JP6325461B2 - 組織透明化方法、組織透明化試薬及び組織観察方法 - Google Patents
組織透明化方法、組織透明化試薬及び組織観察方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6325461B2 JP6325461B2 JP2014558293A JP2014558293A JP6325461B2 JP 6325461 B2 JP6325461 B2 JP 6325461B2 JP 2014558293 A JP2014558293 A JP 2014558293A JP 2014558293 A JP2014558293 A JP 2014558293A JP 6325461 B2 JP6325461 B2 JP 6325461B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tissue
- thiodiethanol
- clearing
- solvent
- glycerol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 136
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 39
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 138
- YODZTKMDCQEPHD-UHFFFAOYSA-N thiodiglycol Chemical compound OCCSCCO YODZTKMDCQEPHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 77
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 58
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 47
- 150000005527 organic iodine compounds Chemical class 0.000 claims description 42
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 40
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 30
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 30
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 30
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 claims description 29
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 28
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 25
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 claims description 20
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 19
- 238000005352 clarification Methods 0.000 claims description 18
- 239000011630 iodine Substances 0.000 claims description 17
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 17
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 15
- 239000003021 water soluble solvent Substances 0.000 claims description 15
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 13
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 claims description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 9
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 claims description 9
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 claims 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 124
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 64
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 27
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 18
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 18
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 18
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 14
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 11
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 11
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 10
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 8
- 229960000780 iomeprol Drugs 0.000 description 8
- NJKDOADNQSYQEV-UHFFFAOYSA-N iomeprol Chemical compound OCC(=O)N(C)C1=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C1I NJKDOADNQSYQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 7
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 6
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 6
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 5
