JP6466911B2 - Ｃｃｌ２２及びｃｃｌ１７癌生物マーカー - Google Patents

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Description

本発明は、一般に癌の分野における診断、予後、層別化及びモニタリングの方法に関する。本発明の方法は、血液または被験体の血液成分において、ケモカイン胸腺及び活性化で調節されるケモカイン（ＴＡＲＣ）、別名ＣＣＬ１７と、マクロファージ由来ケモカイン（ＭＤＣ）、別名ＣＣＬ２２の比を決定することを含む。
癌は、全てのヒト死の約１３％の原因となり、治療の成功は、癌が診断される段階に関連している場合が多くい。したがって、全てのタイプの癌に罹患している患者対するより優れた診断及びリスク予測（予後）ツールに対する需要がある。
ケモカインは、とりわけ、癌、ウイルス感染、喘息及びアレルギー疾患を含む種々の疾患、並びに慢性関節リウマチ及びアテローム硬化症などの自己免疫病状における免疫性及び炎症性の応答において重要な役割を果たす。これらの小さな、分泌分子は、保存された４つのシステインモチーフによって特徴付けられる８−１４ｋＤａタンパク質の増えつつあるスーパーファミリーである。ケモカインの作用は、Ｇ結合タンパク質結合受容体のサブファミリーによって媒介される。ケモカインは、保存されたシステイン残基の位置に応じて４つの異なる群、ＣＸＣ、ＣＣ、ＣＸ３ＣまたはＣに分けられ、及び受容体命名法は、ケモカインのものに本質的に従う。したがって、ＣＣケモカインは、ＣＣケモカイン受容体に結合し、ＣＸＣリガンドは、ＣＸＣ受容体に結合し、及び同様になる。
ケモカイン受容体及びこれらのリガンドは、正常組織ホメオスタシスにおける、及び疾患における細胞の輸送を指揮し、細胞運動性、侵襲性及び生存に影響を及ぼす。癌では、一定のケモカイン及びこれらの受容体が腫瘍微小環境との間の細胞輸送のために重要である。たとえば、悪性及び間質細胞によって作製されるケモカインは、腫瘍関連白血球成分の程度及び表現型に、血管形成に、及び繊維芽細胞の生成に寄与し得る。これらの間質ケモカインは、また悪性細胞の生存を直接補助し得る。これは、悪性細胞がこれらの通常の対応物上で通常では見いだされない機能的ケモカイン受容体を増やすためである。これらの受容体は、転移活性に寄与し得るし；悪性細胞は、白血球様になり、転移の部位にてケモカイン勾配に応答することができる。
ケモカイン胸腺及び活性化で調節されるケモカイン（ＴＡＲＣ）、別名ＣＣＬ１７は、Ｔリンパ球に対して走化性活性を示すが、単球または顆粒球には示さない。それは、ケモカイン受容体ＣＣＲ４に特異的に結合することができる。正常組織において、ＣＣＬ１７は、血管及びリンパ内皮細胞によって発現されるが、マクロファージ、樹状細胞及びケラチノサイトによっても産生される。
マクロファージ由来ケモカイン（ＭＤＣ）、別名ＣＣＬ２２は、またケモカイン受容体ＣＣＲ４に特異的に結合することができる。ＣＣＬ２２は、一般に構成的に発現されるケモカインであると考えられるが、その発現は、一定の刺激によって調節され得るようにも見える。正常組織において、ＣＣＬ２２は、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｂ細胞及びＴ細胞の産物である。それは、上皮組織においても見いだされる。たとえば、腸管上皮は、ＣＣＬ２２を構成的に産生し、これはＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカインによってさらにアップレギュレートすることができる。
また、ＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２は、腫瘍の部位にて増加したレベルで見いだされる。免疫組織化学は、上皮腫瘍細胞にて、及び腫瘍間質を形成する細胞にて、たとえば子宮頸癌において、両方にてＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２の増加したレベルを示した（ＷＯ２００９０３７４５４）。研究により、ケモカインの作用がＧ結合タンパク質結合受容体のサブファミリーによって媒介されることを証明されており、これは、とりわけ受容体指定されたケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体４またはＣＣケモカイン受容体４（ＣＣＲ４）である。ＣＣＲ４のための特異的リガンドは、ＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２を含む。
ＣＣＲ４は、Ｔ細胞走化性の機能及び炎症部位への食作用性細胞の遊走においてとりわけ重要であると考えられる。ＣＣＲ４は、ヘルパーＴ細胞２型（Ｔｈ２）細胞及び調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞上に優先して発現されるが、その他の健康な細胞または組織上では限られた発現だけを生じる。
また、ＣＣＲ４発現は、腫瘍において検出されている。腫瘍は、細胞の不均一な混合物であり、とりわけ新生細胞、繊維芽細胞、内皮及び免疫寛容細胞で構成される。マクロファージは、腫瘍質量の５０％までであり得る。したがって、腫瘍は、免疫細胞を浸潤することを含み得るし、及びこれらの免疫細胞は、ＣＣＲ４を発現し得る。
また、ＣＣＲ４は、一定の新生物形成腫瘍細胞によって発現される。より具体的には、ＣＣＲ４は、腫瘍間質においてのみ見いだされ得るのではなく、及びこれは、上皮性腫瘍細胞、すなわち新生細胞によっても発現され得る。成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫細胞は、ＣＣＲ４を発現することが長く公知であった。より最近では、ＣＣＲ４は、一定の癌腫の新生物形成腫瘍細胞によって発現されることがまた見いだされていた（ＷＯ２００９／０３７４５４及びＷＯ２０１２／０７６８８３）。ＣＣＲ４発現は、発癌、特に子宮頚部、食道、腎臓、脳、乳房、卵巣、前立腺、胃及び膵臓の癌における初期のイベントであると考えられる。したがって、血液学的及び非血液学的癌細胞、たとえば固体腫瘍細胞は、ＣＣＲ４を発現し得る。
癌の診断、予後及び／またはモニタリングのための種々の方法が存在するが、癌の診断、予後、モニタリング及び同様のものを進歩させるさらなる方法に対する需要が残っている。
本発明は、癌患者におけるケモカインＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２の血漿レベルの解析を意味する。本発明者は、これらのケモカインのどちらかの血漿レベルが無進行生存の、または癌患者の全生存の指標であり得るどうかを決定することを記載する。実施例に示したように、ＣＣＬ１７もＣＣＬ２２も単独ではこの関係における有用な指標ではなかった。しかし、本発明者は、驚くべきことに、血漿におけるＣＣＬ１７対ＣＣＬ２２の比が無進行生存の、及び全生存の優れた指標であることを見いだした。解析した患者の群の中で、ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２のより高い比をもつものは、より低い比をもつものより無進行生存の減少した可能性及び全生存を有した。
本発明者は、癌患者が健康な被験体より高い血漿ＣＣＬ１７対ＣＣＬ２２の比を典型的には有することを見いだした。その上、この比は、図１３に示したように、腫瘍量で明らかな相関を示し、比と腫瘍重量の間には線形の関係がある。したがって、比は、腫瘍量の、より詳細には腫瘍量の程度の、及び抗癌治療、特に抗ＣＣＲ４治療に対する応答のマーカーである。
本発明者は、循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を使用して癌を診断し、癌の発症または進行をモニターし、予後を行い、治療に対する応答を予測し、患者を層別化して治療に対する決定を行い、及び抗癌治療に応答をモニターし得ることを決定した。
「循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比」は、都合よくは、本明細書において単に「比」と称される。
結果的に、一つの態様において、本発明は、癌における診断のマーカーとして循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を提供する。本発明は、被験体からの試料における循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を決定することを含む、癌を診断することに関連する情報を得る方法を提供する。より詳細には、本発明は、癌を診断することに関連する情報を得る方法であって、被験体からの試料における循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を決定すること、及び被験体が癌を有するかどうかに関して診断を行うことを含む方法を提供する。
方法は、前記試料における比を対照比または参照比と比較することを任意に含んでいてもよい。診断は、被験体のＣＣＬ１７対ＣＣＬ２２比が対照もしくは参照より高い、またはより低いかどうか、すなわちそれが増加するかどうかを決定することによって行ってもよい。
診断は、単に比のみに基づいて、または比及び１つもしくは複数のその他の診断のツールまたはマーカーに基づいて行ってもよい。したがって、代わりの観点から、癌を診断する方法が提供される。診断に関連する情報を得る方法と関連して本明細書において考察した方法工程及び特徴のいずれも、必要な変更を加えて診断の方法に適用し、及び逆もまた同じである。したがって、「診断の方法」をいう本明細書におけるいずれの記載も、「癌を診断することに関連する情報を得る方法」と交換可能であることが明示的に理解されるべきであり、及び逆もまた同じである。
さらなる態様において、本発明は、癌におけるモニタリングマーカーとして循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を提供する。本発明は、被験体からの試料における循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を決定することを含む、癌の発症または進行をモニターすることに関連する情報を得る方法を提供する。より詳細には、本発明は、癌の発症または進行をモニターすることに関連する情報を得る方法であって、被験体からの試料における循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を決定すること、及び癌が発症した、または進行したかどうかに関して決定を行うことを含む方法を提供する。
方法は、前記試料における比を対照または参照比と比較することを任意に含んでいてもよい。癌が発症した、または進行したかどうかに関する決定は、被験体のＣＣＬ１７対ＣＣＬ２２比が対照もしくは参照より高い、またはより低いかどうか、すなわちそれが増加するかどうかを決定することによって行ってもよい。
