性剤、白糖、単シロップ、クエン酸、蒸留水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、マクロゴール、リン酸−水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、ブドウ糖、塩化ナトリウム、フェノール、チメロサール、パラオキシ安息香酸エステル、亜硫酸水素ナトリウム等があり、製剤の形に応じて、ＢＬＴ１拮抗剤と混合して使用される。

さらに、本発明の医薬組成物製剤中におけるＢＬＴ１拮抗剤又はＬＴＢ₄生合成阻害剤の含有量は、製剤の形によって大きく変動し、特に限定されるものではないが、通常は、組成物全量に対して０．０１〜１００重量％、好ましくは１〜１００重量％である。

本発明のＡＭＤ予防又は治療剤の投与量は、投与する患者の症状、年齢、投与方法によって異なるが、ＢＬＴ１拮抗剤又はＬＴＢ₄生合成阻害剤として０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日であるのが好ましい。

次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。

試験例１
Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドのＢＬＴ１野生型（ＢＬＴ１^+/+）マウスとＢＬＴ１欠損型（ＢＬＴ１^-/-）マウスを用いて、レーザー傷害後の脈絡層から発生する血管新生について解析した。
雄の若年齢（８〜１２週齢）および老齢（４４〜４８週齢）のＢＬＴ１^+/+マウスとＢＬＴ１^-/-マウスにレーザー（パワー：２００ｍＷ,露光時間：０．１０ｓ,波長：５３２ｎｍ）を４〜５スポット照射し、７日後に眼を単離、その後４％パラフォルムアルデヒド（ＰＦＡ）含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で固定し、角膜、レンズおよび網膜を除去し、再度４％ＰＦＡ／ＰＢＳで固定した。網膜色素上皮−脈絡層を含む眼組織を、５０％、７５％、１００％、７５％、５０％、２５％の順にメタノール含有ＰＢＳに浸して脱水、さらにブロッキング液（１％ウシ血清アルブミン、０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００含有リン酸緩衝生理食塩水）で４℃、１時間インキュベートした後、ＦＩＴＣで標識されたイソレクチンＢ４（ＩＢ４,７ｍｉｃｒｏｇｒａｍ／ｍＬ）で４℃、一晩染色した。これに切れ込みを入れてスライドガラス上で成形後、退色防止剤入のマウント剤で封入、カバーガラスを載せてフラットマウントを作製した。共焦点顕微鏡を用いて３次元でＩＢ４陽性の血管像を取り込み、各マウスで生じた新生血管の体積を測定した。
その結果、図１に示すように、若年齢マウスでは、ＢＬＴ１^+/+マウスとＢＬＴ１^-/-マウスの間に血管新生の差は認められなかった。しかし、老齢マウスでは、ＢＬＴ１^+/+マウスに比べてＢＬＴ１^-/-マウスで有意に血管新生が低下していた。
この結果から、加齢に伴って亢進する網膜の血管新生が、ＢＬＴ１^-/-マウスでは軽減されることがわかる。

試験例２
購入したＣ５７ＢＬ／６バックグラウンドの老齢マウス（日本エスエルシー、野生型、４０週齢以上、雄）にトーザー照射後、直ちにＤＭＳＯ（final ０．１％、ＰＢＳで希釈）またはＢＬＴ１拮抗剤であるＣＰ１０５６９６（式（１）中、Ｒ¹＝フェニル、Ｒ²＝１−カルボキシ−シクロペンチル基）並びにＬＴＢ₄産生関連酵素の阻害剤であるZileuton、BestatinおよびＭＫ８８６を各々のマウスに硝子体内投与した。試験例１と同様にレーザー照射７日後、脈絡層から生じる血管新生を評価した。
その結果、ＣＰ１０５６９６を濃度依存的に投与したマウスは、新生血管の体積が有意に抑制した。また、ＬＴＢ₄産生酵素阻害剤も同様に、新生血管の抑制効果が観察された。このことから、ＢＬＴ１拮抗剤及びＬＴＢ₄生合成阻害剤はＡＭＤの発症を抑える新規治療薬となることが示唆された。

Claims

べスタチンを有効成分とする加齢黄斑変性症予防又は治療剤。