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000010826 Nissl staining Methods 0.000 description 4
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 4
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 4
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000053171 Glial Fibrillary Acidic Human genes 0.000 description 3
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 3
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 3
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 3
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 108010014765 tomato lectin Proteins 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- FHNINJWBTRXEBC-UHFFFAOYSA-N Sudan III Chemical compound OC1=CC=C2C=CC=CC2=C1N=NC(C=C1)=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 FHNINJWBTRXEBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- YVPYQUNUQOZFHG-UHFFFAOYSA-N amidotrizoic acid Chemical compound CC(=O)NC1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C(O)=O)=C1I YVPYQUNUQOZFHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229940099373 sudan iii Drugs 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 2
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 2
- YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 2,5-dimethoxy-4-bromophenethylamine Chemical compound COC1=CC(CCN)=C(OC)C=C1Br YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QPHJQCAPTXSDDP-UHFFFAOYSA-N 2-phenyl-2,7-diazaspiro[4.4]nonane Chemical compound C1NCCC11CN(C=2C=CC=CC=2)CC1 QPHJQCAPTXSDDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010007269 Carcinogenicity Diseases 0.000 description 1
- 241000238366 Cephalopoda Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108010017480 Hemosiderin Proteins 0.000 description 1
- WWVAPFRKZMUPHZ-UHFFFAOYSA-N Iodoxamic acid Chemical compound OC(=O)C1=C(I)C=C(I)C(NC(=O)CCOCCOCCOCCOCCC(=O)NC=2C(=C(C(O)=O)C(I)=CC=2I)I)=C1I WWVAPFRKZMUPHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OIRFJRBSRORBCM-UHFFFAOYSA-N Iopanoic acid Chemical compound CCC(C(O)=O)CC1=C(I)C=C(I)C(N)=C1I OIRFJRBSRORBCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXIGWFXRQKWHHA-UHFFFAOYSA-N Iotalamic acid Chemical compound CNC(=O)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C(O)=O)=C1I UXIGWFXRQKWHHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUHXFSYUBXNTHU-UHFFFAOYSA-N Iotrolan Chemical compound IC=1C(C(=O)NC(CO)C(O)CO)=C(I)C(C(=O)NC(CO)C(O)CO)=C(I)C=1N(C)C(=O)CC(=O)N(C)C1=C(I)C(C(=O)NC(CO)C(O)CO)=C(I)C(C(=O)NC(CO)C(O)CO)=C1I XUHXFSYUBXNTHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZFHZUGUCWJVEQC-FPUQOWELSA-M Ipodate Sodium Chemical compound [Na+].CN(C)\C=N\C1=C(I)C=C(I)C(CCC([O-])=O)=C1I ZFHZUGUCWJVEQC-FPUQOWELSA-M 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 101000572987 Mus musculus POU domain, class 3, transcription factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N N-methylglucamine Chemical compound CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N 0.000 description 1
- 241000238633 Odonata Species 0.000 description 1
- 235000008753 Papaver somniferum Nutrition 0.000 description 1
- 240000001090 Papaver somniferum Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000545067 Venus Species 0.000 description 1