癌が発症した、または進行したかどうかに関する決定は、単に比のみに基づいて、または比及び１つもしくは複数のその他の診断のツールまたはマーカーに基づいて行ってもよい。したがって、代わりの観点から、癌の発症または進行をモニターする方法が提供される。モニタリングに関連する情報を得る方法と関連して本明細書において考察した方法工程及び特徴のいずれも、必要な変更を加えて診断の方法に適用し、及び逆もまた同じである。したがって、「モニタリングの方法」をいう本明細書におけるいずれの記載も、「モニタリングに関連する情報を得る方法」と交換可能であることが明示的に理解されるべきであり、及び逆もまた同じである。
さらなる態様において、本発明は、癌における予測的なマーカーとして循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を提供する。本発明は、被験体からの試料における循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を決定することを含む、治療に応答する癌の可能性を予測することに関連する情報を得る方法を提供する。より詳細には、本発明は、治療に応答する癌の可能性を予測することに関連する情報を得る方法であって、被験体から試料における循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を決定すること、及び治療に応答する癌の可能性を予測することを含む方法を提供する。
方法は、前記試料における比を対照または参照比と比較することを任意に含んでいてもよい。治療に応答する癌の可能性の予測は、被験体のＣＣＬ１７対ＣＣＬ２２比が対照もしくは参照より高い、またはより低いかどうか、すなわちそれが増加するか、または減少されるどうかを決定することによって行ってもよい。
治療に応答する癌の可能性の予測は、単に比のみに基づいて、または比及び１つもしくは複数のその他の診断のツールまたはマーカーに基づいて行ってもよい。したがって、代わりの観点から、治療に応答する癌の可能性を予測する方法が提供される。予測に関連する情報を得る方法と関連して本明細書において考察した方法工程及び特徴のいずれも、必要な変更を加えて治療に応答する癌の可能性を予測する方法に適用し、及び逆もまた同じである。したがって、「予測する方法」をいう本明細書におけるいずれの記載も、「予測することに関連する情報を得る方法」と交換可能であることが明示的に理解されるべきであり、及び逆もまた同じである。
さらなる態様において、本発明は、癌における層別化マーカーとして循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を提供する。本発明は、癌を有する被験体の層別化に関連する情報を、好ましくは治療に対する彼らの需要に応じて得る方法であって、被験体からの試料における循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を決定することを含む方法を提供する。より詳細には、本発明は、癌患者の層別化に関連する情報を、好ましくは治療に対する彼らの需要に応じて得る方法であって、たとえば治療に対する彼らの需要に応じて、被験体からの試料における循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を決定すること、及び前記被験体を層別化することを含む方法を提供する。
方法は、前記試料における比を対照または参照比と比較することを任意に含んでいてもよい。層別化は、被験体のＣＣＬ１７対ＣＣＬ２２比が対照もしくは参照より高い、またはより低いかどうか、すなわちそれが増加するか、または減少されるどうかを決定することによって行ってもよい。
層別化は、単に比のみに基づいて、または比及び１つもしくは複数のその他の診断のツールまたはマーカーに基づいて行ってもよい。したがって、代わりの観点から、彼らが治療に応答する可能性に従った被験体の層別化の方法が提供される。層別化に関連する情報を得る方法と関連して本明細書において考察した方法工程及び特徴のいずれも、必要な変更を加えて層別化の方法に適用し、及び逆もまた同じである。したがって、「層別化の方法」をいう本明細書におけるいずれの記載も、「層別化に関連する情報を得る方法」と交換可能であることが明示的に理解されるべきであり、及び逆もまた同じである。
さらなる態様において、本発明は、予後のマーカーとして循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を提供する。本発明は、癌予後に関連する情報を得る方法であって、被験体からの試料における循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を決定することを含む方法を提供する。より詳細には、本発明は、癌予後に関連する情報を得る方法であって、被験体からの試料における循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を決定すること、及び癌予後を行うことを含む方法を提供する。
方法は、前記試料における比を対照または参照比と比較することを任意に含んでいてもよい。予後は、被験体のＣＣＬ１７対ＣＣＬ２２比が対照もしくは参照より高い、またはより低いかどうか、すなわちそれが増加するか、または減少されるどうかを決定することによって行ってもよい。
予後は、単に比のみに基づいて、または比及び１つもしくは複数のその他の診断のツールまたはマーカーに基づいて行ってもよい。したがって、代わりの観点から、予後の方法が提供される。予後に関連する情報を得る方法と関連して本明細書において考察した方法工程及び特徴のいずれも、必要な変更を加えて予後の方法に適用し、及び逆もまた同じである。したがって、「予後の方法」をいう本明細書におけるいずれの記載も、「予後に関連する情報を得る方法」と交換可能であることが明示的に理解されるべきであり、及び逆もまた同じである。
さらなる態様において、本発明は、癌における治療応答のマーカーとして循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を提供する。本発明は、治療に癌の応答を評価して／モニターすることに関連する情報を得る方法であって、被験体からの試料における循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を決定することを含む方法を提供する。より詳細には、本発明は、治療に癌の応答を治療に癌の応答を評価して／モニターすることに関連する情報を得る方法であって、被験体からの試料における循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を決定すること、及び評価すること／モニターすることを含む方法を提供する。
方法は、前記試料における比を対照または参照比と比較することを任意に含んでいてもよい。治療に対する癌の応答の評価／モニタリングは、被験体のＣＣＬ１７対ＣＣＬ２２比が対照もしくは参照より高い、またはより低いかどうか、すなわちそれが増加するか、または減少されるどうかを決定することによって行ってもよい。
治療に対する癌の応答の評価／モニタリングは、単に比のみに基づいて、または比及び１つもしくは複数のその他の診断のツールまたはマーカーに基づいて行ってもよい。したがって、代わりの観点から、治療に対する癌の応答を評価する／モニターする方法が提供される。治療応答の評価／モニタリングに関連する情報を得る方法と関連して本明細書において考察した方法工程及び特徴のいずれも、必要な変更を加えて癌の応答を評価して／モニターする方法に適用し、及び逆もまた同じである。したがって、「評価する／モニターする方法」をいう本明細書におけるいずれの記載も、「評価する／モニターする方法に関連する情報を得る方法」と交換可能であることが明示的に理解されるべきであり、及び逆もまた同じである。
療法の間または療法の後に、本発明のモニタリング方法は、癌の進行をモニターして療法の有効性を評価するために、または療法の進行をモニターするために使用することができ、すなわち能動的な療法のモニタリングのために使用することができる。このような場合、連続的な（周期的な）前記比における変化についての比の決定により、癌療法が有効だったか否か、またはその範囲、癌が被験体において再発生する、または進行するか否か、及びさらには癌の可能性が高い臨床結果（予後）により、それが再発生する、または進行するはずであることを評価できるだろう。
同様に、本発明の方法は、療法に、たとえば無処置患者における疾患の進行をモニターすることに供されなかった患者の能動的な監視に使用することができる。さらに連続測定により、癌が進行しているか否か、またはその程度を評価することができるだろうし、したがって、たとえば治療的介入が必要か、または望ましいかどうかに関してより合理的な決定を行うことができる。
このようなモニタリングは、癌の初期の、及び理想的には前臨床的指標を得るために、健康な個体、たとえば癌を発症するリスクがあると考えられる個体に対して実施することさえできる。
当業者であれば、本明細書に提供された方法のいずれかを本明細書に提供されたその他の方法の１つまたは複数と、及び／または１つまたは複数のさらなる方法と組み合わせてもよいことを認識するだろう。
たとえば、本明細書において開示した方法の２つ以上、たとえば３つ以上、４つ以上または５つ以上の組み合わせである方法が提供される。本明細書において開示した診断、予後、予測、モニタリング及び／または層別化方法の２つ以上を任意の組み合わせにおいて組み合わせてもよい。方法を組み合わせるときに、それぞれの方法は、工程といわれ得る。本発明の方法に関して本明細書に提供した詳細は、これらの工程に必要な変更を加えて適用される。
したがって、癌の発症及び経過を評価する方法であって、前記方法は、癌を診断する工程、癌の進行をモニターする工程、治療に対する癌応答の可能性を予測する工程、層別化の工程、予後の工程及び治療に対する応答をモニターする工程から選択される少なくとも２つの工程を含む方法が提供される。任意に、前記方法は、これらの工程の少なくとも３、４、５または６つを含む。任意に、これらの工程のいずれも、２回以上実施されてもよい。たとえば、癌の進行をモニターする工程は、治療前及び後の両方に実施されてもよい。
任意に、本明細書に提供された方法のいずれも、被験体または患者が抗癌治療を受けるべきかどうかを決定する工程をまた含んでいてもよく、これは好ましくは抗ＣＣＲ４治療である。特に、方法は、被験体が癌を有すること、癌が発症していること、癌が進行していること、予後が悪いこと、癌が抗癌治療に応答する可能性が高いこと、及び／または癌が治療に応答していることの決定を含む場合、方法は、被験体または患者が抗癌治療を受けるべきことを決定する工程を含んでいてもよく、これは好ましくは抗ＣＣＲ４治療である。
