JP6199360B2 - Automatic perfusion culture device - Google Patents
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Description
本発明は、細胞培養(細胞及び生体組織の培養などを含む)に使用され、培養容器内に培地(培養液)を自動的に灌流して細胞培養を行う自動灌流培養装置に関する。 The present invention relates to an automatic perfusion culture apparatus that is used for cell culture (including cell and biological tissue culture) and that automatically cultures a culture medium in a culture vessel to perform cell culture.
近年、iPS細胞、ES細胞などの実用化に向けた研究が推進されており、その際、細胞や生体組織を培養し、その培養物を人に移植して再生医療を行う研究が盛んに行われている。 In recent years, research for the practical application of iPS cells, ES cells, etc. has been promoted. At that time, research on regenerative medicine by culturing cells and living tissues and transplanting the culture to humans has been actively conducted. It has been broken.
この種の研究における細胞培養を行う培養工程では、培養容器内に、培地とともに、培養する細胞を播種して収容し、培養容器内の培地を定期的に交換し、或いは培養容器内に培地を略連続して供給し排出する処理が行われる。 In the culture process in which cell culture is performed in this type of research, the cells to be cultured are seeded and stored together with the medium in the culture container, the medium in the culture container is periodically replaced, or the medium is placed in the culture container. A process of supplying and discharging substantially continuously is performed.
細胞を播種した培養容器内に、培地を略連続して灌流しながら細胞培養を行う培地灌流方式の細胞培養装置は、従来、下記特許文献1で提案されている。この培養装置は、古い培地を培養容器から略連続して排出しながら、新しい培地を略連続して培養容器内に供給して細胞培養を行うように構成される。
A culture medium perfusion system cell culture apparatus that performs cell culture while perfusing a culture medium in a culture container seeded with cells has been proposed in
上記細胞培養装置は、培養容器を気密構造とし、ポンプにより古い培地を培養容器内から排出し、培養容器内の内圧の低下に応じて、新しい培地を培養容器内に供給する。このようなポンプの一定時間の駆動によって、上記細胞培養装置は、培養容器内に培地を灌流させ、或いは古い培地を新しい培地と交換するように動作する。 In the cell culture device, the culture container has an airtight structure, an old medium is discharged from the culture container by a pump, and a new medium is supplied into the culture container as the internal pressure in the culture container decreases. By driving the pump for a certain period of time, the cell culture device operates to perfuse the culture medium in the culture container or to replace the old culture medium with a new culture medium.
しかしながら、この細胞培養装置は、培養容器内の培地の圧力変化や流速の変化を小さくして、培地灌流方式による細胞培養を行うことができるものの、ポンプの動作に伴い、培養容器内で培地が供給ポート側から排出ポート側にある程度の流速で流れる。このため、ポンプの作動による培地の流れが直接的に細胞に印加されやすく、これにより、細胞への培地の刺激が過度に発生し、細胞培養に悪影響を生じやすい課題があった。 However, although this cell culture device can perform cell culture by the medium perfusion method by reducing changes in the pressure and flow rate of the medium in the culture container, the medium is not contained in the culture container as the pump operates. It flows at a certain flow rate from the supply port side to the discharge port side. For this reason, the flow of the culture medium due to the operation of the pump is easily applied directly to the cells, thereby causing excessive stimulation of the culture medium to the cells, which tends to adversely affect the cell culture.
また、上記細胞培養装置は、培地貯留タンク内の培地をポンプにより培養容器内に供給し、培養容器の排出ポートを通して排出した古い培地を、再び培地貯留タンクに戻すように、循環させる構造のため、灌流培養工程の途中で、培地に新たな培地、別の成分培地、或いは薬剤などを加えることが難しいという課題があった。 In addition, the cell culture device has a structure in which the medium in the medium storage tank is supplied into the culture container by a pump, and the old medium discharged through the discharge port of the culture container is circulated so as to return to the medium storage tank again. In the middle of the perfusion culture process, there is a problem that it is difficult to add a new medium, another component medium, or a drug to the medium.
本発明は、上述の課題を解決するものであり、培養容器内に培地を極めて低流速且つ低流量で灌流させ、細胞に緩やかな培地の流れを付与して、良好に細胞培養を行うことができる自動灌流培養装置を提供することを目的とする。 The present invention solves the above-described problem, and allows a medium to be perfused in a culture vessel at an extremely low flow rate and a low flow rate to give a gentle flow of the medium to the cells, thereby performing cell culture well. It is an object of the present invention to provide an automatic perfusion culture apparatus that can be used.
本発明に係る自動灌流培養装置は
培地を収容する外側容器と、
該外側容器内に挿入され、細胞を播種する多孔質の膜を底部に有した培養容器と、
該外側容器内に培地を供給するように配設された供給流路と、
該供給流路を通して該外側容器内に培地を供給する供給ポンプと、
該培養容器内から培地を排出するように配設された排出流路と、
該排出流路を通して該培養容器内から培地を排出する排出ポンプと、
該外側容器内の培地の液面レベルを検出して液面検出信号を発生する液面検出手段と、
該液面検出手段の液面検出信号に基づき、該供給ポンプを制御して、該外側容器への培地の供給量を制御する制御手段と、
を備え、
該外側容器内の培地液面レベルと該培養容器内の培地液面レベルとの差に応じて、該外側容器内の培地が前記多孔質の膜を通して該培養容器内に灌流することを特徴とする。
An automatic perfusion culture apparatus according to the present invention comprises an outer container for containing a medium,
A culture vessel inserted into the outer vessel and having a porous membrane at the bottom for seeding cells;
A supply channel arranged to supply the culture medium into the outer container;
A supply pump for supplying the culture medium into the outer container through the supply channel;
A discharge channel arranged to discharge the medium from the culture vessel;
A discharge pump for discharging the medium from the culture vessel through the discharge channel;
A liquid level detecting means for detecting a liquid level of the medium in the outer container and generating a liquid level detection signal;
Control means for controlling the supply pump based on the liquid level detection signal of the liquid level detection means to control the amount of medium supplied to the outer container;
With
The medium in the outer container is perfused into the culture container through the porous membrane according to the difference between the medium liquid level in the outer container and the medium liquid level in the culture container. To do.
