JP6461096B2 - 結腸切除なしに炎症性腸疾患を処置するための方法および組成物 - Google Patents
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Description
a)腸、生殖器、外皮、膵臓、腎臓、循環器、および呼吸器から選択される組織を用いて、ECM足場、グラフト、または組成物を調製するステップ、および
b)腸組織を冒す疾患、損傷または状態を被っている患者のうち、下部腸管組織を冒す疾患または状態を被っている患者の組織に、ECMグラフトまたは足場組成物を植込み、移植、適用または投与するステップであり、ここで腸組織は、ECM組成物の植込み、移植、適用または投与の前に切除またはアブレーションを受けない。
a.損傷または疾患のある組織に対する粘膜切除を任意に行うステップ、
b.腸、生殖器(膣以外)、外皮、膵臓、腎臓、循環器、および呼吸器から選択される組織を用いて、TS−ECMグラフトまたは足場組成物を調製するステップ、ならびに
c.同じ腸、生殖器(膣以外)、外皮、膵臓、腎臓、循環器、および呼吸器の組織を冒す疾患または状態を被っている患者の組織に、TS−ECM足場または組成物を植込み、移植、または投与するステップ。
i)ECMを粉砕するステップ、
ii)酸性溶液中の酸性プロテアーゼによる消化によって、インタクトな非透析または非架橋ECMを可溶化して、消化溶液を生成するステップ、
iii)消化溶液のpHを7.2から7.8のpHに調整して、中和消化溶液を生成するステップ、および
iv)25℃よりも高い温度で溶液をゲル化するステップ。
下部腸管、生殖器(膣以外)、外皮、膵臓、腎臓、循環器、および呼吸器から選択される組織を用いて、TS−ECM足場を調製するステップと、
同じ下部腸管、生殖器(膣以外)、外皮、膵臓、腎臓、下部腸管、循環器、および呼吸器の組織を冒す疾患または状態を被っている患者の組織に、TS−ECM足場を植込み、移植、または投与するステップとを含む。
i.ECMを粉砕するステップ、
ii.酸性溶液中の酸性プロテアーゼによる消化によって、インタクトな非透析または非架橋ECMを可溶化して、消化溶液を生成するステップ、
iii.消化溶液のpHを7.2から7.8のpHに調整して、中和消化溶液を生成するステップ、および
iv.25℃よりも高い温度で溶液をゲル化するステップ。
−下部切開に伴う括約筋の破損(失禁)または仙椎神経の損傷(インポテンス)のリスクを減少させ、かつ
−貯留機能を改善し、水分吸収の増加および貯蔵能力の改善によってより正常な排便習慣を可能にする;
−結腸切除またはたとえばIPAA(回腸肛門吻合を伴う全直腸結腸切除)などの類似の手順よりも比較的単純になり、侵襲性が少なくなる;粘膜切除はかなり直接的な手順であり、全快/回腸瘻造設と同時に、またはその後の任意のときに下側から行われ得る。迂回回腸瘻造設がまだ現存している間に幹細胞が「植えられ」て粘膜を再生してもよい。
−結腸を残すことによって、結腸なしで生活することによる生涯の懸念(例、嚢炎、腸閉塞、脱水など)を取り除く;
−一時的な回腸瘻造設のみを行う(すなわち新たな粘膜が生存可能になるまで);および
−別様にはIBDを処置するために独立に働き得るさまざまな分野(手術、医学、内視鏡、および組織工学)を一緒にする。
4匹の生きたイヌの結腸組織に、小腸粘膜下層細胞外マトリックス(SIS−ECM)グラフトを移植した。公知の技術に従って、長さ約3〜4センチメートルのSIS−ECMグラフトを調製した。2層、4層、6層、および8層の異なる層数を有するシートまたはチューブのグラフトを調製し、経肛門環状粘膜切除の後にテストした。