任意に、また、本明細書に提供された方法のいずれも、治療を受けている、または受けた被験体について、治療が変更されるべき、またはやめるべきかどうかを決定する工程を含んでいてもよい。たとえば、方法は、治療用量及び／または頻度を増加する、減少するべきであることを決定する工程を含んでいてもよい。特に、方法が、治療に応答して比が増加される、時間とともに増加してきた、または減少していなかった（または十分に減少しない）という決定を含む場合、方法は、治療用量を及び／または頻度は増加するべきであると決定する工程を含んでいてもよい。方法が、治療に応答して比が増加されない、時間とともに減少されてきた、または減少したという決定を含む場合、方法は、治療用量及び／または頻度を減少するべきであると、または治療をやめてもよいと決定する工程を含んでいてもよい。
方法は、特定の治療が別の治療で置換されるべきであること、たとえば１つの薬物を別の薬物で置換されるべきであることを決定する工程を含んでいてもよい。特に、方法が、治療に応答して比が増加される、時間とともに増加してきた、または減少しなかった（または十分に減少しない）という決定を含む場合、方法は、治療がもう一つの治療によって置換されるべきであると決定する工程を含んでいてもよい。方法が、治療に応答して比が増加されない、時間とともに減少してきた、または減少したという決定を含む場合、方法は、治療がもう一つの治療によって置換されるべきでないと決定する工程を含んでいてもよい。
任意に、本明細書に提供された方法のいずれも、前記被験体または患者に抗癌治療を投与する工程をまた含んでいてもよく、これは、好ましくは抗ＣＣＲ４治療である。次いで、方法は、診断及び治療、モニタリング及び治療；予後及び治療；予測及び治療；または層別化及び治療の方法といわれ得る。
任意に、本明細書に提供された方法のいずれを任意のその他の公知の方法、特に癌のための公知の診断の、予後の、予測の、及び／またはモニタリングの方法と組み合わせて使用してもよい。
本発明の方法の１つの利点は、これらが、血液試料などの容易に得られる試料で迅速かつ容易に実施することができる生物マーカー比についての簡易検査を介して診断、予後、予測、層別化及び／またはモニタリングできるということである。
さらなる態様において、本発明は、本明細書において記述した方法のいずれかにおける使用のためのキットを提供する。また、これらの方法のいずれかにおいて使用されるときのキットが提供される。また、本明細書において記述した方法のいずれかにおける前記キットの使用が提供される。
前記キットは、ＣＣＬ１７のレベルを決定するために適切な薬剤及びＣＣＬ２２のレベルを決定するために適切な薬剤を含む。このような薬剤は、それぞれＣＣＬ１７またはＣＣＬ２２に対する特異的結合親和性を典型的には有するだろう。好ましい薬剤は、それぞれＣＣＬ１７またはＣＣＬ２２を対象とする抗体である。キットは、また検出手段、たとえばそれぞれＣＣＬ１７またはＣＣＬ２２のレベルを決定するために適切な薬剤を検出する手段を含んでいてもよい。特に、前記薬剤は、検出可能部分、たとえば蛍光部分でラベルされてもよい。キットは、またサンプリング手段を含んでいてもよい。
ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比は、これが増加される、または高いと、癌を示す。比が高いほど、被験体が癌を有する可能性がより高い。
したがって、診断の方法は、ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が増加される、または高いことを決定すること、及び前記決定の結果として、被験体が癌を有する、または癌を有する可能性が高まいという診断する工程またはＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が増加されない、または低いことを決定すること、及び前記決定の結果として、被験体が癌を有しない、または癌を有する可能性が減少されたという診断する工程を含んでいてもよい。
癌の発症（発症）をモニターする方法は、ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が増加される、または高いことを決定すること、及び前記決定の結果として、癌が発症したこと、または癌が発症していた可能性が高いことを決定する、または診断する工程またはＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が増加されない、または低いことを決定すること、及び前記決定の結果として、癌が発症していないこと、または癌が発症していた可能性が減少したことを決定する、または診断する工程を含んでいてもよい。
ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比は、これが増加される、または高いと、癌の進行を示す。比が高いほど、癌が進行した可能性がより高い。代わりの観点では、比が高いほど、癌がより進行している。
したがって、癌の進行をモニターする方法は、ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が増加される、または高いことを決定すること、及び前記決定の結果として、癌が進行している、または進行していた可能性が高いことを決定する、または診断する工程またはＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が増加されない、または低いことを決定すること、及び前記決定の結果として、癌が進行していない、または進行していない可能性が高いことを決定する、または診断する工程を含んでいてもよい。
ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比は、これが増加される、または高いと、癌患者が有害な予後を有する可能性が高まったことを示す。したがって、予後の方法は、ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が増加される、または高いことを決定すること、及び前記決定の結果として、前記患者が有害な予後を有する、または有害な予後の可能性が高いことを決定する工程またはＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が増加されない、または低いことを決定すること、及び前記決定の結果として、前記患者が有害な予後を有しない、または有害な予後の可能性が減少したことを決定する工程を含んでいてもよい。
ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が高いほど、増加され、すなわち、比が高いほど、癌患者が有害な予後を有する可能性がより大きい。したがって、予後の方法は、ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が増加される程度を決定すること、及び前記決定の結果として癌患者が有害な予後を有する可能性を決定する工程を含んでいてもよい。
ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比は、これが増加される、または高いと、癌が治療に応答するだろう可能性が高まったことを示す。比が高いほど、癌が治療に応答するだろう可能性がより高い。
したがって、予測の方法は、ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が増加される、または高いことを決定すること、及び前記決定の結果として、前記癌が治療に応答するだろう、または治療に応答する可能性が高いことを決定する工程またはＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が増加されない、または低いことを決定すること、及び前記決定の結果として、前記癌が治療に応答しないだろう、または治療に応答する可能性が減少したことを決定する工程を含んでいてもよい。
したがって、層別化の方法は、ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が１つまたは複数の癌患者において増加される、または高く、及び１つまたは複数の癌患者において増加されない、または低いことを決定する工程、及び前記決定の結果として、及び増加した、または高い比を有する前記患者を、治療を必要とする、から利益を得る、及び／またはに応答する可能性が高い第１の群に層別化する工程、並びに増加していない、または低い比を有する前記患者を、治療を必要とする、から利益を得る、及び／またはに応答する可能性が低い第２の群に層別化する工程を含んでいてもよい。
ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比は、治療後にこれが減少され、または低いほど、癌が前記治療に応答した可能性が増加したことを示す。比が低いほど、癌が前記治療に応答した可能性がより高い。
したがって、治療に対する応答を評価する／モニターする方法は、ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が減少される、または低いことを決定すること、及び前記決定の結果として、癌が前記治療に応答した、または前記治療に応答した可能性が高まったことを決定する工程またはＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が減少されない、または高いことを決定すること、及び前記決定の結果として、癌が前記治療に応答しなかった、または前記治療に応答しなかった可能性が高まったことを決定する工程を含んでいてもよい。
代わりの観点では、治療後にＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比が低下される程度は、癌が前記治療に応答した程度を示す。比における減少が大きいほど、治療に対する応答は、より大きい。したがって、治療に対する応答を評価する／モニターする方法は、ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比がどの程度に減少されるかを決定すること、及び前記決定の結果として、癌が前記治療に対してどの程度応答したかを決定する工程を含んでいてもよい。
本明細書において記述する、比における「増大」または「増加した」もしくは「より高い」比、は、比を対照または参照と比較するときに、比の任意の測定可能な増大または上昇を含む。
本明細書において記述する、比における「減少」または「減少した」もしくは「より低い」比は、比を対照または参照と比較するときに、比の任意の測定可能な減少を含む。
「高い」比は、対照または参照より高い比であり、及び「低い」比は、対照または参照より低い比である。
上で述べたように、いくつかの実施形態において、本発明の方法のいずれも、比を対照比とまたは参照比と比較することを任意に含んでいてもよい。