この発明によれば、外側容器内に培地を供給し、外側容器内の培地液面レベルと培養容器内の培地液面レベルとの間にレベル差、つまり外側容器内の培地液面レベルが培養容器内より高くなることにより、培養容器の底部の膜を通して培地が外側容器から培養容器内に灌流するので、培地の灌流は、極めて低流速で且つ低流量で行われる。 According to this invention, the medium is supplied into the outer container, and the level difference between the medium liquid level in the outer container and the medium liquid level in the culture container, that is, the medium liquid level in the outer container is cultured. Since the medium is perfused from the outer container into the culture container through the membrane at the bottom of the culture container by being higher than in the container, the medium is perfused at a very low flow rate and at a low flow rate.
このため、例えば生体細胞が血液やリンパ液の流れに接して成長或いは生存するように、膜上に播種した細胞には、緩やかな培地の流れを付与して、培地の柔らかな接触と刺激を細胞に生じさせることができる。このため、培地の供給に伴う細胞への悪影響は防止され、生体環境下に極めて近い状態で、良好に細胞培養を行うことができる。さらに、細胞培養の途中で、培地に新たな培地を加え、または別の成分培地を加え、或いは培地に薬剤などを加えて細胞培養を行うことができる。 For this reason, for example, cells that are seeded on the membrane are given a gentle flow of the medium so that the living cells grow or survive in contact with the flow of blood or lymph, and the soft contact and stimulation of the medium are applied to the cells. Can be generated. For this reason, the bad influence to the cell accompanying supply of a culture medium is prevented, and cell culture | cultivation can be performed favorably in the state very close to a biological environment. Furthermore, in the middle of cell culture, a new medium can be added to the medium, another component medium can be added, or a drug can be added to the medium to perform cell culture.
また、古い培地を培養容器から排出しつつ、外側容器内の培地の液面レベルを検出し、その液面レベルに基づき供給ポンプを制御して、新しい培地を外側容器内に供給することができるため、適正量の培地を略連続的に、極めて低流量で培養容器の底部に灌流し、培養容器の膜に播種した細胞を良好に培養することができる。 Further, while discharging the old medium from the culture container, the liquid level of the medium in the outer container can be detected, and the supply pump can be controlled based on the liquid level to supply a new medium into the outer container. Therefore, an appropriate amount of the medium can be perfused continuously at a very low flow rate to the bottom of the culture vessel, and the cells seeded on the membrane of the culture vessel can be cultured well.
またここで、上記供給流路は、上記供給ポンプに接続される供給チューブと、該供給チューブに接続され、上記外側容器内に配置される供給ノズルと、を備え、上記排出流路は、上記排出ポンプに接続される排出チューブと、該排出チューブに接続され、上記培養容器内に配置される排出ノズルと、を備えた構成とすることができる。これによれば、灌流培養装置の供給流路及び排出流路を、小型で簡単に形成することができ、簡単に取り扱うことができる。 Further, the supply flow path includes a supply tube connected to the supply pump, and a supply nozzle connected to the supply tube and disposed in the outer container, and the discharge flow path is A discharge tube connected to the discharge pump and a discharge nozzle connected to the discharge tube and disposed in the culture vessel can be provided. According to this, the supply flow channel and the discharge flow channel of the perfusion culture apparatus can be easily formed in a small size and can be easily handled.
またここで、上記供給ポンプは、培地の流路となる供給接液部と、駆動部を駆動して該供給接液部内に培地を送るように動作する供給ポンプ駆動部とが、分離可能に連結され、上記排出ポンプは、培地の流路となる排出接液部と、駆動部を駆動して該排出接液部内から培地を排出するように動作する排出ポンプ駆動部とが、分離可能に連結される構成とすることができる。これによれば、培地の接液部分の洗浄や交換を容易に行うことができる。 Further, the supply pump is configured such that the supply liquid contact part that becomes a flow path of the culture medium and the supply pump drive part that operates to drive the drive part and send the culture medium into the supply liquid contact part are separable. Connected, the discharge pump can be separated into a discharge wetted part serving as a medium flow path and a discharge pump drive that operates to drive the drive unit to discharge the medium from the discharged wetted part. It can be set as the structure connected. According to this, washing | cleaning and replacement | exchange of the liquid-contact part of a culture medium can be performed easily.
またここで、上記外側容器、上記培養容器、上記供給ポンプの供給接液部、上記供給チューブ、供給ノズル、排出ノズル、排出チューブ、及び上記排出接液部は、取り外し交換可能に配設された構成とすることができる。これによれば、培地の接液部分を容易に取り外して、その洗浄や交換を簡便に行うことができる。 Also, here, the outer container, the culture container, the supply wetted part of the supply pump, the supply tube, the supply nozzle, the discharge nozzle, the discharge tube, and the discharge wetted part are arranged to be removable and replaceable. It can be configured. According to this, the liquid contact part of a culture medium can be removed easily and the washing | cleaning and replacement | exchange can be performed simply.
またここで、上記外側容器は、複数のウエルを有したウエルプレートから構成し、各ウエル内に上記培養容器を挿入することができる。これによれば、複数の培養容器を使用して一度に多くの細胞培養を行うことができる。 Here, the outer container is constituted by a well plate having a plurality of wells, and the culture container can be inserted into each well. According to this, many cell cultures can be performed at once using a plurality of culture vessels.
またここで、上記ウエルプレートを取出可能に収納する収納室と該収納室を開閉する開閉蓋とを備えたケースが設けられ、該ケースには、少なくとも、ウエルプレート、培養容器、供給ノズル、供給チューブ、排出ノズル、排出チューブを、収納するように構成することができる。これによれば、ウエルを有したウエルプレートをケース内に収納し、当該ケース内に、少なくとも供給チューブ、供給ノズル、排出チューブ、及び排出ノズルを収納し、且つケースはコンパクトに形成することができるので、自動灌流培養装置を小型化し、構造を簡単化することができる。 Here, a case is provided that includes a storage chamber for removably storing the well plate and an open / close lid for opening and closing the storage chamber. The case includes at least a well plate, a culture vessel, a supply nozzle, a supply The tube, the discharge nozzle, and the discharge tube can be configured to be accommodated. According to this, the well plate having the well is stored in the case, and at least the supply tube, the supply nozzle, the discharge tube, and the discharge nozzle are stored in the case, and the case can be formed compact. Therefore, the automatic perfusion culture apparatus can be miniaturized and the structure can be simplified.