処置がないときは、瘢痕および狭窄が形成されるという結果が予期される。しかし、ECM処置によって、全体的および顕微鏡的に正常にみえる切除組織の粘膜被覆が得られた。管状デバイスのECM層の数に基づいて、結果がわずかに変動した。すなわち、一般的にECM層数が多いことが粘膜被覆の増加に関連付けられた。ECM足場で処置されたいずれのイヌにも、狭窄の徴候は存在しなかった。
本発明に従うと、炎症性腸疾患(IBD)の処置のためにECMゲル組成物を用いることの実行可能性を、ラットにおいてインビボでテストできる。ラットは、たとえば潰瘍性大腸炎(UC)などのヒトIBDに対するモデルとして確立されてもよく、デキストラン硫酸ナトリウム(Dextran Sulfate Sodium:DSS)を数日間飲料水に入れて適宜投与することによって、ラット結腸組織にUCを誘導できる。
小腸のセグメントからのSISの調製は、米国特許第4,902,508号、米国特許第5,275,826号、および米国特許第5,514,533号に詳述されており、それらの開示は本明細書において明確に引用により援用される。腸のセグメントは最初に、外側層(特に漿膜および筋層)および内側層(粘膜の内腔部分)の両方を除去するための長手方向の拭い取り運動を用いたアブレーションを受ける。典型的に、SISを食塩水でリンスし、以下に記載されるとおりに使用するまで、水和または脱水状態で任意に保存する。
上述のとおりに調製したSIS検体を、組織ハサミ、片刃カミソリ、またはその他の適切な切断器具を用いて任意の小片に刻むかまたは細断する。平底のステンレス鋼容器に検体を入れ、容器内に液体窒素を導入し、検体を凍結させて粉砕のために準備する。
SIS粉末を金網でふるいにかけて、任意の便利な容器に入れる。次いで粉末をタンパク質消化して、実質的に均質な溶液を形成する。一実施形態においては、HClでpH2.5に調整した0.1M酢酸中で、1mg/mlのペプシン(シグマ・ケミカル社(Sigma Chemical Co.)、セントルイス(St.Louis)、Mo.)によって、粉末を室温にて48時間にわたり消化する。消化活性を不活性化するために、反応媒体を水酸化ナトリウムで中和する。次いで、可溶化した粘膜下層を溶液の塩析によって濃縮し、さらなる精製および/または凍結乾燥のために分離して、粉末形状のプロテアーゼ可溶化腸粘膜下層を形成してもよい。
Cf=最終ゲルの濃度(mg/ml)
Cs=ECM消化溶液の濃度(mg/ml)
Vf=実験のために必要な最終ゲル溶液の体積
Vd=ECM消化溶液から必要な体積(ml)
V10X=必要な10×PBSの体積(ml)
V1X=必要な1×PBSの体積(ml)
VNaOH=必要な0.1N NaOHの体積(ml)
SIS−ECM溶液または懸濁物を、UC誘導ラットの結腸内に浣腸によって投与してもよい。グラフトの投与後に、宿主動物の拒絶反応、感染症、または異常な生理反応は予期されない。加えて、内視鏡および腹腔鏡を介して、溶液または懸濁物を結腸に投与してもよい。本発明の予期されない結果とは、SIS溶液または懸濁物材料によって結腸粘膜の増強を達成できるような、適切な組織リモデリングの刺激であると考えられる。
Claims (2)
- 潰瘍性大腸炎およびクローン病から選択される炎症性腸疾患を処置、または寛解するための組成物であって、
前記組成物は、流体としての細胞外マトリックス(ECM)からなり、
前記流体は、溶液、懸濁物、およびゲルからなる群から選択され、
前記ECMは、疾患または損傷のある組織の前記処置、または寛解をもたらすために、前記疾患または損傷のある組織の再構築組織リモデリングを提供し、
前記ECMはグラフトまたは足場として作用し、
前記流体のECMは、小腸、および大腸から選択される組織に由来するものである、
組成物。 - 前記流体のECMは内視鏡的に送達されるか、または、浣腸によって送達される、請求項1に記載の組成物。
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