用語「対照」比は、本明細書に使用され、健康な、すなわち非癌性の対照の比をいう。いくつかの実施形態において、対照は、「自己」対照、すなわち以前の時点にて前記（試験）被験体について決定された比でもよい。いくつかの実施形態において、対照比は、試験被検体以外の１つまたは複数の被験体に基づく。
用語「参照」比は、本明細書に使用され、癌性の対照の比をいう。参照は、「自己」参照、すなわち以前の時点にて前記被験体について決定された比でもよい。いくつかの実施形態において、参照比は、試験被検体以外の１つまたは複数の被験体に基づく。
典型的には、対照比は、健康な被験体の適切なセットにおける個体比を決定すること、及び前記比の中央値または平均を決定することによって決定されるだろう。あるいは、健康な被験体において決定される単一の比を対照として使用してもよい。健康な被験体は、以前の時点にて試験被検体でもよいし、この場合、対照は「自己」対照を意味し得るし、またはこれは、異なる被験体、すなわち試験被検体でなくてもよい。
典型的には、参照比は、癌性の被験体の適切なセットにおける個体比を決定すること、及び前記比の中央値または平均を決定することによって決定されるだろう。しかし、特に治療に対する応答を癌の進行をモニターする、または評価する／モニターする状況において、参照比は、好ましくは、「自己」参照、すなわち以前の時点にて前記試験被検体について決定された比である。
比較のための対照比または参照比は、適切な対照／参照被験体または対照／参照被験体のセットを試験することに由来してもよいが、本発明の方法は、このような対照／参照被験体または対照／参照被験体のセットでの能動的試験を実施することを必ずしも含むというわけではないことに留意すべきである。その代わりに、これらは、対照／参照被験体からまたは対照／参照被験体のセットから以前に決定された対照／参照比との比較を含んでいてもよい。
本発明の方法における使用のための適切な対照被験体または試料は、当業者によって容易に同定されるだろう。このような被験体は、「正常な」被験体ともいわれるだろう。適切な対照被験体の例は、健康な被験体、たとえば癌に罹患していない個体を含むだろう。好ましくは、これらは、また癌の任意の形態の歴史を有しない。好ましくは、これらは、また他のいかなる同時疾患も有しない。好ましくは、対照被験体は、任意の薬物療法の通常のユーザーでない。
本発明の方法における使用のための適切な参照被験体または試料は、当業者によって容易に同定されるだろう。このような被験体は、癌を有する個体を含むだろう。好ましくは、参照被験体は、試験被検体と同じ癌の形態を有し、そして試験被検体が腎臓の癌を有する場合、参照被験体は好ましくは、腎臓癌を有する被験体であり、一方膵臓癌を有する試験被検体については、参照被験体は、好ましくは膵臓癌及びその他を有する被験体である。好ましくは、参照被験体は、また癌の同等の段階を有し、すなわち早期段階癌を有する試験被検体については、参照被験体は、理想的には早期段階癌を有するべきであり、一方後期段階癌を有する試験被検体については、参照被験体は、理想的には後期段階癌を有するべきである。好ましくは、参照被験体の癌は、転移していない。当業者は、試験被検体及び対照または参照被験体がその他の基準について一致させるべきであるどうかを容易に決定することができる。たとえば、任意に、対照または参照被験体は、以下基準の１つまたは複数に関して試験被検体と一致してもよい：年齢、レース及び／または性交。
好ましくは、問題の比は、適切な手段によって前記患者から得られる、またはそれから除去される試験試料を解析することによって決定される。したがって、決定は、好ましくはインビトロにおいて実施される。
本明細書における考察から明らかであろうように、本発明の方法は、単一の、または１回限りの被験体に関する測定または比の決定を含むことができ、またはたとえば癌の進行の進行中のモニタリングについて、長期にわたって複数の測定または決定を含んでいてもよい。
対照または参照比は、別々の図または範囲でもよい。
上で述べたように、本発明の方法は、比が増減されるかどうかに関する決定を含んでいてもよい。これは、相対的または絶対的な用語で表することができる。
関連用語において、対照または参照と比較したときに、それが予め定められた閾値、すなわちカットオフより上にあるときに、比は増加する。比がカットオフより上に上がる場合、患者は、比の増加を有するとみなされる。たとえば、その最も単純なものでは、評価が対照または参照との比較に基づいて行われる場合、増加した比は、対照または参照比より少なくとも１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６、２．８、３．０、３．２、３．４、３．６、３．８、４．０、４．２、４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７．０、７．２、７．４、７．６、７．８、８．０、８．２、８．４、８．６、８．８、９．０、９．２、９．４、９．６、９．８、１０、１１、１２、１３，または１４倍高くてもよい。
その他の用語において、「増加した」についてのカットオフは、対照比より少なくとも１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６、２．８、３．０、３．２、３．４、３．６、３．８、４．０、４．２、４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７．０、７．２、７．４、７．６、７．８、８．０、８．２、８．４、８．６、８．８、９．０、９．２、９．４、９．６、９．８、１０、１１、１２、１３，または１４倍高いと定義することができる。
あるいは、「増加した」比についてのカットオフは、対照または参照試料における平均比または中央比から３、２．５、２．４、２．３、２．２、２．１、２、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１、０．８、０．５または０．３の標準偏差の下限によって定義することができる。平均、中央値及び標準偏差は、標準的な統計分析によって決定される。
決定は、以下により詳細に記載したように、比の絶対値に基づいて行うことができる。比が決定される試料のタイプにより、どの絶対値が対照または参照として使用されるべきかについて決定するだろうことが、認識されなければならない。特に、図１２〜図１６を比較することにより分かるように、血清試料の解析は、血漿試料の解析より高い比を生じると予想し得る。たとえば、マウスにおいて、血清比は、血漿比より一桁高い大きさであるように見えるだろう。以下の値は、血漿試料で得られたデータに基づいて提供してあるので、これらの値は、比を血漿試料で決定するときに使用するために適切な値の例である。
対照比は、たとえば、約０．００１−０．４またはこの範囲内に入る任意の値でもよい。好ましくは、対照比は、約０．００１−０．３５、約０．００１−０．３、約０．００１−０．２５または約０．００１−０．２、たとえば０．１９以下、０．１８以下、０．１７以下、０．１６以下、０．１５以下、０．１４以下、０．１３以下、０．１２以下、０．１１以下、０．１０以下、０．０９以下、０．０８以下、０．０７以下、０．０６以下、０．０５以下、０．０４以下または０．０３以下である。
参照比は、たとえば約０．６以下、しかし０．０５を上回ってもよい。したがって、範囲または絶対値として表したときに、参照比は、たとえば約０．６、０．５５、０．５、０．４９、０．４８、０．４６、０．４４、０．４２、０．４、０．３８、０．３７、０．３６、０．３５、０．３４、０．３３、０．３２、０．３１、０．３、０．２９、０．２８、０．２７、０．２６、０．２５、０．２４、０．２３、０．２２、０．２１． ０．２、０．１９、０．１８、０．１７、０．１６、０．１５、０．１４、０．１３、０．１２、０．１１または０．１の上限及び約０．０５、０．０８、０．１、０．１２、０．１４、０．１６、０．１８、０．２、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、０．２５、０．２６、０．２７、０．２８、０．２９または０．３の下限を有してもよい。これらの上限のいずれも、これらのより下限のいずれかと組み合わせてもよく、ただし、下限は、選択された上限より低い。
腎臓癌、特に進行した腎臓癌については、参照比は、好ましくは約０．５−０．２、たとえば０．４５−０．２５または０．４−０．２８、好ましくは約０．３２−０．３５である。卵巣癌、好ましくはＨＧＳ卵巣癌については、参照比は、好ましくは約０．２−０．０８、たとえば約０．１９、０．１８、０．１７、０．１６、０．１５、０．１４、０．１３、０．１２、０．１１または０．１の上限及び約０．０８の下限を有する範囲である。膵臓癌については、参照比は、好ましくは約０．３６−０．１１、たとえば約０．３６、０．３５、０．３４、０．３３、０．３２、０．３１、０．３、０．２９、０．２８、０．２７、０．２６、０．２５、０．２４、０．２３、０．２２、０．２１、０．２、０．１９、０．１８、０．１７、０．１６、０．１５、０．１４または０．１３の上限及び約０．１１の下限を有する範囲である。
したがって、これらの値は、カットオフのレベルを提供し得るし、すなわちそれがこれらの値を上回る場合、比は増加される。上に記載された絶対値の全ては、血漿試料における比の解析に基づいて提供される。血清試料を解析するときに、より高い絶対値が適切だろうと考えられる。たとえば、血清試料については、上で提供される値のそれぞれは、１０、９、８、７、６、５、４、３または２を乗じてもよい。
本明細書における考察から明らかなように、本発明の方法のいくつかがその他の方法と同じ対照または参照比を使用し得る一方で、すべての対照または参照が、あらゆる方法に適切であり得るわけではない。当業者は、どんな対照または参照比が使用されるべきかについて決定することができるだろうが、しかし、以下は特に適切な対照及び参照の実施例である。
診断の方法については、対照比、任意に自己対照比を使用することは、特に適切である。
発症をモニターする方法については、対照比、好ましくは自己対照比を使用することは、特に適切である。
癌の進行をモニターする方法については、代わりに参照比を使用してもよいが、自己参照比を使用することは、特に適切であり、または対照比を使用してもよく、それは自己対照でもよい。
予後の方法については、代わりに対照比を使用してもよいが、参照比を使用することは、特に適切である。
予測または層別化の方法については、代わりに対照比を使用してもよいが、参照比を使用することは、特に適切である。
治療に対する応答を評価して／モニターする方法については、代わりに対照比を使用してもよいが、参照比、好ましくは自己参照比を使用することは、特に適切である。