- GPKUGWDQUVWHIC-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine tetrahydrochloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.Cl.NNC1=CC=C(C=C1)C1=CC=C(NN)C=C1 GPKUGWDQUVWHIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- QEPMPXAUMUWNNO-UHFFFAOYSA-N bis(methylsulfanyl)methyl-trimethylsilane Chemical compound CSC(SC)[Si](C)(C)C QEPMPXAUMUWNNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 231100000260 carcinogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007670 carcinogenicity Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010226 confocal imaging Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005223 diatrizoic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000008393 encapsulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000005562 fading Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000009688 glial response Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- VVDGWALACJEJKG-UHFFFAOYSA-N iodamide Chemical compound CC(=O)NCC1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C(O)=O)=C1I VVDGWALACJEJKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004901 iodamide Drugs 0.000 description 1
- 229960002487 iodoxamic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960001025 iohexol Drugs 0.000 description 1
- NTHXOOBQLCIOLC-UHFFFAOYSA-N iohexol Chemical compound OCC(O)CN(C(=O)C)C1=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C1I NTHXOOBQLCIOLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004647 iopamidol Drugs 0.000 description 1
- XQZXYNRDCRIARQ-LURJTMIESA-N iopamidol Chemical compound C[C@H](O)C(=O)NC1=C(I)C(C(=O)NC(CO)CO)=C(I)C(C(=O)NC(CO)CO)=C1I XQZXYNRDCRIARQ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 229960002979 iopanoic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002603 iopromide Drugs 0.000 description 1
- DGAIEPBNLOQYER-UHFFFAOYSA-N iopromide Chemical compound COCC(=O)NC1=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)N(C)CC(O)CO)=C1I DGAIEPBNLOQYER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000929 iotalamic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960003182 iotrolan Drugs 0.000 description 1
- 229960000506 iotroxic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- 229960003194 meglumine Drugs 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229960004712 metrizoic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012120 mounting media Substances 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001103 thalamus Anatomy 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011824 transgenic rat model Methods 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
この組織透明化方法において、前記水溶性溶媒には、2,2´−チオジエタノールとグリセロールと非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液との混合液が好適に用いられる。この場合、水性溶媒中の2,2´−チオジエタノール、グリセロール及びヨウ素含有量40%の非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液の容量比は、それぞれ10〜50%、1〜20%及び10〜70%とされる。
また、前記水性溶媒として、2,2´−チオジエタノールと非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液の混合液を用いることもできる。この場合、水性溶媒中の2,2´−チオジエタノール及びヨウ素含有量40%の非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液の容量比は、20〜80%、80〜20%とされる。
さらに、前記水性溶媒として、2,2´−チオジエタノールとグリセロールとの混合液を用いてもよい。この場合、水性溶媒中の2,2´−チオジエタノール及びグリセロールの容量比は、70〜95%、5〜30%とされる。
