JP6052655B2 - 電離水素水の製造方法およびこれに用いる微生物 - Google Patents
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Description
山形県山形市八森の湧水から1.5Lの水を採水した。この水の一部を121℃で20分オートクレーブ滅菌し、寒天培地を作製した。この寒天培地に滅菌してない湧き水を加え、32Wの蛍光灯4本を照射しながら、30℃で2週間から1カ月間程度静置培養した。目で確認できたコロニーを従属栄養細菌用のPB寒天培地または2種類の藍藻類用寒天培地(C培地およびCT培地)に画線して植菌し、さらに2週間から1カ月の間蛍光灯を照射しながら、30℃で静置培養した。
2−1:実験装置および器具
(1)透析膜チューブ(Slide-A-Lyzer Dialysis Cassette G2、Thermo SCIENTIFIC社)、(2)蒸留水入りビーカー、(3)pH計(HM-31P、GSF-2739C、(株)東亜DKK社)、(4)酸化還元電位(ORP)計(HM-31P、 PST-2729C、(株)東亜DKK社)、(5)溶存水素(DH)計(KM2100 DH、(株)共栄電子研究所)、(6)デジカメ内蔵パソコン(Apple社 iMac)、録画ソフトウエア(QTRex)、(7)恒温槽、(8)夜間測定のための27W蛍光灯(なお、蛍光灯の照射は水素生成の誘導に影響しなかった)。
(1)−85℃に凍結保存しておいた各菌株を白金耳でかきとり、PB寒天培地へ画線植菌し、30℃で7日〜10日間静置培養した。(2)出現した単一のコロニーを白金耳でかき取り、100mLのPB液体培地を加えた200mL容の三角フラスコに植え継ぎ、30℃、70rpmで7日〜10日間の振とう培養を行った。(3)この20mlまたは50mLの培養液を200mLまたは500mLのPB液体培地を加えた1Lの三角フラスコに植え継ぎ、30℃、70rpmで7日〜10日間の振とう培養を行った。(4)培養液を500mL容の遠心管に移し、4℃、5,000rpm、5min遠心して、培地を捨て集菌した。(5)菌体を2mlのTNEbuffer (20mM Tris-HCl(pH8.0)、200mMNaCl、1mMEDTA(pH8.0))に懸濁した。(6)全量を15mL容の透析膜カチューブに注入した。(7)この菌溶液を加えた。透析チューブを、200mLの蒸留水を加えた500mLのビーカーまたは400mLの蒸留水を加えた1Lのビーカーに静置した。(8)この後の実験は5分間の水素ガスの添加あるいは添加しない条件で行い、さらに計測は装置を太陽光が射し込むようにブラインドを開いた状態にした実験室の窓際に設置した場合と暗室に設置した場合の2パターンで行った。
電離水素水である水と電離水素水でない水の最も簡便な識別法は、酢酸や塩酸などの酸を添加することによって、水素が生成することを確認する方法である。水素が生成されなければ電離水素水ではない。そこで、GN1株を用いて作製した還元水に水素を添加し、溶存水素濃度が一定となった後に17mol/L酢酸を2%(v/v)添加し、溶存水素濃度の上昇が検出されるか調べた。ここで、水素の添加は微生物のヒドロゲナーゼ酵素を活性化させる目的と水素ガスを溶かすためである。水素ガスを添加しない場合は電離水素水の活性が弱い水ができることを確認している。この結果を図1に示す。酢酸添加後に、5時間にわたって溶存水素濃度が2μg/Lから3μg/Lに上昇し、水素が発生していることが確認できる。この結果より、電離水素水の性質の一つを確認できたと考察する。なお、酸を添加した直後に急激に酸化還元電位が上昇しているが、これは、酸を加えた場合には酸化還元電位が上昇し、塩基を加えた場合には酸化還元電位が下降する性質があるため、正しい反応である。データは示していないが、ポジティブコントロールのセラミックボールによる還元水には1μg/Lの溶存水素が検出されたが、蒸留水や水道水では溶存水素は検出されなかったことも、この考察を裏付けている。
図2は、該微生物を用いて98%エタノールおよびリモネンを終濃度が2%になるように添加したときに水素ガスが発生する様子を示している。エタノール等の炭化水素を添加して、炭化水素を分解させると同時に、電離水素水中の溶存酸素や溶存酸素と反応することで、水素ガスが発生されることが確認された。水素ガスを添加後の100時間目に1回目のエタノール添加後し、さらに150時間過ぎに2回目のエタノールを添加したところ、最大2μg/Lの溶存水素濃度の上昇が検出された。また、約200時間目にリモネンを添加した際も1μg/Lの水素濃度上昇が検出された。これらの結果より、電離水素水の性質である、炭化水素添加により水素の生成が確認できた。蒸留水にエタノールを添加するコントロールの実験も行ったが、この際は酸化還元電位の低下は検出されたが、溶存水素濃度の上昇は検出されなかった。
Claims (7)
- 受託番号NITE P-1240で示されるMesorhizobium GN1株、または受託番号NITE P-1241で示されるBurkholderia sp.WN2株に属する微生物と水とを接触させる工程を含み、H−(ヒドリド)イオンが含まれる電離水素水を製造する方法。
- 前記電離水素水に外部から水素ガスを吹き込み、前記微生物を活性化させ、当該吹きこんだ水素ガスを水中に溶存水素として溶解させる工程を含む、請求項1に記載の電離水素水の製造方法。
- 受託番号NITE P-1240で示されるMesorhizobium GN1株、または受託番号NITE P-1241で示されるBurkholderia sp.WN2株に属する水素分子を分解してH−イオンを生成する微生物。
- 受託番号NITE P-1240で示されるMesorhizobium GN1株、または受託番号NITE P-1241で示されるBurkholderia sp.WN2株に属する微生物と水とを接触させ、H − (ヒドリド)イオンが含まれる電離水素水を製造する工程、
前記工程で製造された電離水素水に、塩酸または酢酸などの酸を添加してH + イオンを供給することにより水素ガスを生成する工程、とを含む水素ガスの生成方法。 - 受託番号NITE P-1240で示されるMesorhizobium GN1株、または受託番号NITE P-1241で示されるBurkholderia sp.WN2株に属する微生物と水とを接触させ、H − (ヒドリド)イオンが含まれる電離水素水を製造する工程、
前記工程で製造された電離水素水に、炭化水素を添加し、当該炭化水素を分解させると同時に電離水素水中の溶存水素や溶存酸素と反応させることにより水素ガスを発生させる工程、とを含む水素ガスの発生方法。 - 受託番号NITE P-1240で示されるMesorhizobium GN1株、または受託番号NITE P-1241で示されるBurkholderia sp.WN2株に属する微生物と水とを接触させ、H − (ヒドリド)イオンが含まれる電離水素水を製造する工程、
前記工程で製造された電離水素水をろ過または殺菌処理する工程、
とを含む還元性の飲料水の製造方法。 - 請求項3に記載の微生物を凍結乾燥標品とした食べる食品の製造方法。
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