当業者は、比の解析が使用される対照または参照に依存するだろうことを認識するだろう。したがって、予後の方法において、比は、典型的には参照比と比較されるだろうし、及び結果的に参照より高い比は、悪い／さらに悪い予後を示し、及び比より低い比は、良い／より良い予後を示す。比を代わりに対照比と比較してもよく、この場合、より低い、同等の、類似の、または対照比と比較して小さな因子によって増加するのみである比は、良い／より良い予後を示し、及び対照比と比較して大きな因子によって増加する比は、悪い／さらに悪い予後を示す。
予測または層別化の方法については、比は、参照比と典型的には比較されるだろうし、及び結果的に、参照より高い比は、治療に応答する可能性が高い癌を示し、及び参照より低い比は、治療に応答する可能性が低い癌を示す。比をあるいは対照比と比較してもよく、この場合、より低い、同等の、類似の、または対照比と比較して小さな因子によって増加するのみである比は、治療に応答しそうにない、またはする可能性が低い癌を示し、及び対照比と比較して大きな因子によって増加するのみである比は、治療に応答する可能性が高い、またはより可能性が高い癌を示す。
治療に対する応答を評価する／モニターする方法については、比は、参照比と典型的には比較されるだろうし、及び結果的に、参照より低い比は、治療に応答した癌を示す。比をあるいは対照比と比較してもよく、この場合、より低い、同等の、類似の、または対照比と比較して小さな因子によって増加するのみである比は、治療に（よく）応答した癌を示し、及び対照比と比較して大きな因子によって増加するのみである比は、治療にあまりよく応答しなかった癌を示す。
任意に、本発明の方法、特に癌の進行をモニターする方法または治療に対する応答を評価する／モニターする方法のいずれも、周期的に癌患者から循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比を決定することを含んでもよい。
「周期的に」は、決定が２つ以上の、たとえば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９または１０の異なる時点にてされることを意味する。決定は、規則的な、または不規則な間隔でされてもよい。間隔は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０日、週、月もしくは年でもよい。任意の与えられた時点にて決定される比を１つまたは複数の以前の値と比較して、比における増加または減少が生じたかどうかを決定してもよい。
以前の時点と比較した比の増加は、進行していた癌を示し；時間とともに比における有意な変化なしは、癌進行の欠如を示し；及び以前の時点と比較した比における減少は、退行していた癌を示す。
したがって、癌の進行をモニターする方法は、第１の時点にて比が後の（第２の、またはその後の）時点にての比より低い場合に癌が進行したと決定する工程、または第１の時点にて比が後の（第２の、またはその後の）時点にての比と実質的に同じである場合に癌が進行しなかった、すなわち無進行であると決定する工程、または第１の時点にて比が後の（第２の、またはその後の）時点にての比より高い場合に癌が退行したと決定する工程を含んでいてもよい。
本明細書に使用される用語「診断」または「診断すること」は、患者が疾患に罹患するか否かの決定をいう。
本明細書に使用される用語「モニタリング」は、任意の変化が起こる／起こったかどうかの決定をいう。典型的には、任意の変化が時間とともに、すなわち以前の時点から起こったかどうかが決定される。たとえば、変化は、癌などの疾患の発症及び／または進行でもよい。
本明細書に使用される用語「予後」は、疾患の重症度または起こり得る経過のリスク予測及び疾患と関連する臨床的結果をいう。したがって、本明細書に使用される用語「予後の方法」は、当業者が、所与の結果が生じるだろうという確率をそれによって見積もる、及び／または決定することができる方法をいう。予後が関連する結果は、罹患率及び／または死亡率でもよい。特に、予後は、疾患が進行することなく患者が疾患を抱えて生きる時間の長さである「無進行生存」（ＰＦＳ）と関連し得る。したがって、ＰＦＳは、療法の開始からの癌進行の日までの時間または療法の終わりから癌進行の日までの時間であり得る。
「進行すること」または「進行」は、疾患がさらに悪化すること、すなわち重症度が増加すること、たとえば腫瘍量が増加すること、たとえば腫瘍がサイズ及び／または重量において増加し、癌が悪性またはより悪性になること、及び／または転移が発症する、または転移の発病率及び／または割合が増加することを意味する。
予後は、全生存に関連してもよい。「全生存」（ＯＳ）は、患者が死に至る前に疾患を抱えて生きる時間の長さを意味する。たとえば、全生存は、癌の診断、治療開始または治療完了から死までの時間と定義してもよい。全生存は、「全生存率」として典型的には表現され、それは、人々が癌などの疾患と診断された、または治療を開始された、もしくは治療を完了された後の一定の期間なお生きている研究または治療群における人々の割合である。たとえば、全生存率は、５年生存率として明示されてもよく、それは人々の診断もしくは治療の開始または完了の５年後に生きている研究または治療群における人々の割合である。
癌の特定のタイプを有する患者の平均（たとえば中央値、平均または最頻値）ＯＳ及びＰＦＳに関する統計的な情報は、当業者に利用可能である。したがって、被験体がそのような平均と比較して増加した、または減少したＯＳまたはＰＦＳを有する、または有する可能性が高いかどうかの決定がなされ得る。
ＰＦＳ及び／または全生存の可能性及び／または長さが減少したという決定は、予後が悪い、または有害であることを意味する。用語「悪い」及び「有害な」は、本明細書において交換可能に使用される。「悪い」予後は、患者のための参照予後より悪い予後として定義されてもよいので、また、それは「より悪い」予後としていわれてもよく、及び「良い」または「非有害な」予後は、患者のための参照予後より良い予後として定義されてもよいので、また、それは「より良い」予後としていわれてもよい。当業者は、「参照予後」については、癌、好ましくは癌の同じ段階の同じタイプを有する患者が使用されるべきであることを認識するだろう。「参照予後」は、任意のその他の適切な方法によって決定される平均的予後または典型的な予後でもよい。
有害な、またはより悪い予後は、より短い全生存またはより短い全生存及び／またはより短いＰＦＳの高まった可能性もしくはより短いＰＦＳの高まった可能性として定義されてもよい。
「退行すること」または「退行」によって、疾患が改善すること、すなわち重症度が減少すること、たとえば腫瘍量が減少する、たとえば腫瘍がサイズ及び／または重量において減少する、または検出不可能になる、癌がより悪性にならない、及び／または転移の発病率または割合が減少することを意味する。
治療に対する応答は、進行、退行、進行性及び退行性要素の組み合わせまたは任意の進行または退行の非存在を含んでいてもよい。したがって、治療に対する応答は、腫瘍サイズ、腫瘍重量、腫瘍の数、悪性及び転移から選択される１つまたは複数の基準における変化を含んでいてもよい。どの変化が進行または退行を構成するかを本明細書において他で考察してある。
「発症」は、疾患の発症を意味する。
本明細書に使用される用語「予測」または「予測すること」は、特定の結果の可能性を決定することをいう。
本明細書に使用される用語「層別化」または「層別化すること」は、特定された基準に基づいた部分母集団への集団の分裂をいう。より詳細には、それは、特定の基準に基づいた少なくとも２つの群への被験体または患者のコホートの分裂をいい、それは本発明の状況において比を含む、またはそれからなる。
本明細書に使用される用語「治療」または「治療すること」は、被験体に医学的な利益をもたらすことに狙いを定める一連の行動をいう。治療は、予防的でも、または治療的でもよく；好ましくは、それは治療的である。
「予防的」は、治療が防止的、すなわちそれが疾患の発症の前に適用されることを意味する。「治療的」は、治療が疾患の発症の後に適用されることを意味する。
治療は、好ましくは抗癌治療である。本明細書において「抗癌治療」の参照は、癌を治療することを目指す任意の治療を含む。治療は、外科手術、放射線及び／または薬物を含み得る。薬物治療は、好まれる。これは、化学療法を含み得る。
いくつかの実施形態において、抗癌治療は、抗ＣＣＲ４治療である。したがって、本明細書において「治療」の任意の参照は、好ましくは抗ＣＣＲ４治療であることが理解されるはずである。
「抗ＣＣＲ４」治療は、ＣＣＲ４のレベル及び／または活性を直接または間接的に低下させる、または阻害する任意の治療を意味する。阻害は、部分的でも、または完全でもよい。好ましくは、抗ＣＣＲ４治療は、ＣＣＲ４の活性を直接阻害し、最も好ましくはＣＣＲ４と直接相互作用することによる。したがって、治療は、そのリガンド、特にＣＣＲ４がＣＣＬ１７及び／またはＣＣＬ２２の１つまたは複数によって活性化されることを防ぐ薬剤を含み得る。好ましくは、ＣＣＲ４がそのリガンドのいずれかによって活性化されることを防ぐ。たとえば、薬剤は、ＣＣＲ４がそのリガンド、好ましくはＣＣＬ１７及び／またはＣＣＬ２２の１つまたは複数を結合することを阻止し得るし、これにより結合が通常生じるだろう任意の活性化を防ぎ得る。
たとえば、薬剤は、ＣＣＲ４に特異的に結合する抗体またはＣＣＲ４アンタゴニストである化学分子でもよい。化学的ＣＣＲ４アンタゴニストの実施例は、抗ＣＣＲ４活性を有する有機化学分子を含み、それの例は、スルホンアミド化合物、ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン誘導体、２−アミノチアゾール誘導体、２−アミノキナゾリン及びピペラジンを含む。適切な抗体及び化学的アンタゴニストは、当該技術分野において周知であり、及び実施例はＷＯ２０１０／１４２９５２、ＷＯ０４１０８７１７及びＷＯ０２０９４２６４においてとりわけ開示される。
いくつかの実施形態において、抗ＣＣＲ４治療は、ＣＣＲ４のリガンド、好ましくはＣＣＬ１７及び／またはＣＣＬ２２と直接相互作用することによってＣＣＲ４活性に影響を及ぼす。したがって、治療は、特異的にＣＣＬ１７またはＣＣＬ２２に結合し、及び好ましくは前記ケモカインがＣＣＲ４を活性化することを阻止する薬剤を含んでいてもよい。たとえば、薬剤は、ＣＣＬ１７またはＣＣＬ２２に特異的に結合する抗体またはＣＣＬ１７またはＣＣＬ２２アンタゴニストである化学分子でもよい。
循環しているＣＣＬ１７対循環しているＣＣＬ２２の比は、ＣＣＬ２２のレベルによってＣＣＬ１７のレベルを分けることによって決定してもよい。これらのレベルは、前もって決定されてもよかったが、本発明の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は、循環しているＣＣＬ１７のレベル及び循環しているＣＣＬ２２のレベルを測定する工程を含んでいてもよい。測定をインビボで実施してもよいが、好ましくはそれを患者から提供された試料においてインビトロで実施する。