水性溶媒中の2,2´−チオジエタノールの濃度を抑制して蛍光タンパク質の蛍光シグナルの消失又は減衰を防止するため、水性溶媒には、2,2´−チオジエタノールと非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液の混合液あるいはこれにグリセロールを加えたものを用いることが好ましい。
加えて、前記水溶性溶媒は、対象とする臓器に応じて、さらにスクロース水溶液を含むことができる。
また、組織透明化試薬は、対象とする臓器に応じて、さらにスクロース水溶液を含んでいてもよい。
この組織観察方法は、具体的には、前記組織を蛍光標識する標識手順と、蛍光標識後の前記組織を前記溶媒中に浸漬する前記透明化手順と、透明化後の組織中の前記蛍光標識から発せられる蛍光を検出する検出手順と、を含むことができる。
また、この組織観察方法は、前記組織を前記溶媒中に浸漬する前記透明化手順と、透明化後の組織を蛍光標識する標識手順と、透明化及び蛍光標識後の組織中の前記蛍光標識から発せられる蛍光を検出する検出手順と、を含むことができる。
この組織観察方法では、前記検出手順において、蛍光顕微鏡、蛍光実体顕微鏡、共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡による観察を好適に採用できる。
本発明に係る組織透明化方法及び組織観察方法は、屈折率が1.4〜1.7である水溶性溶媒(組織透明化試薬)中に組織を浸漬する透明化手順を含むことを特徴とする。水溶性溶媒の屈折率は、より好ましくは1.50〜1.52とされる。
本発明に係る組織透明化方法及び組織観察方法において、対象とする臓器(あるいは臓器片)は、特に限定されないが、脳、脊髄、肝臓、脾臓、腎臓、肺、心臓、血管、皮膚、皮下組織、腸、脂肪組織、リンパ節、筋肉、腱及び癌、並びに骨などとされる。本発明では、2,2´−チオジエタノール(以下、単に「チオジエタノール」と称する)にグリセロールを組み合わせて用いることで、1mm以上の厚さの組織、具体的には1mm〜2cm程度の厚みの組織であっても、透明化できることが初めて明らかにされた。
水溶性溶媒(以下、「組織透明化試薬」とも称する)の屈折率は、対象臓器に応じて上記数値範囲内で適宜設定され得る。上記屈折率を満たす組織透明化試薬の好適な例として、チオジエタノール(屈折率1.52)と非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液(ヨウ素含有量40%の水溶液の屈折率約1.51)の混合液、あるいはチオジエタノールとグリセロール(屈折率1.474)との混合液が挙げられ、より好ましくはチオジエタノールとグリセロールと非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液との混合液が挙げられる。また、組織透明化試薬は、対象とする臓器に応じて所望により、さらにスクロース水溶液を含んでいてもよい。
また、チオジエタノールと非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液の混合液を用いる場合、水性溶媒中のチオジエタノール及びヨウ素含有量40%の非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液の容量比は、20〜80%、80〜20%とされる。
さらに、チオジエタノールとグリセロールとの混合液を用いる場合、水性溶媒中のチオジエタノール及びグリセロールの容量比は、70〜95%、5〜30%とされる。
スクロース水溶液を添加する場合には、スクロース水溶液の添加容量に応じて、チオジエタノール、グリセロール及び非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液のいずれか1以上の添加容量を減らせばよい。
臓器は組織透明化試薬中に所定時間浸漬することにより透明化される。浸漬は4〜60℃程度にて行うことが好ましく、20〜42℃程度にて行うことが特に好ましい。試薬を室温以上に加温することで、試薬の粘性が低下し、臓器内への浸透度が向上する。低温度下でのスクロースの析出を防止するため、スクロース水溶液には30%程度の濃度の水溶液を用いることが好ましい。浸漬する時間は対象臓器によって異なるが、例えば24時間〜6日間である。一例として、対象臓器が脳、脊髄、心臓、皮膚又は筋肉である場合、4〜6日程度の浸漬が行われる。また、対象臓器が肝臓、腎臓、肺、血管、リンパ節又は癌である場合、24時間〜3日間の浸漬が好ましい。
本発明に係る組織透明化方法及び組織観察方法では、上述の組織透明化手順の前に、従来公知の病理組織学的手法による固定化手順を行ってもよい。また、固定化手順には、必要に応じて従来公知の脱脂処理等を組み合わせてもよい。
[透明化前の蛍光標識]
本発明に係る組織観察方法では、組織を蛍光標識した後に、上述の透明化手順を行って、透明化された組織中の蛍光標識から発せられる蛍光を検出することが可能である。上述のように、本発明に係る組織透明化方法は、ほぼすべての蛍光標識の蛍光を保持でき、かつ、蛍光タンパク質の劣化(退色)を防止できるため、複数の蛍光標識を用いた多重染色による組織観察にも好適である。
また、本発明に係る組織観察方法では、上述の透明化手順を行った後に、透明化後の組織を蛍光標識して、透明化された組織中の蛍光標識から発せられる蛍光を検出することも可能である。
4%パラフォルムアルデヒド緩衝液で灌流固定した後にラット脊髄を摘出し、さらに同溶液に24時間浸漬して固定した。固定後の脊髄(径3mm)を、チオジエタノール:グリセロール:スクロース=20:40:40の溶液、50:40:10の溶液、70:25:5の溶液の各前処理溶液に順にそれぞれ24時間ずつ浸漬した後、90:5:5の最終溶液に24時間浸漬して透明化した。
ラット脳(組織厚6mm)を実施例1に記載の手順で固定し透明化した。
神経軸索に蛍光タンパク質VENUSを発現するトランスジェニックラットを作成した。トランスジェニックラットの作成は、非特許文献3("Visual properties of transgenic rats harboring the channelrhodopsin-2 gene regulated by the thy-1.2 promoter." PLoS ONE, 2009, Vol.4, No.11, e7679)記載の手法により行った。実施例1に記載の手順で固定し透明化した脊髄を共焦点顕微鏡(Zeiss, LSA-700)により観察した。
上述のトランスジェニックラットの第12胸髄の背側を鋭利なハサミで半切して脊髄を損壊した後、傷口を閉じた。4週間後に、実施例1に記載の手順で脊髄を固定し透明化した。透明化後の脊髄を多光子励起顕微鏡(Nikon, A1MP)により観察した。
マウスに実験的脳脊髄炎を誘起した。マウス尾根部に炎症誘起MOGペプチドエマルジョンを皮下注射し、30日後に4%パラフォルムアルデヒド緩衝液で灌流固定した後に脳脊髄を摘出し、さらに同溶液に24時間浸漬して固定した。固定後の脳脊髄を、チオジエタノール:グリセロール=20:80の溶液、50:50の溶液、70:30の溶液の各前処理溶液に順にそれぞれ24時間ずつ浸漬した後、90:10の最終溶液に24時間浸漬して透明化した。透明化後の脳脊髄を多光子励起顕微鏡により観察した。
実施例1に記載の手順でマウス肺(下葉、縦:横:厚み=7mm:5mm:5mm)を固定し透明化した。透明化後の肺を多光子励起顕微鏡により観察し、肺胞血管の3次元構造を構築した。