また、使用者は、自動灌流培養装置を小型のケースごとそのままインキュベータ内に出し入れして、簡便に使用することができる。さらに、使用後、ウエルプレート、培養容器、供給ポンプの供給接液部、供給チューブ、供給ノズル、排出ノズル、排出チューブ、排出接液部は、装置から取り出し、洗浄し或いは使い捨てするように使用することができるので、細胞のコンタミネーションを防止しつつ、安価なコストで繰り返し細胞培養に使用することができる。 In addition, the user can easily use the automatic perfusion culture apparatus by putting it in and out of the incubator as it is in the small case. Furthermore, after use, the well plate, the culture vessel, the supply wetted part of the supply pump, the supply tube, the supply nozzle, the discharge nozzle, the discharge tube, and the discharge wetted part are taken out from the apparatus and used to be washed or disposable. Therefore, it can be repeatedly used for cell culture at a low cost while preventing contamination of cells.
ここで、上記液面検出手段として、1対の電極部を有した液面検出器を配設することができ、液面検出器は、外側容器内に1対の電極部を挿入し、電極部間にパルス電圧を印加して外側容器内の液面を検出するように構成することができる。これによれば、培地の液面レベルを比較的簡単に電気的に検出することができ、また、検出時、電極部間にはシングルパルスを印加すればよく、培地に与える電流の影響を最少にすることができる。 Here, a liquid level detector having a pair of electrode portions can be disposed as the liquid level detecting means, and the liquid level detector has a pair of electrode portions inserted into the outer container, The liquid level in the outer container can be detected by applying a pulse voltage between the parts. According to this, it is possible to detect the liquid level of the medium relatively easily and electrically, and at the time of detection, a single pulse may be applied between the electrodes, and the influence of the current on the medium is minimized. Can be.
またここで、上記供給接液部及び上記排出接液部に接続される流路が各々流路マニホールドとして一体化され、流路マニホールドは取り出し交換可能に形成された構成とすることができる。これによれば、流路を簡単に取り外して洗浄し、或いは交換することができる。 Further, here, the flow paths connected to the supply liquid contact part and the discharge liquid contact part are integrated as a flow path manifold, and the flow path manifold can be taken out and replaced. According to this, the flow path can be easily removed and cleaned or replaced.
またここで、流路マニホールド内における、供給ポンプの供給接液部と前記供給ノズル間の各流路に、開閉バルブを接続することができる。これによれば、1台の供給ポンプを使用して、複数の外側容器内に適正量の培地を順に供給することができ、各外側容器について各々供給ノズルを設ける場合に比して、構成を簡単化することができる。 In addition, an open / close valve can be connected to each flow path between the supply liquid contact portion of the supply pump and the supply nozzle in the flow path manifold. According to this, a single supply pump can be used to sequentially supply an appropriate amount of culture medium into a plurality of outer containers, and the configuration can be compared with the case where a supply nozzle is provided for each outer container. It can be simplified.
またここで、上記供給ポンプは圧電ダイヤフラム式ポンプから構成され、上記供給接液部はダイヤフラムを含むポンプ室を有して構成することができる。これによれば、培地を脈動なく連続して外側容器に供給し、使用後には供給接液部を駆動部から簡単に外して洗浄し或いは交換することができる。 Here, the supply pump can be constituted by a piezoelectric diaphragm type pump, and the supply liquid contact part can be constituted by having a pump chamber containing the diaphragm. According to this, the culture medium can be continuously supplied to the outer container without pulsation, and after use, the supply liquid contact part can be easily removed from the drive part and cleaned or replaced.
また、上記液面検出手段として、参照電極と検出電極を有し、液面レベルに応じて変化する該参照電極と該検出電極間の静電容量の変化に基づき、外側容器内の液面レベルを非接触で検出する静電容量式液面センサを、配設することができる。これによれば、培地液面に電極を接触させないため、電流による培地への悪影響をなくすことができる。 In addition, the liquid level detection means includes a reference electrode and a detection electrode, and the liquid level in the outer container is changed based on a change in capacitance between the reference electrode and the detection electrode that changes according to the liquid level. A capacitance type liquid level sensor that detects non-contact can be provided. According to this, since the electrode is not brought into contact with the medium liquid level, the adverse effect on the medium due to the current can be eliminated.
またここで、上記液面検出手段として、光センサを有し、該光センサの受光信号に基づき、光学的に外側容器内の液面レベルを検出する光学式液面センサを、配設することができる。これによれば、電流や電界による培地への悪影響なしに、培地液面の検出を行うことができる。 Further, here, as the liquid level detection means, an optical sensor is provided which has an optical sensor and optically detects the liquid level in the outer container based on the light reception signal of the optical sensor. Can do. According to this, it is possible to detect the medium liquid level without adversely affecting the medium due to current or electric field.
この発明の自動灌流培養装置によれば、培養容器内に培地を極めて低流速且つ低流量で灌流させ、細胞に緩やかな培地の流れを付与して、細胞を良好に培養することができる。 According to the automatic perfusion culture apparatus of the present invention, the medium can be perfused in the culture vessel at a very low flow rate and a low flow rate, and a gentle medium flow can be imparted to the cells, so that the cells can be cultured well.