好ましくは、ＣＣＬ１７タンパク質対ＣＣＬ２２タンパク質の比は決定されるので、これらのケモカインはタンパク質レベルにて測定される。このような測定は、多数の当該技術において周知であり、及び記述された任意の適切な手段によってされてもよい。たとえば、抗体を使用してもよい。ＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２に特異的抗体は、それぞれ当該技術分野において周知であり、及びたとえば、ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ（４３５０ Ｌａｓｓｉｔｅｒ ａｔ Ｎｏｒｔｈ Ｈｉｌｌｓ Ａｖｅｎｕｅ， Ｓｕｉｔｅ ２５０， Ｒａｌｅｉｇｈ， ＮＣ ２７６０９）またはＬｉｆｅＳｐａｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｉｎｃ．（２４０１ Ｆｏｕｒｔｈ Ａｖｅｎｕｅ， Ｓｕｉｔｅ ９００， Ｓｅａｔｔｌｅ， ＷＡ ９８１２１）から市販されている。
ＣＣＬ１７及び／またはＣＣＬ２２のタンパク質レベルを検出するために使用され得る方法の実施例は、ＲＩＡ及び／またはＥＬＩＳＡが通常は選択方法であり、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または蛍光免疫測定法、免疫沈降法及び免疫ブロット法または酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）などの免疫測定法を含む。
ＥＬＩＳＡ及びＲＩＡに基づいた方法は両方とも当該技術において標準的であり、及び当業者に周知だろう方法によって実施することができる。このような方法は、検出されるケモカインに対する抗体の使用を一般に含み、これにより試料とインキュベートされて試料中のケモカインの検出が可能になる。任意の適切な抗体を使用することができ、及びこれらの実施例は、本明細書において他で、及び従来技術において記述される。たとえば、ＣＣＬ１７またはＣＣＬ２２に対する適切な抗体またはそれらの特定のエピトープを認識する抗体は、標準的な技術によって、たとえば実験動物の免疫化によって調製することができる。同じ抗体は、ラベリング、その他に関して抗体に対してされる適切な修飾で、任意の免疫測定法（たとえばＲＩＡに基づいたアッセイまたはＥＬＩＳＡに基づいたアッセイ）においてケモカインを検出するために一般に使用することができる。
ＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２のレベルを決定するための特に適切なアッセイは、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（１６０１ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ ２０８５０−３１７３， ＵＳＡ）から利用可能である免疫測定システムである。
Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（商標）（ＭＳＤ）のマルチアレイ技術は、電気化学発光検出を利用する生物マーカーの測定を可能にする多重免疫測定システムである。ＭＳＤアッセイにおいて、分析物に特異的な捕捉抗体は、９６ウェル炭素電極プレート表面のそれぞれのウェルにおいてアレイに被覆されている。検出システムは、ＭＵＬＴＩ−ＡＲＲＡＹ（商標）及びＭＵＬＴＩ−ＳＰＯＴ（商標）プレートの電極表面にて開始される電気化学的刺激に応じて光を発するＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ（商標）標識を使用する。電気刺激は、光である出力信号から分離されて、最小のバックグラウンドでアッセイを生成する。ＭＳＤ標識は、生体分子に都合よく抱合させることができ、安定であり、及び非放射性である。加えて、電極表面の近くの標識のみが検出され、非洗浄したアッセイを有効にする。このアッセイのさらなる詳細は、企業の文献において見いだされ得る。もちろん、当業者は、その他の供給元によって提供される適切な同等の免疫測定法を使用してもよい。
本発明の方法において、ＣＣＬ１７及び／またはＣＣＬ２２の量は、試料及び抗体を抗体が結合すること、及び前記試料における前記ケモカインの量を決定することを可能にする状態に供して、検出されるケモカインに結合する抗体で前記患者からの血液または血液成分試料に接触することによって決定され得る。
本発明の方法は、これらのケモカインの「循環している」レベルに関する。用語「循環している」は、循環、すなわち血流を示すために本明細書に使用され、それはこれらのケモカインの局所的なレベルと対比され得る。特に、本発明は、腫瘍または腫瘍微小環境内のＣＣＬ１７またはＣＣＬ２２のレベルに関係しない。
これらのケモカインの循環しているレベルは、血液または血液成分もしくは血漿または血清などの派生物の適切な試料において決定されてもよい。血漿は、特に好まれる。したがって、本明細書において「循環している」レベルへの任意の言及は、好ましくは血液、血漿または血清におけるレベルを意味すると理解されるはずである。血漿（またはいくつかのその他の血液成分）が解析される試料である場合、次いでアッセイの前に、血漿（またはその他の血液成分）は、当該技術において周知であり、及び記述される方法によって血液試料から分離されることができる。
本発明の方法は、患者から試料を得る工程、たとえば血液試料を得る工程を任意にさらに含んでいてもよい。しかし、好ましく、方法は、提供された試料において実施される。
本発明の方法は、癌に関する。「癌」は、新形成、すなわち細胞の異常成長または分裂によって特徴付けられる状態のための全体語である。したがって、癌性の細胞は、「新生物形成」としていわれてもよい。癌細胞のコレクションは、たいてい「腫瘍」といわれ、及び用語「腫瘍」及び「癌」は交換可能に使用され得る。
癌は、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫及び膠腫などの任意の癌でもよい。好ましくは、癌は、癌腫、肉腫及び／または膠腫、最も好ましくは癌腫である。癌は、良性でも、または悪性でもよい。好ましくは、それは悪性である。
適切な癌の実施例は、限定されないが、腎臓癌、卵巣癌、膵臓癌、食道癌、子宮頸癌、子宮癌、膀胱癌、胆嚢癌、肝癌、頭頸部癌、扁平上皮細胞癌、胃腸癌、乳がん、前立腺癌、精巣癌、肺癌、非小細胞性肺癌、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、複数の骨髄腫、白血病、成人Ｔ細胞白血病、喉頭癌、脳癌、神経芽腫、胃がん、子宮体癌及びメラノーマを含む。腎臓（腎臓の）、卵巣及び膵性癌は、好ましく、腎臓癌が特に好ましい。いくつかの実施形態において、癌は、結腸直腸癌を除外する。
一定の癌は、対応する健康な組織と実質的に同じレベルにて、または増加したレベルのいずれかにてＣＣＲ４を発現する。これは、それがＣＣＲ４を発現する新生細胞であることを意味する。いくつかの実施形態において、癌は、ＣＣＲ４を発現する癌、好ましくは健康な組織と比較して増加したレベルである。上で述べたように、新生細胞に加えて、腫瘍は、浸潤性細胞を含んでいてもよく、それはＣＣＲ４を発現し得るので、いくつかの実施形態において、癌は、ＣＣＲ４発現非新生細胞を含む腫瘍として存在する。腫瘍間質は、ＣＣＲ４発現細胞を含んでいてもよいので、いくつかの実施形態において、癌は、ＣＣＲ４発現間質細胞を含む腫瘍として存在する。いくつかの実施形態において、上の１つまたは複数を組み合わせてもよいので、腫瘍は、ＣＣＲ４発現新生細胞、ＣＣＲ４発現非新生細胞を含んでいてもよく、及び／またはＣＣＲ４発現間質細胞を含む間質を有してもよい。
本発明の方法は、癌を有する被験体または癌を有しない被験体において実施してもよい。被験体は、癌を有するのではないかと疑われてもよく、または被験体は、癌を有するのではないかと疑われなくてもよい。被験体は、癌を有すると確認されてもよい。被験体は、癌に関して症候性でも、または無症候性でもよい。医学的な注意を受けている被験体は、「患者」としていわれてもよい。したがって、本明細書において「被験体」への任意の参照は、患者に参照を含むように理解されるはずである。
たとえば、方法は、スクリーニングするプログラムの一部として実施されてもよい。また、方法は、異なる方法の結果を確認する、たとえば被験体が癌を有するかどうか、癌が発症したかどうか、癌が進行したかどうか、予後が良い、または悪いかどうか、被験体が治療を受けるべきかどうか、癌が治療に応答する可能性が高いかどうか、及び／または癌が治療に応答したかどうかを確認するために実施されてもよい。
本明細書において記述した本発明の方法は、癌に罹患しているかもしれない任意の被験体において実施することができる。方法は、哺乳類、たとえばヒト、サルなどのその他の霊長類、研究室哺乳類、たとえばマウス、ラット、ウサギ、モルモット、家畜哺乳類、たとえばウマ、ウシ、ヒツジ、ブタまたは飼育されたペット、たとえばネコ、イヌにおいて一般に実施される。好ましい実施形態において、哺乳類は、ヒトである。しかし、その他の実施形態において、比を任意の適切な動物モデルにおける癌マーカーとして使用することができる。
本発明は、現在以下の非限定的な図、表及び実施例を参照することよってより詳細に記述されるだろう。
表：
表１は、健康な対照と比較した腎臓の癌患者及び膵臓癌患者の血漿試料におけるＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比に関して発明者によって生成されるデータを示す。患者群及び正常（対照）群すべては、男性及び女性の被験体を含む。
表２は、健康な対照と比較した高悪性度の漿液の（ＨＧＳ）卵巣癌患者の血漿試料におけるＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比に関して発明者によって生成されるデータを示す。卵巣癌は、女性にのみ影響を及ぼすので、患者群及び正常（対照）群は女性の被験体のみを含む。