GFPを遺伝子導入したヒト肺癌細胞をヌードマウスの皮下に移植し、60日後に癌組織(5mm角)を摘出し、4%パラフォルムアルデヒド緩衝液に24時間浸漬して固定した。実施例1に記載の手順により透明化を行った。透明化後の癌を多光子励起顕微鏡により観察した。
ラットの心臓(1.2cm角)及びマウスの肝臓(縦:横:厚み=1cm:1cm:6mm)を実施例1に記載の手順で固定し透明化した。結果を図12、図13に示す。図12中矢印は、大動脈を示す。図13中矢印は、門脈を示す。
実施例2で透明化したラット脳を薄切し、グリア細胞線維性酸性タンパク質(GFAP)に対する免疫染色、脂肪染色、核染色及びニッスル染色を行った。
4日齢のラット個体を前処理液(チオジエタノール:30%スクロース=20:80)に4℃で24時間、最終溶液(チオジエタノール:グリセロール:30%スクロース=90:5:5)に4℃で48時間浸漬して透明化した。結果を図18に示す。ラット個体を丸ごと透明化できていることが確認される。
GFPを遺伝子導入したヒト肺癌細胞をヌードマウスの皮下に移植し、4週間成長させた。蛍光試薬を結合したトマトレクチンを動物の血管に注入した後、4%パラフォルムアルデヒド緩衝液で灌流固定した。癌組織を摘出し、4%パラフォルムアルデヒド緩衝液に24時間浸漬して固定した。
4%パラフォルムアルデヒド緩衝液で灌流固定した後にマウス脳を摘出し、さらに同溶液に24時間浸漬して固定した。固定後の脳(組織厚6mm)を、チオジエタノール:イオメプロール=50:50の溶液に25℃で48時間浸漬した。結果を図20Aに示す。
EGFPを発現するレトロウイルスベクターを用いてマウスの脳血管にEGFPを発現させた。実施例12と同様の手順で固定し透明化した脳を共焦点顕微鏡(Zeiss, LSA-700)により観察した。
4%パラフォルムアルデヒド緩衝液で灌流固定した後にラット脳を摘出し、さらに同溶液に24時間浸漬して固定した。固定後の脳(組織厚4mm)を、チオジエタノールに3日間浸漬した。
Claims (15)
- 2,2´−チオジエタノールと、非イオン性有機ヨウ素化合物と、を含む水溶性溶媒中に組織を浸漬する手順を含む組織透明化方法。
- 前記溶媒がさらにグリセロールを含む、請求項1記載の組織透明化方法。
- 前記溶媒が、2,2´−チオジエタノールとグリセロールと非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液との混合液であり、2,2´−チオジエタノール、グリセロール及びヨウ素含有量40%の非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液の容量比がそれぞれ10〜50%、1〜20%及び10〜70%である請求項2記載の組織透明化方法。
- 前記溶媒が、2,2´−チオジエタノールと非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液の混合液であり、2,2´−チオジエタノール及びヨウ素含有量40%の非イオン性有機ヨウ素化合物水溶液の容量比が20〜80%、80〜20%である請求項1記載の組織透明化方法。
- 前記溶媒が、さらにスクロース水溶液を含む請求項1又は2記載の組織透明化方法。
- 前記溶媒の屈折率が、1.4〜1.7である請求項1〜5のいずれか一項に記載の組織透明化方法。
- 前記組織が、脳、脊髄、肝臓、肺、心臓、血管及び癌からなる群より選択される一以上である請求項1〜6のいずれか一項に記載の組織透明化方法。
- 前記組織が1mm以上の厚さを有する請求項7記載の組織透明化方法。
- 2,2´−チオジエタノールと、非イオン性有機ヨウ素化合物と、を含む水溶性溶媒からなる組織透明化試薬。
- さらにグリセロールを含む、請求項9記載の組織透明化試薬。
- 2,2´−チオジエタノールと、非イオン性有機ヨウ素化合物と、を含む水溶性溶媒中に組織を浸漬する透明化手順を含む組織観察方法。
- 前記溶媒がさらにグリセロールを含む、請求項11記載の組織観察方法。
- 前記組織を蛍光標識する標識手順と、
蛍光標識後の前記組織を前記溶媒中に浸漬する前記透明化手順と、
透明化後の組織中の前記蛍光標識から発せられる蛍光を検出する検出手順と、を含む請求項11又は12記載の組織観察方法。 - 前記組織を前記溶媒中に浸漬する前記透明化手順と、
透明化後の組織を蛍光標識する標識手順と、
透明化及び蛍光標識後の組織中の前記蛍光標識から発せられる蛍光を検出する検出手順と、を含む請求項11又は12記載の組織観察方法。 - 前記検出手順において、前記蛍光を蛍光顕微鏡、蛍光実体顕微鏡、共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡により観察する、請求項13又は14記載の組織観察方法。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2013012889 | 2013-01-28 | ||
JP2013012889 | 2013-01-28 | ||
JPPCT/JP2013/004369 | 2013-07-17 | ||
JP2013004369 | 2013-07-17 | ||
PCT/JP2013/006811 WO2014115206A1 (ja) | 2013-01-28 | 2013-11-20 | 組織透明化方法、組織透明化試薬及び組織観察方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2014115206A1 JPWO2014115206A1 (ja) | 2017-01-19 |
JP6325461B2 true JP6325461B2 (ja) | 2018-05-16 |
Family
ID=51227027
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014558293A Active JP6325461B2 (ja) | 2013-01-28 | 2013-11-20 | 組織透明化方法、組織透明化試薬及び組織観察方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20160011086A1 (ja) |
EP (1) | EP2950077B1 (ja) |
JP (1) | JP6325461B2 (ja) |
CN (1) | CN104956201B (ja) |
WO (1) | WO2014115206A1 (ja) |
Families Citing this family (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015049101A (ja) * | 2013-08-30 | 2015-03-16 | オリンパス株式会社 | 生体透明化剤 |
SG11201700093QA (en) * | 2014-07-07 | 2017-02-27 | Chih-Yung Lin | Aqueous tissue clearing solution and uses thereof |
JP6510558B2 (ja) * | 2014-12-25 | 2019-05-08 | オリンパス株式会社 | 生体観察装置および生体観察方法 |