以下、本発明の一実施形態を図面に基づいて説明する。この自動灌流培養装置は、図1に示すように、上記外側容器となるウエル4を有したウエルプレート3がケース1の収納室2内に配設され、ウエルプレート3の各ウエル4内に、細胞を播種する多孔質の膜6を底部に有した培養容器5が上から挿入され、各ウエル4内に培地を供給し、各ウエル内に挿入された、培養容器底部の膜6上の細胞に対し、略連続して培地を灌流し、細胞培養を行うように構成される。ここで使用されるウエルプレート3は、6個のウエルを有して構成されが、ウエルの数は6個未満、7個以上とすることもできる。
Hereinafter, an embodiment of the present invention will be described with reference to the drawings. In this automatic perfusion culture apparatus, as shown in FIG. 1, a
具体的には、図2〜図6に示す如く、自動灌流培養装置は、ウエルプレート3を取出可能に収納する収納室2を備えたケース1と、ケース1の収納室2を覆い開閉可能に設けられた開閉蓋1aと、ウエルプレート3の各ウエル4内に培地を供給する供給ポンプ40と、ウエル4内の培養容器5から培地を排出する排出ポンプ60と、供給ポンプ40から供給チューブ13を通して送られた培地を各ウエル4内に供給する供給ノズル14と、排出ポンプ60の運転により各ウエル4内の培養容器5から培地を排出する排出ノズル24と、ウエル4内の培地の液面レベルを検出して液面検出信号を発生する、上記液面検出手段としての液面検出器7と、を備える。また、上記供給流路は、この供給チューブ13と供給ノズル14を備え、上記排出流路は、この排出チューブ23と排出ノズル24を備えて構成される。
Specifically, as shown in FIGS. 2 to 6, the automatic perfusion culture apparatus covers the
ウエルプレート3を収納するケース1は、図2等に示す如く、薄型の直方体形状の箱状に、透明合成樹脂により成形され、ベース板1b上に固定される。ケース1の開口した上部には、開閉蓋1aが開閉可能に取り付けられる。ケース1、開閉蓋1a、及びウエルプレート3は、透明合成樹脂により形成され、細部培養時、蓋を閉じた状態で、顕微鏡下などにおいて、各培養容器5内の細胞を、容易に観察できるようになっている。
As shown in FIG. 2 and the like, the
さらに、ケース1に隣接したベース板1b上に取付台1dが固定され、取付台1d上に、培地を供給する供給ポンプ40、培地の供給先を各ウエル4において切り換える開閉バルブ17、各培養容器5内から古い培地を排出する排出ポンプ60が取り付けられる。さらに、そこに隣接して、新しい培地を入れる培地供給容器8、及び古い培地を入れる廃液容器9が、ベース板1b上に取り付けられる。培地供給容器8には蓋8aが、廃液容器9には蓋9aが被せられる。
Further, a mounting
図8に示すように、ケース1の収納室2内に、6個のウエル4を有するウエルプレート3が収納され、6個のウエル4内には、図1のように、培養容器5が上から挿入される。各ウエル4内に培地供給用の供給ノズル14が挿入され、各培養容器5内には排出ノズル24が挿入される。ウエルプレート3がケース1の収納室2内に収納されることに伴い、各ウエル4内に挿入される供給ノズル14、各培養容器5内に挿入される排出ノズル24、及びそれらに接続される供給チューブ13及び排出チューブ23はケース1内に収納される。図7に示すように、各供給ノズル14及び各排出ノズル24は、ケース1内の支持板1cに取り付けられ、定位置に保持される。
As shown in FIG. 8, a
図1、図8に示すように、各ウエル4に挿入される培養容器5は、カップ状容器状に形成され、その底部には、培養する細胞を播種するために、多孔質の膜6が取り付けられる。膜6は、例えば、直径約0.3〜5μmの多数の微細孔を有したメンブレンフィルターなどから形成され、培養しようとする細胞が膜6上に播種され、保持されるようになっている。培養容器5は、各ウエル4内に上から挿入されるが、培養容器5の底部に設けた膜6とウエル4の底面との間に、間隔をあけるように、保持される。なお、細胞の培養時、膜6の目詰まりを防止するために、細胞はゲルと混合し、細胞懸濁液として膜上に播種される。
As shown in FIG. 1 and FIG. 8, the
上記のように、図7に示す如く、ケース1の収納室2内には、各ウエル4内に培地供給用の供給ノズル14が挿入され、各培養容器5内には排出ノズル24が挿入される。それらの供給ノズル14及び排出ノズル24を支持するために、ケース1内上部に支持板1cがウエルプレート3の上方を覆うように配設され、図7に示すごとく、支持板1c上には供給ノズル14及び排出ノズル24を保持する部材が設けられる。
As described above, as shown in FIG. 7, the
細胞培養時、この自動灌流培養装置は、使用時、温度、湿度、炭酸ガス濃度などを管理されたインキュベータ内に入れられ、細胞培養が行われるが、図2〜図5に示すように、自動灌流培養装置は、ベース板1b上にケース1、供給ポンプ40、排出ポンプ60等を搭載した、小型で簡単な構造となっているので、使用者は、容易にインキュベータ内に装置を出し入れすることができる。
At the time of cell culture, this automatic perfusion culture device is placed in an incubator in which temperature, humidity, carbon dioxide concentration, etc. are controlled at the time of use, and cell culture is performed. As shown in FIGS. Since the perfusion culture apparatus has a small and simple structure in which the
さらに、図1に示す如く、各ウエル4内の培地の液面を、電気的に検出するために、液面検出手段として液面検出器7が、ケース1内に設けられる。この液面検出器7は、1対の電極部を有し、ウエルプレート3の各ウエル4内に1対の電極部を挿入し、電極部間にパルス電圧を印加してウエル内の液面を検出するように構成される。検出時に印加するパルス幅は、例えば数m秒というように短く設定され、液面が1対の電極部に達したとき、電極部間の電位の低下を検出して、液面を検出する。このため、比較的簡単な構成の検出器により、培地液面を検出することができ、液面検出時に、培地に与える電流の影響を最少にすることができる。
Further, as shown in FIG. 1, a
液面検出器としては、上記の電極式の液面検出器に代えて、非接触式の静電容量式液面センサを設けることもできる。この静電容量式液面センサは、参照電極と検出電極を有し、液面レベルに応じて変化する参照電極と検出電極間の静電容量の変化に基づき、各ウエル4内の培地の液面レベルを非接触で検出することができる。これによれば、電流による培地への悪影響を防止することができる。 As the liquid level detector, a non-contact capacitive liquid level sensor can be provided instead of the electrode type liquid level detector. This capacitance type liquid level sensor has a reference electrode and a detection electrode, and based on the change in the capacitance between the reference electrode and the detection electrode that changes according to the liquid level, the liquid in the medium in each well 4 The surface level can be detected without contact. According to this, the bad influence to the culture medium by an electric current can be prevented.
また、液面検出器として、光学式液面センサを使用することもできる。光学式液面センサは、光センサを有し、光センサの受光信号に基づき、光学的に各ウエル4内の液面レベルを検出するように構成される。このため、電流や電界を培地に印加せずに、液面レベルを検出するため、電界や電流による培地への悪影響をなくすことができる。 An optical liquid level sensor can also be used as the liquid level detector. The optical liquid level sensor includes an optical sensor, and is configured to optically detect the liquid level in each well 4 based on a light reception signal of the optical sensor. For this reason, since the liquid level is detected without applying an electric current or electric field to the culture medium, it is possible to eliminate adverse effects on the culture medium due to the electric field or electric current.