実施例１の結果を示す棒グラフ。ＣＣＲ４ ｍＲＮＡを腎臓の癌生検からの試料におけるリアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定し、及び正常な腎臓からの試料と比較した。ＣＣＲ４ ｍＲＮＡ発現レベルは、ハウスキーピング遺伝子（１８Ｓ遺伝子）の発現レベルと比べて示してある。 実施例１の結果を示す棒グラフ。ＣＣＲ４及びそのリガンドＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２のレベルをヒト患者からの腎臓の癌生検の組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）における免疫組織化学（ＩＨＣ）によって解析した。それぞれの生検は、０−染色なし、１−弱い染色、２−ＣＣＲ４、ＣＣＬ１７またはＣＣＬ２２それぞれについて強力な染色を記録した。 実施例１の結果を示す棒グラフ。ヒト及びマウスＣＣＬ１７の異なる濃度に対する７８６−Ｏ（ヒト腎癌株化細胞）及びＲＥＮＣＡ（マウスの腎臓の癌株化細胞）応答をそれぞれ、１６時間を超えるＴｒａｎｓｗｅｌｌに基づいた遊走アッセイにおいて解析した。細胞数／フィールド（４０×倍率）を示す。３件の実験の平均を示す。それぞれ、アステリスクは、*＝ｐ≦０．０５、**＝ｐ≦０．０１及び***＝ｐ≦０．００１のｐ値を表す。 実施例１の結果を示す棒グラフ。ヒト及びマウスＣＣＬ２２の異なる濃度に対する７８６−Ｏ及びＲＥＮＣＡ株化細胞応答をそれぞれ、１６時間を超えるＴｒａｎｓｗｅｌｌに基づいた遊走アッセイにおいて解析した。細胞数／フィールド（４０×倍率）を示す。３件の実験の平均を示す。それぞれ、アステリスクは、*＝ｐ≦０．０５、**＝ｐ≦０．０１及び***＝ｐ≦０．００１のｐ値を表す。 実施例２の結果を示すグラフ。腎臓の癌患者における血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の平均比は、正常な（健康な）対照における血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の平均比より有意に高い。アステリスクは、***＝ｐ≦０．００１のｐ値を表す。 実施例２の結果を示すグラフ。パートＡ）は、無進行生存（ＰＦＳ）を示し、及びパートＢ）は、数日間における時間に対してプロットされる全生存を示す。グラフは、高ＣＣＬ１７を伴う患者についての結果を、低ＣＣＬ１７を伴う患者についての結果と比較する。ｙ軸は、数日間における時間を示す。 実施例２の結果を示すグラフ。パートＡ）は、無進行生存を示し、及びパートＢ）は、数日間における時間に対してプロットされる全生存を示す。グラフは、高ＣＣＬ２２を伴う患者についての結果を、低ＣＣＬ２２を伴う患者についての結果と比較する。ｙ軸は、数日間における時間を示す。 実施例２の結果を示すグラフ。パートＡ）は、無進行生存を示し、及びパートＢ）は、数日間における時間に対してプロットされる全生存を示す。グラフは、高ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比を伴う患者についての結果を低ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比を伴う患者についての結果と比較する。ｙ軸は、数日間における時間を示す。 実施例３の結果を示すグラフ。ＨＧＳ卵巣癌患者（全て女性）における血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の比は、正常な（健康な）女性の対照における血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の平均比より有意に高い。 実施例３の結果を示すグラフ。膵臓癌患者における血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の比は、正常な（健康な）対照における血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の平均比より有意に高い。 実施例４（Ａ）の結果を示す棒グラフ。それは、合計２３のアイソタイプ対照抗体処理されたマウス及び２１のＡｆｆｉ−５処理されたマウスでの３件の独立した実験からエンドポイントにての平均腫瘍重量を示す。抗ＣＣＲ４抗体（Ａｆｆｉ−５）−処理された動物（Ｔ）の腫瘍重量は、対照処理された動物（Ｃ）の腫瘍重量より有意に低かった。***ｐ＜０．０００１。 実施例４の結果を示すグラフ。抗ＣＣＲ４抗体（Ａｆｆｉ−５）−処理された動物（Ｔ）における血清ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の比は、対照処理された動物（Ｃ）における血清ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の平均比より有意に低かった。また、これらの腫瘍量を反映して、対照処理されたマウスが有意に増加した比を有するのと比較された、健康な動物（Ｈ）血清における平均比に示した。 実施例４の結果を示すグラフ。血清ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の比は、マウスにおける腫瘍重量と強く相関する。 ＡＺＤ２０９８、ＣＣＲ４の化学的アンタゴニストの化学式。 実施例５の結果を示す棒グラフ。それは、合計２７の対照−媒体処理されたマウス及び２８のＡＺＤ２０９８処理されたマウスでの４件の独立した実験からエンドポイントにての平均腫瘍重量を示す。ＡＺＤ２０９８処理された動物（Ｔ）の腫瘍重量は、対照処理された動物（Ｃ）の腫瘍重量より著しく低かった。***ｐ＝０．００１。 実施例５の結果を示すグラフ。ＡＺＤ２０９８処理された動物（Ｔ）における血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の平均比は、対照処理された動物（Ｃ）における血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の平均比より有意に低かった。
実施例１−腎臓の癌生検及び株化細胞における生物マーカー研究
ＣＣＲ４ ｍＲＮＡを腎臓の癌生検におけるリアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定し、及び正常な腎臓と比較した。正常な、及び悪性ヒト腎生検からのｍＲＮＡのこの解析は、正常な腎臓試料においてでなく、悪性腎臓におけるＣＣＲ４ ｍＲＮＡの発現を明らかにした（図１）。ヒトの腎臓の癌におけるＣＣＲ４発現をさらに調査するために、我々は、免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用してＣＣＲ４及びそのリガンドについて腎臓の癌組織マイクロアレイ、ＴＭＡを染色した。ＴＭＡは、乳頭状の腎臓の癌として分類されたいくつかの生検で、主に明らかな細胞腎癌（７５％）からなった。
ＣＣＲ４を我々のＴＭＡにおいて進行した腎細胞癌（ＲＣＣ）、明らかな細胞及び明らかでない細胞を伴う５７人の患者からの１７３の悪性腫瘍コアのうちの１５３からの悪性細胞において検出した（図２）。また、我々の正の対照として役立つヒト脾臓は、ＣＣＲ４を発現した（図示せず）。負の対照組織は、胎盤であり、及びこれはＣＣＲ４を発現しなかった（図示せず）。また、浸潤性白血球は、生検においてＣＣＲ４を発現した。また、ＣＣＲ４リガンドＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２は、腎臓の癌生検において見いだされた（図２）。正常な腎臓組織生検において、我々は、ＣＣＲ４及びＣＣＬ１７のための非常に弱い発現及びＣＣＬ２２の弱い発現を見いだした（図示せず）。これらの研究は、ＣＣＲ４及びそのリガンドが悪性腎臓の組織において異常に発現されるという以前の報告を確認する。
ＲＣＣ生検においてＣＣＲ４及びそのリガンドを検出して、次いで我々は、これらのマーカーが腎臓の癌から確立される株化細胞において存在するかどうかを調査した。細胞表面ＣＣＲ４並びに細胞内ＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２を、ヒトの明らかな細胞腎細胞癌株化細胞７８６−Ｏ及びＡ４９８において、及びマウスＲＣＣ株化細胞ＲＥＮＣＡにおいて検出した（データを示さず）。
我々は、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）遊走アッセイにおいて、ＣＣＲ４がＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２を使用してこれらのＲＣＣ株化細胞において遊走を刺激するように機能することを確認した。図３及び４は、それぞれ７８６−Ｏ及びＲＥＮＣＡ細胞における組換えヒトまたはマウスＣＣＬ１７及び ＣＣＬ２２の３つの濃度に対するケモカインに特有であるベルシェープ型用量応答曲線を示す。これは、ＲＣＣ細胞の表面上で発現される細胞表面ＣＣＲ４が機能することを示し、及びリガンドのピコグラム量の構成的産生にもかかわらず、まだ、株化細胞は外部の勾配に応答することができた。
実施例２ 腎臓の癌患者の血漿解析
我々は、４８人のＲＣＣ患者からの血漿におけるＣＣＲ４リガンドＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２のレベルを測定し、及びこれらを年齢がマッチした個体からの２６の正常な血漿試料と比較した。ＣＣＬ２２及びＣＣＬ１７血漿レベルは、製造業者の説明書に従ってヒト炎症性ケモカインＫ１５００１Ｃ−２についてＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（商標）（ＭＳＤ）システム多重アッセイを利用して決定した。
以下は、アッセイシステムの簡単な概要である：ＭＳＤは、空間的に異なる点 ＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２を含むケモカインのための抗体上の捕捉抗体でプレコートされたプレートを提供する。使用者は、１つまたは複数のインキュベーション期間の経過にわたって、標識された検出抗体−電気化学発光化合物、ＭＳＤ ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ標識で標識された抗ＣＣＬ１７及び抗ＣＣＬ２２を含む試料及び溶液を添加する。作用している電極表面上に固定された捕捉抗体に結合する試料における分析物；結合した分析物による標識された検出用抗体の補充により、サンドイッチが完成する。使用者は、電気化学発光のために適切な化学的環境を提供し、及びプレートを解析のためのＭＳＤ ＳＥＣＴＯＲ（登録商標）機器にロードするＭＳＤリードバッファを添加する。ＳＥＣＴＯＲ機器内部で、プレート電極に対する印加電圧は、電極表面に結合した標識に光を放射させる。機器は、放射光の強度を測定して、ＣＣＬ１７またはＣＣＬ２２の定量的測定を提供する。
循環しているＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２レベルは、それぞれ患者において７５６及び１８９３ｐｇ／ｍｌ及び正常な対照において３７５及び６８０５ｐｇ／ｍｌの平均であった。したがって、ＣＣＬ１７レベルは、健康な対照においてより癌患者の血漿において高かったが、ＣＣＬ２２のレベルは、健康な対照においてより癌患者の血漿において低かった。
我々は、血漿におけるＣＣＬ１７対ＣＣＬ２２の比が癌の状態、特に腫瘍量の統計的に有意な指標であることを驚くべきことに見いだした。図５に示したように、分析された正常な、すなわち非癌性の、対照の被験体の大多数は、非常に低い血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比を有したのに対して、分析された腎臓の癌患者の大多数が高い血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比を有した。特に、平均比は、腎臓の癌患者対健康な対照において有意により高かった（図５）。したがって、増加した比（健康な対照と比較して）は、癌の存在を示す。
また、我々は、これらのマーカーと生存との間の関係を調査した。血漿ＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２レベルを測定して、及び患者をこれらのレベルが中央値より上である場合に「高」レベルを有する群、及びこれらのレベルが中央値より下である場合に「低」レベルを有する群に分類した。図６及び７に示したように、単独のＣＣＬ１７とＣＣＬ２２血漿レベルのどちらも、無進行生存または全生存の有用なマーカーでなかった。しかし、血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の比は、驚くべきことに、全生存及び無進行生存両方の統計的に有意なマーカーであった（図８）。患者をこれらの比が中央値より上である場合に「高い」比を有する群及びこれらの比が中央値よりより下である場合に「低い」比を有する群に分類した。高ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比は、より低い無進行及び全生存（それぞれｐ＝０．００７及びｐ＝０．０５）と関連していた。
表１は、この研究及びその解析の部分として生成されるデータを示す。
実施例３ さらなる癌患者の血漿解析
血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の比が腎臓の癌における診断及び予後の生物マーカーであることを確立して、我々は、また、この関係がその他の癌型において存在するかどうかを調査した。我々は、膵臓癌及び卵巣癌（高悪性度の漿液の卵巣癌、ＨＧＳ）を分析し、及びまた、これらの癌において血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の比が統計的に有意な癌マーカーであることを確認した（図９及び１０）。表１及び２は、この研究及びその解析の部分として生成されるデータを示す。
実施例４ 抗ＣＣＲ４抗体での治療に対する応答
我々は、ＣＣＲ４に拮抗性の完全ヒトＩｇＧ１抗体（Ａｆｆｉ−５を意味する、Ａｆｆｉｔｅｃｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＡＳ， Ｇａｕｓｔａｄａｌｌeｅｎ ２１， Ｎ−０３４９， Ｏｓｌｏ， Ｎｏｒｗａｙから得られる）がＴｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）遊走アッセイにおけるＣＣＬ１７への７６８−Ｏ及びＡ４９８細胞の遊走を阻害することを決定した。簡潔には、７８６−ＯまたはＲＥＮＣＡ細胞をＥＤＴＡに基づいた緩衝液で収集し、培地（７８６−Ｏについては無血清、ＲＥＮＣＡについては０．５％の血清を含む）において再懸濁して、４５分間Ａｆｆｉ−５または対照ＩｇＧとプレインキュベートした。１−２×１０5細胞をＴｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）インサート（１２−ウェルフォーマット）の上部に播いて、ヒトＣＣＬ１７（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）またはマウスＣＣＬ１７（Ｒ＆Ｄ、１−００１−Ａ）の示した濃度を含む培地を底面スペースに添加した。一晩のインキュベーション後、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）インサートを綿棒でインサートの上部に残っている細胞を除去した後に修飾されたＧＩＥＭＳＡ染色で染色した。膜をインサートから切除し、及びスライド上に乗せた。インサート当たりの１０のフィールドにおける細胞数は、４０×倍率で顕微鏡にて計数した。それぞれの条件について三通りを解析した。マウスＣＣＬ１７へのＲＥＮＣＡ細胞の遊走が阻害され、また抗体がマウスＣＣＲ４に拮抗性であったことを示している。
ＲＥＮＣＡ細胞遊走に対するＡｆｆｉ−５の作用は、我々にインビボでのＲＥＮＣＡモデルにおけるこの抗体を試験させた。ＲＥＮＣＡ細胞は、左腎の腎臓の被膜下にルシフェラーゼ標識されたＲＥＮＣＡ細胞の注射によって野生型Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて同所性に成長した。マウスには、１０ｍｇ／ｋｇの抗体またはアイソタイプ対照の週２回の腹腔内注射を与えた。
Ｂａｌｂ／ｃマウスは１×１０４ ＲＥＮＣＡ−ｌｕｃ細胞を同所性に注射され、Ａｆｆｉ５（Ｔ）またはＩｇＧ対照（Ｃ）、１０ｍｇ／ｋｇでの処理を外科手術の４８時間後に始め、及び毎週２回続けた。マウスを外科手術の１７日後に屠殺し、及び腫瘍重量を左腎重量（腫瘍を含んだ）に右腎（未処理）の重量を減算することによって決定した。３件の実験（処理された対照ｎ＝２８、治療されたｎ＝２７）からの合わせた結果を示す。発光を決定するために、マウスにＰＢＳ中のＤ−ルシフェリン１５０μｇ／ｇ体重を腹腔内注射し、及び電荷結合素子カメラ（ＩＶＩＳ、Ｘｅｎｏｇｅｎ、Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）で生物発光イメージングを注射の１０分後に開始した。イメージングを２、７、１４及び２１日目に行った。
図１１は、合計２３のアイソタイプ対照抗体処理されたマウス及び２１のＡｆｆｉ−５処理されたマウスで３件の独立した実験からエンドポイントにての平均腫瘍重量を示す。抗体処理は、腫瘍重量または生物発光によって測定したときに腫瘍量の有意な阻害を生じさせた（ｐ＜０．０００１）。
図１２に示したように、血清ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比は、治療応答を伴って低下した、すなわち対照処理された動物の平均比は、抗体処理された動物の平均比より有意に高かった。
図１３は、血清ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２の比がマウスにおける腫瘍重量と強く相関することを示す。この図は、抗ＣＣＲ４薬剤で処理されるマウスにおける、及び未治療／対照治療されたマウスにおける比と腫瘍重量の相関を示し、この相関が処理にかかわりなく存在することを示している。
実施例５ ＣＣＲ４の化学的アンタゴニストでの治療に対する対応
実施例４において記述される１つに同等の研究をＣＣＲ４、図１４において示される化学的式を有するＡＺＤ２０９８を意味する化合物の化学的アンタゴニストを使用することによって実施した。
本質的に実施例４に記載されているように、しかしＡＺＤ２０９８で、及びＡｆｆｉ−５の代わりに実施したＴｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）遊走アッセイは、ＡＺＤ２０９８がマウスＣＣＬ１７へのＲＥＮＣＡ細胞の遊走を阻害することを示し、化合物がマウスＣＣＲ４に拮抗性だったことを示した。
インビボでのＲＥＮＣＡモデルアッセイを、本質的に実施例４に記載されているように、しかしＡＺＤ２０９８で、及びＡｆｆｉ−５の代わりに実施した。４件の実験（処理された対照ｎ＝２７、治療されたｎ＝２８）を実施し、及び結果を組み合わせた。結果は、腫瘍重量（ｐ＝０．００１）（図１５）または生物発光（ｐ＝０．０５）によって測定したときに、ＡＺＤ２０９８処理が腫瘍量の有意な阻害を生じさせたことを示した。
ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比を動物の血清試料よりもむしろ血漿試料において決定した。図１６に示したように、血漿ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比は、治療応答で低下した、すなわち対照処理された動物の平均比がアンタゴニスト処理された動物の平均比より有意に高かった。

Claims (7)

  1. （ｉ）癌の進行または発症をモニターすること；
    （ｉｉ）治療に対する癌の応答をモニターすること；
    （ｉｉｉ）癌を診断すること；
    （ｉｖ）癌予後；及び／または
    （ｖ）癌が治療に応答する可能性を予測すること
    に関連した情報を得るための方法であって、前記方法は、被験体からの試料において循環しているＣＣＬ１７と循環しているＣＣＬ２２との比を決定することを含む、前記方法であって、
    前記方法は、前記ＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比を対照または参照比と比較することを含み、前記試料は、血液、血漿、または血清であり、癌が腎臓癌、膵臓癌、および卵巣癌から選択され、
    （ｉ）前記被験体における増大したＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比は、癌の発症または進行の可能性が高いことを示す；
    （ｉｉ）前記被験体における減少したＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比は、前記治療に応答した前記癌の可能性が高いことを示す；
    （ｉｉｉ）前記被験体における増大したＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比は、前記被験体が癌を有する可能性が高いことを示す；
    （ｉｖ）前記被験体における増大したＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比は、有害な予後の可能性が高いことを示す；および／または
    （ｖ）前記被験体における増大したＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比は、癌が治療に応答する可能性が高いことを示す、前記方法。
  2. 請求項１に記載の方法であって、前記方法は、循環しているＣＣＬ１７及び循環しているＣＣＬ２２のレベルを決定すること、及びＣＣＬ１７：ＣＣＬ２２比を算出することを含む、前記方法。
  3. 前記方法は、抗体を使用してＣＣＬ１７及びＣＣＬ２２のレベルを決定することを含む、請求項２に記載の前記方法。
  4. 請求項１〜３のいずれかに記載の方法であって、前記試料は、血清または血漿である、前記方法。
  5. 請求項１〜４のいずれかに記載の方法であって、前記癌は、腎臓癌である、前記方法。
  6. 請求項１〜４のいずれかに記載の方法であって、前記癌は、卵巣癌である、前記方法。
  7. 請求項１〜４のいずれかに記載の方法であって、前記癌は、膵臓癌である、前記方法。

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