EP3273218A4 (en) * | 2015-03-18 | 2018-12-26 | Riken | Method for observing biological material and clearing method |
EP3450953A4 (en) | 2016-04-28 | 2020-01-08 | Riken | COMPOSITION FOR THE PRODUCTION OF BIOLOGICAL MATERIAL WITH OUTSTANDING LIGHT TRANSMISSION AND USE OF THE COMPOSITION |
JPWO2018008136A1 (ja) * | 2016-07-07 | 2019-04-18 | オリンパス株式会社 | 画像処理装置および画像処理装置の作動方法 |
CN107621462B (zh) * | 2016-07-13 | 2020-03-31 | 王志伟 | 一种组织透明化液sut及其制备和应用 |
CN106323708B (zh) * | 2016-07-29 | 2019-04-30 | 浙江大学 | 一种透明化试剂、生物组织透明化成像方法及其应用 |
JP6898720B2 (ja) * | 2016-10-14 | 2021-07-07 | 株式会社ファンケル | 皮膚内部構造評価方法 |
KR101866249B1 (ko) | 2016-11-29 | 2018-06-12 | 박순현 | 생체 조직 투명화용 조성물 및 이를 이용한 생체 조직 투명화 방법 |
WO2018113723A1 (en) * | 2016-12-22 | 2018-06-28 | The University Of Hong Kong | Compositions and methods for clearing tissue |
CN107132101B (zh) * | 2017-03-28 | 2019-10-11 | 中国科学院深圳先进技术研究院 | 一种组织光透明剂及其制备方法和应用 |
EP3707492B1 (en) * | 2017-11-09 | 2022-02-02 | Case Western Reserve University | Lipid-preserving refractive index matching for prolonged imaging depth for tranparent tissue sample and composition |
KR20190094509A (ko) * | 2018-02-05 | 2019-08-14 | 한국화학연구원 | 스페로이드 투명화용 조성물, 이를 이용한 스페로이드 투명화 방법 및 이를 포함하는 키트 |
WO2019180874A1 (ja) * | 2018-03-22 | 2019-09-26 | オリンパス株式会社 | 生体組織透明化材料 |
CN110763661B (zh) * | 2018-07-25 | 2022-03-22 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 处理液组合物、试剂盒和生物器官透明化同时进行免疫标记的方法 |
JP7106114B2 (ja) * | 2018-08-27 | 2022-07-26 | 学校法人東京理科大学 | 生体試料の透明化方法及び生体試料透明化剤 |
CN109406768B (zh) * | 2018-11-06 | 2023-01-24 | 扬州大学 | 一种观察微小组织内细胞立体分布及统计细胞数目的方法 |
US20220276139A1 (en) * | 2019-07-08 | 2022-09-01 | The University Of Hong Kong | Compositions and methods for clearing tissue |
CN110596096B (zh) * | 2019-07-08 | 2022-10-25 | 深圳技术大学 | 透明化试剂及其在生物组织材料光学成像中的应用、活体皮肤组织透明化成像方法 |
JP2021018167A (ja) * | 2019-07-22 | 2021-02-15 | 国立大学法人 東京大学 | 生体組織の処理方法及び処理用組成物 |
JPWO2021060373A1 (ja) * | 2019-09-24 | 2021-04-01 | ||
JPWO2021182121A1 (ja) * | 2020-03-13 | 2021-09-16 | ||
WO2021238893A1 (en) * | 2020-05-25 | 2021-12-02 | The Chinese University Of Hong Kong | Efficient and effective tissue clearing agents and their compositions |
CN111610078B (zh) * | 2020-07-03 | 2021-12-14 | 中国科学技术大学 | 生物组织透明化试剂及生物组织透明化方法 |
WO2024162288A1 (ja) * | 2023-01-31 | 2024-08-08 | 国立研究開発法人理化学研究所 | 光学観察用の構造及びその作成方法、試料の観察方法、顕微鏡観察用のマウント液 |
CN117147250B (zh) * | 2023-08-16 | 2024-06-04 | 四川大学 | 一种实验用小型哺乳动物牙齿透明化方法 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4313861B2 (ja) * | 1997-08-01 | 2009-08-12 | キヤノン株式会社 | プローブアレイの製造方法 |
US6219575B1 (en) * | 1998-10-23 | 2001-04-17 | Babak Nemati | Method and apparatus to enhance optical transparency of biological tissues |
JP3486609B2 (ja) * | 2000-12-15 | 2004-01-13 | キヤノン株式会社 | インク、インクジェット記録方法、記録ユニット、インクカートリッジ及びインクジェット記録装置 |
GB2377757B (en) * | 2001-07-19 | 2004-11-17 | Ann-Shyn Chiang | An aqueous tissue clearing solution |
US6472216B1 (en) * | 2001-07-24 | 2002-10-29 | Ann-Shyn Chiang | Aqueous tissue clearing solution |
JP4671226B2 (ja) * | 2005-08-18 | 2011-04-13 | 株式会社島津製作所 | 生体組織の直接質量分析法 |
CN101251449A (zh) * | 2008-04-10 | 2008-08-27 | 山东大学 | 一种医学组织切片染色方法 |
WO2011111876A1 (en) * | 2010-03-12 | 2011-09-15 | Riken | Clearing reagent for biological material, and use thereof |