図8等に示すように、取付台1d内に1台の圧電ダイヤフラム式の供給ポンプ40が、培地供給容器8内の培地を各ウエル4に供給するために配設される。供給ポンプ40は、図9、図10に示すように、小型で薄型の圧電ダイヤフラム式ポンプから構成され、ピエゾ素子等の圧電素子50とその振動駆動により振動するダイヤフラム45とを備える。培地供給容器8は、取付台1dに隣接したベース板1b上に配設され、容器には新しい培地が入れられ、蓋8aが被せられる。
As shown in FIG. 8 and the like, one piezoelectric diaphragm
圧電ダイヤフラム式の供給ポンプ40は、図9、図10に示す如く、圧電素子50を設けた供給ポンプ駆動部41と、ダイヤフラム45、ポンプ室46、入口ポート54、及び出口ポート53を設けた供給接液部42と、が分離可能に結合される。供給ポンプ駆動部41は、薄い方形の駆動ケース43を外殻として形成され、駆動ケース43内に、金属板49が取り付けられ、金属板49の内側に圧電素子50が取り付けられる。さらに、金属板49の外側に、吸着用のゴム磁石シート48が取り付けられる。
As shown in FIGS. 9 and 10, the piezoelectric diaphragm
一方、供給接液部42は、薄い方形板状の接液ケース44を外殻として形成され、接液ケース44内に、ポンプ室46が形成される。ポンプ室46の前面にダイヤフラム45が張設され、ダイヤフラム45の外側に磁性体ダイヤフラム47が取り付けられる。接液ケース44内のポンプ室46に連通して出口ポート53と入口ポート54が設けられ、出口ポート53に吐出弁52が設けられ、入口ポート54に吸入弁51が設けられる。これにより、圧電素子50の動作によりダイヤフラム45が振動すると、入口ポート54から吸入弁51を通して培地がポンプ室46に吸引され、出口ポート53から吐出弁52を通して培地が送出される。
On the other hand, the supply
供給ポンプ40は、使用時、図10に示すように、供給ポンプ駆動部41と供給接液部42が重ね合わせて組み付けられるが、供給ポンプ駆動部41と供給接液部42を重ね合わせたとき、供給ポンプ駆動部41のゴム磁石シート48と供給接液部42側の金属板49が吸着し、両者が正確な位置に簡単に組み付けられるようになっている。このため、供給ポンプ40の使用後、供給接液部42を洗浄し或いは使い捨てとする場合、供給ポンプ駆動部41と供給接液部42を剥がすように操作すれば、ゴム磁石シート48と金属板49が分離し、供給接液部42を供給ポンプ駆動部41から簡単に取り外して、洗浄し或いは廃棄することができる。
When the
供給ポンプ40は、図7等に示すように、供給流路マニホールド15の下側であって、取付台1d上の凹部内に配設され、その供給接液部42の入口ポート54には供給チューブ13、供給流路マニホールド15を介して培地供給容器8が接続される。また、供給接液部42の出口ポート53は、供給流路マニホールド15により6チャンネルに分岐されて、6台の開閉バルブ17に接続される。6台の開閉バルブ17は、図7に示すように、取付台1d内の凹部で、供給ポンプ40に隣接した位置に収納され、供給流路マニホールド15内の供給用流路16に接続される。
As shown in FIG. 7 and the like, the
供給流路マニホールド15は、図11〜図13に示すように、合成樹脂製の直方体ブロック状に形成され、その内部に、新しい培地を流すための供給用流路16が形成される。また、図11の右側の側面に、供給用流路16に繋がる入口ポート15bが設けられ、この右側面の入口ポート15bには、上記培地供給容器8に接続される供給チューブ13が接続される。さらに、供給流路マニホールド15の底部には、上記供給ポンプ40の供給接液部42が接続される凹部とポートが形成され、且つ6台の開閉バルブ17が接続される凹部とポートが設けられる。供給流路マニホールド15の正面側に、6本の出口ポート15aが設けられ、6台の開閉バルブ17の吐出側は流路を介してこの6本の出口ポート15aに接続される。
As shown in FIGS. 11 to 13, the
これにより、供給流路マニホールド15内に形成された供給用流路16は、培地供給容器8側の供給チューブ13と入口ポート15bを通して、培地を供給ポンプ40の供給接液部42の入口ポート54に吸引し、その出口ポート53から流路を通して6台の開閉バルブ17に送り、各開閉バルブ17の吐出側から出口ポート15aを通して培地を送出するように、流路が設けられる。
Thus, the
開閉バルブ17には、例えば形状記憶合金を駆動部に使用した小型バルブを使用することができる。この小型バルブは、例えば消費電力0.3W以下、オリフィス0.4mm程度の、非常に小型のバルブであり、安価に製造することができ、使い捨てとして使用することができる。
As the open /
上記のように、供給流路マニホールド15内の供給用流路16は、図11〜図13に示す如く、開閉バルブ17を通して、各ウエル4の供給ノズル14に、供給チューブ13を介して接続され、供給ポンプ40の動作によって、培地供給容器8内の培地が、供給流路マニホールド15内の供給用流路16に送られ、開閉バルブ17を通して、順に供給ノズル14に供給される。つまり、6台の開閉バルブ17が順に開放されると、培地は、6チャンネルの供給チューブ13を通り、6本の供給ノズル14に順に送られ、各供給ノズル14から各ウエル4内に供給されるようになっている。
As described above, the
さらに、図7等に示す如く、取付台1d上の後部に、排出ポンプ60が取り付けられる。排出ポンプ60は、図14、図15に示すように、6チャンネルの蠕動式のペリスタポンプから構成され、図1に示す如く、各ウエル4内に挿入された培養容器5内の培地を、排出チューブ23を介して、廃液容器9に排出する。廃液容器9はベース板1b上の取付台1dの隣接位置に配設され、廃液容器9には、蓋9aが被せられる。
Furthermore, as shown in FIG. 7 etc., the
排出ポンプ60の吐出側には、排出流路マニホールド25が排出チューブ23を介して接続される。排出流路マニホールド25は、図17〜図19に示すように、その平面凹部内に、6本の入口ポート25aが設けられ、その右側面に、1本の出口ポート25bが設けられ、内部に、入口ポート25aと出口ポート25bを接続するように、排出用流路26が形成される。
A
排出ポンプ60は、培地の流路となる排出接液部62と、駆動部を駆動して排出接液部62内から培地を排出するように動作する排出ポンプ駆動部61とが、分離可能に結合して構成される。排出接液部62は、図14に示す如く、ポンプチューブ63から構成され、ポンプケーシングの下ケース64b内及びロータ66上に挿入され、ロータ66の回転に応じて、ロータ66の各ローラ67により押圧され、送液を行う。
In the
排出ポンプ駆動部61は、図14、図15に示す如く、減速機付きの小型モータ65と、小型モータ65により低速で回転駆動されるロータ66とを備える。ロータ66には複数本(ここでは3本)のローラ67が、小型モータ65の回転軸と平行な軸により回転自在に軸支される。ロータ66の3本のローラ67には、各々、6チャンネルのローラ部が軸方向に並設され、小型モータ65の回転軸は、ロータ66の中心軸に設けた軸穴に、挿入されて連結される。
As shown in FIGS. 14 and 15, the discharge
図14、図15に示すように、排出ポンプ60のポンプケーシングは、上ケース64aと下ケース64bとからなり、内部にロータ66を収納する、略円柱空間状のポンプ室が形成される。排出ポンプ60のポンプ室内には、内部に挿入されるロータ66の3本のローラ67の一部周りに接するように、ポンプチューブ63がロータ66上に挿入される。ポンプチューブ63は、排出ポンプ60の排出接液部62を構成し、上ケース64aを取り外した状態の、下ケース64b及びロータ66上に載置してセットされる。
As shown in FIGS. 14 and 15, the pump casing of the
これにより、排出ポンプ60から排出接液部62を分離する場合、上ケース64aを下ケース64b及びロータ66から取り外せば、ポンプチューブ63がロータ66上に露出し、ポンプチューブ63をポンプケーシングから簡単に取り外して分離することができる。排出ポンプ60の作動時、小型モータ65の駆動によりロータ66が低速回転すると、3本のローラ67が旋回しながら自転し、ローラ67の各チャンネルのローラ部が、6チャンネル分のポンプチューブ63を押し潰しながら回転し、ポンプチューブ63内の培地を排出側に送ることとなる。
As a result, when separating the discharge wetted
排出ポンプ60を組み立てる場合、図14、図15に示す如く、ポンプチューブ63を下ケース64b及びロータ66上にセットした状態で、上ケース64aを下ケース64bの上に被せ、取付板69を押し付けるように、固定板68のスリットに取付板69を挿入する。そして、カバー70とともに取付板69を摺動させるのみで、比較的簡単に、排出ポンプ60を組み立てることができる。カバー70上にはツマミが突設されている。
When assembling the
排出ポンプ60の使用後には、カバー70及び取付板69を持って摺動させ、上ケース64aを下ケース64b上から取り外せば、ポンプケーシングを容易に分解することができる。そしてこの状態で、排出接液部62のポンプチューブ63を、ポンプケーシングから取り外し、その洗浄や交換を簡単に行うことができる。
After the
図1に示すように、上記構成の自動灌流培養装置は、上記制御手段となるコントローラ30により制御される。コントローラ30は、例えばマイクロコンピュータを備えて構成され、ウエルプレート3の各ウエル4に対し自動的に培地の灌流を行い、細胞培養を実施する。
As shown in FIG. 1, the automatic perfusion culture apparatus having the above configuration is controlled by a
上記供給ポンプ40の圧電素子50、開閉バルブ17、排出ポンプ60の小型モータ65は、コントローラ30の制御用出力ポートに接続されて制御され、コントローラ30の制御用入力ポートには、上記液面検出器7が接続され、液面の検出信号が入力される。コントローラ30のマイクロプロセッサは、予め記憶されたプログラムデータに基づき、下記のような細胞培養のための灌流処理を実施するように構成される。コントローラ30とその電源(電池等)は、上記構成の自動灌流培養装置とは別置きで設置され、接続されるが、上記ベース板1bと一体に構成することもできる。
The
次に、上記自動灌流培養装置の動作を、図20のフローチャートを参照して説明する。細胞培養を行う場合、先ず、ウエルプレート3の各ウエル4の培養容器5内に、培養しようとする細胞を、その底部の膜6に播種する。
Next, the operation of the automatic perfusion culture apparatus will be described with reference to the flowchart of FIG. When cell culture is performed, first, cells to be cultured are seeded on the
このとき、培養しようとする細胞は懸濁液とされ、さらにゲルと混合し、培養容器5の膜6上に播種される。細胞懸濁液をゲルと混合することにより、膜6の目詰まりを防止することができる。ウエルプレート3の各ウエル4内には、所定量の培地(培養液)が入れられ、ケース1の開閉蓋1aが閉じられる。
At this time, the cells to be cultured are made into a suspension, further mixed with the gel, and seeded on the
この状態で、コントローラ30が起動され、自動灌流培養装置は、所定の温度、湿度、炭酸ガス濃度に管理されたインキュベータ内に入れられ、培地灌流による細胞培養が行われる。
In this state, the
コントローラ30が起動し、培地灌流処理を開始すると、先ず、ステップ100で、排出ポンプ60が起動し、各ウエル4内の培養容器5内から培地が排出される。つまり、排出ポンプ60が作動すると、各培養容器5の排出ノズル24から培地が吸引され、吸引された培地は、排出チューブ23から排出流路マニホールド25内の排出用流路26を通り、廃液容器9内に排出される。この培地の排出は、所定時間(例えば30秒間)行われ、所定時間経過後に、ステップ110に進み、ステップ120で、排出ポンプ60は停止する。このとき、略一定量の古い培地が各培養容器5から排出される。
When the
ペリスタルポンプからなる排出ポンプ60は、各培養容器5内の古い培地を、各チャンネルのポンプチューブ63を通して、脈動を生じさせながら排出するが、培養容器5の底部の膜6に播種された細胞の近傍を灌流する培地は、ウエル4内の液面レベルと培養容器5内の液面レベルとのレベル差に応じて、徐々に非常に低流速且つ低流量で、移動することとなり、培地の灌流に排出ポンプ60の動作の影響が加わることは皆無である。
The
次に、ステップ130で、供給ポンプ40が起動し、ステップ140で、各培養容器5の番号を示す「n」を1とする。供給ポンプ40が起動すると、供給ポンプ40によって培地供給容器8から新しい培地が吸引され、供給流路マニホールド15内の供給用流路16内に吸引される。
Next, in
次に、ステップ150で、n番目のウエル4の液面検出器7に、検出用のパルス信号を印加し、次のステップ160で、液面検出器7から培地液面の検出信号が入力されたか否かを判定する。
Next, in
ここで、n番目のウエル4の液面レベルが低い場合、検出信号が入力されないと判定され、次に、ステップ170に進み、n番目の開閉バルブ17を開放する。これにより、供給ポンプ40によって吸引された新しい培地は、供給流路マニホールド15内の供給用流路16からn番目の開閉バルブ17を通り、供給チューブ13から供給ノズル14を通して、n番目のウエル4内に供給される。
Here, when the liquid level of the
そして、次のステップ180で、所定時間(例えば10秒間)経過したか否かを判定し、所定時間が経過するまで、n番目の開閉バルブ17を開放して、n番目のウエル4内に培地を供給する。この間、n番目のウエル4内に培地が供給され、その液面レベルが上昇していく。
Then, in the
このとき、図1に示すように、通常、ウエル4内の培地の液面レベルは、培養容器5内の液面レベルに比して高くなっているため、重力によりウエル4内の下部の培地は、液面レベルの低い培養容器5側に緩やかに移動し、その底部の膜6を下側から上側に通り、培養容器5の上部へと徐々に緩やかに灌流する。これにより、膜6に播種されている細胞の周囲に、新たな培地が略連続的に緩やかに付与され、細胞培養が行われる。
At this time, as shown in FIG. 1, since the liquid level of the medium in the
一方、ステップ180で、所定時間(例えば10秒間)が経過したと判定すると、次に、ステップ150に戻り、再び、n番目のウエル4の液面検出器7に、検出用のパルス信号を印加し、次のステップ160で、液面検出器7から培地液面の検出信号が入力されたか否かを判定する。ここで、培地液面の検出信号が入力されない場合、上記ステップ170、ステップ180が繰り返され、n番目のウエル4内に培地が供給される。
On the other hand, if it is determined in
そして、n番目のウエル4の液面レベルが上昇し、その液面検出器7が液面を検出し、検出信号が出力されると、ステップ160からステップ190に進み、n番目の開閉バルブ17を閉鎖する。これにより、n番目のウエル4内への培地の供給は停止する。
Then, when the liquid level of the
そして、次に、ステップ200に進み、各培養容器5の番号を示す「n」を「n+1」とし、次のステップ210を経て、再びステップ150に戻り、n+1番目のウエル4の液面検出器7に、検出用のパルス信号を印加し、次のステップ160で、上記のように、液面検出器7から培地液面の検出信号が入力されたか否かを判定する。
Then, the process proceeds to step 200, where “n” indicating the number of each
そして、n+1番目のウエル4の液面レベルが低い場合、上記と同様に、検出信号が入力されないと判定され、次に、ステップ170に進み、n+1番目の開閉バルブ17を開放する。これにより、供給ポンプ40によって吸引された新しい培地は、供給流路マニホールド15内の供給用流路16からn+1番目の開閉バルブ17を通り、供給チューブ13から供給ノズル14を通して、n+1番目のウエル4内に供給される。
If the liquid level of the (n + 1)
そして、次のステップ180で、上記と同様、所定時間(例えば10秒間)経過したか否かを判定し、所定時間が経過するまで、n+1番目の開閉バルブ17を開放して、n+1番目のウエル4内に培地を供給する。この間、上記と同様に、n+1番目のウエル4内に培地が供給され、その液面レベルが上昇していくこととなる。
Then, in the
そして、n+1番目のウエル4の液面レベルが上昇し、その液面検出器7が液面を検出し、検出信号が出力されると、上記と同様、ステップ160からステップ190に進み、n+1番目の開閉バルブ17を閉鎖する。これにより、n+1番目のウエル4内への培地の供給は停止する。
Then, when the liquid level of the (n + 1) th well 4 rises and the
このようにして、ウエルプレート3の全て(6個)のウエル4について、上記ステップ150〜ステップ210が繰り返され、これにより、全てのウエル4内に適正量の培地が徐々に略連続して供給され、各ウエル4の液面レベルが所定レベルまで上昇した状態となる。これにより、各ウエル4内の液面レベルは、培養容器5内の液面レベルに比して高くなるため、ウエル4内の下部の培地は、重力によって、培養容器5側に移動し、その底部の膜6を下から上に通り、培養容器5内の上部へと移動する。これにより、膜6に播種されている細胞の周囲に、培地が非常に低速且つ低流量で緩やかに流れることとなる。
In this way, the
このような図20の培地灌流処理は、所定のルーティン時間で繰り返し実行され、その間、ウエルプレート3の各ウエル4内の培養容器5からは、古い培地が徐々に排出され、各ウエル4内には新しい培地が徐々に供給される。それに伴い、各ウエル4内の培地は、培養容器5の底部の膜6を通して、徐々に緩やかに低速、低流量で培養容器5内に灌流され、そのような動作が所定時間、所定の環境下で行われ、培養容器5内の細胞が培養される。
Such a medium perfusion process of FIG. 20 is repeatedly executed at a predetermined routine time, and during this time, the old medium is gradually discharged from the
なお、上記灌流処理は、培養容器5の1回の排出時間を例えば30秒とし、各ウエル4への供給時間を例えば10秒とし、1回の灌流処理を約1分30秒で実施した。このような灌流処理は、時間間隔を略ゼロとして、連続的に繰り返すことができるが、数十秒から数分間の時間間隔をおいて上記灌流処理を繰り返すこともでき、培養する細胞に応じて、任意に決めることができる。また、培養容器5の排出時間、及びウエル4への供給時間は、容器の大きさ、供給ポンプ40や排出ポンプ60の送液能力つまり単位時間当たりの送液量に応じて、任意に変えることができる。
The perfusion treatment was performed for about 1 minute and 30 seconds, with one discharge time of the
上記自動灌流培養装置は、細胞培養の処理が終了した時点で、培養装置がインキュベータから取り出され、各培養容器5内の細胞が顕微鏡下などで観察され検査などが行われる。このような細胞培養の後、培養装置は分解され、次回の使用にそなえて、ケース1内のウエルプレート3、培養容器5、培地供給容器8、廃液容器9、流路マニホールドなどが、洗浄され、或いは使い捨てとして廃棄され、次回の細胞培養時のコンタミネーションを防止する。
In the automatic perfusion culture apparatus, when the cell culture process is completed, the culture apparatus is removed from the incubator, and the cells in each
使用後の自動灌流培養装置の分解は、ケース1の開閉蓋1aを開き、ケース1内のウエルプレート3、培養容器5、供給ノズル14、排出ノズル24、液面検出器7、供給チューブ13、及び排出チューブ23を取り外し、それらを洗浄し、或いは廃棄する。さらに、ベース板1b上の培地供給容器8、廃液容器9を外して洗浄或いは廃棄する。
Disassembly of the automatic perfusion culture apparatus after use opens the opening /
上記のように、供給ポンプ40の供給接液部42は、その供給ポンプ駆動部41から簡単に取り外し可能な構造であり、排出ポンプ60はその排出接液部62を排出ポンプ駆動部61から簡単に取り外し可能な構造である。このため、取付台1d上の供給ポンプ40、開閉バルブ17及び排出ポンプ60を取り外し、簡単に、供給ポンプ40から供給接液部42を外し、排出ポンプ60から排出接液部62を取り外し、それらを洗浄し或いは廃棄することができる。さらに、ベース板1b上の取付台1d上から、供給流路マニホールド15、排出流路マニホールド25を、供給チューブ13、排出チューブ23などとともに取り外して洗浄し、或いは使い捨てとして廃棄する。
As described above, the supply
このように、上記自動灌流培養装置は、各ウエル4内に培地を供給し、各ウエル4内に挿入された培養容器5の底部の膜6を通して培地を培養容器5内に、徐々に低速、低流量で灌流させ、膜6上に播種した細胞を良好に培養することができる。つまり、ウエル4内の培地液面レベルが培養容器5内より高くなると、培養容器5の底部の膜6を通して培地がウエル4から培養容器5内に灌流し、これにより、培地の灌流は、極めて緩やかに低流速で且つ低流量で行われる。このため、膜6上に播種した細胞には、緩やかな培地の流れが付与される。このため、膜6上の細胞には、緩やかな培地の流れによる適度な刺激が生じて、極めて良好に細胞培養を行うことができる。
As described above, the automatic perfusion culture apparatus supplies the medium into each well 4 and gradually moves the medium into the
また、各ウエル内に挿入された培養容器5から古い培地を排出しつつ、各ウエル4内の培地の液面レベルを検出し、その液面レベルに基づき新しい培地を各ウエル4に供給するため、適正量の培地を低速、低流量で培養容器5の底部に灌流して、培養容器5の膜6に播種した細胞を良好に培養することができる。
Further, in order to detect the liquid level of the medium in each well 4 while discharging the old medium from the
さらに、ウエル4を有したウエルプレート3をケース1内に収納し、ケース1内に、供給チューブ13、供給ノズル14、排出チューブ23、及び排出ノズル24を収納し、且つケース1はコンパクトに形成することができる。これにより、使用者は、自動灌流培養装置を小型のケース1ごとそのままインキュベータ内に出し入れして、簡便に使用することができる。
Further, the
また、自動灌流培養装置は、構造を簡単化して小型化し、安価に製造することができるので、小規模の研究機関などでも、自動灌流培養装置による細胞培養を、簡便に行うことができる。 In addition, since the automatic perfusion culture apparatus can be simplified in structure and reduced in size and manufactured at low cost, cell culture using the automatic perfusion culture apparatus can be easily performed even in a small-scale research institution.
さらに、使用後、ウエルプレート3、培養容器5、供給ポンプ40の供給接液部42、供給チューブ13、供給ノズル14、排出ノズル24、排出チューブ23、排出ポンプ60の排出接液部62等は、供給ポンプ駆動部41や排出ポンプ駆動部61を除いて、灌流培養装置から簡単に取り外すことができ、取り出した部品は、洗浄し或いは廃棄して使い捨てするように使用されることができる。これにより、本自動灌流培養装置を繰り返し使用する場合、細胞のコンタミネーションを防止しつつ、安価なコストで繰り返し細胞培養に使用することができる。
Further, after use, the
1 ケース
1a 開閉蓋
1b ベース板
1c 支持板
1d 取付台
2 収納室
3 ウエルプレート
4 ウエル
5 培養容器
6 膜
7 液面検出器
8 培地供給容器
8a 蓋
9 廃液容器
9a 蓋
13 供給チューブ
14 供給ノズル
15 供給流路マニホールド
15a 出口ポート
15b 入口ポート
16 供給用流路
17 開閉バルブ
23 排出チューブ
24 排出ノズル
25 排出流路マニホールド
25a 入口ポート
25b 出口ポート
26 排出用流路
30 コントローラ
40 供給ポンプ
41 供給ポンプ駆動部
42 供給接液部
43 駆動ケース
44 接液ケース
45 ダイヤフラム
46 ポンプ室
47 磁性体ダイヤフラム
48 ゴム磁石シート
49 金属板
50 圧電素子
51 吸入弁
52 吐出弁
53 出口ポート
54 入口ポート
60 排出ポンプ
61 排出ポンプ駆動部
62 排出接液部
63 ポンプチューブ
64a 上ケース
64b 下ケース
65 小型モータ
66 ロータ
67 ローラ
68 固定板
69 取付板
70 カバー
DESCRIPTION OF
Claims (13)
該外側容器内に挿入され、細胞を播種する多孔質の膜を底部に有した培養容器と、
該外側容器内に培地を供給するように配設された供給流路と、
該供給流路を通して該外側容器内に培地を供給する供給ポンプと、
該培養容器内から培地を排出するように配設された排出流路と、
該排出流路を通して該培養容器内から培地を排出する排出ポンプと、
該外側容器内の培地の液面レベルを検出して液面検出信号を発生する液面検出手段と、
該液面検出手段の液面検出信号に基づき、該供給ポンプを制御して、該外側容器への培地の供給量を制御する制御手段と、
を備え、
該外側容器内の培地液面レベルと該培養容器内の培地液面レベルとの差に応じて、該外側容器内の培地が前記多孔質の膜を通して該培養容器内に灌流することを特徴とする自動灌流培養装置。 An outer container containing the medium;
A culture vessel inserted into the outer vessel and having a porous membrane at the bottom for seeding cells;
A supply channel arranged to supply the culture medium into the outer container;
A supply pump for supplying the culture medium into the outer container through the supply channel;
A discharge channel arranged to discharge the medium from the culture vessel;
A discharge pump for discharging the medium from the culture vessel through the discharge channel;
A liquid level detecting means for detecting a liquid level of the medium in the outer container and generating a liquid level detection signal;
Control means for controlling the supply pump based on the liquid level detection signal of the liquid level detection means to control the amount of medium supplied to the outer container;
With
The medium in the outer container is perfused into the culture container through the porous membrane according to the difference between the medium liquid level in the outer container and the medium liquid level in the culture container. Automatic perfusion culture device.
前記排出流路は、前記排出ポンプに接続される排出チューブと、該排出チューブに接続され、前記培養容器内に配置される排出ノズルと、を備えたことを特徴とする請求項1記載の自動灌流培養装置。 The supply flow path includes a supply tube connected to the supply pump, and a supply nozzle connected to the supply tube and disposed in the outer container,
The automatic discharge apparatus according to claim 1, wherein the discharge flow path includes a discharge tube connected to the discharge pump, and a discharge nozzle connected to the discharge tube and disposed in the culture vessel. Perfusion culture device.
The liquid level detection means includes a reference electrode and a detection electrode. Based on a change in capacitance between the reference electrode and the detection electrode that changes according to the liquid level, the liquid level in the outer container is determined. 2. The automatic perfusion culture apparatus according to claim 1, wherein a capacitance type liquid level sensor for detecting in a non-contact manner is provided.
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