WO2012147965A1 (ja) * | 2011-04-28 | 2012-11-01 | 独立行政法人理化学研究所 | 生物材料を透明化する方法、及びその利用 |
CN103562702A (zh) * | 2011-05-20 | 2014-02-05 | 独立行政法人理化学研究所 | 生物材料用透明化试剂、及其利用 |
CN102749231B (zh) * | 2011-10-14 | 2014-07-09 | 华中科技大学 | 骨组织光透明剂 |
-
2013
- 2013-11-20 EP EP13872734.2A patent/EP2950077B1/en active Active
- 2013-11-20 US US14/764,060 patent/US20160011086A1/en active Pending
- 2013-11-20 WO PCT/JP2013/006811 patent/WO2014115206A1/ja active Application Filing
- 2013-11-20 CN CN201380071465.XA patent/CN104956201B/zh active Active
- 2013-11-20 JP JP2014558293A patent/JP6325461B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2950077B1 (en) | 2018-07-25 |
EP2950077A4 (en) | 2016-11-02 |
CN104956201A (zh) | 2015-09-30 |
US20160011086A1 (en) | 2016-01-14 |
JPWO2014115206A1 (ja) | 2017-01-19 |
CN104956201B (zh) | 2018-08-28 |
EP2950077A1 (en) | 2015-12-02 |
WO2014115206A1 (ja) | 2014-07-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6325461B2 (ja) | 組織透明化方法、組織透明化試薬及び組織観察方法 | |
Azaripour et al. | A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue | |
US11035763B2 (en) | Kit for producing cleared biological specimens and method for producing cleared biological specimens | |
JP2024019174A (ja) | 大型組織の標識、透明化及びイメージングのための方法 | |
US9778155B2 (en) | Methods for phenotyping of intact whole tissues | |
Heimel et al. | Iodine‐enhanced micro‐CT imaging of soft tissue on the example of peripheral nerve regeneration | |
CN104568553B (zh) | 一种组织光透明剂及其应用 | |
EP3550029B1 (en) | Composition for biotissue clearing and biotissue clearing method using same | |
CN108061677A (zh) | 用于生物材料的澄清试剂和其用途 | |
KR102296381B1 (ko) | 생체 조직 투명화용 조성물 및 이를 이용한 생체 조직 투명화 방법 | |
CN107132101A (zh) | 一种组织光透明剂及其制备方法和应用 | |
WO2021015196A1 (ja) | 生体組織の処理方法及び処理用組成物 | |
Žygelytė et al. | RetroDISCO: clearing technique to improve quantification of retrograde labeled motor neurons of intact mouse spinal cords | |
KR20190094509A (ko) | 스페로이드 투명화용 조성물, 이를 이용한 스페로이드 투명화 방법 및 이를 포함하는 키트 | |
JP7411223B2 (ja) | 被検体の透明化方法および透明化された被検体の製造方法 | |
KR102141496B1 (ko) | 투명화된 거대조직의 면역염색용 조성물 및 이를 이용한 투명화된 거대 생체 조직의 면역염색 방법 | |
CN114149693B (zh) | 一种用于血管网络标记成像的染料工作液、其制备和应用 | |
TWI695846B (zh) | 固化式組織澄清方法與組合物 | |
RU2429462C2 (ru) | Способ оптического просветления образцов биологических тканей | |
Montoro et al. | Comparison of tissue processing methods for microvascular visualization in axolotls | |
KR102354092B1 (ko) | 스페로이드 투명화용 조성물, 이를 이용한 스페로이드 투명화 방법 및 이를 포함하는 키트 | |
Heimel et al. | Research Article Iodine-Enhanced Micro-CT Imaging of Soft Tissue on the Example of Peripheral Nerve Regeneration | |
Matryba et al. | Progress in ex situ tissue optical clearing–shifting immuno-oncology to the third dimension | |
Grafflin et al. | Autofluorescence of teleostean kidneys |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160905 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20170614 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170919 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171030 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180327 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180412 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6325461 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |